Criterio de selección de cepas de Basidiomicetes usadas ...Cesio, Horacio Heinzen, M. Pía...

Criterio de selección de cepas de Basidiomicetes usadas como

inóculo para biobeds.

Anisleidy Rivero, Silvina Niell, Lucía Pareja, Verónica Cesio, Horacio Heinzen, M. Pía Cerdeiras

Facultad de Química-Universidad de la República

¿Why WRF?

Proven biodegrading ability of xenobiotics .

Enzymatic system

They are able to degrade lignin to CO2 and H2O

As filamentous fungi they are able to colonize different substrates.

Area/volume makes them efficient degraders

Which strains?

Why?

Construction of a strain collection

INIA-LIA 057 project (isolates from E. globulus forests)

Trinidad Mushrooms (speciality mushrooms)

Isolates from native forests

Inocutis jamaicensis Inonotus spp. Stereum spp.

Pycnoporus sanguineus Panus tigrinus

Phanerochaete crassa Coriolus versicolor

Laetiporus sulphureus Bjerkandera adusta

Gymnopilus spectabilis Dictyopanus pusillus

Schizoplhyllum commune

Strain collection of the Cátedra de Microbiología General-FQ-FC UdelaR

230 isolates, 114 strains of

Basidiomycetes (WRF y BRF)

Conservation

Uses

General characteristics of the strains to be used?

Non pathogenic

Able to grow in the presence of the compound/s to be

degraded

Able to grow on the substrates to be used in the construction

of the biobed

Present a “strong” ligninolytic system

Screening of Basidiomycetes

11 strains of the collection of the Cátedra de Microbiología YNB w/glu y wo/glu+50mg kg-1 de endosulfan (12days at 28±2°C).

•P. atropurpuracens(CCM014) •P. crysosporium(CCM004) •A. biennis(CCM0106) •B. adusta(CCM0379) •T. versicolor(CCM0338) •P. sanguineus(CCM0374) •P. cubensis(CCM0417) •Coriolus sp(CCM0341) •P. cornucopiae(CCM006) •G. trabeum(H2130) •G. recinaceum(CCM7187)


Non pathogenic


degraded


of the biobed


Hongo Medio w endo. Tiempo A 28°C Tamaño(diámetro)

P.artropurpuracens YNB 12 días 8 mm

YNB + glu 12 días 8 mm

P.crysosporium YNB 12 días 12 mm


A. biennis YNB 12 días 27 mm


B. adusta YNB 12 días 38 mm


T. versicolor YNB 12 días 9 mm


P. sanguineus YNB 12 días 8 mm


P. cubensis YNB 12 días No crecimiento

YNB + glu 12 días No crecimiento

Coriolus YNB 12 días 9 mm


P. cornucopiae YNB 12 días No crecimiento


G. ferreus YNB 12 días 9 mm


G. recinaceum YNB 12 días No crecimiento


Results

A. biennis (CCM0106) y B. adusta (CCM0379)


Non pathogenic


degraded


of the biobed



Non pathogenic


degraded


of the biobed


Remazole-blue Poly –R478

Media decolouration??

(-) (+)

Borokhov, O.,Rothenburger, S., 2000. Rapid Dye Decolorization Method for

Screening Potencial Wood Preservatives. Appl Environ Microb 66, 5457-5459.

Decoloration rate (x10-6 mM/s)

RBB Acid Blue 25

without E (G) 0.20 0.08

inactiv.E (F) 0.60 0.02

inactiv.E.+Mn

+H2O2 (E) 0.70 0.01

E (D) 3.00 3.00

E + Mn (C) 3.00 3.00

E+ H2O2 (B) 3.00 2.00

E +Mn+H2O2 (A) 3.00 2.00

∙Extracto de malta ∙YNB+1% Glu ∙Kimura ∙YCB+tartrato de amonio(1,2mM) ∙YCB+tartrato de amonio(30 mM) ∙MEA

Which culture media should we use?

Growth and decolouration of Poly-R and RBBR


Non pathogenic


degraded


of the biobed

























Results

Endosulfan
























Results

Evaluation of bioconversion

Growth on YNB +1% glucose+50 mg kg-1

endosulfan 27days

28°C

Sampling 9, 15, 27 days

Bjerkandera adusta

0

10

20

30

40

50

0 días 9 días 15 días 27 días

End α+β 50 16 19 9

Co

nc(m

g.k

g-1)

Endosulfán α+β

% biocon. 9 días 15 días 27 días

End α+β 68 63 82

End α 78 74 89

End β 91 90 94

A. biennis

0

10

20

30

40

50


End α+β 50 22 18 13

Co

nc(m

g.k

g-1)

Endosulfán α+β

9 días 15 días 27 días

End α+β 57 64 75

End α 70 75 83

End β 88 90 93

Metabolites detected

0

2

4

6

8

10

12


Co

nc(m

gkg-1)

Tiempo(días)

End sulfato

End éter

End alcohol

B. adusta

A. biennis

0

2

4

6

8

10

12

14

0 días 9 días 15

días

27

días

Co

nc(m

g.k

g-1)

Tiempo(días)

End. sulfato

End. éter

End. alcohol

Endosulfan

Chlorpyrifos

Can A. biennis grow on chlorpiryfos?

YNB (1% glu)(wo/glu)

50 mg kg -1 endosulfan


60 mg kg -1 chlorpiryfos


50 mg kg -1 endosulfan

60 mg kg -1 chlorpiryfos

12días 28°C

Growth evaluation

It can!!

Muchas gracias!! Thank you very much!!

Tack så mycket!! Merci beaucoup!!

• Cáscara de arroz:

• 23% lignina (paja trigo 20%)

• 0.2-0.3 % N

• 40% C

Remazole-blue Poly –R478

Decoloración del medio ??

(-) (+)

Estudio de producción de enzimas del sistema ligninolítico de A. biennis y B. adusta . Selección del medio de cultivo

Medios de cultivo ensayados

∙Extracto de malta ∙YNB+1% Glu ∙Kimura ∙YCB+tartrato de amonio(1,2mM) ∙YCB+tartrato de amonio(30 mM) ∙MEA

6 días a 28°C

Borokhov, O.,Rothenburger, S., 2000. Rapid Dye Decolorization Method for

Screening Potencial Wood Preservatives. Appl Environ Microb 66, 5457-5459.

Bioconversión para Bjerkandera adusta. Metabolitos intermedios

0

2

4

6

8

10

12


Co

nc(m

gkg-1)

Tiempo(días)

End sulfato

End éter

End alcohol


Endosulfán

sulfato

<LOD 4,2 2,4 <LOD

Endosulfán

éter

<LOD <LOD <LOD <LOD

Endosulfán

alcohol

<LOD 5,1 11 6,3

Bioconversión para A. biennis

0

10

20

30

40

50


End α+β 50 22 18 13

Co

nc(m

g.k

g-1)

Endosulfán α+β

0

10

20

30

40


End α 35 15 12 8,4

Co

nc(m

gkg-1)

End α

0

5

10

15


End β 15 6 4,8 3,7

Co

n(m

g.k

g-1

)

End β

9 días 15 días 27 días

End α+β 57 64 75

End α 70 75 83

End β 88 90 93

Bioconversión para A.biennis. Metabolitos intermedios

0

2

4

6

8

10

12

14

0 días 9 días 15 días 27 días C

onc(m

g.k

g-1)

Tiempo(días)

End. sulfato

End. éter

End. alcohol


Endosulfán

sulfato

<LOD <LOD 1,3 <LOD

Endosulfán

éter

<LOD LOD<X<LOQ <LOD <LOD

Endosulfán

alcohol

<LOD 14 8,9 2,1

Quiénes fuimos, somos y seremos (algun@s)

• Silvana Alborés • Andreína Baratta • Marta Bianchi • Mariana Barraco • Gianna Cecchetto • M. Pía Cerdeiras • Verónica Cesio • Laura Franco-Fraguas • Claudia M. Ibáñez

• Carlos Mantero • Mario Piaggio • María Julia Pianzzola • Nora Telechea • Mariana Richiero • Annisleidy Rivero • Marta Rolfo • Alvaro Vázquez

Date post:	08-Jul-2020
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Criterio de selección de cepas de Basidiomicetes usadas ...Cesio, Horacio Heinzen, M. Pía...

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