8/17/2019 Concentracion de Enzima y Ph

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONALEscuela Nacional de Ciencias Biológicas

CINETICA ENZIMATICA

“EFECTO DEL PH CONCENT!ACION DE ENZIMA SOB!E

LA "ELOCIDAD DE !EACCION#

Casillas !a$os %uille&$o A&'u&o( O&'a Ca$a&go Be&enice

)F"* SECCION *

O+,e'i-o %ene&al.

- Analizar algunos factores que modifican lavelocidad de la reacción catalizada por la invertasay caracterizar de esta manera a dicha enzima.

O+,e'i-o es/ec01ico.- Analizar la importancia del pH del medio sobre la

velocidad de una reacción enzimática y su efectosobre el carácter iónico de la enzima y del sustrato

- Demostrar que la velocidad de la reacciónenzimática es directamente proporcional a la

concentración de enzima

In'&oducción.

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran lavelocidad de una reacción enzimática. !stas reducen laenerg"a de activación que es esencial para el inicio decualquier tipo de reacción qu"mica. #on un requisito de ba$oconsumo de energ"a para la activación la reacción tienelugar más rápidamente De forma general la velocidad deuna reacción catalizada enzimáticamente es proporcional ala cantidad de enzima en la mezcla de ensayoLos enzimas poseen grupos qu"micos ionizables

%carbo&ilos amino tiol imidazol etc.' en las cadenaslaterales de sus aminoácidos. (eg)n el pH del medio estosgrupos pueden tener carga el*ctrica positiva negativa oneutra La conformación de las prote"nas depende enparte de sus cargas el*ctricas habrá un pH en el cual laconformación será la más adecuada para la actividadcatal"tica. !ste es el llamado pH óptimo y depende de lasecuencia de aminoácidos que conforman la enzima.#ualquier cambio brusco en el pH afecta las propiedadescatal"ticas de una enzima.

!esul'ado.

Ta+la &esul'ados 2E34Tu+o 5 Tu+o * Tu+o ) Tu+o 6 Tu+o 7

A+so&+ancia 84865 8469: 847*8 545)* 546;;

A<=ca& &educ'o&>µ$oles?

8486 64: 749 5*45 574;

"elocidad >U4I4? 84886 846: 8479 54*5 547;

Concen'&aciónde en<i$a >µg@*48 $L?

5 * ) 6 7

Ta+las de &esul'ados /H4Tu+o5

Tu+o*

Tu+o)

Tu+o6

Tu+o7

A+so&+ancia 84)8 84::* 5459; 54)66 849;6

A<=ca& &educ'o& >µ$oles?

)4) 584; *49 56477 ;4)

"elocidad >U4I4? 84)) 548; 54*9 5467 84;)

PH )47 647 747 947 ;47

Discusiones.La sacarosa es un acetal que no se o&idan con facilidadporque ambos átomos de carbono anom*ricos están fi$osen un enlace glicos"dico !l ácido +, dinitrosalic"lico %D('reacciona )nicamente con los az)cares reductores. Lasacarosa es un disacárido no reductor pero tras suhidrólisis se libera glucosa y fructuosa que son reductoresy reaccionan con el D( generando un producto coloreadoque es posible analizar en el espectrofotómetro Al aadir el+,-D( ocurre una reacción de ó&ido-reducción en la cualel +,-D( %amarillo' es reducido por la glucosa al ácido +-amino-,-nitrosalic"lico %ro$o' mientras que la glucosa seo&ida a ácido D-glucónoico

 

(e adiciono D( porque estecumple con varias funciones como proporciona el pHalcalino necesario para que ocurra el equilibrio ceto /enólico en el cual la D/0ructosa se isomeriza formando D/glucosa y viceversa además inactiva la acción de laenzima.La velocidad de reacción es proporcional a la concentraciónde enzima pues a mayor cantidad de enzima es posibletransformar más sustrato en menor tiempo ya que seforma una cantidad mayor del comple$o !(. La cantidad demol*culas de sustrato presente en la mezcla de reacción esdemasiado alta en comparación con las mol*culas deenzima por lo que al adicionar enzima está siempretendrá sustrato disponible para reaccionar es decir el

sustrato nunca será el reactivo limitante.La actividad de la invertasa se ve afectada por el pH al cualse lleva a cabo la reacción. La curva actividad-pH puedeser diferente para cada tipo de enzima pero en el caso dela enzima utilizada muestra una tendencia gráfica parecidaa una campana o parábola!l pH modifica la velocidad de reacción de distintasmaneras. 1na de ellas es por la ionización del sitio activoen donde el proceso catal"tico usualmente requiere que la

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enzima y el sustrato tengan grupos qu"micos en unaforma iónica particular para poder interactuar. 2tro aspectoen la que el pH se ve involucrado es en ladesnaturalización de la enzima ya que pH e&tremospueden ocasionar que la enzima pierda su estructura nativay por tanto su actividad o función debido al cambio de lasinteracciones iónicas tambi*n la estabilidad de la enzima

se ve modificada. La actividad má&ima de la enzima ocurre en el pH óptimo.

 Aunque e&perimentalmente los valores obtenidos en la

 Absorbancia no fueron los esperados debido posiblemente

a la medición inadecuada del tiempo de reacción de la

invertasa o a la adición de diferentes vol)menes de

reactivos es posible observar en la representación gráfica

que para la invertasa el pH optimo se encuentra en un

rango de pH de 3 a 3.,. (i el medio se torna muy ácido o

muy básico la enzima se desactiva y se desactiva de

manera irreversible.

Conclusiones.

La velocidad de reacción es directamente proporcional a la

concentración de enzima y la concentración del sustrato

tambi*n aumenta la velocidad de reacción hasta que llega

a una velocidad má&ima.

!l pH óptimo de la invertasa es un rango de 3 a 3. a

valores inferiores o superiores la actividad de la enzima

disminuye.

Bi+liog&a10a.

4oet 5ratt 6778 0undamentos de bioqu"mica la

vida a nivel molecular 69 edición editorial m*dica

panamericana pp: 6,7-68+