قسم الامراض المعدية Department of infectious diseases

transcript

االمراض قسمالمعدية

في الدم مصرف

الدفاع • خط هو المعدية األمراض قسمالمتبرع سالمة على الحفاظ في الثالث

األمراض فحوصات بإجراء للدم والمتلقيونقله . الدم طريق عن المنقولة المعدية

المتحصل • النتائج ودقة جودة من والتأكدبسجالت واالحتفاظ الفحص بعد عليها

على للحفاظ تامة بسرية وموثقة دقيقةالدم . وسالمة المتبرعين خصوصية

hayatabdulhamid@yahoo.com

المعدية األمراض ماهي؟ بالدم المنقولة

• -: ينتقل الذي المرض هو ، المعدUي المرضآلخر للمرض حامل أو مريض شخص من

أن بد ال المعدي المرض يحدث ولكي سليمتسمى متكاملة عوامل عدة تتوافر

وهي : العدوي بسلسلةالمرض : • مسببات أوالالمرض : • حامل أو العدوى مصدر ثانياالمرض: • انتقال وسيلة رابعاوهنا • والمرض العدوى النتقال وسائل عدة هناك

الدم وهو الرئيسية المسببات احد يهمناhayatabdulhamid@yahoo.com

فترات النافذة لبعض

الفيروسات

NAT Window period Window period virus

within 6-11Days 24 days HIV

within 5-11 Days 70-80 days HCV

15-60 Days 160 days HBsAg

المضادة األجسام تطوير تسبق فترة هياختيار يتم ضوئها وعلى األولية العدوى خالل

عدم من وجود لمعرفة الفحص طريقةالمعدية االمراض

Window period

األمراض الدم عبر تنقل التي

فيروسات

•Hepatitis B - البائي الوبائي الكبد التهاب•Hepatitis C - الجيمي الوبائي الكبد التهاب•HIV 1 البشري - 2و المناعة نقص فيروس•CMV - للخاليا المضخم الفيروس•HGV•TTV• - WNV النيل غرب فيروس

Bacteriaبكتيريا

•TTB reaction identified as most comm• syphilis - الزهري•staph •strept •yersinia •Lyme Disease

Protozoaأوليات

• -Malaria المالريا•Babesiosis •Leishmaniasis• Chagas Disease - شاغاس مرض

Toxoplasmosis

بريونات

•Creutzfeldt-Jakob CJD مرض أو جاكوب كروتزفيلد مرض

البقر ريكتيسياجنونلعدة • التابعة المعدية االمراض انواع بعض هذه

المتبرعين غلى فحصها ويتم الطفيليات من انواعوتبعا الدم لمصارف العالمية السياسة حسب

يتم التي للدولة بالنسبة مرض كل خطورة لشدةعلى المتفق الوبائيات بعض هناك ولكن التبرع فيها

عالميا . فحصهاطرق • بعدة بالدم االمراض وجود عن الكشف ويتم

ومتخصصة ,... متعددة اجهزة hayatabdulhamid@yahoo.comبواسطة

األمراض عن الكشف طرقالمعدية :-

•1 - Latex agglutination آو • المستضد تفاعل على يعتمد سريع اختبار

العينة إضافة عند بعضهما مع المضاد الجسمالمستضد أو المضاد بالجسم المغلفة للكريات

النتيجة تعتبر التالزن حدوث وعند المطابقسلبية . التالزن وعدم ايجابية

2- ELISA The enzyme-linked immunosorbent assay

المستضد وجود عن الكشف هي االليزا المضاد Agتقنية والجسمAb المادة مع لتفاعلهم اإلنزيمي النشاط بقياس المصل في

دقيقة طريقة وهي كيميائيا لونها وتغيير األنبوبة داخلالكميات . تقدير في وحساسة

االليزا :- اختبارات أنواع DIRECT ELISA مباشرة مناعية قياسات INDIRECT ELISA مباشرة غير مناعية قياسات

SANDWICH ELISA تنافسية غير مناعية قياسات• COMPETETIVE ELISA تنافسية مناعية قياسات

• COMPETETIVE ELISA مناعية قياسات تنافسية

المستضد يتنافس الحالة هذه قياسه Agفي المطلوبمع العينة المضاد Labeled Antigenفي بالجسم لالرتباط

تكون الحالة هذه وفيكمية بين عكسية مع Agالعالقة قياسه labeledالمطلوب

Antigen. SANDWICH ELISA غير مناعية قياسات تنافسية

عن الكشف المطلوب وقياس Ag المستضديكونمغطى االليزا طبق فيكون العينة في تركيزه

المضاد .Abبالجسم

INDIRECT ELISA غير مناعية قياسات مباشرة

في المضاد الجسم عن الكشف المطلوب يكون عندماتركيزه وقياس العينة

DIRECT ELISA مباشرة مناعية قياسات

3 - PCR (Polymerase chain reaction)

النووي )• الحمض نسخ إكثار على تقوم مخبريه تقنية DNAهو منه( محددة قطعة باستنساخ الحيوي النظام خارج

و االختبارات أجراء يتسنى لكي إنتاجها ومضاعفة. عليها اإلضافية الفحوصات

وجنس • نوع تحديد في الطرق أدق من تعتبر الطريقة وهذه. وكميته الفيروس

من • نوعان : PCRهناك•1 .PCR . العادي •2 .RT PCR ( Real Time PCR ) :نفس على يقوم النوع وهذا

بكمبيوتر الجهاز مرتبط يكون الوحيد الخالف ولكن المبدأالحقيقية الكمية ثم ومن التفاعل لبدا الحقيقي الوقت لتحديد

النووي الحمض نسخ ( DNA )لعدد

4– NAT technology

احدث • من وتعتبر النووي الحمض على تعتمد تقنيةهو . النووي الحمض تكنولوجيا وادقها التقنيات

المختلفة التقنيات من عددا يشمل عام مصطلحالنووي، الحمض التقاط أو استخالص تتضمن

عنه والكشف وتضخيمه،

العينة • sample dillutionتخفيف

•) - الحرارة ) درجة الحضن مدة المخففة العينة تحضينالعينة )• (phosphate buffer salineغسلباضافة • Enzyme conjugateنقوم

•) - الحرارة ) درجة الحضن مدة المخففة العينة تحضينالعينة )• (phosphate buffer salineغسلباضافة • substrate (tetra methyl benzedine)نقوم

العينة • بتحضين نقومبجهاز • العينه بوضع الكثافة Elisa readerنقوم لقراءة

للعينة optical density( O.D)الضوئية

االليزا لتحليل الرئيسية الخطوات

ELISA Reader

PRECAUTIONS تحذيرات

•Negative control with strong signal The excessive background signal can be caused by inadequate rinsing of plates, reagents not sufficiently diluted, inadequate blocking of plates or non-specific binding of enzyme conjugate. The appearance of color in negative control wells may also indicate cross-reactivity of secondary antibody with components in the antigen sample .

Positive control with no signal

•Microwell plates not coated properly.•Reagents applied in wrong order or step omitted.

•Secondary antibody not matched to the species of primary antibody.

•Enzyme conjugate defective or inhibited by contaminant.

•Detector antibody not compatible with capture antibody (for sandwich assays) .

ELISA with weak signal •Wash buffer not adequately drained after every wash

step.•Inadequate incubation times.

•Detection reagents too dilute. Perform checkerboard titrations.

•Enzyme conjugate defective or inhibited by contaminant.•Substrate defective or contaminated.

•Microwell plates poorly coated.•Loss of capture antibody during blocking/washing.

Decrease or eliminate use of Tween-20 .

ارقام ....

: عن المأمون الدم نقل فر oيسبفيرoوس 16• عدوى حالة مليون

و Bالكبد بفيرoوس 5• عدوى حالة يين مال

و Cالكبد نحو ب 160• عدوى حالة HIVألف

قاطبة العالم في عام كل

الجودة ضبط إجراءات

الجهاز الترددالمركزي الطرد Bench centrifugeجهاز شهور 3كل

Timers/ clock \ الساعات الميقاتية الساعات سنوياالماصات معايرة سنويا

ELISA reader االليزا جهاز شهور 3كل

األمراض فحص في المستخدمة األجهزة أنواع باقيبها وااللتزام المصنع تعليمات حسب تفحص المعدية

النتائج دقة .بضمان

ومكافحة السالمةالعدوى :- المختبر .• داخل الخاصة المراييل ارتداء ضرورة

الدم- • حقائب مع التعامل أثناء القفازات ارتداء ضرورةومكوناته.

ب أسطح تنظيف • ونهاية المواد الالعمل بداية في خاصةاليوم .

مكان- • داخل والتدخين والشرب األكل باتا منعا يمنعلحفظ المخصصة الثالجات في الطعام حفظ أو العمل

الدم . مكونات

استخدام • وطرق والتحذيرات المنشورات وجود من التأكد

•. السليمة بالطريقة المواد

التأكد • خالل من الطبية وغير الطبية األجهزة تأمينات وجود من التأكد. سالمتها من

القفازات ) , , • المعطف ومنها المختبر في السالمة مستلزمات ارتداءالطبية , ( األحذية الواقية النظارة

والشرب • األكل kمنع ذلك التدخينو ي في صحة من لما على ضررالجميع.

العدسات • مثل الشخصية المستلزمات بعض استخدام من الحذرالالصقة.

•. عينة أي مع التعامل عند الحذر•. الكترونية أو كهربائية مصادر أي عن المياه مصادر وفصل إبعادبالطرق • الملوثة واألدوات الطبية المخلفات من التخلص

نوعها الصحيحة .حسب

ومكافحة السالمةالعدوى :-

العدوى :- ومكافحة السالمة

المراجع

لبنوك - 1 األمريكية للجمعية القياسية المعايير كتاباإلصدار 2005لسنة 15الدم

2 - Handbook of Transfusion MedicineEditor DBL McClelland , U- K- Blood Services 4th Edition

قسم الامراض المعدية Department of infectious diseases

Health & Medicine