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Capacitacion 5800

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Interpretación de Histogramas y Dispersogramas hematológicos en analizadores 5 diferenciales (a ver... quien se cree el cuento de las "6" estirpes?).
57
Ver: 1.0 27 Abril 2011 Dpto. de Ingeniería Medica Lic. TM Javier Quiroz Castillo Aplicaciones / Marketing ANALISIS E INTERPRETACIÓN DE LAS ALARMAS, DISPERSOGRAMAS E HISTOGRAMAS Analizador Hematológico BC-5800
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Page 1: Capacitacion   5800

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Lic. TM Javier Quiroz Castillo Aplicaciones / Marketing

ANALISIS E INTERPRETACIÓN DE LAS ALARMAS, DISPERSOGRAMAS E HISTOGRAMAS Analizador Hematológico BC-5800

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Familia de Productos Mindray

2

Oficinas Shenzhen,

P.R.China Ingresos:

547.5 Mill. USD (2008) Empleados:

5580 Posicionamiento de Mercado: Mayor compañía China en Desarrollo Médico; Global No.3 en Monitoreo de Pacientes

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Familia de Analizadores Hematológicos

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Imagen del BC-58005 diferenciales, 29 parametros

Hasta 90 muestras por hora

Laser scatter + Chemical dye +

Flow cytometry technology

Canal independiente y método optico

para la medición de Basófilos

Powerful capability to flag abnormal cells

Optional autoloader, barcode scanner

Large TFT touch screen

Large storage capacity: up to 40,000 samples

Recommended or customizable decision rules

for re-exam abnormal samples

Support uni- or bi-directional LIS

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PLT

Eos

Lymph

Mono

Neutro

Baso

RBC

Estudio de Células Sanguíneas

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Secuencia normal de Tamaño

Después de los Lisantes

Tecnología 3 diff?

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Cinco grupos Leucocitarios

Lymphocyte 25 ~ 30%Monocyte 3 ~ 8 %

Neutrophil 50 ~70%

Basophil 0 ~ 1 %

Eosinophil 0.5 ~3%

Tecnología 5 diff?

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Estructura simple y diferente tamaño Estructura compleja y tamaño medio

Gran núcleo que ocupa casi toda la célula

Más citoplasma que el linfocito

Gránulos pequeños, núcleo multilobular

Gránulos grandes y oscuros; núcleo lobulado

Gránulos grandes rojo/naranja; núcleo púrpura bilobulado

Similitudes y diferencias

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Existen 5 diferentes tipos de Leucocitos ( WBC)

Lymphocyte Monocyte Neutrophil Eosinophil Basophil

Tamaño pequeño, gran núcleo con relación a citoplasma, el mayor constituyente del sistema inmune.

Grande, citoplasma sin gránulos, interviene en la ingestión de partículas extrañas, como bacterias o parásitos.

Gránulos en citoplasma de color rosado, marcador de etapa aguda de la inflamación.

Gránulos de color naranja, gruesos , relacionados con infecciones parasitarias.

Menos común de todos, gránulos de color azul oscuro, relacionados con infecciones micóticas.

Granulocitos

LYM MON NEU EOS BAS

Diferenciación de Leucocitos5 Diff.

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ED

B

CATa

mañ

o

Complejidad, gránularidad (vacuolas, artefactos)

WBC: White Blood CellCombinación de Tamaño y Complejidad

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¿Cómo Diferenciar los Diferentes Tipos de Leucocitos?

Utilizando sus diferentes características, TAMAÑO Y COMPLEJIDAD CELULAR

Para eso utilizaremos cuatro tecnologías combinadas:Citometría de FlujoDispersión de Laser Tinción CitoquímicaImpedancia Eléctrica

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Tecnología Avanzada

Dispersión de laser

Citometría de flujo

Tinción citoquímica

WBC 5-diff technology

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Celulas inyectadas en una cámara de flujo que esta localizado en el paso óptico de una fuente de luz, usualmente un laser.

La cámara de flujo contiene un líquido que fluye rapidamente : el fluido envolvente que lleva la muestra a alta velocidad por el paso de luz.

Las células mantienen su orientación y posición en el fluido debido a que obedecen las característricas del flujo laminar y atraviesan en fila de uno el paso óptico.

WBC TecnologíaCitometría de Flujo

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La dispersión de Luz ocurre cuando la partícula reflacta la luz que incide sobre ella, esto depende de las características físicas de la partícula.

-Forward scatter (FS): Tamaño-Side scatter (SS): Complejidad

1 - 5°6 - 20°

WBC TecnologíaDispersión de Luz Laser

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1

3

2

1 Muestra

2 Laser

3 Lentes

5

4

Dispersión de Laser de Ángulo Múltiple

Dispersión de ángulo mayor (MAS)8~20

Granularidad (Complex)

Dispersión de ángulo Menor (LAS)2~5Volumen

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Teoría de Mie

• En células diferentes de diferente tamaño (Monoc. y Linf.)• El ángulo bajo las diferencia por tamaño

LAS

Laser

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Teoría de Mie

• En células diferentes pero del mismo tamaño (granulocitos)• Ángulo mayor refleja la complejidad celular

MAS

Laser

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RBC

OtrosWBC

EOS

LEO I LEO II

Cámara de diferencial

WBC TecnologíaTinción Química

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BASO

other WBC

RBC

WBC technologyChemical dye

BASO Channel

LBA

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WBC BAS%

BASO scattergramWBC/Baso

BAS# can be calculated according to BAS%

WBC total result is counted in BASO channel

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BAS% WBC BAS#

DIFF Bath BASO Bath

NEU% LYM% MON% EOS% * =

*

NEU# LYM# MON# EOS#

5 part resultFinally…

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DISPERSOGRAMA / SCATTERGRAMA

DEFINICIÓNGráfico estadístico que representa la distribución de dos variables en una muestra. Una variable se representa gráficamente en el eje vertical; la otra en el horizontal. Un dispersograma demuestra el grado o tendencia de presentación de las variables en relación mutua.

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INTERPRETACIÓN DEL DISPERSOGRAMA

Eos

Lymph

Mon

Ghost

Neu

FS : Frontal Scatter / Dispersión Frontal / Información sobre el Tamaño celularSS : Side Scatter / Dispersión Lateral / Información sobre Complejidad Celular

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Entendiendo el Dispersograma Normal

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Dispersograma de una muestra NORMAL

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Dispersograma de una muestra normal

Dispersograma BASO

1. The 4 parts except BASO should be close to the lower left corner.

2. The profile of lower part should be smooth, not cut by a straight line.

RBC Ghost

Mono

Lymph

Neu

Eos

Baso

4 Parts

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Estructura complejaEstructura simple

Pequeño

Estructura interna del Linfo es mas simple que la del EOS.

Neutro es complejo y grande

Mono es más grande que el Linfo

DIFF

Grande

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Estructura complejaEstructura simple

Grande

Pequeño

LymphNeutroEosMonoDisminuyen grandemente

Baso mantiene su mismo tamaño

BASO

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Dispersograma Anormal y Su Significado

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Neu

Eos

Lym

Mon

LIC

NRbc

ALY

Ghost

Left Shift

ALY

Muestras Anormales: Banderas

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Lymphocytosis Neutrophilia

Leucopoenia

Monocytosis

Eosinophilia

Dispersograma de una muestra ANORMAL

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Dispersograma de una muestra ANORMAL

ATL LIC

Lyse resistantLeft shift

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Dispersograma Anormal

Mov Izq.

LIC

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Dispersograma Anormal

ALY

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Ganancia inadecuada

Ganancia baja Ganancia alta

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Celda de flujo sucia o con coágulos

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ALARMA Señal por medio de la cual se informa sobre la presencia real o inminente de una amenaza, aviso de la probabilidad de que ocurra un suceso.

DEFINICIÓN

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SISTEMA DE ALARMAS

1.Límite

Excedido

3.Se Requiere

Confirmación Microscópica

2.Banderas

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¿Por qué se requiere confirmación microscópica?

En estado patológico las células alteran sus características celulares normales Tamaño : células activadas son mas grandesComplejidad : Células activadas desarrollan estructuras que normalmente no poseen. (granulaciones tóxicas, vacuolas)

RUO

Atypical Lymphocytes (#,%)

Large Immature Cell (#,%)

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Superposición de poblaciones

Como consecuencia de esto las células no se encontraran en las zonas donde normalmente se ubicaban. Y es posible que las poblaciones se superpongan no permitiendo asi una identificación definitiva.Las posibilidades son variadas

35 65

40 60

41 70

3565

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¿Por qué, en ocasiones, mi lámina no concuerda con el resultado del analizador?

• Diferencia de método, recordar que el analizador cuenta miles de células y el observador 100.

• Extensión de la muestra, de la aguja, o del tubo?

• Fragilidad de los eosinófilos• Técnica de lectura (incluyo

los extremos?)• Alteraciones debido a la

preparación del colorante.• Densidad de la muestra.• Velocidad del extendido.

Recordar que en raras ocasiones la lectura microscópica hecha por dos operadores diferentes coincide completamente

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HISTOGRAMAS, EL PRINCIPIO DE COULTER

Luego de producida la acción del lisante las células son medidas y contadas por el método de impedancia (recordar que por el principio de Coulter el número de pulsos producidos por el paso de una partícula con carga de una solución a otra conectas y unidas mediante un registrador de voltaje equivale al número de partículas que se desplazan de una solución a otra, y la duración del pulso es directamente proporcional al volumen de la partícula.)

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HISTOGRAMAS

En estadística, es la representación gráfica de una variable, en forma de barras, donde la altura de cada barra es proporcional a la frecuencia de los valores representados.

En el eje vertical se presentan las frecuencias.

En el eje horizontal se presentan los valores de las variables

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HISTOGRAMASEl histograma es un grafico construido mediante la representación de dos variables:

 

a.- Volumen de la partícula, en el eje X (Horizontal), en femtolitros

b.- Número de partículas, eje Y (Vertical)

El analizador presenta 3 histogramas

WBC, Baso

Glóbulos Rojos

Plaquetas

El analizador separa los pulsos en umbrales y canales.

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HISTOGRAMAS

Traducción de los pulsos en un Histograma

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HISTOGRAMAS

Curva de datos primarios

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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Observe que la distribución de la población no es simétrica, esto es normal debido a que las plaquetas son restos celulares de forma y tamaño variable, una plaqueta joven es de mayor tamaño que una senescente, si bien el límite aceptado para una plaqueta normal son 12 fl. Eso quiere decir que el promedio de la población (el pico) debería encontrarse siempre al lado izquierdo de la flecha, como se observa en el gráfico.

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PDWMPV

PLTPCT =

* MPV

10000

PLT seriesHistogram

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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Un gráfico que siga la línea roja debe interpretarse como posible agregación plaquetaria (el origen intra o extravascular de la misma no puede determinarse) o con un aumento en el número de plaquetas grandes, fragmentos celulares (membranas de glóbulos rojos)

Un gráfico que siga la línea verde debe interpretarse como interferencia producida por microcitosis marcada, glóbulos rojos de menos de 30 fl.(recordar que tanto plaquetas como glóbulos rojos se miden por impedancia en una misma cámara y de manera simultánea.)

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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Una agregación plaquetaria lleva consigo una disminución en el número de plaquetas (2 o más plaquetas agregadas son contadas como una de mayor tamaño).

Por lo tanto cada vez que se encuentre una alteración en la forma del histograma de plaquetas, debe investigarse microscópicamente la muestra en busca de agregación plaquetaria.

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PLT seriesP-LCC/P-LCR

S2 representa el número de plaquetas grandes, y S1+S2 representa el recuento total de plaquetas

PLTP-LCC = * P-LCR

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P-LCC y P-LCR estan relacionados.

P-LCC Platelets-Large Cells CountP-LCR Platelets-Large Cells Ratio

PLTP-LCC = * P-LCR

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PLT: Platelet Clinical application

PLT P-LCR Clinical Cases

Normal (100-300*109/L) Normal (11-45%) ~

Increased platelet destruction

Reactive thrombocytosis

~ Thalassanemia

~ Platelet dysplasia

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HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS

El Histograma de Glóbulos Rojos se aprecia como una distribución cercana a la normal.

Observe la distribución casi simétrica de la población con el pico de la población cercana a los 87 fl. Observe además que existen hematíes debajo de los 50 fl. Y encima de los 100 fl.

El ancho de base de la campana representa el nivel de variabilidad de la población, (Anisocitosis/poiquilocitosis)

La posición de la campana sobre el eje horizontal representa la tendencia Micro, Normo o Macrocítica de la población.

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Case Presentation

Normal people, the RBC histogram shape is in perfect Gaussian distribution.

Dimorphologic RBC histogram, indicating anisocytosis. From a rectal cancer patient

Microcytosis, the RBC dominant peak moves to left. From a 34-year old outpatient.

Dimorphologic RBC histogram. From a recovery of Iron-deficiency anemia treatment patient.

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Sample Rotatory Valve

DIFF Channel

Flow

Cytom

etry

Laser S

catter

Sca

tterg

ram

RBCPLT

HGB

Colorim

etry

Impedance

LH Lyse

Aperture

BASO Channel

4 channels for BC-58005 reagents in 4 channel

LEO I

LEO II

LBA

HGB Channel

LH

Diluent

LYMMONNEUEOS

BASWBC

HGB

RBCPLT

RBC Channel


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