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The world leader in serving scienceProprietary & Confidential
Beatriz Colom FernándezDirección Técnica Unidad de Inmunología
2018 Kick Off Meeting
October 24-26, 2018
BUSCANDO MÁS ALLÁ DE LA SUPERFICIE : SCREENING DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES
Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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Indice
• Enfermedades del tejido conectivo (CTD).
• Determinación de ANAs en el laboratorio.
• ¿Qué es el Elia CTD Screen?
• Estudio comparativo de la técnica de cribado EliA CTD con la de IFI para la determinación de ANAs en
pacientes en seguimiento o con alta sospecha diagnostica de EAS realizado en Synlab.
• Propuesta de nuevo algoritmo de Screening diagnóstico para laboratorios en el screening de ANA´s.
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Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo
103 Enfermedades autoinmunes (1)
En conjunto afectan al 5-10% población desarrollados (2)
Tienden a la cronicidad y al compromiso de muchos órganos y tejidos, produciendo daño estructural y funcional.
Importancia de diagnóstico precoz para orientar tratamiento adecuado.
Síntomas e historia clínica del paciente junto con examen médico y de laboratorio.
Los anticuerpos antinucleares (ANA) son el “sello serológico” de las enfermedades del tejido conectivo.
(1) Diagnostic criteria in autoimmune disease
(2008)
(2) Journal of Autoimmunity 34 (2010) 168-177
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• Clasificación en sistémicas y
órgano-específicas
Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo (CTD)
Tiroiditis de Hashimoto
Mixedema Primario
Anemia perniciosa
Gastritis atrofia AI
Enfermedad de Addison
Hepatitis Autoinmune
-
-
-
-
Síndrome de Sjögren
Artritis reumatoide
Dermatomiositis
Esclerodermia
EMTC
SAF
Lupus eritematoso discoide
LES
Sistémicas
Órgano específicas
“Inmunología” 7ª edición Elsevier
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Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo (CTD)
Primeros síntomas muy genéricos
Síntomas clínicos similares
Múltiples órganos afectados
Diferentes facultativos implicados (médicos de atención primaria, pediatras, reumatólogos, medicina interna,
gastroenterólogos, endocrinos,…)
DIAGNOSTICO DIFICIL
PRUEBAS DE LABORATORIO ESPECIFICAS
Y FIABLES COMO AYUDACongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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Anticuerpos antinucleares (ANAs)
¿Qué son los ANAs?
Son autoanticuerpos. Anticuerpos que reconocen componentes celulares autólogos, dirigidos frente:
ags nucleares
membrana nuclear
Huso mitótico
citoplasmáticos (organelas)
membranas celulares
Presentes en enfermedades autoinmunes pero también en procesos inflamatorios, infecciosos, fármacos, etc.
Útiles para diagnóstico (ó criterio diagnóstico), diagnóstico diferencial, clasificación, pronóstico, y
seguimiento enfermedades autoinmunes.
Técnicas para detección:
Técnicas de precipitación (inmunoprecipitación, inmunodifusión, contrainmuno-electroforesis) y hemaglutinación.
Inmunoensayos: Inmunoblotting, Radioinmunoensayo, Inmunofluorescencia (IFI), Enzimoinmunoensayo (ELISA),
Tecnología multiplexCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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Inmunofluorescencia (IFI)
International Consensus of ANA Patters (ICAP)
Homogéneo:dsDNA
Nucleosoma
Histonas
Centromérico
CENP-A, B
Citoplasmáticos
Reticular
Moteado (puntos discretos/fino/fino denso)
Fibrilares (lineal/segmentado/filamentar)
Golgi
Bastones y anillos
Nucleolar
Homogéneo
Grumoso
Granular
Moteado
Fino
Denso
Fino/denso
Membrana nuclear
Parecido PCNA
CENP-F
Mitoticos
Mid body
Huso mitótico
Centriolo
Envoltura cromosómica
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Autoantígenos diana y CTD asociadas
*Mahler et al. J Immunolo Res
SLE: systemic lupus erythematosus; SSc: sysemic sclerosis; SjS: Sjögren´s síndrome;
IIM: idiopathic inflammatory myopathy; MCTD: muxed connective tissue disease;
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Relevancia ac anti-SSA/RO
Anti-SSA/Ro es el ag mas frecuente en los pacientes ANA+.
Anti SSA/Ro52 y Ro60 suelen darse juntos en los pacientes.
Anti Ro60 puede encontrarse forma exclusiva, pacientes LES.
Anti Ro52 puede encontarse de forma exclusiva, no son específico de una enfermedad, frecuentes en
miositis, S.Sjögren, esclerodermia y LES.
Anti Ro52 en miositis, asociados a Jo-1.
Proporción importante de pacientes CTD, solo se detecta ac anti-Ro52.
Sensibilidad para detección por IFI e inmunoblotting es baja.
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Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo (CTD)
Muy sensible: Test screening
Claro y orientativo: Objetivo
Lo más específico posible:
Aumentar el rendimientoCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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¿Qué es el Elia CTD Screen?
• Cribado por enzimoinmunoensayo (EIA) para
enfermedades del tejido conjuntivo
Sm
RNP 70
RNP A
RNP C
Ro 60
Ro 52
La
Scl-70
CENP
Jo-1
ds-DNA
Fribrilarin
RNA Polym.III
Rib-P
PM/Scl
PCNA
Mi2
Wavelength(l) Ecitation (Amax)
Fluorescence (Emax)
FLUORESCENCIA
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Elia CTD Screening
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IFI VS ELIA CTD
IFIVentajas
Alta sensibilidad
Detecta mas de 100 Ags (patrones)
Herramienta para descubrir nuevos
autoanticuerpos
Util para amplio espectro enf
autoinmunes(HAI, etc)
Precio
Inconvenientes
Poco específico
Falta sensibilidad (Rib-P, Ro-52, Jo-1)
Subjetivo
No estandarizados
Personal altamente cualificado
Elia CTDVentajas
Alta especificidad
Antígenos clínicamente relevantes
Objetivo
Cuantifica rango
Reproducible
Estructura 3D antígeno
Tiempo
Coste-efectivo
Inconvenientes
Solamente útil ETC
Falta sensibilidad monoantigénica
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…Medicina basada en la evidencia
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… Medicina basada en la evidencia
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… Medicina basada en la evidencia
Elia CTD + especificidad
A = especificidad, Elia CTD +
sensible
VPP Elia CTD > IFI
VPN IFI > Elia CTD
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Estudio comparativo de métodos para el cribado de enfermedades autoinmunes sistémica :FLUOROENZIMOINMUNOENSAYO VS INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
Criterio inclusión: Pacientes ya diagnosticados de EAS o con alta sospecha.
Determinación ANA por IFI Hep-2 (Euroimmun) y Elia CTD Screen.
ENAs específicos a todos los sueros positivos por Elia CTD Screen o por IFI Hep-2.
Se consideró el valor verdadero el concordante con los ENAs y de acuerdo con diagnóstico final descrito en la
Hª clínica.
Se analizó especificidad y sensibilidad
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Material y métodos
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Resultados
IFI ELiANº
RESULTADOS
+ + 8
- - 62
+ - 25
- + 4
Total 99
Discrepancias
n=29
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Resultados
2 casos ENA POS (Ro52+)
2 casos ENA NEG DNA POSI
4 casos
25 casos
23/25 ENA negativo
1/320 Homogéneo. ENA screening+low (sin ENAs específico)Act: 640 Nuclear dots+Homogéneo Scl-70 Probable Esclerosis Sistémica
1/320 Moteado. DNA+ SSA+ SSB+ Act: 640 Moteado. SSA+ SSb+ Sindrome SjögrenCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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Resultados
RESULTADO IFI ELiA
FN 4 2
FP 23 0
VN 62 84
VP 10 12
Sensibilidad 71,43% 85,71%
Especificidad 72,94% 100,00%
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Cómo trabajamos entonces?Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018
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Algoritmo ANA laboratorio
Elia CTD Screen
Cuáles??
dsDNA, Rib-P, PM-scl, fibrillarin,
PCNA, RNA Pol III, Mi-2
SOSPECHA CLINICA ETC
Negativo
ETC fuertemente
descartada
ENA específicosIFI
Homogéneo
Centrómero
Moteado
Nucleolar
Citoplasmático
dsDNA
Positivo Según sospecha clínica
Sobrecoste????
COMUNICACIÓN
CLÍNICO-LABORATORIO
Miositis (7-16ags..)
Miopatías inflamatorias
Esclerosis sitémicas
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Conclusiones e ideas clave para llevar a casa….
La IFI es una técnica mas sensible para detectar ANA aunque Elia CTD sí detecta algunos ags
que “escapan” a IFI. En nuestro estudio, Elia CTD mayor sensibilidad y especificidad.
¿Qué pasa con los ANAs postivos por IFI que no presentan ENAs positivos?
Comunicación clínico-laboratorio para orientar estudio, para empleo de paneles de ags específicos según
sospecha clínica, para ser eficaces.
Algoritmos de laboratorio eficientes. Se trata de hacer más, con menos. Mejorar y optimizar la gestión de las
muestras y resultados.
Elia CTD: test screening específico, detección óptima, den resultado preciso, fácil y reproducible para seguimiento.
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Agradecimientos
Dr. Jose Agustin González
Dr. Luis Carlos Calle
Dra. Carmen Escudero
Unidad de Inmunología Synlab Alcobendas:
Cristina García Maldonado
Esther Avila Elbaz
División Inmunodiagnóstico
Jordi Bertran
Juana Millón
Juan Jiménez
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