Diagnostic Techniques Diagnostic Techniques in bloodstream in bloodstream
infections: where are infections: where are we going?we going?
Elizandra Silva GuimarãesElizandra Silva Guimarães
AprimoramentoAprimoramento
USP 2010USP 2010
BLOODSTREAM BLOODSTREAM INFECTIONSINFECTIONS
• Bacteremia: presença da bactéria na corrente sanguínea
• Mortalidade BSI nosocomiais: de 35 para 60%. Em UTIs: de 31,5 para 82,4%, nos USA, em 2009.
• No Brasil: segundo MS (2009), infecções nosocomiais 15,5%.
IDENTIFICAÇÃOIDENTIFICAÇÃO4 diferentes categorias:
• Hybridization-based• PCR-based• Microarray methods• Protein-based
FLUORESCENCE IN SITU FLUORESCENCE IN SITU HYBRIDIZATION (FISH)HYBRIDIZATION (FISH)
• Técnica complementar à hemocultura convencional
• Acelera o diagnóstico de pacientes em sepse
• Altamente sensível e específica para bactérias G+
www.biovisible.com/FISHex.jpgwww.biovisible.com/FISHex.jpg
FISHFISH
http://www.moleculardevices.com/media/mm_FISH.jpg
PCR-BASED METHODSPCR-BASED METHODS• Reduz o tempo do diagnóstico• Possui boa reprodutibilidade• PCR Multiplex: necessita de uma
suspeita diagnóstica• Risco de contaminação• Impossibilidade do método de
acompanhamento terapêutico
SeptiFastSeptiFast
“SeptiFast detects and identifies the presence of the 25 most common microorganisms in healthcare associated sepsis directly in 1.5 mL of blood, without prior incubation, in < 6 hours.”
• Multiplex real time PCR quantitativa e hibridização.• Genotipagem• Possibilidade de calcular a quantidade de bactérias presentes na amostra.• Baixa sensibilidade em pequenas concentrações bacterianas• Baixa especificidade para alguns microorganismos
https://www.cobas-roche.co.uk/
MICROARRAY MICROARRAY METHODSMETHODS
• Probes de DNA para genes específicos ligados a substratos sólidos (vidro, nylon) para detecção e quantificação de ácidos nucléicos provenientes de amostras biológicas, as quais são postas para hibridar com o DNA fixado no array.
• Detecção, indentificação e genotipagem.• Importante ferramenta epidemiológica.• Pequena quantidade de amostra• Relativa baixa sensibilidade de microarrays de
fluorescência.
MICROARRAYMICROARRAY
biotech.biology.arizona.edu/.../biotech.biology.arizona.edu/.../microaray.jpgmicroaray.jpg
PROTEIN-BASED PROTEIN-BASED METHODSMETHODS
• Baseado em espectroscopia vibracional, na qual se utiliza radiação eletromagnética para testar o comportamento vibracional de proteínas observando-se a absorção ou espalhamento dessa radiação.
• Método complementar
PERSPECTIVASPERSPECTIVAS• Maior rapidez• Diminuição de custos• Utilização de técnicas conjuntas• Aumento da sensibilidade e
especificidade dos métodos• Importância epidemiológica
