Post on 06-Jul-2018
transcript
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
1/17
LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA 2
ISOLASI SENYAWA KIMIA MENGGUNAKAN KROMATOGRAFILAPISTIPIS PREPARATIF PADA FRAKSI DAUN KELOR(Moringa
oleiferaLam.)ASAL DESAMANGGALUNGKECAMATANMANDALLEKABUPATEN PANGKEP
Oleh :
NAMA : ARIN RIZKI TALIBSTAMBUK : 1521!"2KELOMPOK : 2 (DUA)KELAS : C#!ASISTEN : MUS MUALIM$S#F%&'#
PROGRAM STUDI FARMASILABORATORIUM FARMAKOGNOSIFITOKIMIAFAKULTAS FARMASI
UNIERSITAS MUSLIM INDONESIAMAKASSAR
21*
BAB I
PENDA+ULUAN
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
2/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
A# L%,%& Bel%-%./
Kromatografi adalah tehnik untuk memisahkan campuran menjadi
suatu komponen dengan bantuan dari suatu perbedaan dari sifat fisik
masing-masing komponen.
Dari berbagai metode kromatogarfi dapat memberikan suatu cara
pemisahan paling baik. Karena pemanfaatan yang luas untuk pemisahan
analitik dan preparatif. Untuk kromatografi analitik dipakai pada tahap
permulaan pada semua cuplikan, sedangkan kromatografi preparatif
hanya untuk fraksi murni dari suatu campuran tanaman.
Salah satu pendekatan untuk penelitian tumbuhan obat adalah
penapis senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman. Cara
ini digunakan metode Kromatografi apis !ipis "K!# untuk
mengidentifikasi senyawa yang terkandung didalam suatu sampel
tanaman obat yang nantinya akan diteliti selanjutnya.
Sifat utama yang terlibat dalam pemisahan secara kromatografi ada
$ yaitu% ". Kecenderungan suatu molekul untuk melarut dalam cairan
"kelarutan#, "'#. Kecenderungan molekul untuk melekat pada permukaan
serbuk halus "adsorpsi, penjerapan# dan "$#. Kecenderungan molekul
untuk menguap atau berubah kekeadaan uap "keatsirian#.
!erjadinya pemisahan dikarenakan adanya komponen suatu
cuplikan yang bergerak dengan jarak yang berbeda akibat adanya
perbedaan partisi dari komponen yang dipisahkan. (emisahan dan
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
3/17
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
4/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
Moringa oleifera . # dengan menggunkan eluen n-+eksan dan til setat
reaksi sehingga diperoleh senyawa murni.
BAB II
TIN7AUAN PUSTAKA
A# U&%8%. T'h%.
1# Kl%0898-%08 (R4l499 et al $ 2)egnum % (lantaeDi)ision % SpermatophytaSubdi)isio % ngiospermaeClassis % DicotyledoneaeSubclassis % Dialypetalae/rdo % hoeadales "0rassicales#1amilia % *oringaceae2enus % *oringaSpecies % Moringa Oleifera
2# M4&94l4/8
Kelor "Moringa oleifera# tumbuh di dataran rendah maupun dataran
tinggi sampai di ketinggian 3 &444 dpl. Kelor banyak ditanam sebagai
tapal batas atau pagar di halaman rumah atau ladang. Daun kelor
dapat dipanen setelah tanaman tumbuh &,5 hingga ' meter yang
biasanya memakan waktu $ sampai 6 bulan. 7amun dalam budidaya
intensif yang bertujuan untuk produksi daunnya, kelor dipelihara
dengan ketinggian tidak lebih dari & meter. (emanenan dilakukan
dengan cara memetik batang daun dari cabang atau dengan
memotong cabangnya dengan jarak '4 sampai 84 cm di atas tanah
"Kurniasih, '4&$#.
!# N%'% D%e&%h
http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Moringa%20oleiferahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Moringa%20oleifera
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
5/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
!anaman kelor mempunyai nama lokal yaitu kelor "9awa, Sunda,
0ali, ampung#, Kerol "0uru#, *arangghi "*adura#, *oltong "1lores#,
Kelo "2orontalo#, Keloro "0ugis#, Kawano " Sumba#, /ngge "0ima#,
+au fo "!imor# "liya,'446#.
;# K%../%. K8'8%
Kelor "Moringa oleifera# mempunyai kandungan senyawa
8":rhamnopyranosylo;y# ben
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
6/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
Salah satu metode pemisahan yang memerlukan biaya paling
murah dan memakai peralatan sangat sederhana ialah kromatografi lapis
tipis preparatif "K!(#.Walaupun K!( dapat memisahkan dalam jumlah
gram,sebagian besar pemakaian hanya dalam jumlah miligram. K!
preparatif dilakukan dengan menggunakan lapisan tebal "sampai & mm#
sebagai pengganti lapisan penyerap yang tipis "+arborne, &=>?#.
Preparatif thin- layer chromatography "(!C# atau kromatografi
lapis tipis preparati)e "K!(# merupakan metode isolasi yang sudah lama
popular karena digunakan secara uni)ersal oleh mahasiswa dan peneliti
khususnya bahan alam. (opularitas metode ini berkurang setelah muncul
metode high pressure liquid chromatography "+(C# dan counter current
chromatography "CCC# "2ritter, &==.
Kromatografi apis !ipis @ preparati)e adalah salah satu metode
yang paling sederhana dan murah untuk mengisolasi komponen kimia
dari suatu bahan alam. *eskipun pengerjaannya intensif dan hanya
sedikit isolate yang diperlukan dari tiap prosedur fraksinasi "usli,'445#.
(emisahan komponen kimia dengan Kromatografi apis !ipis
preparati)e pada dasarnya sama dengan K! biasa namun perbedaannya
ialah K!-preparatif menggunakan lempeng yang besar "ukuran '4 ; '4
cm dan '4 ; 84 cm# dengan ketebalan 4,5-'mm. Dan sampel ditotolkan
berupa garis lurus pada salah satu sisi lempeng. (enjerap yang paling
umum digunakan ialah silica gel 64 dan dipakai untuk pemisahan
campuran senyawa lipofil maupun senyawa hidrofil "2ritter, &==.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
7/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
1raksi aktif dilarutkan sedikit demi sedikit sebelum ditotolkan pada
pelat K!(. (elarut yang baik adalah pelarut atsiri "heksan, diklometer, etil
asetat# karena jika bukan pelarut atsiri akan menyebabkan pelebaran pita.
Konsentrasi fraksi harus sekitar 5-&4 A. 1raksi ditotol sesempit mungkin
untuk menghindari pita yang terbentuk. (enotolan dapat dilakukan dengan
cara "pipa kapiler tetapi baik dengan penotolan otomatis B camay desage#
atau mikropipet "2ritter,&==.
(ada K!(, kebanyakan penjerap mengandung indikator
flouresensi untuk membantu deteksi kedudukan pita yang terpisah
sepanjang senyawa tersebut menyerap sinar U "2ritter,&==.
(ada kromatografi lapis tipis preparatif, cuplikan yang akan
dipisahkan ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi pelat lapisan besar
dan dikembangkan secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga
campuran akan terpisah menjadi beberapa pita. (ita ditampakkan dengan
cara yang tidak merusak jika senyawa itu tanwarna, dan penyerap yang
mengandung senyawa pita dikerok dari pelat kaca. Kemudian cuplikan
dielusi dari penyerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna untuk
memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni untuk
telaah pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan analisis, untuk meneliti
bahan alam yang la
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
8/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
(engembangan plat K!( biasanya dilakukan dalam bejana
kaca yang dapat menampung beberapa plat. Keefisienan pemisahan
dapat ditingkatkan dengan cara pengembangan berulang. +arus
diperhatikan bahwa semakin lama senyawa berkontak dengan penyerap
maka semakin besar kemungkinan penguraian "+ostettman, &==5#.
Dalam perkembangan selanjutnya metode K! tidak hanya
digunakan untuk mengidentifikasi noda akan tetapi juga untuk mengisolasi
ekstrak, metode ini kemudian dikenal sebagai K! preparatif. *etode ini
merupakan salah satu metode yang paling sederhana dan murah untuk
mengisolasi komponen kimia dari suatu bahan alam. (rinsip kerjanya
yaitu adsorpsi dan partisi, dengan menggunakan lempeng yang besar "'4
'4# "2ritter, &==.
*etode kerjanya meliputi penotolen ekstrak bahan alam dalam
bentuk pita pada lempeng. +al ini memungkinkang sampel dalam jumlah
besar dapat muat pada lempeng K!, lempeng dikembangkan dalam
pelarut yang telah diketahui mampu memisahkan komponen, yang paling
penting adalah harus digunakan metode deteksi yang tidak merusak
sampel "7ajib, '4&$#.
Kromatografi preparatif dipakai untuk memperoleh komponen
campuran dalam jumlah yang memadai "mg sampai g# dalam keadaan
murni sehingga komponen itu dapat dicirikan lebih lengkap atau dipakai
pada reaksi berikutnya "2ritter, &==
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
9/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
*eski banyak terdapat metode seperti yang telah disebutkan di
atas, terdapat metode lain yang pembiayaannya paling murah dan
memakai peralatan paling dasar yaitu Kromatografi apis !ipis (reparatif
"K!(#. adsorben yang paling banyak digunakan yaitu silika gel yang
dipakai untuk pemisahan campuran lipofil maupun senyawa hidrofil.
ketebalan adsorben yang paling sering digunakan ialah 4,5 @ ' mm.
pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran plat sudah tentu mengurangi
jumlah bahan yang dapat dipisahkan dengan K!(. Ukuran partikel dan
porinya kurang lebih sama dengan ukuran tingkat mutu K! "*aston,
&=>6#.
BAB III
METODE PRAKTIKUM
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
10/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
A Al%, %. B%h%.1 Al%,
lat yang digunakan pada praktikum ini adalah lat penyemprot
D((+, 0atang pengaduk panjang, Chamber K!(, 2elas ukur,emari
sam, *istar, (ipa kapiler, dan Sendok besi.
2 B%h%.
0ahan yang digunakan pada praktikum ini adalah luminium foil,
D((+,til setat, 1raksi aktif KKK dan KC, empeng kaca, Kapas, n-
+eksan, dan tissu.
B C%&% Ke&6%
Disiapkan alat dan bahan. Dipilih hasil fraksi yang terelusi dengan
baik pada kromatografi kolom kon)ensional dan kromatografi kolom cair
)akum. Kemudian masing-masing fraksi yang telah dipilih dilarutkan
dengan eluen dan ditotolkan pada lempeng K!( menggunakan pipa
kapiler. Selanjutnya dielusi dalam chamber yang berisi eluen n-heksan%etil
"?%$# yang telah jenuh. Kemudian dibiarkan terelusi, selanjutnya diamati
penampakan bercak noda pada lampu U '58 dan $66 nm. Dan
dilakukan uji antioksidan dengan pereaksi D((+.
BAB I
+ASIL PENGAMATAN
A# T%el Pe./%'%,%.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
11/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
F&%-08 7'l%h P8,% W%&.%Pe.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
12/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
lurus pada salah satu sisi lempeng. Dan setelah itu pada bagian langkah
akhir silica akan dikeruk yang mana disebut sebagai isolate.
Cara kerja dari metode ini diambil fraksi aktif dari hasil KKK dan
fraksi aktif dari hasil KC kemudian ditotolkan berbentuk pita garis
penotolan yang telah dibuat sebelumnya. empeng yang digunakan
berukuran '4 ; '4 cm. setelah sampel ditotolkan, disemprotkan dengan
D((+ kemudian dikembangkan dengan eluen kloroform etanol
?%$ didalam chamber K!(. Setelah pengelusian, lempeng-lempeng dan
diaamati di bawah lampu U. Kemudian pita-pita tersebut dideteksi dan
diberi bawah lampu U. Kemudian pita-pita tersebut dideteksi dan diberi
tanda kemudian dikeruk yang selanjutnya disebut sebagai isolate.
Senyawa dideteksi adalah fla)onoid yang ditandai dengan noda yang
berpendar di bawah U $66 nm
Dari hasil yang di dapatkan bahwa bahwa fraksi &> pada =%&
"KKK# dan fraksi 6%8 "KC# merupakan senyawa yang sangat efektif
sebagai antioksidan yg ditandai dengan terbentuknya pita berwarna biru
"U '58# dan warna kuning "U $66# pada lempeng K!( dimana
senyawa tersebut merupakan isolat murniBtunggal yg nantinya akan
digunakan pada praktikum K! multi eluen dan dua dimensi.
K!( memiliki keuntungan yaitu sebagai salah satu metode
pemisahan yang memerlukan pembiayaan paling murah dan memakai
peralatan dasar. Sedangkan kerugian K!( yaitu pengambilan senyawa
dari plat yang dilanjutkan dengan pengekstraksian penjerap memerlukan
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
13/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
waktu lama dan jika senyawa beracun harus dikeruk dari plat akan
meningmbulkan banyak masalah terus.
BAB
PENUTUP
A Ke08'=l%.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
14/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
0erdasarkan data yg dihasilkan, dapat disimpulkan bahwa fraksi
&> pada =%& "KKK# dan fraksi 6%8 "KC# merupakan senyawa yang
sangat efektif sebagai antioksidan yg ditandai dengan terbentuknya pita
berwarna biru "U '58# dan warna kuning "U $66# pada lempeng K!(
dimana senyawa tersebut merupakan isolat murniBtunggal yg nantinya
akan digunakan pada praktikum K! multi eluen dan dua dimensi.
B S%&%.
0imbingan dari asisten sangat kami harapkan dalam melakukan
suatu praktikum agar praktikan dapat mengerjakan praktikum dengan baik
DAFTAR PUSTAKA
nonim. '4&6. “Penuntun dan Buku er!a Praktikum "itokimia i#$ . U*I%*akassar.
liya. '446. Mengenal %eknik Pen!ernihan &ir . Semarang % C neka Ilmu.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
15/17
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
2ritter, roy. &==&. GPengantar kromatografi$' I!0% 0andung.
usli.'445. GPenuntun praktikum fitokimia #$' aboratorium fitokimiafakultas farmasi U*I% *akassar.
+ostetmann and *anson,&=>6, C K/*!/21I ((!I1,I!0, 0andung
Kurniasih. '4&$. hasiat dan Manfaat (aun elor .Jogyakarta% (ustaka0aru (ress
Krisnadi, . Dudi. '4&$. Kelor Super 7utrisi. embaga Swadaya*asyarakat @ *edia (eduli ingkungan "S*-*(I72#.Kunduran. Jogya.
*unson, 9ames,., &==&, 7ISIS 1*SI, irlangga Uni)ersity(ress, Surabaya
7ajib, dkk. '4&$. Penuntun Praktikum "itokimia ##' 1akultas 1armasi
Uni)ersitas *uslim Indonesia % *akassar.
7ugraha, ., '4&$. G0I/K!II!S KS!K DU7 K/ "Moringaoleifera# !+D( )schericia coli (7J00 K/I0SI/SIS(D 00IH . 1akultas Kedokteran +ewan., Uni)ersitas Udayana %Denpasar
oloff, ., +. eisgerber., U. ang., 0. Stimm. '44=. Moringa oleifera*&M ., &?>5. IJ-C+ erlag 2mb+ L Co. K2a, einheim.
oth, +erman, 9., 0laschike, 2., &=>>, 7ISIS 1*SI, 2adjah *adaUni)ersity (ress, Jogya
LAMPIRAN
S-e'% Ke&6%
Disiapkan alat dan bahan
Dipilih hasil fraksi yang terelusi baik pada KC dan KKK
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
16/17
K K K
KCVK
Pita
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
Kemudian masing-masing fraksi dilarutkan dengan eluen dan totolkanpada K!( pada sisi yang berbeda "lempeng K!( yang telah dibagi dua
sisi# menggunakan pipa kapiler
Dielusi dalam chamber yang berisi eluen n-heksan %etil asetat ">%'# yang
telah jenuh
Diamati penampakan pita yang terbentu pada lampu U '58 dan U $66
nm
empeng K!( disemprot menggunakan pereksi D((+ untuk pengujianantioksidan
Diamati lagi penampakan pita yang terbentuk pada lampu U '58 dan U
$66 nm
F4,4 Pe./%'%,%.
8/17/2019 Kromatografi Lapis Tipis Preparative
17/17
Lempeng Kaca
KKK
KCVK
Pita
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS PREPARATIVE
U !**
U 25;