(19) 한민 특허청(KR)

(12) 등 특허공보(B1)

(45) 공고 2011 10월18

(11) 등 10-1074954(24) 등 2011 10월12

(51) Int. Cl.

A61K 31/13 (2006.01) A61K 31/04 (2006.01)

A61P 3/04 (2006.01)(21) 원 10-2010-0007547

(22) 원 2010 01월27

심사청 2010 01월27

(65) 공개 10-2011-0087899

(43) 공개 2011 08월03

(56) 행 술 사 헌

US5684026 A

(73) 특허

재단 경 과학 술진 원

경 수원시 통 동 864-1

균 학 산학 단

경 수원시 안 천천동 300 균 학 내

(72)

훈

경 도 시 보 동 신 마 포스 타운아 트 212동 804

지

울시 악 천3동 우아 트 122동 1901

(뒷 에 계 )

(74) 리

민

체 청 항 수 : 10 항 심사 : 수

(54) （１Ｓ,２Ｓ,３Ｓ,４Ｓ）―５―아미 사 탄―１,２,３,４― 트라 포함하 항비만

(57) 약

본 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 포함하 항비만 에 한 것 ,

(1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 지 포에 포 억 하므 , 비

만 또 비만과 다양한 질 또 료에 하게 사 수 다.

도 - 도1

등록특허 10-1074954

- 1 -

(72)

울시 악 천동 악드림타운 103동 1001

안 경

울시 동 수1가2동 동아그린아 트 101동509

아

경 도 수원시 달 계동 1016-2 지 하엘 피스 535

수

울산 역시 울주 언양 리 울산 산 브아 트 108동 1103

경

경 도 수원시 안 천천동 550-2 201

등록특허 10-1074954

- 2 -

특허청

청 항 1

하 학식 1 시 합 포함하 항비만 .

[ 학식 1]

청 항 2

1항에 어 , 상 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor) 억 함

지 포가 지 포 것 억 시 것 특징 하 항비만 .

청 항 3

1항 또 2항 포함하 비만 또 료 약 학 .

청 항 4

3항에 어 , 상 약 학 , , 산 , 과립 , 슐 , 탁 , 내 액 , , 시럽 ,

균 수 액, 비수 , 탁 , , 동결건 루어진 택 어 하

가지 것 특징 하 비만 또 료 약 학 .

청 항 5

1항 또 2항 포함하 비만 또 개 식 .

청 항 6

5항에 어 , 상 식 , 지, 빵, 릿, , 스 , 과 , 피 , 라 , 껌 ,

아 스 림 , 스프, 료수, 차, 드링 , 알 료 비타민 복합 루어진 택 어

하 특징 하 비만 또 개 식 .

청 항 7

1항 또 2항 포함하 비만 또 개 약 .

청 항 8

7항에 어 , 상 약 독청결 , 샤워폼, 가그린, 티슈, 비 , 핸드워시, 가습

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- 3 -

진 , 마스 , 연고 필 진 루어진 택 어 하 에 사 것 특징

하 비만 또 개 약 .

청 항 9

1항 또 2항 포함하 비만 또 개 료 .

청 항 10

9항에 어 , 상 료 연 수, 수 수, 양 수, 양 림, 마사지 림, 에

스, 아 림, 아 에 스, 징 림, 징폼, 징워 , , 우 , , 림, ,

에 스, 컵 스, 운 , 염 , 샴 , 린스 루어진 택

어 하 가지 것 특징 하 비만 또 개 료 .

술 야

본 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 ((1S,2S,3S,4S)-5-aminocyclopentane-[0001]

1,2,3,4-tetraol) 포함하 항비만 에 한 것 다.

경 술

비만 체내에 지 과 상태 말하 그 원 지 열량 취, 내 비 애, 운동 ,[0002]

등 지만 그 에 도 과 에 지 가 직 계 다. 비만 다 특별한 원

없 취에 지에 비해 비에 지가 래 단순 (본태 ) 비만과 내 비질 ( 슐린 당

뇨병, 쿠싱 후 , , 갑상 하) 시상하 애 (뇌 만복감 해 시 타 다)

등 원 해 비만 후 비만 다.

또한, 비만 에 가 사실 여러 연 통해 알 다. 비만 못 생 습[0003]

많 생하지만, 식 스스 지 할 수 없 경우에 등 질 근거가 다

연 결과가 보고 었다. , 비만 마우스 비만 (ob )가 견 었다. 상 비만

식 억 하 틴 (leptin) 라 단 질 만든다. 비만 마우스에 틴 에

변 가 생겨 안 어 식 억 하지 못하여 과식 하게 어 비만에 게 것 다. 사람에

어 도 비만 가 틴 도가 상승하고 도 하고 식 억 지 않 것 틴에

한 감수 낮 다. 병 비만에 체내에 만들어지 단 질 가 비만 마우스에

타 것과 매우 사한 결과가 었다. 근에 아드 린 수 체에 상 가 재

하고 하 연 결과도 보고 었다. 지 직 아드 린 수 체 특 타 3-수 체 지

해하고 에 지 꾸 여하고 , 여 에 상 생 비에 지가 하 어 살 찌

게 것 다.

스트 스 시 라고 할 만 상생 에 압 많 고 , 러한 신 안과 만 해[0004]

하 해 식 취 가시 에 신체 동 감 하 므 에 지 사에 균 래 어 비

만 수 다. 피곤하거 가 났 과식할 수 고 어 가 생했 도 식 취 통해 그

보상하거 도피하 경향 다. 런 행동 어 습득 다. , 식과 여

든 생리 , 심리 신 채워주 해 식 공 아 아 들 경우 런 식 식

하 것 우게 다. 비만 사람 에 지 하여 식 과 체 못하 경우

가 많다.

체 시상하 에 취 만복감 하 가 , 만약 여 에 어 한 질 애가 생[0005]

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식 못하게 식 과 취하게 어 비만 어 다. 에 내 비

갑상 에 만약 몬 내 비 하 사가 하 어 열량 비가 감 에 비만 다.

그러 , 비만 가 갑상 에 애가 것 아니다. 신피질 몬 과 비 한 비만

내 비 비만 비만 신 또 간 질 료에 어 다량 신피질 스 드 랫동

안 사 했 에 생 경우가 다. 쿠싱 후 (Cushing syndrome) 신피질 극 몬 (ACTH) 비

상승하게 하여 신피질 극함 티 과 생 어 심 지 포 식 래한다. 여

여 몬 에스트 겐에 해 지단 해 (lipoprotein lipase, LPL)가 폐경 후에

비가 감 피하지 합 진 고 슐린 과 비 지 생 진 , 지 해가 억 어

지 므 비만 다. LPL 많 에 복 비만 래 다.

경 가 고도 달함에 라 식생 택해지고 동량 어들고, 식습 도 취 리 과[0006]

, 운동 등 취 에 지 비에 지 간 균 해 비만 가하고 다. 운동 과 비

만 계 비에 지 하도 지만, 그보다 에 지가 체내에 쉬운 사상태 변하 것

하다. 운동 동 에 지량 감 시 여 리 체내에 하게 슐린 동 약해

지 슐린 당 내리 감 , 지 합 감 지 않 므 지 진시

사상태 변한다. 또한, 운동 상태에 사도 감 므 에 지 욱 가 쉽

다. 단 질도 탄수 도 체내에 들어 여 양 지 태 몸 안에

다. 러한 과 양 지 변할 운동 지 합 상승시 게 다.

러한 비만 병 시 진 가 사 애 2 당뇨병, 동맥경 험 [0007]

가시 , 심 액공 에 담 주게 어 심 병에 걸리게 , 지 간에 담 주어 지 간,

담 , 간경변에 걸리게 다. 몸 게가 뼈 에 담 주어 골격 상 생 행동 에 라

동 한 므 운동 어 비만 욱 심 , 특 여 비만 내 비 상 가 월경 순,

감퇴, 산시 합병 , 피 습진 많 한다.

비만 하 지 여러 가지가 , 체질량지수 (Body Mass Index; BMI) 체 하여 비[0008]

만 도 평가하 하 , 체 (㎏) 신 (m) 곱 값 (BMI = ㎏/㎡) 다. 허리

복 지 량 하 아주 한 지 , 체지 체 체 에 지 게가 차지하

(%) 타내고, 상 경우 15-18 %, 여 경우 20-25 % 다.

같 , 과도한 지 상 생리학 생 학 신체 에 향 미 , 당뇨병, 고 압, 고지[0009]

, 심 계 질 암 등 병과도 한 다. 러한 비만에 해 다 어트식 항비만

개 웰빙에 한 심고 어 많 연 들에 해 진 고 다. 러한 개

단계에 스 리닝 간편한 평가 지 포 하거 동 하 다.

체 , 러한 비만 개 한 재 개 근 폭 게 연 고 , 다 어트

한 비만 료 과 하 사 도 많 알 다.

재 비만 료하 료 게 신경계에 하여 식 에 향 주 약 에 하여[0010]

수 해하 약 어 볼 수 다. 신경계에 하 약 각각 에 라 닌

(5HT) 신경계 해하 플루라민, 스 플루라민 등 약 , 아드 린 신경계 통한 에 드린

등 약 근에 닌 아드 린 신경계에 동시 하여 비만 해하 시 트라

민 등 약 들 시 고 다. 에도, 에 하여 비만 해하 약 췌 에

생 리 아 해하여 지 수 여주 , 근 비만 료 허가 리스타트 등

다. 그러 , 에 사 어 약 플루라민 등 원 폐고 압 심 막 병변과 같

근에 사 지 었 , 다 약 들도 압감 산산 등 생하여 심

, 신질 등 에 사 하지 못하 다.

에 라, 비만 또 료 지 포 억 가 등 하게 었다. 지 포[0011]

에 지 체내 한 에 지원 사 , 비만 진행 에 라 지 포 수 가가 어

뿐만 아니라 과다한 지 포 에 한 다량 트리 리 라 드 합 지 포 가 포함한

태 변 여러 변 동 한다. 지 포 가 여 에 지 지 태

합 함 다. 한편, 지 에 라 지 포 가 그 직경 약 20 지

어 수 그 결과 포 수천 지 가 것 알 다. 러한, 지 포

식사 가 하지만 새 운 지 포가 지 포 과 식사 과가

등록특허 10-1074954

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없 에 비만 근본 료 또 억 어하 해 지 포 과 하 것 하

다. 지 포 슐린 슐린 -I (insulin like growth factor-1), 몬 등 극에

하여 진 , 과 에 CCAAT enhancer-binding protein (C/EBP) family, PPAR-γ (peroxisome

proliferator-activated receptor) 등 사 들 가가 찰 다. 들, 사 들 지 포

어 지 포 진시 지 산 결합 단 질 aP2 지 산 생합 (fatty acid

synthase) 같 들 량 가시 다. 한편, 지 간 진행에도 과다한 지 여

고 보고 고 다 [J. Clin. Invest., 98, 1575-1584 (1996)].

근, 지 포 억 하 생 지 포 수 할 수 , 그에 라 여 에[0012]

지 할 수 다 아 어 탕 하여 지 포 해하 질들 탐색하고 하 연

가 진행 고 다. 새 운 약 개 하 한 여러 가지 에 약

실험 변 또 새 운 질 합 과 검색 매우 많 시간과 가 필 하다.

에 본 들 에 공지 합 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 지[0013]

포에 지 포 억 하 과가 내고, 비만 또 료 도 사 할

수 하여 본 하 다.

내

해결하 과

본 지 포 억 함 그 계 질 료에 할 수 항비만 [0014]

공하 것 다.

본 다 비만 또 료 한 약 학 공하 것 다.[0015]

본 또 다 비만 또 개 한 식 공하 것 다.[0016]

본 또 다 비만 또 개 한 약 공하 것 다.[0017]

본 또 다 비만 또 개 한 료 공하 것 다.[0018]

본 또 다 상 비만 또 료 한 약 학 약 학 한 양[0019]

비만 병 또 병 가 개체에게 여하 단계 포함하 비만 료 공하 것 다.

과 해결 수단

상 달 하 한 본 양상 , 하 학식 1 시 합 포함[0020]

하 항비만 공 다.

[ 학식 1][0021]

[0022]

본 또 다 양상에 , 술한 포함하 비만 또 료 약 학[0023]

공 다.

본 또 다 양상에 , 술한 포함하 비만 또 개 식 [0024]

공 다.

본 또 다 양상에 , 술한 포함하 비만 또 개 약[0025]

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공 다.

본 또 다 양상에 , 술한 포함하 비만 또 개 료 [0026]

공 다.

본 또 다 양상에 , 술한 비만 또 료 한 약 학 약 학 [0027]

한 양 비만 병 또 병 가 개체에게 여하 단계 포함하 비만 료 공

다.

하, 본 상 한다.[0028]

본 양상에 , 하 학식 1 시 합 포함하 항비만 공[0029]

한다.

[ 학식 1][0030]

[0031]

본 PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor) 억 함 지 [0032]

포가 지 포 것 억 시 므 비만 또 료에 사 수 다.

비만 당뇨병 고지 병 가 가시킬 수 , 애, 염, 심 계 질 [0033]

병 험 또한 커질 수 다. 또한 비만 하여 담 수 , 경우에 암도 야

수 것 알 므 , 상 비만 에도 비만과 다양한 질 또 료에

하게 사 수 다.

상 학식 1 시 합 공지 에 하여 합 할 수 다. 들 , 하 식 1에 타낸[0034]

합 과 거쳐 수 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 수득할 수 다.

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[ 식 1][0035]

[0036]

시약 건: (a) NaH, DMSO, BnPPh3Cl, THF, 45 ℃; (b) (i) Dess-Martin periodinane, CH2Cl2, 0 ℃;[0037]

(ii) NaHMDS, MePPh3Br, THF, 0 ℃; (c) (i) CSI, Na2CO3, toluene, 0 ℃; (ii) 25 % Na2SO3, rt; (d) 5 mol%

(IMesH2)(PCy3)(Cl)2Ru=CHPh, toluene, 80 ℃: (e) cat. OsO4, 50 % NMO, 80 % acetone, rt; (f) (i) 2,2-

dimethoxypropane, PPTS, CH2Cl2, rt; (ii) separation; (iii) p-TsOH, MeOH, 40 ℃; (iv) 10 % Pd/C, H2, 6n

HCl, MeOH, rt; (v) DOWEX-50w X 8 (H+ form, 0.5m NH4OH as an eluent).

상 식 1에 , "Bn" 질 (benzyl group) 타내 , "Cbz" 복시 질 (carboxybenzyl group)[0038]

타낸다.

[0039]

본 다 양상에 , 하 학식 1 시 합 포함하 항비만 [0040]

포함하 비만 또 료 약 학 공한다.

[ 학식 1][0041]

[0042]

본 에 어, " " 란 여에 해 비만 억 하거 병 지연시 든 행 미한[0043]

다.

본 에 어, " 료"란 여에 해 비만에 한 가 거 게 변경 든 행[0044]

미한다.

, 본 상 학식 1 시 합 약학 허 가 한 염 태 사 수 , 염[0045]

약학 허 가 한 리산 (free acid)에 해 산 가염 하다. 산 가염 염산,

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질산, 산, 산, 브 수 산, 드 수 산, 아질산 또 아 산과 같 산 지

복실 트, 닐- 알 에 트, 하 드 시 알 에 트 알 에 트, 향 산 , 지

향 폰산 같 독 산 얻 다. 러한 약학 독한 염 트, 피

트, 트, 트, 트, 니트 트, 포스 트, 하 드 겐 포스 트, 하

드 겐 포스 트, 타포스 트, 피 포스 트 라 드, 브 마 드, 아 다 드, 플루 라 드, 아

트, 프 피 트, 에 트, 프릴 트, 아 릴 트, 포 트, 티 트,

프 트, 헵타 에 트, 프 피 트, 살 트, 말 트, 시 트, 수 트, 트,

마 트, 말리에 트, 틴-1,4- 에 트, 헥산-1,6- 에 트, 에 트, 에 트, 틸 에

트, 니트 에 트, 하 드 시 에 트, 시 에 트, 프탈 트, 프탈 트, 포

트, 루엔 포 트, 포 트, 실 포 트, 닐아 트, 닐프 피 트,

닐 티 트, 시트 트, 락 트, β-하 드 시 티 트, 리 트, 말 트, 타트 트, 탄

포 트, 프 포 트, 프탈 -1- 포 트, 프탈 -2- 포 트 또 만 트 포함한다.

본 에 산 가염 통상 , 들 , 상 학식 1 시 합 과량 산 수 액 [0046]

에 해시 고, 염 수 매, 들 탄 , 에탄 , 아 또 아 니트릴 사 하여

시 할 수 다.

또한, 본 상 학식 1 시 합 염 사 하여 약학 허 가 한 염 만들[0047]

수 다. 알 리 또 알 리 염 들 합 과량 알 리 수산 또 알 리

수산 액 에 해하고, 비 해 합 염 여과하고, 여액 , 건 시 얻 다. ,

염 트 , 또 슘염 하 것 약상 합하다. 또한, 에 하 염 알 리

또 알 리 염 당한 염 ( , 질산 )과 시 얻 다.

또한, 상 약 학 약학 허 가 한 담체 가 포함할 수 다. 약학 허 가 한[0048]

담체 포함하 상 경 또 비경 여러 가지 수 다. 할 경우에 보통 사

하 진 , 량 , 결합 , 습 , 해 , 계 등 또 사 하여 다. 경

여 한 고 에 , , 산 , 과립 , 슐 등 포함 , 러한 고 하 상

합 에 어도 하 상 들 , , 탄산 슘, 수 스 (sucrose) 또 락 스

(lactose), 라틴 등 어 다. 또한 단순한 에 스 아린산 마그 슘, 탈 등과 같

들도 사 다. 경 여 한 액상 탁 , 내 액 , , 시럽 등 해당 사

단순 , 리 드 라핀 에 여러 가지 , 들 습 , 감미 , 향 , 보

등 포함 수 다. 비경 여 한 에 균 수 액, 비수 , 탁 , , 동결 건

, 가 포함 다. 비수 , 탁 프 필 리 (propylene glycol), 폴리에틸 리 ,

리브 과 같 식 , 에틸 트 같 주사 가 한 에스 등 사 수 다.

(witepsol), 마 골, 트 (tween) 61, 지, 라우린지, 리 라틴 등 사 수

다.

상 약 학 , , 산 , 과립 , 슐 , 탁 , 내 액 , , 시럽 , 균 수 액,[0049]

비수 , 탁 , , 동결 건 루어진 택 어 하 가

질 수 다.

상 본 약 학 한 양 여한다. [0050]

본 에 어 "약 학 한 양" 학 료에 가 한 합리 수 / 험 비 질[0051]

료하 에 한 양 미하 , 량 수 개체 도, 연 , 별, 감염 러스 ,

약 , 약 에 한 민감도, 여 시간, 여 경 비 , 료 간, 동시 사 약 포함

한 타 학 야에 알 진 에 라 결 수 다. 본 개별 료 여

하거 다 료 병 하여 여 수 고 래 료 순차 또 동시에 여 수 다. 그리

고 단 또 다 여 수 다. 상 고 하여 없 한 양 과 얻

수 양 여하 것 하 , 당업 에 해 하게 결 수 다.

본 비만 또 료 하여 단독 , 또 수술, 몬 료, 약 료 생 학[0052]

사 하 들과 병 하여 사 할 수 다.

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한편, 본 상 비만 또 료 약 학 약 학 한 양 비만 병 또[0053]

병 가 개체에게 여하 단계 포함하 비만 료 공한다.

본 에 어, "개체"란 미 비만 거 비만에 걸릴 수 간 포함한 든 동 미하고 본 [0054]

학식 1 시 합 포함하 개체에게 여함 , 상 비만 과

료할 수 다. 들어, 본 비만 간 료할 수 다. 본

비만 료 병행하여 여할 수 다.

상 여 경 직에 도달할 수 한 어 한 경 통하여 여 수 다.[0055]

본 하 에 라 복강내 여, 맥내 여, 근 내 여, 피하 여, 피내 여, 경

여, 비내 여, 폐내 여, 직 내 여 수 , 에 한 지 않 다. 또한 상

질 포 동할 수 에 해 여 수 다.

아울러, 본 술한 항비만 포함하 비만 또 개 식 [0056]

공한다.

, 본 상 학식 1 시 합 포함하 항비만 비만 또 개 식 [0057]

에 첨가 수 다. 본 상 학식 1 시 합 포함하 항비만 식 첨가

사 할 경우, 상 그 첨가 거 다 식 또 식 과 함께 사 수 고, 통상

에 라 하게 사 수 다. 합양 사 ( , 건강 또 료 처 )에

라 합하게 결 수 다. , 식 또 료 시에 본 원료에 하여

0.01 ~ 10 량%, 람직하게 0.05 ~ 1 량% 양 첨가 다. 그러 건강 생 하거

또 건강 하 간 취 경우에 상 양 상 하 도 사 수 다.

상 식 에 특별한 한 없다. 상 질 첨가할 수 식 , 지, 빵, [0058]

, , 스 , 과 , 피 , 라 , 타 , 껌 , 아 스 림 포함한 , 각 스프,

료수, 차, 드링 , 알 료 비타민 복합 등 , 통상 미에 건강식

포함한다.

본 건강 료 통상 료 같 여러 가지 향미 또 천연 탄수 등 가 [0059]

함 할 수 다. 상술한 천연 탄수 포도당, 과당과 같 사 라 드, 말 스, 슈 스 같 사

라 드, 스트린, 사 스트린과 같 폴리사 라 드, 리 , 비 , 에리트리 등 당알

다. 감미 타우마틴, 스 비아 과 같 천연 감미 , 사 린, 아스 탐과 같 합 감

미 등 사 할 수 다. 상 천연 탄수 비 본 100 ㎖ 당 약 0.01 ~

0.04 g, 람직하게 약 0.02 ~ 0.03 g 다.

상 에 본 여러 가지 양 , 비타민, 해질, 미 , 착색 , 트산 그 염, 알 산[0060]

그 염, 산, 보 드 , pH , 안 , , 리 린, 알 , 탄산 료에 사

탄산 등 함 할 수 다. 그 에 본 천연 과 스, 과 스 료 야채

료 한 과 함 할 수 다. 러한 독립 또 합하여 사 할 수 다. 러한

첨가 비 게 하진 않지만 본 100 량 당 0.01 ~ 0.1 량 에 택

것 다. 들 들 독립 또 합하여 사 할 수 다.

아울러, 본 술한 항비만 포함하 비만 또 개 약 [0061]

공한다.

, 본 비만 또 개 약 에 첨가 수 다. 본 상[0062]

학식 1 합 포함하 항비만 약 첨가 사 할 경우, 상 그 첨가

거 다 약 과 함께 사 수 고, 통상 에 라 하게 사 수 다.

합량 사 ( , 건강 또 료 처 )에 라 합하게 결 수 다.

람직하게 , 상 약 독청경 , 샤워폼, 가그린, 티슈, 비 , 핸드워시, 가습 진[0063]

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, 마스 , 연고 또 필 진 수 다.

아울러, 본 술한 항비만 포함하 비만 또 개 료 [0064]

공한다.

, 본 비만 또 개 료 에 첨가 수 다. 본 상[0065]

학식 1 합 포함하 항비만 료 첨가 사 할 경우, 상 그 첨가 거

다 료 과 함께 사 수 고, 통상 에 라 하게 사 수 다.

합량 사 ( , 건강 또 료 처 )에 라 합하게 결 수 다.

람직하게 , 상 료 연 수, 수 수, 양 수, 양 림, 마사지 림, 에[0066]

스, 아 림, 아 에 스, 징 림, 징폼, 징워 , , 우 , , 림, ,

에 스, 컵 스, 운 , 염 , 샴 , 린스 또 수 다.

과

본 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 포함하 지 포가 지[0067]

포 것 억 하므 , 비만 또 비만 해 수 다양한 질 료에

하게 사 수 다.

도 간단한

도 1 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 에 한 지 포에 지 포 억[0068]

과 드 O 염색 통해 그래프 타낸 것 다.

도 2 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 에 한 지 포에 지 포 억

과 드 O 염색 통해 미경 찰 한 결과 타낸 사진 다.

도 3 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 포독 (cytotoxicity) 도 한 그래

프 다.

도 4 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 PPAR-γ 사 에 미 향 타낸

그래프 다.

도 5 C/EBPα GLUT4 real-time PCR 실시한 결과 타낸 그래프 다.

도 6 Adiponectin ADD1/SREBP1c real-time PCR 실시한 결과 타낸 그래프 다.

도 7 Resistin aP2 real-time PCR 실시한 결과 타낸 그래프 다.

도 8 PPAR-γ real-time PCR 실시한 결과 타낸 그래프 다.

도 9 PPARγ C/EBPα 웨스 블 결과 타낸 것 다.

실시하 한 체 내

하, 본 실시 실험 에 해 보다 상 한다. 단, 하 실시 본 시하 것[0069]

뿐 본 내 하 실시 에 한 것 아니다.

1 : (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 [0070]

(가) (2R,3S,4S)-2,3,4-트리스( 질 시)-6- 닐헥스-5-엔-1- ( 학식 2) 합[0071]

수 DMSO (3.38 mL, 28.56 mmol) 수 THF (53 mL) 합 액에 0 ℃, 질 건에 NaH (1.14 g,[0072]

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- 11 -

72.16 mmol, 60% in mineral oil) 고 실 에 1시간 동안 한 후, 0 ℃에 BnPPh3Cl (11.1 g, 28.56

mmol) 가하고 실 에 2시간 동안 하 다. 0 ℃에 , (3R,4R,5R)-3,4,5-트리스( 질 시) 트라하 드

-2H-피란-2- (4.0 g, 9.52 mmol) 상 에 생 합액에 가하고 45 ℃에 2시간 동안 하 다.

그 후, 합 냉각시 고 EtOAc (50 mL) 한 다 , NH4Cl 포 수 액, brine 척하 , 그 후

에 수 MgSO4 건 시 고 감압 하 다. 얻 사 컬럼 마 그래피 실시하여

(2R,3S,4S)-2,3,4-트리스( 질 시)-6- 닐헥스-5-엔-1- 80 % (Z:E = 3.4:1) 수 수득하 다.

[ 학식 2][0073]

[0074]

Rf = 0.37 (Hexane/EtOAc 3:1); [α]D25 +39.6 (c 1.0, CHCl3); Z isomer:

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.68 (t,[0075]

1H, J = 5.0 Hz), 3.73 (dd, 1H, J = 12.0, 5.0 Hz), 3.77 (dd, 1H, J = 12.0, 5.0 Hz), 3.94 (t, 1H, J =

5.0 Hz), 4.29 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 4.31 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.48 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.56 (d, 1H,

J = 11.5 Hz), 4.69 (dd, 1H, J = 10.0, 5.0 Hz), 5.81 (dd, 1H, J = 12.0, 10.0 Hz), 6.90 (d, 1H, J = 12.0

Hz), 7.14-7.40 (m, 20H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 61.42, 70.67, 71.97, 74.19, 74.47, 79.45, 81.17,

126.89, 127.53, 127.78, 127.84, 127.93, 127.98, 128.13, 128.28, 128.51, 128.58, 128.73, 128.99,

136.81, 138.18, 138.46, 138.52; E isomer: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.64 (dt, 1H, J = 6.5, 4.0 Hz),

3.82 (d, 2H, J = 4.0), 3.96 (dd, 1H, J = 6.0, 4.0 Hz), 4.24 (dd, 1H, J = 7.5, 4.0Hz), 4.45 (d, 1H, J =

12.0 Hz), 4.53 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 4.63 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 4.70 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.76 (d,

1H, J = 11.5 Hz), 4.88 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 6.26 (dd, 1H, J = 16.0, 7.5 Hz), 6.43 (d, 1H, J = 16.0

Hz), 7.27-7.40 (m, 20H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 61.31, 70.35, 71.86, 74.19, 74.55, 78.82, 81.01,

126.72, 127.53, 127.83, 127.91, 127.98, 128.06, 128.21, 128.34, 128.58, 128.62, 128.81, 128.99,

134.85, 136.69, 136.81, 138.29, 138.48, 138.63; HRMS (FAB) Calcd for C33H35O4 [M+H+] 495.2535, found

495.2547.

( ) (3S,4R,5R)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3,4,5-트리 )트리스( 시)트리스( 틸 )트리 ( 학식 3) 합[0076]

(2R,3S,4S)-2,3,4-트리스( 질 시)-6- 닐헥스-5-엔-1- (2.28 g, 4.61 mmol) 수 CH2Cl2 (18 mL) 액에[0077]

Dess-Martin periodinane (5.87 g, 13.83 mmol) 0 ℃에 가하고, 실 에 1.5시간 동안 하 다. 그

후 합 CH2Cl2 하고 NaHCO3 포 수 액, brine 척한 다 수 MgSO4 건 시 고 감압

하 다. 수득한 알 하 드 과 없 다 진행시 다. MePPh3Br (4.94 g, 13.83 mmo

l) 수 THF (15 mL) 액에 NaHMDS (13.83 mL, 13.83 mmol) 고 0 ℃에 1시간 동안 한 후, 알 하

드 0 ℃에 천천 가하고 실 에 15 동안 시 다. 합 EtOAc 하고 H2O brine

척한 다 수 MgSO4 건 시 고 감압 하 다. 얻 사 컬럼 마 그래피 실시

하여 (3S,4R,5R)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3,4,5-트리 )트리스( 시)트리스( 틸 )트리 56 % (Z:E = 3:1)

수 수득하 다.

등록특허 10-1074954

- 12 -

[ 학식 3][0078]

[0079]

Rf = 0.38 (Hexane/EtOAc 15:1); [α]D25 -70.3 (c 1.0, CHCl3); Z isomer:

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.87[0080]

(dd, 1H, J = 6.5 Hz), 4.04 (dd, 1H, J = 8.0, 4.0 Hz), 4.13 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.22 (d, 1H, J = 12.0

Hz), 4.47 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.55 (m, 2H), 4.84 (dd, 2H, J = 11.5, 11.5 Hz), 4.98 (d, 1H, J = 16.5

Hz), 5.25 (dd, 1H, J = 11.5, 10.0 Hz), 5.91-5.98 (m, 2H), 6.89 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 7.03-7.38 (m,

20H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 70.06, 70.37, 73.84, 74.54, 81.84, 82.76, 119.41, 127.32, 127.45,

127.48, 127.61, 127.66, 128.12, 128.29, 128.34, 128.38, 128.42, 129.30, 130.15, 134.75, 135.56,

136.95, 138.44, 139.02, 139.22; E isomer: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.86-3.90 (m, 1H), 4.08 (dd, 1H, J

= 9.0, 4.0Hz), 4.15-4.27 (m, 2H), 4.43 (dd, 2H, J = 4.5, 11.5Hz), 4.58-4.70 (m, 2H), 4.83-4.88 (m,

2H), 5.25-5.40 (m, 2H), 7.25-7.45 (m, 20H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 70.36, 70.93, 72.71,75.46,

80.23, 84.54, 119.22, 126.83, 127.34, 127.49, 127.65, 127.73, 127.79, 127.84, 129.23, 130.79, 133.30,

133.60, 136.01, 136.38, 136.87, 138.47,138.56, 138.75, 138.82; HRMS (FAB) Calcd for C34H35O3 [M+H+]

513.2406, found 513.2407.

(다) 질 (3S,4S,5R)-4,5-비스( 질 시)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3- 트 ( 학식 4) 합[0081]

(3S,4R,5R)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3,4,5-트리 )트리스( 시)트리스( 틸 )트리 (3.6 g, 7.34 mmol) [0082]

수 THF (29 mL) 액에 CSI (1.95 mL, 21.96 mmol) Na2CO3 (3.5 g, 33.03 mmol) 고 0 ℃에 24시간 동

안 하 다. 그 합 에 25 % Na2SO3 (10 ml) 고 실 에 24시간 동안 한 후, EtOAc 어

하고 H2O brine 척하 다. 그 다 수 MgSO4 건 시 고 감압 하 다. 얻 사

컬럼 마 그래피 실시하여 질 (3S,4S,5R)-4,5-비스( 질 시)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3- 트

80 % (Z:E = 2.6:1, anti:syn = 18:1) 수 수득하 다.

[ 학식 4][0083]

[0084]

Rf = 0.28 (Hexane/EtOAc 8:1); [α]D25 -79.6 (c 0.1, CHCl3);

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.73 (br,[0085]

0.56H), 3.80 (t, 0.72H, J = 7.0 Hz), 3.88-3.92 (m, 0.72H), 4.29 (d, 0.28H, J = 11.5 Hz), 3.39 (d,

0.72H, J = 11.5 Hz), 4.47 (d, 0.28H, J = 11.5 Hz), 4.54 (d, 0.72H, J = 11.5 Hz), 4.57 (d, 0.28H, J =

11.5 Hz), 4.61 (d, 0.72H, J = 11.5 Hz), 4.63 (d, 0.28H, J = 11.5 Hz), 4.67 (d, 0.72H, J = 11.5 Hz),

4.77 (d, 0.28H, J = 11.5 Hz), 4.89 (br, 0.28H), 5.06-5.16 (m, 2H), 5.25 (t, 0.72H, J = 8.0 Hz), 5.35-

5.44 (m, 2H), 5.76 (dd, 0.72H, J = 10.5, 10.0 Hz), 5.85-5.94 (m, 1H), 6.17 (dd, 0.28H, J = 15.5, 8.0

등록특허 10-1074954

- 13 -

Hz), 6.49 (d, 0.28H, J = 15.5 Hz), 6.63 (d, 0.72H, J = 10.5 Hz), 7.03-7.46 (m, 20H); 13C NMR (125 MHz,

CDCl3) δ 50.32, 66.87, 70.47, 70.53, 74.49, 81.12, 81.34, 83.20, 83.50, 119.70, 120.25, 126.78,

127.53, 127.60, 127.85, 128.01, 128.15, 128.23, 128.37, 128.58, 128.65, 128.68, 128.76, 128.90,

132.74, 132.82, 136.18, 136.58, 138.25, 155.60; HRMS (FAB) C35H36NO4 [M+H+] 534.2644, found 534.2640.

(라) 질 (1S,4R,5S)-4,5-비스( 질 시)사 트-2-에닐 트 ( 학식 5) 합[0086]

질 (3S,4S,5R)-4,5-비스( 질 시)-1- 닐헵타-1,6- 엔-3- 트 (3.13 g, 5.87mmol) 수 루엔[0087]

(59 ml) 액에 Grubbs Catalyst (0.24 g, 0.29 mmol) 가하여 80 ℃에 4시간 동안 시 다. 그 후,

라 트 (Celite) 통해 여과 시 다 , 컬럼 마 그래피 실시하여 질 (1S,4R,5S)-4,5-비스(

질 시)사 트-2-에닐 트 75 % 수 수득하 다.

[ 학식 5][0088]

[0089]

Rf = 0.18 (Hexane/EtOAc 4:1); [α]D25 -79.6 (c 0.1, CHCl3);

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.02 (t, 1H, J =[0090]

5.5 Hz), 4.30 (dd, 1H, J = 5.0, 2.5 Hz), 4.64 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.65 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.69-

4.71 (br, 1H), 4.72 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.79 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 5.12 (s, 2H), 5.29 (d, 1H, J =

9.0 Hz), 6.05 (dd, 1H, J = 6.0, 2.0 Hz), 6.09 (dd, 1H, J = 6.0, 3.0 Hz), 7.27-7.38 (m, 15H); 13C NMR

(125 MHz, CDCl3) δ 54.65, 66.88, 72.31, 72.58, 78.42, 80.03, 127.86, 127.90, 128.02, 128.05, 128.22,

128.61, 128.69, 133.06, 135.08, 136.90, 138.30, 138.79, 156.36; HRMS (FAB) Calcd for C27H28NO4 [M+H+]

430.2018, found 430.2013.

(마) 질 (1S,2S,3R,4S,5S)-2,3-비스( 질 시)-4,5- 하 드 시사 틸 트 ( 학식 6) 합[0091]

질 (1S,4R,5S)-4,5-비스( 질 시)사 트-2-에닐 트 (0.45g, 1.06 mmol) 80 % 아 액에[0092]

50 % NMO(0.33 ml) OsO4 (1 crystal) 가하여 실 에 3시간 동안 시 다. 그 후에 EtOAc 어

시 고 10 % NaHSO3, Brine 척한 다 , 수 MgSO4 건 시 고 감압 하 다. 얻 사

컬럼 마 그래피 실시하여 질 (1S,2S,3R,4S,5S)-2,3-비스( 질 시)-4,5- 하 드 시사 틸

트 82 % 수 수득하 다.

[ 학식 6][0093]

[0094]

등록특허 10-1074954

- 14 -

Rf = 0.36 (Hexane/EtOAc 1:2); [α]D25 +7.3 (c 0.44, CHCl3);

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.82 (br s, 1H),[0095]

3.09 (br s, 1H), 3.91-3.99 (m, 3H), 4.17 (dd, 1H, J = 5.5, 4.5 Hz), 4.23 (br d, 1H, J = 3.0 Hz), 4.52

(d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.68 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.76 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.79 (d, 1H, J = 12.0 Hz),

5.14 (d, 1H, J = 12.5 Hz), 5.10 (d, 1H, J = 12.5 Hz), 5.62 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 7.27-7.40 (m, 15H); 13C

NMR (125 MHz, CDCl3) δ 58.34, 67.35, 72.63, 73.27, 73.59, 76.42, 77.58, 84.59, 127.94, 128.01,

128.21, 128.37, 128.50, 128.69, 128.76, 128.82, 136.45, 138.04, 138.29, 157.59; HRMS (FAB) Calcd for

C27H30NO6 [M+H+] 464.2073, found 464.2083.

( ) (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 ( 학식 7) 합[0096]

질 (1S,2S,3R,4S,5S)-2,3-비스( 질 시)-4,5- 하 드 시사 틸 트 (0.17 g, 0.38 mmol)[0097]

MeOH (3 mL) 액에 6N HCl (1.5 mL) 가하고, 10 % Pd/C 매, 수 가스 건 하에 실 에 24시간 동안

시 다. 그 후에 라 트 여과시 고 한 다 , 착 수지 하여 마 그래피 실시

하여 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 95 % 수 수득하 다.

[ 학식 7][0098]

[0099]

Rf = 0.16 (CH2Cl2/MeOH 1:2); [α]D22 +2.3 (c 1.0, MeOH);

1H NMR (500 MHz, D2O) δ 3.46 (t, 1H, J = 6.0[0100]

Hz), 3.96 (t, 1H, J = 5.0 Hz), 4.00 (dd, 1H, J = 6.5, 6.0 Hz), 4.19 (t, 1H, J = 7.0 Hz), 4.22 (dd, 1H,

J = 5.5, 4.5 Hz); 13C NMR (125 MHz, D2O) δ 57.19, 67.83, 71.83, 73.85, 76.39; HRMS (FAB) Calcd for

C5H12NO4 [M+H+] 150.0766, found 150.0767.

실험 1-1 : 3T3-L1 지 포 비[0101]

3T3-L1 지 포 한 생 공학연 원 얻어 하 다. 3T3-L1 지 포 사과 연 하[0102]

실험에 리 것 , 상 포 가 할수 지 포 내 지 하여 비만

도하게 다. 항비만 과 가질 것 생각 질 상 포에 처리하 , 포 가

수 항비만 과가 질 것 볼 수 다.

실험 1-2 : 3T3-L1 지 포 지 포 도[0103]

마우스 지 포 3T3-L1 10 % BCS DMEM 지 고 37 ℃, 5 % CO2 건에 양하 다. 3T3-L1[0104]

지 포 24 well plate에 5×104/well 포 수 주한 후, 100 % confluency 시 2 동안

지시 다. 지 포 MDI (0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), 1 uM dexamethasone, 1

ug/ml 슐린) 포함하 10% FBS DMEM 지 지 포 2 동안 도하 고, 양 48 시간 후, 1

ug/ml 슐린 함 10 % FBS DMEM 틀 동안 양하 다. 그 후 2 마다 4 동안 10 % FBS DMEM

등록특허 10-1074954

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양액 체하 다. 지 포 도하 동안 1에 한 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사

탄-1,2,3,4- 트라 시료 60, 80 100 uM 도 각 양에 처리하 고, 가 시 8 째

에 지 포 도 찰하 다.

실험 1-3 : 드 O (Oil red O) 염색 [0105]

지 도 하 해 드 O 염색 실시하 다. 상 실시 1-2에 도한 지 포 [0106]

도 드 O 염색 통해 1차 미경 통해 하 고, 지 포 염색 도 510 nm 도

에 포 지 양 하 다. 그 결과 도 1 도 2에 타내었다. 도 1 도 2

(1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 시료 지 않 경우에 60, 80 100 uM

경우 지 차 억 과가 가하 것 할 수 었다.

실험 2 : 포독 실험[0107]

3T3-L1 포 96 well plate에 5×103/well 개 주하여 37 ℃, 5 % CO2 건에 하루 동안 양하 다.[0108]

24 시간 후 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 시료 각각 20 uM, 40 uM, 60 uM, 80 uM

100 uM 도 처리하여 24시간 동안 양한 후 MTT 통해 포독 하 다. ELISA 통해 540 nM

도에 하 , 그 결과 도 3에 타내었다. 도 3 참고하 , 도에 포독 지

않 것 찰 었다.

실험 3 : PPAR-γ 사 [0109]

HEK 293T cell에 pGL3-PPRE luciferase reporter PPARγ, pRL-SV-40 플라스미드 트 스[0110]

(transfection) 하 다. 들 하루 동안 시 후 포에 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-

1,2,3,4- 트라 시료 60, 80 100 uM과 PPARγ 도 질 10 uM Troglitazone 24시간 동안 함께 처리하

다. 그 후, (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 시료에 한 PPARγ 사 도

luciferase 강도 통해 찰하 , 그 결과 도 4에 타내었다. 도 4 시료 도가 0 uM에

100 uM PPAR-γ 사 차 감 할 수 었다.

실험 4 : Real-time PCR[0111]

지 포 단계에 C/EBPα PPARγ 지 포에 양 가한다. 아 포[0112]

(adipokine)들 도 가하게 다. 지 포 도 과 같 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄

-1,2,3,4- 트라 시료 60, 80 100 uM 도 처리 한 후 8 동안 시 C/EBPα PPARγ, 지

포 에 여하 들 ( 1) 도 Real-time PCR 하 다. 가 벽하게 어

3T3-L1 포 PBS 척한 후, cell pellet 아 RNA prep kit 사 하여 RNA만 리하 다.

RNA 1 ug 사 하여 cDNA 합 한 후 SYBR green과 primer 하여 Real-time PCR 수행하 ,

GAPDH 사 하 다. 각각 C/EBPα PPARγ, 지 포 에 여하 들

도 결과 도 5 내지 도 8에 타내었다. 도 5 내지 도 8 , 체 0 uM에 100 uM 도가 가하

도에 C/EBPα PPARγ, 지 포 에 여하 들 억 할 수

었 , 특 aP2 경우에 60 uM만 처리한 경우에도 게 억 었 할 수 었다.

1

Gene name[0113] Forward primer Reverse primer

GAPDH GAGTCAACGGATTTGGTCGT GACAAGCTTCCCGTTCTCAG

PPARγ CGCTGATGCACTGCCTATGA AGAGGTCCACAGAGCTGATTCC

C/EBPα AGGTGCTGGAGTTGACCAGT CAGCCTAGAGATCCAGCGAC

GLUT4 CTTCTTTGAGATTGGCCCTGG AGGTGAAGATGAAGAAGCCAAGC

Adiponectin AGCCTGGAGAAGCCGCTTAT TTGCAGTAGAACTTGCCAGTGC

등록특허 10-1074954

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aP2 CATGGCCAAGCCCAACAT CGCCCAGTTTGAAGGAAATC

ADD1/SREBP1c CAAACTGCCCATCCACCGAC TGCCTCCTCCACTGCCACAA

Resistin TCAACTCCCTGTTTCCAAATGC TCTTCACGAATGTCCCACGA

실시 5 : 웨스 블 (Western blot assay)[0114]

지 포 도 과 같 3T3-L1 포에 (1S,2S,3S,4S)-5-아미 사 탄-1,2,3,4- 트라 시료[0115]

틀 간격 처리한 후 포 PBS 척하 , RIPA buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM

sodium chloride, 1 % NP-40, 0.5 % sodium dexycholate, 0.1 % sodium dodecyl sulfate, protease

inhibitor) 하여 포 해시 다. 13000 rpm에 30 동안 원심 리하여 단 질 량하고,

8 % SDS-PAGE gel 하여 동 수행하 다. 동 protein들 membrane에 동시 후 5 %

skim milk 포함하 TBST blocking 하 다. 1차 항체 (PPARγ, C/EBPα) 2차 항체 시 후 ECL

통해 PPARγ C/EBPα 단 질 규 하 , 그 결과 도 9에 타내었다.

도

도 1

도 2

등록특허 10-1074954

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도 3

도 4

도 5

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도 6

도 7

도 8

도 9

열

열 첨

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