+ All Categories
Home > Documents >  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$...

 · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$...

Date post: 12-Jul-2020
Category:
Upload: others
View: 1 times
Download: 0 times
Share this document with a friend
60
!" #$%$ "& ’$( !))% ** + & #$%$ "& ’$( invitro *, -. "& ’$( #$%$ & /0 + 1( 2 3 45 6 2 invivo invitro 78 "& ’$( #$%$ !$ 79 %$ " -$: ;( )2 1( + & "& ’$( #$ 9< -"3)= > ?’$ <@
Transcript
Page 1:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

� �

���������

� �

��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������

�� �� �������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������

� ���������������������������������� ���!"�#�$��%�$� � ��� "�&��'$(�!�))%������������������������������**��

�+����&�#�$��%�$� � "�&��'$(������invitro��������������������������������������������������������������������������������������������*,

�-���.� �� "�&��'$(�#�$��%�$� ������� ��&��/�0+� �1��(�2����������������������������������������������������������

� �3����4��5 ������6 �2�� ����invivo���invitro ����������������������������������������������������������������������78

"�&��'$(�#�$��%�$� �!��$���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������79��

��%�$� ��������"�-�$���:�;���(� ����)� 21��(�+����&� "�&��'$(�#�$���������������������������������������9<��

-�"�3)=����� ��>��?�'$��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������<@

Page 2:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

������ � �

� �

��������������

�����������������

����%�$� � �3�"�&��'$($��#�AmAb�B�����������-�C���D���"��C%��)'EC���C/3 � �C3F�5

��& ������G� �"��"����3���/�&�H�I=��J�#�K����������!"�L'���G�M������3'$�L0��)$� ����3���/�&�

��$���� ������������������!�C��N�EC:�-�C$���:�2���3$��%���������� ���!"�������&��3�"�&��'$(�O���

�����$���� �����������������13�mAb� ��������������!"�"��C���+����"�2���CK���&��3�����J��P$�"��

�$���� ����

��K�'���Q�F��"��'F�&� �3�����1=%����+� ��/K��!�L:��&�R��6���&��

������G"��(�1��&� ��&�1���OK/ �mAb�����������������C%��C��&�S2T�4C��) �1CP�U���V�C���C&�

���W�� � ��� �'=�&(�����W�� ������+� �1�����"�C�>�S�C?$��1F�&�1=%���(�+���C��1�

0����������������"���� �!"�L'����3��X=�� 2(�2�� ���E&��"��5������M��&���!����'�)��Y� �/���C��

����������"�"�G"�%�Z%�13��![���1�\�� ��) 2��$��3�� �+���O����"���������!�C��"�C?����':���C$��

���������������������C����ZKC��G��"�W��C �!2��$��2��;�&�W/?���]�����&������� ���!"��2���^5&�_���

��)��&�� �`�=:���&�Z��3�����

��+���������(�+����)$� �!����'�)�������1F�&�1=%�����������C'$(�S2T���"�C� ������&�� �1�

���������)%�� ����������������!"������&� "�&����������������C\�!"�L'C���"��C ��5������M��&�+���O���

������"��>�� K������������������S2T� "�C&��'$(����� ��$�����/$�4�U����!"�&���X'\��J��$��>��&�!�0�O

���������3�����"�![���-��3 �G��&��������C)%�������������������J�G�C���C'$�2���1C3���"�1=C%� �3C���

��$���� �;���G"�&�N�'�"��"��'=�&���G�������'�)�����

���������K�� (�!�$2�"��� ����=���.��O/?$�*AAAVS�B������#�C��aC������"*bb@����'C����"�

����c�C)/ �13��C/$��'C���G"�L����������C����� ��C&�-�C$���:�2��!"�mAb��������C� �OC/?$��Z��EC�������

�1���3&NIH) 2�B�"�C/$�"����#�C���C�����*bb@�NIH������C �"���C���0�C �d��C���"�

1- AAVS: American Anti – Vivisection Society

2-NIH: National Institute of Health

Page 3:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

���(�+���2��!"�L'���1�����������13��mAb�����������C��&��C � ���C.��C/�0��P$�2�������QC���"

���#�C��aC������"�"�? �1����"*bb��AAVS ��C�&����NIH�"�C%�"������� NIH�2��

��������������a�K=��c�.� �O�������&�13����� ���'�/%��%�"�%�1����"�-����D���� � ����

����"���/%�����������2���C3�"�&��C'$(�#�$��%�$� ������� �3��������&��'**�����a�K=C��N�)C���%�

�����&�-����D���)� 2��"� ���E&�d��?���%�"�&�!�� ����X=�� 2(�-�$���:�4M��J�#�K��

���������������������C$"�&����"���C/�&�-�C$���:�2��1C��/:���-�$���:�;���(�J�"�"�"�� ��"�-����D��J���2�

���C%��)%�O��5�����1����"���%e ��'�/%����C������C�(mAb ����QC��1�C�(�+����C&�

���������f ��'�/%�4�] �O������f��-�����"�1����/�0�-���. ��������C&�13�����3�����%������

��������������"��g������%e �+���2�����$��':���$���"�"�G�$����a\��:�������� fC �O�)h/���'�/%

����������(�+����C&��i�C$��C����� �"�C���-���.��%�"�&����C���6>���!"�C/$�O�C�5�����1�C���2��

����1�5.�����/$��g�������G� 2�G(��"�1F�&�1=%� �3�����5����

���!����g����"�)���J�j�&� �"�)���N�����&���� �3C���6>�J��C'�/%� �^0��d��?��J��'�/%��&

����������G��)IC��!"��C3k�G(��"��%�!2���Q����2� (�!�>��%�Q���"�!����g�������i�C$�1EC�&

�������������� ��C'�/%�J��C'�/%��C$�>���� ��%��E����"�O�)h/�����)'��"���^:6������l��C'$��C&���C&

mI= �"�/$��g�����������������1F���1�"�����

�������������+���d�I'$���%�Z���"��P$� mAb������� ���������������&����&�����1C�\�� � �/)���

���������X=�� 2(�-�$���:�2��!"�L'������������C��&�nC)��/���������������C&�j�C&� ��C����C����2���CK�

������������������C)%��C �"��C����C/)����o�1C���!�$2�"��� � ���"�5' ��:���������aC/0�OC���2��p���C��&

�����������������C'�/%����������&��%������&��/�0�������O'��"�-�����"��%��)k����"��� ��""�

����������"���� �!"�/��2�? �-�$���:�2��1�\�� ���!"�L'��7AIACUCBq�r�Y��%� ��s�JO�)h/�

)%�� ���������������%�Z mAb&����C��������C/�0�������-�����"�1��(�+��������

IACUC���/��2�? �j�&� ����"���!"����������1=C%� �3C�����C%�Z����C&�OC����&�O�)h/���

�������������� ��&�#�/5 ���M��&����&�1F�&mAb���������� T�C&�ZC?:�-��C�����4�U�� ��&�Y���m�

mAb����"��>����\�!"�L'���"�� ��������������������mCD ��C���C))%��C/$��C������ ��C�������CK�'\�

�L'���2��a�\���"�G�=$����&�R�D ��)�"��/$�1��&��/�0�t������&�R�]) �+���2��!"

3- IACUC : Institutional Animal care and use committee.

Page 4:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��������������1=%�_�D ��"�����_������&�� ��������G"�"�RF��13���$�m���+��+� �1��(

�1���!"�"�S�?$�����

��� ���!"��������d�)'���13���/�0��'�/%�Q��������a\��C:��&�����-�C$���:���2(��C��"�"�G�$�C�

��������&�� ����$�"�� ���������Z'E����%�!�)�(�#���O��)k�#�M��"�O���&�)&��� �������1CF�&�1=%�

�'=�&��5���������������C3�"�&��C'$(�������13��1F�&�1=%� �3�����)&���� � ��� ���#�C$��%�$� �

�&����&�����������X ��)�(��"�#�/5 �+���-��������������C3$(��%����&��'��"�"�����D.���a��"��K)

���"���]) ���U� ���J�3$(�2��!"�L'����K)�������$��>����\�!"�L'���"�� ��)$�����/$�E ��

��������/�� ����)�6���&�#�mD �G"��(�1��&�������� ���� �$�&��"� ��e>���� ���-��5\����&�n)

���&�R��D� ����������������""�C>�d�ECD �15)C�������J�!�X=$�"�J�1��"��&�j�&� �#�K���������C ��OC�����

�"���a��:�-�E�u ��"�1F�&�1=%�������-�3E��"�?����&��$����� ����

������������2���%�"��"�"����a��"�O��)kmAb���"�C%��CP$�t�C��G�����/$�1��(�+����&���

���^5&���>2���d���1F�&�1=%�_������&������� ���!"��2����� "���C ��"�J��$�C���/$

���O��)k��%mAb��������������+���J��C��&�2�C�$�"��C �T�C&� �3'P�U��&�-��L' ���� ������"�1=C%�

��!�X=�� 2((Invitro)���1���OK/ �%������&��'���$���(�����������c�C$�����C�� ���!"�ARat�B

���������C������"���T�C&�G� �$���YT�/5 mAb����"�Rat�"����������������CM��C&����"�C����)C��&��C/$����

������������������C������&��"�\�#�:�O�0��"������)�"�� �RF��1F�&�1=%�_������&��L�5.mAb���"�

��������������)C��&��C ��C)/���Z'EC���v5.��&� ���+� ������C$�������������"�w�C�x���C�� 2�C��H��C���

� ���Z'E��invitro ����������1C���5F�;��C%����C��O�y���C��G�C��!����C$"��C&��C$�����C �������

���'$(�� "�&�"����?) ���mAb������������-��C��x���C&��"�\�1F�&�1=%� �3����2��a��:��$��C �#�

�������#�m���-��\�1����OK/ �G"�&��5��M���U�O�����!"��$� �)\� �3��K�� ��&����O�y����

�������K�z����&�Z3 �V����X�"��mAb���������"����\���{f��1D����������������� ���!"���>"��(

����������W����z������) 2��$� �'%�&����|��\��&�+2����&�"�� ���������!"��4�C�(�2�� ��>�C��� ��&�+

�1�������������X�"�t�M�2�������������1=C%�_������&� ��>2����"������� ���!"���^5&��$����$�

�����F�%�������13�mAb����������&�� � ���aK= �Q�������� ��'�/%�a��"�O����&6����C?�'$���&

��������/�0�-���.�Q���%�"��>�� ����/':�������������+���2��!"�L'C����C �"��G"�/C��2�C? � ��C&

����� ��&�+� �1��(������mAb����1���S2T������������������1C�e>��C&�J��C�(��C ��P$��&�J�#�:�O����&

Page 5:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#

����������������1�C�(� ���+����&�2��$�J��))%�� �1F�=������X=�� 2(� �3�����%���]$�/��J�G� 2

��&���;��%�+� ����

��� ���"��������������2��$����2�"���v\�' �����$�+� �1��(�+����&�#�$��%�$� � "�&��'$(�������

���"��"�"����+���O��� ��&��/�0�1��"���������

������������C{���"������a&�\��':���$����"�"�"�?����&��)� � ��!�))%�W$�\�}�� ������/$��P$��&

��R��6�pristane�A����������������C)%�� �Q/%� �� ��� ���#���������&��%�����/��� ��!"� �B

����������&��'��"�"�������+� ��&����������������C&��':���C$��C��"�"�YT�/':��1��(�W/?��#�M��"����

�����J���(�� �"�������������������1CF�&��C&�Z��C3��1�C����C&������� ���!"���^5&��K�'\��Y���mI

��������������"��"�"����1��(������a&�\�;��6F���K�"��� ��"�������$���� �!"�L'���������C5&�O���&�C)&

����� �������� ���#����R��6��2�J�+� �����������������������C���C'L���C(��"��C':��$�2���a\��:����&

�����$��>����\��&��2���"�� �-�]5������K=��2���5&�������W�� ��K)���2��a�\���1����a&�\�1��(�a�

������!�))%�1:���$�!���W/���"�������"��>�-�������I�����&�����������"��CD ��C��&��C�����I��"��5�

����"�5�������&��"��� �����I����������$�Zg0�G���:��%��������"�_�F�������6��C���C��$�G�=C$��':���������

���&�� ����

��� ��������������������13��+� �1��(�+���2���'\�mAb��L'���������1C3�����&�"���� �!"

��������������������!�CX$�"��CD �J���CK �-�C)��5 �a �C��"�C�>�-�����F�%�+���':���$����"�"�a����

����������������������Ci��':���$�Zg0��%��������"�W������"�"�G��&�O'=%���������I��"��5���O'��"

�""�>����

�!"6���2��c�$��"mAb �!��"�����f��"�� ��%�eU�)��&�� ��$� �"�!"�L'��� ��&����"�����

����� �3�����&��)$�����/$��'F�&�1=%���������Z'EC����"�G���������%�O���������$������������C%~

��!����S6�'E �A�����������C'��"�-���C� �aC��"���C&�B�C�{���������C&��$�EC/��-�C$����QC�z����&�c�9��G(��������

�����������������"�C��� �Z'E���O���#��\�a&�\��U��:��"���T�&��)�6���0�&��%����&�� ������!�C0��C&

� "��2�"��5�mAb�&� ��?����>��Y���mI ��$���� �������1��(�+����&�#�/5 ���M�

�����2���P$�"�� ����� *8������&��'/%�S�>�J������������+����C��x���C%�1��� �X�"�"��� �2��"�� �O���

���������������������"�C���C �WC) �G(� T�C&��C)�6��1C�0��C&�1CF�&�1=%�_������&��������+�'EC>��C&��C ������������

4- bioequivalence

Page 6:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

$

������������������J��3������1=%� ���_�D �J���� ��(�OFmAb����1=%��"�������R��D��13��1F�&

� ���-���.��������(�+����&��)�6���P$�2��YT�/':���$� �"������������������E��� �a&�\�+� �1

�"���+���O���O�=$����$����� �Y��\�5' ������

��� ��������������mAb������������������S�C?$��+�C �1�C�(�+����C&� ��C?��-��C���C&�2��C ���%���������

����������������C�1C%�:��C��&�15)C��OC��������&���� �"�����&�"��>�� �������2��!"�L'C���1/C���C&����"�����

����"�� �"��1F�&�1=%� ���+�����

���������C�����1C3��+�C �1�C�(�+���2��!"�L'C��� "��D �"��� ��"mAb���1C���OCK/ �

����&� ���.���������������������_C����!�C��!"�L'C��� �C����5 �2�����C��#�C� �G��C)0��&������2�"��� �

IACUC����������C�������P) ��&�����"�/)����g���� ��&�mAb��������1�C�(�+����C&��3C�� ��"��

)%�� ���] ��Z����

*�������������� ���#����1=%������W�� ��"��K�'\������ �����-� ��&��%�w��U�@����*8�2���

�����J�1���!"�%������1P�UmAb�������2���'/%�J�!���"�?���<��������C'������ ��&�S�>��%� ���C��&��

�h$�)k���� ���Z'E��Hollow-fiber�������������/�$�`�=U��������>����\�!"�L'���"�� �C$����C&��

�P�U�4������� ���11m

mg�788�����1m

mg�<88��������O����� �3'P�U�J���"�1��&����mAb�

���� �����$������

��������2��;�&��������K�'\��<����S�>���� �mAb����������������C�� �C��!"���'=C�&�"��5�����l)��2��

�������������������C������C)F��CP$��C]�$�2��J�1���2��$�"�� �G� 2�Z����M��&�-��L' � � ����������OC���

������ mAb���������������C)�(�F���-��CP$����C$����S6�'EC ��C ��O����K)���a���&����&�� �aK= �

����&�� �#�/5 �!�X=�� 2(�Q��1��&�\�2���'5�������

7�����6���$(��K� �X)��mAb�����������d��] �"�K�/0��%���"�G�=$�1F�&�1=%��������&� ������

&��'$(��1����'F��O�&�2����%���M��&����!"�%������;��%� "����

9���������������������C�� ��C$�����C ���!"�%��������+� ��"�_�F�� ��������#����!"��Q���K� �X)��

���&����

<������2���'=�&��K�'\��<8�����2��S�>���� �mAb����������������C��\�"�CK�/0���1C���2�C�$�"�� �#�5F�

����������F����� ����'%����%�1���O����X$��&�������!"��v�5.����F���� ���Z?:����=U� ����')

Page 7:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

%

������"��':��X�"� ���+������O�g������������������2�C�$�OC����)$�����/$�������������1�5.��O��'3&��

��$2���!"��(�&����

��������������CK)������'C���$�1C�5 ��������5 �O����%�Z�)%�� ���%f��� ������ �C���C'�/%�IACUC��

vi� ������������������C�5���$�$�C\��C���/�0����T"��&����-�$���:�2��!"�L'���-���.��%��)��&�� O�

��)��/$����

��������!"��v��5�� ��&��������5 �2�)�����������!"�&�a��:�Z%��%������������� �C��+����C%��$� 2��

�&�1=%'F�J�������� ��&���L �����mAb�1���!�=$��g����J����&��/$�����

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

Page 8:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

&

� �

���'���

� � �CC3�"�&��CC'$($�#�CC$��%��AmAb�B�-�CC���D���"��CC%��)'ECC���CC/3 � �CC3F�5 �2�

��& ������������$� ����C3���/�&�G�C �"��"����C3���/�&�H�I=���"�J�#�K���������G�M�C�����C3'$�L0��C)

�����$���� �!"�L'�����������������2��!� (�1��&� �3$��%������������ ���!"�������&��3�"�&��'$(�O��

������$���� �������!���N�E:�-�$���:���������C' �����C����&������� ���!"�6���� �3���C����B�

�����������$���� �������� ��� � �3������&�!���O/���-�$���:�����������13�mAb�����J��CP$�"�� �

�� �3�������a��:������������������$���!"�"�����+����"�2���K���&��'E��&�������!�CL:��&�R��6���&

�����!���!"� (�+� ��/K��A��+��invivo������+� �1��(����J��B���������'F�C&�1=C%�+����C&�����

�������������������1CF�&�1=C%��C����W��C ������+� �1��(�W�� � ����&��'=�&���%�� �"�����1C��&� ��C&

��G"��(mAb��������4��) �1P�U���V�����&���"��>�� �-����������'�)��Y� �/0�1��(�+��

��!������M��&��������3��X=�� 2(�2�� ���E&��"��5�����������"�C���C �S�?$��������OC����"��C��+�C

���������"�G"�%�Z%�13��![���1�\�� ��) 2��$�"��� �a��\��"��������)��&�� �!���"�?����':���$����

�������������������&�Z��3�������ZK��G��"�W�� �!2��$��2��;�&�W/?���]�����&������� ���!"��2���^5&

=:����%~��':���$�`��!����������))%�� �"�?������������������'�)C���'F�C&�1=%��+����K�������"

��!��������C������������C��!"������&� "�&��'$(�S2T���"�� ���!"�&�+� �1��(�+���a�

��)%�� ��� ���+���OK��������X=C�� 2(�1=C%A invitro B��1�EC$����C&���1�C�(�+��

������������)$�����/$�4�U����!"�&���>�1\�������G��>��������C���-��3 �G��&����S2T� "�&��'$(����� [�!

�������))%����������+����"����������� ���+��invitro�����������2��;�C&��C&����1C��F� ����"�b8�

�1����'��%�����)�6��2����!"�"�;��6F�����"����

����2��!"�L'���+��mAb������������)%�� �O��5�����G(�2��$�"�� ����� �J�������#�C$��%�$� �Z%���"��

��� "�&��'$(�A���2���'/%*�8���S�>��B��������������"���C �2�� ���EC&������C���D�� �C3:�M�4C��U� ��C&

�������&�� �2��$�"�� �Q�'���$(������_��' ���������"�� �A*��*�8���S�>��B�������3F�5 ������� ��&

%���1��m�I=�� ����������(��%�;�� 2(� ��&���mAb���������!"�L'C���"��C �-�C$���:��"������

���$��>�� ����\��������!��$���������)� 2�O����"�mAb������T�&�����������1C���!�C��vC��5��S�>�Q��2��

���T�&���"�� mAb�"��"�"�&��%��$� �"����� �6�$���!� 2���H�I=�� �3���� ��&�����

Page 9:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

(

��"�&��%mAb�����&�-����D���"� ����������C��O�y���C��H�I=C��13��#�K����������3����C�g�&�%�

�%�$� ������y��Q����1���Z3 ��������������C)$�/���C%��3��K�� � ���E&�1�)��4����3$(�"�&��%

���/���� 2������������������������C&��C]&����"��C �;C$�"��]C��;��6CF����!����))%�� �#�')%����#����6�

��K�� �G�/'�����a/0�O�&�j�������1���3$(�G��� �����

��������������������C&�G�C&6� ��C�����"��C � ����'E$�"�"��3&��0�&������Q�z����&�S��0��"��3'F�=���O��

��������������&�����^0��J�a ��0�O���_����!���������S�/�����$�L0� �6���/�&�a ��0�����C$���� �C3'F

���������3�����"���&�"�����x��J�!���A������ ���B������Gz��C$(� �C3$z��C'$(�J�A"��aC���"��"�C

��)/���B�1���!�����G"�&����m'��G�6� �!�0��&mAb �D$��&��1������ ��C&��C%�

�������$"�>�!"�L'���-�$���:���G�E$���"��3���/�&�H�I=�������G� �"��4��) �_�����1D�J�

��)%�������� ���������!�)mAb���������������S���C ��C�����O���&�C)&��C$� ��C �!�$2�"��D �$���M��&�

mAb��������������&�� �-�$���:�2���'/%�!"�L'����&��]&����"�������������C&�_���C ��C���F��C/��ZU���0

�������mAb�������������������}�C$"�"�G�C&6� �G��C�:��"��C$�����C �+���O���J�+� �1��(�+����&�

���&����

����������������:� ���C3X$��� ��"�C&�!�C3&�1C3���CK�� (�1C��"�-���� ���������"��C%� ��"�!�C3 �-�C$�

����������J��$���� �!"�L'���+2� (���-����D��J�!�X=�� 2(�A*b�7�IRAC�B���G��&������C)%��C ��

�p�$���:�����������)C��&�4C��) ��C$�>���c�C$�2���'EC��&��$"�>�� �d�I'$�������� ��&��%��

��������������G�)�/M��a&�\�d�����&��3$(�"��5��O��'/%��&�G��'&������� �C��#� �G�h/�����3����

������.�����������������C����"�� ����&��K�z����&����X=�� 2(� ���Z'E����� ���$����� 2�������

��$��>����\�����������������J��':���C$�G�$�C���a\��C:��&����d�)'���a ���-�$���:�2����D��!"�L'��

��������������������� ���C.�J��C��&��'C��"�1C�&�] ���DC���C/�0�+����C&��K�������"�"�"���d��].��������

������&�� �q�������!"�L'�����1�\�� � �/)�����������X=C�� 2(�-�$���:�2��ANRC�*bb,�B����C&

�����������������^5&��)%�� �G��&���!"�%��D&�-�$���:��"����� ���"��2�"��5��"�� ��"�HI= ���M

�����������Y�C\��C%��)'E�����3����a ������aK�����-�\������������!����C&���CM��C&��C����!�=C$��C&�?�������

�$����� )��������':���$���"�"�4�� ����������'EC�$�#�')%�a&�\�G�)�/M���&��%��$���)������-�C0M�

����������������������G�C��D �J�G�KC�6� �"�2�������"�)����"����&����R��D��t������3�����&�j�&� ��5\��

�����������������-�$���:��"�R��6��-��{���&�W����W�] �"��F���X�"����1C���3&�-� ��1����

Page 10:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!)

�������� ��"�3$����X=�� 2(�-�$���:�2��!"�L'�����G�E$��1�\�� ��"�� �/0IACUC�S6� ����

��%��)%�� ���-���C� ��C&�d�m � ���aK�����R&�]��"�� ��"<PHS ���aC��:�G�C)�/M��

���)��/$���������������R��D����D����M��&�R&�] �-�$���:� �����/0����-���� �O���R�M���2���C��&

��a�/D�������$���&�a\��:��&���$(��K$(������!��2���d�)'���-�$���:��&�l$����"�"�J��':���$��

��"����CC ���CCP'$��G��)/=CC$�"�2��O���&�CC)&�� �CC��+���2��!"�L'CC���#����CC�:���"��CC%��

���X=�� 2( ��&�������� mAb�)�"����\��P$�� ������� �3�����K�������"�!�C���%~ �

����������"mAb�������$���/0����#��5 �)����������2��!"�L'C���2�? ���'����1���OK/ �R�D �J��

�����"���+� �1��(�+�������������������1�C�(�+���a �C���C%� "�3)=C������f��2��a�\�#�:�����&���

����� ��"�3$�J����&��IACUC�������������C)��/$� �C�>�Z�/mC����2�"��� ��"����&���*����!"�L'C���

����������1���������a&�\��/�0��P$�2��G���:�2�� "�3)=��J���������������1C�~������2(�2���C%����3����

��������a\��C:��&���$(������!��2���d�)'���"�"�������������������J��C$���C'F�>����C\��C����"��C ��)$�C����C �������

7��� ���+������X=�� 2(�1=%���������$��!���!"�"�H�I=��4��) �$�������!�C��#�D �v��i�

���������������������C��!"��QC���C�����1C3��S2T�aC:�� ��&�C�2���J��C�5F��'�/%��&�����!�C))%��C�����������

�&��"���� "�&��'$(��"��>��/$����

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

5- PHS: Public Health Service��

Page 11:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!!

� �

��*���+ ,�� -���".�/�01����2�3�4� ��5/��6���1�78����������-�09�2�,�64���

�24� ��:-*4�� ,�/� �

$(��������#�C$��%�) � �3�"�&��'��� �3C����a �C�invitro ���C�� invivo���2���C��%����C�

1��3$(����������������������C3�"�&��'$(��%� ������� �3�����#������������&� "�&��'$(�������2��a�\

������$���� ��'���J��))%����������&�����1C���!�C (���2���M��"��3�����O���"�?���a:�� ��

������&��'$(�!�))%������� �3�������3������������:�2��!"�L'C����C&�2�C�$�#�C$��%�) � �C3�"����-�C$����

���+� �YT�/5 ����"��"����������������Q���������&��"�\��%�1���������!"��Q��"�?���+���O����?�'$

�������������&�� ��$T�M�-� � ��&� "�&��'$(�O�y�����c�$������������J���� �C$�����C��!"��OC�����C ��

�"���� �!�� �$�� �����������

���%������J�� ��������"�?��� ��&�!�=$������J����&��?�'$��&�-�$���:�2��!"�L'���S�0��&��

�1����� ���Q�)K��Y����invitro ������ "�C&��C'$(�-�C5]\�����C��aC�"��������&��"�\�

�������������������P$�2��G(��?�'$���!"�&��=�� 2(�2�)�����Q�)K��O�������1���!���Gz��'$(��&�am'

"�&��'$(�"�K�/0����g���%� &�� �HI= �$�#�mD �G�6� �����������

������� �3$z��%�"��"�"����G�K ��O��mAb ������CP$�2���$�EC$�� �3EC$�K���C&������� �

'$z���������'�E�$z�$�/���;��%��0�&��?�'$��"���"�%�O�6X�����K��������#�C$��%�$� � "�C&��C'$(�

����������G�E$���"��K�)��%�!"�L'���"�� ������������J� ��C������+���;���C���2��aC�\[��G��X=C��

����������� ��� �3�"�&��'$(�_�F��������������"��C5���C&���C�':��+���OC����%��$"�%�� ���3��#�$��%

���������������J�C$"��$���� �$� "�&��'$(�!�))%������� �3�����G�k���1��"�!���O/���G���:� "��2

��������������������"�C&�G��C�:�G"�C%�OC/������CK���C&����':��J��'=�&� "�&��'$(������� ��&����+�'EC>

���)K�z�������!"�L'���"�� �-�$���:�"��5��� �������� �A����J��3�� ������3��>�B������������ ��&

���"�&��'$(�c�$�Q� ����������������1�C�(�+���2��!"�L'C���-��C���"�����1���!"�"�;��%����V��

�1����\�&�G���:�2��!"�L'����&�2��$�G�)h/�����

��

��

� �

Page 12:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!

� �

.*��0;���"�2�3-�09�4�<��2� �6��,4�2�38���=�>5/�*��38���?4�1�@��

��A��*���+ ,"� �

��������R��6��13���%��$z��'$(��&��3�� ��������$���� �O/��J�1���!�����3�����������C&�Gz��C'$(�OC��

Freund’s adjuvant����CK��QC��G"�%�!6�$z�/���&������4�%������1$���"������������

�������������"�C���C ���3��J����&�Gz��'$(� ��:��%�#z���������������aC �%� ���=CU�J�aC �%� �3���C��2�

��������"���� �!"�L'���Gz�$�/���G��)0��&����ZE�$�>�����K� �����/���"�Y����������2��J�3��X=C�� 2(�

������������"�C��� �!"�L'����P$�"�� � �3�"�&��'$(������� ��&��3�� ����������C���3C�� �YT�C/5 ��7�

�������������1C���-��CL' �O�C��D � 2���O/��� �3�/5����'�"������$���� �O/����'L������C'\�

������������1��L%��:��&�S����"� "�&��'$(��'��J����C&�G(�#�CDM����'=%����!���O/���+� �

&�������W�) �G��)0�"���� ��'��"�&��g� ��� � �3������&�Gz��F� ������

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

� �

Page 13:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!�

� �

��*4��0;���"�2�B-� �C�D�?4�1����E�24� ��5/��� -���2� ��38��"� �

�������������������� �C3�"�&��C'$(� �C�>�!2��C$�� ��&��3�� �2��J� 2���O/���2���'L���)k�1�e>�2����

�������"���� ��'F�>�G���$�/$�� ���������W/��13������) � �3K�)K����Z%� �3/?:� ��(

�������1���!� (�"�����&��3�� �G���-��L' � �3K�)K���&�� ��� "�&��'$(�'����P$����6C����

�AELISA�B������"���� �!��?)�� �' �'�����F�������������Gz�C�F�J����&�T�&� "�&��'$(��'����>�

�������"�"�S�?$��G����� ����������������������������("�C��2�"��3C�� ��C&��C��&�J����&�O�g��������'����>�

booster) �B����(�1�"��&�4��) ��)/�����������J�"���!"2�� ��X$��a/0����K���&�

�"���� �!��?)���3I����O��� "�&��'$(��'���O��5�������

�������������������Gz��C'$(�RC��6���3C�� ��C&�YT�/5 �J�1F��T�&��F�%��:��&� "�&��'$(��'����'\���A���C&

����("���2�"�G��)0�B�"�����\�L��a�"�-�����&�1$���"��G��&��� �C����aC�A��RC��M�2�

���� "��������B����"���� �S�?$��������RC��6��OC��7��������������2���C5&��C'L���"���Gz�C�F�2��aC�\�2���

�������"��>�� �-���� 2���O/���O��(����������������'C��"�&�����3$(�#�DM�J��'=%�����3�� ����

��"�� �������� �3����������� ��&��3$(�2�invitro ��))%�� �!"�L'�������

��

���9��0;���"�09�� 3����0 ��2�3-�"� �

���� �3�����G"�%�2��F�����DM����� "�&��'$(�!�))%�������������� �3���C���C&��$��"�"��D ��/0��%

������������1���L)�� ��� �$��� ���Q��2��!����'F�>�A��� ��� �B�������C%�� ��������Q��"�?����0�&

������"���� �1���"��D �$������&��"�\�����C&��%��)'E���g��� �$� �3�����J�� ��� � �3����

8- azaguanine����������&�CI'$��_�CD ��C&��C3$(�1���EC:�2���C���$�C���C �!"�"�1=C%������������

�AHATB Hypoxanthine – aminopterin – thymidine�2���5&�!"�L'���"�� �

�������Gz��F"���a��:�G�)�/M���,���

,����������a �0�a ���J������&�I'$��_�D ���!�$��"2�&aminopterin�������E ��%�1����������������"��EC �������C���y�%�$�6')C�

����)%�� �����������������))%�!"�L'���Q�y�%�$� �������6')�� ��&��0�F���E �Q��2�����&��3�����O���&�)&���EC �����!"���"��C%� ���������������������1C���H\�C$��$��!���2��F�G(��&�#� �$� "�&��'$(�!�))%������� �3������%��g� ��� �������������2��QC�h���O���&�C)&

��������������������� �3�����_�F����)��&��/$�_�D �O����"������&��"�\��g�3)���&� "�&��'$(�!�))%������� �3�������� ��� � �3������))%�� �����!�������������

Page 14:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!�

��"�� ��� � �3�����Gz��F�2��a�\��'L��Q�8- azaguanine��!"�"��C����C ���$�C�����

���:�-��\����&��3���������������)C��&��'C��"�W����������T�&�-�������_�CD HAT�����!2�C���_C�F�

�!���2��F� �3������&�-��:������"�� ����

��

����3F��0;���"� �G�6�8�@���.�H��2�3-�09�� ����0 ��2�3-�09�?�"� �

����������������J�1C���!�����3��Y�\��%��g� ��� � �3������&�!���O/���+� �#�DM�"�L) � �3����

�����$���� �2��F�����&�Gz��F������!�C���C�3��!2�C��#�DM� �3�����G� 6/��G"�%�z��L��'$�

�����#�K��>�O����������"�� ��� � �3����A��������"���� ������� ���=U�2��F��0�&��%� ��!"� �B

�"��>�� �S�?$�����

����������������V���&�I'$��_�D ��"�!���2��F� �3�����_�F�J�����%~�S�����:� ��"��%���]$�/�

�����))%�� ����������� �3'�����"��3��������b,���������� �3���C��a �C���C%� ���$��Feeder���

��$���� �W�2���J����&�� ����� �3���C��OC��Feeder ������LC�� �=C'E��-�C��'D �2��

������C$��!�C���C'F�>� z�C���6�F�S����&�+� ������CP$��C&������ �3���C���C�(��C Feeder �

��))%��O� ���� �������� �3������������=�� ��&�������� ����'%�F����

���� � ��?�� �3���D �����������������C����C%��C$��!�C���'����g���1=%�_�D �2���%��)'E��"�

���������������� ����'%�F� ��:���!"�%�O� ������!���!"�"�1=%� �3���������)��&�� ����� �C���&

�� �3����Feeder����������#��D �O���2���G����� �+� �2��!�����3������ �C������ ��C?����!"�L'C��

"�%����������������I'C���6Cx �2��!����'F�>� ��z�F���%� �2��G����� �O�)h/�������� �C���C&�+�C �G

� �3����Feeder�"�%�!"�L'�������

��

�I<����0;���"������J*���K ���*�K��+ ,��-�0K9�2�K,�64��LK� /�01limiting

Dilution: 9��� -���� ��3/�01�: +M�*� MN�����"�� �

������������������� �C��1C����2��� ��C������ �3���C��Qk�%�������� ����0�/? �J���:� �O����"b,�

�������1=%�_�D ��"���!����'��"�&� ���$����������������CP$�2���C �"���"����$���� �!"�"�����J�1F�&�

�������������������������$�C���C �!"�"��C���+�C �1�C�(�+����&������!���d�I'$��Gz��'$(� ��&��>[��

�"��>�� �S�?$���5&���:� ��"�Q)�$��%����

Page 15:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!#

�+����&�G"�%�G��%�G� 2�O����"Limiting dilution�1���%���%���"�� �G�)�/M��

������)'E��G��%�Q��Q��a\��:� ��:��3K��k���������������'C��"��C���&���-��^\���:� �O����"

������������������� �3���C��G�C� �2������C$��"��&�C��C��K��-��\��%��g��� �����������1���S2T��2�C�F���

��"��%� ��!��invitro �"�%�d�I'$����"�"�6��/��J��$���$��&������T�&�1\���"�������

�������������&�N�E:� �3����� ��&�!�������� �3�"�&��'$(�J�"��� �2���^5&��"���_�D ��"�!�$�/�\

���)'E���/��1=%��������"�+� �1��(�+���2��!"�L'���������:� �O���������������3���C���C$�����C

�����"�-�?$����������������+����"��C���2�������%�!��"��"��%�!"�"�G�=$��L�'I �d��?��O�)h/�

�� �C5&�a:�� ��"��%��$���� �"�?��������� ���!"��+� �1��(��&������invitro ���

invivo �KD'���"��2����)�"�� �G�=$�d��] ����� ��&� "�&��'$(����������'=�&�S����

��������������������Ck��C&�+�C �1�C�(�+���2��!"�L'C��� ��&�G���D ��&�Q/%� ��&��g�3�/5����'�"

�1���!��������

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

Page 16:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!$

� �

�J*��� �.�/�01����24� ��5/��� -��invitro� �

������2��!"�L'���Z3 �1�6 �Q�mAb���������#�C$��%��C��� �3 �C���'$(� ����&���J�����G"�C&�"�C��

�������C������m'��#�$��%�) � "�&��'$(�"��2���"�� ��������C:����C���C���QC��Y�/��'EC ��C%�1��������

�A�������������������Gz��C'$(�;)C%���QC��#�yEC ��C%�Gz��C'$(�#�K� �Q��2���'/E\������ "�C&��C'$(�

�1���HI= �B�"��>�� ��$�=$�������

�J���%���M��&mAb���"�� ��C������� �3����������%�1=%�_�D ��"����invitro ����

��������������������"�C��� �1F���!����������� ���������&��%���� �1��(�W�� ��"�������)%�� �O� f���

mAb����1=%�_�D ��"��%���]$�/��4�U��� ��"�%�H��I��W�) ��"�O���2��G����� ����

�"�%�!"�L'���G(�2��G����� �1���1��(�W�� ����

�3��������'F�&�1=%�A�invitro��B�������/0���������a&�\��K�������"��������C)$�����C ��)C��&�

�����g�3$������� ��&mAb���$���!"�L'�����������C��!��C��2�� ���E&����"�C�� � ����� ��C&� ��C?��

����+����&�1=%invitro���������1���!"�%�1F�=�����!��� 2����)�3&����������CP$�2�����!����O��

�����������������%�+����>��h���J��&��%�+2� (��&�2��$�G�6� �J��3$(� ����� ��&�2��$�"�� �-�3E�J�

��"�&��'$(�1P�U�����������������CK&�+����&�4��)' �#�mD �Z?:���G(�1/�\�J�!� (�1��&��g�3$�

��)��&�� �-��L' ��'F�����

���������������������CP) �1=C%�_�CD ��"��C����� �C��+����)�6���"����&�6�$��F�.��-�6�3?��1/�\

""�>�����������������C�"�� �V��1=%�_�D ��&�����L' ������� ���������������!"��������OC��

��CC����� �3CC����;CCI&invitro �"�CC�� ����� �) "�CC�� ������CC�"��CC ���CC����

��)%�� ��D&�+������ �3'�"��D ����

��

Batch Tissue – Culture methods�"� �

������������������� �C��#��C��G"�"��C���J1=C%�_�CD ��"� "�&��'$(�#�$��%�) �������!���O����!"��

����������������&�� �1=%�_�D �2�� "�&��'$(�#�$��%�) �H��I����J�� ���������������>�O�)��S��

��_�D ��'=�&��"�����������������"� ��C>�O���C&��>�$�/��� ��C:���"�C���C �!"�L'���1F�&� �3'=%�

Page 17:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!%

��"��:<8�������1����'������ ��"�S�>��K� ����������_�CD ��"�S�C��O���2��!"�L'������ �C����1=C%

����&�G(��"�"��� � ���O���&��>�$�/���2���/3 �;I&��=) ��$����� �� ������������

��������)k�J� ��>�O���&��>�$�/����&��>"��(�2��2��':�� ��&����_�D ��$��/%�O���� ��C0� �3'=%

����������������������� ��C����������C�� �C��!"���C����%��$��!"�%���3�����m'�� �3�� �F��&�S���2�

��)%�� �O� f�����

���"��CC%��g��� ��CC������"���CC ��'=CC�&��"*8��FCS�2���CC5&�J�!"�CC%��CC���9z�CC�����������

A*������2����B���������2���'/%�_�D ��"����� ��&��)$����� *��FCS�����_�CD ��"��C������2�� ��C0�

���$�����>2���S����������T�M�G� 2�-� ��"� ��>2���O�������������������"��C����"�C��"�C?��� ����$

<�7����Z%�G�6� ��&�6>������ ��������"��� FCS�$����/$���>2���1=%�_�D ��"�����

�������������������1CD��J�1CF�&�1=C%�V�mCI � �3KC�F��"������� �3'=%�J� ��>2���O���2���5&

������-� ��&�����"���$�'���_����*8���������!"��(�F����$���� ��&�K$��2���mAb����_�D �O���2��

�����"���� � ��(�W/������F�+���!"2�&mAb�2���'/%�1P�U��&��8���C�� ��"�S�>��K� �

������C��&�� ��'����������������������;��6CF�����1=C%�_�CD ��"�#�C�D �G[�EC%��1CP�U��C%��g�3C�����������

���������������� ���'�EC$�"����C3$(��C���G�6� �������������:�-��\��)$����� ��)�"�� �����G(��"��C%�

�1P�U��?�'$��"���!"�"�;��6F������))%�� ������3����mAb��$��&�T�&��������

���G��k� �3K�F�2���3����2���^5&bottle�roller ��aC��"��&��%��))%�� �!"�L'���

���������_�CD � T�C&� �C3/?:��"��C':�J��C�2�>����g�eU�"�� �J�1=%�_�D �;�k�S����

��$���� �;I����W�2���Y �%����

%�2�>�~�L$�a&�\��E��A���2���C�3��aC&�\Baxter and diagnostic chemicals�B����C%

��������������������2���C3$(���C�0�G"�C/$���e�$�K ��a��"��&����#��D � ��2�>�1P�U�J!"�%�����������Y��

���"�� �;��6F��1=%�_�D �t�i�!����"����

��������������"�C&��C'$(�1CP�U��C����C)�"�;��6CF������C�����G�6� ��)$����� ��3����O����/���"�

��$� �� ��\�&��'������ ��"�S�>��K� ��)k�!"��D ����

�������1P�U��&�2��$�-����D���'=�&��"mAb����G�6� ��&�*8�*�8�����������C'����C�� ��"�S�C>��C�� ���

���&�� �1F�&�1=%�_�D ��"�G(�1P�U�2���'=�&����E&��%����&�� ����

Page 18:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!&

������������'��F� �3C����J���&�4��) �����D��"�&��%� ��&�H���$� �3�"�&��'$(��>������C&�G��C��

��&��g���'��FCut off � ��&��$����� �2�>���=F����z��L��'$���N�����&�Z%����K� �G2��

"��>����\�!"�L'���"�� �1P�U�;��6F�����

����������������������C'�)�F��G�'C�� ���2��G"�"���C�0��C&�G��C��� ����1=%�_�D ��g���W�� �J�O�)h/�

�O�y����A�O�y��������G ���"�%�H��I��mAb���2���='E���&������1CP�U��&�G�'��

�"��(�1��&�v�'I � ��"�&��%� ��&�4��) ����

���>����k�������������1=C%�_�CD ��"�"�C�� � �C3)���&��>�$�/����������� ��>� �3)���&��>�$�/�����

�����&��$����� mAb������""�>�j��I �!�����3����������������C��2���QC���"��$����� �w��x����:� ���

�"��>�S�?$����%� ���$�O��'/%��&��'/%����

�����M��&���������� 2��$��!����)�6����"�&�!"���Y�'�E$��K�)K���P$�2��1F�&�1=%� �3����J���

����������3$(�G��������c����G� 2����$��"��/%�A��"��:7����'L���B����������C��&�� �1��(�+����&�=

���������"�� mAb����&�� �+� �1��(�+����&��E��� �a&�\�6�$�+���O����&�����

���������%�_�D �Z?:��%�1���O���+���O���4��5 �2������������!"�&�"��2�"�����3�����&��%�1F�&�1=

��1P�UmAb���������C��&�� �Z%�!� (�1��&��A�������������C'����C�� ��"�S�C>��K� ��C)k�"��C:�B��

�2�� ���� mAbw��x�������H��I���M��"�6�$�J"���� �!����$"�����

���:��"�������F"�m������&�J�1mAb��������1C���5F��C%�1C���!"�"�G�=$�mAb��� �3C�����C&�

�"���$�'���H��I�������w��x��"��:42�����)%�� ������;��%����

��

Semipermeable- Membrane- Based systems

�*����� /�O�PC������ �2�3�5Q 9�"� �

������������������C������&��?) ���T�&��'�E$�"��&�� �������� �3���������J�����%~�T�&��"��%���]$�/�

���T�&���"�� mAb�"���� �1=%� �3]�D ��"������Ck�W$� �Q��2��!"�L'��hollow

fiberf=U��k�����&�Cut off��ZC%����K� �G2��AD�888�78���888�*8�B��� ���EC&��"

�������������������C��&����T�C&� �C���'�E$�"��"�����!2�����3������&����!����'F�>���K&�a�����2�����OC��

�6�3?�-�������������������3/'EC���OC���t�C��J��$�C��� �!�� �$��������/�$�`�=U�������&� �3/'E���

Page 19:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!(

��������3�����G"�%����mAb�����������������������2��W$�C �QC���&��%�1���Qk�%��PLD �Q���"�!�

��$���� �����1=%�_�D � ��:��'>�6&�1/E\����

��������������������QC/%�� ��C������Z/�C'����C����C&��C%� "��2� ����'%�F��&�G����� ����1=%�_�D �����

���"�%�a�/K��J�))%�� ����eU�"�� g������������C))%��C ���C�0�!����"�2���':����&�����������2���

������"��2�Z?:��&�#"�5���"����������3����������$��>�� ����\mAb���������\�C&�Z%�Z?:��&�1/E\��"�

��)$� �� �A*<���*������C��QC������g�=CU�Z'EC����"��'������ �Fiber Cartridge���

Small Hollow�B����2��G��C&�G��C��� �����'>�6&��PLD ��"�!���t�m �1=%�_�D

���������3�����G"�"�1�"mAb������������3�������M�O�/����"�%����5��mAb��$����� ������C&��C)

��������$��� ��(�W/��1=%�_�D �2��a�'E ���M��������1P�U�G"��(�1��&��0�&� �)&2� �O��

mAb�"���� �+� �1��(��)$� �����

��

�1���"��� �`�=U�������&�Z'E����"����

The mini PERM ( Unisyn technologies , Hopkinton, MA) ��

CELLine ( Integra Bioscience , Ijams ville , MD ���

CELLine�2����QCC�F��CC&�13&�=CC �"�&��CC%���CCD$������CCi��CCP$T�"��"�"���$�'CC����������������

�AT flask�B����1���!���Z�E����$�>�����PLD ��"��&��������/�$�`�=U�Q��_�������

�������������������������"��"�����C���CPLD ��C&�QC�"6$�6C�$��C��"�1/EC\��"�2�C>�~�CL$�aC&�\�`�=U�Q��������

Mini – PERM � ��1����&�= ��:��M� ���"�������C�� ��C:���QC����!"�&� ���$��'���

�������'$� �F��%�"��"�6�$�AFermentor�B����S��� ���M��&������������g�eU�"�� ���2�>�����$��k��

��$����=') ����

�������C:���OC��� 2��C$��!���88��788���������C&�K$���C&�2�C�$���"��"��C)�6���T"�CO2��6C�$��������

����&�� ����

������%�1���O���`�=U�������&�Z'E���1�6 � T�&�1P�UmAb���Y�'�EC$�ZC?:��"��$����� �

����"���������Z%FCS�������_C�F����C��&��'C��"�"�C���1=C%�_�CD �G6I ��"��$����� �

��$���"�����������PLD ��&� ��>� �3)���&��>�$�/���2�� 6�k�$����� ����

Page 20:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

)

�������G����'=U(�+���O���4��5 �2�mAb��������1���!"� � �3����� ���!"��(�F��&����-K=

&��CC/%��CCK�)K��CC ��U� �3CC����2���'=CC���� ��CC&��CC����CC��&��CC �1CCF�&�1=CC%�S�

���������������C)%��/$�"�?�����K= ��)�"�� �S�?$��1F�&�1=%��.�:�#�:��"��%��g�3��X=�� 2(��

�a%�G�6� mAb �O�&�!"��D ��"�+���O����&�!��������� ��� 160��10���4EC:��C&�

� �0"��Unisyn�����&�� �����

���&��"%(���'Hollow- Fiber�&�1=%�_�D ����"�C���C ��/�� ��� ��"�S��� ���M�

�l�����%�2���%Hollow Fiber������C�"�G[�EC%��1=C%�_�CD ��&��%�2�>��&���������������

��1C���!���a�K=��1=%�_�D �G6I �Q�����)%�� ����l�����C%Hollow Fiber�2��

��������������#�:��"� � �������� �3����� ��:����$��"����\��PLD �Q���"��%��g���)k� �����F

��$�"��&������������1���!���a�K=�����&�� �T�&��'�E�������������t�C����!"�C&�����C���C/�$������F�O��

�����C$��"�`�=CU��C�����C&� �3/'E����&��3&�= ������C'%(���&Hollow- Fiber����CD��2��

� �3/'E���G�� ��"��K�)K�invitro �1���Z'E���O��'�K= �����

"��"��'F������� �3�����1���E:��&� "��:����Z'E���O����&���%�aK= ����E&��'�E$�

�"���� �j�&� ��/���K���&�' ���$��� ���!"��(�F���������_�D �-����x�� T�&����

��&���'%(Hollow – fiber ����g�C3$�#�mCD ���3�� ��&�500 mg����'=C�&��C��mAb�

��1���!����:��M������������2��;�&�YT�/5 �Z'E���c�$�O��� 2��$��!��*�88����"��"��C)�6���T"���

���'%(��&���F�a�T"��&hollow – fiber����� T�C&���"�C� � ��C&�_C�F�mAb��!"�L'C�������

��$���� ��� ����'%(�hollow- Fiber����1C��F� ���CM��C&�v�'I � �3��X=�� 2(��"�

��$���� �!"�L'��� 6� (����

�����������J��)C���$�"��C � �C���C)�6��1C�"����C�����$�C 2� ��e>���� ����&��"�\�O���D ��>�����

����)$����� mAb����������2��!�����3�������������� �3��X=C�� 2(����C'��"����C/�0�6%�� �2������ ��

��))%���3��"�"���\�t�M� ��?�����

�����������)�6X��C�� ��C&�������$�'�(� �3����2��!"�L'���-���=$���W/? ���!�>��%�O��)k�Y����

�����������"��3�� mAb��D&�"�� ������$��!"�"����\��������������C%��C)%�� ���%f��J��3$(� ��>��?�'$

��� �4�U������$�'�(� �3���������������� ��&�����) � �3�����$�����mAb������_C����2�C�$�"�� �

"��(�Z���F�������D���5 ������ �3C���invitro ����C����� ��C&�mAb���WC\�� ��C�%���"�

Page 21:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

!

������������������+���2��!"�L'C��� ��C&��C/�0��C������%�1���R�D �1���yE �O������)'E��4��)

����&��'��"������� ��&�+� �1��(����

���1���yE �O��IACUC���������%�1��������������2��!"�L'C�����!"�C%��&��2������O���D ��/�0��

��)%�"�������4��m�����+� �1��(�+������

��

��

��

��

��

��

��

��

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

� �

Page 22:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

� �

�� -���2� ���0R�2�,���*�SmAbJ���: 9��T�� �

�0U9����/T����

� �3K�)K���k��>�����X=�� 2(Ainvitro�B���2��;�C&� ��C&�b8������C���� mAb ����CK&

�������1E$�"����&�J"���� �!"�&������� �3C�����%�"��"�"�����]���invitro�������C$���$���(��C%���

�������-����m�G�k� ��������������C����� �C�2��$���1C���-��L' ���mAb������)'EC��c�C)' �

� �3K�)K�invitro ������2��W$�C ��C3$(�2��!"�L'C���-���C.���!"�C�$�4��) �"��� ��/���"�

���������2�� "��2�"��5�����&�2��$��>��Y���m�J"���� �R��D�mAb��%�13�������>[��������

����$�C��#�C&�U� ��/�&�G� �"��"��3$(�������C�����J�"���C ��^C5&��"mAb��"�invitro �J��

�������������������' C���C� � ���'�'EC$���C�"��C/$�;C�������!z����Q���/�0� �3F���ANIH�B

��=CC���CC.�OCC/?$���CC&��CC�����"����"���CC �OCC���2�� "��CC5����CCK�� (��"�!�CC$2�"�CC�� �������������

�AAAVS�B�����!"�%��F�5 ������1������"��%�J�1C������C����2��NIH��������!�C��!��C���G(��C&�

��1�������1������'�/%C���������������-�CK$� ��C&�����L��5��G(�4\�5' ���1���!"�%��P$����?�����

����������������!"�C%��g����+"�� �^0��2��!��� ��(�W/��-��&�?���&��)� �1������"�!���1E��

�1�����

*�����������_������&�� �������������� ���!"��2���^5&�invitro����d��J����RCF�������J��C))%��C/$

�2��;�&��k�>b8��� �3�����&���� �������invitro �J�mAb���S�C0�J��C))%�� �������

�"��"�"�����mI= ���O�5 �G�6� ��&��������

������NIH��������=���.�O/?$��1���"�"�O������&����������!"�C%�!������K�� (��"�!�$2�"��� �

������1��F� �S�0�G�6� ��%�1��9��������&��%����&�� 7����S�0�G�6� ���!�C��!���=C �1��F�

�"��"�1�&�] � �)���G��)/=$�"�_�������

��Q�Workshop�������������+���2��!"�L'C���1C�0�)/ �-��C{��J�!�C��a�K=��Y������%��g������

������������1���!"�"����\��D&�"�� ��g������v�'I � ����=%��"����1��(��������"���=C%����O�$��\

���������������������g�$����� ���������%��g��mAb�����"����invitro����"�����g���)�'���J�"���$�

����1����'F�>��P$����������������d�CI'$�� ��C&���C'&���Ck��>����C������C�� � ��� mAb��� �3C����

invitro ������#�C �$�#�CDM� �3���C�� "��C5��a �C���C�������1=%�J��$���� �!"�&���K&������

Page 23:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��������� ��%����&�� $������!�))%���ex�� �3������)$� ��)�AFeeder�B��))%�a/0������^C5&��"

%�J�"��� ��"��'/ �1=invitro ����"�J��C��/$�O�/^��������������������$�����/$���OC�

������ "�&��'$(�1P�U�;��6F��"��� ���������� ��C��������C������������&��������N�CK5 ���CM��C&���C{�������

����)%�� �������� �'KLE$�����"�A��������������C'$(��C'F���G��C���� � �C3�������C%���� ��� � ���!"�

���������13��4�U����1���!����3$(�"���� "�&�����������C$���� ���K&�a/0���G�/'���j������O��5��B

������1���O�g������E&� "�&��'$(�������G�6� ������������������C� �G"��(�1C��&�!����C3)���C�%���CM��&

��4��) �A���F�%�B������������!"�L'����g���!"��O�)k�2��!"�L'����&��&�?��-�5��] � ��&� "�&��'$(

�1���1��(�+���2�����

���mAb��2��a��:��W�� ������� "��� ��"�+� �1��(����!"�L'C���+�C ��"�-�5��] � ��&��%

�����������������C%��)'E�� "��2����E&�"��� �J��'�/%�`�^0��-�5��] ��"�1��� ���.����E&�"����

��������))%�� ���gf�����-����= �O���������������)%�� ������;��6F���$� 2�+� �1��(�+����&�2��$

����d�CCI'$��1CC3��+�CC ��"�W��CC�� �X��CC&�U��"�w�CC�U� "�CC&��CC'$(�ZCC%�ZCC?:��CC%

����� ����������1C���2�C�$�"�� �d��] ��K�z����&�1���5F��&������"�-�C5��] In vivo �

�����������������!�C$��>�QC��;)C%�G�� �G"�%��%��&��"���� "�&��'$(�Q���g�$����4�U��������C&��C$�X���

�����������������c�$�Q���� ����6���`����� ��&�����&��K� ��g�2� ��/�&� �����)��2���^5&���3 ���P)

����������"�� ����\�����&�"�� �V��#��������13�����������OC����"� "�C&��C'$(�a/0�a �%��&��2�

������2���gT�&� �3'P�U�J�"��� mAb�����1���2��$�"�� �����������$�C 2�O�C)h/��+� �1��(�+��

�����$�X�&� �3)�y������%�A����� ��U�B����������1C���2��$�"�� ��))%�� �a'I ����l��'$���������C���

�#����"�G���K/�*bb����C%��$��!"�%���3i��J�mAb����+����C&�!�C���C�����invitro ��������

������������������O�%�'�����)$� ��X�"� ����'%�F�1��(��K)������)%� �&��&�1��(�+����&��$�����

�W$� ��/�0�-�5��] ��"����1��(�W�� �2��!"�L'������O�%�'����O����%�"���� �a �����

��$���� ����

����k��>�mAb��������"��C$�����C �invitro�����������������QC���C%�1C���S2T��C%��$�C 2�J�"�C���C�����

���D ��&�� ���������� ���"�_1������'/%���FCS����"�����>2����A������1C���S2T�G� 2��'L���)k

�����������1��� �5&� 2���H���G� 2�����D �G��&�-� �O����%�B�����Q��d�I'$���$���-����&

������"��%����� �������invivo���������"2��C$��� ���f���&�1���#�5F��������1CP�U�G�CkmAb���"�

Page 24:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

���������������&����1���S2T�W�� �2���/%�Z?:�_�F�1���T�&�1��(�W�� ����13��;�� 2(�"�� �+�

�������������������2���C/%���"�C� �a ���1���OK/ �Z%�Z?:�O����k��>��"���R��6��J�G(���{f������&

������������OC���2���C��$��K�z�C���&��C{���C$�Xh���J��C��&����O�%�'����a��\�2���X�"� ����'%�F

�1���!�=$��%~�����'%�F���1���"��� �a��"����-����= �O��� ��&����

����Z%���"�� ���{f��1D��!z�����������/$����\��X�"� ���O�y�������������"��CX�"� ���O�y�����J�"��>

��-�5�� ���������������G(��K�z����&��/0��/�$���J��$���� �R�\��G�&�A����10�C���)k�B�����C&�1�EC$

0��/�$/��mAb�A��2����)k�B����&�� �!���%����

�������������������C���C)/���HC�$��S��)���&�+� �2��!"�L'����&�!�))%�!"��(� �3�"�&��'$((SCID)�

���d�)'���a&�\��1����������������CK���M��C&��C$��!�C��"�C?�������C���/�$�`�=U�������&����3/'E��

��))%�����G(��"�G� 6/����M��&��)$����� �� ��������c�$�O��)k����

����O��5���%�1���S2T� �'=�&�-��&�?��)%���W��C��G"�%�#�&�U��&�2��$�Q�)K��O����&���(

�����������C�� �����C��!"��QC��G"�%������13�� �'=�&� ��� �������mAb����$�C �"��{�C �

���������!"��(�&����

������������ ��&�+� �1��(�+��mAb��������������C���&� "�&��'$(��>"��(��%��$� 2�1���OK/ �

����������������������C��&�d�CI'$���C3)���C)K$��C��� ��CP$�"��C ��C/�0� �3F����&�J���� � �3)�y�������������

�A��������������C��&�1�C�(�N�C����&�6�$��L) � �3��')%��K�'\��Y���m�B�����C�����J�G(��&�=C ���"��

���Z%�N��� mAb������������������C&�2�C�$��C%��$�C 2��mC�I=�� �C3F�5 ��g��'&��G"�%�#�&�U� ��&�

��CC)k�G�CC 6/�� �X��CC&�UmAb��J�+�CC �1�CC�(�+���2��!"�L'CC���S�CC0�-��CC���"���������

�"���S�?$���$�����/$����

�����������������&�������&�"���a'I � 2���H��� �3�����������&��$����� � �����M��&�-�5��]

��H��I��+����K)�������5��M�G�/'���mAb�������������S�C0�G(��C?�'$��C%��C�"��C ��C��x�����

������������������C��&��C �G�C/��/%�Z'E���`�6���#�m����g�$����S�0����Gz��'$(��&�;)%�������"���C ��"

����������������������C0�&����$�C���C �H�C�I��ZC���C&�#�5F� �3�"�&��'$(���!����$"� �3�"�&��'$(� "��2

� �3'���5F��"�a���invivo ��$"�>�� �#�5F� �3�"�&��'$(������C&�!����$"� �3�"�&��'$(

�����CC��&��CC���$�CC���CC ��'CC��"�&�!�CC))%�1�CC��>�F� �3���CC�����CC��&�"�CC�2�#�CC/':�

�����������$���� �������k�2���X�"�!�))%�}��� �3/E�$�K ���������C?) ��$����� �G���!����$"

Page 25:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#

������������������;��C%��C0�&��C?�'$��"���""�>�!��������� "�&��'$(�#�mD ��g�2��)/���;��6F���&

��(� ��>�$� �G� 2����������"���G�&�a�"��"�6��?��2���5&� "�&��'$���������J�Z��C���C��' �#�C:�3&

����������������2�C�$�"�� �!��$������ ��&�H��� "�&��'$(���3����1���!���d�I'$��� ���������K�'\�

� �3'=%�1��invitro��$���� �!"�"�����������

7������� � �������������� ���!"��Rat�������"��{u ���M��&�Rat��������J��C))%��C/$�������1��(�

/5 �_������&�Z%�����T�invitro ��YT�C/5 ��C ��J��$���� ���>2�������C&��g�3C�� ��"�

v�5.��)/���Z'E����))%�� �������1����J����

�����J�W\�� ��^5&��"mAb�����������������2����6>�C$�J��C��&��C �2��$�"�� �+� � �3�����������0��&��%�

�����X�"� ����$�>�A���YT�C/5 Rat�B�����������"�C��!"�L'C��� 2�C��OC/��� ��C&�������C5&��Ck��C>���^

��� ���� �������Rat����_������&�invitro��������'C�"�4C�U���$�C��� ���>2����� �3���K�����EC&

�1���S2T�1=%�_�D ����

�2��Z%� �3/?:��%��$� 2mAb�w��U�Rat ������$�C�(��C&�� ��C��������1C���2��$�"�� �

���������C&��g�3C�� �2��!"�L'C����C&�+� �1��(�+���J�"�����>2���1=%�_������&��$�����/$

�5.��)/���Z'E���1���S2T�v����

�����������1���2��$�"�� �!��$���������:��"�#�mD ��>��#�:�3&�A�������H��C� "�C&��'$(�2��Y���m

�!���B� � �������� �3�����"����5�����&Rat �����C���_���C���C&�invitro����>2�C��

�$��������������������Gz�C�F�2��aC��:� ��� ��C��������C'���C%��$���'F���"��X�"�G���D �mouse������

��Rat����mouse��hamster����� ��� ��C�������C&�1�EC$� �C'/%� �������rat-rat ��

�W������3��13��+� �1����+����3$(� ��&�a��"�O�/���&����$��" mAb��1CP�U��&�

��������P) ��&�"�5' � �3$"�%�G��%�2��a�\�;�� 2(� ��&�T�&invitro �J!��$������ ��&�

�1���2��$�"�� ����

9���������$"��0�&��$����� � "�&��'$(�H��I�����������"���G(�1���5F�;��%���O�y�����G���!�����

��������������������C��%���aC� ��C ��1E�$�2��$�"�� ��=��[�� �3F��� ��&�H���#�mD �Q���'\�

������������������d�CI'$��O��C'3&�G��C)0��C&�4�U��+� �1��(�+���J�1���S2T�T�&��K�z����&�1���5F

����"���� �"�3)=�����������������1C��&�1CP�U��C3$(��"��%�"��"�"���� ���E&����X=�� 2(�_����

���'$(�2��!� (��� "�&�����������������F�C%��C&�?��-�C5��] � ��C&�#�C/5 �1=%� �3���������&����&�

Page 26:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

$

��������.� "�&��'$(�t�5 �R�] � 2���H���!"��$ �1E�$����1��(�+����%��X�"�"���

���������� ��&�+� mAb��������&�"��"��X'E&�1���S2T�������������C��%���aC� ��&� "�&��'$(��&�2��$

�����������G�/��/%�1�����1���5F�"����J�T�&��"��mAb��������2�K��>��C5��M�-��C���C&��%�����C�

����&�!������"�!��������� �3�"�&��'$(�2�� ���E&invitro ��aC&�\�1=%������W�� �2��

�������������������C��Gz��C'$(�#�mC���1���5F�O'F��1�"�2���&��?) �"���$�'���+������2��)'E�$�w��x�

�������Gz��'$(�;)%��� �����)���X�"�������"���� � "�&��'$(����������C&�w�C�x���C�:� ��>����"�C?���

���������������C���$�S2T��CX�"�1���OK/ ��������/�$�`�=U�������&��g�3/'E�����������C'$(�#�C� � ��C&

�O���CCC&����>�$�/��� �CCC3�"�&M��AIgM�B�O���CCC&��>�$�/����3G�A�3IgG�B��"�4CCC�U�

� 2���H��� �3K�)K� invitro��1�"�2��G(��?�'$��%��$���� �!����$"�1���5F�O'F

�����1���G�/��/%��&�#�m��������������6������C��2���F"�mC�� �3�"�&��'$(�����������C'F��O�C)k�ZC���C3�

���������C)�"��C �G�=$�����3&�= ��3OKT����#�C� �����&�C��2�mAb����������$�C �"�"�&��C%��C&�1C���

�������������������wCL:�aC �%�-�����&����"��a/0���"���H���1=%�W�� �2���$�����/$��%�HI=

���&�)&�J��)%"�����3��1��(�+����&����&�O����

� ��&�Y���m�H��I�IgA mAb��%����2�1���aK= �IgA�� �) ��A�v�5.��g�$�����&

������Gz��'$(��&�#�m���13��B���2�����&IgA��������"�������� ��������/��"�����������C��&�aK=C �O��

������IgA�1���!����'/%�+� �1��(�+����&�����

<����������$�����/$�S���Z%����S���G��&�_����������2���F�%���"�� �mAb�����Jt��C����^5&� ��&�

�����������1$�L0�a ��0����0��&������ ���OE%����&��2���a��\�2�2�������������C��/$�Z���CF�����2���^C5&

���������������������C ���$�C����>2�C��S�C��Z%����S���G��&� �3'��:��&�Y�5�����)$����� ������� ���!"�

�������������$�C����>2�C���C3'��:�O����&��)$�����/$����!"���X�"������M��CK)����C'/3 ����-����=C �RC����������������

�AChandler 1998�B����!2��C$���C&��C)$����� ������� ���!"��2���^5&���(�� ��P$��&�J

����F�_�D ��"��F�%\���������G�C$� �!�C$2�1C��&�\����C��&��C%��$��� ���3X$�S���Z%����S����

�����������������2���C'/%�_���C��OC����"��C3$(�� ��J��$���� �!"�"�H�I=�*8�����������"���� "�C&��C'$(�2�

���E��� ��������������$2���� ��$��!��� ���3X$���T�&�S���1P�U��&�_�D ��"��%��g�3'��:��&�����C>�

����&�_�D *���������������&��?) �S��*8�����������&�_�D ��&�1�E$� "�&��'$(�2�*8����"���S��

Page 27:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

%

��������������������1C3��!�C��t�C��G�C 2����)�6���%���(��/$�1��&�!"2�&����V����"� ���x�����

��'F������x��1=%�_������&��3����� ��>2������/$�������������

���������������������C������C&�!�C))%��C�����Q��2�����X�"�1��� ����&�1��� �EK��2��S���1�L�%

����C&�����C��!"��QC��G�����>2��������&�-��L' ��$����� �J��X�"�!�))%FCS �*���2�

�����������������"� ���E��� ���M��&�������!"��G�/���%��)%��/$�O�/^��V��1��� �EK�*��

FCS�1��� ���2��!�����3��"�%�����������X�"����

����������������������"�aC%�!��"�� ��&�![��&��%��)��&�� �������1�L�%�O�/^���&�_��� �-����= �O��

��������&�� �Z3 ��eU��������������C%�S����\�F�_�D ��&��g� �������������� ���!"��G"�%���>2��

������������������������_C���� ���EC��� �6���C$(��C&�2�C�$��C'F�>����C\��C�gf��"�� �1��(�2�����G(���3����'&�

�$2����"��"�� ��������G�>�������������#�mC����C��%���aC� ��"�-��C��x��"�?��mAb�����#�C/0���C��

�"�&������!��/���T"��3$���� �t����&��X�"��K�z����&����

�������������� �C3�"�&��'$(��%��g��� ��������G�����>2����"������K= �O���D �2���^5&IgM�

����IgA������������"��$��!"�"�+��6>�S����\�F� �3'��:��&��))%�� �����������������C������C&���%f��a��

mAb ��IgA����IgM�����C%�1C���OC���IgM������� �C\�!�C))%�1C����� "�C&��C'$(�QC��

�����������������"�C��&��$�CL0� �C3���/�&�2�� ���E&��"�G�E$���)/���������"���'&���%�1���G�/��/%

���(�� IgA����1C����$�>�C$�>��$�EC$�� �3���/�&��&�!��/���A��aC��\�2�Begers IgA

Nephropathy��2���CCK��G�CC)%���CC%��CC�� ��>�c�CC$�O��CC��l��1CC��L$��Henach-

Schanlein Vascultis���&�� �1���� ��>����B����"���C �c�C$�OC���2��S��Kh����"��%

�������������������"�C���{�C ��)���C&�G�C �"��C&��?) ��%��$��!�=$�HI= ��g�2�4��(�ZE�$�K ����OC��

����� �C3�����6����C�����-���.�-����= IgA���IgM������#�C5F��K�z�C���&���CM��C&��C%����

�� ����)'E��������C�"��C �G�=$�J��$��"�T�&����%���a����������C%�1C���!"�C%�HI=C ��C'�/%

����������#�C$��%�) � "�C&��'$(��������)� 2��"������F��IgA���������!"��(�1C��&�1=C%�_�CD ��"�

�ZCC%����CC� ��DCC��' � ��� ��CC������2���CC/%�"��CC5��#�CC:�3&�1CC��IgA�_���CC���"�

invitro����������$��!���;�� 2(�J�a�K=����1P�U�������&� "�&��'$(�2��T�&�����C&��C�%���M��G�6C� ��

FCS�����C'$(�1CP�U��&�R�\"���������$T�M�G"�%��&�K$��J�1=%�_�D ��&�!����F�.��

� �3��K�� �������2��15$�/ �13�� "�&IgA�"��"��X'E&�#�5F��U�����

Page 28:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

&

��k��>�Roggenbuck and Others�A�*bb9�B���2��S�C>��C�� ���"�� mAb�IgM�

������ �3�����&������'%������invitro��$"�%������������"�C���J��*��FCS������ ���C.�_�CD ��"�

�O�&� �3=)%�����J�!"�&mAb�IgM �1��:�;��%��&��?) �_�D �-���%����X�"���

����������"�>�H��I�� ��e����K���"�v�5.�l��'$��� "�&��'$(����H��C� ����:� ��"�Q�)K�

������_�F��&��2�&��&��"�\� 2��78����2�IgM����������G��C�F�G��CX�"��C��&�� ���'%���)/����� T�C&

%99/9��������������H�C�I��#�CM��"�����C�"�;)C%���1��&�\�2�IgM��������_���C���"�!�C���C�����

invitro �$��!"�%�!���= �����

����+� �1��(�+��$� 2���K�mAb�������1C3����C ��� �C3$z��C'$(�����2� ��/�&�a ��0� ��&�

����������C�� � �3�� ��"��g���%����'E�E%�������&����C���������;��C 2(��$�EC$�� �C3���/�&� ��C&��������

1���2��$�"�� �J"���� �����

��YT�/5 ��=�� 2(�O�)k�������"��"�#����-��{���&�2��$��A�������"�G�=$��K)����)5�mAb�����CP$�2��

�"��"�#���F� �3E$�z(��&�2��$��)���&�;���-�5��] � ��&����1����{� ��$� �"����

�������2�� "��2�"��5��"��� �O����"mAb����������2��a�\����&�4�U��v�'I �-����m����3�����6����&�

����(� ��&��$�/$�Q���K)������������������2�"�;��6CF��-�C5��] ��"�"�C��d�CI'$���'=C�&�-�C�g6��6���C$

������������"��2���"�� ��������������&�2��$���yE �O������$���;�� 2(mAb��������"���C ��CK)����C��"��"�

�"���a��:���"��)5 � �� (�l��'$�����$��X&����\�;�� 2(�"�� ��)$��'&��F�%����

���������"�-� �3&������g�2�1��/��!�P') ��U�"��� �����&� ��&����������>�J� "�&��'$(��g���%�"�� �

1����F�.��1��� ����)k��&�2��$�-�\������

,����������2���C'�5/��-�\������>�1=%� �3����IgG�������������"��C%��C)%��C �"�C?���#�C$��%�) �

�������C$��!�C�����2�K��>�1��(�W�� ��"�!����������&�= �#�mD �2������L' � ���1�5\�

�/0����Gz��'$(��&�#�m���1�F�i��&��?�'$��"#&�"��e>�� ��{��G(�Z3 ��K�z��������

Leibiger��G���CK/�����A*bb<�B���C����mAb� IgG ����v�C�����'=C%�_�CD ��"��������

����������������G��C��2�K��>� �C3��X����S�C/���"��g�C3'$��2�$� ��)\� �3���>� ���"��%��))%�� ���

��)��&�� �����������G�C���C��2�K��>�O�)k�"��� ��^5&��"mAb����������aC/0��"��C�������CM��C&�

mAb�� ��{���"���$� ��{f���X�"�"��� ��"����"��e>����

Page 29:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

(

�1=%�_������&���� "�0���U�V���O���G�>�)E��$invitro��?�'$����)�"�� �1�E$�

�������������1�0��&�+� �G�&��"� "�&��'$(�O���;��6F���%��$��>�� ��#�m�������2�$�C � ���!�$��>��&

������&�� ����������������C&����"�/$�Z�P)�� ��M�G����� ����1=%�_������%�1���!����0"������C����

������C���G�C���C��2�K��>�O/C.��"��P$�"�� ��g�3'$��Q�����AMary and Orbers

1997�B����������������Z����$��0M��!�����O���-��{���&��)� � �)�������='$��2��� �� ��J�����WC\����"

�������������������C\���DC��1C�5\� �G"��(�1C��&� ��C&�!�))%����2�K��>� �3/�6$(�G��&� ��K'�"

���������Q������ �������J����)\� ��>����#�K�� � ���!��UIgG�������!"�&�G��>�������"���%�Q��

�1E�$��)'F���1�"��.�:�G� 2� ��(�OF��&�4�U�������

������������a�K=C���&��?) ��$����� �1=%�_�D ��"�G����2�K��>���D$mAb����� �C3�>[����C&�

�"����$� �"� ��"�&��%�13��Q�'�)%�%� ��F����

@�����C������ �3������K�'\�� ���!�C))%��C����� �mAb��C ��0��C&����aC��\�2���2�1C$�L0�a

��$��!���!"��(�|��\����/I ����$���+� �G�&�"�������&�4�U���3��������

������������������z�C�������C��&��C$�����C �� ��C������ �3'=%��"��/���K�� ����|��\�J��/I ��>"��(

��������"����'��"�&�+� �G�&��"�1=%� �3�������������������!�C))%�!"�C�(�aC ��0�OC���G"�C&�O�C&�2�����

�����"������&��$�����/$�������������������+�C �QC��O���&�C)&�J�"�C��S�C?$��#���C' ��C&�K� ��C.� �C���������

������������������� ��C&� ���EC&� �3C�� ��CK���:��"��C�"�-�?$����+2����&� � ��������Q���$�����

�����O'���������������������C����O�C&�2��#�����1\���3�� �!�0��&���1���2��$�"�� ������ � ���

�1F�����

Stein �A�*bb<�B� ���M��&����Q�)K��O���1��F� �1���!"�%���gf��a�'E����

��

� �

� �

� �

� �

� �

� �

Page 30:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�)

� �

�2�38*��V��W��*���X��T�2�����Invitro �*� Invivo"� �

���� �3����4��5 ������6 invitro������C����� ��C&�+�C �1�C�(� �3������mAb��OC����"�

�1���!���HI= �1/E\��� �3����YT�/':���%�"�%���������&invitro �2��;�&�b8��

�� ��2��$mAb��� �����������)%�� �O��������J4��5 ������6 �2���^5&�����������-�C$���:�;��C�(�"��� �

������C�����G"�&� "�m'\���&�_��� ��X�"�-�0�.� ���"�� ����\������"�� mAb��1C�����

�������G��)0��&�O�g���;I&��"��h$�)k����� �3C����invivo�����invitro������� ��C?���C����� ��C&�

mAb������� �3����1���!����%~�invitro������1C���OCK/ ���*�����C��,������C�(�+����C&��&��1

����&��'��"��)�6��+� ����

����������������$���� ��0�&��%��g����'%�F�2���^5&invitro���������� �C���C)�6���C��&��C)�6������

���������������ZC%��C�����1C�0��C&�4�U���%�1���-�6�3?�����>��%mAb������� �3C�����C&�� ��C������

invitro���1��������������������!"�L'C���vC�'I �-�6�3?���&�_�D �c�$��)k�2��R�D �����&�S2T��>�

����]$�/��J��)%�������������������f���&�R��D����"���� �T�&���%� ����)�6��J��'F��� ���L������>��%�

�'F��� ���

��

�2�38*��2��X��invitro�"� �

���� �3����invitro�����������C�"��C �;��%� "�&��'$(���������:� ��"�����3�� �2��!"�L'���J�

������������������������WC�) �G��C)0��C&�J�"��"�"�C��� "�C&��C'$(��C������mC\��K�'\���3�� �2��G����� �� ������

x � ���#���e�"�%�!"�L'��� ����

���� �3����invitro�YT�/5 ����6>�&��g�3������!�������������t�CM�2��J "�C&��C'$(�!�C�$�������� ��&�

���)'E���g���"�15)����������������������C&��EC��� ��"��C����� ��C&�1=C%�2��!"�L'C����C':���G(�1�0

�1��� "�m'\��-�P: �a��"��&���-�$���:�2��!"�L'������

�� �3�����"�invitro 2��$���&��$���:� �3�K������g�����&� IACUCs�1E�$�����

�� �3�����"�invitro�1���Z%����1E�$�G���:��&���%��"��&�?���&�V�I����&�2��$�����

Page 31:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�!

����� �3�����"�invitro������������������!"�L'C�������C���C/�$�`�=CU��C�����C&� �3/'EC������G(��"��%�������

"���� mAb�1��(�W�� ��"��h$(��&��&�= � �3'P�U��&�4�U�������C������C�(��C �1��&

���&�� �+� �1��(�W�� � �3�>"��(�2�� ��0���"���� ����

��

�2�38*��V��W�invitro "� �

�������������&�_�F���2�-�K$�2��Q������%�"�%���������&<�7����j�&� ���� ������������� ��J�"����

� �3�����&��%�-K= �2���^5&��&invitro��))%�� �!�����"���� �j�&� �����

� ���������^5&���$���� �O�&�2��1=%��"�����))%��/$�����d��1=%��"��������

�� �3����Y� �/0�invitro �2��!"�L'����&�FCS���C3�"�&��'$(��^5&�"�&��%��%�"��"�2��$�

��)%�� �"��D ������ �3����2��!"�L'��invitro ������� ��&�mAb��!"�L'C����&�Y� �/0�

�2�FCS�:�;���(�c�.� ���D���&��%�"��"�2��$��1��������"�� �-�$������

��������� "�&��'$(�4��) �G������2�K��>�G���F��A�����C�����t�&invivo�B�����1C���OCK/

�-�=�� 2(� ��&���� "�&��'$(�#�mD invivo ���J��Cg�2��C)/���1����;��6F��a���&�J�

�����������������"�W��C��G���}�������K�z����&�#�/0���"�-����x��J�#�m����&�a��/��;��%invitro�

�"2���4��) ����

���������������������� �C'/%����C� � ��C:�����C��1=C%�#�mCD �����g���W�� �J���%���M��&�mAb��������

�A��YT�/5 8*�8���88��8�B���������������1C���+�C �1�C�(�+����C&�1�E$��'������ ��"�����C���

����������������/�$�`�=U�������&� �3/'E����%���)%���������2���g�C3'P�U��$����� ��%�1���!���"�?��

mAb���= � �3'P�U��&��E��� �a&�\��)%�������+� �1��(�W�� ��"�!���!����

���������1P�U�J�1F�&�1=%� �3�����"�mAb������������c�C.� �OC���J�1���Z%�1=%��g���W�� ��"�

����������������� "�C&��'$(����%���a� ��$����� �"���%��)%�� � ��������� "�&��'$(�w��x��a:��

���"�;��6F������)�6����G� 2����)%�!����$"���� "�&��'$(�J���"����x��������

�P�U��4��) � �3'mAb���(�1��&��������/�$�`�=U�������&� �3/'E����"��$����� �����

������1��� �3������'=�&�mAb������ �3�����&�!���������invitro����������C/�$�`�=CU��C�����C&�

����������� ��� ��C������#��C��-T�mCD ���!"�C � � �������� �3������&��������!"�C ���'=CU(����

��������� 2���H���O���&�)&�J��$���� �"��"�S2T��5��] �2��a�\�����)�6��������

Page 32:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

���mAb������"�!���������invitro������C&�1�E$� ���v�5.�#�m���a��/��J�mAb��1C��&�

�"��"�1��(�+����&�!� (����

�������X=�� 2(�1=%� �3��������������ZC%����C� ��C����� ��&�Y� �/0�JmAb����������C� ��C������C��

��(�+���2���'$��>�G(�_��' 1��)'E��+� �����

A(Hendriksen and de leeuw 1998, jackson and others 1996 , Peterson

peavey 1998, marx 1998 , lipman 1997 )��

����"��5��mAb������ �3�����&�!���������invitro���������������"�2�C�$�"��C �ag�C���"�C5��1C�0��C&�

�1���"��D �N�'�"����

�����������"����eU�a%�!��"��(FDA)��������������QC���$�EC/��-�C�{�� ��C&��%��$2�� �O�/I��mAb�

�������� �3�����&�!�����invitro����Q���&�mAb����������C�����+� �1��(�+��������&�Y�\��%�

�1���!��*8���"�%��)�6�����&�����T"�G���� �����

��

�J���: 9��J*��2��X��"� �

��������2��T�&� �3'P�U�YT�/5 �+� �1��(�+��mAb������������� �3C����4C�U���%��)%�� ������

����$����� ��%� �5&�w��x�)����!����$"���� "�&��'$(��������"�;��%����G(��{�����)%�)��2�C�$�"�� ��

��&��/$)������

�������&�= ���"�� ��K�'\��mAb������� T�&�1P�U�"���� �!"�L'���mAb�����W�� ��"��P$�"�� �

�����������������1=C%�W��C ��"��C%��CX�"� �C��O�y�����-��{��2��+� ��'��(invitro����"��"�"�C���

��)%�� � ��>�������

��������� "�&��'$(�!�))%�������+� ��'��(�+����"���J���$�������1F�&�1=%� �3���� ��>"����&�2

�"����"���$����

��

��

��

��

��

Page 33:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��

�J���: 9��2�38*��V��W��"� �

��������������������C$�2���1C�\�� ��C&�2�C�$��C%�1����g�3�� �2��S��� �!"�L'���a ���+� �1��(�+��

��$��"����

mAb-������ �3���������&�!���������invivo�������c�)' ���� � �3)�y����� ��:��$����� �

K/ ��%����&� �X�"� ����X'=U(���"���H��I��S6�'E �1���O����

������������������"��C%��)/���Z'E���H�$� ���"� ���+� �2��!"�L'���-�����"�+� �1��(�+��

�"�&�� ���T�&��)�6��J��$���� � ���3X$�V�mI �!���1PF�D � ���W/'?��

�� �3����invivo�"����3�� ��"��3����a&�\���2����"�"��0�&��$����� ���

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

Page 34:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��

� �

�� -��24� ��5/��.�/�01�/���6�+/� �

��64T��'���������

�"��:�<888� �/)�����h&�'%��"� "�&��'$(�#�$��%�$� �Lincats�1���!���1E�������

������Z%���"�� ��"��3$(��'=�&�A���2���'/%*�8��S�>�B����������!�C���C��������C���D��t��C�����P) ��&

��1���������S2T���!"�&�RF� � ��?���P$�2���3$(�2����&�"����O����&�����L' �N��� ��"�"�&

�$���������J�1F�>�� �S�?$��������D����%��"��h$(��&�1�E$����

������"��:����������� ��>�� ��?���P$�2�*8��*�8����������J�Z%�N��� ��"�������G��)0��&����&�S�>�

���>�*88���*8����������� T�C&���_C��' �N�C�� ����&�S�>�*88���������d�ECD �!�C�$���C�����S�C>��������

���"���� ���������mAb�� ��"����������"��>�� �-������P) �����&� ��?��N���������J��H�I=C�

��D��J�G� �"��������$� �"�a ��0�"�?�����-�����

��

��/���4�*��Y >P��Z�,�2� �24� ��5/��.�/�01�/���� -��"� �

��G�6� mAb����������������� ���!�C3&�G�C 2�J��C)�6��aC� ��g����'%�F�1�/�����2��$�"�� �J���aC ��0�

������"��"�t����&��X'E&��$�$�\�����)���"������������G�C 2�J��C)�6��"���C ��mC�I=���'&�\�����E&�W

�����������"���� �W\��������"�� ��$�$�\�-� �6����� ���!�3&���������C������mC�I=���'5)��N���

mAb����������������"��"�"����"��2�G�6� ��&�-��$��&���_��' ����Z%�G�6� ��&�YT�/5 ���������CP$��"��C&

������������� �a&�\���M��&��$� �"�15)��J� ���!�3&�G� 2����)�6��G�6� �O'F�>������C'/%� ���CP:

��������"�� ��1������������������1C���"�C�2��C��_��' �6�$�������G�6� ����m�I=��15)���&�1�E$��

�������������C$�>���� T�&� ����)�6�����$�$�\���'����&���1���!���#�')%����E&��$� �"�15)�

�1���N�E:����E&�+����"����x��������������$� �"� ���t�5 ��%� z���)K���&�15)�

����J��)%�� mAb���$��������������C)%��C ��C�����_C��' ��C��Z%�N��� ��"�6������"��C������C)�6�

��� z���)K���&�15)����������������W��)C���C&�1�EC$����C����"�� ��'/%��m�I=��W��)���&�1�E$

����1C���Z3 ����E&� ���!�3&�G� 2�� ��1��������"�� ��'=�&������$� �"�����"�O���&�C)&

�������������K ��K)����$���������&�� �W���� ���!�3&��&�2��$�15)��O��������+��F���2�&��"����#���G

����&��'��"�J�"��"������%��/0�#�M�T�/':���%����mD � ��&����

Page 35:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�#

��� ��?�������mAb����������������"��C5���C&�R��6�����#������6&� ����&�1=%�2���'=�&� 6�k��&�

���"��"����':��+� � "��2�����������������2��;�C�� ���CP: �aC&�\�;C��%����5��S6�'E ���%�O��

��������"���a��:�G�)�/M�����1���������������������"�C� ��$����� ���1�����������P$�"�� �������!"

���������������� ��&��)%�����������>"��(�G��&�#�mD �Q��6�$���������� "�&��'$(�2�� ��?��4��)'

���������������������-��C����� ��C&�T�C&�1C�L�%��C&�-�C$�K ��G"��(�Z���CF��&�2��$� "�&��'$(� ��?�������

invitro �J�invivo1�������̂ C����1C�L�%�#�')%� ���:���O�)h/���S2T�1C�L�%�O�/

��������D��-���/0�-� �6������1��GMP����������1���S2T� ��?�� ���!"��(�F������� ��&��%����

��������������� ��eC�����CK��2��G�)�/M�� ��&�#�mD �1��� ���;�� 2(�O�)h/����!"�%�1��0�

�����1��� ���.�#�mD �1�L�%���������������wCL:� ��C&��G(�G"�C%��)'EC ����������������&��2��

�������J�1���S2T�!�))%�t�m ����:���FDA��������$�$�\��)���"����G(��p������"��C����"�� �-�K$

�-T�mD �;�� 2(���1��mAb�$�E$��!"�L'��� ��&��q�1���!"�%�� �6������

��

�2�38*�invivo�*�invitro�24� ��5/��.�/�01�����2��<��� -���2� �"� �

��������� ��&mAb����������+�������� �1��(�+����"�2�� ��?��invitro����"���� �!"�L'�����

�� ��&$���������������S�/���)�6��J��$� �"� ���!"��(�F�"�� ��"�6��+���d�I'��&�!����C����O��'=

���"�� �V�m'��"���&�������

��������������������wCL:� ��C&�J�������2�������������2��;���a �%�1�F�i��&������� ����)�6������&��&

�+���G�$�"�"�m'\���$�$� � ��?�������invivo ��)�"�� ����\�����������J�"����O����&

h/��������� ��%�G�)mAb�������+����&���%�� �"��J"���� �T�&�invitro�����C�� "�mC'\�����EC&�

�������������� 2�C���C)�3&� T�C&���1&�{� ����)�6�����2�J�1���A��������d�CI'$���C&�"��"��X'EC&��C)�6�����

Sub Clone�������������O��'3&��&�mAb���"��C��������Z%�S����&�_������"�������

�S���G��&�_�D �B��������&�j�&� invitro �&����"�C��� �������J��������'=�&����� ��

����������������&�J�S�>����`�2���&��)�6�invivo������"��"� ��T�C&�������x' � ���)�6����'����%�

�����)%�� �1&�\��A��aK��B�J���������������C' ��"�ZC%�G�6C� � ��&��������)�6���E��� ��"�invitro�

������2��������!"���&��'E&21������,�&��&�����������������C���C)�6��OC���1���OK/ ��)k����J�1����'=�&��

������������������C���"�J�"�=C$��3)�EC)K��1\����-�$���:� ���3X$� ����)�6��a� ��g����'%�F�a ��

Page 36:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�$

�������Z'E���J�!��$�������� ��%�!��"���X=�� 2(��������d�CI'$��YT�/5 ���1�������F����&�G��� �

�������������K�������"�O�)h/��J�1���Z%�G(��"�G���:�2��!"�L'���G�k�"���� ����_�D �2��G��'&��

���������������)%�� ������;��%������ �3$z��'$(��&��X'=U(�"�%�!"�L'���S���G��&�����%��$� 2

����������"mAb��������������� "�&��'$(�2���/%�G�6� �O�)h/����1����$��D&���Z3 ���'%�F�G� 2��

Z'E���1���2��$�"�� invivo �_�F����������������2�"���� �d�I'$��,���#�CM��C'L�������

��=%�� ���"�Z'E���invitro ��1C���-��CL' � ���P: �a&�\���M��&��$� 2�_�������

����������������"��C �Z'EC����&�� ��������G"�/$���>2��� ��&�S2T�G� 2�-� ��&��X'E&�������G� 2

����� ���!"�L'��mAb�"��"�2��$�"�� �����

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

�aK����

Page 37:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�%

������G"�&��&�G� 2�a��"��&���$�����&�S2T�G� 2�;��6F���� 2����)�3&�����O�C5 ����C� ��C����� ��

mAb������������� ��?��N��� ��"�J�invitro������������&�1�E$�invivo�������G�C 2��C&���C�':��

�"��"� �'=�&����

�������������������"�1C�0��C&��C%�G� �"��&�j�&� �Q�z��(� �3I����1�/����M���&��$� �"�15)���"

�������������� z���)K��2��Y���/0�J��(�� �"���&������Gz��'$(�S��� �O'F�>����\���5 invitro�

������"���� �!"�L'���S���G��&��������������C�2��)'EC�������"�� ��?)����"�Q�z���$�/��� �3I���

������������������ �3����2�� ���E&��"������� ���!"��W�) ��3�� ��%mAb���)'EC������Z'EC��

������������2��!� (�1��&� "�&��'$(�G"�%�"���&�a��/��G�E$���)/�� ��%�"��"�+����?) ��$����� �

�������{��;��%�����3�z��(��&mAb���6����"�C���������������G(��"��C%��g�3C����O���&�C)&DNA�� �

�������������+�'E>����5����J�"������ � "�&��'$(� ���Gz�O�6X����G�E$����'F����1������$�E$�

���������� �3�� ��"� "�&��'$(����������3�"�&��'$(�G"�%SCID�A������)/���Z'E����%��g�3��

�����$��"��L�5.����E&�B����Z'E�������invitro�������������C))%�aC:����aK=C �OC����C$�����C ������"

���������K)���O��5�� ��&������� ����%��$� �"�15)�mAb����������J�1C��"��C��������P$�"�� ��{��

��L'����&�YT�/5 ���2��!"mAb�Z'E���2��!� (�1��&�invivo�S�?$������G�C 2����2�"����

����������1������O�g����������)�6�����'����%� ���!�3&������������$�C�/%��$�C 2�!��"�O�C/���"��C$���

��&��g�3$���������+����invitro����������C�"��C �+�'E>����"�����������+��� 2�C���C)�3&��C'\�

invitro ��g�3$� ���!"��(�F��g(��%�-�0M���$��/%�J��$���a�/K��#�mD ��5������

��&����������S�?$���g�3$��)�����)%�� �a �%���FDA�)%�� �#���������

�������������������C&�j�C&� �-�CP: ��'=C�&�1C�/����C&��?) ������ �3'&�\��J��m�I=��W��)���"��

��������������������"��"� �C'/%�1C�/�������C� �C3$z��C'$(�"�����K���:��"�J�"���� �����)�6�����"

��������+���2��!� (�1��&� ���!"��(�F��?�'$invivo���������!"�L'C����C��!"�'E>���M��&�YT�/5 ��������

��$���� ��� ��%� �3���invivo ��������Z��C3��;��C%�O/C.��C��!�C���C)�3&� �C?$��&�

����������;��6F����� �������mAb�������J���������"�C��aC��:� �'=C�&��������� 2�C���C)�3&�OC�������

�������������'%�F��&�-�$���:�2��!"�L'���;��%��&��?) ��$����� *8�������������EC&�G�6C� ��&��%�"���

����������)%�� �Z%���������� ����)�6�� "��2�������������ZC3 ����EC&�1�C�(�+��C&������� ����)�6�

���������1�����x' ����E&�1��(��������"��)�6����'%�F����2�J1��������"����O����&���RC��D��15)�

Page 38:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�&

����5������A��������������������!�C���C)&��C�����$�C �"�aC ��0��5C������RC��D��N�����&��%��'5)�B�J

����������#�m���a��/����������G� 2��&���������O��'=�&mAb���"��"�����������C' �2��!"�L'C���O���&�C)&

Invivo������invitro��������t������&��X'E&�z������1�L�%��&��X'E&�O�)h/��!Mab����C�����

(��"�������!"�������&�!���"��"�Z'E���G���+��&�������Qk�%�N��� ��"������� ��&

�����C�����+����C&�1�EC$�G�k�"��>�� ����\�!"�L'���"�� �4�U��1��(Invitro � ���"�

��)�3&��&�2��$�G��&��$����� ���1��� ��T�&�������G� �$����!"��QC��1=%�_����� 2���

1=%�_�D �"�������"��>�-��������

��

�J*��� �� -��invivo�� �

F���������������������+����C%��C)%��C �HI=C ���C�2�1C���ZC3 �� ��������Q��Q�z����&���'��1=C%

�����X=�� 2(AinvitroB�������������"�C%�!"�L'������ �1��(�+���2�����&����1���RF� �����!�C0

��1P�U� ����K�z����&���'F��O����&mAb��1�C�(�+���"�� ��"�O�)h/����!���������

����������"��"��C{��1�C�(�������1�/%� ������ ����������G�C��D ���������+����"��C���"��C�����a)C�

invivo ���invitro����4C��) � �C3$��%�d�CI'$���������� ����x' �Z�P)���&��)$����� �

��'$l������))%��)�3&��������������1���Z3 � �'= � ��&��)�6���'\��!"�"�G�=$��&�?������)�3&� ��&

����������������+����C&����#��C��!"��1����'3&�J� "�m'\���P$�2��Z'E��� 2��invivo������C�:� ��C&�

����������$���������+��� 2����)�3&invivo������������S���C ��C������%������� ���!"�� ��&�_�F�

��������� 2����)�3&�� ��J�1���2��$�"�� �"��"invitro������������1���S2T������� ���!"��S�/�� ��&�

��������������#��\�a&�\����mAb�������&��'��"������������C������"����CI ���'%�CFinvitro���ZC3 �

�"��2�1/:2�����%��&����':�����2�1���"��"�!��"�+2� (�a)������T�&�1�"���J����� ��C&

����Z'E��� 2����)�3&invitro�������������O�C/���C%�1C������':�� "��2�t�m ����K��ag�����&�

����������������"�����)�6��;��6F�� ��&��/3 �a �0invitro���1����������)�3&� ����%��g����x'

�����+����&������� 2��invivo�����C$��e>�� ���{f���������������C��J��)C��J�OC��a �C���G��C�:

��������G�6� �J����X=�� 2(����������������ZC?:���c�$�J�������I��"��5��J�!��������� � Primer�

1����������������������G� �C$��� ����C���$�C�� ��K'C�"� ���$���� ����E&�2�M��&��$����� �a ��0�O��

�1P�U���1��(������mAb��$��e>��{������

Page 39:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�(

�������������YT�/5 ��))%�� �������1��(�Z%�Y�0�$��%��g���G��%�d���J�#�� � ��&������ ����)k�_�F�

������������������"�C�2�1��(��%��g���G��%�d����K���:��"�J��)�"�� �a�K=���\�L���!�L:��"���6&

��������������������"��C%��C))%��C �����������Kk�%� ���� ���2�� "�5' � ����$��%�J��))%�� ������

��������"���� �a�K=����L�� ���1/E\��/��������������C%��$�C��d�CI'$�����&��g���G��%�O���&�)&

�����Qk�%���S�$� ���� �����������))%�� ����������Z��3 ��'/%�������������4C�� ��C���"��C���C��I�

�������1P�U�O��'=�&���#�mD �O���T�&���3�mAb���������"�C���C �+�C �!��>�Q��2��������"�6C�

�������������������C���"�������I��J��)�"�� ����I��!2�������K��_�F��%�Z��3 ����E&�������!"��"��

��������&����S2T�+� �"��5�2����S�>����`�mAb����G�6� ��&�7������%��&��&������O���&�)&�J���"�� �;

���������������#�/5 ���M��&���"��"�+� ��K�)��%�_������&��X'E&�2�? �!"�L'���"�� ����I��"��5�

����&����&���&�������I��Z/�6%� ����

�����+����&�d��] ������invivo�������������J�"��"�����C��!"��QC���/��3��15��M�;��%��&�2��$�

�����������))%�a �%����������!��"�Q��!�$2� �3�� ��������C�%�d�CI'$����������C��x����4C��) � �C��G�

����������������C)�3&� ��C&��%��)'E��������"�+� ��\�L��!�L:��&�!���R��6�� � ��������1P�U

��)���) ������� 2�����1P�U���Z?:mAb �����d�CI'$��G�C�%��C&��X'EC&�J�!���������

�����Q���/'E����E��� �O�����"��"�!�����������C)%��C �aK= ������������ ��C&�!���O��C'3&�O���&�C)&

�� �Z/�6%�C ��C&��G������+����"�#�mCDinvivo �������+�C ��"��C��G�C�%� �X��C&�U�J�

����������������C)%��C��������#�mCD �O��C'3&��C%�1C����$��%�2��!"�L'���������"�#��C���C���_���C�

invivo ���� "�C&��C'$(�J�����C�� ���!"���/��J��_�����O����"�O���&�)&�J�1���d��] �

��������������&�!�=$� 2����)�3&��'\���':�J��))%�� �����������1���a��"�O�/���&����&�R��6���%�

��"��%����������!"��YT�/5 �+� invitro ��)%�� �wL:��)%��/$�����d������

������������������QC��1�C�(�+����&�������"��X&�"����������) �Q�)K��Q�������� ��%��E%� ��&

����1���!"���+�������������������1������':����� �!�))%��)��5 �Q���&��3�� ��$�2���!���= � ��&

�������I�� ��&����1\��O��'3&�����������������'=C%��C��&�+�C ��C%�����$� 2���!"�%�O��5��1��(�W�� �

��"�����)%�O��5��������������������-��C����� ��C&���"��"� ��T�C&�G� �$���J�1����'5����1��(�+��

���������������������)%�� ������� "�&��'$(� T�&� ���1P�U�J�1������ "�m'\�����E&�_�����:���Z%

�������������T�&�N��� ��&�G����� ��'5�����������"������E&� ��&��������C)�6�������� ���!"��2��

Page 40:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�)

�+����)�6���)$�/�� 2���H��invitro �1�������+����C������"��%�aK= �O��'/3

invivo������������������"�G��C�:�G�C�"�4�C�(�-�C$�K ��O�)h/����-�$���:�2��!"�L'���"��"�"����

�����������������C����'C���&����a/5����'�"�������)��&�!���$�+2� (��'���&����O�E)K���K�����

����� ��)��&�!�=$�������������C'\��6?&����"��=) ��&���� �O���&��>�$�/����X'=U(�"����J����&

�����������������&��>"��(�G�K ��J�"���� �!"�L'����)/���Z'E���v5.��&����3�� �2���%��� ���Gz��

�����������T�C&�1C�L�%��&� ��� �$�&���d��] �1�L�%��&����$���:�2��!"�L'����&����':���%�J����

����1 ��O�/^�� ��&"��"���X�"�-K= �2��J�������)C��&��C �������������C&�1�C�(�W��C �z�L��'$�C�

�J�T�&�10��Pristane�"����'��"�&��':��&����"��(�� �T�&�1/E\��&��������

��

�� -�����J*�Invitro�� �

����-��������%�������x' invitro������������������"��C)�"��C ����C\���{�C��1CD�����G(� 2����)�3&���

������1���!����g���� "�5' �-T�� ��������"�C5' � ��?�� ���Z'E��invitro���������C���'C����

������������������J��)'EC��-��C���"��&����Z'E���O���J��)%�� �!"��(�&�������&��%�-��L' �-����':�

����������������������C))%��C ���C���1=C%�!2����O������'�E$�"��&����3������%� ���PLD �Q��Z'E��

������������������?�'$��"����))%�� ����������!2����T�&��'�E$�"��&� �3������%� ���PLD ��"�Z'E��

��1P�UmAb�&�����"���� �T������������O���C�����EC&�N��� ��"�-������� ��&�A����2���C'/%gr�*8�B�

�������������� ����E�%�J�G�'�U� �]&�J�Q�F�a� �Z%��'�E$�"��&�������1=%�!"��� ���Z'E��

�2�>��&�������J� ����'%����&��hollow – fiber�����C&��C����� ��C&����$���� �!"�L'����

������_�����:���Z%�G�6� Agr*88�*8�B�����Z'E���J�� �������������C��1=%� ��&� ���PLD �

��������������QC�F�O�C)h/������CF����� ���Z'E���a��\�2��T�&��'�E$�"��&Spinner���� �C]&���

�����"���� �!"�L'���G�'�U��������T�C&�G�6� ��&�-������Agr�*88������T�C&��C&��B����� �C��Z'EC����"

��������������������RC�/0� �C3K$����"�Gz�C/��G��EC$������1=C%�aC� �J�"�C��� �S�?$����6&����E&

�k� ����') �F��!�)��������� ����'%���J�Gz��F��� �3K$���Z'E���airlift����1=%�Z'E�����

����������

�2�� ��0� ���!"��(�FAg���Z%�S���G�6� ��&�_�D ��&�������!"��G"�%��'��"(������&�

����������(�� �1��&�S���G��&�_�D ���������������������C��!"�� ����C/%�!�C$��"2�&���C{(�YT�/5 ��%

Page 41:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�!

��"��"��������+����&�����������F�2�invitro��������!�$2�-�$���:�2��G"�K$�!"�L'���J�A������Ck��C>����C%

������������������$�C���C ��C'F�>�-�$���:�2��"���� �!"�L'���1=%�_�D ��"��%� "�� �2���^5&B����

��������"�C���S�C0���S�C��G��&�_�D ������Z%�S������� ��&�_�D ��"�������G�K ��O�)h/�

���������������&�� �G�&6� ��&�_��� � ��� "�&��'$(�����3$z��'$(�����%����k����������C�K��"�� ��)�6��

�����������������)�6����;��6F������������g���%�J�Q�z���)K��-����x�����)%������;��%��'=�&��t�m

�����������������)�6��J��)%�Z%����a�������-�6�3?�invitro������������J��C)%��C ���C���;��C%��'=C�&�

�"���a����� ��?�������� ��&������+����&����&�+���O���O���&�)&����

����+���-K= �!2�� �invitro������1�����2����\��&��A�������������O���C�� �C��Z'C�(��C%�"�C������

������ �C��Z'EC���S�/�� ��&�Y� �6��invitro�������!"�"�Z�C/5���C��!"�C&�S�C$�G(�2��T�C&��"��C%�������

���"����/$�B������������+���2���'=�&�J�-�6�3?��J�G�)%��%�J�"�� � ����)�6�invivo�����J��C��&�� �

���������+����&�1�E$�+���O����"�� ��������-����minvivo�������Y�������J��)'E�����Z3 �<�

7�����������Z'EC����"��C)$�����/$����G��%invitro��������������J��C)�"��C �"��"�C� �C�&��C&�"�C�� �

��������������Z'E��������Z'E����K�$�K � �3m�$���v�5.�����J��&��K� ��>"��(� T�&�a�E$�'�

������������������ T�C&���"�� �������J��$��"�!2�������������-��P$�������&��&�2��$��%�G���'=�mAb�

���M�I&�����������������J�1C����C���'EC�(�1��(��' ��&��E��� ��"� "�&��'$(�#�$��%�$� �O�����1P�U

����������������G�C 2�;��6CF���C) 2��$�G�$(����/��5������2� (�R&������"��F���K�)K�����$����;��6F�

��������������������;��6CF�����G�C)%��%��C&�j�C&� � �C���C)�6���%����&�� �Z'E���-�:�����+2� (�����

�����"�� ���������(�1��&� ��&��%��?$(�2������ T�C&���"�� �G"mAb����������V�C��2��G�C)�/M����

�������������������2���C���C������C:��M��C&�J�1���S2T�_�D �"��2� ���Z?:�!"��(�F�G"�&� "�m'\�

��������������!�C$�/�\�&�O�E%����$����!�����%���#�$��%�) � "�&��'$(������DNA����2��!�C$�/�\�&�

������������������C&��X'=U(��$��"�S����&�2��$��%������� ���!"��"�� ��"���!"� �#���IgG����J� ��C>�

��)%�� �!��h�������������X/�����

��������Z'E���Q���%�1���aK= ��&��%� ��&invitro������������!�$2�C�� �C0"��N�C����C&����V�C�

���)%�d�I'$�����������CK)�����""�C>���C��D ��C$�Xk�+���OC��� �C���)�6���K)����&�������&

������ mAb�����������������C�����&�=C �_���C����1=%�_�D �Q���"�-��L' � � ��������2���%�

�"���� ���������>�6&��&� ��'%�F��&��$����� �*88���������������C��1C���ZC3 �O���&�C)&�J��C��&�-��CL' �

Page 42:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�������������������������C�� �C��!"��2��!"�L'C����C&�-��CL' � �C��Z'EC���������1��&�\�O�&� ���E���

������O'F�>��P$��"���-��L' ������C������)�6������D ���P) ��&�Z'E������ 2����)�3&��)�6�

�����"���S�?$��S�>����������� ���Z?:��&� ���Z'E��������Z��S��Kh������$�'�"�"�"�5' � ��?�

�����)'E�$��)�6��Z%������������� ��� z���)K���K�g�?$(�2��A��������QC�$z��$��C����4�%����$�B��"

�������������� �C��Z'EC������)'EC��1F�=C������5C����#�:invitro�����������C (��%����C�� "�mC'\��������

�-��������'=�&�Q�"6$�!�)�(��"�J��$���� mAb�+��&�Q��G��&� ��?��invitro �

����������S�?$����

��' ��"��'��%�a�T"�O��'/3 �2���K�invitro ������� ���Q�)K���&�Z%��X'E&���J

����������������1C&�M��#�C')%���1=%�_�D �J�S2����J�1=%�t��i�G����6����'���a� �1F�&�1=%

�����1���Z'E����"�� "������������������C]�D ��]���C�������#�')%�_���:���������T�&��������"

�����a/5����'�"�R�\"�1��0���������������������>"�C�(��C&�j�C&� �G�C�2�����C.�G�$�C���a\��C:��C&�J��

������1���Z3 ����E&�Z'E����&��K� �������������� "�mC'\��G�C�2����C.�2�� ��>�C����&�Q/%� ��&

������������������:� ��&�!���#�')%����E&���%� �3������G��>�-�3E��J� ��?���������"������a&�\

�������������������� T�&�1&�{��)�6���&����O����/���%���(�� ��"�����mAb�"����Z'E����Invitro�

��$���� ��F�.�����

��

/�/�[����X-��"�� �

����1�C�� ��C&�!�CD' �-T�����"��$�$�\�-� �6��invivo ���invitro����C'$(�#�C$��%�) �

���������"� ���P: �a&�\�-����x��J� "�&�������(��P$����?���A���������1�C���"������a&�\�-�K$

���� ���!"��(�F�;�� 2(mAb������$�E$��t��m � ��&��B�1����'���$������ ��&�S2T� ���-��L��

���������������������!"�L'C���1�C�(��C����� ��C&��C%��g�3C�� ��&�-��P$���;�� 2(� ���J�������+����"�����

�������� ��&��g�3$�!"��(�F�;�� 2(����$���� *,�������������C������"��C%��g�3C�� �2���C��') �N�����

���������)%�� ���K��J��$���� �!"�L'�����������������G��C)0�1CD���C%�HI=C � �C��a/5����'C�"��"

Point to Consider�A�������a&�\�-�K$�B�1 ���&�-��P$�� �$�&�J"���� �!"�&�S�$

���������������� � "�&��'$(�������#�')%�J�-�$���:��0�/? ��' ��#�')%�a ���-�$���:� ��&

������������������~�C���C �-�C$���:��CK�6�F����K�z�C�����F�a �%�-�)��5 ����/���K�� �;�� 2(����

Page 43:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��

���������C&��C��&�1C�\�� �Z'E���Q��O�)h/�������� C���C&�-��CP$� ������ �X��C&�U���-�C$���:��'

��������&��'��"�"�����K�z��������������������&��F"�m�����&�E'%�� �3������������%���]$�/�

FDA�"���2����&�Y���� ����&����� �$�&�O���J��$���� ��g���)������

���������������������!"�L'C����C������"��C%����C$���:��mCI= ��C&�1�C�(�+����&������� ��&����aK���������

��������0M��J��$���� �����������$�>�J�O��J��)��a� ��������$��"�2��$������Z?:� ��&�����-� �6��

Pristain����������#����1P�U�J���������� ��(�WC/��G�C 2�����C����J���C%�c��C��G� 2�J�!���

��"��"�"����1��(���������������aCD ��� ���C3X$�aC� �-�$���:��'���)���&�Y�/��'E �-� �6�������

���������$���:� ���3X$�� �/0�_����������eU�� �$�&�Jd�������J��)'E��a�"�������� ��"��%��

��)'E��j�������"����

FDA���J�*7�mAB�������1���!"�%��������K�)��%�!"�L'��� ��&����J�������������&����&��3$(�2�����

�����"���������1��(�+�������������2���C���� �C����"� �3'C����"��'=�&FDA���� ��C&�mAb�

�����+����&��%�1��invitro�������������C����� ��C&��%������ ��]$��&�"���� ��'����mAb���"�

�����+���T�C&�N��� invitro����������������������C��Z'EC�����C�2�J�1CF�>��C�������C\�!"�L'C���"��C �

��������������������C:����C���g�C3$� �C���)�6��;��%��0�&����!��� 2����)�3&�+���O����"� z���)K�

�������J�O�/���M���&�J�""�>FDA���������mAb��������+���2��!"�L'C����C&�invitro����R��=C�����

����)%�� ����������J��)���J�G�/�(�J��������"������������ ��C&�+�C �2��!"�L'C���G�'E�X$������g���J��g��

��������������G�$(��&� �X�"� ����=%�YT�/':����!���c�)/ ����"��D �1��(�������1C������

�������O�&��$�$�\� ���-��L��2���'/3 �����������+���mAb��������-��C���"����&��%�1������ �6���

����������������1��0��J�2�? �2��a�\���!"��(�F�"�?���O�:��"�J1���+������x����$������"�-��C��x�

�������������������C�"��C �����)���C&�!"�L'C�����P) ��&�!"��(�F�Q��"�?����"�YT�/5 �1����FDA�

����������������!���������-��L' � �3�����&��%������!"��(�F�J�)%�1&�{��%�"��"� ��� �$�&��&����':�

���)'E��G�EK���$����������������������x��G��&�1����������K�������"�-� �6���O���O�)h/�

���&��&�O�:��"�����2�F�a�/K��2���57������Z?:�;��6F���)���&�-�=�� 2(��A��N��� �B����"�&��C%�J��&��

���$��"������������Q�z����&�"��� ��&��2�����R��D��;I&��P$�R�M��&FDA�����O�C&��$� 2�J7�����C����

������������������C�����1�C�(�+����&���'&���%����mD � ��&�S2T�-�0M�������=%������#�M�#��

�������+��&��5&���J����� invitro����!��������������)%���gf�������������+����"��"��C%�!"�&� "���

Page 44:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

��

�����������1���!����������)'E�$�N��\�a&�\�Z���&��%��3&�= � ��� "�&��'$(�J���������G�)k�G(

�����Z$������ ��"��%Steins��&������������������C������C������C�����aC:�� ��"�-����x���k����J�!���G

����������������?) ��������)� 2��"��'3&� ���1��F� ��&�"���"�?����������������'\��!"�%�G��&���

���%mAb��������������������� �����������&�O���D �J�1����P$�"�� ��K�)��%� ��"�&��%� ��&�

�_������"�"�2Invitro��))%���>2�������

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

��

Page 45:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�#

� �

� �24� ��5/��.�/�01�/���� -����4���/� ;�\��9��2�,��� �T������

: 9��J*���

�����Y/����/� �

� �

]�594��4���R����

M����������������������C����� ��C&��'�C�(� �3C�����C&�j�C������"�-�C$���:�;���(�"�� ��"��/%�-�0

mAb���������������O����&����-�$���:�;���(��&�j�&� �-K= �W&�) �O����'=�&�1���!����=') �

���������1E�$�N�'�"��"��)� 2�O����"��/KD � ���!"�"�� ���$��!"�"�1�E$�+����J�#�� � ��&

�) �+��6>'��������������&��]&����"�!����=mAb��������C����&@A�ECVAM�B�����g�C�����6C%�

��������G�=$��M��O�6X���� �3����1D�����f�� ��&��)%�� �����C%��p�����+���4C�0�O��C'/3

���������vC���2���C��$��C%�1C���!"�L'C���"��C �G��C�:� ��&�G(�G"�&���(�"�"�1��(�B��RC��6�

primer�d��B�����2�����$���L��d�3'��primer����B��ZK����:�$� ����=F��"���B����1C��3$��"��

� ���� ����3�$���� �"�?����%��/���q��

������&�a��\�O���2��������6>���%���M��&�1���!�=$����f��-T�� ����g����-T�� ��'=�&

������������������&������!"�%�+��6>��X��K��2��4�U����!"�&�V�m�O����"��%�$��-�0M�� ��:�!��

) ��/��\����� �Q�'�����C��&�!����=McGuill ���Ruwan��#�C���"�*b�b����C&��C��

�%����� ��!���Amys�A�*b�@�B������������������C)� 2�OC����"��%�C$�� �C��!"�"���-��CP$� ��C:��%

��������C))%�� �"�)'���J��)'E������Y�C�����*8������;�C��#�C��MeGuill�����Rowan���� ���C��� �

������C'3&�������!��&�"mAb����������������G��C)0�1CD��-�C$���:��' C��O'F�C>��CP$��"����p��S�6C�

���������������G��C�:��C&�!�C��"����N�'����'� �%�Z3F� ��&��'=�&�-����D����aC%������1CD��� �C�

�������%��:������� ��&�HI= mAb�����$"�%��=') ���������a�"���6&� �� ��� ���!"�����{f�

��������L' ���T�&� �3/?:��"�1��(�W�� �1��"�&�J���L�-�R��6����Pristane�C��&���� ��C&�

�����������������C&�!"���� ����=F�;��%���"�"���l$��;��%�13�����3����"�?����/�0� �)� ���3�

7- ECVAM= European Centar for the Validation of Alsernatrve methodes�

Page 46:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�$

����\��5��] �"�� �G���:����$��>���������OC����"�-�C0M��;��6CF�� ��&��%�$�� ����%�G�)%��

1����'F�>�-�����)� 2����

�: 9��J*���4���/� ;�\��9��^�S����

��������������C���$�=C$��0�&�J�!�=$��)�3&�������/��3�� ���!"��![����&�J������� ���!"����&

���������������"�����EL��"�"�2�� ���5 �G��)0��&��$����� ��%��$���� �+� ��"�� �����Y�C��\"�-T�� ��

�������������1C���!��/��"�"��&�Y� �6���1��(��������%��$��!"�K$�HI= ��Gobhart�����2���C��$�"�"�

������������������������\�LC��aC�"�6��C?��2���C��$����C/':��"�"��C%�1CF���"����&�C�2������1�C�(������

pristane����\�L��a�"�6��?��2���'=�&�+� ��"��S�1E�$� z����6�F�����

�����\�L��a�"�6��?��6�$�G�E$���"����������1E�$���(��2���}�$"�"��������&��/$�1:��������"��

�������������������C&��CK)����X �1���}�$"�"�-��$��&�ZK����:�$� ���� ���G�E$���)���&�-��&�?���"

����������&�!"�%���/:� ��!"�� �3'F�&�������������WC/?���Ck��C>��1EC�$�}�$"�"�1��(�W�� �W/?���

�����������������"�"����':���C$�"�CF��L)C�� ��C&�1C/:�6 �1�0��&��$����� �W�� �"��2���������C)%�"�C?���

�����������������C':����C0�&�W�� �G��=%�J����&�!�))%�1:���$���}�$"�"�1��(�W�� �W/?���K�'\�

������1E�$�}�$"�"���"���� �������������2�� ��>���� ��&�W�� �����"����G��=%�+� ��"�O���&�)&

���������������&�� ���L �G(�2�����$��':���$�;��%���G(�W/?��������������C�� �C��!"����&��k�>

����)���&�Zg0�!����������������������J�������L)��J�?�>�a ����%��)%�� �"�?���+� ��"����"�"�

��/�>��������������2���P)F�C����C/�&�+� �����"�����$�=$�O���J�1���1���5F���-���:�;��%�J�

�������������������Z��3 ������� ���!"���&�YT�/5 ���"���!���= �1���OK/ �G(�1�0�����ZC%����C� ��

�������mAb�����"���� �!���= ��A�������%�1���Z3 ��'K$�O����&������������C&��X'E&���yE �O���

����"��"�������!"����B�����������"��L�'I �Q�z�������-����x���)$����� ������� ���!"��O�)h/�

����&�!��/���':���$���"�"��&�1���OK/ ��%��))%�"�?���+� ����

��

�*�4�4�\<�9�2�38*���,�BP���T��?�_�/����4��5;��/� �

������������������%��)%�O��5������I&��E%��>��J�1����.��mAb�&����������"�"��C0�&�1��(�+����

����������������%�1E�$�HI= �����1��� ���.�-�0M����&�"����J�"���� �+� ��"��':���$

�������)��&����&��k�-�0M��O�������������������"��':���C$��C����"�"� ��C&��C/�0�G�)�/M��a&�\�N���

Page 47:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�%

��������&��/$�"��� �G�>�$����������������C/] � ��>�!2��$��"�� ��"��� ����$�����&�������&��k�>y�O

����"�"��]��� �-�C0M���^5&�J�)%�� �a/D��G���:�Q���%�l$���������Ck��CK)����C&��C)�

�������':���$���"�"��0�&��� ��0�������"��"�"����J�"���� ���������C))%�� ������������ ���/)���

������������������������'C��"����G��C�:��"�"�"�2��C&���CP'$���C��&��C ��)%�"�"�"�?���G�E$���"�������>���%

Z���&��������1���"��� ��)� 2�O����"��/%�-�0M������������O�C�5�� ��C&����C�\�"��C � �3������

��������������������OC���"���$�'C�����CK����"���C ��'=C�&��"�"���$�"����G���:��"��':���$������"�"�G�6�

�������������������C��G2��;��C%��%�1���G��=%�"�"�#�:��"��$���:�"���� ���F��%�1��"��"���

�A���%�a� ;�����2���'=�&�G2���8��*<������"��B�����������"�C��vC\�' ��eCU���d(�t�m �������OC��

��$�������������������&��) "��������"�"�;��6F�� ��&��m���G��)0��&��$����� ���� ��>�!2�����C �

��������������������C%�1C���"�C�� �G�>�C$����"�G�&�G2��;��%���;��6F��V�m��"��/%�-�0M�

�������"���� �!��?)��v�'I �_�����1D���������������&�C�2��� ��&�G2��G"�"�1�"�2��J�#�:�����"

���������2�1E�$���L ��' 0�1��(�W�� � ���"� ���+� ������������C� �2���P)F�C���C3$(��/���%���

�������$��"�G2��;��6F��J��':���$���������������C)%�HI=C ��C��1���S2T� �'��\"� ��'F�� ����$�=$

���������������"���� �a/D' �����':���$������"�"�2�� �����"��k�G���:��%�������� �3C����OC���2���K�

��������������5F�6 �\���$���2�G�>�$������&�6 �\���$���2�G���:�!���= ��$����� �4��) ���'�����!"�&

���������������������������C\�#�C/5 ���C$��C�2�G��C�:��C%��C'\��2���'$�C�(�_���C��O����"����1���5F�;��%��������

�1���H�I=��a&�\�J"��>�� ����

���������������������d��]C.��H�C��aC� ��C��&� ��C'F��H�C��QC��2��!"�L'C����$����� ��X�"�+��

Barclqy����������������������CP$��C&��C%� ��C'F��QCk�%�Y�'�EC$�-��C��x�� ��>�!2��$��!2����� ��&��%������

���������������������C�"��C ����1C����'EC&���G��C�:��"�!���"�?���d��].�����"��&���(��������Cg�����"

�������������������2���C$�����C � "�C0� �C���'F��2��t��D$���%��$������' �O���D �J�d��].��H��

������"���2�U(�Qk�%�Y�'�E$� �3������������������Y�/��'EC ���C'F���C��x��G�6C� ��C%��$"�%���F��3$(

��������"�?����':���$����"�"����"��&��'E&���1���!�����G�6C� ��C%��$������?�'$�O����&��3$(

����������+� ��"��$��>��?'E�� ����'F�Rat���������������EC&�J��C$�X�&��CL\�QC���"�!��� ���3X$�

�1����)�&�;���a&�\���#��"��$��>��?'E��J���'F��;��%����;��6F�7�<�* ��10�C�

Page 48:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�&

����=�� 2(�G� �"�!��"�#�M��"�A�1E��B�"���a�����d��].��H����&��$����� ��2���C%

�"���� �O��5��G���:� "�0��$��>��?'E�� ����'F��2��t��D$��R��M����

��������aC�"�RC��6���C%��C)'F���"�O�C��D �J�-�C$���:� ���!���S�?$�� �3$� 2(�2���K���"

�����������������2���C5&�d��]C.��H����"� �������a&�\� �� (�;��6F���0�&��$�5 �OU����\�L�,�

�"���� �2������

������H����)� 2��"� �'=�&� ����%�������������ZCg0��C&�H�C��OC�����1���!�=$�S�?$��d��].�

������������������O���&�C)&�!"�C�$��'EC&����)���C&��C��Q�z����6�F�-����x��a� ��':���$���"�"�2�� �X�"

����������������� ��C&�������$����� �H���O����&�!��� ��(�W/��-�0M����(��%��=$�O������fE

��������������"��(�Z���F�����������_��' �J�Z� �-�����&�"�"� �)&����M�����"�����J��C��� ���#��

���������������&��2��� ��&��X�"� �3�����5��] ��&�c����G���� �����"��)$� �O���D �2���%�$��"��5�

���������$"�%����X=�� 2(�-�$���:��"�!���"�?����':���$�����#����"*b�<��1C)L��>���G���� �

����������������������&�C�2��� ��C&� ��C'F�����CK�)��%�ZCg0�2��G��C���C ��$�Xk��K)����&��)� � ������

���':���$������)'����=') �J�"�%�!"�L'���G���:������������C)k��"��%����� ��"�!�����] �-��P$

�)&���;��%�-����= �2��c�$�l)���&��)$����� ���!����'F�>���%��&�"�� ����

�����F��&�-����= �A�G���:��&�G"2�1�"�G��&�B��

����'F����

�����i���

G���:��&�G"2�1�"��) 2��$�-����= ��

����� "�J�G�&�G2�������

�0���)���&�Zg��

��G"�%�Q��D��2�����$�6� (�Q��D�� ����'F����

��������������������� �C��!z��C���C���3C����2��QC����� ��&�����$�>����2��' �� ����>�&�2��!"�L'���G����

�����1F�>���%��&��=�� 2(����������������!�C��"�?��� ����>�&���2��' �� ����>�&�O���2�������� ���!"�"

���������������G"��(�Z���F�#�:��"�G���D ������_������������':���$������"�"�"�?��� ��&����ZKD

���������)��&�� ��3��>�������X=�� 2(�G�>�$����"�������2�� ���P: �a&�\����� �����>�&�O��

����������������������C�L �-�C$���:�2��1C�\�� �a)C������O�C��D � ��C&��C%��$��!"��(�Z���F����-�0M�������

Page 49:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

�(

������&�� ������ ��&�G��)/=$�"����-�����&�������"�"�2�� "�C�2�����C��#�K�������':���C$��C��

���������������� ��&��\�L��-����6��1D��G���:��"�!���"�?��mAb������OK/ ��%��$��!"�K$������

������������������������C%��C/g0��C���&� ��C&�N�EC:� �C��+����CK)����C��!"��$��4\�� �1\"��&�1��������

���������"���C$�"����2�)��J��)��&��':���$������"�"�"�����X$��&��$����� �������C?�'$��C'�/%�OC��

�������%��)%�� � ��>�������������1C��"�&�WC\� ��"�V�mCI&�+� �1��(�+����"��':���$�#�/':

�������&����"��"�"����1��(�W�� �������+���2��!"�L'���mAb�������������C&����+�C �1�C�(����C����C&�

"�%�"��D �#�/5 �+���Q��G��)0����

��

�`��H��Dpriming�E� �

������������\�L��a�"�R��6���������&�4�U���\�L��!�L:��&�R��6�Pristane8������aC �%���S�C?$��

����0�"���� �����%�1���O����&�!�Pristane��>� �C��;)C%���`������������&������2���C ���$�

����������)%�� �a/0��\�L��W�� �G��=%��"�a��������K� (AAmyx�B����ZC?:�"�%�"�3)=��

���"��2� ��pristane�����������������������Ci�J�G2��;��C%��C&�J�!�C��RC��6��+�C ���L��a�"��&��%�

����������� ��)���&�Zg0�O������&�� �!��/��1���5F�;��%���!��/������������C� �O'C��%��C&��C$����

Pristane������������"�C��!"�"�;��C%�d�C�] ��C{���&�G��������������"��C ��"��$��CL)%�QC���"

���������J�G���:��':���$���"�"�O�KE����1�)�Amyx���������#�C/5 ����C� ��%�"�%�+��6>�<�8�

����2�������Pristane����������������������C� ��C&���!"�%������"�"�Zg0��8�������ZCg0��C���C��

"���� ��'/%����

��"�-����D��������d��] ����� �2��!"�L'����)� 2�Pristane��������1�C�(�#�mD �O��'=�&��%�

�1D�� �3�� ��"�!���!������1��(�W/���"���� �� (��P: �a&�\�-��L��J��)%������

����������\�LC��aC�"�RC��6���&�����&*�8����������C���C����8����������C���C��<�8������2���C���C��

Pristane�1CCC���!"��CCC$�G�=CCC$���Hoogeneraod���Wrarght�CCC���"��#*b�,���������

����������� �+� ��&��>���%��)'F���"<�8�����2��������Pristane����"�C��6��C?�������W��C �ZC?:

����aC��:�1��(@��b����������"�C&��C�����C���C�������������C%����C��+�C ��"*�8������2���C���C��

����Pristane���%�����&����5�� �J�!���c�����O�����#� �F��&�6019 HC����������������C�)0����C ������C �nC���CX��OU���2���%����(�� �1��&����

Page 50:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#)

Pristane�������W�� �Z?:��))%�� �1F���"����,<�b�����"�C&��C�����C���C�������"�-��C��x�

��G�6� Pristane�����1���!�������&���Gillette��������2���C%�"�C%�+��6>�@�����!"�L'C���aC �0�

���>2�U(�G��)0��&�!��APrimer�B���aC �%�$���C$��F�1$���"���3)��Jb�AIFA�B���aC&�\�l��C'$

������2���'3&�������E��� Pristane����1����'��"��A�����������C%�1C���!� (�-T�� �2����&��"IFA�

�����������CP'$��G�C 2��"�������;��%��0�&������������QC��D���C�:� �O�C&� ���C'L���APriming�B

2����������������C&�!�C��QC��D�� �3�� �� ��J�1���!�=$��&��IFA���������2�� �'=C�&�-�C5F"��C&��&��"�

��&�!���Q��D�� �3�� ��&�1�E$�1��(�W�� �G��=%Pristane��)$� �� �!�$2�����

������������K)���"�� ��"��/%��P$�t'����(�� ��P$��&Pristane������G"�%��%��&���d�3'����0�&�

����������1���"��� �"���� ���L��a�"��&�v)��G������������"��C ��"� "�C�2� ���P$�t'���� �

����������"��"�"����"���� �G���:��"�"�"��0�&��K)����Pristane����������C��S��)C��"�C?����0�&�

�������2���5&�N���9��������G��C�:��' C���&��%�"���� ��3�� ��\�L��a�"�R��6��2���'L��

�1����{u ����

��G�EK�AJackson�B����������C$����� ���L��d�3'����%��$"�%�G�=$��M��G���K/�������C0�&��

��������C����C ��P$��&���]) ��%��)'F���"�Y��5&��3$(�"���G�E$����G���:��"��/K�� ��"�"

������������\�L��a�"�R��6��2���5&�2��� ���$��>��\�L��d�3'���"�?����%Pristane������"�"��0�&�

��G"�%�������"�G���K/����G�EK��J�#�:�O����&�"���G���:��"��':���$����"��)���C&��'F�

�������k"�!��&�O��������$�C��1ECK������������2��S��CKh����"��)���C&��C5��M��U�1C 0��C$�Xh��

�� 2(�"�� �-�$���:�����#C��"�;������������RC��6��2���C5&��C'L��<�8�������2���C���C��Pristane�

��=$�!���= ��������������%��5��] �Q��2��!����=') ��5��] �Q���"Gebhart������RC��6��2���C5&�

��\�L��a�"��8�2��������Pristane������8 K/$�#��D �2���������+�C ��&���C$��

�CBBAL�&����*�������������������"� ���CP: �aC&�\�-��CL�� ���Ci��P$�2��1E$��'$�J�O���'L��

�����%������+� Pristane������������J��$"�&��'F�>��K/$�#��D ��%����3$(��&��$"�&�!"�%�1F���"�

����)%�!���= �����������&��':���$����Pristane��������K/$�#��D ���������$�Xh�����!�=$�"�?

���������������������G2�C���&��3$(�G���"�����&�j�&� ��h$(�2����U��&�J��3$(�2��Q�����R��6��2���mI= ��{�

��!�/$�<���������1���$�"����J�1����\�L��!�L:��&�������d��]C.��H���2��a��:� ���!"�"�2�

9- IFA: Incomplete Frend’s Adjuvant

Page 51:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#!

������������������������Ci�ZC��2����)k������!����=') �S��(���M��&��':���$���"�"��%�"�%���F�G�����

�"����/$�A������$�5 �OU��� ��&,������������������"�!���=C �aC&�\��C��x��QC���C���=C%�� �#�M�2���

�����"���"�?���d��].��H�����B������R��6��2���5&��'L��Q�Pristane������+�C ��K/$�S������

��c�$CBBAL��������!���= �1 ����Z��������������v�'I � ��"�[$��&� �3�� ��"�"����O����&

�������!���= �����L' � ���������� ���c�$� �3�CBBAL���������'�C��) �!"�L'C��� ��&���S���

����$"�&��������������������+�C �"�[C$����&��3�� ��"�!���"�?���-T'������&��"�!�)�(�-�5��] ��"

�"����'F�>��P$��"�6�$���R��6���%��$��"�!�����-����= Pristane ��"��':���$����"�"�

��)%��/$�"�?���G���:����

��

�: 9���

���2���5&��Q��D��APrimingBJ�����������G��C�:��\�LC��!�CL:��&�� ��������#����G��E$������

����������1��(�W�� �W/?��J�� ���a�K=���&��?) ��%�"���� �R��6���5��] �"�� ���:�$�S

����"���� ��/K��� ����'%�F����������������C�����2���C�:� �OC����"�G��C�:��' ���"��{u �mAb�

����2��1���-���0��������R��6�� � ��������#����"��5����������!�C��"�C?����� ���c�$�J�!��A����C ��

��/��3�������1L��!"������J�G�3)��B�1��(�"��-���{f����A����3)���&�B����&�� ����

���"��&�ABrodeur�B�����������������"��C5���X$�C�&��C��+�C �`�C�&�G� 2��%��$"�%�+��6>�G���K/���

������������C��&��C �+� ���L���"�!���R��6�� �3�����������C%��g�C��+�C 7105.2 �����#��C��

�����$"�&�!"�%�1F���"������_��' ���M��&@�*��������$�$� �!�$2��2����������!"�"�G�=$�R��D��O����"

������������������`�C�&�-� �;��%��0�&�����"���� ���������"�2�1��(�J��'=�&�#�����������&��%���

����""�>�� �+� ����R��6���&������������"���$�'��� ���+��610��))%�� �#���������C%

��������"���� �`��&�G� 2�G����$T�M��0�&���������������G�ECK�����C��&��C'F�>�-��C���5��] ��"

�-�$���:��'=�&�G���K/��8�*@��$�$� �!�$2�2�������

��������������Z�C�+�C�1�C�(��C�"�>�!���= �T�&��"��%���]$�/��A���v�5C.�B������C0�&�G�EC$���"

����������������G���C/�&��"��C���"��"��C/%�"�"�Y� �/0�� ��"���� �l$�����':���$�N�E:������1�C�(��C&�

��������������������J�O'CF��!����"�aK=C ���Ck"�"�CF��%�!���ZK����:�$��'L��������$���0�&��/��3�

�����������""�>�� �4�\�+2������/.���`���J����=:�� �3�':���$��mauch������C%�"�%�+��6>�

Page 52:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#

������������������1C��:��"��L$��X)��J��L$��X)���&�!��/���$����� �1��(�2�����$�Z>��F��"�O'F��T�&

������&�W�����L)�����!��&�������WC/?���C&�G���:��"��%������ ��P$��&���]) �O���&�)&

�������������&��'��"�"�����':���$���"�"���P'$��G����F�1��(��� ���!z��������2��QC�z����������)���&�

��������&�4�] �O��Jackson��)%�� ����f�������.�F�O���z��$��"�G���K/��������

Kuijpers�������������J�d(�G"�"�1C�"�2��J��X'E�a ����)���&�Zg0�������������EC:��C&����/C�(

�"�%�+��6>������������������CM��"�G�C �"�S�0�-�����"�-�$���:��%�"�%�+��6>�O�)h/����9���

�������������������������C$�� ��C ���C ����C&�j�C&� �-T'C����G��C�����������v5C.��� �CUT�2���'L���

�����������������C0�&��%�!���!��=%��/%�-� ��M��"����=:��!����"��%�"�%�G�=$��M��O�)h/�

����"���� �"�"���������� ����'F��������������������)�C���ECL\��"�W��C �"�C���a �������������&�Q�z�

������������������6C&�#�CDM�J������>����� ��? �J����=:�� �3$�>����&��>�)�Ek�J��/K��!�L:

���������&�� �!�����n$����%������%���!�����������C)%�![C����C&��/KC�� �^F��� ���O/.��"

�����������)%�� ��������'$�6 ��"��L)�� ���!�>���������1��"�������'K$�O����&����&�������3C�� �OC����C%

����������������G(���!"�C%���/:�!"��� ���!����"����\�L���]���&��%��)'��"��/��3�� � �������

�"�%�� ��M�:��������

�����������������������CX�"�"���C ����C$"�"����C\��$�2���R�\"�����&�"�� ����-�$���:�G���K/����G�EK�

�����������������;�C��;��6CF��J�1=���>��/�J�G�&��]�� ��� �G����&2�a ����%��$"�%�+��6>

!�$�����������������"����UT� ���i�J��/K�� ���!"���J�1���5F�;��%�J��/K��S��������G��C�����

��������&�� �A��#���*���B������������������1�C�(�W��C �WC/?��G�6C� ��C&��'EC&�ZCg0�OC�����3i�G� 2������

�����������������1C ���;��6F����G�&�G2��;��6F�����!���= �a&�\��/K��S�����������&��%����&��

�������HI= �G� 2�1�e>��&� "�0���U�Zg0�O������"���� ��������� "�0���U�Zg0�O���2��Q�h��

��������=$�!���= �#�')%� ���+� ��"��Necropsy������������-��C���C&�����)���C&�ZCg0�O�C)k�

�������������!�C)%�����/K���� ��J��/K���>�)�Ek�J��\�L��!2�:��"� 6��$��J���6&� �3/2

������������������a��C��#� �$�1F�&�1���5F��&��$����� ��%���"�� �G�=$�J�1I�� �� ��� ���!"�����

�)%���������-�C��2��&��"�� ��������������!"��O�&� ����= �a&�\� �� (� �3���L���k�>

��������������1C����&�=C ��C�%�1F�=�������"��"�"����-T'��1F�=���10�������� �C��10�C�

Page 53:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#�

���������������������C��������C� �Y�C'��3$���`�C�&��"� ���CP: �a&�\� �� (���{f��1��(�����-��L' Ab����

�"��e>�� ����

��

�a����:84� �*�2�*��a���: 9���

��������������������2��1�C�(�W��C � ��(�WC/����{f����1��"�&�d��)��J�1��"�&�G� 2��%������ ��P$��&

�����������������C��&�G��C�:��' C�� ��C&�ZC3 �-�CK$�2���X/��G���:��Brodeur����;$���CK/������������

�A*b�,�B������������;��C%� ��C&�G(�WC/?��2���C5&�1��(�W�� �W����G��=%��%��$"�%�+��6>

������1��� ���.��� ����� �G�6� ��)���� �/UKCCCR�W�� �Z?:��%��)%�� �������

������'=�&�����$�1��(2��8������������������C��&�ZKC��2����LC��W��C �1��"�&�2��a�\�G�&�G2����!"�"

�G���K/����G�EK���)���&� ��Aa*bbb �B$X������C�:� ��"�G��C�:�1 C���C&�!2������

������)%�� �1��(�1��"�&����(�-����D���"���3$<������&�� ���������$�>��8�������C��R��6��+� ���

���������������1F�>�S�?$��ZK��2���\�L��W�� �1��"�&�J����!���= �a&�\��/K�� ���S�����K�$� 2

�A���������"��:��3�� �� �/�� ��&�G2��;��6F�9�*@�����"�&�B����������C&��C����%��:� ��&�+� ���

�������1F�>����\�W�� �G��=%�-���/0�1D����������$���:����#�:�O����&���Zg0��&�������-T'�

���������'=%��/g�"�������#��"78��������������C&�-T'C��J�G��=%���:� �2���5&�#������\"���)

������������!���= �!��>����-�$���:��^5&��"���2������������>�C�/�J�G�C&��]�� ��� �G����&2

�������������������3C��>��"��'=�&��%��>�����n$��J��X)���L$�J�W�����L)��J�1���5F�;��%�J�1=�

�����"�&�W����G��"���A��#���*���B����������'\� �����$�=$�O�����3i���%���M��&��������C��ZC%�2����!"�&

�����)��&�� �����������"��k�>*b�����2��G��C�:�9����!��C>�<�������������O�C �"��C��O�C����2���C5&�J����C��

�������������"�C&����C�����C/g�"�ZCg0�J�W�� �G��=%��<����������C$"� ��C��*9���������$�C���'=C%�"�C0���������������

�AeuthanizedA�B���#���*���B�����������L��W�� �G��=%�O������"��3�� �-�?$�G�6� *88�

b8�����&���"�&����S�"�G��=%� �*88���<������S���G��=%��*88�7<�����#'���$�Xh���J

�������������������X'�C��-��C���C&�W��C �1��"�&�2���5&�#�')%�-�$���:��"� ���P: �a&�\��)���&������

�ASham Paracentesis�B��=$�!���= ����

����������������1C��"�&�2���C5&�!�C��!���= ��5��M��U��)���&�Zg0��%��$"�6F��G���K/����G�EK�

��2��W�� �1���G��+"�>�}����&��E��� �a&�\���L����

Page 54:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#�

���^5&IACUCs������������������1CD���/KC��W��C �G��=C%��C%��C$"�%��=C') �����g���1�����

�������R��6���&���"���S�?$�����3�&��*�������������G��=C%�aC/0�2���C5&�S�>��K/$�#��D �������

�����������"���!��/��Z?:�;��%�2�����$�}���;��%� ��&�W�� ������C'����������C%�1EC�$�HI=C

���%�����':���$����3�&��;�������"�� �A���������"���� ��':���$��0�&����3�&�"��#�� � ��&�B

����������������������J�ZC?:�;��C%�2���C��$� �3=C)%���W��C �S��(�G��=C%��&��%�"��"�"����G�K ��O����

�����)%������;��%�A����������C����C/�&�1�C�(�W�� �G��=%�6�$��3$�E$���"<������-�C ��"��C$2�9�

�"���� �������10��B����

��W�� �G��=%�a/0����K��2��;����>�����!���=C ��)���C&�ZCg0�J����&�2�? ���2���C5&�!�C�

���"�W�� ��)�6X�����%���"�� �G�=$�G��=%�"���� �4�������':���$�2������

����� ��%� �3���>�1E=$��"ILAR�����������%������] �4�] �O���G� ����� �)k� ����D&�

��"��5���%�"���� �!"�"�������G���:�!�F�� ��&���(� �'/%�����"�C��S�C?$��G��=C%�a/0�

�"��%������� ��&� �'=�&� �3�� �"��5��-����O����Ab����J�"�&������S2T��P$�"�� �

��������������!"�L'C���"��C � �3C�� �"��5�����'F�>�-�����'=�&�G�6� ��&�G��=%�a/0@8��<8��

��)%������;��%����

����������������G���:�"�"����':���$�G�6� ����)���&�Zg0��%���"�� �G�=$�G���K/����G�EK������

������"� �������M��&���)%�� ������;��6F��W�� �G��=%�W\� ������"��C5��G��C���C �O���&�)&

����"�&�"��2��':���$��>��� ��"�"�;��%�����5��] �"�� �G���:,�9����2���'&�C{���CM��C&�2���

�����������-����O����"�J�1F���;��6F��S������#���G��=%�� ��&�J�$��>����\����3�&���2�G��=%

��������a\��:��&�G���:��&�!"�����':���$�G�6� ������C'F�>���K&����&� �'=�&�-�$���:�� �������

���$�����������������1�C�(�W�� �G��=%�-�5F"�"��5�����&�O���&�)&�1���G���:��':���$�Z3 ����5

������������������C��x��!"�L'C���"��C � � ��C������-����m����' ���&�R&�] ���"���!"�"�;��%

���"���!"�"���������������������$�C���C �4�C����� �C'/%��':���C$�� �������� �3������^5&��!2�C��

�������)�"�� ���� �'=�&�W�� �G��=%�-�5F"������������1C�\�� ��C&��'E&�J����G��=%�"��5��O��5�

�"��"�G���:�R�\"���"��>�S�?$�����&����3$�W�� �G��=%����c�����':���$���Zg0��>����

���2�� "��5�IACUCs��������Z?:�1�"��D ���8�����R��6��������Pristane����"�3)=C������

����$��!"�%A��#�����B����2���^5&����������������C$"�K$� ��C����C/)����OC���2��!��C>�OC��� �^0������C �

Page 55:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

##

�������������3�� � ����$�>��^5&��"��K)���&��)� �����g�����)k�������6>��8������� ��C&��C���C��

���!"��$��F�%�1��(�W�� ������<�8����&�S2T�1���OK/ �����������

����O�6X��C��G"�C&�4C��) ��&��)� ��)k���T�u�IFA �� ��C&�Pristane����"��"�"�C���

'�/%��%��)%�� �"�3)=����IACUCs��&�-�$���:�;)%���IFA ���!"�L'C���2��aC�\����

�������/$�HI= �O���������'=�&IACUCs��������������2���C5&����G��C�:��C$�2���1C�\�� ���#�C')%�

��������))%�� �������� �������� �3������������������������"���$�'C���OC����C%�1C����C�'5 ��C'�/%

��%�j���O����&�1�������) IACUCs 6� ����O���D ��)%�S�������C&��C����C�����%

��)��&��'��"��/K��S������1��(�W�� �a�K=��2���5&�G���:����

�'=�&���� ����'�/%�IACUC��������C&����W��C �G��=%�-�5F"�"��5���������C��7���;��C%���C&����

��)�"�� �A�������������&�� ����3$���:� �W�� �G��=%�O��(�B���������W��C �G��=C%�aC/0�"��C5�

������:�1 �� ��&��$��D&�a:�� �2���K������������![C����C����1E��&�� �O���D ������&�� �G���

��������)��&��'��"�G���:�_������&� ������������G����&2���1=���>��/��)$� ��':���$�Zg0��>�

���"����'=%�10����&��'E��&�G���:�J���!���= �G�&� ��� ������C%�1C�����'5 ��'�/%

�'/3 O��L�i����IACUC����������':���C$���"�"�;��C%��������������C$�J��C��&��C �G��C�:��C&�!"����

!"�L'���"�� �-�$���:�"��5��;��%���

���������������G��=C%�a/0�#��"����3�&�2��!"�L'����&��)� ��/��������� ��&��/%� ���!"�"

��������������������C��&��C �"�C�� �W��C �G��=C%�2���C5&��K/$�S���O�6X����6��?�����W�� ���C'�/%��

IACUC����������������C����� ��&��3$(�-��&�?���)� 2��"�-�0M�� ��(�W/���&���"������mAb����

���������������������������3=C��/�� ��6C>�&����C��&�����C3$(���1C���!"�C%��C)� 2�OC����"�-�C$���:�1

��"�� ����\��/��N�'�"��"�-T�� ����g�/�"�>���

�!�))%���ex��#���� ��(�W/�AFeider Cell�B�������1=C%� ��C&�� �C�� �C��aC/K ��

����_������"�� �������Invivo��������>�O�)��S���2��!"�L'���&�G���:�;���(�O� f���)�6���

/����1���!������������-�C$���:��' C���C&�-�3����;��6F���0�&��)�)��S���O��� ��(�W/�

��������1���!���G(���3�� ��&�!"�L'���"�� �������������� ��C&��C/�0�-T�C� ��"��C/%�-�D�C.���� �

k�����1���"��� ������/0�O�)���������������� ��C����������C�� �C��1=C%��C%�1���!���"�3)=��

�������������CL:�2��!�C�� ��(�WC/��!�C))%��C�ex�� �3������) 2��$���������S�C���C���3C�� ��\�LC��!�

Page 56:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#$

��������&�� �+� �1�&���� (��������������1C����'�)��$�!�))%���ex�� �3�����2��!"�L'�������

�����������#C��"�6C�$�!"�L'C���"��C �!�C))%��C�ex��#������S��� ���a/K �2��$�"�� �G�6�

�1F�>����\��D&�"�� ��'�/%��P$���2�!���a�K=��!2���Q��!�>��%����

��

�9���R�S���T�2������?� ;�:���

�����������������)���C&�_���C���C%��)%�� �"�3)=���G���K/����G�EK�������&�!� (�1��&�-�0M�

�����������������������1�C�(���"��C �"���C�����J��C ���!�$��=C����C����&��$����� �1��(��������&��M�&�

�������'/ ��/K����L��W�� �1��"�&����"���� ����&���������������"��C/%� �C��!"�"�J��C.�����CM��&

�������"�G���:�1 ��c�.� �"�� ������C������&��]&��mAb�����������1C���"�C�� �1�C�(�+����C&���

������������������"��C)� 2�OC����"�!�����k��5��] ��3)��G���K/����G�EK�������&�!����=') �����

�����������������-�C$���:� ����C&�������O����$�Xk��%�1����)���&�-�0M�� ��:��%�1���������"

���"��e>�� ���{f�����X=�� 2(�%���������E&��)� 2�O����"���]) � ���!"�"�"��/��J1���"�3= ���

������������)%�� �����&�����������$�$�\� �3����!�X=$�"��"��E%��K�'\��V�mI&�D���.*�K��E��J

����������������1EC�$�"�C�� �"�C��G���:�1i�L:��0�&��%��$�)�/M��"�� � "�&��%� �/)���������

������ �3C�����C)� 2��"��X�"�!�X=$�"��&�!�X=$�"�2���3���L�PrimingA���� 2�C��QC��D��B�J

����� �G��=%�-�5F"�"��5�����')%�J�1��(�W��#����2��!"�L'C������C��3�&�J�G��C�:�2��1�\�� ��

��1���"�3= ����E&�O�6X����W�� ������C>��G��C�:��' ��"�� ��"������"�� ��X�"��'K$

�������������������C�����O�C:��"���C>�O�)��S���2��!"�L'���J1E�$�_��� �1��(�+����&�Y�/��'E ��k

Invitro��� ��&�mAb���1�������������� �3C�����C%�"�����F�O�)k�����$Invitro������C&�!����C&�

������)'E��!��/�� �'=�&�1F�������>�O�)��S���2��!"�L'���A���� �3&��B��X$�Xk�!��&��"���

������������������� ��(�WC/���]���C��1CD��1���OK/ �S����%�a��"�O����&����S���O��� ��(�W/�

:� ��&��':���$�4�� ��%�"����1����'I�X$��&�J�"���G������

��

� �

� �

� �

Page 57:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#%

� �

��4�3�P ��*�2� _��< 5/"� �

�����&�������������������������C'�/%� �^C0��-�C�&�?��J��C'�/%��C&�!�C��Z��C���-T�C� �J�lC����-T�C� ��C�

��������������&�!2���Q��!�>��>��"�!����g���� �3�$��)I�*9����G��)I���8���C%�!�))%�1%���

�����1E=$�Q���&�!��/��������������������"��C����C������l��C'$� �EK���&��'�/%�J�!"�&�6�$��'�/%�!2���

�1���!������)� 2�O������

���'$���%�Z���'5 �� �I����������+���dmAb�������������C%~�-�"�3)=C������C���������&�!��/�����&�

��CC��&����X=CC�� 2(�-�CC$���:�2��!"�L'CC�����1CC�\�� � �CC/)�����"�!�CC����OCC���2���CCK�

�)�"�-�?$��:����O��)k��&�j�&� �-�"�3)=��!Amultiple Suruival surgeryB��

�������������"���R��=������$�O��/�����&�?��O����%��)%�� �G��&��/)�����������!"�L'C���_C�����>��� ��

�������_������!����/�0�������!�))%IACUC������������1C���#�C�\�aC&�\�J����&�!������f�������C&

��������������Z�)%�� �������� ������MmAb���������!"�/C��2�C? �+� �1��(�+��������&�

��������������C��&���!����/�0��������%��M����&�"��IACUC������"�C���C��f���������O/C.��"��C

����� �3�����%�Z�'E����'5 invitro�������&�#�/5 ���M��&����&��� �����C�����mAb�����"�![��C&�

�������"��2���"�� mAb�"��>�� ����\�!"�L'���"�� �����

����������]) �#�mCD ��������&�1E$��'$����!"�K$������ ���������K�'\��C���������C/�0�t��C����C&�R

��������������������2�>2�C��1C3���'C��"� �3C����C%��C)�"�G�=C$����&�O���D �J�"����?) �C%�G"�

���������_����� ��&�� �������"���invitro���������������+�C �1�C�(�+���G"�C&���C%��C&�2��a�\����

�$�"�"�S�?$����

��"�3)=��*����������������!"�����':���C$���"�"�2�� ��>�������;��%� ��&��/�0��5 ���Q��-���.

�����1���S2T�G���:��&�������������� �C��Z'EC���!�C)�(�#�C���)k��"�O���&�)&Invitro���+�'EC>�

����1F����)���� �'=�&����� �3C���invitro�������C����� ��C&�mAb��������+���G��C)0��C&��C��&�

���������CK)����CX �"����'F��e��#�/5 �����������������C&�RC�]) ��C'/�\��C&����mCD ��C&�G��C���aC��"

���������������15)C����!�X=C$�"�1C��"��"�#�K�� ��&�������D�� ���� �$�&���"�&�O� f�� �3'�5\��

������&�� �����������������C����� ��C&����C$�K �� ��e>�������&��$����� �� ��O��Invivo�����'�'EC$���"�

��������&�!��/����/�0�a�T"������������C���������$���k��K)����&��)� � "��2�mAb����+������C��&�

Page 58:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#&

���������������������C&�� ��C����������C�� �C��!"��2���^C5&�"��"�"�C���"����'��e>���)%�+� �1��(

��_����invitro����������'\��J��))%��/$�������&��R&�]����������2����T�C&�1CP�U� ��:�Z%�Z?:

mAb6�� ��&�+� ��J����&�S2T�+� ��&�R������invitro ����aC&�\�#�mCD �YT�/5

������"��/$�����\���������g��D��+� � � ��������������!"��ARat�B�����1�C�(��C�����YT�/5

������������_������&��'I���&����)%��/$��g��D��+� ��"� �{u invitro�������C)%�� ������R&�]��

������� ���+� ��"�� ��Aimmunocompromised�B����������C)/���Z'EC���1�:C���C\�F��

JmAb������)%�� �����������w��x�mAb������1=%�1$���$�����2��a��:�Invitro������C$�����C �

��������G���!����$"��&��?) �����1���5F�;��%���O�y�Ab���""�>���������1=C%� �3����J��K0��&

invitro������������$����� �mAb��������������K5)C ����#�C �$��C��2�K��>�aK���%����/$���������

����))%��/$��mAb��������������C��1=C%�+��������&�!�������������2�K��>�"�C�/%���G��C��

�������#�m���1�F�i��&��$����� ��5��MAg����������"��eC>���{fC�� z�C���&�N�EC:� ��"�K�/0�����

������+2����&� ����$��%��>"��(Invitro������������� ��C&�+�C ��"�z�C�����) 2��$� �'%�&����|��\��&�

������������������"�!�C����>2�C�������� ���!"���"����$����S�0���1���������!"��wL:invitro���"�

�������O'���3X$mAb�F�%�J�$����� ��"������i� ���aK= �Q��-�����&�����

��"�3)=������������mAb�����������������CK)��� ��C&�"�C���'C��e>���C)%��C���$�+� �1��(������&�

�1��"���������'��"�"����+���O���� �"�� ��&��/�0�-� �6������

�����������C%��K)����&��)� � ��!�))%��0��' �}��� Priming�A������ 2�C��QC��D��B�����C&�+�C

Pristane $���"�"��&��?) �����"���C$�"�C���"�C���C �G���:��':��������a�K=C��O�C:��"

������������ ��P$��&�a/'D ��':���$���"�"�"����1��(���������������C�� �C��!"��"�� ��"�![����&��

��C&���� �W/?��1��(�W�� ��%��g�3�D ��"�6�$���!��������/:�1F�&��&��%����O���&�C)&

���������������C5&��C$�2����C��&�a\��C:����+� �J�� �������� �3�����R��6��2���5&������1�C�(��C�����2���

������������������J�"�=C&�}�$"�"�W�� �W/?���K)���2��a�\�G��=%�a/0�6�$����$"�>�����&���J�!���=

������������������"�C5����"�C���C'F�>��P$��"�W�� �G��=%�a/0�"��5���"��'�"��D ����&�"��>�-���

������������������ZCg0���Ck"�G��C�:��C%����&���e��G�K ���������"��3)��1��(�W�� �G��=%�-�5F"

�������&�!�=$��':���$���� ��&IACUCs����������Y�/��'EC ��%��$�E%�"���Oy/] ��%�1���S2T�

Page 59:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

#(

����������������������� ���C3X$����C���&�J��C)��5 �a �C����C%�aC:�� �S�C/���"��)'E��-�$���:�#�yE

��)��&��&�?���&���!��"�+2� (��&���&�G���:�2��W�� �G��=%����

��"�3)=��7����������������� ��&�+� �1��(�+����%��'\�mAb������'F�>���%��&�������J�"����

�������"��CD �J��CK �-�)��5 �a ���G���:��"��':���$���"�"�;��%� ��&�����\�a&�\���

�"��>�S�?$�����&��"�"�2��&�-�����"�W������ �J�G��=%�-�5F"�G"�%����

������^5&��%�1���HI= mAb���������������������$�C���C ��C'F�>���C%��C&�G�C �"���CP) ��C&��C%�����������

������ �3�����������&��)$�����/$Invitro������$����������������������C&��C3$(��C�����+���a��C����C��

��Z'E��invitro��������������C�\�a&�\��U�-�����&��%����&�� ��'E�2��$�E/��-��{���) 2��$�

����1���1/�\�G��>������2�� ���E&�O���&�)&mAb����������-��C���C&�N�'C�"��"� ��?���#�C/5

���������$���� �������+� �1��(� �3���������&����������2���C'/%� ���������� ��K�'\��![��&*8�

������&�S�>�����������_������&�a������%��'\���X�"�"�� ����invitro�������&�G��>������"�?����&��'���

�����������������'=�&�-�)��/����1=%�_�D � 2���H��� �3�z���)K�mAb����� �C�2��$� ��C&�

""�>��E��� �a&�\�+� �1��(�+����&�1/�\��P$�2��1���OK/ ��$� �"���������D�����

��"�3)=��9��mAb����������������&��.�:�#�:��"��%�������������� ��?����M��&�+� �1��(�+�

�����������&���� �"��aK��G�/���&��3$(����������&��$���� ��������C&��C�����1/C���C&����&�W��)����� �

��+��invitro���))%�1%�:������������������� ��&�+� �1��(�+���2��!"�L'���_������^5&��"

mAb��CC��&� ���CC.�1CC���OCCK/ ����_CC����!"�L'CC���"��CC � �CC����5 �2�����CC3���

IACUC�������� ���/)����W.�� ��&mAb�2���)����0�1��(�+���_����+� ��"�����

*��������� ��&�� ��������w��U�1=%�1$���$������K'�\��*8���@��������"�C��� �!"�"�1=%�2�����

�#�mD mAb�2���'/%�1P�U��&�mg/ml�<��>��1��� hallow – fiber reactors�

�������C&��$�C��!"�L'C��������C���C/�$�`�=CU� ���"� ���Z'E�������4C�����mg/ml<88� ��

mg/ml�788�Z%��'P�U��P$�2������ �O����%�"�&�����������&�� ����

���2���'=CC�&��CCK�'\��mg<�J�mAb��CC�����CC��&�<�����CC��!"��2���'=CC�&�"��CC5���CC��

�����������&�S2T�G� 6/����M��&�v�'I �� ��������������������2�����C� �OC�����������)F��P$�2�mAb�

�������$�����) 2��$��%���k�1���aK= ��������������C%�1C���G(�2���'=�&�+2�"�����1�\�� ���#�')%��

��&���1�"�G(��&��$��'&��]��' �!�X=�� 2(�������

Page 60:  · ˙˝˛ ˘ˇˆ- c d˘˝"c% )’ec c/3 c3f5 b mab a# $ ˚% $ 3" &’$(!" l’˜g m˜ 3’$ l0 )$ 3˝ / & g ˝"˝" 3˝ / &h i=˘j# k &! c˙n ec:- c$ :2 3 ...

$)

7�������"�������!"��invitro�������������6���C$(��C���C)%��C/$������������mAb�������"�!�C���C�����

invitro���������������'F��O�&�2������'F���;��%� ���.��K�z����&�1���5F�Q���%��)K� �HI= �

�1������

9�����2���'=�&�mg�<8���2��mAb��������������� ��C������2���C��\�v�5C.�"�CK�/0���1���S2T�#�5F�

��%�1���O����X$��&hallow – fiber reactors����O�g���Z?:����=U� ����'$� �F�J�

��&� �3/'E��density cell system����C���O�C:��"��)$�����/$��X�"� �3K�)K�����

��$2���!"��(�&����2��$�O���J���������d��] ����

<���3����������!�))%�������� �������� mAb����������J��)C��&�!���!"��(��$�L0�a ��0��������&�

� �3�� � ������&�4�U����$���!"�"�z�������

�������������!"��$�W ���JT�&� �����5 ��%�Z�)%�� ���%f��� IACUC�����HI= ��%�1���vi� �

������������������������C���C��1C���S2T��$�$�C\��C���C/�0�O�$��C\��C�����&�-�$���:�2��!"�L'�����(��%��)%��

������������������� �3C�����C%��C'\���C��ZC%��������&�� ��������������!"��Q��O��5�� ��&��������5

invitro ������� ��&��X�"�mAb�1���!���W.���)'E�$���L �����

��

��

��

��

��

��


Recommended