A valódiság problémája a prothrombin vizsgálatokban. A Bio ... · A valódiság problémája a...

A valódiság problémája a prothrombin vizsgálatokban. A Bio-Rad Lyphochek

gyártói alkalmazása:egy lépés elıre.

Vajda ZoltánTomai ErzsébetSzén LeventeBuhala ErzsébetAjzner Éva

Horváth ÉvaDiagon Kft., Prodia RT.

DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

• Some important definition

• Accuracy :The closeness of agreement between a test result and the accepted reference value

• Trueness : The closeness of agreement between the average

• expetcted from a large series of test result and the accepted reference value.

• Bias: The distance between our average results and the reference value.

• Precision : The closeness of agreement between independent test results obtained under stipulated conditions

Az INR képlete



DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®

DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®

Biological variations of quality specifications

•The problem of "true normal " or normal reference range in the population.

•It depends on;

•Age

•Gender

•Race

•Dietary habits

•Genetics

•The method used for it's determination

•The way of calculation

•Endocrin influences

•Diurnal rythm (it's absence is a sign for disease ! )

•Seasonal variations

•Some unknownDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

Some examples for the biological variations in blood coagulation tests.The difficulty to define the precisenormal reference range:

PT : 10 -15 sec. depending age, smoking,gender ( hormonal status), and haematocritFibrinogen : 2,4 – 3,8 g/L. Every life decade

increase the mean with 0,2 g/L

APTT : Under 12 year it can be prolonged

without haemophilia. DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

Sources of variations of measured data

•Biological variation (within subject , between subject )

•Praeanalytical variation ( primary tube, centrifuge , time elapse )

•Random analytical variation (labspecific)

•Variation / bias (instrument/software/reagent specific)

•Quality requirement ; The analytical variation should not exceed the half of the biological variation within the normal reference range .

• 0,5 C.V.% biol > C.V.% anal .

•If this requirement is fulfilled, the function ; normal reference range = (geometric) mean +/- 3 S.D. encompasses the actual normal value with 95% probability (one tail z statistics)l

•Outside of the normal range the proportion between the analytical and biological variability is distorted. The computation of pathological reference range is rather arbitrary. DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

Imprecision of pooled healthy plasma prothrombin time

•Offlcial normal (100%) Pooled blood donor plasma by Verband

•vonDeutschen Gerate Hersteller. (DGH)

– Every lot PT was divided by the seconds produced by DGH pool.

– The prothrombin ratios determined by different thromboplastins were different ;

• Type of PT reagent ratio (95% C.I.)

• Rabbit plain 0,98 (0,91 - 1,06)

•

• Rabbit FV supplemented 1,02 ( 0,98 -1,06)

•

• Recombinant 0,93 (0,87 - 0,97 )

Total imprecision ; 2,16 %

It’s impact on INR imprecision is big, because of the mathematical

formula of INR equation INR = (Patient sec./normal sec) power ISI, the denominator's error should be minimalised.


A torzítás okai:A normál tartomány definitív nehézsége

• 1, A normál plazma sec-ok a legkevébbé mutatják a normál eloszlást ( normál eloszlás = csak random hiba. Ha az eloszlás nem normális akkor szisztematikus hiba vsz.)

• 2, A várható érték ( a laborban ) az átlaggal bizonytalanul közelíthetı, ezért az osztó az INR képeletben hibával terhelt.

• 3, Hemosztázis szempontból ki az egészséges ?Hogy definiálnánk ?




A torzítás okai II: Az ISI meghatározás elvi buktatói

• 1, A normál plazmákon és a kumarinizált plazmákon átfektetett regressziós egyenesek iránytangensei gyakran különbözıek, ez az ISI-nek egy hibát ad.

• 2, A regresszió linearizálási hibája (nem mérési hiba) amely abban nyilvánul meg, hogy a regressziós egyenes mentén az antikoagulált plazmák szélsı értékei milyen távol vannak egymástól és számban egymáshoz hogy aránylanak. Így a válogatott minták milyensége függvényében az ISI lehet alul v. felül kalkulált.(Pld. Két nemzetközi centrum ugynazt a PT reagenst közel 0,1 ISI különbséggel minısíti).


Megj. : Minél alacsonyabb a reagens ISI, a citrát érzékenyég annál kifejezettebb

A torzítás okai III: A hematokrit és citrát viszonya , az eltérı citrát koncentrációjú csövek.


Visszavezethetıség

• 1, Összehasonlító mérések sorozata, ahol egy függvénykapcsolat segítségével az aktuális mérés eredménye egy nemzetközileg, referens módszerrel hitelesített etalon egységgel kifejezhetı.

• 2, Az összehasonlító mérések során a mérések pontatlansága nem adódik össze olyan mértékben, (hibavándorlás) amely együttesen meghaladja a referens módszer konfidencia limitjét az etalonon.

• 3, Az etalon egysége feleljen meg a S.I. Egységek valamelyikének.


Hol sérül a visszavezethetıség a PT esetén?

• 1, Nincs definitív INR etalon (vannak módszerfüggı INR kalibrátorok, de nem széles körben elismertek.)

• 2, Az ISI /INR a nem kumarin kezelt plazmára nem értelmezett ! (Az INR skála 2.0 -nál kezdıdik!!)

• 3, A PT reakció a referens módszer esetén sem fejezhetı ki az S.I. Konform egységgel ( specifikus enzimaktivitás = tömeg / idı)

• A visszavezetési lánc tagjai mentén ( Manchester Std., primer és szekunder WHO standardok, cégek Master lotjai és az aktuális lot-ok) a regressziós hibaterjedés nagyon valószínő, de szisztematikus adatok hiányoznak.


A WHO PT standardok komplex hierarchiája


Miért nehéz valódiság kontrollt gyártani ?

• A nyersanyag nyerés módja (zsákos vs. plazmaferezis)

• A feldolgozás technológiája

• A szükséges adalékanyagok minısége és mennyisége

• ( faktorpótlás, konzerválóanyagok, vázképzı anyagok)

• Együttesen a liofilezett kontrollplazma ionereje, pH-ja, faktorkoncentrációja eltér az eredeti kindulási plazmától.


Mi a követelménye a valódiságkontrollnak ?

• Lehetı leghosszabb lot !

• Jó reproducibilitás

• Jó nyitott stabilitás

• Matrixviszonyai a lehetı legkevésbé torzítók (nem megoldott)

• Bevizsgálás sok laborban


Anyag és módszer

• Lyphochek Lot no.: 78141-143• Dia-PT „Master Lot” 920 642 ISI 1,29• Diagon MEO Labor• Prodia laborok• STA-R és Compact

15,014,514,013,5

Median

Mean

14,414,314,214,114,0

1st Quartile 13,925

Median 14,3003rd Quartile 14,400Maximum 14,900

14,015 14,405

14,024 14,400

0,317 0,609

A-Squared 0,38P-Value 0,363

Mean 14,210StDev 0,417Variance 0,174Skewness -0,660631Kurtosis 0,687545N 20

Minimum 13,200

Anderson-Darling Normality Test

95% Conf idence Interv al f or Mean

95% Conf idence Interv al f or Median

95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals

Summary for C2

A Dia-PT sec. eloszlása mintákonDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

15,014,514,013,513,012,5

Median

Mean

14,214,114,013,913,813,713,6

1st Quartile 13,625

Median 13,8003rd Quartile 14,550Maximum 15,200

13,647 14,243

13,700 14,100

0,484 0,930


Mean 13,945StDev 0,637Variance 0,406Skewness 0,078373Kurtosis 0,410957N 20

Minimum 12,500





Summary for C1

A Dia-PT Masterlot sec. eloszlása a Level I-en DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

1,041,000,960,920,88

Median

Mean

0,98000,97750,97500,97250,97000,96750,9650

1st Quartile 0,95713Median 0,974233rd Quartile 0,98281Maximum 1,04323

0,96470 0,97939

0,96567 0,97423

0,02504 0,03561


Mean 0,97204StDev 0,02940Variance 0,00086

Skewness 0,08132Kurtosis 1,29677N 64

Minimum 0,88089





Summary for Lev1INR

Az INR –ek eloszlása a Lyphochek level I-enDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

3,63,53,43,33,23,13,0

Median

Mean

3,283,263,243,223,20


3,2087 3,2734

3,2048 3,2813

0,1164 0,1628


Mean 3,2411StDev 0,1357Variance 0,0184

Skewness 0,101845Kurtosis 0,356834N 70

Minimum 2,9600





Summary for lev.2INR

A level II INR értékei eloszlása DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

6543210

Median

Mean

5,45,35,25,1


5,0686 5,4149

5,1900 5,3998

0,6225 0,8712

A-Squared 6,28

P-Value < 0,005

Mean 5,2418StDev 0,7260Variance 0,5271Skewness -5,4970Kurtosis 40,0479N 70

Minimum 0,0000





Summary for Lev.3INR

A Level III INR értékei eloszlásaDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.

A Lyphochek reagensgyártói alkalmazásával szerzett kedvezı tapasztalatok

• 1, A reagens gyártás közben segít a reagens MNPT beállításában

• 2, A három szintő kontroll jelentısen megkönnyíti a vonalkódos kalibrációs egyenes egyenletének kiszámolását

• 3, A elegendıen hosszú terméksorozat segíti a hosszúidın keresztüli lot-to lot consistency megtartását


A Lyphochek alklamazásával feltételezhetıelınyök a reagens felhasználói oldalon

• 1, A %-os értékeken keresztül megbízhatóbb információt kapunk az MNPT értékérıl

• 2, A szériahosszúság miatt a felhasználóobjektív képet formálhat a PT reagens ingadozásáról

• 3, A level II és level III INR értékei a diagon Master lottal lettek megállapítva, melyek közvetlen kapcsolatban vannak a WHO PT standarddal


Date post:	21-Jan-2020
Category:	Documents
Upload:	others
View:	1 times
Download:	0 times

A valódiság problémája a prothrombin vizsgálatokban. A Bio ... · A valódiság problémája a...

Documents