10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119 Original articles...

100

Creative Cardiology. 2018; 12 (2)DOI: 10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119

Original articles

Оригинальные статьи

© Коллектив авторов, 2018

УДК 616.126-022.7:577:616-018

Д.В. Грязнов1,2, С.А. Ковалев1,2, А.И. Жданов2, З.А. Воронцова1, А.Л. Лавренов1,

Е.В. Першин3, С.Н. Золотарева1, А.Н. Киншов1, Н.В. Некрасова1

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СОДЕРЖАНИЯКОЛЛАГЕНА-I И КОЛЛАГЕНА-III В ТКАНЯХ КЛАПАНОВСЕРДЦА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ИНФЕКЦИОННОГОЭНДОКАРДИТА: РОЛЬ ФОНОВОГО СОСТОЯНИЯ ИЛИВЛИЯНИЕ ИНФЕКЦИИ?1 ФГБОУ ВО «Воронежский государственный медицинский университет им. Н.Н. Бурденко» Минздрава

России, ул. Студенческая, 10, г. Воронеж, 394036, Российская Федерация;2 БУЗ ВО «Воронежская областная клиническая больница № 1», Московский пр-т, 151, г. Воронеж,

394066, Российская Федерация;3 БУЗ ВО «Воронежское областное патологоанатомическое бюро», Московский пр-т, 151, г. Воронеж,

394066, Российская Федерация

Грязнов Дмитрий Владимирович, канд. мед. наук, доцент кафедры госпитальной хирургии ВГМУ

им. Н.Н. Бурденко, сердечно-сосудистый хирург кардиохирургического отделения № 1 ВОКБ № 1,

orcid.org/0000-0003-0108-5897;

Ковалев Сергей Алексеевич, доктор мед. наук, профессор, главный сердечно-сосудистый хирург

Центрального федерального округа, руководитель Воронежского кардиохирургического центра,

заведующий кардиохирургическим отделением № 2 ВОКБ № 1, профессор кафедры госпитальной

хирургии ВГМУ им. Н.Н. Бурденко,

orcid.org/0000-0001-8200-0351;

Жданов Александр Иванович, доктор мед. наук, профессор, заведующий кафедрой,

orcid.org/0000-0001-7110-6249;

Воронцова Зоя Афанасьевна, доктор биол. наук, профессор, заведующий кафедрой,

orcid.org/0000-0002-3610-2549;

Лавренов Александр Леонидович, канд. мед. наук, ассистент,

orcid.org/0000-0002-9104-3553;

Першин Евгений Викторович, заведующий отделением,

orcid.org/0000-0002-1237-4494;

Золотарева Светлана Николаевна, канд. биол. наук, доцент,

orcid.org/0000-0002-2136-8272;

Киншов Александр Николаевич, ординатор,

orcid.org/0000-0003-3756-5649;

Некрасова Наталья Васильевна, канд. мед. наук, ассистент,

orcid.org/0000-0002-4096-8628

Введение. Коллагеновые волокна I и III типов являются основным компонентом внеклеточногоматрикса клапанного аппарата сердца. Цель исследования – изучение влияния различных форминфекционного эндокардита (ИЭ) на экспрессию этих белков в тканях сердечных клапанов человека.Материал и методы. Данные 60 хирургических пациентов с ИЭ сравнены с показателями 28 хирурги-ческих пациентов с неинфекционным поражением клапанов. Иммуногистохимическое исследова-ние тканей клапанов сердца проводили с использованием сывороток, содержащих антителак коллагену-I (K-I) и коллагену-III (K-III). Содержание белка оценивали посредством обработкипоказателей оптической плотности окраски.Результаты. При сравнении общей группы с ИЭ и контрольной группы различий в содержании K-Iне обнаружено, в то же время при ИЭ получен существенно более низкий уровень K-III. В подгруппе

Креативная кардиология. 2018; 12 (2)DOI: 10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119


101

с острым ИЭ выявлено значимое снижение экспрессии как K-I, так и K-III. При подостром эндокардитеотмечено повышение уровня K-I и снижение уровня K-III в сравнении с контрольной группой(p<0,0001 во всех вышеуказанных сравнениях). Наименьший уровень как K-I, так и K-III отмеченв двух подгруппах контрольной группы: в препаратах с кальцинированным аортальным стенозом (КАС)(pK-I=0,003; pK-III=0,019), а также образцах трехстворчатых клапанов (ТК); (pK-I<0,0001; pK-III<0,0001).Низкий уровень содержания обоих белков имел место также при вторичном эндокардите на фоне КАС(pK-I<0,0001; pK-III<0,0001), уменьшение экспрессии K-III обнаружено в инфекционном поражении ТК(p<0,0001). При пролапсе митрального клапана (ПМК) и при ИЭ на фоне ПМК имело место снижениеуровня K-III (p=0,04 и 0,024 соответственно).Выводы. Основным отличительным признаком ИЭ явилось снижение уровня K-III. На распределениеK-I и K-III при ИЭ оказывают влияние: локализация клапанного поражения, фоновая патологиясердца, форма, активность и стадия инфекционного процесса.

Ключевые слова: экстрацеллюлярный матрикс; инфекционный эндокардит; коллаген-I; коллаген-III;экспрессия.

Для цитирования: Грязнов Д.В., Ковалев С.А., Жданов А.И., Воронцова З.А., Лавренов А.Л., Першин Е.В.,

Золотарева С.Н., Киншов А.Н., Некрасова Н.В. Иммуногистохимический анализ содержания коллагена-I

и коллагена-III в тканях клапанов сердца при различных формах инфекционного эндокардита: роль

фонового состояния или влияние инфекции? Креативная кардиология. 2018; 12 (2): 100–19. DOI:

10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119

Для корреспонденции: Грязнов Дмитрий Владимирович, e-mail: [email protected]

D.V. Gryaznov1,2, S.A. Kovalev1,2, A.I. Zhdanov2, Z.A. Vorontsova1, A.L. Lavrenov1,

E.V. Pershin3, S.N. Zolotareva1, A.N. Kinshov1, N.V. Nekrasova1

IMMUNOHYSTOCHEMICAL ANALYSIS OF COLLAGEN-I AND COLLAGEN-III INCIDENCE IN DIFFERENT FORMS OF INFECTIVE ENDOCARDITIS: THE ROLE OF UNDERLYINGHEART DISEASE OR THE INFLUENCE OF INFECTION?1 Voronezh Burdenko State Medical University; Studencheskaya ulitsa, 10, Voronezh, 394036, Russian Federation;2 Voronezh Regional Clinical Hospital #1; Moskovskiy prospect, 151, Voronezh, 394066, Russian Federation;3 Voronezh Regional Bureau of Pathological Anatomy; Moskovskiy prospect, 151, Voronezh, 394066, Russian

Federation

Dmitriy V. Gryaznov, Cand. Med. Sc., Associate Professor of the Voronezh Burdenko State Medical University

Hospital Surgery Chair, Cardiovascular Surgeon of the Voronezh Regional Clinical Hospital # 1 Cardiac

Surgery Department # 1,

orcid.org/0000-0003-0108-5897;

Sergey A. Kovalev, Dr Med. Sc., Professor, Head Cardiovascular Surgeon of Central Federal District,

Head of the Voronezh Regional Clinical Hospital # 1 Cardiac Surgery Center,

Head of Department of Voronezh Regional Clinical Hospital # 2, Cardiac Surgery Professor

of the Voronezh Burdenko State Medical University Hospital Surgery Chair,

orcid.org/0000-0001-8200-0351;

Aleksandr I. Zhdanov, Dr Med. Sc., Professor, Chief of Chair,

orcid.org/0000-0001-7110-6249;

Zoya A. Vorontsova, Dr Biol. Sc., Professor, Chief of Chair,

orcid.org/0000-0002-3610-2549;

Aleksandr L. Lavrenov, Cand. Med. Sc., Assistant Professor,

orcid.org/0000-0002-9104-3553;

Evgeniy V. Pershin, Chief of Chair,

orcid.org/0000-0002-1237-4494;

Svetlana N. Zolotareva, Cand. Biol. Sc., Associate Professor,

orcid.org/0000-0002-2136-8272;

Aleksandr N. Kinshov, Resident Physician,

orcid.org/0000-0003-3756-5649;

Natal’ya V. Nekrasova, Cand. Med. Sc., Assistant Professor,

orcid.org/0000-0002-4096-8628

Введение

Традиционные методы диагностики ин-

фекционного эндокардита (ИЭ) включают

оценку клинических проявлений, инфор-

мации, полученной с помощью методов

визуализации, а также лабораторных дан-

ных. Последние включают бактериологи-

ческие посевы и серологические исследо-

вания, типирование генетического матери-

ала возбудителя, определение активности

маркеров воспаления и органной пато-

логии, изучение удаленных внутрисердеч-

ных структур с помощью гистологических

и иммуногистохимических методик. В на-

стоящее время в клинической медицине

основная цель лабораторных исследований

при ИЭ направлена на идентификацию

возбудителя, а также на оценку чувстви-

тельности микроорганизма к антимикроб-

ным препаратам [1–3].

Морфология пораженного сердечного

клапана при ИЭ характеризуется проявле-

ниями дистрофии, некроза и соединитель-

нотканного перерождения, выраженность

каждого из этих процессов имеет сущест-

венные особенности в зависимости от воз-

будителя, форм и стадий ИЭ. При остром

ИЭ обычно наблюдается массивная дестру-

кция тканей, сопровождающаяся прояв-

лениями активного воспаления и тромбо-

образования, в то время как при подостром

ИЭ указанные изменения чередуются

с процессами фиброза и склероза. Первич-

ный ИЭ возникает на интактных клапанах

сердца в условиях суперинфекции (наибо-

лее часто у внутривенных наркоманов).

К вторичному относят ИЭ, возникший на

фоне ранее имевшегося клапанного поро-

ка, обусловленного различными варианта-

ми соединительнотканной (дисплазия, де-

генерация) или аутоиммунной (ревматизм

и др.) патологии. В этом случае нарушения

тканевой регуляции первично обусловле-

ны влиянием фонового патологического

процесса, а лишь затем связаны с присое-

динившимся микробным воспалением.

Известно, что течение и прогноз при вто-

ричном ИЭ имеют существенные отличия

от таковых при первичном ИЭ [4–6].

Формирование патологических процес-

сов при ИЭ рассматривается также с пози-

ций изменения активности определенных

102


Original articles

Objective. Collagen-I (C-I) and Collagen-III (C-III) fibers are major components of heart valves extracellularmatrix. The aim of study was to evaluate the influence of different forms of infective endocarditis (IE) on theexpression of these proteins in human heart valves.Methods. . The data of 60 surgical patients with IE and 28 surgical patients with non-infective heart valve diseasewas compared. Immunohistochemistry with Anti-Collagen antibodies was performed. Protein expression wasestimated via calculation of optical density of stain.Results. Comparing general IE and control groups no difference in C-I expression was identified, and the level ofC-III in IE group was significantly lower. Studying of collagen expression in subgroup with acute IE revealed thedecrease of both C-I and C-III. In subacute IE the level of C-I was higher and the level of C-III was lower than in control group (p<0.0001 in all comparisons). The lowest C-I and C-III level was found at subgroups withcalcified aortic stenosis (CAS) (pC-I=0.003; pC-III=0.019) and at tricuspid valve (TV) samples (pC-I<0.0001; pC-III<0.0001). The level of both proteins was low in patients with secondary endocarditis with underlying CAS(pC-I<0.0001; pC-III<0.0001), C-III expression was also poor in cases of TV infective lesion (p<0.0001) and inmitral valve prolapse without and with IE (p=0.04; p=0.024).Conclusion. The main IE hallmark was the decrease of C-III. The distribution of C-I and C-III in IE is under theinfluence of localization of valve lesion, underlying heart disease, form, activity and stage of the infection.

Keywords: extracellular matrix; infective endocarditis; collagen-I; collagen-III; expression.

For citation: Gryaznov D.V., Kovalev S.A., Zhdanov A.I., Vorontsova Z.A., Pershin E.V., Lavrenov A.L., Zolotare-va S.N., Kinshov A.N., Nekrasova N.V. Immunohystochemical analysis of collagen-I and collagen-III incidencein different forms of infective endocarditis: the role of underlying heart disease or the influence of infection? CreativeCardiology. 2018; 12 (2): 100–19 (in Russ.). DOI: 10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119.

For correspondence: Dmitriy V. Gryaznov, e-mail: [email protected]

Acknowledgements. The study had no sponsorship.Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Received May 14, 2018

Accepted May 21, 2018

генов и путей передачи сигнала (как со сто-

роны микро-, так и со стороны макроорга-

низма). Значительное количество трудов

последних лет посвящено изучению роли

изменений генетической экспрессии (в ре-

зультате микробных мутаций или как

результат внешнего воздействия опреде-

ленных веществ или лекарственных препа-

ратов) на формирование склероза аорталь-

ного клапана (АК), двухстворчатого АК

и ИЭ. Следует отметить вариабельность

трактовки этих механизмов у разных ав-

торов [7–10].

Основным субстратом клапанного ап-

парата сердца является экстрацеллюляр-

ный матрикс (ЭМ), представляющий со-

бой сложный комплекс динамически

и пространственно взаимодействующих

соединений. Формирование ЭМ в эмбрио-

генезе определяет структуру сердечных

клапанов. Основными компонентами вне-

клеточного матрикса являются коллагено-

вые волокна I и III типов, гликопротеины

(фибриллин, фибронектин, ламинин и др.,

протеогликаны, а также ряд других соеди-

нений, которые тесно взаимодействуют со

структурами клапанных интерстициаль-

ных (VIC) и эндотелиальных (VEC) клеток.

Регуляция синтеза и распада компонентов

ЭМ осуществляется с участием соедине-

ний оксида азота, тканевого фактора роста

(TGF-b), металлопротеиназ и ряда дру-

гих факторов. Одним из основных генов,

определяющих направленность взаимо-

действия веществ ЭМ, является NOTCH-1

[11–14].

Работы, оценивающие диагностичес-

кую роль белков ЭМ и продуктов их обме-

на, достаточно известны. Так, повышен-

ный уровень предшественника коллаге-

на-III (PIIINP) рассматривается как маркер

активного воспаления, а также как предик-

тор тяжелых исходов при различных за-

болеваниях. Высокое содержание карбок-

ситерминального телопептида коллагена-I

(K-I) трактуют как критерий соединитель-

нотканной деградации. Вместе с этим во

многих работах изучена предиктивная роль

разных видов матриксных металлопротеи-

наз [2, 11–16].

Различные патологические состояния

сердца сопровождаются дезадаптацией

процессов синтеза и распада коллагена.

Нарушенное соотношение коллагена-I

и коллагена-III (K-III) в сторону относи-

тельного уменьшения количества первого

и увеличения второго (на фоне нарушения

экспрессии фибриллина) определяют при

синдроме Марфана. Дисбаланс этих типов

коллагена описан и при таких видах пато-

логии, как двухстворчатый АК и пролапс

митрального клапана (ПМК), при послед-

нем описано снижение продукции K-III.

Преобладание коллагена III типа отмечено

при ревматическом поражении клапанно-

го аппарата. Результаты исследования со-

держания коллагенов при некальциниро-

ванном аортальном стенозе говорят о по-

вышении их продукции. Формирование

кальцинированного аортального стеноза

(КАС) включает активацию VIC и эндоте-

лиально-мезенхимальную трансформацию

VEC с появлением остеобластоподобных

клеток. Результатом являются фиброз,

апоптоз с деградацией коллагена и актива-

ция синтеза неколлагеновых костных про-

теинов. В части экспериментальных работ

при КАС регистрировали повышение про-

дукции коллагенов. Мы также встретили

данные о том, что при КАС отмечается

снижение содержания как K-I, так и K-III

[1, 14, 17–23].

При оценке физических свойств колла-

генов отмечают, что K-I обеспечивает ригид-

ность ткани, в то время как K-III «отвечает»

за эластичность. Повышенное содержание

K-I типа свидетельствует о процессах фи-

броза, преобладание белка данного типа

обнаруживают при утолщении створок

клапанов. Кроме того, существуют иссле-

дования, дающие информацию о том, что

тотальная продукция коллагена растет в ус-

ловиях повышенной механической нагруз-

ки на ткани сердечного клапана. Описаны

также гендерные различия в экспрессии

коллагена-1 [9, 13, 24, 25].



103

Найденные нами данные об экспрессии

коллагена при ИЭ включили единичные

клинические и экспериментальные рабо-

ты. Клинически при ИЭ зарегистрирован

подъем титров антител к K-I и K-III. В бак-

териологических исследованиях изучены

молекулярные механизмы поверхностного

связывания некоторых микроорганизмов

с коллагеном I, II и IV типов, что рассмат-

ривается как важный патогенетический

механизм [8, 26].

Таким образом, мы предположили, что

изучение данных об экспрессии и соотно-

шении K-I и K-III при ИЭ может иметь те-

оретическую, диагностическую и прогнос-

тическую значимость. Дизайн исследова-

ния подразумевал четыре аспекта оценки

содержания данных белков в тканях кла-

панов сердца: 1) зависимость от анатоми-

ческой локализации клапана; 2) как мар-

кер активности или давности воспаления;

3) как признак ремоделирования ЭМ на

фоне воспалительных и склеротических

процессов при подостром ИЭ; 4) в качест-

ве критерия наличия фонового заболева-

ния клапанного аппарата (диагностика

вторичного ИЭ).

Целью исследования явилось изучение

влияния различных форм и стадий ИЭ на

экспрессию коллагена-I и коллагена-III

в клапанах сердца человека.

Материал и методы

Материалом исследования послужили

данные пациентов, прооперированных

в Воронежском кардиохирургическом цен-

тре с 2009 по 2016 гг. Основная группа была

представлена пациентами с ИЭ нативных

клапанов. В контрольную группу вошли

больные с неинфекционной патологией,

которым также была выполнена операция

на клапанах сердца. Все вмешательства вы-

полняли в условиях искусственного крово-

обращения. Распределение пациентов по

локализациям, стадиям и формам ИЭ,

а также структура контрольной группы

представлены в таблице 1. Выполненные

пациентам хирургические вмешательст-

ва – в таблице 2.

Фрагменты клапанного аппарата серд-

ца, взятые интраоперационно, фиксирова-

ли в растворе нейтрального формалина, де-

гидрировали в спиртах восходящей кон-

центрации и в хлороформе, заливали

в парафин. Микротомные срезы толщиной

5–7 мкм со всех парафиновых блоков депа-

рафинировали, регидрировали в спиртах

нисходящей концентрации и окрашивали

гематоксилином и эозином, а также пик-

104


Original articles

Т а б л и ц а 1

Структура клапанной патологииу пациентов, вошедших в исследование

Characteristics of Valve Lesions in Patients Enrolled in the Study

Основная группа (инфекционный эндокардит) 60 (100)

ИЭ левых камер 46 (76,7)

МК 19 (31,7)

АК 22 (36,7)

МК и АК 5 (8,3)

на фоне ПМК 7 (11,7)

на фоне КАС 8 (13,3)

ИЭ правых камер 12 (20)

Билатеральный 2 (3,3)

Острый 24 (40)

Подострый 36 (60)

Первичный 35 (58,3)

Вторичный 25 (41,7)

Контрольная группа 28 (100)

МК 11 (39,3)

ишемическая недостаточность 2 (7,1)

пролапс 6 (21,4)

стеноз 3 (10,7)

АК 12 (42,9)

недостаточность 4 (14,3)

кальцинированный стеноз 8 (28,6)

ТК 5 (17,9)

Примечание. АК – аортальный клапан; МК –митральный клапан; ТК – трехстворчатыйклапан.

Группа n (%)

рофуксином по методу Ван Гизона. Затем

препараты обезвоживали, просветляли

и заключали в раствор полистирола. Полу-

ченные постоянные гистологические пре-

параты просматривали в световом микро-

скопе при увеличении от ×340 до ×1360.

Далее проводили первичную цифровую

микрофотосъемку.

Для иммуногистохимического исследо-

вания использовали следующие сыворотки

компании Abcam (Кембридж, Великобри-

тания):

1. Anti-Collagen I antibody [EPR7785] –

кроличьи моноклональные антитела к кол-

лагену I. Сыворотку разводили 1/1500.

2. Anti-Collagen III antibody [FH-7A] –

мышиные моноклональные антитела к кол-

лагену III. Сыворотку разводили 1/600.

Перед окрашиванием производили теп-

ловое извлечение антигена с трис/ЭДТА 1

содержащим буфером (ТБС). Использо-

вали автоматизированный протокол окра-

шивания. Применяли пероксидазно-анти-

пероксидазный метод. Срезы промывали,

затем инкубировали в 10% растворе нор-

мальной сыворотки в 1% растворе бычьего

сывороточного альбумина (БСА) в ТБС

в течение 2 ч. Далее срезы высушивали,



105


Выполненные операции

Procedures Performed

Основная группа 60 (100)

Протезирование МК 14 (23,3)

в том числе с аннулопластикой ТК 9 (64,3)

Реконструкция МК 5 (8,3)

в том числе с аннулопластикой/реконструкцией ТК 2 (40)

Протезирование АК 23 (38,3)

в том числе с аннулопластикой/реконструкцией МК 3 (13)

в том числе с аннулопластикой ТК 3 (13)

в том числе с реконструкцией зоны перивальвулярного абсцесса 5 (21,7)

Протезирование МК и АК 5 (8,3)

в том числе с аннулопластикой/реконструкцией ТК 2 (40)

Протезирование МК, АК и ТК 1 (1,7)

Протезирование ТК 7 (11,7)

Реконструкция ТК 5 (8,3)

Контрольная группа 28 (100)

Протезирование МК 8 (28,6)

в том числе с аннулопластикой ТК 3 (37,5)

Реконструкция МК 3 (10,7)

в том числе с аннулопластикой/реконструкцией ТК 2 (66,7)

Протезирование АК 12 (42,9)

в том числе с реконструкцией зоны перивальвулярного абсцесса 1 (8,3)

Протезирование ТК 3 (10,7)

Реконструкция ТК 2 (7,1)

Вмешательство n (%)

1 ЭДТА – этилендиаминтетрауксусная кислота.

наносили первичное антитело, разведен-

ное в ТБС с 1% БСА. После инкубации

срезы промывали и повторно инкубирова-

ли в H2O2 в ТБС.

Протокол обнаружения включал нане-

сение на срез раствора вторичных антител,

конъюгированных с ферментом, их инку-

бацию, промывание, контрастирование,

дегидрирование и просветление.

Иммуногистохимические препараты

просматривали в световом микроскопе.

Для последующего проведения гистомор-

фометрии с каждого стекла произвольно

выбирали по 10 полей зрения. Изображе-

ния сохраняли при одинаковых настройках

микроскопа, параметрах разрешения, цве-

тового баланса и чувствительности камеры

с расчетным увеличением ×680. Цифровые

изображения стандартно обрабатывали

и сортировали с помощью программ Adobe

Photoshop CC, выпуск 2015 г. и Adobe

Photoshop Lightroom CC 6.1.1.

Анализ изображений производили с ис-

пользованием программы ImajeJ 1.50i

(National Institute of Health, Мэриленд,

США). Использовали IHC Image Analysis

Toolbox. Предварительно провели проце-

дуру «тренировки» предустановленной мо-

дели для количественной оценки интен-

сивности окраски белков ЭМ примени-

тельно к выполненным в нашей работе

окраскам коллагена-I и коллагена-III.

Данный фильтр позволил выделять облас-

ти изображения, соответствующие окра-

шенным волокнам коллагена и обесцве-

тить зоны окраски прочих тканевых струк-

тур. Далее выполняли анализ оптической

плотности изображений с построением ги-

стограмм по 255 рангам яркости. Попытки

порангового сравнения яркости изображе-

ний в группах были отклонены в связи

с тем, что некоторые показатели были рав-

ны нулю, поэтому в работе приведены по-

казатели средней оптической плотности

(СОП). Выраженность экспрессии (Э) ис-

следуемого белка обратно пропорциональна

значениям СОП. В данном исследовании

показатели СОП варьировали в пределах

90–353. Для удобства Э K-I и K-III отобра-

жена как условная единица (у. е.), равная

обратному значению медианы СОП, умно-10 000

женному на 10 000 ( Э = ) [27, 28].Me СОП

Показатели K-I и K-III соответственно

сравнивали в основной и контрольной

группах, а также в подгруппах, которые

были сформированы в соответствии с ло-

кализацией, формами и стадиями ИЭ (см.

табл. 1). В отдельные подгруппы выделили

пациентов с ПМК и КАС.

Статистическая обработка полученных

данных выполнена при помощи пакета

программ IBM SPSS Statistics, версия 23,

2015 г. Проводили описательную статисти-

ку с разведочным анализом. Рассчитывали

среднее, стандартное отклонение, медиану

(Me), интерквартильный размах (interquar-

tile range – IQR) 25–75 перцентили и со-

путствующие показатели. Характер рас-

пределения данных в рядах оценивали

с использованием критерия Шапиро–Уил-

ка. Бóльшая часть рядов имела распреде-

ление данных, отличное от нормального.

В случаях нормального распределения

в обеих сравниваемых группах, учитывая

разный размер некоторых рядов, для срав-

нения показателей использовали робаст-

ный метод однофакторного дисперсионно-

го анализа по Уэлчу. В остальных случаях

при выполнении сравнительного анализа

использовали непараметрический крите-

рий Уилкоксона–Манна–Уитни. Крити-

ческим уровнем значимости считали

р<0,05; значения р<0,0001 не детализиро-

вали. Следует отметить, что во всех случаях

сравнения показателей в группах с нор-

мальным распределением, при выявлении

уровня значимости ниже критического

с применением параметрического метода,

статистическую значимость отличий нахо-

дили также и при использовании непара-

метрического метода, и наоборот, при

p≥0,05 по методу Уэлча мы получали также

p≥0,05 при использовании критерия Уил-

коксона–Манна–Уитни. В связи с этим

ниже приведены только результаты непа-

106


Original articles

раметрического теста. Далее с целью выяв-

ления диагностической значимости, чувст-

вительности и специфичности выявлен-

ных различий в экспрессии двух типов

коллагена между группами и подгруппами,

а также для определения точек отсечения

показателей СОП проводили ROC-анализ.

Результаты

При изучении и сравнении показателей

K-I и K-III в контрольной группе и ее под-

группах получены следующие результаты

(табл. 3).

Сравнение показателей в контрольной

группе выявило:

– в подгруппе контрольной группы с по-

роками МК не выявлено отличий по содер-

жанию K-I и K-III от всей контрольной

группы (рK-I=0,378; рK-III=0,186) (рис. 1);

– в то же время при ПМК отмечены

значимо более низкие по сравнению со

всей контрольной группой показатели Э

K-III (р=0,04);

– в подгруппе контрольной группы с аор-

тальными пороками не выявлено отличий

в экспрессии K-I и K-III от всей контроль-

ной группы (рK-I=0,378; рK-III=0,486)

(рис. 2);

– в подгруппе контрольной группы

с КАС выявлена значимо меньшая экс-



107


Описательная статистика показателей средней оптической плотности коллагена-I и коллагена-III в контрольной группе и ее подгруппах

Descriptive Statistics of Collagen-I and Collagen-III Average Optical Density in Control Group and Its Subgroups

Контроль

K-I 222,4 21,2 224,8 28,5 122,0 254,7 0,0001 44,48

K-III 220,5 19,0 218,8 26,4 173,5 250,0 0,206 45,7

МК (все препараты)

K-I 220,0 23,7 224,9 27,6 122,0 251,4 0,0001 44,5

K-III 221,9 23,9 218,0 45,6 173,5 254,9 0,031 45,9

Пролапс МК

K-I 230,9 14,5 230,0 20,9 194,2 254,7 0,58 43,51

K-III 246,2 20,3 248,1 24,6 173,5 250,0 0,689 40,31

АК (все препараты)

K-I 221,6 19,2 221,4 34,8 185,3 250,4 0,08 45,17

K-III 221,2 18,5 218,4 29,5 189,9 250,0 0,144 45,79

Кальцинированный аортальный стеноз

K-I 238,0 15,4 241,0 24,0 198,8 254,8 0,0001 41,5

K-III 241,7 16,8 247,6 17,7 191,6 255,0 0,0001 40,39

ТК

K-I 240,7 9,2 240,6 13,2 216,4 254,7 0,018 39,03

K-III 245,5 8,0 248,2 14,5 231,8 254,6 0,021 40,73

Примечание. K-I – коллаген-I; K-III – коллаген-III; Э – экспрессия коллагенов, у. е.; М – среднее;SD – стандартное отклонение; Me – медиана; IQR – интерквартильный размах; Min – минимальноезначение средней оптической плотности; Max – максимальное значение средней оптическойплотности; pSW – уровень значимости критерия нормального распределения Шапиро–Уилка,распределение нормальное при p ≥0,05.

Контрольная группаи ее подгруппы

M SD Me IQR Min Max pSW Э

прессия по обоим типам коллагена в срав-

нении со всей контрольной группой

(рK-I=0,003; рK-III=0,019);

– при сравнении показателей и K-I,

и K-III в препаратах МК с аналогичными

рядами данных в препаратах АК значи-

мых различий не выявлено (рK-I=0,544;

рK-III=0,078) (см. рис. 1, 2);

– содержание K-I и K-III в подгруппе

контрольной группы с препаратами ТК

было значимо меньше, чем в общем кон-

троле (рK-I и рK-III<0,0001) (рис. 3);

– при изучении соотношения K-I/K-III

в контрольной группе, а также в ее подгруп-

пах значимого преобладания одного из

изучаемых типов коллагена не выявлено.

Так, при сравнении Э K-I с Э K-III уровень

значимости в общей контрольной группе

рK-I/K-III=0,385, в подгруппе с препаратами

МК рK-I/K-III=0,196; в подгруппе с препара-

тами АК рK-I/K-III=0,988; в подгруппе с КАС

рK-I/K-III=0,665; в подгруппе контрольной

группы с ПМК рK-I/K-III=0,329; в подгруппе

с препаратами ТК рK-I/K-III =0,640.

108


Original articles

Рис. 1. Контрольная группа. Препарат митрального клапана. Ув. ×680. Иммуногистохимическаяокраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 2. Control Group. Aortic Valve Specimen ×680:

a – Collagen-I Immunostaining; b – Collagen-III Immunostaining

а б

Рис. 2. Контрольная группа. Препарат аортального клапана. Ув. ×680. Иммуногистохимическаяокраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 2. Control Group. Aortic Valve Specimen ×680:


а б

Далее представлены результаты изуче-

ния показателей K-I и K-III в основной

группе и ее подгруппах (табл. 4; рис. 4–9).

При сравнении показателей K-I в ос-

новной и контрольной группах, а также

в подгруппах, получены следующие ре-

зультаты (табл. 5, 6; см. рис. 4–9). Резуль-

таты сравнения показателей K-III в ос-

новной и контрольной группах, а также

в подгруппах приведены в таблицах 7, 8.

Иллюстрации наиболее характерных для

изученных групп и подгрупп гистологичес-

ких и иммуногистохимических препаратов

представлены на рисунках.



109


Описательная статистика показателей средней оптической плотности коллагена-I и коллагена-III в исследуемой группе и ее подгруппах

Descriptive Statistics of Collagen-I and Collagen-III Average Optical Density in Infective Endocarditis Groupand Its Subgroups

ИЭ, общая группа

K-I 214,8 22,3 218,2 33,8 178,8 254,6 0,0001 45,82

K-III 231,9 17,6 233,9 30,5 190,3 253,7 0,0001 42,75

ИЭ левых камер

K-I 213,1 20,5 209,8 27,1 178,8 254,6 0,0001 47,66

K-III 234,8 19,2 235,2 24,7 190,3 352,1 0,0001 42,52

ИЭ МК

K-I 204,0 12,8 206,9 19,1 178,8 230,9 0,32 48,33

K-III 237,4 27,6 236,3 27,0 190,3 352,1 0,0001 42,32

ИЭ на фоне ПМК

K-I 234,7 52,1 229,7 43,2 112,6 312,2 0,0001 43,53

K-III 248,5 17,7 249,1 22,4 184,1 244,3 0,063 40,14

Основная группаи ее подгруппы


Рис. 3. Контрольная группа. Препарат трехстворчатого клапана. Ув. ×680. Иммуногистохимичес-кая окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 3. Control Group. Tricuspid Valve Specimen ×680:


а б

110


Original articles

О к о н ч а н и е т а б л . 4

ИЭ АК

K-I 222,5 20,7 220,3 35,3 181,8 254,6 0,01 45,39

K-III 234,7 16,8 239,2 30,9 190,3 254,3 0,0001 41,81

ИЭ на фоне КАС

K-I 248,6 11,1 253,6 9,1 224,1 254,6 0,0001 39,43

K-III 252,7 9,0 258,2 10,8 249,5 252,8 0,320 38,73

ИЭ ТК

K-I 239,2 24,2 243,5 48,8 184,2 254,4 0,002 41,07

K-III 250,4 4,3 251,2 4,9 237,5 254,8 0,0001 39,81

Острый ИЭ

K-I 235,5 17,9 241,3 31,5 192,6 254,6 0,001 41,44

K-III 247,2 9,0 251,0 10,0 222,2 254,8 0,0001 39,84

Подострый ИЭ

K-I 202,1 13,1 205,4 21,7 178,8 230,9 0,06 48,69

K-III 231,0 21,2 230,5 38,1 190,3 352,1 0,0001 43,38

Первичный ИЭ

K-I 218,9 17,3 215,0 23,6 181,8 254,4 0,03 46,51

K-III 231,0 23,6 227,6 35,1 190,3 352,1 0,0001 43,94

Вторичный ИЭ

K-I 207,2 17,4 206,6 26,8 178,8 242,5 0,094 48,40

K-III 236,9 9,4 237,6 12,0 215,7 253,0 0,349 42,09

Примечание. См. список сокращений к табл. 3.

Основная группаи ее подгруппы


Рис. 4. Инфекционный эндокардит митрального клапана. Ув. ×680. Иммуногистохимическаяокраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 4. Mitral Valve Infective Endocarditis ×680:


а б



111

Рис. 5. Острый инфекционный эндокардит аортального клапана. Ув. ×680. Иммуногистохимиче-ская окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 5. Acute Aortic Valve Infective Endocarditis ×680:


а б

Рис. 6. Подострый инфекционный эндокардит аортального клапана. Ув. ×680. Иммуногистохи-мическая окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 6. Subacute Aortic Valve Infective Endocarditis ×680:a – Collagen-I Immunostaining; b – Collagen-III Immunostaining

а б

Рис. 7. Острый инфекционный эндокардит трехстворчатого клапана. Ув. ×680. Иммуногистохи-мическая окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 7. Acute Tricuspid Valve Infective Endocarditis ×680:a – Collagen-I Immunostaining; b – Collagen-III Immunostaining

а б

Обсуждение

Результаты сравнения общих групп

(см. табл. 4–6; см. рис. 1–9) демонстри-

руют, что при ИЭ отмечается снижение

уровня K-III. Это позволяет предполо-

жить, что под действием воспалительных

ферментов происходит его распад. K-III

отвечает за эластичность тканей и, воз-

можно, более подвержен деградации под

влиянием инфекции и аутоиммунного вос-

паления [1, 19, 25].

Анализ различий в подгруппах основ-

ной группы показывает, что острый ИЭ ха-

рактеризуется низкой экспрессией не

только K-III, но и K-I. В то же время при

подостром ИЭ полученные показатели K-I

были значимо выше, чем в контроле

и в группе с острым ИЭ (см. табл. 5–8;

см. рис. 1–9). Высокую экспрессию K-I при

подостром ИЭ можно объяснить присое-

диняющимися на этой стадии к воспали-

тельно-деструктивным процессам соеди-

112


Original articles

Рис. 8. Вторичный инфекционный эндокардит на фоне кальцинированного аортального стеноза.Ув. ×680. Иммуногистохимическая окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 8. Infective Endocarditis with underlying calcified aortic stenosis ×680:


а б

Рис. 9. Вторичный инфекционный эндокардит на фоне пролапса митрального клапана. Ув. ×680.Иммуногистохимическая окраска:а – на коллаген-I; б – на коллаген-III

Fig. 9. Infective endocarditis with underlying mitral valve prolapse ×680:


а б



113


Коллаген-I. Сравнение групп с контрольными показателями и значимость различий

Collagen-I. The Comparison of Groups with Control

ИЭ 0,475 0,53 –*

ИЭ левых камер 0,027 0,64 >46,04

ИЭ МК 0,694 0,60 –

ИЭ на фоне ПМК 0,241 0,61 –

ИЭ АК 0,525 0,53 –

ИЭ на фоне КАС 0,0001 0,93 <39,78

ИЭ ТК 0,176 0,59 –

Острый ИЭ 0,0001 0,74 <43,71

Подострый ИЭ 0,0001 0,79 >46,19

Первичный ИЭ 0,720 0,52 –

Вторичный ИЭ 0,001 0,69 >47,57

Примечание. U-тест, p – уровень значимости критерия Уилкоксона–Манна–Уитни; AUC – площадьпод кривой; ТО Э – точка отсечения показателя экспрессии.

* – при имеющихся показателях площади под кривой и уровня значимости расчет критериянецелесообразен.

Группа U-тест, p AUC ТО Э


Коллаген-I. Межгрупповое сравнение показателей средней оптической плотности и значимость различий

Collagen-I. The Intergroup Comparison of Average Optical Density

ИЭ левых камер ИЭ ТК 0,024 0,64 >43,86

ИЭ МК ИЭ АК 0,0001 0,75 >45,52

ИЭ на фоне ПМК Контроль ПМК 0,081 0,65 –*

ИЭ МК 0,220 0,66 –

ИЭ на фоне КАС Контроль КАС 0,0001 0,89 <39,94

ИЭ АК 0,001 0,86 <40,26

ИЭ ТК Контроль ТК 0,014 0,75 >41,18

Острый ИЭ Подострый ИЭ 0,0001 0,92 <45,68

* – при имеющихся показателях площади под кривой и уровня значимости расчет критерия

нецелесообразен.

1-я группа 2-я группа U-тест, p AUC ТО Э

нительнотканными и склеротическими из-

менениями, вероятно, эти явления могут

сочетаться с переменным преобладанием.

По всей видимости, высокой продукцией

K-I при подостром ИЭ объясняется и отсут-

ствие изменений уровня K-I в общей груп-

пе с ИЭ. Таким образом, наиболее вероят-

но, что разрушению на фоне инфекции

подвержены оба изученных типа коллагена.

Предположение о том, что в клапанах

левых и правых отделов сердца количество

и соотношение разных типов коллагена

114


Original articles


Коллаген-III. Сравнение групп с контролем и значимость различий

Collagen-III. The Comparison of General and Control Groups

ИЭ 0,0001 0,76 <45,70

ИЭ левых камер 0,0001 0,77 <45,70

ИЭ МК 0,0001 0,82 <43,9

ИЭ на фоне ПМК 0,024 0,69 <41,86

ИЭ АК 0,0001 0,72 <45,70

ИЭ на фоне КАС 0,0001 0,99 <40,16

ИЭ ТК 0,0001 0,71 <42,10

Острый ИЭ 0,0001 0,94 <42,12

Подострый ИЭ 0,0001 0,71 <45,70

Первичный ИЭ 0,0001 0,69 <45,70

Вторичный ИЭ 0,0001 0,83 <44,86

Примечание. См. список сокращений к табл. 5.

Группа U-тест, p AUC ТО Э


Коллаген-III. Межгрупповое сравнение показателей средней оптической плотности и значимость различий

Сollagen-III. The Intergroup Comparison of Average Optical Density

ИЭ левых камер ИЭ ТК 0,0001 0,83 >43,86

ИЭ МК ИЭ АК 0,962 0,50 –*

ИЭ ТК Контроль ТК 0,038 0,80 <39,20

ИЭ на фоне ПМК Контроль ПМК 0,222 0,68 –

ИЭ МК 0,023 0,69 <42,49

ИЭ на фоне КАС Контроль КАС 0,0001 0,995 <40,16

ИЭ АК 0,004 0,78 <40,10

Острый ИЭ Подострый ИЭ 0,0001 0,84 <41,98

Примечание. U-тест, p – уровень значимости критерия Уилкоксона–Манна–Уитни; AUC – площадьпод кривой; ТО Э – точка отсечения показателя экспрессии.

* – при имеющихся показателях площади под кривой и уровня значимости расчет критериянецелесообразен.

1-я группа 2-я группа U-тест, p AUC ТО Э

может быть различным, получило частич-

ное подтверждение при анализе данных

контрольной группы. В ее подгруппе с об-

разцами ТК зарегистрировано значимо

меньшее содержание K-I и K-III. Это, по

всей видимости, связано с иной в сравне-

нии с клапанами левых камер исходной

структурой ТК. При ИЭ ТК экспрессия

K-I не показала отличий от общей конт-

рольной группы и превышала аналогич-

ный показатель в подгруппе контроль-

ной группы с препаратами ТК, а показа-

тели экспрессии K-III были существенно

ниже, чем в общей контрольной группе

и в контрольной подгруппе с препарата-

ми ТК (см. табл. 4–8).

На данном этапе нам представляется

сложным обосновать относительно высо-

кий уровень K-I при ИЭ ТК, возможно

предположить, что выраженное снижение

содержания K-III при ИЭ ТК связано

с преобладанием деструкции более «мягко-

го» белка ЭМ на фоне выраженных дистро-

фических и некротических изменений.

Опираясь на данные о генетически

обусловленных нарушениях продукции

и структуры коллагена при ПМК и при

КАС [7, 9, 20, 22, 23, 29, 30], мы изучили

экспрессию K-I и K-III в подгруппах паци-

ентов с данной патологией. Интерес пред-

ставляла оценка влияния ИЭ на продук-

цию K-I и K-III в ЭМ клапанов сердца

с предшествующими эндокардиту фоновы-

ми изменениями. В данном исследовании

уровень экспрессии K-I при ИЭ на фоне

ПМК не показал статистически значимых

отличий от контрольной группы, а также

от контрольной подгруппы с ПМК. В под-

группе с ИЭ на фоне ПМК получены низ-

кие показатели K-III, однако и в контроль-

ной подгруппе с ПМК уровень K-III был

также низким, сравнение этих подгрупп не

выявило значимости различий (см.

табл. 3–9; см. рис. 1, 9). Вероятно, ИЭ ока-

зывал влияние на содержание изучаемых

белков в тканях МК с соединительноткан-

ными нарушениями, однако малое количе-

ство наблюдений не позволило их выявить.

Мы предполагали, что содержание кол-

лагена в тканях кальцинированных клапанов

будет снижено за счет тканевой дегенерации.

Это предположение получило подтвержде-

ние, в подгруппе контрольной группы

с КАС зарегистрировано существенное

снижение уровней K-I и K-III. В подгруп-

пе основной группы с КАС также отмечен

низкий уровень K-I и K-III. При ИЭ на

фоне КАС показатели экспрессии как K-I,

так и K-III были значимо более низкими

по сравнению с контрольной подгруппой

с КАС (см. табл. 3–8; см. рис. 2, 5, 6, 8).

Полученные результаты позволяют

предположить, что такие состояния, как

ПМК и КАС, вызывают снижение экс-

прессии одного или обоих типов коллаге-

на, а возникающий на их фоне ИЭ может

вызывать дополнительную деструкцию

белков ЭМ. Данное исследование не поз-

волило выявить изменения продукции

коллагенов, происходящие при ИЭ на фо-

не других заболеваний, в частности ревма-

тических пороков, характеризующихся ги-

перпродукцией соединительной ткани

в клапанном аппарате сердца.

Ограничения

Необходимо отметить некоторые огра-

ничения данного исследования. Во-пер-

вых, контрольной группой послужили пре-

параты пациентов с клапанной патологией

сердца, это связано с тем, что мы не нашли

возможности аналогичного выполнявше-

муся в исследуемой группе забора интакт-

ных сердечных клапанов. Во-вторых, не-

которые подгруппы содержат малое коли-

чество наблюдений, что даже в случаях

выявленной статистической значимости

различий определяет меньшую ценность

полученных результатов. Поэтому в выво-

дах приведены в основном результаты

сравнения крупных групп.

Выводы

1. Содержание коллагена I и III типов

в клапанном аппарате левых камер сердца

выше, чем в тканях ТК.



115

2. Характерным для ИЭ изменением со-

держания белков межклеточного матрикса

клапанов сердца является снижение содер-

жания коллагена-III на фоне неизменен-

ного уровня коллагена-I.

3. Отмечены особенности экспрессии

коллагена-I и коллагена-III в зависимости

от форм и стадий ИЭ:

1) для острого ИЭ характерны низкие

показатели экспрессии как коллагена-I,

так и коллагена-III;

2) при подостром ИЭ отмечается повы-

шение содержания коллагена I типа.

4. Изучение уровней белков экстрацел-

люлярного матрикса при вторичном ИЭ

показало, что структура изменений опре-

деляется фоновым заболеванием:

1) ПМК сопровождается снижением

экспрессии коллагена-III, при эндокарди-

те на фоне пролапса отмечена аналогичная

тенденция, однако значимых различий

в содержании изучаемых белков в данных

подгруппах не выявлено;

2) наличие КАС, в том числе послужив-

шего фоном для развития ИЭ, определяет

наименьшее содержание коллагена-I

и коллагена-III без дисбаланса их соотно-

шения.

Таким образом, основным отличитель-

ным признаком ИЭ явилось снижение

уровня коллагена-III. На распределение

K-I и K-III при ИЭ оказывают влияние:

локализация клапанного поражения, фо-

новая патология, активность и срок ин-

фекционного процесса. Полученные ре-

зультаты дают полезную информацию для

понимания нарушения функции соедини-

тельной ткани у больных с ИЭ.

Финансирование. Исследование не име-

ло спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют

об отсутствии конфликта интересов.

Литература

1. Habib G., Lancellotti P., Antunes M.J., Bongior-

ni M.G., Casalta J.P., Del Zotti F. et al. 2015 ESCGuidelines for the management of infective endo-

carditis: The task force for the management ofinfective endocarditis of the European Society ofCardiology (ESC). Endorsed by: European Asso-ciation for Cardio-Thoracic Surgery (EACTS), theEuropean Association of Nuclear Medicine(EANM). Eur. Heart J. 2015; 36 (44): 3075–128.DOI: 10.1093/eurheartj/ehv319.

2. Millar B.C., Habib G., Moore J.E. New diagnostic

approaches in infective endocarditis. Heart. 2016;102 (10): 796–807. DOI: 10.1136/heartjnl-2014-307021.

3. Nishimura R.A., Otto C.M., Bonow R.O.,

Mack M.J., Carabello B.A., McLeod C.J. et al.2017 AHA/ACC Focused Update of the 2014AHA/ACC Guideline for the Management ofPatients With Valvular Heart Disease: A Report ofthe American College of Cardiology/AmericanHeart Association Task Force on Clinical PracticeGuidelines. Circulation. 2017; 135 (22). DOI:10.1161/CIR.0000000000000503.

4. Тюрин В.П. Инфекционные эндокардиты: Ру-

ководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2012.5. Шевченко Ю.Л. Хирургическое лечение ин-

фекционного эндокардита и основы гнойно-септической кардиохирургии. М.: Династия;2015.

6. Lepidi H., Durack D.T., Raoult D. Diagnosticmethods current best practices and guidelines forhistologic evaluation in infective endocarditis.

Infect. Dis. Clin. North Am. 2002; 16 (2): 339–61.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12092476(дата обращения 20.01.2018).

7. El Accaoui R.N., Gould S.T., Hajj G.P., Chu Y.,Davis M.K., Kraft D.C. et al. Aortic valve sclerosisin mice deficient in endothelial nitric oxide syn-thase. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2014;306 (9): H1302–13. DOI: 10.1152/ajpheart.00392.2013.

8. Nomura R., Otsugu M., Naka S., Teramoto N.,

Matsumoto-Nakano A.M., Ooshima T. et al.Contribution of the interaction of streptococcusmutans serotype k strains with fibrinogen to thepathogenicity of infective endocarditis. Infect.

Immun. 2014; 82 (12): 5223–34. DOI:10.1128/IAI.02164-14.

9. Pepe G., Nistri S., Giusti B., Sticchi E.,Attanasio M., Porciani C. Identification of fib-rillin 1 gene mutations in patients with bicuspidaortic valve (BAV) without Marfan syndrome.BMC Med. Gen. 2014; 15: 23. DOI: 10.1186/1471-

2350-15-23.

10. Nallapareddy S.R., Singh K.V., Murray B.E.Contribution of the collagen adhesin Acm topathogenesis of Enterococcus faecium in experi-mental endocarditis. Infect. Immun. 2008; 76 (9):

4120–28. DOI: 10.1128/IAI.00376-08.

11. Gava E., de Castro C.H., Ferreira A.J., Colleta H.,Melo M.B., Alenina N. et al. Angiotensin-(1-7)receptor Mas is an essential modulator of extracel-lular matrix protein expression in the heart. Regul.

116


Original articles

Pept. 2012; 175: 30–42. DOI: 10.1016/j.regpep.2012.01.001.

12. Nus M., MacGrogan D., Martínez-Poveda B.,

Benito Y., Casanova J.C. Diet-Induced aorticvalve disease in mice haploinsufficient for thenotch pathway effector RBPJK/CSL. Arterioscler.

Thromb. Vasc. Biol. 2011; 31: 1580–88. DOI:

10.1161/ATVBAHA.111.227561.

13. Petrov G., Regitz-Zagrosek V., Lehmkuhl E.,Krabatsch T., Dunkel A., Dandel M. et al. Regre-ssion of myocardial hypertrophy after aortic valvereplacement, faster in women? Circulation. 2010;S23–8. DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA.109.927764.

14. Гасанов А.Г., Бершова Т.В. Роль изменений

внеклеточного матрикса при возникновениисердечно-сосудистых заболеваний. Биомеди-

цинская химия. 2009: 55 (2): 155–68. https://

elibrary.ru/item.asp?id=12590537 (дата обраще-ния 18.02.2018).

15. Fleischer K.J., Nousari H.C., Anhalt G.J.,

Stone C.D., Laschinger J.C. Immunohistochemi-cal abnormalities of fibrillin in cardiovascular tis-sues in Marfan's syndrome. Ann. Thorac. Surg. 1997;

63 (4): 1012–17. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9124898 (дата обращения 27.02.2017).

16. Li X., Qi Y., Li Y., Zhang S., Guo S., Chu S. et al.Impact of mineralocorticoid receptor antagonistson changes in cardiac structure and function of leftventricular dysfunction. A meta-analysis of ran-domized controlled trials. Circ. Heart Fail. 2013; 6:156–65. DOI: 10.1161/CIRCHEARTFAILURE.112.000074.

17. Земцовский Э.В., Малев Э.Г., Реева С.В., Лу-

нева Е.Б., Парфенова Н.Н., Лобанов М.Ю.и др. Диагностика наследственных наруше-ний соединительной ткани. Итоги и перспек-тивы. Российский кардиологический журнал.

2013; 4: 38–43. DOI: 10.15829/1560-4071-2013-4-38-43.

18. Banerjee T., Mukherjee S., Ghosh S., Biswas M.,Dutta S., Pattari S. et al. Clinical significance ofmarkers of collagen metabolism in rheumaticmitral valve disease. PLoS One. 2014; 9 (3): e90527.DOI: 10.1371/journal.pone.0090527.

19. Votteler M., Berrio D.A., Horke A., Sabatier L.,Reinhardt D.P., Nsair A. et al. Elastogenesis at the

onset of human cardiac valve development.

Development. 2013; 140 (11): 2345–53. DOI:10.1242/dev.093500.

20. Leopold J.A. Cellular mechanisms of aortic valve

calcification. Circ. Cardiovasc. Interv. 2012; 5 (4):

605–14. DOI: 10.1161/CIRCINTERVENTIONS.

112.971028.21. Nataatmadja M., West M., West J., Summers K.,

Walker P., Nagata M. et al. Abnormal extracellular

matrix protein transport associated with increased

apoptosis of vascular smooth muscle cells in

Marfan syndrome and bicuspid aortic valve tho-

racic aortic aneurysm. Circulation. 2003; II329–34.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12970255(дата обращения 03.12.2018).

22. Sádaba J.R., Martínez-Martínez E., Arrieta V.,

Álvarez V., Fernández-Celis A., Ibarrola J. et al.Role for Galectin-3 in calcific aortic valve stenosis.J. Am. Heart Assoc. 2016; 5 (11): e004360. DOI:10.1161/JAHA.116.004360.

23. Tsamis A., Krawiec J.T., Vorp D.A. Elastin and col-

lagen fibre microstructure of the human aorta inageing and disease: a review. J. R. Soc. Interface.

2012; 10: 1004. DOI: 10.1098/rsif.2012.1004.24. Balachandran K., Bakay M.A., Connolly J.M.,

Zhang X., Yoganathan A.P., Levy R.J. Aortic valvecyclic stretch causes increased remodeling activityand enhanced serotonin receptor responsiveness.Ann. Thorac. Surg. 2011; 92 (1): 147–53. DOI:

10.1016/j.athoracsur.2011.03.084.25. Stephens E.H., Nguyen T.C., Itoh A., Ingels N.B., Jr.,

Miller C., Grande-Allen K.J. The effects of mitralregurgitation alone are sufficient for leaflet remod-eling. Circulation. 2008; 118 (14): S243–9. DOI:

10.1161/CIRCULATIONAHA.26. De Buyzere M.L., De Scheerder I.K., Delan-

ghe J.R., Robbrecht J.H., Clement D.L., Wieme R.J.

Measurement of autoimmune response against

collagen types I, III, and IV by enzyme-linked

immunosorbent assay, and its application in infec-

tive endocarditis. Clin. Chem. 1989; 35 (2): 246–50.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2914369

(дата обращения 25.12.2017).27. Dougherty G. Digital image processing for medical

applications. California State University, Channel

Islands. Cambridge University Press; 2009.

28. Qiu J.S.G., Ilyas M., Dolman G. A Semi-automat-

ic image analysis tool for biomarker detection in

immunohistochemistry analysis. International

Conference on Image and Graphics (ICIG). 2013;

937–42. DOI: 10.1109/ICIG.2013.197.

29. Chen J.-H., Simmons C.A., Towler D.A. Cell-

matrix interactions in the pathobiology of calcific

aortic valve disease. Critical roles for matricellular,

matricrine, and matrixmechanics cues. Circ. Res.

2011; 108: 1510–24. DOI: 10.1161/CIRCRESA-

HA.110.234237.30. Dupuis L., Osinska H., Weinstein M.B., Hinton R.B.,

Christine B. Insufficient versican cleavage and

SMAD2 phosphorylation results in bicuspid aortic

and pulmonary valves. J. Mol. Cell. Cardiol. 2013;

60: 50–9. DOI: 10.1016/j.yjmcc.2013.03.010.

References

1. Habib G., Lancellotti P., Antunes M.J., Bongior-ni M.G., Casalta J.P., Del Zotti F. et al. 2015 ESC

Guidelines for the management of infective endo-

carditis: The task force for the management of

infective endocarditis of the European Society of

Cardiology (ESC). Endorsed by: European

Association for Cardio-Thoracic Surgery

(EACTS), the European Association of Nuclear



117

Medicine (EANM). Eur. Heart J. 2015; 36 (44):3075–128. DOI: 10.1093/eurheartj/ehv319.

2. Millar B.C., Habib G., Moore J.E. New diagnosticapproaches in infective endocarditis. Heart. 2016;102 (10): 796–807. DOI: 10.1136/heartjnl-2014-

307021.3. Nishimura R.A., Otto C.M., Bonow R.O.,

Mack M.J., Carabello B.A., McLeod C.J. et al.

2017 AHA/ACC Focused Update of the 2014

AHA/ACC Guideline for the Management of

Patients With Valvular Heart Disease: A Report of

the American College of Cardiology/American

Heart Association Task Force on Clinical Practice

Guidelines. Circulation. 2017; 135 (22). DOI:10.1161/CIR.0000000000000503.

4. Tyurin V.P. Infective endocarditis: Guidelines.

Moscow: GEOTAR–Media; 2012 (in Russ.).5. Shevchenko Yu.L. Surgical treatment of infective

endocarditis and basics of pyoseptic cardiac

surgery. Moscow: Dinastiya; 2015 (in Russ).

6. Lepidi H., Durack D.T., Raoult D. Diagnostic

methods current best practices and guidelines for

histologic evaluation in infective endocarditis.

Infect. Dis. Clin. North Am. 2002; 16 (2): 339–61.

Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/

12092476 (accessed January 20, 2018).

7. El Accaoui R.N., Gould S.T., Hajj G.P., Chu Y.,Davis M.K., Kraft D.C. et al. Aortic valve sclerosis

in mice deficient in endothelial nitric oxide syn-

thase. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2014;

306 (9): H1302–13. DOI: 10.1152/ajpheart.

00392.2013.

8. Nomura R., Otsugu M., Naka S., Teramoto N.,Matsumoto-Nakano A.M., Ooshima T. et al.

Contribution of the interaction of streptococcus

mutans serotype k strains with fibrinogen to the

pathogenicity of infective endocarditis. Infect.

Immun. 2014; 82 (12): 5223–34. DOI:

10.1128/IAI.02164-14.9. Pepe G., Nistri S., Giusti B., Sticchi E.,

Attanasio M., Porciani C. Identification of fib-

rillin 1 gene mutations in patients with bicuspid

aortic valve (BAV) without Marfan syndrome.

BMC Med. Gen. 2014; 15: 23. DOI: 10.1186/1471-2350-15-23.

10. Nallapareddy S.R., Singh K.V., Murray B.E.Contribution of the collagen adhesin Acm to

pathogenesis of Enterococcus faecium in experi-

mental endocarditis. Infect. Immun. 2008; 76 (9):4120–28. DOI: 10.1128/IAI.00376-08.

11. Gava E., de Castro C.H., Ferreira A.J., Colleta H.,

Melo M.B., Alenina N. et al. Angiotensin-(1-7)receptor Mas is an essential modulator of extracel-lular matrix protein expression in the heart. Regul.

Pept. 2012; 175: 30–42. DOI: 10.1016/j.regpep.

2012.01.001.

12. Nus M., MacGrogan D., Martínez-Poveda B.,Benito Y., Casanova J.C. Diet-Induced aorticvalve disease in mice haploinsufficient for thenotch pathway effector RBPJK/CSL. Arterioscler.

Thromb. Vasc. Biol. 2011; 31: 1580–88. DOI:10.1161/ATVBAHA.111.227561.

13. Petrov G., Regitz-Zagrosek V., Lehmkuhl E., Kra-batsch T., Dunkel A., Dandel M. et al. Regression of

myocardial hypertrophy after aortic valve replace-ment, faster in women? Circulation. 2010; S23–8.DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA. 109.927764.

14. Gasanov A.G., Bershova T.V. The role of extracel-

lular matrix changes in occurrence of cardiovascu-lar diseases. Biomeditsinskaya Khimiya. 2009;

55 (2): 155–68 (in Russ). Available at: https://elibrary.ru/item.asp?id=12590537 (accessed Feb-ruary 18, 2018).

15. Fleischer K.J., Nousari H.C., Anhalt G.J.,Stone C.D., Laschinger J.C. Immunohistochemi-cal abnormalities of fibrillin in cardiovascular tis-sues in Marfan's syndrome. Ann. Thorac. Surg. 1997;63 (4): 1012–17. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pubmed/9124898 (accessedFebruary 27, 2017).

16. Li X., Qi Y., Li Y., Zhang S., Guo S., Chu S. et al.

Impact of mineralocorticoid receptor antagonistson changes in cardiac structure and function of leftventricular dysfunction. A meta-analysis of ran-domized controlled trials. Circ. Heart Fail. 2013; 6:156–65. DOI: 10.1161/CIRCHEARTFAILURE.

112.000074.17. Zemtsovskiy E.V., Malev E.G., Reeva S.V., Lune-

va E.B., Parfenova N.N., Lobanov M.Yu. et al.

Diagnosis of genetical abnormalities of connective

tissue. Overall results and prospects. Russian

Journal of Cardiology. 2013; 4: 38–43 (in Russ.).

DOI: 10.15829/1560-4071-2013-4-38-43.18. Banerjee T., Mukherjee S., Ghosh S., Biswas M.,

Dutta S., Pattari S. et al. Clinical significance of

markers of collagen metabolism in rheumatic

mitral valve disease. PLoS One. 2014; 9 (3): e90527.

DOI: 10.1371/journal.pone.0090527.19. Votteler M., Berrio D.A., Horke A., Sabatier L.,

Reinhardt D.P., Nsair A. et al. Elastogenesis at the

onset of human cardiac valve development.

Development. 2013; 140 (11): 2345–53. DOI:

10.1242/dev.093500.

20. Leopold J.A. Cellular mechanisms of aortic valvecalcification. Circ. Cardiovasc. Interv. 2012; 5 (4):

605–14. DOI: 10.1161/CIRCINTERVENTIONS.

112.971028.

21. Nataatmadja M., West M., West J., Summers K.,

Walker P., Nagata M. et al. Abnormal extracellular

matrix protein transport associated with increased

apoptosis of vascular smooth muscle cells in

Marfan syndrome and bicuspid aortic valve tho-

racic aortic aneurysm. Circulation. 2003; II329–34.

Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/

12970255 (accessed December 3, 2018).

22. Sádaba J.R., Martínez-Martínez E., Arrieta V.,

Álvarez V., Fernández-Celis A., Ibarrola J. et al.Role for Galectin-3 in calcific aortic valve stenosis.J. Am. Heart Assoc. 2016; 5 (11): e004360. DOI:

10.1161/JAHA.116.004360.

118


Original articles

23. Tsamis A., Krawiec J.T., Vorp D.A. Elastin and col-lagen fibre microstructure of the human aorta in

ageing and disease: a review. J. R. Soc. Interface.

2012; 10: 1004. DOI: 10.1098/rsif.2012.1004.24. Balachandran K., Bakay M.A., Connolly J.M.,

Zhang X., Yoganathan A.P., Levy R.J. Aortic valve

cyclic stretch causes increased remodeling activity

and enhanced serotonin receptor responsiveness.

Ann. Thorac. Surg. 2011; 92 (1): 147–53. DOI:10.1016/j.athoracsur.2011.03.084.

25. Stephens E.H., Nguyen T.C., Itoh A., Ingels N.B., Jr.,Miller C., Grande-Allen K.J. The effects of mitral

regurgitation alone are sufficient for leaflet remod-

eling. Circulation. 2008; 118 (14): S243–9. DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.

26. De Buyzere M.L., De Scheerder I.K., Delan-

ghe J.R., Robbrecht J.H., Clement D.L., Wieme R.J.

Measurement of autoimmune response against

collagen types I, III, and IV by enzyme-linked

immunosorbent assay, and its application in infec-

tive endocarditis. Clin. Chem. 1989; 35 (2): 246–50.

Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2914369 (accessed December 25, 2017).

27. Dougherty G. Digital image processing for medicalapplications. California State University, ChannelIslands. Cambridge University Press; 2009.

28. Qiu J.S.G., Ilyas M., Dolman G. A Semi-automat-

ic image analysis tool for biomarker detection inimmunohistochemistry analysis. InternationalConference on Image and Graphics (ICIG). 2013;937–42. DOI: 10.1109/ICIG.2013.197.

29. Chen J.-H., Simmons C.A., Towler D.A. Cell-

matrix interactions in the pathobiology of calcificaortic valve disease. Critical roles for matricellular,matricrine, and matrixmechanics cues. Circ. Res.

2011; 108: 1510–24. DOI: 10.1161/CIRCRESA-HA.110.234237.

30. Dupuis L., Osinska H., Weinstein M.B., Hinton R.B.,Christine B. Insufficient versican cleavage andSMAD2 phosphorylation results in bicuspid aorticand pulmonary valves. J. Mol. Cell. Cardiol. 2013;60: 50–9. DOI: 10.1016/j.yjmcc.2013.03.010.

Поступила 14.05.2018Принята к печати 21.05.2018



119

Date post:	18-Apr-2020
Category:	Documents
Upload:	others
View:	1 times
Download:	0 times

10.24022/1997-3187-2018-12-2-100-119 Original articles...

Documents