� �
���������
� �
��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������
�� �� �������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������
� ���������������������������������� ���!"�#�$��%�$� � ��� "�&��'$(�!�))%������������������������������**��
�+����&�#�$��%�$� � "�&��'$(������invitro��������������������������������������������������������������������������������������������*,
�-���.� �� "�&��'$(�#�$��%�$� ������� ��&��/�0+� �1��(�2����������������������������������������������������������
� �3����4��5 ������6 �2�� ����invivo���invitro ����������������������������������������������������������������������78
"�&��'$(�#�$��%�$� �!��$���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������79��
��%�$� ��������"�-�$���:�;���(� ����)� 21��(�+����&� "�&��'$(�#�$���������������������������������������9<��
-�"�3)=����� ��>��?�'$��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������<@
������ � �
� �
��������������
�����������������
����%�$� � �3�"�&��'$($��#�AmAb�B�����������-�C���D���"��C%��)'EC���C/3 � �C3F�5
��& ������G� �"��"����3���/�&�H�I=��J�#�K����������!"�L'���G�M������3'$�L0��)$� ����3���/�&�
��$���� ������������������!�C��N�EC:�-�C$���:�2���3$��%���������� ���!"�������&��3�"�&��'$(�O���
�����$���� �����������������13�mAb� ��������������!"�"��C���+����"�2���CK���&��3�����J��P$�"��
�$���� ����
��K�'���Q�F��"��'F�&� �3�����1=%����+� ��/K��!�L:��&�R��6���&��
������G"��(�1��&� ��&�1���OK/ �mAb�����������������C%��C��&�S2T�4C��) �1CP�U���V�C���C&�
���W�� � ��� �'=�&(�����W�� ������+� �1�����"�C�>�S�C?$��1F�&�1=%���(�+���C��1�
0����������������"���� �!"�L'����3��X=�� 2(�2�� ���E&��"��5������M��&���!����'�)��Y� �/���C��
����������"�"�G"�%�Z%�13��![���1�\�� ��) 2��$��3�� �+���O����"���������!�C��"�C?����':���C$��
���������������������C����ZKC��G��"�W��C �!2��$��2��;�&�W/?���]�����&������� ���!"��2���^5&�_���
��)��&�� �`�=:���&�Z��3�����
��+���������(�+����)$� �!����'�)�������1F�&�1=%�����������C'$(�S2T���"�C� ������&�� �1�
���������)%�� ����������������!"������&� "�&����������������C\�!"�L'C���"��C ��5������M��&�+���O���
������"��>�� K������������������S2T� "�C&��'$(����� ��$�����/$�4�U����!"�&���X'\��J��$��>��&�!�0�O
���������3�����"�![���-��3 �G��&��������C)%�������������������J�G�C���C'$�2���1C3���"�1=C%� �3C���
��$���� �;���G"�&�N�'�"��"��'=�&���G�������'�)�����
���������K�� (�!�$2�"��� ����=���.��O/?$�*AAAVS�B������#�C��aC������"*bb@����'C����"�
����c�C)/ �13��C/$��'C���G"�L����������C����� ��C&�-�C$���:�2��!"�mAb��������C� �OC/?$��Z��EC�������
�1���3&NIH) 2�B�"�C/$�"����#�C���C�����*bb@�NIH������C �"���C���0�C �d��C���"�
1- AAVS: American Anti – Vivisection Society
2-NIH: National Institute of Health
�
���(�+���2��!"�L'���1�����������13��mAb�����������C��&��C � ���C.��C/�0��P$�2�������QC���"
���#�C��aC������"�"�? �1����"*bb��AAVS ��C�&����NIH�"�C%�"������� NIH�2��
��������������a�K=��c�.� �O�������&�13����� ���'�/%��%�"�%�1����"�-����D���� � ����
����"���/%�����������2���C3�"�&��C'$(�#�$��%�$� ������� �3��������&��'**�����a�K=C��N�)C���%�
�����&�-����D���)� 2��"� ���E&�d��?���%�"�&�!�� ����X=�� 2(�-�$���:�4M��J�#�K��
���������������������C$"�&����"���C/�&�-�C$���:�2��1C��/:���-�$���:�;���(�J�"�"�"�� ��"�-����D��J���2�
���C%��)%�O��5�����1����"���%e ��'�/%����C������C�(mAb ����QC��1�C�(�+����C&�
���������f ��'�/%�4�] �O������f��-�����"�1����/�0�-���. ��������C&�13�����3�����%������
��������������"��g������%e �+���2�����$��':���$���"�"�G�$����a\��:�������� fC �O�)h/���'�/%
����������(�+����C&��i�C$��C����� �"�C���-���.��%�"�&����C���6>���!"�C/$�O�C�5�����1�C���2��
����1�5.�����/$��g�������G� 2�G(��"�1F�&�1=%� �3�����5����
���!����g����"�)���J�j�&� �"�)���N�����&���� �3C���6>�J��C'�/%� �^0��d��?��J��'�/%��&
����������G��)IC��!"��C3k�G(��"��%�!2���Q����2� (�!�>��%�Q���"�!����g�������i�C$�1EC�&
�������������� ��C'�/%�J��C'�/%��C$�>���� ��%��E����"�O�)h/�����)'��"���^:6������l��C'$��C&���C&
mI= �"�/$��g�����������������1F���1�"�����
�������������+���d�I'$���%�Z���"��P$� mAb������� ���������������&����&�����1C�\�� � �/)���
���������X=�� 2(�-�$���:�2��!"�L'������������C��&�nC)��/���������������C&�j�C&� ��C����C����2���CK�
������������������C)%��C �"��C����C/)����o�1C���!�$2�"��� � ���"�5' ��:���������aC/0�OC���2��p���C��&
�����������������C'�/%����������&��%������&��/�0�������O'��"�-�����"��%��)k����"��� ��""�
����������"���� �!"�/��2�? �-�$���:�2��1�\�� ���!"�L'��7AIACUCBq�r�Y��%� ��s�JO�)h/�
)%�� ���������������%�Z mAb&����C��������C/�0�������-�����"�1��(�+��������
IACUC���/��2�? �j�&� ����"���!"����������1=C%� �3C�����C%�Z����C&�OC����&�O�)h/���
�������������� ��&�#�/5 ���M��&����&�1F�&mAb���������� T�C&�ZC?:�-��C�����4�U�� ��&�Y���m�
mAb����"��>����\�!"�L'���"�� ��������������������mCD ��C���C))%��C/$��C������ ��C�������CK�'\�
�L'���2��a�\���"�G�=$����&�R�D ��)�"��/$�1��&��/�0�t������&�R�]) �+���2��!"
3- IACUC : Institutional Animal care and use committee.
�
��������������1=%�_�D ��"�����_������&�� ��������G"�"�RF��13���$�m���+��+� �1��(
�1���!"�"�S�?$�����
��� ���!"��������d�)'���13���/�0��'�/%�Q��������a\��C:��&�����-�C$���:���2(��C��"�"�G�$�C�
��������&�� ����$�"�� ���������Z'E����%�!�)�(�#���O��)k�#�M��"�O���&�)&��� �������1CF�&�1=%�
�'=�&��5���������������C3�"�&��C'$(�������13��1F�&�1=%� �3�����)&���� � ��� ���#�C$��%�$� �
�&����&�����������X ��)�(��"�#�/5 �+���-��������������C3$(��%����&��'��"�"�����D.���a��"��K)
���"���]) ���U� ���J�3$(�2��!"�L'����K)�������$��>����\�!"�L'���"�� ��)$�����/$�E ��
��������/�� ����)�6���&�#�mD �G"��(�1��&�������� ���� �$�&��"� ��e>���� ���-��5\����&�n)
���&�R��D� ����������������""�C>�d�ECD �15)C�������J�!�X=$�"�J�1��"��&�j�&� �#�K���������C ��OC�����
�"���a��:�-�E�u ��"�1F�&�1=%�������-�3E��"�?����&��$����� ����
������������2���%�"��"�"����a��"�O��)kmAb���"�C%��CP$�t�C��G�����/$�1��(�+����&���
���^5&���>2���d���1F�&�1=%�_������&������� ���!"��2����� "���C ��"�J��$�C���/$
���O��)k��%mAb��������������+���J��C��&�2�C�$�"��C �T�C&� �3'P�U��&�-��L' ���� ������"�1=C%�
��!�X=�� 2((Invitro)���1���OK/ �%������&��'���$���(�����������c�C$�����C�� ���!"�ARat�B
���������C������"���T�C&�G� �$���YT�/5 mAb����"�Rat�"����������������CM��C&����"�C����)C��&��C/$����
������������������C������&��"�\�#�:�O�0��"������)�"�� �RF��1F�&�1=%�_������&��L�5.mAb���"�
��������������)C��&��C ��C)/���Z'EC���v5.��&� ���+� ������C$�������������"�w�C�x���C�� 2�C��H��C���
� ���Z'E��invitro ����������1C���5F�;��C%����C��O�y���C��G�C��!����C$"��C&��C$�����C �������
���'$(�� "�&�"����?) ���mAb������������-��C��x���C&��"�\�1F�&�1=%� �3����2��a��:��$��C �#�
�������#�m���-��\�1����OK/ �G"�&��5��M���U�O�����!"��$� �)\� �3��K�� ��&����O�y����
�������K�z����&�Z3 �V����X�"��mAb���������"����\���{f��1D����������������� ���!"���>"��(
����������W����z������) 2��$� �'%�&����|��\��&�+2����&�"�� ���������!"��4�C�(�2�� ��>�C��� ��&�+
�1�������������X�"�t�M�2�������������1=C%�_������&� ��>2����"������� ���!"���^5&��$����$�
�����F�%�������13�mAb����������&�� � ���aK= �Q�������� ��'�/%�a��"�O����&6����C?�'$���&
��������/�0�-���.�Q���%�"��>�� ����/':�������������+���2��!"�L'C����C �"��G"�/C��2�C? � ��C&
����� ��&�+� �1��(������mAb����1���S2T������������������1C�e>��C&�J��C�(��C ��P$��&�J�#�:�O����&
#
����������������1�C�(� ���+����&�2��$�J��))%�� �1F�=������X=�� 2(� �3�����%���]$�/��J�G� 2
��&���;��%�+� ����
��� ���"��������������2��$����2�"���v\�' �����$�+� �1��(�+����&�#�$��%�$� � "�&��'$(�������
���"��"�"����+���O��� ��&��/�0�1��"���������
������������C{���"������a&�\��':���$����"�"�"�?����&��)� � ��!�))%�W$�\�}�� ������/$��P$��&
��R��6�pristane�A����������������C)%�� �Q/%� �� ��� ���#���������&��%�����/��� ��!"� �B
����������&��'��"�"�������+� ��&����������������C&��':���C$��C��"�"�YT�/':��1��(�W/?��#�M��"����
�����J���(�� �"�������������������1CF�&��C&�Z��C3��1�C����C&������� ���!"���^5&��K�'\��Y���mI
��������������"��"�"����1��(������a&�\�;��6F���K�"��� ��"�������$���� �!"�L'���������C5&�O���&�C)&
����� �������� ���#����R��6��2�J�+� �����������������������C���C'L���C(��"��C':��$�2���a\��:����&
�����$��>����\��&��2���"�� �-�]5������K=��2���5&�������W�� ��K)���2��a�\���1����a&�\�1��(�a�
������!�))%�1:���$�!���W/���"�������"��>�-�������I�����&�����������"��CD ��C��&��C�����I��"��5�
����"�5�������&��"��� �����I����������$�Zg0�G���:��%��������"�_�F�������6��C���C��$�G�=C$��':���������
���&�� ����
��� ��������������������13��+� �1��(�+���2���'\�mAb��L'���������1C3�����&�"���� �!"
��������������������!�CX$�"��CD �J���CK �-�C)��5 �a �C��"�C�>�-�����F�%�+���':���$����"�"�a����
����������������������Ci��':���$�Zg0��%��������"�W������"�"�G��&�O'=%���������I��"��5���O'��"
�""�>����
�!"6���2��c�$��"mAb �!��"�����f��"�� ��%�eU�)��&�� ��$� �"�!"�L'��� ��&����"�����
����� �3�����&��)$�����/$��'F�&�1=%���������Z'EC����"�G���������%�O���������$������������C%~
��!����S6�'E �A�����������C'��"�-���C� �aC��"���C&�B�C�{���������C&��$�EC/��-�C$����QC�z����&�c�9��G(��������
�����������������"�C��� �Z'E���O���#��\�a&�\��U��:��"���T�&��)�6���0�&��%����&�� ������!�C0��C&
� "��2�"��5�mAb�&� ��?����>��Y���mI ��$���� �������1��(�+����&�#�/5 ���M�
�����2���P$�"�� ����� *8������&��'/%�S�>�J������������+����C��x���C%�1��� �X�"�"��� �2��"�� �O���
���������������������"�C���C �WC) �G(� T�C&��C)�6��1C�0��C&�1CF�&�1=%�_������&��������+�'EC>��C&��C ������������
4- bioequivalence
$
������������������J��3������1=%� ���_�D �J���� ��(�OFmAb����1=%��"�������R��D��13��1F�&
� ���-���.��������(�+����&��)�6���P$�2��YT�/':���$� �"������������������E��� �a&�\�+� �1
�"���+���O���O�=$����$����� �Y��\�5' ������
��� ��������������mAb������������������S�C?$��+�C �1�C�(�+����C&� ��C?��-��C���C&�2��C ���%���������
����������������C�1C%�:��C��&�15)C��OC��������&���� �"�����&�"��>�� �������2��!"�L'C���1/C���C&����"�����
����"�� �"��1F�&�1=%� ���+�����
���������C�����1C3��+�C �1�C�(�+���2��!"�L'C��� "��D �"��� ��"mAb���1C���OCK/ �
����&� ���.���������������������_C����!�C��!"�L'C��� �C����5 �2�����C��#�C� �G��C)0��&������2�"��� �
IACUC����������C�������P) ��&�����"�/)����g���� ��&�mAb��������1�C�(�+����C&��3C�� ��"��
)%�� ���] ��Z����
*�������������� ���#����1=%������W�� ��"��K�'\������ �����-� ��&��%�w��U�@����*8�2���
�����J�1���!"�%������1P�UmAb�������2���'/%�J�!���"�?���<��������C'������ ��&�S�>��%� ���C��&��
�h$�)k���� ���Z'E��Hollow-fiber�������������/�$�`�=U��������>����\�!"�L'���"�� �C$����C&��
�P�U�4������� ���11m
mg�788�����1m
mg�<88��������O����� �3'P�U�J���"�1��&����mAb�
���� �����$������
��������2��;�&��������K�'\��<����S�>���� �mAb����������������C�� �C��!"���'=C�&�"��5�����l)��2��
�������������������C������C)F��CP$��C]�$�2��J�1���2��$�"�� �G� 2�Z����M��&�-��L' � � ����������OC���
������ mAb���������������C)�(�F���-��CP$����C$����S6�'EC ��C ��O����K)���a���&����&�� �aK= �
����&�� �#�/5 �!�X=�� 2(�Q��1��&�\�2���'5�������
7�����6���$(��K� �X)��mAb�����������d��] �"�K�/0��%���"�G�=$�1F�&�1=%��������&� ������
&��'$(��1����'F��O�&�2����%���M��&����!"�%������;��%� "����
9���������������������C�� ��C$�����C ���!"�%��������+� ��"�_�F�� ��������#����!"��Q���K� �X)��
���&����
<������2���'=�&��K�'\��<8�����2��S�>���� �mAb����������������C��\�"�CK�/0���1C���2�C�$�"�� �#�5F�
����������F����� ����'%����%�1���O����X$��&�������!"��v�5.����F���� ���Z?:����=U� ����')
%
������"��':��X�"� ���+������O�g������������������2�C�$�OC����)$�����/$�������������1�5.��O��'3&��
��$2���!"��(�&����
��������������CK)������'C���$�1C�5 ��������5 �O����%�Z�)%�� ���%f��� ������ �C���C'�/%�IACUC��
vi� ������������������C�5���$�$�C\��C���/�0����T"��&����-�$���:�2��!"�L'���-���.��%��)��&�� O�
��)��/$����
��������!"��v��5�� ��&��������5 �2�)�����������!"�&�a��:�Z%��%������������� �C��+����C%��$� 2��
�&�1=%'F�J�������� ��&���L �����mAb�1���!�=$��g����J����&��/$�����
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
&
� �
���'���
� � �CC3�"�&��CC'$($�#�CC$��%��AmAb�B�-�CC���D���"��CC%��)'ECC���CC/3 � �CC3F�5 �2�
��& ������������$� ����C3���/�&�G�C �"��"����C3���/�&�H�I=���"�J�#�K���������G�M�C�����C3'$�L0��C)
�����$���� �!"�L'�����������������2��!� (�1��&� �3$��%������������ ���!"�������&��3�"�&��'$(�O��
������$���� �������!���N�E:�-�$���:���������C' �����C����&������� ���!"�6���� �3���C����B�
�����������$���� �������� ��� � �3������&�!���O/���-�$���:�����������13�mAb�����J��CP$�"�� �
�� �3�������a��:������������������$���!"�"�����+����"�2���K���&��'E��&�������!�CL:��&�R��6���&
�����!���!"� (�+� ��/K��A��+��invivo������+� �1��(����J��B���������'F�C&�1=C%�+����C&�����
�������������������1CF�&�1=C%��C����W��C ������+� �1��(�W�� � ����&��'=�&���%�� �"�����1C��&� ��C&
��G"��(mAb��������4��) �1P�U���V�����&���"��>�� �-����������'�)��Y� �/0�1��(�+��
��!������M��&��������3��X=�� 2(�2�� ���E&��"��5�����������"�C���C �S�?$��������OC����"��C��+�C
���������"�G"�%�Z%�13��![���1�\�� ��) 2��$�"��� �a��\��"��������)��&�� �!���"�?����':���$����
�������������������&�Z��3�������ZK��G��"�W�� �!2��$��2��;�&�W/?���]�����&������� ���!"��2���^5&
=:����%~��':���$�`��!����������))%�� �"�?������������������'�)C���'F�C&�1=%��+����K�������"
��!��������C������������C��!"������&� "�&��'$(�S2T���"�� ���!"�&�+� �1��(�+���a�
��)%�� ��� ���+���OK��������X=C�� 2(�1=C%A invitro B��1�EC$����C&���1�C�(�+��
������������)$�����/$�4�U����!"�&���>�1\�������G��>��������C���-��3 �G��&����S2T� "�&��'$(����� [�!
�������))%����������+����"����������� ���+��invitro�����������2��;�C&��C&����1C��F� ����"�b8�
�1����'��%�����)�6��2����!"�"�;��6F�����"����
����2��!"�L'���+��mAb������������)%�� �O��5�����G(�2��$�"�� ����� �J�������#�C$��%�$� �Z%���"��
��� "�&��'$(�A���2���'/%*�8���S�>��B��������������"���C �2�� ���EC&������C���D�� �C3:�M�4C��U� ��C&
�������&�� �2��$�"�� �Q�'���$(������_��' ���������"�� �A*��*�8���S�>��B�������3F�5 ������� ��&
%���1��m�I=�� ����������(��%�;�� 2(� ��&���mAb���������!"�L'C���"��C �-�C$���:��"������
���$��>�� ����\��������!��$���������)� 2�O����"�mAb������T�&�����������1C���!�C��vC��5��S�>�Q��2��
���T�&���"�� mAb�"��"�"�&��%��$� �"����� �6�$���!� 2���H�I=�� �3���� ��&�����
(
��"�&��%mAb�����&�-����D���"� ����������C��O�y���C��H�I=C��13��#�K����������3����C�g�&�%�
�%�$� ������y��Q����1���Z3 ��������������C)$�/���C%��3��K�� � ���E&�1�)��4����3$(�"�&��%
���/���� 2������������������������C&��C]&����"��C �;C$�"��]C��;��6CF����!����))%�� �#�')%����#����6�
��K�� �G�/'�����a/0�O�&�j�������1���3$(�G��� �����
��������������������C&�G�C&6� ��C�����"��C � ����'E$�"�"��3&��0�&������Q�z����&�S��0��"��3'F�=���O��
��������������&�����^0��J�a ��0�O���_����!���������S�/�����$�L0� �6���/�&�a ��0�����C$���� �C3'F
���������3�����"���&�"�����x��J�!���A������ ���B������Gz��C$(� �C3$z��C'$(�J�A"��aC���"��"�C
��)/���B�1���!�����G"�&����m'��G�6� �!�0��&mAb �D$��&��1������ ��C&��C%�
�������$"�>�!"�L'���-�$���:���G�E$���"��3���/�&�H�I=�������G� �"��4��) �_�����1D�J�
��)%�������� ���������!�)mAb���������������S���C ��C�����O���&�C)&��C$� ��C �!�$2�"��D �$���M��&�
mAb��������������&�� �-�$���:�2���'/%�!"�L'����&��]&����"�������������C&�_���C ��C���F��C/��ZU���0
�������mAb�������������������}�C$"�"�G�C&6� �G��C�:��"��C$�����C �+���O���J�+� �1��(�+����&�
���&����
����������������:� ���C3X$��� ��"�C&�!�C3&�1C3���CK�� (�1C��"�-���� ���������"��C%� ��"�!�C3 �-�C$�
����������J��$���� �!"�L'���+2� (���-����D��J�!�X=�� 2(�A*b�7�IRAC�B���G��&������C)%��C ��
�p�$���:�����������)C��&�4C��) ��C$�>���c�C$�2���'EC��&��$"�>�� �d�I'$�������� ��&��%��
��������������G�)�/M��a&�\�d�����&��3$(�"��5��O��'/%��&�G��'&������� �C��#� �G�h/�����3����
������.�����������������C����"�� ����&��K�z����&����X=�� 2(� ���Z'E����� ���$����� 2�������
��$��>����\�����������������J��':���C$�G�$�C���a\��C:��&����d�)'���a ���-�$���:�2����D��!"�L'��
��������������������� ���C.�J��C��&��'C��"�1C�&�] ���DC���C/�0�+����C&��K�������"�"�"���d��].��������
������&�� �q�������!"�L'�����1�\�� � �/)�����������X=C�� 2(�-�$���:�2��ANRC�*bb,�B����C&
�����������������^5&��)%�� �G��&���!"�%��D&�-�$���:��"����� ���"��2�"��5��"�� ��"�HI= ���M
�����������Y�C\��C%��)'E�����3����a ������aK�����-�\������������!����C&���CM��C&��C����!�=C$��C&�?�������
�$����� )��������':���$���"�"�4�� ����������'EC�$�#�')%�a&�\�G�)�/M���&��%��$���)������-�C0M�
����������������������G�C��D �J�G�KC�6� �"�2�������"�)����"����&����R��D��t������3�����&�j�&� ��5\��
�����������������-�$���:��"�R��6��-��{���&�W����W�] �"��F���X�"����1C���3&�-� ��1����
!)
�������� ��"�3$����X=�� 2(�-�$���:�2��!"�L'�����G�E$��1�\�� ��"�� �/0IACUC�S6� ����
��%��)%�� ���-���C� ��C&�d�m � ���aK�����R&�]��"�� ��"<PHS ���aC��:�G�C)�/M��
���)��/$���������������R��D����D����M��&�R&�] �-�$���:� �����/0����-���� �O���R�M���2���C��&
��a�/D�������$���&�a\��:��&���$(��K$(������!��2���d�)'���-�$���:��&�l$����"�"�J��':���$��
��"����CC ���CCP'$��G��)/=CC$�"�2��O���&�CC)&�� �CC��+���2��!"�L'CC���#����CC�:���"��CC%��
���X=�� 2( ��&�������� mAb�)�"����\��P$�� ������� �3�����K�������"�!�C���%~ �
����������"mAb�������$���/0����#��5 �)����������2��!"�L'C���2�? ���'����1���OK/ �R�D �J��
�����"���+� �1��(�+�������������������1�C�(�+���a �C���C%� "�3)=C������f��2��a�\�#�:�����&���
����� ��"�3$�J����&��IACUC�������������C)��/$� �C�>�Z�/mC����2�"��� ��"����&���*����!"�L'C���
����������1���������a&�\��/�0��P$�2��G���:�2�� "�3)=��J���������������1C�~������2(�2���C%����3����
��������a\��C:��&���$(������!��2���d�)'���"�"�������������������J��C$���C'F�>����C\��C����"��C ��)$�C����C �������
7��� ���+������X=�� 2(�1=%���������$��!���!"�"�H�I=��4��) �$�������!�C��#�D �v��i�
���������������������C��!"��QC���C�����1C3��S2T�aC:�� ��&�C�2���J��C�5F��'�/%��&�����!�C))%��C�����������
�&��"���� "�&��'$(��"��>��/$����
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
5- PHS: Public Health Service��
!!
� �
��*���+ ,�� -���".�/�01����2�3�4� ��5/��6���1�78����������-�09�2�,�64���
�24� ��:-*4�� ,�/� �
$(��������#�C$��%�) � �3�"�&��'��� �3C����a �C�invitro ���C�� invivo���2���C��%����C�
1��3$(����������������������C3�"�&��'$(��%� ������� �3�����#������������&� "�&��'$(�������2��a�\
������$���� ��'���J��))%����������&�����1C���!�C (���2���M��"��3�����O���"�?���a:�� ��
������&��'$(�!�))%������� �3�������3������������:�2��!"�L'C����C&�2�C�$�#�C$��%�) � �C3�"����-�C$����
���+� �YT�/5 ����"��"����������������Q���������&��"�\��%�1���������!"��Q��"�?���+���O����?�'$
�������������&�� ��$T�M�-� � ��&� "�&��'$(�O�y�����c�$������������J���� �C$�����C��!"��OC�����C ��
�"���� �!�� �$�� �����������
���%������J�� ��������"�?��� ��&�!�=$������J����&��?�'$��&�-�$���:�2��!"�L'���S�0��&��
�1����� ���Q�)K��Y����invitro ������ "�C&��C'$(�-�C5]\�����C��aC�"��������&��"�\�
�������������������P$�2��G(��?�'$���!"�&��=�� 2(�2�)�����Q�)K��O�������1���!���Gz��'$(��&�am'
"�&��'$(�"�K�/0����g���%� &�� �HI= �$�#�mD �G�6� �����������
������� �3$z��%�"��"�"����G�K ��O��mAb ������CP$�2���$�EC$�� �3EC$�K���C&������� �
'$z���������'�E�$z�$�/���;��%��0�&��?�'$��"���"�%�O�6X�����K��������#�C$��%�$� � "�C&��C'$(�
����������G�E$���"��K�)��%�!"�L'���"�� ������������J� ��C������+���;���C���2��aC�\[��G��X=C��
����������� ��� �3�"�&��'$(�_�F��������������"��C5���C&���C�':��+���OC����%��$"�%�� ���3��#�$��%
���������������J�C$"��$���� �$� "�&��'$(�!�))%������� �3�����G�k���1��"�!���O/���G���:� "��2
��������������������"�C&�G��C�:�G"�C%�OC/������CK���C&����':��J��'=�&� "�&��'$(������� ��&����+�'EC>
���)K�z�������!"�L'���"�� �-�$���:�"��5��� �������� �A����J��3�� ������3��>�B������������ ��&
���"�&��'$(�c�$�Q� ����������������1�C�(�+���2��!"�L'C���-��C���"�����1���!"�"�;��%����V��
�1����\�&�G���:�2��!"�L'����&�2��$�G�)h/�����
��
��
� �
!
� �
.*��0;���"�2�3-�09�4�<��2� �6��,4�2�38���=�>5/�*��38���?4�1�@��
��A��*���+ ,"� �
��������R��6��13���%��$z��'$(��&��3�� ��������$���� �O/��J�1���!�����3�����������C&�Gz��C'$(�OC��
Freund’s adjuvant����CK��QC��G"�%�!6�$z�/���&������4�%������1$���"������������
�������������"�C���C ���3��J����&�Gz��'$(� ��:��%�#z���������������aC �%� ���=CU�J�aC �%� �3���C��2�
��������"���� �!"�L'���Gz�$�/���G��)0��&����ZE�$�>�����K� �����/���"�Y����������2��J�3��X=C�� 2(�
������������"�C��� �!"�L'����P$�"�� � �3�"�&��'$(������� ��&��3�� ����������C���3C�� �YT�C/5 ��7�
�������������1C���-��CL' �O�C��D � 2���O/��� �3�/5����'�"������$���� �O/����'L������C'\�
������������1��L%��:��&�S����"� "�&��'$(��'��J����C&�G(�#�CDM����'=%����!���O/���+� �
&�������W�) �G��)0�"���� ��'��"�&��g� ��� � �3������&�Gz��F� ������
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
� �
!�
� �
��*4��0;���"�2�B-� �C�D�?4�1����E�24� ��5/��� -���2� ��38��"� �
�������������������� �C3�"�&��C'$(� �C�>�!2��C$�� ��&��3�� �2��J� 2���O/���2���'L���)k�1�e>�2����
�������"���� ��'F�>�G���$�/$�� ���������W/��13������) � �3K�)K����Z%� �3/?:� ��(
�������1���!� (�"�����&��3�� �G���-��L' � �3K�)K���&�� ��� "�&��'$(�'����P$����6C����
�AELISA�B������"���� �!��?)�� �' �'�����F�������������Gz�C�F�J����&�T�&� "�&��'$(��'����>�
�������"�"�S�?$��G����� ����������������������������("�C��2�"��3C�� ��C&��C��&�J����&�O�g��������'����>�
booster) �B����(�1�"��&�4��) ��)/�����������J�"���!"2�� ��X$��a/0����K���&�
�"���� �!��?)���3I����O��� "�&��'$(��'���O��5�������
�������������������Gz��C'$(�RC��6���3C�� ��C&�YT�/5 �J�1F��T�&��F�%��:��&� "�&��'$(��'����'\���A���C&
����("���2�"�G��)0�B�"�����\�L��a�"�-�����&�1$���"��G��&��� �C����aC�A��RC��M�2�
���� "��������B����"���� �S�?$��������RC��6��OC��7��������������2���C5&��C'L���"���Gz�C�F�2��aC�\�2���
�������"��>�� �-���� 2���O/���O��(����������������'C��"�&�����3$(�#�DM�J��'=%�����3�� ����
��"�� �������� �3����������� ��&��3$(�2�invitro ��))%�� �!"�L'�������
��
���9��0;���"�09�� 3����0 ��2�3-�"� �
���� �3�����G"�%�2��F�����DM����� "�&��'$(�!�))%�������������� �3���C���C&��$��"�"��D ��/0��%
������������1���L)�� ��� �$��� ���Q��2��!����'F�>�A��� ��� �B�������C%�� ��������Q��"�?����0�&
������"���� �1���"��D �$������&��"�\�����C&��%��)'E���g��� �$� �3�����J�� ��� � �3����
8- azaguanine����������&�CI'$��_�CD ��C&��C3$(�1���EC:�2���C���$�C���C �!"�"�1=C%������������
�AHATB Hypoxanthine – aminopterin – thymidine�2���5&�!"�L'���"�� �
�������Gz��F"���a��:�G�)�/M���,���
,����������a �0�a ���J������&�I'$��_�D ���!�$��"2�&aminopterin�������E ��%�1����������������"��EC �������C���y�%�$�6')C�
����)%�� �����������������))%�!"�L'���Q�y�%�$� �������6')�� ��&��0�F���E �Q��2�����&��3�����O���&�)&���EC �����!"���"��C%� ���������������������1C���H\�C$��$��!���2��F�G(��&�#� �$� "�&��'$(�!�))%������� �3������%��g� ��� �������������2��QC�h���O���&�C)&
��������������������� �3�����_�F����)��&��/$�_�D �O����"������&��"�\��g�3)���&� "�&��'$(�!�))%������� �3�������� ��� � �3������))%�� �����!�������������
!�
��"�� ��� � �3�����Gz��F�2��a�\��'L��Q�8- azaguanine��!"�"��C����C ���$�C�����
���:�-��\����&��3���������������)C��&��'C��"�W����������T�&�-�������_�CD HAT�����!2�C���_C�F�
�!���2��F� �3������&�-��:������"�� ����
��
����3F��0;���"� �G�6�8�@���.�H��2�3-�09�� ����0 ��2�3-�09�?�"� �
����������������J�1C���!�����3��Y�\��%��g� ��� � �3������&�!���O/���+� �#�DM�"�L) � �3����
�����$���� �2��F�����&�Gz��F������!�C���C�3��!2�C��#�DM� �3�����G� 6/��G"�%�z��L��'$�
�����#�K��>�O����������"�� ��� � �3����A��������"���� ������� ���=U�2��F��0�&��%� ��!"� �B
�"��>�� �S�?$�����
����������������V���&�I'$��_�D ��"�!���2��F� �3�����_�F�J�����%~�S�����:� ��"��%���]$�/�
�����))%�� ����������� �3'�����"��3��������b,���������� �3���C��a �C���C%� ���$��Feeder���
��$���� �W�2���J����&�� ����� �3���C��OC��Feeder ������LC�� �=C'E��-�C��'D �2��
������C$��!�C���C'F�>� z�C���6�F�S����&�+� ������CP$��C&������ �3���C���C�(��C Feeder �
��))%��O� ���� �������� �3������������=�� ��&�������� ����'%�F����
���� � ��?�� �3���D �����������������C����C%��C$��!�C���'����g���1=%�_�D �2���%��)'E��"�
���������������� ����'%�F� ��:���!"�%�O� ������!���!"�"�1=%� �3���������)��&�� ����� �C���&
�� �3����Feeder����������#��D �O���2���G����� �+� �2��!�����3������ �C������ ��C?����!"�L'C��
"�%����������������I'C���6Cx �2��!����'F�>� ��z�F���%� �2��G����� �O�)h/�������� �C���C&�+�C �G
� �3����Feeder�"�%�!"�L'�������
��
�I<����0;���"������J*���K ���*�K��+ ,��-�0K9�2�K,�64��LK� /�01limiting
Dilution: 9��� -���� ��3/�01�: +M�*� MN�����"�� �
������������������� �C��1C����2��� ��C������ �3���C��Qk�%�������� ����0�/? �J���:� �O����"b,�
�������1=%�_�D ��"���!����'��"�&� ���$����������������CP$�2���C �"���"����$���� �!"�"�����J�1F�&�
�������������������������$�C���C �!"�"��C���+�C �1�C�(�+����&������!���d�I'$��Gz��'$(� ��&��>[��
�"��>�� �S�?$���5&���:� ��"�Q)�$��%����
!#
�+����&�G"�%�G��%�G� 2�O����"Limiting dilution�1���%���%���"�� �G�)�/M��
������)'E��G��%�Q��Q��a\��:� ��:��3K��k���������������'C��"��C���&���-��^\���:� �O����"
������������������� �3���C��G�C� �2������C$��"��&�C��C��K��-��\��%��g��� �����������1���S2T��2�C�F���
��"��%� ��!��invitro �"�%�d�I'$����"�"�6��/��J��$���$��&������T�&�1\���"�������
�������������&�N�E:� �3����� ��&�!�������� �3�"�&��'$(�J�"��� �2���^5&��"���_�D ��"�!�$�/�\
���)'E���/��1=%��������"�+� �1��(�+���2��!"�L'���������:� �O���������������3���C���C$�����C
�����"�-�?$����������������+����"��C���2�������%�!��"��"��%�!"�"�G�=$��L�'I �d��?��O�)h/�
�� �C5&�a:�� ��"��%��$���� �"�?��������� ���!"��+� �1��(��&������invitro ���
invivo �KD'���"��2����)�"�� �G�=$�d��] ����� ��&� "�&��'$(����������'=�&�S����
��������������������Ck��C&�+�C �1�C�(�+���2��!"�L'C��� ��&�G���D ��&�Q/%� ��&��g�3�/5����'�"
�1���!��������
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
!$
� �
�J*��� �.�/�01����24� ��5/��� -��invitro� �
������2��!"�L'���Z3 �1�6 �Q�mAb���������#�C$��%��C��� �3 �C���'$(� ����&���J�����G"�C&�"�C��
�������C������m'��#�$��%�) � "�&��'$(�"��2���"�� ��������C:����C���C���QC��Y�/��'EC ��C%�1��������
�A�������������������Gz��C'$(�;)C%���QC��#�yEC ��C%�Gz��C'$(�#�K� �Q��2���'/E\������ "�C&��C'$(�
�1���HI= �B�"��>�� ��$�=$�������
�J���%���M��&mAb���"�� ��C������� �3����������%�1=%�_�D ��"����invitro ����
��������������������"�C��� �1F���!����������� ���������&��%���� �1��(�W�� ��"�������)%�� �O� f���
mAb����1=%�_�D ��"��%���]$�/��4�U��� ��"�%�H��I��W�) ��"�O���2��G����� ����
�"�%�!"�L'���G(�2��G����� �1���1��(�W�� ����
�3��������'F�&�1=%�A�invitro��B�������/0���������a&�\��K�������"��������C)$�����C ��)C��&�
�����g�3$������� ��&mAb���$���!"�L'�����������C��!��C��2�� ���E&����"�C�� � ����� ��C&� ��C?��
����+����&�1=%invitro���������1���!"�%�1F�=�����!��� 2����)�3&����������CP$�2�����!����O��
�����������������%�+����>��h���J��&��%�+2� (��&�2��$�G�6� �J��3$(� ����� ��&�2��$�"�� �-�3E�J�
��"�&��'$(�1P�U�����������������CK&�+����&�4��)' �#�mD �Z?:���G(�1/�\�J�!� (�1��&��g�3$�
��)��&�� �-��L' ��'F�����
���������������������CP) �1=C%�_�CD ��"��C����� �C��+����)�6���"����&�6�$��F�.��-�6�3?��1/�\
""�>�����������������C�"�� �V��1=%�_�D ��&�����L' ������� ���������������!"��������OC��
��CC����� �3CC����;CCI&invitro �"�CC�� ����� �) "�CC�� ������CC�"��CC ���CC����
��)%�� ��D&�+������ �3'�"��D ����
��
Batch Tissue – Culture methods�"� �
������������������� �C��#��C��G"�"��C���J1=C%�_�CD ��"� "�&��'$(�#�$��%�) �������!���O����!"��
����������������&�� �1=%�_�D �2�� "�&��'$(�#�$��%�) �H��I����J�� ���������������>�O�)��S��
��_�D ��'=�&��"�����������������"� ��C>�O���C&��>�$�/��� ��C:���"�C���C �!"�L'���1F�&� �3'=%�
!%
��"��:<8�������1����'������ ��"�S�>��K� ����������_�CD ��"�S�C��O���2��!"�L'������ �C����1=C%
����&�G(��"�"��� � ���O���&��>�$�/���2���/3 �;I&��=) ��$����� �� ������������
��������)k�J� ��>�O���&��>�$�/����&��>"��(�2��2��':�� ��&����_�D ��$��/%�O���� ��C0� �3'=%
����������������������� ��C����������C�� �C��!"���C����%��$��!"�%���3�����m'�� �3�� �F��&�S���2�
��)%�� �O� f�����
���"��CC%��g��� ��CC������"���CC ��'=CC�&��"*8��FCS�2���CC5&�J�!"�CC%��CC���9z�CC�����������
A*������2����B���������2���'/%�_�D ��"����� ��&��)$����� *��FCS�����_�CD ��"��C������2�� ��C0�
���$�����>2���S����������T�M�G� 2�-� ��"� ��>2���O�������������������"��C����"�C��"�C?��� ����$
<�7����Z%�G�6� ��&�6>������ ��������"��� FCS�$����/$���>2���1=%�_�D ��"�����
�������������������1CD��J�1CF�&�1=C%�V�mCI � �3KC�F��"������� �3'=%�J� ��>2���O���2���5&
������-� ��&�����"���$�'���_����*8���������!"��(�F����$���� ��&�K$��2���mAb����_�D �O���2��
�����"���� � ��(�W/������F�+���!"2�&mAb�2���'/%�1P�U��&��8���C�� ��"�S�>��K� �
������C��&�� ��'����������������������;��6CF�����1=C%�_�CD ��"�#�C�D �G[�EC%��1CP�U��C%��g�3C�����������
���������������� ���'�EC$�"����C3$(��C���G�6� �������������:�-��\��)$����� ��)�"�� �����G(��"��C%�
�1P�U��?�'$��"���!"�"�;��6F������))%�� ������3����mAb��$��&�T�&��������
���G��k� �3K�F�2���3����2���^5&bottle�roller ��aC��"��&��%��))%�� �!"�L'���
���������_�CD � T�C&� �C3/?:��"��C':�J��C�2�>����g�eU�"�� �J�1=%�_�D �;�k�S����
��$���� �;I����W�2���Y �%����
%�2�>�~�L$�a&�\��E��A���2���C�3��aC&�\Baxter and diagnostic chemicals�B����C%
��������������������2���C3$(���C�0�G"�C/$���e�$�K ��a��"��&����#��D � ��2�>�1P�U�J!"�%�����������Y��
���"�� �;��6F��1=%�_�D �t�i�!����"����
��������������"�C&��C'$(�1CP�U��C����C)�"�;��6CF������C�����G�6� ��)$����� ��3����O����/���"�
��$� �� ��\�&��'������ ��"�S�>��K� ��)k�!"��D ����
�������1P�U��&�2��$�-����D���'=�&��"mAb����G�6� ��&�*8�*�8�����������C'����C�� ��"�S�C>��C�� ���
���&�� �1F�&�1=%�_�D ��"�G(�1P�U�2���'=�&����E&��%����&�� ����
!&
������������'��F� �3C����J���&�4��) �����D��"�&��%� ��&�H���$� �3�"�&��'$(��>������C&�G��C��
��&��g���'��FCut off � ��&��$����� �2�>���=F����z��L��'$���N�����&�Z%����K� �G2��
"��>����\�!"�L'���"�� �1P�U�;��6F�����
����������������������C'�)�F��G�'C�� ���2��G"�"���C�0��C&�G��C��� ����1=%�_�D ��g���W�� �J�O�)h/�
�O�y����A�O�y��������G ���"�%�H��I��mAb���2���='E���&������1CP�U��&�G�'��
�"��(�1��&�v�'I � ��"�&��%� ��&�4��) ����
���>����k�������������1=C%�_�CD ��"�"�C�� � �C3)���&��>�$�/����������� ��>� �3)���&��>�$�/�����
�����&��$����� mAb������""�>�j��I �!�����3����������������C��2���QC���"��$����� �w��x����:� ���
�"��>�S�?$����%� ���$�O��'/%��&��'/%����
�����M��&���������� 2��$��!����)�6����"�&�!"���Y�'�E$��K�)K���P$�2��1F�&�1=%� �3����J���
����������3$(�G��������c����G� 2����$��"��/%�A��"��:7����'L���B����������C��&�� �1��(�+����&�=
���������"�� mAb����&�� �+� �1��(�+����&��E��� �a&�\�6�$�+���O����&�����
���������%�_�D �Z?:��%�1���O���+���O���4��5 �2������������!"�&�"��2�"�����3�����&��%�1F�&�1=
��1P�UmAb���������C��&�� �Z%�!� (�1��&��A�������������C'����C�� ��"�S�C>��K� ��C)k�"��C:�B��
�2�� ���� mAbw��x�������H��I���M��"�6�$�J"���� �!����$"�����
���:��"�������F"�m������&�J�1mAb��������1C���5F��C%�1C���!"�"�G�=$�mAb��� �3C�����C&�
�"���$�'���H��I�������w��x��"��:42�����)%�� ������;��%����
��
Semipermeable- Membrane- Based systems
�*����� /�O�PC������ �2�3�5Q 9�"� �
������������������C������&��?) ���T�&��'�E$�"��&�� �������� �3���������J�����%~�T�&��"��%���]$�/�
���T�&���"�� mAb�"���� �1=%� �3]�D ��"������Ck�W$� �Q��2��!"�L'��hollow
fiberf=U��k�����&�Cut off��ZC%����K� �G2��AD�888�78���888�*8�B��� ���EC&��"
�������������������C��&����T�C&� �C���'�E$�"��"�����!2�����3������&����!����'F�>���K&�a�����2�����OC��
�6�3?�-�������������������3/'EC���OC���t�C��J��$�C��� �!�� �$��������/�$�`�=U�������&� �3/'E���
!(
��������3�����G"�%����mAb�����������������������2��W$�C �QC���&��%�1���Qk�%��PLD �Q���"�!�
��$���� �����1=%�_�D � ��:��'>�6&�1/E\����
��������������������QC/%�� ��C������Z/�C'����C����C&��C%� "��2� ����'%�F��&�G����� ����1=%�_�D �����
���"�%�a�/K��J�))%�� ����eU�"�� g������������C))%��C ���C�0�!����"�2���':����&�����������2���
������"��2�Z?:��&�#"�5���"����������3����������$��>�� ����\mAb���������\�C&�Z%�Z?:��&�1/E\��"�
��)$� �� �A*<���*������C��QC������g�=CU�Z'EC����"��'������ �Fiber Cartridge���
Small Hollow�B����2��G��C&�G��C��� �����'>�6&��PLD ��"�!���t�m �1=%�_�D
���������3�����G"�"�1�"mAb������������3�������M�O�/����"�%����5��mAb��$����� ������C&��C)
��������$��� ��(�W/��1=%�_�D �2��a�'E ���M��������1P�U�G"��(�1��&��0�&� �)&2� �O��
mAb�"���� �+� �1��(��)$� �����
��
�1���"��� �`�=U�������&�Z'E����"����
The mini PERM ( Unisyn technologies , Hopkinton, MA) ��
CELLine ( Integra Bioscience , Ijams ville , MD ���
CELLine�2����QCC�F��CC&�13&�=CC �"�&��CC%���CCD$������CCi��CCP$T�"��"�"���$�'CC����������������
�AT flask�B����1���!���Z�E����$�>�����PLD ��"��&��������/�$�`�=U�Q��_�������
�������������������������"��"�����C���CPLD ��C&�QC�"6$�6C�$��C��"�1/EC\��"�2�C>�~�CL$�aC&�\�`�=U�Q��������
Mini – PERM � ��1����&�= ��:��M� ���"�������C�� ��C:���QC����!"�&� ���$��'���
�������'$� �F��%�"��"�6�$�AFermentor�B����S��� ���M��&������������g�eU�"�� ���2�>�����$��k��
��$����=') ����
�������C:���OC��� 2��C$��!���88��788���������C&�K$���C&�2�C�$���"��"��C)�6���T"�CO2��6C�$��������
����&�� ����
������%�1���O���`�=U�������&�Z'E���1�6 � T�&�1P�UmAb���Y�'�EC$�ZC?:��"��$����� �
����"���������Z%FCS�������_C�F����C��&��'C��"�"�C���1=C%�_�CD �G6I ��"��$����� �
��$���"�����������PLD ��&� ��>� �3)���&��>�$�/���2�� 6�k�$����� ����
)
�������G����'=U(�+���O���4��5 �2�mAb��������1���!"� � �3����� ���!"��(�F��&����-K=
&��CC/%��CCK�)K��CC ��U� �3CC����2���'=CC���� ��CC&��CC����CC��&��CC �1CCF�&�1=CC%�S�
���������������C)%��/$�"�?�����K= ��)�"�� �S�?$��1F�&�1=%��.�:�#�:��"��%��g�3��X=�� 2(��
�a%�G�6� mAb �O�&�!"��D ��"�+���O����&�!��������� ��� 160��10���4EC:��C&�
� �0"��Unisyn�����&�� �����
���&��"%(���'Hollow- Fiber�&�1=%�_�D ����"�C���C ��/�� ��� ��"�S��� ���M�
�l�����%�2���%Hollow Fiber������C�"�G[�EC%��1=C%�_�CD ��&��%�2�>��&���������������
��1C���!���a�K=��1=%�_�D �G6I �Q�����)%�� ����l�����C%Hollow Fiber�2��
��������������#�:��"� � �������� �3����� ��:����$��"����\��PLD �Q���"��%��g���)k� �����F
��$�"��&������������1���!���a�K=�����&�� �T�&��'�E�������������t�C����!"�C&�����C���C/�$������F�O��
�����C$��"�`�=CU��C�����C&� �3/'E����&��3&�= ������C'%(���&Hollow- Fiber����CD��2��
� �3/'E���G�� ��"��K�)K�invitro �1���Z'E���O��'�K= �����
"��"��'F������� �3�����1���E:��&� "��:����Z'E���O����&���%�aK= ����E&��'�E$�
�"���� �j�&� ��/���K���&�' ���$��� ���!"��(�F���������_�D �-����x�� T�&����
��&���'%(Hollow – fiber ����g�C3$�#�mCD ���3�� ��&�500 mg����'=C�&��C��mAb�
��1���!����:��M������������2��;�&�YT�/5 �Z'E���c�$�O��� 2��$��!��*�88����"��"��C)�6���T"���
���'%(��&���F�a�T"��&hollow – fiber����� T�C&���"�C� � ��C&�_C�F�mAb��!"�L'C�������
��$���� ��� ����'%(�hollow- Fiber����1C��F� ���CM��C&�v�'I � �3��X=�� 2(��"�
��$���� �!"�L'��� 6� (����
�����������J��)C���$�"��C � �C���C)�6��1C�"����C�����$�C 2� ��e>���� ����&��"�\�O���D ��>�����
����)$����� mAb����������2��!�����3�������������� �3��X=C�� 2(����C'��"����C/�0�6%�� �2������ ��
��))%���3��"�"���\�t�M� ��?�����
�����������)�6X��C�� ��C&�������$�'�(� �3����2��!"�L'���-���=$���W/? ���!�>��%�O��)k�Y����
�����������"��3�� mAb��D&�"�� ������$��!"�"����\��������������C%��C)%�� ���%f��J��3$(� ��>��?�'$
��� �4�U������$�'�(� �3���������������� ��&�����) � �3�����$�����mAb������_C����2�C�$�"�� �
"��(�Z���F�������D���5 ������ �3C���invitro ����C����� ��C&�mAb���WC\�� ��C�%���"�
!
������������������+���2��!"�L'C��� ��C&��C/�0��C������%�1���R�D �1���yE �O������)'E��4��)
����&��'��"������� ��&�+� �1��(����
���1���yE �O��IACUC���������%�1��������������2��!"�L'C�����!"�C%��&��2������O���D ��/�0��
��)%�"�������4��m�����+� �1��(�+������
��
��
��
��
��
��
��
��
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
� �
�� -���2� ���0R�2�,���*�SmAbJ���: 9��T�� �
�0U9����/T����
� �3K�)K���k��>�����X=�� 2(Ainvitro�B���2��;�C&� ��C&�b8������C���� mAb ����CK&
�������1E$�"����&�J"���� �!"�&������� �3C�����%�"��"�"�����]���invitro�������C$���$���(��C%���
�������-����m�G�k� ��������������C����� �C�2��$���1C���-��L' ���mAb������)'EC��c�C)' �
� �3K�)K�invitro ������2��W$�C ��C3$(�2��!"�L'C���-���C.���!"�C�$�4��) �"��� ��/���"�
���������2�� "��2�"��5�����&�2��$��>��Y���m�J"���� �R��D�mAb��%�13�������>[��������
����$�C��#�C&�U� ��/�&�G� �"��"��3$(�������C�����J�"���C ��^C5&��"mAb��"�invitro �J��
�������������������' C���C� � ���'�'EC$���C�"��C/$�;C�������!z����Q���/�0� �3F���ANIH�B
��=CC���CC.�OCC/?$���CC&��CC�����"����"���CC �OCC���2�� "��CC5����CCK�� (��"�!�CC$2�"�CC�� �������������
�AAAVS�B�����!"�%��F�5 ������1������"��%�J�1C������C����2��NIH��������!�C��!��C���G(��C&�
��1�������1������'�/%C���������������-�CK$� ��C&�����L��5��G(�4\�5' ���1���!"�%��P$����?�����
����������������!"�C%��g����+"�� �^0��2��!��� ��(�W/��-��&�?���&��)� �1������"�!���1E��
�1�����
*�����������_������&�� �������������� ���!"��2���^5&�invitro����d��J����RCF�������J��C))%��C/$
�2��;�&��k�>b8��� �3�����&���� �������invitro �J�mAb���S�C0�J��C))%�� �������
�"��"�"�����mI= ���O�5 �G�6� ��&��������
������NIH��������=���.�O/?$��1���"�"�O������&����������!"�C%�!������K�� (��"�!�$2�"��� �
������1��F� �S�0�G�6� ��%�1��9��������&��%����&�� 7����S�0�G�6� ���!�C��!���=C �1��F�
�"��"�1�&�] � �)���G��)/=$�"�_�������
��Q�Workshop�������������+���2��!"�L'C���1C�0�)/ �-��C{��J�!�C��a�K=��Y������%��g������
������������1���!"�"����\��D&�"�� ��g������v�'I � ����=%��"����1��(��������"���=C%����O�$��\
���������������������g�$����� ���������%��g��mAb�����"����invitro����"�����g���)�'���J�"���$�
����1����'F�>��P$����������������d�CI'$�� ��C&���C'&���Ck��>����C������C�� � ��� mAb��� �3C����
invitro ������#�C �$�#�CDM� �3���C�� "��C5��a �C���C�������1=%�J��$���� �!"�&���K&������
�
��������� ��%����&�� $������!�))%���ex�� �3������)$� ��)�AFeeder�B��))%�a/0������^C5&��"
%�J�"��� ��"��'/ �1=invitro ����"�J��C��/$�O�/^��������������������$�����/$���OC�
������ "�&��'$(�1P�U�;��6F��"��� ���������� ��C��������C������������&��������N�CK5 ���CM��C&���C{�������
����)%�� �������� �'KLE$�����"�A��������������C'$(��C'F���G��C���� � �C3�������C%���� ��� � ���!"�
���������13��4�U����1���!����3$(�"���� "�&�����������C$���� ���K&�a/0���G�/'���j������O��5��B
������1���O�g������E&� "�&��'$(�������G�6� ������������������C� �G"��(�1C��&�!����C3)���C�%���CM��&
��4��) �A���F�%�B������������!"�L'����g���!"��O�)k�2��!"�L'����&��&�?��-�5��] � ��&� "�&��'$(
�1���1��(�+���2�����
���mAb��2��a��:��W�� ������� "��� ��"�+� �1��(����!"�L'C���+�C ��"�-�5��] � ��&��%
�����������������C%��)'E�� "��2����E&�"��� �J��'�/%�`�^0��-�5��] ��"�1��� ���.����E&�"����
��������))%�� ���gf�����-����= �O���������������)%�� ������;��6F���$� 2�+� �1��(�+����&�2��$
����d�CCI'$��1CC3��+�CC ��"�W��CC�� �X��CC&�U��"�w�CC�U� "�CC&��CC'$(�ZCC%�ZCC?:��CC%
����� ����������1C���2�C�$�"�� �d��] ��K�z����&�1���5F��&������"�-�C5��] In vivo �
�����������������!�C$��>�QC��;)C%�G�� �G"�%��%��&��"���� "�&��'$(�Q���g�$����4�U��������C&��C$�X���
�����������������c�$�Q���� ����6���`����� ��&�����&��K� ��g�2� ��/�&� �����)��2���^5&���3 ���P)
����������"�� ����\�����&�"�� �V��#��������13�����������OC����"� "�C&��C'$(�a/0�a �%��&��2�
������2���gT�&� �3'P�U�J�"��� mAb�����1���2��$�"�� �����������$�C 2�O�C)h/��+� �1��(�+��
�����$�X�&� �3)�y������%�A����� ��U�B����������1C���2��$�"�� ��))%�� �a'I ����l��'$���������C���
�#����"�G���K/�*bb����C%��$��!"�%���3i��J�mAb����+����C&�!�C���C�����invitro ��������
������������������O�%�'�����)$� ��X�"� ����'%�F�1��(��K)������)%� �&��&�1��(�+����&��$�����
�W$� ��/�0�-�5��] ��"����1��(�W�� �2��!"�L'������O�%�'����O����%�"���� �a �����
��$���� ����
����k��>�mAb��������"��C$�����C �invitro�����������������QC���C%�1C���S2T��C%��$�C 2�J�"�C���C�����
���D ��&�� ���������� ���"�_1������'/%���FCS����"�����>2����A������1C���S2T�G� 2��'L���)k
�����������1��� �5&� 2���H���G� 2�����D �G��&�-� �O����%�B�����Q��d�I'$���$���-����&
������"��%����� �������invivo���������"2��C$��� ���f���&�1���#�5F��������1CP�U�G�CkmAb���"�
�
���������������&����1���S2T�W�� �2���/%�Z?:�_�F�1���T�&�1��(�W�� ����13��;�� 2(�"�� �+�
�������������������2���C/%���"�C� �a ���1���OK/ �Z%�Z?:�O����k��>��"���R��6��J�G(���{f������&
������������OC���2���C��$��K�z�C���&��C{���C$�Xh���J��C��&����O�%�'����a��\�2���X�"� ����'%�F
�1���!�=$��%~�����'%�F���1���"��� �a��"����-����= �O��� ��&����
����Z%���"�� ���{f��1D��!z�����������/$����\��X�"� ���O�y�������������"��CX�"� ���O�y�����J�"��>
��-�5�� ���������������G(��K�z����&��/0��/�$���J��$���� �R�\��G�&�A����10�C���)k�B�����C&�1�EC$
0��/�$/��mAb�A��2����)k�B����&�� �!���%����
�������������������C���C)/���HC�$��S��)���&�+� �2��!"�L'����&�!�))%�!"��(� �3�"�&��'$((SCID)�
���d�)'���a&�\��1����������������CK���M��C&��C$��!�C��"�C?�������C���/�$�`�=U�������&����3/'E��
��))%�����G(��"�G� 6/����M��&��)$����� �� ��������c�$�O��)k����
����O��5���%�1���S2T� �'=�&�-��&�?��)%���W��C��G"�%�#�&�U��&�2��$�Q�)K��O����&���(
�����������C�� �����C��!"��QC��G"�%������13�� �'=�&� ��� �������mAb����$�C �"��{�C �
���������!"��(�&����
������������ ��&�+� �1��(�+��mAb��������������C���&� "�&��'$(��>"��(��%��$� 2�1���OK/ �
����������������������C��&�d�CI'$���C3)���C)K$��C��� ��CP$�"��C ��C/�0� �3F����&�J���� � �3)�y�������������
�A��������������C��&�1�C�(�N�C����&�6�$��L) � �3��')%��K�'\��Y���m�B�����C�����J�G(��&�=C ���"��
���Z%�N��� mAb������������������C&�2�C�$��C%��$�C 2��mC�I=�� �C3F�5 ��g��'&��G"�%�#�&�U� ��&�
��CC)k�G�CC 6/�� �X��CC&�UmAb��J�+�CC �1�CC�(�+���2��!"�L'CC���S�CC0�-��CC���"���������
�"���S�?$���$�����/$����
�����������������&�������&�"���a'I � 2���H��� �3�����������&��$����� � �����M��&�-�5��]
��H��I��+����K)�������5��M�G�/'���mAb�������������S�C0�G(��C?�'$��C%��C�"��C ��C��x�����
������������������C��&��C �G�C/��/%�Z'E���`�6���#�m����g�$����S�0����Gz��'$(��&�;)%�������"���C ��"
����������������������C0�&����$�C���C �H�C�I��ZC���C&�#�5F� �3�"�&��'$(���!����$"� �3�"�&��'$(� "��2
� �3'���5F��"�a���invivo ��$"�>�� �#�5F� �3�"�&��'$(������C&�!����$"� �3�"�&��'$(
�����CC��&��CC���$�CC���CC ��'CC��"�&�!�CC))%�1�CC��>�F� �3���CC�����CC��&�"�CC�2�#�CC/':�
�����������$���� �������k�2���X�"�!�))%�}��� �3/E�$�K ���������C?) ��$����� �G���!����$"
#
������������������;��C%��C0�&��C?�'$��"���""�>�!��������� "�&��'$(�#�mD ��g�2��)/���;��6F���&
��(� ��>�$� �G� 2����������"���G�&�a�"��"�6��?��2���5&� "�&��'$���������J�Z��C���C��' �#�C:�3&
����������������2�C�$�"�� �!��$������ ��&�H��� "�&��'$(���3����1���!���d�I'$��� ���������K�'\�
� �3'=%�1��invitro��$���� �!"�"�����������
7������� � �������������� ���!"��Rat�������"��{u ���M��&�Rat��������J��C))%��C/$�������1��(�
/5 �_������&�Z%�����T�invitro ��YT�C/5 ��C ��J��$���� ���>2�������C&��g�3C�� ��"�
v�5.��)/���Z'E����))%�� �������1����J����
�����J�W\�� ��^5&��"mAb�����������������2����6>�C$�J��C��&��C �2��$�"�� �+� � �3�����������0��&��%�
�����X�"� ����$�>�A���YT�C/5 Rat�B�����������"�C��!"�L'C��� 2�C��OC/��� ��C&�������C5&��Ck��C>���^
��� ���� �������Rat����_������&�invitro��������'C�"�4C�U���$�C��� ���>2����� �3���K�����EC&
�1���S2T�1=%�_�D ����
�2��Z%� �3/?:��%��$� 2mAb�w��U�Rat ������$�C�(��C&�� ��C��������1C���2��$�"�� �
���������C&��g�3C�� �2��!"�L'C����C&�+� �1��(�+���J�"�����>2���1=%�_������&��$�����/$
�5.��)/���Z'E���1���S2T�v����
�����������1���2��$�"�� �!��$���������:��"�#�mD ��>��#�:�3&�A�������H��C� "�C&��'$(�2��Y���m
�!���B� � �������� �3�����"����5�����&Rat �����C���_���C���C&�invitro����>2�C��
�$��������������������Gz�C�F�2��aC��:� ��� ��C��������C'���C%��$���'F���"��X�"�G���D �mouse������
��Rat����mouse��hamster����� ��� ��C�������C&�1�EC$� �C'/%� �������rat-rat ��
�W������3��13��+� �1����+����3$(� ��&�a��"�O�/���&����$��" mAb��1CP�U��&�
��������P) ��&�"�5' � �3$"�%�G��%�2��a�\�;�� 2(� ��&�T�&invitro �J!��$������ ��&�
�1���2��$�"�� ����
9���������$"��0�&��$����� � "�&��'$(�H��I�����������"���G(�1���5F�;��%���O�y�����G���!�����
��������������������C��%���aC� ��C ��1E�$�2��$�"�� ��=��[�� �3F��� ��&�H���#�mD �Q���'\�
������������������d�CI'$��O��C'3&�G��C)0��C&�4�U��+� �1��(�+���J�1���S2T�T�&��K�z����&�1���5F
����"���� �"�3)=�����������������1C��&�1CP�U��C3$(��"��%�"��"�"���� ���E&����X=�� 2(�_����
���'$(�2��!� (��� "�&�����������������F�C%��C&�?��-�C5��] � ��C&�#�C/5 �1=%� �3���������&����&�
$
��������.� "�&��'$(�t�5 �R�] � 2���H���!"��$ �1E�$����1��(�+����%��X�"�"���
���������� ��&�+� mAb��������&�"��"��X'E&�1���S2T�������������C��%���aC� ��&� "�&��'$(��&�2��$
�����������G�/��/%�1�����1���5F�"����J�T�&��"��mAb��������2�K��>��C5��M�-��C���C&��%�����C�
����&�!������"�!��������� �3�"�&��'$(�2�� ���E&invitro ��aC&�\�1=%������W�� �2��
�������������������C��Gz��C'$(�#�mC���1���5F�O'F��1�"�2���&��?) �"���$�'���+������2��)'E�$�w��x�
�������Gz��'$(�;)%��� �����)���X�"�������"���� � "�&��'$(����������C&�w�C�x���C�:� ��>����"�C?���
���������������C���$�S2T��CX�"�1���OK/ ��������/�$�`�=U�������&��g�3/'E�����������C'$(�#�C� � ��C&
�O���CCC&����>�$�/��� �CCC3�"�&M��AIgM�B�O���CCC&��>�$�/����3G�A�3IgG�B��"�4CCC�U�
� 2���H��� �3K�)K� invitro��1�"�2��G(��?�'$��%��$���� �!����$"�1���5F�O'F
�����1���G�/��/%��&�#�m��������������6������C��2���F"�mC�� �3�"�&��'$(�����������C'F��O�C)k�ZC���C3�
���������C)�"��C �G�=$�����3&�= ��3OKT����#�C� �����&�C��2�mAb����������$�C �"�"�&��C%��C&�1C���
�������������������wCL:�aC �%�-�����&����"��a/0���"���H���1=%�W�� �2���$�����/$��%�HI=
���&�)&�J��)%"�����3��1��(�+����&����&�O����
� ��&�Y���m�H��I�IgA mAb��%����2�1���aK= �IgA�� �) ��A�v�5.��g�$�����&
������Gz��'$(��&�#�m���13��B���2�����&IgA��������"�������� ��������/��"�����������C��&�aK=C �O��
������IgA�1���!����'/%�+� �1��(�+����&�����
<����������$�����/$�S���Z%����S���G��&�_����������2���F�%���"�� �mAb�����Jt��C����^5&� ��&�
�����������1$�L0�a ��0����0��&������ ���OE%����&��2���a��\�2�2�������������C��/$�Z���CF�����2���^C5&
���������������������C ���$�C����>2�C��S�C��Z%����S���G��&� �3'��:��&�Y�5�����)$����� ������� ���!"�
�������������$�C����>2�C���C3'��:�O����&��)$�����/$����!"���X�"������M��CK)����C'/3 ����-����=C �RC����������������
�AChandler 1998�B����!2��C$���C&��C)$����� ������� ���!"��2���^5&���(�� ��P$��&�J
����F�_�D ��"��F�%\���������G�C$� �!�C$2�1C��&�\����C��&��C%��$��� ���3X$�S���Z%����S����
�����������������2���C'/%�_���C��OC����"��C3$(�� ��J��$���� �!"�"�H�I=�*8�����������"���� "�C&��C'$(�2�
���E��� ��������������$2���� ��$��!��� ���3X$���T�&�S���1P�U��&�_�D ��"��%��g�3'��:��&�����C>�
����&�_�D *���������������&��?) �S��*8�����������&�_�D ��&�1�E$� "�&��'$(�2�*8����"���S��
%
��������������������1C3��!�C��t�C��G�C 2����)�6���%���(��/$�1��&�!"2�&����V����"� ���x�����
��'F������x��1=%�_������&��3����� ��>2������/$�������������
���������������������C������C&�!�C))%��C�����Q��2�����X�"�1��� ����&�1��� �EK��2��S���1�L�%
����C&�����C��!"��QC��G�����>2��������&�-��L' ��$����� �J��X�"�!�))%FCS �*���2�
�����������������"� ���E��� ���M��&�������!"��G�/���%��)%��/$�O�/^��V��1��� �EK�*��
FCS�1��� ���2��!�����3��"�%�����������X�"����
����������������������"�aC%�!��"�� ��&�![��&��%��)��&�� �������1�L�%�O�/^���&�_��� �-����= �O��
��������&�� �Z3 ��eU��������������C%�S����\�F�_�D ��&��g� �������������� ���!"��G"�%���>2��
������������������������_C���� ���EC��� �6���C$(��C&�2�C�$��C'F�>����C\��C�gf��"�� �1��(�2�����G(���3����'&�
�$2����"��"�� ��������G�>�������������#�mC����C��%���aC� ��"�-��C��x��"�?��mAb�����#�C/0���C��
�"�&������!��/���T"��3$���� �t����&��X�"��K�z����&����
�������������� �C3�"�&��'$(��%��g��� ��������G�����>2����"������K= �O���D �2���^5&IgM�
����IgA������������"��$��!"�"�+��6>�S����\�F� �3'��:��&��))%�� �����������������C������C&���%f��a��
mAb ��IgA����IgM�����C%�1C���OC���IgM������� �C\�!�C))%�1C����� "�C&��C'$(�QC��
�����������������"�C��&��$�CL0� �C3���/�&�2�� ���E&��"�G�E$���)/���������"���'&���%�1���G�/��/%
���(�� IgA����1C����$�>�C$�>��$�EC$�� �3���/�&��&�!��/���A��aC��\�2�Begers IgA
Nephropathy��2���CCK��G�CC)%���CC%��CC�� ��>�c�CC$�O��CC��l��1CC��L$��Henach-
Schanlein Vascultis���&�� �1���� ��>����B����"���C �c�C$�OC���2��S��Kh����"��%
�������������������"�C���{�C ��)���C&�G�C �"��C&��?) ��%��$��!�=$�HI= ��g�2�4��(�ZE�$�K ����OC��
����� �C3�����6����C�����-���.�-����= IgA���IgM������#�C5F��K�z�C���&���CM��C&��C%����
�� ����)'E��������C�"��C �G�=$�J��$��"�T�&����%���a����������C%�1C���!"�C%�HI=C ��C'�/%
����������#�C$��%�) � "�C&��'$(��������)� 2��"������F��IgA���������!"��(�1C��&�1=C%�_�CD ��"�
�ZCC%����CC� ��DCC��' � ��� ��CC������2���CC/%�"��CC5��#�CC:�3&�1CC��IgA�_���CC���"�
invitro����������$��!���;�� 2(�J�a�K=����1P�U�������&� "�&��'$(�2��T�&�����C&��C�%���M��G�6C� ��
FCS�����C'$(�1CP�U��&�R�\"���������$T�M�G"�%��&�K$��J�1=%�_�D ��&�!����F�.��
� �3��K�� �������2��15$�/ �13�� "�&IgA�"��"��X'E&�#�5F��U�����
&
��k��>�Roggenbuck and Others�A�*bb9�B���2��S�C>��C�� ���"�� mAb�IgM�
������ �3�����&������'%������invitro��$"�%������������"�C���J��*��FCS������ ���C.�_�CD ��"�
�O�&� �3=)%�����J�!"�&mAb�IgM �1��:�;��%��&��?) �_�D �-���%����X�"���
����������"�>�H��I�� ��e����K���"�v�5.�l��'$��� "�&��'$(����H��C� ����:� ��"�Q�)K�
������_�F��&��2�&��&��"�\� 2��78����2�IgM����������G��C�F�G��CX�"��C��&�� ���'%���)/����� T�C&
%99/9��������������H�C�I��#�CM��"�����C�"�;)C%���1��&�\�2�IgM��������_���C���"�!�C���C�����
invitro �$��!"�%�!���= �����
����+� �1��(�+��$� 2���K�mAb�������1C3����C ��� �C3$z��C'$(�����2� ��/�&�a ��0� ��&�
����������C�� � �3�� ��"��g���%����'E�E%�������&����C���������;��C 2(��$�EC$�� �C3���/�&� ��C&��������
1���2��$�"�� �J"���� �����
��YT�/5 ��=�� 2(�O�)k�������"��"�#����-��{���&�2��$��A�������"�G�=$��K)����)5�mAb�����CP$�2��
�"��"�#���F� �3E$�z(��&�2��$��)���&�;���-�5��] � ��&����1����{� ��$� �"����
�������2�� "��2�"��5��"��� �O����"mAb����������2��a�\����&�4�U��v�'I �-����m����3�����6����&�
����(� ��&��$�/$�Q���K)������������������2�"�;��6CF��-�C5��] ��"�"�C��d�CI'$���'=C�&�-�C�g6��6���C$
������������"��2���"�� ��������������&�2��$���yE �O������$���;�� 2(mAb��������"���C ��CK)����C��"��"�
�"���a��:���"��)5 � �� (�l��'$�����$��X&����\�;�� 2(�"�� ��)$��'&��F�%����
���������"�-� �3&������g�2�1��/��!�P') ��U�"��� �����&� ��&����������>�J� "�&��'$(��g���%�"�� �
1����F�.��1��� ����)k��&�2��$�-�\������
,����������2���C'�5/��-�\������>�1=%� �3����IgG�������������"��C%��C)%��C �"�C?���#�C$��%�) �
�������C$��!�C�����2�K��>�1��(�W�� ��"�!����������&�= �#�mD �2������L' � ���1�5\�
�/0����Gz��'$(��&�#�m���1�F�i��&��?�'$��"#&�"��e>�� ��{��G(�Z3 ��K�z��������
Leibiger��G���CK/�����A*bb<�B���C����mAb� IgG ����v�C�����'=C%�_�CD ��"��������
����������������G��C��2�K��>� �C3��X����S�C/���"��g�C3'$��2�$� ��)\� �3���>� ���"��%��))%�� ���
��)��&�� �����������G�C���C��2�K��>�O�)k�"��� ��^5&��"mAb����������aC/0��"��C�������CM��C&�
mAb�� ��{���"���$� ��{f���X�"�"��� ��"����"��e>����
(
�1=%�_������&���� "�0���U�V���O���G�>�)E��$invitro��?�'$����)�"�� �1�E$�
�������������1�0��&�+� �G�&��"� "�&��'$(�O���;��6F���%��$��>�� ��#�m�������2�$�C � ���!�$��>��&
������&�� ����������������C&����"�/$�Z�P)�� ��M�G����� ����1=%�_������%�1���!����0"������C����
������C���G�C���C��2�K��>�O/C.��"��P$�"�� ��g�3'$��Q�����AMary and Orbers
1997�B����������������Z����$��0M��!�����O���-��{���&��)� � �)�������='$��2��� �� ��J�����WC\����"
�������������������C\���DC��1C�5\� �G"��(�1C��&� ��C&�!�))%����2�K��>� �3/�6$(�G��&� ��K'�"
���������Q������ �������J����)\� ��>����#�K�� � ���!��UIgG�������!"�&�G��>�������"���%�Q��
�1E�$��)'F���1�"��.�:�G� 2� ��(�OF��&�4�U�������
������������a�K=C���&��?) ��$����� �1=%�_�D ��"�G����2�K��>���D$mAb����� �C3�>[����C&�
�"����$� �"� ��"�&��%�13��Q�'�)%�%� ��F����
@�����C������ �3������K�'\�� ���!�C))%��C����� �mAb��C ��0��C&����aC��\�2���2�1C$�L0�a
��$��!���!"��(�|��\����/I ����$���+� �G�&�"�������&�4�U���3��������
������������������z�C�������C��&��C$�����C �� ��C������ �3'=%��"��/���K�� ����|��\�J��/I ��>"��(
��������"����'��"�&�+� �G�&��"�1=%� �3�������������������!�C))%�!"�C�(�aC ��0�OC���G"�C&�O�C&�2�����
�����"������&��$�����/$�������������������+�C �QC��O���&�C)&�J�"�C��S�C?$��#���C' ��C&�K� ��C.� �C���������
������������������� ��C&� ���EC&� �3C�� ��CK���:��"��C�"�-�?$����+2����&� � ��������Q���$�����
�����O'���������������������C����O�C&�2��#�����1\���3�� �!�0��&���1���2��$�"�� ������ � ���
�1F�����
Stein �A�*bb<�B� ���M��&����Q�)K��O���1��F� �1���!"�%���gf��a�'E����
��
� �
� �
� �
� �
� �
� �
�)
� �
�2�38*��V��W��*���X��T�2�����Invitro �*� Invivo"� �
���� �3����4��5 ������6 invitro������C����� ��C&�+�C �1�C�(� �3������mAb��OC����"�
�1���!���HI= �1/E\��� �3����YT�/':���%�"�%���������&invitro �2��;�&�b8��
�� ��2��$mAb��� �����������)%�� �O��������J4��5 ������6 �2���^5&�����������-�C$���:�;��C�(�"��� �
������C�����G"�&� "�m'\���&�_��� ��X�"�-�0�.� ���"�� ����\������"�� mAb��1C�����
�������G��)0��&�O�g���;I&��"��h$�)k����� �3C����invivo�����invitro������� ��C?���C����� ��C&�
mAb������� �3����1���!����%~�invitro������1C���OCK/ ���*�����C��,������C�(�+����C&��&��1
����&��'��"��)�6��+� ����
����������������$���� ��0�&��%��g����'%�F�2���^5&invitro���������� �C���C)�6���C��&��C)�6������
���������������ZC%��C�����1C�0��C&�4�U���%�1���-�6�3?�����>��%mAb������� �3C�����C&�� ��C������
invitro���1��������������������!"�L'C���vC�'I �-�6�3?���&�_�D �c�$��)k�2��R�D �����&�S2T��>�
����]$�/��J��)%�������������������f���&�R��D����"���� �T�&���%� ����)�6��J��'F��� ���L������>��%�
�'F��� ���
��
�2�38*��2��X��invitro�"� �
���� �3����invitro�����������C�"��C �;��%� "�&��'$(���������:� ��"�����3�� �2��!"�L'���J�
������������������������WC�) �G��C)0��C&�J�"��"�"�C��� "�C&��C'$(��C������mC\��K�'\���3�� �2��G����� �� ������
x � ���#���e�"�%�!"�L'��� ����
���� �3����invitro�YT�/5 ����6>�&��g�3������!�������������t�CM�2��J "�C&��C'$(�!�C�$�������� ��&�
���)'E���g���"�15)����������������������C&��EC��� ��"��C����� ��C&�1=C%�2��!"�L'C����C':���G(�1�0
�1��� "�m'\��-�P: �a��"��&���-�$���:�2��!"�L'������
�� �3�����"�invitro 2��$���&��$���:� �3�K������g�����&� IACUCs�1E�$�����
�� �3�����"�invitro�1���Z%����1E�$�G���:��&���%��"��&�?���&�V�I����&�2��$�����
�!
����� �3�����"�invitro������������������!"�L'C�������C���C/�$�`�=CU��C�����C&� �3/'EC������G(��"��%�������
"���� mAb�1��(�W�� ��"��h$(��&��&�= � �3'P�U��&�4�U�������C������C�(��C �1��&
���&�� �+� �1��(�W�� � �3�>"��(�2�� ��0���"���� ����
��
�2�38*��V��W�invitro "� �
�������������&�_�F���2�-�K$�2��Q������%�"�%���������&<�7����j�&� ���� ������������� ��J�"����
� �3�����&��%�-K= �2���^5&��&invitro��))%�� �!�����"���� �j�&� �����
� ���������^5&���$���� �O�&�2��1=%��"�����))%��/$�����d��1=%��"��������
�� �3����Y� �/0�invitro �2��!"�L'����&�FCS���C3�"�&��'$(��^5&�"�&��%��%�"��"�2��$�
��)%�� �"��D ������ �3����2��!"�L'��invitro ������� ��&�mAb��!"�L'C����&�Y� �/0�
�2�FCS�:�;���(�c�.� ���D���&��%�"��"�2��$��1��������"�� �-�$������
��������� "�&��'$(�4��) �G������2�K��>�G���F��A�����C�����t�&invivo�B�����1C���OCK/
�-�=�� 2(� ��&���� "�&��'$(�#�mD invivo ���J��Cg�2��C)/���1����;��6F��a���&�J�
�����������������"�W��C��G���}�������K�z����&�#�/0���"�-����x��J�#�m����&�a��/��;��%invitro�
�"2���4��) ����
���������������������� �C'/%����C� � ��C:�����C��1=C%�#�mCD �����g���W�� �J���%���M��&�mAb��������
�A��YT�/5 8*�8���88��8�B���������������1C���+�C �1�C�(�+����C&�1�E$��'������ ��"�����C���
����������������/�$�`�=U�������&� �3/'E����%���)%���������2���g�C3'P�U��$����� ��%�1���!���"�?��
mAb���= � �3'P�U��&��E��� �a&�\��)%�������+� �1��(�W�� ��"�!���!����
���������1P�U�J�1F�&�1=%� �3�����"�mAb������������c�C.� �OC���J�1���Z%�1=%��g���W�� ��"�
����������������� "�C&��'$(����%���a� ��$����� �"���%��)%�� � ��������� "�&��'$(�w��x��a:��
���"�;��6F������)�6����G� 2����)%�!����$"���� "�&��'$(�J���"����x��������
�P�U��4��) � �3'mAb���(�1��&��������/�$�`�=U�������&� �3/'E����"��$����� �����
������1��� �3������'=�&�mAb������ �3�����&�!���������invitro����������C/�$�`�=CU��C�����C&�
����������� ��� ��C������#��C��-T�mCD ���!"�C � � �������� �3������&��������!"�C ���'=CU(����
��������� 2���H���O���&�)&�J��$���� �"��"�S2T��5��] �2��a�\�����)�6��������
�
���mAb������"�!���������invitro������C&�1�E$� ���v�5.�#�m���a��/��J�mAb��1C��&�
�"��"�1��(�+����&�!� (����
�������X=�� 2(�1=%� �3��������������ZC%����C� ��C����� ��&�Y� �/0�JmAb����������C� ��C������C��
��(�+���2���'$��>�G(�_��' 1��)'E��+� �����
A(Hendriksen and de leeuw 1998, jackson and others 1996 , Peterson
peavey 1998, marx 1998 , lipman 1997 )��
����"��5��mAb������ �3�����&�!���������invitro���������������"�2�C�$�"��C �ag�C���"�C5��1C�0��C&�
�1���"��D �N�'�"����
�����������"����eU�a%�!��"��(FDA)��������������QC���$�EC/��-�C�{�� ��C&��%��$2�� �O�/I��mAb�
�������� �3�����&�!�����invitro����Q���&�mAb����������C�����+� �1��(�+��������&�Y�\��%�
�1���!��*8���"�%��)�6�����&�����T"�G���� �����
��
�J���: 9��J*��2��X��"� �
��������2��T�&� �3'P�U�YT�/5 �+� �1��(�+��mAb������������� �3C����4C�U���%��)%�� ������
����$����� ��%� �5&�w��x�)����!����$"���� "�&��'$(��������"�;��%����G(��{�����)%�)��2�C�$�"�� ��
��&��/$)������
�������&�= ���"�� ��K�'\��mAb������� T�&�1P�U�"���� �!"�L'���mAb�����W�� ��"��P$�"�� �
�����������������1=C%�W��C ��"��C%��CX�"� �C��O�y�����-��{��2��+� ��'��(invitro����"��"�"�C���
��)%�� � ��>�������
��������� "�&��'$(�!�))%�������+� ��'��(�+����"���J���$�������1F�&�1=%� �3���� ��>"����&�2
�"����"���$����
��
��
��
��
��
��
�J���: 9��2�38*��V��W��"� �
��������������������C$�2���1C�\�� ��C&�2�C�$��C%�1����g�3�� �2��S��� �!"�L'���a ���+� �1��(�+��
��$��"����
mAb-������ �3���������&�!���������invivo�������c�)' ���� � �3)�y����� ��:��$����� �
K/ ��%����&� �X�"� ����X'=U(���"���H��I��S6�'E �1���O����
������������������"��C%��)/���Z'E���H�$� ���"� ���+� �2��!"�L'���-�����"�+� �1��(�+��
�"�&�� ���T�&��)�6��J��$���� � ���3X$�V�mI �!���1PF�D � ���W/'?��
�� �3����invivo�"����3�� ��"��3����a&�\���2����"�"��0�&��$����� ���
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
� �
�� -��24� ��5/��.�/�01�/���6�+/� �
��64T��'���������
�"��:�<888� �/)�����h&�'%��"� "�&��'$(�#�$��%�$� �Lincats�1���!���1E�������
������Z%���"�� ��"��3$(��'=�&�A���2���'/%*�8��S�>�B����������!�C���C��������C���D��t��C�����P) ��&
��1���������S2T���!"�&�RF� � ��?���P$�2���3$(�2����&�"����O����&�����L' �N��� ��"�"�&
�$���������J�1F�>�� �S�?$��������D����%��"��h$(��&�1�E$����
������"��:����������� ��>�� ��?���P$�2�*8��*�8����������J�Z%�N��� ��"�������G��)0��&����&�S�>�
���>�*88���*8����������� T�C&���_C��' �N�C�� ����&�S�>�*88���������d�ECD �!�C�$���C�����S�C>��������
���"���� ���������mAb�� ��"����������"��>�� �-������P) �����&� ��?��N���������J��H�I=C�
��D��J�G� �"��������$� �"�a ��0�"�?�����-�����
��
��/���4�*��Y >P��Z�,�2� �24� ��5/��.�/�01�/���� -��"� �
��G�6� mAb����������������� ���!�C3&�G�C 2�J��C)�6��aC� ��g����'%�F�1�/�����2��$�"�� �J���aC ��0�
������"��"�t����&��X'E&��$�$�\�����)���"������������G�C 2�J��C)�6��"���C ��mC�I=���'&�\�����E&�W
�����������"���� �W\��������"�� ��$�$�\�-� �6����� ���!�3&���������C������mC�I=���'5)��N���
mAb����������������"��"�"����"��2�G�6� ��&�-��$��&���_��' ����Z%�G�6� ��&�YT�/5 ���������CP$��"��C&
������������� �a&�\���M��&��$� �"�15)��J� ���!�3&�G� 2����)�6��G�6� �O'F�>������C'/%� ���CP:
��������"�� ��1������������������1C���"�C�2��C��_��' �6�$�������G�6� ����m�I=��15)���&�1�E$��
�������������C$�>���� T�&� ����)�6�����$�$�\���'����&���1���!���#�')%����E&��$� �"�15)�
�1���N�E:����E&�+����"����x��������������$� �"� ���t�5 ��%� z���)K���&�15)�
����J��)%�� mAb���$��������������C)%��C ��C�����_C��' ��C��Z%�N��� ��"�6������"��C������C)�6�
��� z���)K���&�15)����������������W��)C���C&�1�EC$����C����"�� ��'/%��m�I=��W��)���&�1�E$
����1C���Z3 ����E&� ���!�3&�G� 2�� ��1��������"�� ��'=�&������$� �"�����"�O���&�C)&
�������������K ��K)����$���������&�� �W���� ���!�3&��&�2��$�15)��O��������+��F���2�&��"����#���G
����&��'��"�J�"��"������%��/0�#�M�T�/':���%����mD � ��&����
�#
��� ��?�������mAb����������������"��C5���C&�R��6�����#������6&� ����&�1=%�2���'=�&� 6�k��&�
���"��"����':��+� � "��2�����������������2��;�C�� ���CP: �aC&�\�;C��%����5��S6�'E ���%�O��
��������"���a��:�G�)�/M�����1���������������������"�C� ��$����� ���1�����������P$�"�� �������!"
���������������� ��&��)%�����������>"��(�G��&�#�mD �Q��6�$���������� "�&��'$(�2�� ��?��4��)'
���������������������-��C����� ��C&�T�C&�1C�L�%��C&�-�C$�K ��G"��(�Z���CF��&�2��$� "�&��'$(� ��?�������
invitro �J�invivo1�������̂ C����1C�L�%�#�')%� ���:���O�)h/���S2T�1C�L�%�O�/
��������D��-���/0�-� �6������1��GMP����������1���S2T� ��?�� ���!"��(�F������� ��&��%����
��������������� ��eC�����CK��2��G�)�/M�� ��&�#�mD �1��� ���;�� 2(�O�)h/����!"�%�1��0�
�����1��� ���.�#�mD �1�L�%���������������wCL:� ��C&��G(�G"�C%��)'EC ����������������&��2��
�������J�1���S2T�!�))%�t�m ����:���FDA��������$�$�\��)���"����G(��p������"��C����"�� �-�K$
�-T�mD �;�� 2(���1��mAb�$�E$��!"�L'��� ��&��q�1���!"�%�� �6������
��
�2�38*�invivo�*�invitro�24� ��5/��.�/�01�����2��<��� -���2� �"� �
��������� ��&mAb����������+�������� �1��(�+����"�2�� ��?��invitro����"���� �!"�L'�����
�� ��&$���������������S�/���)�6��J��$� �"� ���!"��(�F�"�� ��"�6��+���d�I'��&�!����C����O��'=
���"�� �V�m'��"���&�������
��������������������wCL:� ��C&�J�������2�������������2��;���a �%�1�F�i��&������� ����)�6������&��&
�+���G�$�"�"�m'\���$�$� � ��?�������invivo ��)�"�� ����\�����������J�"����O����&
h/��������� ��%�G�)mAb�������+����&���%�� �"��J"���� �T�&�invitro�����C�� "�mC'\�����EC&�
�������������� 2�C���C)�3&� T�C&���1&�{� ����)�6�����2�J�1���A��������d�CI'$���C&�"��"��X'EC&��C)�6�����
Sub Clone�������������O��'3&��&�mAb���"��C��������Z%�S����&�_������"�������
�S���G��&�_�D �B��������&�j�&� invitro �&����"�C��� �������J��������'=�&����� ��
����������������&�J�S�>����`�2���&��)�6�invivo������"��"� ��T�C&�������x' � ���)�6����'����%�
�����)%�� �1&�\��A��aK��B�J���������������C' ��"�ZC%�G�6C� � ��&��������)�6���E��� ��"�invitro�
������2��������!"���&��'E&21������,�&��&�����������������C���C)�6��OC���1���OK/ ��)k����J�1����'=�&��
������������������C���"�J�"�=C$��3)�EC)K��1\����-�$���:� ���3X$� ����)�6��a� ��g����'%�F�a ��
�$
�������Z'E���J�!��$�������� ��%�!��"���X=�� 2(��������d�CI'$��YT�/5 ���1�������F����&�G��� �
�������������K�������"�O�)h/��J�1���Z%�G(��"�G���:�2��!"�L'���G�k�"���� ����_�D �2��G��'&��
���������������)%�� ������;��%������ �3$z��'$(��&��X'=U(�"�%�!"�L'���S���G��&�����%��$� 2
����������"mAb��������������� "�&��'$(�2���/%�G�6� �O�)h/����1����$��D&���Z3 ���'%�F�G� 2��
Z'E���1���2��$�"�� invivo �_�F����������������2�"���� �d�I'$��,���#�CM��C'L�������
��=%�� ���"�Z'E���invitro ��1C���-��CL' � ���P: �a&�\���M��&��$� 2�_�������
����������������"��C �Z'EC����&�� ��������G"�/$���>2��� ��&�S2T�G� 2�-� ��&��X'E&�������G� 2
����� ���!"�L'��mAb�"��"�2��$�"�� �����
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
�aK����
�%
������G"�&��&�G� 2�a��"��&���$�����&�S2T�G� 2�;��6F���� 2����)�3&�����O�C5 ����C� ��C����� ��
mAb������������� ��?��N��� ��"�J�invitro������������&�1�E$�invivo�������G�C 2��C&���C�':��
�"��"� �'=�&����
�������������������"�1C�0��C&��C%�G� �"��&�j�&� �Q�z��(� �3I����1�/����M���&��$� �"�15)���"
�������������� z���)K��2��Y���/0�J��(�� �"���&������Gz��'$(�S��� �O'F�>����\���5 invitro�
������"���� �!"�L'���S���G��&��������������C�2��)'EC�������"�� ��?)����"�Q�z���$�/��� �3I���
������������������ �3����2�� ���E&��"������� ���!"��W�) ��3�� ��%mAb���)'EC������Z'EC��
������������2��!� (�1��&� "�&��'$(�G"�%�"���&�a��/��G�E$���)/�� ��%�"��"�+����?) ��$����� �
�������{��;��%�����3�z��(��&mAb���6����"�C���������������G(��"��C%��g�3C����O���&�C)&DNA�� �
�������������+�'E>����5����J�"������ � "�&��'$(� ���Gz�O�6X����G�E$����'F����1������$�E$�
���������� �3�� ��"� "�&��'$(����������3�"�&��'$(�G"�%SCID�A������)/���Z'E����%��g�3��
�����$��"��L�5.����E&�B����Z'E�������invitro�������������C))%�aC:����aK=C �OC����C$�����C ������"
���������K)���O��5�� ��&������� ����%��$� �"�15)�mAb����������J�1C��"��C��������P$�"�� ��{��
��L'����&�YT�/5 ���2��!"mAb�Z'E���2��!� (�1��&�invivo�S�?$������G�C 2����2�"����
����������1������O�g����������)�6�����'����%� ���!�3&������������$�C�/%��$�C 2�!��"�O�C/���"��C$���
��&��g�3$���������+����invitro����������C�"��C �+�'E>����"�����������+��� 2�C���C)�3&��C'\�
invitro ��g�3$� ���!"��(�F��g(��%�-�0M���$��/%�J��$���a�/K��#�mD ��5������
��&����������S�?$���g�3$��)�����)%�� �a �%���FDA�)%�� �#���������
�������������������C&�j�C&� �-�CP: ��'=C�&�1C�/����C&��?) ������ �3'&�\��J��m�I=��W��)���"��
��������������������"��"� �C'/%�1C�/�������C� �C3$z��C'$(�"�����K���:��"�J�"���� �����)�6�����"
��������+���2��!� (�1��&� ���!"��(�F��?�'$invivo���������!"�L'C����C��!"�'E>���M��&�YT�/5 ��������
��$���� ��� ��%� �3���invivo ��������Z��C3��;��C%�O/C.��C��!�C���C)�3&� �C?$��&�
����������;��6F����� �������mAb�������J���������"�C��aC��:� �'=C�&��������� 2�C���C)�3&�OC�������
�������������'%�F��&�-�$���:�2��!"�L'���;��%��&��?) ��$����� *8�������������EC&�G�6C� ��&��%�"���
����������)%�� �Z%���������� ����)�6�� "��2�������������ZC3 ����EC&�1�C�(�+��C&������� ����)�6�
���������1�����x' ����E&�1��(��������"��)�6����'%�F����2�J1��������"����O����&���RC��D��15)�
�&
����5������A��������������������!�C���C)&��C�����$�C �"�aC ��0��5C������RC��D��N�����&��%��'5)�B�J
����������#�m���a��/����������G� 2��&���������O��'=�&mAb���"��"�����������C' �2��!"�L'C���O���&�C)&
Invivo������invitro��������t������&��X'E&�z������1�L�%��&��X'E&�O�)h/��!Mab����C�����
(��"�������!"�������&�!���"��"�Z'E���G���+��&�������Qk�%�N��� ��"������� ��&
�����C�����+����C&�1�EC$�G�k�"��>�� ����\�!"�L'���"�� �4�U��1��(Invitro � ���"�
��)�3&��&�2��$�G��&��$����� ���1��� ��T�&�������G� �$����!"��QC��1=%�_����� 2���
1=%�_�D �"�������"��>�-��������
��
�J*��� �� -��invivo�� �
F���������������������+����C%��C)%��C �HI=C ���C�2�1C���ZC3 �� ��������Q��Q�z����&���'��1=C%
�����X=�� 2(AinvitroB�������������"�C%�!"�L'������ �1��(�+���2�����&����1���RF� �����!�C0
��1P�U� ����K�z����&���'F��O����&mAb��1�C�(�+���"�� ��"�O�)h/����!���������
����������"��"��C{��1�C�(�������1�/%� ������ ����������G�C��D ���������+����"��C���"��C�����a)C�
invivo ���invitro����4C��) � �C3$��%�d�CI'$���������� ����x' �Z�P)���&��)$����� �
��'$l������))%��)�3&��������������1���Z3 � �'= � ��&��)�6���'\��!"�"�G�=$��&�?������)�3&� ��&
����������������+����C&����#��C��!"��1����'3&�J� "�m'\���P$�2��Z'E��� 2��invivo������C�:� ��C&�
����������$���������+��� 2����)�3&invivo������������S���C ��C������%������� ���!"�� ��&�_�F�
��������� 2����)�3&�� ��J�1���2��$�"�� �"��"invitro������������1���S2T������� ���!"��S�/�� ��&�
��������������#��\�a&�\����mAb�������&��'��"������������C������"����CI ���'%�CFinvitro���ZC3 �
�"��2�1/:2�����%��&����':�����2�1���"��"�!��"�+2� (�a)������T�&�1�"���J����� ��C&
����Z'E��� 2����)�3&invitro�������������O�C/���C%�1C������':�� "��2�t�m ����K��ag�����&�
����������������"�����)�6��;��6F�� ��&��/3 �a �0invitro���1����������)�3&� ����%��g����x'
�����+����&������� 2��invivo�����C$��e>�� ���{f���������������C��J��)C��J�OC��a �C���G��C�:
��������G�6� �J����X=�� 2(����������������ZC?:���c�$�J�������I��"��5��J�!��������� � Primer�
1����������������������G� �C$��� ����C���$�C�� ��K'C�"� ���$���� ����E&�2�M��&��$����� �a ��0�O��
�1P�U���1��(������mAb��$��e>��{������
�(
�������������YT�/5 ��))%�� �������1��(�Z%�Y�0�$��%��g���G��%�d���J�#�� � ��&������ ����)k�_�F�
������������������"�C�2�1��(��%��g���G��%�d����K���:��"�J��)�"�� �a�K=���\�L���!�L:��"���6&
��������������������"��C%��C))%��C �����������Kk�%� ���� ���2�� "�5' � ����$��%�J��))%�� ������
��������"���� �a�K=����L�� ���1/E\��/��������������C%��$�C��d�CI'$�����&��g���G��%�O���&�)&
�����Qk�%���S�$� ���� �����������))%�� ����������Z��3 ��'/%�������������4C�� ��C���"��C���C��I�
�������1P�U�O��'=�&���#�mD �O���T�&���3�mAb���������"�C���C �+�C �!��>�Q��2��������"�6C�
�������������������C���"�������I��J��)�"�� ����I��!2�������K��_�F��%�Z��3 ����E&�������!"��"��
��������&����S2T�+� �"��5�2����S�>����`�mAb����G�6� ��&�7������%��&��&������O���&�)&�J���"�� �;
���������������#�/5 ���M��&���"��"�+� ��K�)��%�_������&��X'E&�2�? �!"�L'���"�� ����I��"��5�
����&����&���&�������I��Z/�6%� ����
�����+����&�d��] ������invivo�������������J�"��"�����C��!"��QC���/��3��15��M�;��%��&�2��$�
�����������))%�a �%����������!��"�Q��!�$2� �3�� ��������C�%�d�CI'$����������C��x����4C��) � �C��G�
����������������C)�3&� ��C&��%��)'E��������"�+� ��\�L��!�L:��&�!���R��6�� � ��������1P�U
��)���) ������� 2�����1P�U���Z?:mAb �����d�CI'$��G�C�%��C&��X'EC&�J�!���������
�����Q���/'E����E��� �O�����"��"�!�����������C)%��C �aK= ������������ ��C&�!���O��C'3&�O���&�C)&
�� �Z/�6%�C ��C&��G������+����"�#�mCDinvivo �������+�C ��"��C��G�C�%� �X��C&�U�J�
����������������C)%��C��������#�mCD �O��C'3&��C%�1C����$��%�2��!"�L'���������"�#��C���C���_���C�
invivo ���� "�C&��C'$(�J�����C�� ���!"���/��J��_�����O����"�O���&�)&�J�1���d��] �
��������������&�!�=$� 2����)�3&��'\���':�J��))%�� �����������1���a��"�O�/���&����&�R��6���%�
��"��%����������!"��YT�/5 �+� invitro ��)%�� �wL:��)%��/$�����d������
������������������QC��1�C�(�+����&�������"��X&�"����������) �Q�)K��Q�������� ��%��E%� ��&
����1���!"���+�������������������1������':����� �!�))%��)��5 �Q���&��3�� ��$�2���!���= � ��&
�������I�� ��&����1\��O��'3&�����������������'=C%��C��&�+�C ��C%�����$� 2���!"�%�O��5��1��(�W�� �
��"�����)%�O��5��������������������-��C����� ��C&���"��"� ��T�C&�G� �$���J�1����'5����1��(�+��
���������������������)%�� ������� "�&��'$(� T�&� ���1P�U�J�1������ "�m'\�����E&�_�����:���Z%
�������������T�&�N��� ��&�G����� ��'5�����������"������E&� ��&��������C)�6�������� ���!"��2��
�)
�+����)�6���)$�/�� 2���H��invitro �1�������+����C������"��%�aK= �O��'/3
invivo������������������"�G��C�:�G�C�"�4�C�(�-�C$�K ��O�)h/����-�$���:�2��!"�L'���"��"�"����
�����������������C����'C���&����a/5����'�"�������)��&�!���$�+2� (��'���&����O�E)K���K�����
����� ��)��&�!�=$�������������C'\��6?&����"��=) ��&���� �O���&��>�$�/����X'=U(�"����J����&
�����������������&��>"��(�G�K ��J�"���� �!"�L'����)/���Z'E���v5.��&����3�� �2���%��� ���Gz��
�����������T�C&�1C�L�%��&� ��� �$�&���d��] �1�L�%��&����$���:�2��!"�L'����&����':���%�J����
����1 ��O�/^�� ��&"��"���X�"�-K= �2��J�������)C��&��C �������������C&�1�C�(�W��C �z�L��'$�C�
�J�T�&�10��Pristane�"����'��"�&��':��&����"��(�� �T�&�1/E\��&��������
��
�� -�����J*�Invitro�� �
����-��������%�������x' invitro������������������"��C)�"��C ����C\���{�C��1CD�����G(� 2����)�3&���
������1���!����g���� "�5' �-T�� ��������"�C5' � ��?�� ���Z'E��invitro���������C���'C����
������������������J��)'EC��-��C���"��&����Z'E���O���J��)%�� �!"��(�&�������&��%�-��L' �-����':�
����������������������C))%��C ���C���1=C%�!2����O������'�E$�"��&����3������%� ���PLD �Q��Z'E��
������������������?�'$��"����))%�� ����������!2����T�&��'�E$�"��&� �3������%� ���PLD ��"�Z'E��
��1P�UmAb�&�����"���� �T������������O���C�����EC&�N��� ��"�-������� ��&�A����2���C'/%gr�*8�B�
�������������� ����E�%�J�G�'�U� �]&�J�Q�F�a� �Z%��'�E$�"��&�������1=%�!"��� ���Z'E��
�2�>��&�������J� ����'%����&��hollow – fiber�����C&��C����� ��C&����$���� �!"�L'����
������_�����:���Z%�G�6� Agr*88�*8�B�����Z'E���J�� �������������C��1=%� ��&� ���PLD �
��������������QC�F�O�C)h/������CF����� ���Z'E���a��\�2��T�&��'�E$�"��&Spinner���� �C]&���
�����"���� �!"�L'���G�'�U��������T�C&�G�6� ��&�-������Agr�*88������T�C&��C&��B����� �C��Z'EC����"
��������������������RC�/0� �C3K$����"�Gz�C/��G��EC$������1=C%�aC� �J�"�C��� �S�?$����6&����E&
�k� ����') �F��!�)��������� ����'%���J�Gz��F��� �3K$���Z'E���airlift����1=%�Z'E�����
����������
�2�� ��0� ���!"��(�FAg���Z%�S���G�6� ��&�_�D ��&�������!"��G"�%��'��"(������&�
����������(�� �1��&�S���G��&�_�D ���������������������C��!"�� ����C/%�!�C$��"2�&���C{(�YT�/5 ��%
�!
��"��"��������+����&�����������F�2�invitro��������!�$2�-�$���:�2��G"�K$�!"�L'���J�A������Ck��C>����C%
������������������$�C���C ��C'F�>�-�$���:�2��"���� �!"�L'���1=%�_�D ��"��%� "�� �2���^5&B����
��������"�C���S�C0���S�C��G��&�_�D ������Z%�S������� ��&�_�D ��"�������G�K ��O�)h/�
���������������&�� �G�&6� ��&�_��� � ��� "�&��'$(�����3$z��'$(�����%����k����������C�K��"�� ��)�6��
�����������������)�6����;��6F������������g���%�J�Q�z���)K��-����x�����)%������;��%��'=�&��t�m
�����������������)�6��J��)%�Z%����a�������-�6�3?�invitro������������J��C)%��C ���C���;��C%��'=C�&�
�"���a����� ��?�������� ��&������+����&����&�+���O���O���&�)&����
����+���-K= �!2�� �invitro������1�����2����\��&��A�������������O���C�� �C��Z'C�(��C%�"�C������
������ �C��Z'EC���S�/�� ��&�Y� �6��invitro�������!"�"�Z�C/5���C��!"�C&�S�C$�G(�2��T�C&��"��C%�������
���"����/$�B������������+���2���'=�&�J�-�6�3?��J�G�)%��%�J�"�� � ����)�6�invivo�����J��C��&�� �
���������+����&�1�E$�+���O����"�� ��������-����minvivo�������Y�������J��)'E�����Z3 �<�
7�����������Z'EC����"��C)$�����/$����G��%invitro��������������J��C)�"��C �"��"�C� �C�&��C&�"�C�� �
��������������Z'E��������Z'E����K�$�K � �3m�$���v�5.�����J��&��K� ��>"��(� T�&�a�E$�'�
������������������ T�C&���"�� �������J��$��"�!2�������������-��P$�������&��&�2��$��%�G���'=�mAb�
���M�I&�����������������J�1C����C���'EC�(�1��(��' ��&��E��� ��"� "�&��'$(�#�$��%�$� �O�����1P�U
����������������G�C 2�;��6CF���C) 2��$�G�$(����/��5������2� (�R&������"��F���K�)K�����$����;��6F�
��������������������;��6CF�����G�C)%��%��C&�j�C&� � �C���C)�6���%����&�� �Z'E���-�:�����+2� (�����
�����"�� ���������(�1��&� ��&��%��?$(�2������ T�C&���"�� �G"mAb����������V�C��2��G�C)�/M����
�������������������2���C���C������C:��M��C&�J�1���S2T�_�D �"��2� ���Z?:�!"��(�F�G"�&� "�m'\�
��������������!�C$�/�\�&�O�E%����$����!�����%���#�$��%�) � "�&��'$(������DNA����2��!�C$�/�\�&�
������������������C&��X'=U(��$��"�S����&�2��$��%������� ���!"��"�� ��"���!"� �#���IgG����J� ��C>�
��)%�� �!��h�������������X/�����
��������Z'E���Q���%�1���aK= ��&��%� ��&invitro������������!�$2�C�� �C0"��N�C����C&����V�C�
���)%�d�I'$�����������CK)�����""�C>���C��D ��C$�Xk�+���OC��� �C���)�6���K)����&�������&
������ mAb�����������������C�����&�=C �_���C����1=%�_�D �Q���"�-��L' � � ��������2���%�
�"���� ���������>�6&��&� ��'%�F��&��$����� �*88���������������C��1C���ZC3 �O���&�C)&�J��C��&�-��CL' �
�
�������������������������C�� �C��!"��2��!"�L'C����C&�-��CL' � �C��Z'EC���������1��&�\�O�&� ���E���
������O'F�>��P$��"���-��L' ������C������)�6������D ���P) ��&�Z'E������ 2����)�3&��)�6�
�����"���S�?$��S�>����������� ���Z?:��&� ���Z'E��������Z��S��Kh������$�'�"�"�"�5' � ��?�
�����)'E�$��)�6��Z%������������� ��� z���)K���K�g�?$(�2��A��������QC�$z��$��C����4�%����$�B��"
�������������� �C��Z'EC������)'EC��1F�=C������5C����#�:invitro�����������C (��%����C�� "�mC'\��������
�-��������'=�&�Q�"6$�!�)�(��"�J��$���� mAb�+��&�Q��G��&� ��?��invitro �
����������S�?$����
��' ��"��'��%�a�T"�O��'/3 �2���K�invitro ������� ���Q�)K���&�Z%��X'E&���J
����������������1C&�M��#�C')%���1=%�_�D �J�S2����J�1=%�t��i�G����6����'���a� �1F�&�1=%
�����1���Z'E����"�� "������������������C]�D ��]���C�������#�')%�_���:���������T�&��������"
�����a/5����'�"�R�\"�1��0���������������������>"�C�(��C&�j�C&� �G�C�2�����C.�G�$�C���a\��C:��C&�J��
������1���Z3 ����E&�Z'E����&��K� �������������� "�mC'\��G�C�2����C.�2�� ��>�C����&�Q/%� ��&
������������������:� ��&�!���#�')%����E&���%� �3������G��>�-�3E��J� ��?���������"������a&�\
�������������������� T�&�1&�{��)�6���&����O����/���%���(�� ��"�����mAb�"����Z'E����Invitro�
��$���� ��F�.�����
��
/�/�[����X-��"�� �
����1�C�� ��C&�!�CD' �-T�����"��$�$�\�-� �6��invivo ���invitro����C'$(�#�C$��%�) �
���������"� ���P: �a&�\�-����x��J� "�&�������(��P$����?���A���������1�C���"������a&�\�-�K$
���� ���!"��(�F�;�� 2(mAb������$�E$��t��m � ��&��B�1����'���$������ ��&�S2T� ���-��L��
���������������������!"�L'C���1�C�(��C����� ��C&��C%��g�3C�� ��&�-��P$���;�� 2(� ���J�������+����"�����
�������� ��&��g�3$�!"��(�F�;�� 2(����$���� *,�������������C������"��C%��g�3C�� �2���C��') �N�����
���������)%�� ���K��J��$���� �!"�L'�����������������G��C)0�1CD���C%�HI=C � �C��a/5����'C�"��"
Point to Consider�A�������a&�\�-�K$�B�1 ���&�-��P$�� �$�&�J"���� �!"�&�S�$
���������������� � "�&��'$(�������#�')%�J�-�$���:��0�/? ��' ��#�')%�a ���-�$���:� ��&
������������������~�C���C �-�C$���:��CK�6�F����K�z�C�����F�a �%�-�)��5 ����/���K�� �;�� 2(����
��
���������C&��C��&�1C�\�� �Z'E���Q��O�)h/�������� C���C&�-��CP$� ������ �X��C&�U���-�C$���:��'
��������&��'��"�"�����K�z��������������������&��F"�m�����&�E'%�� �3������������%���]$�/�
FDA�"���2����&�Y���� ����&����� �$�&�O���J��$���� ��g���)������
���������������������!"�L'C����C������"��C%����C$���:��mCI= ��C&�1�C�(�+����&������� ��&����aK���������
��������0M��J��$���� �����������$�>�J�O��J��)��a� ��������$��"�2��$������Z?:� ��&�����-� �6��
Pristain����������#����1P�U�J���������� ��(�WC/��G�C 2�����C����J���C%�c��C��G� 2�J�!���
��"��"�"����1��(���������������aCD ��� ���C3X$�aC� �-�$���:��'���)���&�Y�/��'E �-� �6�������
���������$���:� ���3X$�� �/0�_����������eU�� �$�&�Jd�������J��)'E��a�"�������� ��"��%��
��)'E��j�������"����
FDA���J�*7�mAB�������1���!"�%��������K�)��%�!"�L'��� ��&����J�������������&����&��3$(�2�����
�����"���������1��(�+�������������2���C���� �C����"� �3'C����"��'=�&FDA���� ��C&�mAb�
�����+����&��%�1��invitro�������������C����� ��C&��%������ ��]$��&�"���� ��'����mAb���"�
�����+���T�C&�N��� invitro����������������������C��Z'EC�����C�2�J�1CF�>��C�������C\�!"�L'C���"��C �
��������������������C:����C���g�C3$� �C���)�6��;��%��0�&����!��� 2����)�3&�+���O����"� z���)K�
�������J�O�/���M���&�J�""�>FDA���������mAb��������+���2��!"�L'C����C&�invitro����R��=C�����
����)%�� ����������J��)���J�G�/�(�J��������"������������ ��C&�+�C �2��!"�L'C���G�'E�X$������g���J��g��
��������������G�$(��&� �X�"� ����=%�YT�/':����!���c�)/ ����"��D �1��(�������1C������
�������O�&��$�$�\� ���-��L��2���'/3 �����������+���mAb��������-��C���"����&��%�1������ �6���
����������������1��0��J�2�? �2��a�\���!"��(�F�"�?���O�:��"�J1���+������x����$������"�-��C��x�
�������������������C�"��C �����)���C&�!"�L'C�����P) ��&�!"��(�F�Q��"�?����"�YT�/5 �1����FDA�
����������������!���������-��L' � �3�����&��%������!"��(�F�J�)%�1&�{��%�"��"� ��� �$�&��&����':�
���)'E��G�EK���$����������������������x��G��&�1����������K�������"�-� �6���O���O�)h/�
���&��&�O�:��"�����2�F�a�/K��2���57������Z?:�;��6F���)���&�-�=�� 2(��A��N��� �B����"�&��C%�J��&��
���$��"������������Q�z����&�"��� ��&��2�����R��D��;I&��P$�R�M��&FDA�����O�C&��$� 2�J7�����C����
������������������C�����1�C�(�+����&���'&���%����mD � ��&�S2T�-�0M�������=%������#�M�#��
�������+��&��5&���J����� invitro����!��������������)%���gf�������������+����"��"��C%�!"�&� "���
��
�����������1���!����������)'E�$�N��\�a&�\�Z���&��%��3&�= � ��� "�&��'$(�J���������G�)k�G(
�����Z$������ ��"��%Steins��&������������������C������C������C�����aC:�� ��"�-����x���k����J�!���G
����������������?) ��������)� 2��"��'3&� ���1��F� ��&�"���"�?����������������'\��!"�%�G��&���
���%mAb��������������������� �����������&�O���D �J�1����P$�"�� ��K�)��%� ��"�&��%� ��&�
�_������"�"�2Invitro��))%���>2�������
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
�#
� �
� �24� ��5/��.�/�01�/���� -����4���/� ;�\��9��2�,��� �T������
: 9��J*���
�����Y/����/� �
� �
]�594��4���R����
M����������������������C����� ��C&��'�C�(� �3C�����C&�j�C������"�-�C$���:�;���(�"�� ��"��/%�-�0
mAb���������������O����&����-�$���:�;���(��&�j�&� �-K= �W&�) �O����'=�&�1���!����=') �
���������1E�$�N�'�"��"��)� 2�O����"��/KD � ���!"�"�� ���$��!"�"�1�E$�+����J�#�� � ��&
�) �+��6>'��������������&��]&����"�!����=mAb��������C����&@A�ECVAM�B�����g�C�����6C%�
��������G�=$��M��O�6X���� �3����1D�����f�� ��&��)%�� �����C%��p�����+���4C�0�O��C'/3
���������vC���2���C��$��C%�1C���!"�L'C���"��C �G��C�:� ��&�G(�G"�&���(�"�"�1��(�B��RC��6�
primer�d��B�����2�����$���L��d�3'��primer����B��ZK����:�$� ����=F��"���B����1C��3$��"��
� ���� ����3�$���� �"�?����%��/���q��
������&�a��\�O���2��������6>���%���M��&�1���!�=$����f��-T�� ����g����-T�� ��'=�&
������������������&������!"�%�+��6>��X��K��2��4�U����!"�&�V�m�O����"��%�$��-�0M�� ��:�!��
) ��/��\����� �Q�'�����C��&�!����=McGuill ���Ruwan��#�C���"�*b�b����C&��C��
�%����� ��!���Amys�A�*b�@�B������������������C)� 2�OC����"��%�C$�� �C��!"�"���-��CP$� ��C:��%
��������C))%�� �"�)'���J��)'E������Y�C�����*8������;�C��#�C��MeGuill�����Rowan���� ���C��� �
������C'3&�������!��&�"mAb����������������G��C)0�1CD��-�C$���:��' C��O'F�C>��CP$��"����p��S�6C�
���������������G��C�:��C&�!�C��"����N�'����'� �%�Z3F� ��&��'=�&�-����D����aC%������1CD��� �C�
�������%��:������� ��&�HI= mAb�����$"�%��=') ���������a�"���6&� �� ��� ���!"�����{f�
��������L' ���T�&� �3/?:��"�1��(�W�� �1��"�&�J���L�-�R��6����Pristane�C��&���� ��C&�
�����������������C&�!"���� ����=F�;��%���"�"���l$��;��%�13�����3����"�?����/�0� �)� ���3�
7- ECVAM= European Centar for the Validation of Alsernatrve methodes�
�$
����\��5��] �"�� �G���:����$��>���������OC����"�-�C0M��;��6CF�� ��&��%�$�� ����%�G�)%��
1����'F�>�-�����)� 2����
�: 9��J*���4���/� ;�\��9��^�S����
��������������C���$�=C$��0�&�J�!�=$��)�3&�������/��3�� ���!"��![����&�J������� ���!"����&
���������������"�����EL��"�"�2�� ���5 �G��)0��&��$����� ��%��$���� �+� ��"�� �����Y�C��\"�-T�� ��
�������������1C���!��/��"�"��&�Y� �6���1��(��������%��$��!"�K$�HI= ��Gobhart�����2���C��$�"�"�
������������������������\�LC��aC�"�6��C?��2���C��$����C/':��"�"��C%�1CF���"����&�C�2������1�C�(������
pristane����\�L��a�"�6��?��2���'=�&�+� ��"��S�1E�$� z����6�F�����
�����\�L��a�"�6��?��6�$�G�E$���"����������1E�$���(��2���}�$"�"��������&��/$�1:��������"��
�������������������C&��CK)����X �1���}�$"�"�-��$��&�ZK����:�$� ���� ���G�E$���)���&�-��&�?���"
����������&�!"�%���/:� ��!"�� �3'F�&�������������WC/?���Ck��C>��1EC�$�}�$"�"�1��(�W�� �W/?���
�����������������"�"����':���C$�"�CF��L)C�� ��C&�1C/:�6 �1�0��&��$����� �W�� �"��2���������C)%�"�C?���
�����������������C':����C0�&�W�� �G��=%�J����&�!�))%�1:���$���}�$"�"�1��(�W�� �W/?���K�'\�
������1E�$�}�$"�"���"���� �������������2�� ��>���� ��&�W�� �����"����G��=%�+� ��"�O���&�)&
���������������&�� ���L �G(�2�����$��':���$�;��%���G(�W/?��������������C�� �C��!"����&��k�>
����)���&�Zg0�!����������������������J�������L)��J�?�>�a ����%��)%�� �"�?���+� ��"����"�"�
��/�>��������������2���P)F�C����C/�&�+� �����"�����$�=$�O���J�1���1���5F���-���:�;��%�J�
�������������������Z��3 ������� ���!"���&�YT�/5 ���"���!���= �1���OK/ �G(�1�0�����ZC%����C� ��
�������mAb�����"���� �!���= ��A�������%�1���Z3 ��'K$�O����&������������C&��X'E&���yE �O���
����"��"�������!"����B�����������"��L�'I �Q�z�������-����x���)$����� ������� ���!"��O�)h/�
����&�!��/���':���$���"�"��&�1���OK/ ��%��))%�"�?���+� ����
��
�*�4�4�\<�9�2�38*���,�BP���T��?�_�/����4��5;��/� �
������������������%��)%�O��5������I&��E%��>��J�1����.��mAb�&����������"�"��C0�&�1��(�+����
����������������%�1E�$�HI= �����1��� ���.�-�0M����&�"����J�"���� �+� ��"��':���$
�������)��&����&��k�-�0M��O�������������������"��':���C$��C����"�"� ��C&��C/�0�G�)�/M��a&�\�N���
�%
��������&��/$�"��� �G�>�$����������������C/] � ��>�!2��$��"�� ��"��� ����$�����&�������&��k�>y�O
����"�"��]��� �-�C0M���^5&�J�)%�� �a/D��G���:�Q���%�l$���������Ck��CK)����C&��C)�
�������':���$���"�"��0�&��� ��0�������"��"�"����J�"���� ���������C))%�� ������������ ���/)���
������������������������'C��"����G��C�:��"�"�"�2��C&���CP'$���C��&��C ��)%�"�"�"�?���G�E$���"�������>���%
Z���&��������1���"��� ��)� 2�O����"��/%�-�0M������������O�C�5�� ��C&����C�\�"��C � �3������
��������������������OC���"���$�'C�����CK����"���C ��'=C�&��"�"���$�"����G���:��"��':���$������"�"�G�6�
�������������������C��G2��;��C%��%�1���G��=%�"�"�#�:��"��$���:�"���� ���F��%�1��"��"���
�A���%�a� ;�����2���'=�&�G2���8��*<������"��B�����������"�C��vC\�' ��eCU���d(�t�m �������OC��
��$�������������������&��) "��������"�"�;��6F�� ��&��m���G��)0��&��$����� ���� ��>�!2�����C �
��������������������C%�1C���"�C�� �G�>�C$����"�G�&�G2��;��%���;��6F��V�m��"��/%�-�0M�
�������"���� �!��?)��v�'I �_�����1D���������������&�C�2��� ��&�G2��G"�"�1�"�2��J�#�:�����"
���������2�1E�$���L ��' 0�1��(�W�� � ���"� ���+� ������������C� �2���P)F�C���C3$(��/���%���
�������$��"�G2��;��6F��J��':���$���������������C)%�HI=C ��C��1���S2T� �'��\"� ��'F�� ����$�=$
���������������"���� �a/D' �����':���$������"�"�2�� �����"��k�G���:��%�������� �3C����OC���2���K�
��������������5F�6 �\���$���2�G�>�$������&�6 �\���$���2�G���:�!���= ��$����� �4��) ���'�����!"�&
���������������������������C\�#�C/5 ���C$��C�2�G��C�:��C%��C'\��2���'$�C�(�_���C��O����"����1���5F�;��%��������
�1���H�I=��a&�\�J"��>�� ����
���������������������d��]C.��H�C��aC� ��C��&� ��C'F��H�C��QC��2��!"�L'C����$����� ��X�"�+��
Barclqy����������������������CP$��C&��C%� ��C'F��QCk�%�Y�'�EC$�-��C��x�� ��>�!2��$��!2����� ��&��%������
���������������������C�"��C ����1C����'EC&���G��C�:��"�!���"�?���d��].�����"��&���(��������Cg�����"
�������������������2���C$�����C � "�C0� �C���'F��2��t��D$���%��$������' �O���D �J�d��].��H��
������"���2�U(�Qk�%�Y�'�E$� �3������������������Y�/��'EC ���C'F���C��x��G�6C� ��C%��$"�%���F��3$(
��������"�?����':���$����"�"����"��&��'E&���1���!�����G�6C� ��C%��$������?�'$�O����&��3$(
����������+� ��"��$��>��?'E�� ����'F�Rat���������������EC&�J��C$�X�&��CL\�QC���"�!��� ���3X$�
�1����)�&�;���a&�\���#��"��$��>��?'E��J���'F��;��%����;��6F�7�<�* ��10�C�
�&
����=�� 2(�G� �"�!��"�#�M��"�A�1E��B�"���a�����d��].��H����&��$����� ��2���C%
�"���� �O��5��G���:� "�0��$��>��?'E�� ����'F��2��t��D$��R��M����
��������aC�"�RC��6���C%��C)'F���"�O�C��D �J�-�C$���:� ���!���S�?$�� �3$� 2(�2���K���"
�����������������2���C5&�d��]C.��H����"� �������a&�\� �� (�;��6F���0�&��$�5 �OU����\�L�,�
�"���� �2������
������H����)� 2��"� �'=�&� ����%�������������ZCg0��C&�H�C��OC�����1���!�=$�S�?$��d��].�
������������������O���&�C)&�!"�C�$��'EC&����)���C&��C��Q�z����6�F�-����x��a� ��':���$���"�"�2�� �X�"
����������������� ��C&�������$����� �H���O����&�!��� ��(�W/��-�0M����(��%��=$�O������fE
��������������"��(�Z���F�����������_��' �J�Z� �-�����&�"�"� �)&����M�����"�����J��C��� ���#��
���������������&��2��� ��&��X�"� �3�����5��] ��&�c����G���� �����"��)$� �O���D �2���%�$��"��5�
���������$"�%����X=�� 2(�-�$���:��"�!���"�?����':���$�����#����"*b�<��1C)L��>���G���� �
����������������������&�C�2��� ��C&� ��C'F�����CK�)��%�ZCg0�2��G��C���C ��$�Xk��K)����&��)� � ������
���':���$������)'����=') �J�"�%�!"�L'���G���:������������C)k��"��%����� ��"�!�����] �-��P$
�)&���;��%�-����= �2��c�$�l)���&��)$����� ���!����'F�>���%��&�"�� ����
�����F��&�-����= �A�G���:��&�G"2�1�"�G��&�B��
����'F����
�����i���
G���:��&�G"2�1�"��) 2��$�-����= ��
����� "�J�G�&�G2�������
�0���)���&�Zg��
��G"�%�Q��D��2�����$�6� (�Q��D�� ����'F����
��������������������� �C��!z��C���C���3C����2��QC����� ��&�����$�>����2��' �� ����>�&�2��!"�L'���G����
�����1F�>���%��&��=�� 2(����������������!�C��"�?��� ����>�&���2��' �� ����>�&�O���2�������� ���!"�"
���������������G"��(�Z���F�#�:��"�G���D ������_������������':���$������"�"�"�?��� ��&����ZKD
���������)��&�� ��3��>�������X=�� 2(�G�>�$����"�������2�� ���P: �a&�\����� �����>�&�O��
����������������������C�L �-�C$���:�2��1C�\�� �a)C������O�C��D � ��C&��C%��$��!"��(�Z���F����-�0M�������
�(
������&�� ������ ��&�G��)/=$�"����-�����&�������"�"�2�� "�C�2�����C��#�K�������':���C$��C��
���������������� ��&��\�L��-����6��1D��G���:��"�!���"�?��mAb������OK/ ��%��$��!"�K$������
������������������������C%��C/g0��C���&� ��C&�N�EC:� �C��+����CK)����C��!"��$��4\�� �1\"��&�1��������
���������"���C$�"����2�)��J��)��&��':���$������"�"�"�����X$��&��$����� �������C?�'$��C'�/%�OC��
�������%��)%�� � ��>�������������1C��"�&�WC\� ��"�V�mCI&�+� �1��(�+����"��':���$�#�/':
�������&����"��"�"����1��(�W�� �������+���2��!"�L'���mAb�������������C&����+�C �1�C�(����C����C&�
"�%�"��D �#�/5 �+���Q��G��)0����
��
�`��H��Dpriming�E� �
������������\�L��a�"�R��6���������&�4�U���\�L��!�L:��&�R��6�Pristane8������aC �%���S�C?$��
����0�"���� �����%�1���O����&�!�Pristane��>� �C��;)C%���`������������&������2���C ���$�
����������)%�� �a/0��\�L��W�� �G��=%��"�a��������K� (AAmyx�B����ZC?:�"�%�"�3)=��
���"��2� ��pristane�����������������������Ci�J�G2��;��C%��C&�J�!�C��RC��6��+�C ���L��a�"��&��%�
����������� ��)���&�Zg0�O������&�� �!��/��1���5F�;��%���!��/������������C� �O'C��%��C&��C$����
Pristane������������"�C��!"�"�;��C%�d�C�] ��C{���&�G��������������"��C ��"��$��CL)%�QC���"
���������J�G���:��':���$���"�"�O�KE����1�)�Amyx���������#�C/5 ����C� ��%�"�%�+��6>�<�8�
����2�������Pristane����������������������C� ��C&���!"�%������"�"�Zg0��8�������ZCg0��C���C��
"���� ��'/%����
��"�-����D��������d��] ����� �2��!"�L'����)� 2�Pristane��������1�C�(�#�mD �O��'=�&��%�
�1D�� �3�� ��"�!���!������1��(�W/���"���� �� (��P: �a&�\�-��L��J��)%������
����������\�LC��aC�"�RC��6���&�����&*�8����������C���C����8����������C���C��<�8������2���C���C��
Pristane�1CCC���!"��CCC$�G�=CCC$���Hoogeneraod���Wrarght�CCC���"��#*b�,���������
����������� �+� ��&��>���%��)'F���"<�8�����2��������Pristane����"�C��6��C?�������W��C �ZC?:
����aC��:�1��(@��b����������"�C&��C�����C���C�������������C%����C��+�C ��"*�8������2���C���C��
����Pristane���%�����&����5�� �J�!���c�����O�����#� �F��&�6019 HC����������������C�)0����C ������C �nC���CX��OU���2���%����(�� �1��&����
#)
Pristane�������W�� �Z?:��))%�� �1F���"����,<�b�����"�C&��C�����C���C�������"�-��C��x�
��G�6� Pristane�����1���!�������&���Gillette��������2���C%�"�C%�+��6>�@�����!"�L'C���aC �0�
���>2�U(�G��)0��&�!��APrimer�B���aC �%�$���C$��F�1$���"���3)��Jb�AIFA�B���aC&�\�l��C'$
������2���'3&�������E��� Pristane����1����'��"��A�����������C%�1C���!� (�-T�� �2����&��"IFA�
�����������CP'$��G�C 2��"�������;��%��0�&������������QC��D���C�:� �O�C&� ���C'L���APriming�B
2����������������C&�!�C��QC��D�� �3�� �� ��J�1���!�=$��&��IFA���������2�� �'=C�&�-�C5F"��C&��&��"�
��&�!���Q��D�� �3�� ��&�1�E$�1��(�W�� �G��=%Pristane��)$� �� �!�$2�����
������������K)���"�� ��"��/%��P$�t'����(�� ��P$��&Pristane������G"�%��%��&���d�3'����0�&�
����������1���"��� �"���� ���L��a�"��&�v)��G������������"��C ��"� "�C�2� ���P$�t'���� �
����������"��"�"����"���� �G���:��"�"�"��0�&��K)����Pristane����������C��S��)C��"�C?����0�&�
�������2���5&�N���9��������G��C�:��' C���&��%�"���� ��3�� ��\�L��a�"�R��6��2���'L��
�1����{u ����
��G�EK�AJackson�B����������C$����� ���L��d�3'����%��$"�%�G�=$��M��G���K/�������C0�&��
��������C����C ��P$��&���]) ��%��)'F���"�Y��5&��3$(�"���G�E$����G���:��"��/K�� ��"�"
������������\�L��a�"�R��6��2���5&�2��� ���$��>��\�L��d�3'���"�?����%Pristane������"�"��0�&�
��G"�%�������"�G���K/����G�EK��J�#�:�O����&�"���G���:��"��':���$����"��)���C&��'F�
�������k"�!��&�O��������$�C��1ECK������������2��S��CKh����"��)���C&��C5��M��U�1C 0��C$�Xh��
�� 2(�"�� �-�$���:�����#C��"�;������������RC��6��2���C5&��C'L��<�8�������2���C���C��Pristane�
��=$�!���= ��������������%��5��] �Q��2��!����=') ��5��] �Q���"Gebhart������RC��6��2���C5&�
��\�L��a�"��8�2��������Pristane������8 K/$�#��D �2���������+�C ��&���C$��
�CBBAL�&����*�������������������"� ���CP: �aC&�\�-��CL�� ���Ci��P$�2��1E$��'$�J�O���'L��
�����%������+� Pristane������������J��$"�&��'F�>��K/$�#��D ��%����3$(��&��$"�&�!"�%�1F���"�
����)%�!���= �����������&��':���$����Pristane��������K/$�#��D ���������$�Xh�����!�=$�"�?
���������������������G2�C���&��3$(�G���"�����&�j�&� ��h$(�2����U��&�J��3$(�2��Q�����R��6��2���mI= ��{�
��!�/$�<���������1���$�"����J�1����\�L��!�L:��&�������d��]C.��H���2��a��:� ���!"�"�2�
9- IFA: Incomplete Frend’s Adjuvant
#!
������������������������Ci�ZC��2����)k������!����=') �S��(���M��&��':���$���"�"��%�"�%���F�G�����
�"����/$�A������$�5 �OU��� ��&,������������������"�!���=C �aC&�\��C��x��QC���C���=C%�� �#�M�2���
�����"���"�?���d��].��H�����B������R��6��2���5&��'L��Q�Pristane������+�C ��K/$�S������
��c�$CBBAL��������!���= �1 ����Z��������������v�'I � ��"�[$��&� �3�� ��"�"����O����&
�������!���= �����L' � ���������� ���c�$� �3�CBBAL���������'�C��) �!"�L'C��� ��&���S���
����$"�&��������������������+�C �"�[C$����&��3�� ��"�!���"�?���-T'������&��"�!�)�(�-�5��] ��"
�"����'F�>��P$��"�6�$���R��6���%��$��"�!�����-����= Pristane ��"��':���$����"�"�
��)%��/$�"�?���G���:����
��
�: 9���
���2���5&��Q��D��APrimingBJ�����������G��C�:��\�LC��!�CL:��&�� ��������#����G��E$������
����������1��(�W�� �W/?��J�� ���a�K=���&��?) ��%�"���� �R��6���5��] �"�� ���:�$�S
����"���� ��/K��� ����'%�F����������������C�����2���C�:� �OC����"�G��C�:��' ���"��{u �mAb�
����2��1���-���0��������R��6�� � ��������#����"��5����������!�C��"�C?����� ���c�$�J�!��A����C ��
��/��3�������1L��!"������J�G�3)��B�1��(�"��-���{f����A����3)���&�B����&�� ����
���"��&�ABrodeur�B�����������������"��C5���X$�C�&��C��+�C �`�C�&�G� 2��%��$"�%�+��6>�G���K/���
������������C��&��C �+� ���L���"�!���R��6�� �3�����������C%��g�C��+�C 7105.2 �����#��C��
�����$"�&�!"�%�1F���"������_��' ���M��&@�*��������$�$� �!�$2��2����������!"�"�G�=$�R��D��O����"
������������������`�C�&�-� �;��%��0�&�����"���� ���������"�2�1��(�J��'=�&�#�����������&��%���
����""�>�� �+� ����R��6���&������������"���$�'��� ���+��610��))%�� �#���������C%
��������"���� �`��&�G� 2�G����$T�M��0�&���������������G�ECK�����C��&��C'F�>�-��C���5��] ��"
�-�$���:��'=�&�G���K/��8�*@��$�$� �!�$2�2�������
��������������Z�C�+�C�1�C�(��C�"�>�!���= �T�&��"��%���]$�/��A���v�5C.�B������C0�&�G�EC$���"
����������������G���C/�&��"��C���"��"��C/%�"�"�Y� �/0�� ��"���� �l$�����':���$�N�E:������1�C�(��C&�
��������������������J�O'CF��!����"�aK=C ���Ck"�"�CF��%�!���ZK����:�$��'L��������$���0�&��/��3�
�����������""�>�� �4�\�+2������/.���`���J����=:�� �3�':���$��mauch������C%�"�%�+��6>�
#
������������������1C��:��"��L$��X)��J��L$��X)���&�!��/���$����� �1��(�2�����$�Z>��F��"�O'F��T�&
������&�W�����L)�����!��&�������WC/?���C&�G���:��"��%������ ��P$��&���]) �O���&�)&
�������������&��'��"�"�����':���$���"�"���P'$��G����F�1��(��� ���!z��������2��QC�z����������)���&�
��������&�4�] �O��Jackson��)%�� ����f�������.�F�O���z��$��"�G���K/��������
Kuijpers�������������J�d(�G"�"�1C�"�2��J��X'E�a ����)���&�Zg0�������������EC:��C&����/C�(
�"�%�+��6>������������������CM��"�G�C �"�S�0�-�����"�-�$���:��%�"�%�+��6>�O�)h/����9���
�������������������������C$�� ��C ���C ����C&�j�C&� �-T'C����G��C�����������v5C.��� �CUT�2���'L���
�����������������C0�&��%�!���!��=%��/%�-� ��M��"����=:��!����"��%�"�%�G�=$��M��O�)h/�
����"���� �"�"���������� ����'F��������������������)�C���ECL\��"�W��C �"�C���a �������������&�Q�z�
������������������6C&�#�CDM�J������>����� ��? �J����=:�� �3$�>����&��>�)�Ek�J��/K��!�L:
���������&�� �!�����n$����%������%���!�����������C)%�![C����C&��/KC�� �^F��� ���O/.��"
�����������)%�� ��������'$�6 ��"��L)�� ���!�>���������1��"�������'K$�O����&����&�������3C�� �OC����C%
����������������G(���!"�C%���/:�!"��� ���!����"����\�L���]���&��%��)'��"��/��3�� � �������
�"�%�� ��M�:��������
�����������������������CX�"�"���C ����C$"�"����C\��$�2���R�\"�����&�"�� ����-�$���:�G���K/����G�EK�
�����������������;�C��;��6CF��J�1=���>��/�J�G�&��]�� ��� �G����&2�a ����%��$"�%�+��6>
!�$�����������������"����UT� ���i�J��/K�� ���!"���J�1���5F�;��%�J��/K��S��������G��C�����
��������&�� �A��#���*���B������������������1�C�(�W��C �WC/?��G�6C� ��C&��'EC&�ZCg0�OC�����3i�G� 2������
�����������������1C ���;��6F����G�&�G2��;��6F�����!���= �a&�\��/K��S�����������&��%����&��
�������HI= �G� 2�1�e>��&� "�0���U�Zg0�O������"���� ��������� "�0���U�Zg0�O���2��Q�h��
��������=$�!���= �#�')%� ���+� ��"��Necropsy������������-��C���C&�����)���C&�ZCg0�O�C)k�
�������������!�C)%�����/K���� ��J��/K���>�)�Ek�J��\�L��!2�:��"� 6��$��J���6&� �3/2
������������������a��C��#� �$�1F�&�1���5F��&��$����� ��%���"�� �G�=$�J�1I�� �� ��� ���!"�����
�)%���������-�C��2��&��"�� ��������������!"��O�&� ����= �a&�\� �� (� �3���L���k�>
��������������1C����&�=C ��C�%�1F�=�������"��"�"����-T'��1F�=���10�������� �C��10�C�
#�
���������������������C��������C� �Y�C'��3$���`�C�&��"� ���CP: �a&�\� �� (���{f��1��(�����-��L' Ab����
�"��e>�� ����
��
�a����:84� �*�2�*��a���: 9���
��������������������2��1�C�(�W��C � ��(�WC/����{f����1��"�&�d��)��J�1��"�&�G� 2��%������ ��P$��&
�����������������C��&�G��C�:��' C�� ��C&�ZC3 �-�CK$�2���X/��G���:��Brodeur����;$���CK/������������
�A*b�,�B������������;��C%� ��C&�G(�WC/?��2���C5&�1��(�W�� �W����G��=%��%��$"�%�+��6>
������1��� ���.��� ����� �G�6� ��)���� �/UKCCCR�W�� �Z?:��%��)%�� �������
������'=�&�����$�1��(2��8������������������C��&�ZKC��2����LC��W��C �1��"�&�2��a�\�G�&�G2����!"�"
�G���K/����G�EK���)���&� ��Aa*bbb �B$X������C�:� ��"�G��C�:�1 C���C&�!2������
������)%�� �1��(�1��"�&����(�-����D���"���3$<������&�� ���������$�>��8�������C��R��6��+� ���
���������������1F�>�S�?$��ZK��2���\�L��W�� �1��"�&�J����!���= �a&�\��/K�� ���S�����K�$� 2
�A���������"��:��3�� �� �/�� ��&�G2��;��6F�9�*@�����"�&�B����������C&��C����%��:� ��&�+� ���
�������1F�>����\�W�� �G��=%�-���/0�1D����������$���:����#�:�O����&���Zg0��&�������-T'�
���������'=%��/g�"�������#��"78��������������C&�-T'C��J�G��=%���:� �2���5&�#������\"���)
������������!���= �!��>����-�$���:��^5&��"���2������������>�C�/�J�G�C&��]�� ��� �G����&2
�������������������3C��>��"��'=�&��%��>�����n$��J��X)���L$�J�W�����L)��J�1���5F�;��%�J�1=�
�����"�&�W����G��"���A��#���*���B����������'\� �����$�=$�O�����3i���%���M��&��������C��ZC%�2����!"�&
�����)��&�� �����������"��k�>*b�����2��G��C�:�9����!��C>�<�������������O�C �"��C��O�C����2���C5&�J����C��
�������������"�C&����C�����C/g�"�ZCg0�J�W�� �G��=%��<����������C$"� ��C��*9���������$�C���'=C%�"�C0���������������
�AeuthanizedA�B���#���*���B�����������L��W�� �G��=%�O������"��3�� �-�?$�G�6� *88�
b8�����&���"�&����S�"�G��=%� �*88���<������S���G��=%��*88�7<�����#'���$�Xh���J
�������������������X'�C��-��C���C&�W��C �1��"�&�2���5&�#�')%�-�$���:��"� ���P: �a&�\��)���&������
�ASham Paracentesis�B��=$�!���= ����
����������������1C��"�&�2���C5&�!�C��!���= ��5��M��U��)���&�Zg0��%��$"�6F��G���K/����G�EK�
��2��W�� �1���G��+"�>�}����&��E��� �a&�\���L����
#�
���^5&IACUCs������������������1CD���/KC��W��C �G��=C%��C%��C$"�%��=C') �����g���1�����
�������R��6���&���"���S�?$�����3�&��*�������������G��=C%�aC/0�2���C5&�S�>��K/$�#��D �������
�����������"���!��/��Z?:�;��%�2�����$�}���;��%� ��&�W�� ������C'����������C%�1EC�$�HI=C
���%�����':���$����3�&��;�������"�� �A���������"���� ��':���$��0�&����3�&�"��#�� � ��&�B
����������������������J�ZC?:�;��C%�2���C��$� �3=C)%���W��C �S��(�G��=C%��&��%�"��"�"����G�K ��O����
�����)%������;��%�A����������C����C/�&�1�C�(�W�� �G��=%�6�$��3$�E$���"<������-�C ��"��C$2�9�
�"���� �������10��B����
��W�� �G��=%�a/0����K��2��;����>�����!���=C ��)���C&�ZCg0�J����&�2�? ���2���C5&�!�C�
���"�W�� ��)�6X�����%���"�� �G�=$�G��=%�"���� �4�������':���$�2������
����� ��%� �3���>�1E=$��"ILAR�����������%������] �4�] �O���G� ����� �)k� ����D&�
��"��5���%�"���� �!"�"�������G���:�!�F�� ��&���(� �'/%�����"�C��S�C?$��G��=C%�a/0�
�"��%������� ��&� �'=�&� �3�� �"��5��-����O����Ab����J�"�&������S2T��P$�"�� �
��������������!"�L'C���"��C � �3C�� �"��5�����'F�>�-�����'=�&�G�6� ��&�G��=%�a/0@8��<8��
��)%������;��%����
����������������G���:�"�"����':���$�G�6� ����)���&�Zg0��%���"�� �G�=$�G���K/����G�EK������
������"� �������M��&���)%�� ������;��6F��W�� �G��=%�W\� ������"��C5��G��C���C �O���&�)&
����"�&�"��2��':���$��>��� ��"�"�;��%�����5��] �"�� �G���:,�9����2���'&�C{���CM��C&�2���
�����������-����O����"�J�1F���;��6F��S������#���G��=%�� ��&�J�$��>����\����3�&���2�G��=%
��������a\��:��&�G���:��&�!"�����':���$�G�6� ������C'F�>���K&����&� �'=�&�-�$���:�� �������
���$�����������������1�C�(�W�� �G��=%�-�5F"�"��5�����&�O���&�)&�1���G���:��':���$�Z3 ����5
������������������C��x��!"�L'C���"��C � � ��C������-����m����' ���&�R&�] ���"���!"�"�;��%
���"���!"�"���������������������$�C���C �4�C����� �C'/%��':���C$�� �������� �3������^5&��!2�C��
�������)�"�� ���� �'=�&�W�� �G��=%�-�5F"������������1C�\�� ��C&��'E&�J����G��=%�"��5��O��5�
�"��"�G���:�R�\"���"��>�S�?$�����&����3$�W�� �G��=%����c�����':���$���Zg0��>����
���2�� "��5�IACUCs��������Z?:�1�"��D ���8�����R��6��������Pristane����"�3)=C������
����$��!"�%A��#�����B����2���^5&����������������C$"�K$� ��C����C/)����OC���2��!��C>�OC��� �^0������C �
##
�������������3�� � ����$�>��^5&��"��K)���&��)� �����g�����)k�������6>��8������� ��C&��C���C��
���!"��$��F�%�1��(�W�� ������<�8����&�S2T�1���OK/ �����������
����O�6X��C��G"�C&�4C��) ��&��)� ��)k���T�u�IFA �� ��C&�Pristane����"��"�"�C���
'�/%��%��)%�� �"�3)=����IACUCs��&�-�$���:�;)%���IFA ���!"�L'C���2��aC�\����
�������/$�HI= �O���������'=�&IACUCs��������������2���C5&����G��C�:��C$�2���1C�\�� ���#�C')%�
��������))%�� �������� �������� �3������������������������"���$�'C���OC����C%�1C����C�'5 ��C'�/%
��%�j���O����&�1�������) IACUCs 6� ����O���D ��)%�S�������C&��C����C�����%
��)��&��'��"��/K��S������1��(�W�� �a�K=��2���5&�G���:����
�'=�&���� ����'�/%�IACUC��������C&����W��C �G��=%�-�5F"�"��5���������C��7���;��C%���C&����
��)�"�� �A�������������&�� ����3$���:� �W�� �G��=%�O��(�B���������W��C �G��=C%�aC/0�"��C5�
������:�1 �� ��&��$��D&�a:�� �2���K������������![C����C����1E��&�� �O���D ������&�� �G���
��������)��&��'��"�G���:�_������&� ������������G����&2���1=���>��/��)$� ��':���$�Zg0��>�
���"����'=%�10����&��'E��&�G���:�J���!���= �G�&� ��� ������C%�1C�����'5 ��'�/%
�'/3 O��L�i����IACUC����������':���C$���"�"�;��C%��������������C$�J��C��&��C �G��C�:��C&�!"����
!"�L'���"�� �-�$���:�"��5��;��%���
���������������G��=C%�a/0�#��"����3�&�2��!"�L'����&��)� ��/��������� ��&��/%� ���!"�"
��������������������C��&��C �"�C�� �W��C �G��=C%�2���C5&��K/$�S���O�6X����6��?�����W�� ���C'�/%��
IACUC����������������C����� ��&��3$(�-��&�?���)� 2��"�-�0M�� ��(�W/���&���"������mAb����
���������������������������3=C��/�� ��6C>�&����C��&�����C3$(���1C���!"�C%��C)� 2�OC����"�-�C$���:�1
��"�� ����\��/��N�'�"��"�-T�� ����g�/�"�>���
�!�))%���ex��#���� ��(�W/�AFeider Cell�B�������1=C%� ��C&�� �C�� �C��aC/K ��
����_������"�� �������Invivo��������>�O�)��S���2��!"�L'���&�G���:�;���(�O� f���)�6���
/����1���!������������-�C$���:��' C���C&�-�3����;��6F���0�&��)�)��S���O��� ��(�W/�
��������1���!���G(���3�� ��&�!"�L'���"�� �������������� ��C&��C/�0�-T�C� ��"��C/%�-�D�C.���� �
k�����1���"��� ������/0�O�)���������������� ��C����������C�� �C��1=C%��C%�1���!���"�3)=��
�������������CL:�2��!�C�� ��(�WC/��!�C))%��C�ex�� �3������) 2��$���������S�C���C���3C�� ��\�LC��!�
#$
��������&�� �+� �1�&���� (��������������1C����'�)��$�!�))%���ex�� �3�����2��!"�L'�������
�����������#C��"�6C�$�!"�L'C���"��C �!�C))%��C�ex��#������S��� ���a/K �2��$�"�� �G�6�
�1F�>����\��D&�"�� ��'�/%��P$���2�!���a�K=��!2���Q��!�>��%����
��
�9���R�S���T�2������?� ;�:���
�����������������)���C&�_���C���C%��)%�� �"�3)=���G���K/����G�EK�������&�!� (�1��&�-�0M�
�����������������������1�C�(���"��C �"���C�����J��C ���!�$��=C����C����&��$����� �1��(��������&��M�&�
�������'/ ��/K����L��W�� �1��"�&����"���� ����&���������������"��C/%� �C��!"�"�J��C.�����CM��&
�������"�G���:�1 ��c�.� �"�� ������C������&��]&��mAb�����������1C���"�C�� �1�C�(�+����C&���
������������������"��C)� 2�OC����"�!�����k��5��] ��3)��G���K/����G�EK�������&�!����=') �����
�����������������-�C$���:� ����C&�������O����$�Xk��%�1����)���&�-�0M�� ��:��%�1���������"
���"��e>�� ���{f�����X=�� 2(�%���������E&��)� 2�O����"���]) � ���!"�"�"��/��J1���"�3= ���
������������)%�� �����&�����������$�$�\� �3����!�X=$�"��"��E%��K�'\��V�mI&�D���.*�K��E��J
����������������1EC�$�"�C�� �"�C��G���:�1i�L:��0�&��%��$�)�/M��"�� � "�&��%� �/)���������
������ �3C�����C)� 2��"��X�"�!�X=$�"��&�!�X=$�"�2���3���L�PrimingA���� 2�C��QC��D��B�J
����� �G��=%�-�5F"�"��5�����')%�J�1��(�W��#����2��!"�L'C������C��3�&�J�G��C�:�2��1�\�� ��
��1���"�3= ����E&�O�6X����W�� ������C>��G��C�:��' ��"�� ��"������"�� ��X�"��'K$
�������������������C�����O�C:��"���C>�O�)��S���2��!"�L'���J1E�$�_��� �1��(�+����&�Y�/��'E ��k
Invitro��� ��&�mAb���1�������������� �3C�����C%�"�����F�O�)k�����$Invitro������C&�!����C&�
������)'E��!��/�� �'=�&�1F�������>�O�)��S���2��!"�L'���A���� �3&��B��X$�Xk�!��&��"���
������������������� ��(�WC/���]���C��1CD��1���OK/ �S����%�a��"�O����&����S���O��� ��(�W/�
:� ��&��':���$�4�� ��%�"����1����'I�X$��&�J�"���G������
��
� �
� �
� �
#%
� �
��4�3�P ��*�2� _��< 5/"� �
�����&�������������������������C'�/%� �^C0��-�C�&�?��J��C'�/%��C&�!�C��Z��C���-T�C� �J�lC����-T�C� ��C�
��������������&�!2���Q��!�>��>��"�!����g���� �3�$��)I�*9����G��)I���8���C%�!�))%�1%���
�����1E=$�Q���&�!��/��������������������"��C����C������l��C'$� �EK���&��'�/%�J�!"�&�6�$��'�/%�!2���
�1���!������)� 2�O������
���'$���%�Z���'5 �� �I����������+���dmAb�������������C%~�-�"�3)=C������C���������&�!��/�����&�
��CC��&����X=CC�� 2(�-�CC$���:�2��!"�L'CC�����1CC�\�� � �CC/)�����"�!�CC����OCC���2���CCK�
�)�"�-�?$��:����O��)k��&�j�&� �-�"�3)=��!Amultiple Suruival surgeryB��
�������������"���R��=������$�O��/�����&�?��O����%��)%�� �G��&��/)�����������!"�L'C���_C�����>��� ��
�������_������!����/�0�������!�))%IACUC������������1C���#�C�\�aC&�\�J����&�!������f�������C&
��������������Z�)%�� �������� ������MmAb���������!"�/C��2�C? �+� �1��(�+��������&�
��������������C��&���!����/�0��������%��M����&�"��IACUC������"�C���C��f���������O/C.��"��C
����� �3�����%�Z�'E����'5 invitro�������&�#�/5 ���M��&����&��� �����C�����mAb�����"�![��C&�
�������"��2���"�� mAb�"��>�� ����\�!"�L'���"�� �����
����������]) �#�mCD ��������&�1E$��'$����!"�K$������ ���������K�'\��C���������C/�0�t��C����C&�R
��������������������2�>2�C��1C3���'C��"� �3C����C%��C)�"�G�=C$����&�O���D �J�"����?) �C%�G"�
���������_����� ��&�� �������"���invitro���������������+�C �1�C�(�+���G"�C&���C%��C&�2��a�\����
�$�"�"�S�?$����
��"�3)=��*����������������!"�����':���C$���"�"�2�� ��>�������;��%� ��&��/�0��5 ���Q��-���.
�����1���S2T�G���:��&�������������� �C��Z'EC���!�C)�(�#�C���)k��"�O���&�)&Invitro���+�'EC>�
����1F����)���� �'=�&����� �3C���invitro�������C����� ��C&�mAb��������+���G��C)0��C&��C��&�
���������CK)����CX �"����'F��e��#�/5 �����������������C&�RC�]) ��C'/�\��C&����mCD ��C&�G��C���aC��"
���������������15)C����!�X=C$�"�1C��"��"�#�K�� ��&�������D�� ���� �$�&���"�&�O� f�� �3'�5\��
������&�� �����������������C����� ��C&����C$�K �� ��e>�������&��$����� �� ��O��Invivo�����'�'EC$���"�
��������&�!��/����/�0�a�T"������������C���������$���k��K)����&��)� � "��2�mAb����+������C��&�
#&
���������������������C&�� ��C����������C�� �C��!"��2���^C5&�"��"�"�C���"����'��e>���)%�+� �1��(
��_����invitro����������'\��J��))%��/$�������&��R&�]����������2����T�C&�1CP�U� ��:�Z%�Z?:
mAb6�� ��&�+� ��J����&�S2T�+� ��&�R������invitro ����aC&�\�#�mCD �YT�/5
������"��/$�����\���������g��D��+� � � ��������������!"��ARat�B�����1�C�(��C�����YT�/5
������������_������&��'I���&����)%��/$��g��D��+� ��"� �{u invitro�������C)%�� ������R&�]��
������� ���+� ��"�� ��Aimmunocompromised�B����������C)/���Z'EC���1�:C���C\�F��
JmAb������)%�� �����������w��x�mAb������1=%�1$���$�����2��a��:�Invitro������C$�����C �
��������G���!����$"��&��?) �����1���5F�;��%���O�y�Ab���""�>���������1=C%� �3����J��K0��&
invitro������������$����� �mAb��������������K5)C ����#�C �$��C��2�K��>�aK���%����/$���������
����))%��/$��mAb��������������C��1=C%�+��������&�!�������������2�K��>�"�C�/%���G��C��
�������#�m���1�F�i��&��$����� ��5��MAg����������"��eC>���{fC�� z�C���&�N�EC:� ��"�K�/0�����
������+2����&� ����$��%��>"��(Invitro������������� ��C&�+�C ��"�z�C�����) 2��$� �'%�&����|��\��&�
������������������"�!�C����>2�C�������� ���!"���"����$����S�0���1���������!"��wL:invitro���"�
�������O'���3X$mAb�F�%�J�$����� ��"������i� ���aK= �Q��-�����&�����
��"�3)=������������mAb�����������������CK)��� ��C&�"�C���'C��e>���C)%��C���$�+� �1��(������&�
�1��"���������'��"�"����+���O���� �"�� ��&��/�0�-� �6������
�����������C%��K)����&��)� � ��!�))%��0��' �}��� Priming�A������ 2�C��QC��D��B�����C&�+�C
Pristane $���"�"��&��?) �����"���C$�"�C���"�C���C �G���:��':��������a�K=C��O�C:��"
������������ ��P$��&�a/'D ��':���$���"�"�"����1��(���������������C�� �C��!"��"�� ��"�![����&��
��C&���� �W/?��1��(�W�� ��%��g�3�D ��"�6�$���!��������/:�1F�&��&��%����O���&�C)&
���������������C5&��C$�2����C��&�a\��C:����+� �J�� �������� �3�����R��6��2���5&������1�C�(��C�����2���
������������������J�"�=C&�}�$"�"�W�� �W/?���K)���2��a�\�G��=%�a/0�6�$����$"�>�����&���J�!���=
������������������"�C5����"�C���C'F�>��P$��"�W�� �G��=%�a/0�"��5���"��'�"��D ����&�"��>�-���
������������������ZCg0���Ck"�G��C�:��C%����&���e��G�K ���������"��3)��1��(�W�� �G��=%�-�5F"
�������&�!�=$��':���$���� ��&IACUCs����������Y�/��'EC ��%��$�E%�"���Oy/] ��%�1���S2T�
#(
����������������������� ���C3X$����C���&�J��C)��5 �a �C����C%�aC:�� �S�C/���"��)'E��-�$���:�#�yE
��)��&��&�?���&���!��"�+2� (��&���&�G���:�2��W�� �G��=%����
��"�3)=��7����������������� ��&�+� �1��(�+����%��'\�mAb������'F�>���%��&�������J�"����
�������"��CD �J��CK �-�)��5 �a ���G���:��"��':���$���"�"�;��%� ��&�����\�a&�\���
�"��>�S�?$�����&��"�"�2��&�-�����"�W������ �J�G��=%�-�5F"�G"�%����
������^5&��%�1���HI= mAb���������������������$�C���C ��C'F�>���C%��C&�G�C �"���CP) ��C&��C%�����������
������ �3�����������&��)$�����/$Invitro������$����������������������C&��C3$(��C�����+���a��C����C��
��Z'E��invitro��������������C�\�a&�\��U�-�����&��%����&�� ��'E�2��$�E/��-��{���) 2��$�
����1���1/�\�G��>������2�� ���E&�O���&�)&mAb����������-��C���C&�N�'C�"��"� ��?���#�C/5
���������$���� �������+� �1��(� �3���������&����������2���C'/%� ���������� ��K�'\��![��&*8�
������&�S�>�����������_������&�a������%��'\���X�"�"�� ����invitro�������&�G��>������"�?����&��'���
�����������������'=�&�-�)��/����1=%�_�D � 2���H��� �3�z���)K�mAb����� �C�2��$� ��C&�
""�>��E��� �a&�\�+� �1��(�+����&�1/�\��P$�2��1���OK/ ��$� �"���������D�����
��"�3)=��9��mAb����������������&��.�:�#�:��"��%�������������� ��?����M��&�+� �1��(�+�
�����������&���� �"��aK��G�/���&��3$(����������&��$���� ��������C&��C�����1/C���C&����&�W��)����� �
��+��invitro���))%�1%�:������������������� ��&�+� �1��(�+���2��!"�L'���_������^5&��"
mAb��CC��&� ���CC.�1CC���OCCK/ ����_CC����!"�L'CC���"��CC � �CC����5 �2�����CC3���
IACUC�������� ���/)����W.�� ��&mAb�2���)����0�1��(�+���_����+� ��"�����
*��������� ��&�� ��������w��U�1=%�1$���$������K'�\��*8���@��������"�C��� �!"�"�1=%�2�����
�#�mD mAb�2���'/%�1P�U��&�mg/ml�<��>��1��� hallow – fiber reactors�
�������C&��$�C��!"�L'C��������C���C/�$�`�=CU� ���"� ���Z'E�������4C�����mg/ml<88� ��
mg/ml�788�Z%��'P�U��P$�2������ �O����%�"�&�����������&�� ����
���2���'=CC�&��CCK�'\��mg<�J�mAb��CC�����CC��&�<�����CC��!"��2���'=CC�&�"��CC5���CC��
�����������&�S2T�G� 6/����M��&�v�'I �� ��������������������2�����C� �OC�����������)F��P$�2�mAb�
�������$�����) 2��$��%���k�1���aK= ��������������C%�1C���G(�2���'=�&�+2�"�����1�\�� ���#�')%��
��&���1�"�G(��&��$��'&��]��' �!�X=�� 2(�������
$)
7�������"�������!"��invitro�������������6���C$(��C���C)%��C/$������������mAb�������"�!�C���C�����
invitro���������������'F��O�&�2������'F���;��%� ���.��K�z����&�1���5F�Q���%��)K� �HI= �
�1������
9�����2���'=�&�mg�<8���2��mAb��������������� ��C������2���C��\�v�5C.�"�CK�/0���1���S2T�#�5F�
��%�1���O����X$��&hallow – fiber reactors����O�g���Z?:����=U� ����'$� �F�J�
��&� �3/'E��density cell system����C���O�C:��"��)$�����/$��X�"� �3K�)K�����
��$2���!"��(�&����2��$�O���J���������d��] ����
<���3����������!�))%�������� �������� mAb����������J��)C��&�!���!"��(��$�L0�a ��0��������&�
� �3�� � ������&�4�U����$���!"�"�z�������
�������������!"��$�W ���JT�&� �����5 ��%�Z�)%�� ���%f��� IACUC�����HI= ��%�1���vi� �
������������������������C���C��1C���S2T��$�$�C\��C���C/�0�O�$��C\��C�����&�-�$���:�2��!"�L'�����(��%��)%��
������������������� �3C�����C%��C'\���C��ZC%��������&�� ��������������!"��Q��O��5�� ��&��������5
invitro ������� ��&��X�"�mAb�1���!���W.���)'E�$���L �����
��
��
��
��
��
��