DRI ® Amphetamines Assay For In Vitro Diagnostic Use Rx Only 10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit) Intended Use The DRI ® Amphetamines Assay is intended for the qualitative or semi-quantitative determination of amphetamines in human urine. The assay range is 0-2000 ng/mL with cutoff levels of 500 and 1000 ng/mL. The assay provides a simple and rapid analytical screening procedure for detecting amphetamines in urine. This assay provides only a preliminary analytical test result. A more specific alternative chemical method must be used in order to obtain a confirmed analytical result. Gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) is the preferred confirmatory method. 1,2 Clinical consideration and professional judgment should be applied to any drug of abuse test result, particularly when preliminary positive results are used. Summary and Explanation of the Test Amphetamines are synthetic derivatives of ephedrine. The most common amphetamines include d-amphetamine, d-methamphetamine, and d,l-amphetamine. They act as stimulants for the central nervous system. Amphetamine is the most sympathomimetic amine. 3,4 When amphetamine is ingested, it is either rapidly deactivated in the liver or excreted unchanged into the urine. Other ephedrine derivatives such as methamphetamine can be metabolized and excreted in urine as amphetamine. 5 The DRI Amphetamines assay is a liquid ready-to-use homogeneous enzyme immunoassay. 6 The assay uses specific antibodies, which can detect amphetamine and/or methamphetamine in urine with minimal cross-reactivity to various over-the-counter structurally unrelated compounds. The assay is based on the competition of an enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) labeled drug and the drug from the urine sample for a fixed amount of specific antibody binding sites. In the absence of free drug from the sample, the specific antibody binds the drug labeled with G6PDH and causes a decrease in enzyme activity. In the presence of free drug, the free drug occupies the antibody binding sites, allowing the drug- labeled G6PDH to interact with the substrate, resulting in enzyme activity. This phenomenon creates a direct relationship between drug concentration in urine and the enzyme activity. The enzyme activity is determined spectrophotometrically at 340 nm by measuring its ability to convert nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) to NADH. Precautions and Warnings DANGER: 1. This test is for in vitro diagnostic use only. The reagents are harmful if swallowed. 2. Reagents used in the assay components contain ≤0.09% sodium azide, which may react with lead or copper plumbing to form potentially explosive metal azides. When disposing of such reagents, always flush with a large volume of water to prevent azide build-up. 3. DRI Amphetamines Assay (100 mL) contains ≤0.5% Drug-specific antibody and ≤0.2% bovine serum albumin (BSA). 4. Do not use the reagents beyond their expiration dates. H317 - May cause allergic skin reaction. H334 - May cause allergy or asthma symptoms or breathing difficulties if inhaled. Avoid breathing mist or vapor. Contaminated work clothing should not be allowed out of the workplace. Wear protective gloves/eye protection/face protection. In case of inadequate ventilation wear respiratory protection. If on skin: Wash with plenty of soap and water. IF INHALED: If breathing is difficult, remove victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathing. If skin irritation or rash occurs: Get medical advice/attention. If experiencing respiratory symptoms: Call a POISON CENTER or doctor/physician. Wash contaminated clothing before reuse. Dispose of contents/container to location in accordance with local/regional/national/international regulations. Reagents Antibody/Substrate Reagent: Contains monoclonal anti-amphetamines antibodies, glucose- 6-phosphate (G6P), and nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) in Tris buffer with sodium azide as a preservative. Enzyme Conjugate Reagent: Contains amphetamines labeled with glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) in Tris buffer with sodium azide as a preservative. Reagent Preparation and Storage The reagents are ready for use. No reagent preparation is required. All assay components when stored at 2-8°C, are stable until the expiration date indicated on the label. Additional Materials Required (sold separately): Kit Description 1664 DRI Negative Calibrator, 10 mL 1388 DRI Negative Calibrator, 25 mL 1588 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 10 mL 1589 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 25 mL 1591 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 10 mL 1592 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 25 mL 1594 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 10 mL 1595 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 25 mL 1597 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 10 mL 1598 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 25 mL DOAT-2 MAS ® DOA Total – Level 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS ® DOA Total – Level 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS ® DOA Total – Level 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS ® DOA Total – Level 5, 6 x 18 mL Specimen Collection and Handling Collect urine specimens in plastic or glass containers. Care should be taken to preserve the chemical integrity of the urine sample from the time it is collected until the time it is assayed. Specimens kept at room temperature that do not receive initial test within 7 days 7 of arrival at the laboratory should be placed into a secure refrigeration unit at 2 to 8°C for several weeks. 8 For longer storage prior to analysis or for sample retention after analysis, urine specimens may be stored at -20°C. 9 Studies have shown amphetamine analytes in urine are stable at -20°C indefinitely. 8 Laboratories following the SAMHSA mandatory guidelines should refer to SAMHSA “Short- Term Refrigerated Storage” and “Long-Term Storage” requirements. 10 To protect the integrity of the sample, do not induce foaming and avoid repeated freezing and thawing. An effort should be made to keep pipetted samples free of gross debris. It is recommended that grossly turbid specimens be centrifuged before analysis. Frozen samples should be thawed and mixed prior to analysis. Adulteration of the urine sample may cause erroneous results. If adulteration is suspected, obtain another sample and forward both specimens to the laboratory for testing. Handle all urine specimens as if they were potentially infectious. Assay Procedure Analyzers capable of maintaining a constant temperature, pipetting samples, mixing reagents, measuring enzymatic rates at 340 nm and timing the reaction accurately can be used to perform this assay. Before performing the assay, refer to the analyzer-specific protocol sheet, which contains parameters and/or additional instructions for use. Quality Control and Calibration Good laboratory practice suggests the use of control specimens to ensure proper assay performance. Use controls near the cutoff calibrator to validate the calibration. Control results must fall within established ranges, as determined by laboratory procedures and guidelines. If results fall outside of established ranges, assay results are invalid. All quality control requirements should be performed in conformance with local, state and/or federal regulations or accreditation requirements. Each laboratory should establish its own calibration and control frequency. Qualitative Analysis For qualitative analysis of samples, use the DRI Multi-Drug Urine Calibrator 1 or 2. The Calibrator 1 contains 500 ng/mL d-methamphetamine, which is used as a cutoff reference for distinguishing “positive” from “negative” samples for a 500 ng/mL cutoff. The Calibrator 2 contains 1000 ng/mL d-methamphetamine, which is used as a cutoff reference for distinguishing “positive” from “negative” samples for a 1000 ng/mL cutoff. Semi-quantitative analysis For semi-quantitative analysis, use all calibrators. Results and Expected Values Qualitative results A sample that exhibits a change in absorbance ( A) value equal to or greater than the value obtained with the cutoff calibrator is considered positive. A sample that exhibits a change in absorbance ( A) value lower than the value obtained with the cutoff calibrator is considered negative. Semi-quantitative results A rough estimate of drug concentration in the samples can be obtained by running a standard curve with all calibrators and quantitating samples off the standard curve. Sample results above the high calibrator should be diluted with negative urine and retested. Semi-quantitation of positive results enables laboratories to determine an appropriate dilution of the specimen for confirmation by a confirmatory method such as GC/MS. It also permits the laboratory to establish quality control procedures and assess control performance.
Transcript
DRI® Amphetamines Assay For In Vitro Diagnostic Use
Rx Only
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit)
Intended UseThe DRI® Amphetamines Assay is intended for the qualitative or semi-quantitative determination of amphetamines in human urine. The assay range is 0-2000 ng/mL with cutoff levels of 500 and 1000 ng/mL. The assay provides a simple and rapid analytical screening procedure for detecting amphetamines in urine.
This assay provides only a preliminary analytical test result. A more specific alternative chemical method must be used in order to obtain a confirmed analytical result. Gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) is the preferred confirmatory method.1,2 Clinical consideration and professional judgment should be applied to any drug of abuse test result, particularly when preliminary positive results are used.
Summary and Explanation of the TestAmphetamines are synthetic derivatives of ephedrine. The most common amphetamines include d-amphetamine, d-methamphetamine, and d,l-amphetamine. They act as stimulants for the central nervous system. Amphetamine is the most sympathomimetic amine.3,4 When amphetamine is ingested, it is either rapidly deactivated in the liver or excreted unchanged into the urine. Other ephedrine derivatives such as methamphetamine can be metabolized and excreted in urine as amphetamine.5
The DRI Amphetamines assay is a liquid ready-to-use homogeneous enzyme immunoassay.6 The assay uses specific antibodies, which can detect amphetamine and/or methamphetamine in urine with minimal cross-reactivity to various over-the-counter structurally unrelated compounds. The assay is based on the competition of an enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) labeled drug and the drug from the urine sample for a fixed amount of specific antibody binding sites. In the absence of free drug from the sample, the specific antibody binds the drug labeled with G6PDH and causes a decrease in enzyme activity. In the presence of free drug, the free drug occupies the antibody binding sites, allowing the drug-labeled G6PDH to interact with the substrate, resulting in enzyme activity. This phenomenon creates a direct relationship between drug concentration in urine and the enzyme activity. The enzyme activity is determined spectrophotometrically at 340 nm by measuring its ability to convert nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) to NADH.
Precautions and WarningsDANGER: 1. This test is for in vitro diagnostic use only. The reagents are harmful if swallowed. 2. Reagents used in the assay components contain ≤0.09% sodium azide, which may react with lead or copper plumbing to form potentially explosive metal azides. When disposing of such reagents, always flush with a large volume of water to prevent azide build-up. 3. DRI Amphetamines Assay (100 mL) contains ≤0.5% Drug-specific antibody and ≤0.2% bovine serum albumin (BSA). 4. Do not use the reagents beyond their expiration dates.
H317 - May cause allergic skin reaction.H334 - May cause allergy or asthma symptoms or breathing difficulties if inhaled.
Avoid breathing mist or vapor. Contaminated work clothing should not be allowed out of the workplace. Wear protective gloves/eye protection/face protection. In case of inadequate ventilation wear respiratory protection. If on skin: Wash with plenty of soap and water. IF INHALED: If breathing is difficult, remove victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathing. If skin irritation or rash occurs: Get medical advice/attention. If experiencing respiratory symptoms: Call a POISON CENTER or doctor/physician. Wash contaminated clothing before reuse. Dispose of contents/container to location in accordance with local/regional/national/international regulations.
ReagentsAntibody/Substrate Reagent: Contains monoclonal anti-amphetamines antibodies, glucose-6-phosphate (G6P), and nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) in Tris buffer with sodium azide as a preservative.
Enzyme Conjugate Reagent: Contains amphetamines labeled with glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) in Tris buffer with sodium azide as a preservative.
Reagent Preparation and StorageThe reagents are ready for use. No reagent preparation is required. All assay components when stored at 2-8°C, are stable until the expiration date indicated on the label.
Additional Materials Required (sold separately):
Kit Description 1664 DRI Negative Calibrator, 10 mL 1388 DRI Negative Calibrator, 25 mL 1588 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 10 mL 1589 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 25 mL 1591 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 10 mL 1592 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 25 mL 1594 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 10 mL 1595 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 25 mL 1597 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 10 mL 1598 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Level 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Level 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Level 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Level 5, 6 x 18 mL
Specimen Collection and HandlingCollect urine specimens in plastic or glass containers. Care should be taken to preserve the chemical integrity of the urine sample from the time it is collected until the time it is assayed.
Specimens kept at room temperature that do not receive initial test within 7 days7 of arrival at the laboratory should be placed into a secure refrigeration unit at 2 to 8°C for several weeks.8
For longer storage prior to analysis or for sample retention after analysis, urine specimens may be stored at -20°C.9 Studies have shown amphetamine analytes in urine are stable at -20°C indefinitely.8
Laboratories following the SAMHSA mandatory guidelines should refer to SAMHSA “Short-Term Refrigerated Storage” and “Long-Term Storage” requirements.10
To protect the integrity of the sample, do not induce foaming and avoid repeated freezing and thawing. An effort should be made to keep pipetted samples free of gross debris. It is recommended that grossly turbid specimens be centrifuged before analysis. Frozen samples should be thawed and mixed prior to analysis. Adulteration of the urine sample may cause erroneous results. If adulteration is suspected, obtain another sample and forward both specimens to the laboratory for testing.
Handle all urine specimens as if they were potentially infectious.
Assay ProcedureAnalyzers capable of maintaining a constant temperature, pipetting samples, mixing reagents, measuring enzymatic rates at 340 nm and timing the reaction accurately can be used to perform this assay.
Before performing the assay, refer to the analyzer-specific protocol sheet, which contains parameters and/or additional instructions for use.
Quality Control and CalibrationGood laboratory practice suggests the use of control specimens to ensure proper assay performance. Use controls near the cutoff calibrator to validate the calibration. Control results must fall within established ranges, as determined by laboratory procedures and guidelines. If results fall outside of established ranges, assay results are invalid. All quality control requirements should be performed in conformance with local, state and/or federal regulations or accreditation requirements. Each laboratory should establish its own calibration and control frequency.
Qualitative AnalysisFor qualitative analysis of samples, use the DRI Multi-Drug Urine Calibrator 1 or 2. The Calibrator 1 contains 500 ng/mL d-methamphetamine, which is used as a cutoff reference for distinguishing “positive” from “negative” samples for a 500 ng/mL cutoff. The Calibrator 2 contains 1000 ng/mL d-methamphetamine, which is used as a cutoff reference for distinguishing “positive” from “negative” samples for a 1000 ng/mL cutoff.
Semi-quantitative analysisFor semi-quantitative analysis, use all calibrators.
Results and Expected ValuesQualitative resultsA sample that exhibits a change in absorbance ( A) value equal to or greater than the value obtained with the cutoff calibrator is considered positive. A sample that exhibits a change in absorbance ( A) value lower than the value obtained with the cutoff calibrator is considered negative.
Semi-quantitative resultsA rough estimate of drug concentration in the samples can be obtained by running a standard curve with all calibrators and quantitating samples off the standard curve. Sample results above the high calibrator should be diluted with negative urine and retested. Semi-quantitation of positive results enables laboratories to determine an appropriate dilution of the specimen for confirmation by a confirmatory method such as GC/MS. It also permits the laboratory to establish quality control procedures and assess control performance.
Cutoff CharacterizationSamples near the cutoff values were prepared by spiking d-amphetamine and d-methamphetamine separately into negative pooled urine. The samples were assayed in replicates of 20 in both qualitative and semi-quantitative modes. In qualitative mode, all samples were detected accurately with the negative samples recovering less than the cutoff calibrators and the positive samples recovering greater than the cutoff calibrators. In semi-quantitative mode, samples recovered within ± 12% error of their nominal values. The precision of the 20 replicates was less than 1% CV for qualitative mode and less than 4% CV for semi-quantitative mode.
Accuracy160 clinical urine specimens were tested with the DRI Amphetamines assay on the Beckman Coulter AU680 and GC/MS. The results are presented in the following tables.
Some discordant results were obtained when the assay was used to detect amphetamine and methamphetamine analytes individually. The assay is capable of detecting the presence of both amphetamine and methamphetamine analytes with 100% cross reactivity to both drugs. Therefore samples tested for one analyte may give false positive results due to the presence of the other analyte.
Qualitative Analysis: The overall concordance between the DRI Amphetamines assay and GC/MS for amphetamine was 58.0% for the 500 cutoff and 59.4% for the 1000 cutoff.
Stratified Results
DRI
Low Negativeby GC/MS(less than
-50%)
Near CutoffNegativeby GC/MS
(between -50% and cutoff)
Near CutoffPositive
by GC/MS(between cutoff and
+50%)
High Positive
by GC/MS(greater
than +50%)
PercentAgreement
withGC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positive 34 24 14 49 100.0%
Negative 16 1 0 0 22.7%
1000 ng/mL Cutoff
Positive 40 15 19 20 97.5%
Negative 35 8 1 0 43.9%
Qualitative500 ng/mL
GC/MS1000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Semi-quantitative Analysis: The overall concordance between the DRI Amphetamines assay and GC/MS for amphetamine was 58.0% for the 500 cutoff and 58.7% for the 1000 cutoff.
Stratified Results
DRI
Low Negativeby GC/MS(less than
-50%)
Near CutoffNegativeby GC/MS
(between -50% and cutoff)
Near CutoffPositive
by GC/MS(between cutoff
and +50%)
High Positive
by GC/MS(greater
than +50%)
PercentAgreement
withGC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positive 34 24 14 49 100.0%
Negative 16 1 0 0 22.7%
1000 ng/mL Cutoff
Positive 41 15 19 20 97.5%
Negative 34 8 1 0 42.9%
Semi-quantitative500 ng/mL
GC/MS1000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
2
Limitations1. A positive result from this assay indicates only the presence of amphetamine or
methamphetamine and does not necessarily correlate with the extent of physiological and psychological effects.
2. A positive result by this assay should be confirmed by another nonimmunological method such as GC, TLC or GC/MS.
3. The test is designed for use with human urine only.4. It is possible that other substances and/or factors (eg, technical or procedural) not
listed in the specificity table may interfere with the test and cause false results.
Specific Performance CharacteristicsTypical performance data results obtained on the Beckman Coulter AU680 analyzer are shown below.11
Dilution Recovery and LinearityA high patient urine sample containing around 2000 ng/mL methamphetamine was serially diluted with analyte-free urine in 10% increments and tested in 5 replicates in semi-quantitative mode. All samples were recovered within ± 10% error of the expected value and the R-value was 0.9998.
PrecisionSamples spiked with various amounts of d-amphetamine and d-methamphetamine were tested in qualitative and semi-quantitative mode using a CLSI (EP05-A2) precision protocol.12 The samples were tested in replicates of 2, twice per day for 20 days, total N = 80. The results are presented in the following tables.
Qualitative Analysis:
Concentration of sample, ng/mL
Number ofdeterminations
500 Cutoff#Neg / #Pos
1000 Cutoff#Neg / #Pos
d-Amphetamine
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1250 80 0 / 80 0 / 80
1500 80 0 / 80 0 / 80
d-Methamphetamine
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1250 80 0 / 80 0 / 80
1500 80 0 / 80 0 / 80
Semi-quantitative Analysis:
Sample Conc.,ng/mL
ResultMean,ng/mL
Within-runPrecision
TotalPrecision
500Cutoff#Neg /#Pos
1000Cutoff#Neg /#Pos
SD,ng/mL % CV SD,
ng/mL % CV
d-Amphetamine
150 145.9 9.0 6.2 10.1 6.9 80 / 0 80 / 0
375 372.8 10.2 2.7 10.9 2.9 80 / 0 80 / 0
625 683.9 11.2 1.6 13.5 2.0 0 / 80 80 / 0
750 775.4 14.1 1.8 17.6 2.3 0 / 80 80 / 0
1250 1317.9 23.6 1.8 28.4 2.2 0 / 80 0 / 80
1500 1467.6 23.0 1.6 32.0 2.2 0 / 80 0 / 80
d-Methamphetamine
150 168.4 7.4 4.4 9.3 5.5 80 / 0 80 / 0
375 392.8 8.0 2.0 11.1 2.8 80 / 0 80 / 0
625 626.1 9.6 1.5 12.1 1.9 0 / 80 80 / 0
750 770.4 9.7 1.3 11.8 1.5 0 / 80 80 / 0
1250 1284.1 15.5 1.2 18.9 1.5 0 / 80 0 / 80
1500 1515.1 21.4 1.4 27.3 1.8 0 / 80 0 / 80
Summary of Amphetamine Discordant Results:Accuracy samples were categorized based upon the d-amphetamine GC/MS concentration only. The table below identifies those samples with a d-amphetamine concentration below the cutoff, in which the observed DRI Amphetamines assay result was positive.
Cutoff Value(ng/mL)
DRI Result
AmphetamineGC/MS (ng/mL)
MethamphetamineGC/MS (ng/mL)
500 Positive 47 1653
500 Positive 68 1621
500 Positive 68 334
500 Positive 69 1666
500 Positive 69 1707
500 Positive 70 444
500 Positive 70 1513
500 Positive 76 1679
500 Positive 82 533
500 Positive 83 481
500 Positive a 100 538
500 Positive 100 675
500 Positive 109 1446
500 Positive 123 661
500 Positive 128 503
500 Positive 128 1221
500 Positive 141 1259
500 Positive 148 942
500 Positive 160 1254
500 Positive 161 1415
500 Positive 168 1319
500 Positive 168 1595
500 Positive 184 548
500 Positive 189 1067
500 Positive 200 1024
500 Positive 202 393
500 Positive 203 1230
500 Positive 211 1421
500 Positive 212 1241
500 Positive 214 97
500 Positive 231 1782
500 Positive 232 207
500 Positive 140 449
500 Positive 246 460
500 Positive 258 1029
500 Positive 264 1642
500 Positive 270 479
500 Positive 271 1338
500 Positive 272 1080
500 Positive 273 516
500 Positive 298 2772
500 Positive 300 101
500 Positive 307 2411
500 Positive 317 2668
500 Positive 325 2828
500 Positive 330 2543
500 Positive 374 693
500 Positive 380 709
Table con’t
Cutoff Value(ng/mL)
DRI Result
AmphetamineGC/MS (ng/mL)
MethamphetamineGC/MS (ng/mL)
500 Positive 402 132
500 Positive 407 747
500 Positive 417 1088
500 Positive 426 1599
500 Positive 450 828
500 Positive 486 860
500 Positive 490 1287
500 Positive 493 1005
500 Positive 494 924
500 Positive 498 919
1000 Positive 47 1653
1000 Positive 68 1621
1000 Positive 68 334
1000 Positive 69 1666
1000 Positive 69 1707
1000 Positive 70 1513
1000 Positive 76 1679
1000 Positive 100 538
1000 Positive 109 1446
1000 Positive 128 1221
1000 Positive 141 1259
1000 Positive 148 942
1000 Positive 160 1254
1000 Positive 161 1415
1000 Positive 168 1319
1000 Positive 168 1595
1000 Positive 189 1067
1000 Positive 200 1024
1000 Positive 203 1230
1000 Positive 211 1421
1000 Positive 212 1241
1000 Positive 231 1782
1000 Positive 258 1029
1000 Positive 264 1642
1000 Positive 271 1338
1000 Positive 272 1080
1000 Positive 298 2772
1000 Positive 307 2411
1000 Positive 317 2668
1000 Positive 325 2828
1000 Positive 330 2543
1000 Positive 374 693
1000 Positive 407 747
1000 Positive 417 1088
1000 Positive 426 1599
1000 Positive 450 828
1000 Positive 486 860
1000 Positive 490 1287
1000 Positive 493 1005
3
Table con’t
Cutoff Value(ng/mL)
DRI Result
AmphetamineGC/MS (ng/mL)
MethamphetamineGC/MS (ng/mL)
1000 Positive 494 924
1000 Positive 498 919
1000 Positive 500 1989
1000 Positive 513 938
1000 Positive 522 957
1000 Positive 541 1013
1000 Positive 572 1050
1000 Positive 576 1052
1000 Positive 595 2396
1000 Positive 656 2533
1000 Positive 715 2415
1000 Positive 771 1190
1000 Positive 780 287
1000 Positive 814 2984
1000 Positive b 816 0
1000 Positive 929 0
1000 Positive 998 367
1000 Negative 1101 0
Qualitative Analysis: The overall concordance between the DRI Amphetamines assay and GC/MS for methamphetamine was 87.4% for the 500 cutoff and 87.4% for the 1000 cutoff.
Stratified Results
DRI
Low Negativeby GC/MS(less than
-50%)
Near CutoffNegativeby GC/MS
(between -50% and cutoff)
Near CutoffPositive
by GC/MS(between cutoff
and +50%)
High Positive
by GC/MS(greater
than +50%)
PercentAgreement
withGC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positive 3 11 11 60 100.0%
Negative 19 7 0 0 65.0%
1000 ng/mL Cutoff
Positive 5 9 22 31 100.0%
Negative 35 9 0 0 75.9%
Qualitative500 ng/mL
GC/MS1000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Stratified Results
DRI
Low Negativeby GC/MS(less than
-50%)
Near CutoffNegativeby GC/MS
(between -50% and cutoff)
Near CutoffPositive
by GC/MS(between cutoff
and +50%)
High Positive
by GC/MS(greater
than +50%)
PercentAgreement
withGC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positive 3 11 11 60 100.0%
Negative 19 7 0 0 65.0%
1000 ng/mL Cutoff
Positive 5 10 22 31 100.0%
Negative 34 8 0 0 74.1%
Semi-quantitative500 ng/mL
GC/MS1000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Summary of Methamphetamine Discordant Results:Accuracy samples were categorized based upon the d-methamphetamine GC/MS concentration only. The table below identifies those samples with a d-methamphetamine concentration below the cutoff, in which the observed DRI Amphetamines assay result was positive.
Cutoff Value(ng/mL)
DRI Result
AmphetamineGC/MS (ng/mL)
MethamphetamineGC/MS (ng/mL)
500 Positive 300 101
500 Positive 402 132
500 Positive 232 207
500 Positive 780 287
500 Positive 68 334
500 Positive 1142 339
500 Positive 1203 356
500 Positive 998 367
500 Positive 202 393
500 Positive 70 444
500 Positive 240 449
500 Positive 246 460
500 Positive 270 479
500 Positive 83 481
1000 Positive 780 287
1000 Positive 68 334
1000 Positive 1142 339
1000 Positive 1203 356
1000 Positive 998 367
1000 Positive 100 538
1000 Positive 374 693
1000 Positive 407 747
1000 Positive 450 828
1000 Positive 486 860
1000 Positive 498 919
1000 Positive 494 924
1000 Positive 513 938
1000 Positive 148 942
1000 Positive 522 957
a Sample also contained MDA~288 ng/mL and MDMA~2530 ng/mL.b Sample also contained PPA ~1000 ng/mL and Pseudoephedrine ≥ 40 µg/mL.
SpecificityThe specificity of the assay was evaluated by testing various structurally related and unrelated compounds for cross-reactivity. The potential cross-reactant compound was spiked into a negative urine pool at the listed concentrations and tested in qualitative and semi-quantitative mode. Samples that tested positive or greater than the cutoff concentration were considered to cross react with the assay and samples that tested negative or less than the cutoff concentration were considered to have no significant cross reactivity.
4
The following parent compound and metabolites, when tested with the DRI Amphetamines assay, produced a positive result at the concentrations listed below.
Compound 500 Cutoff Concentration, ng/mL
1000 Cutoff Concentration, ng/mL
d-Amphetamine 500 1000
d-Methamphetamine 500 1000
Methylenedioxyamphetamine(MDA)
1400 2500
Methylenedioxymethamphetamine(MDMA)
800 1300
Structurally unrelated compounds and/or concurrently used drugs produced a negative result at the concentrations listed below.
Compound 500 Cutoff Concentration, ng/mL
1000 Cutoff Concentration, ng/mL
Acetaminophen 1000000 1000000
Acetylsalicylic Acid 1000000 1000000
l-Amphetamine 12500 12500
Benzoylecgonine 1000000 1000000
Benzphetamine 20000 20000
Benzylpiperazine 40000 63000
Bupropion 13000 50000
Caffeine 1000000 1000000
Cetirizin Dihydrochloride 1000000 1000000
Chlorpromazine 500000 500000
Codeine 1000000 1000000
Dextromethorphan 1000000 1000000
d-Ephedrine 1000000 2000000
l-Ephedrine 100000 350000
d,l-Ephedrine 200000 700000
Fenfluramine 1200 4000
Isometheptene 6000 20000
Isoxsuprine 100000 100000
Meperidine 1000000 1000000
Mephentermine 15000 25000
Methadone 1000000 1000000
l-Methamphetamine 3500 10000
Methapyrilene 100000 500000
Methylphenidate 150000 500000
Metronidazole 1000000 1000000
Morphine 1000000 1000000
Nor-pseudoephedrine 600000 1000000
Oxazepam 500000 500000
Phencyclidine 1000000 1000000
Phendimetrazine 40000 200000
Phenethylamine 30000 100000
Phenmetrazine 1500 4000
Phenobarbital 1000000 1000000
Phenothiazine 10000 10000
Phentermine 17500 25000
Phenylephrine 300000 500000
Phenylpropanolamine 200000 250000
Procainamide 13000 20000
Promethazine 500000 500000
Table con’t
Compound 500 Cutoff Concentration, ng/mL
1000 Cutoff Concentration, ng/mL
Propranolol 200000 200000
d-Pseudoephedrine 75000 250000
l-Pseudoephedrine 150000 250000
Ranitidine 250000 600000
Scopolamine 35000 100000
Secobarbital 1000000 1000000
Thioridazine 1000000 1000000
Trifluoperazine 1000000 1000000
Triflupromazine 1000000 1000000
Tyramine 300000 500000
3-OH-Tyramine 500000 500000
InterferenceThe potential effects of pH, endogenous and exogenous substances on the recovery of amphetamines using the DRI Amphetamines assay was assessed by adding known amounts of potentially interfering substances into two pools of drug free urine containing the highest concentration of amphetamine and methamphetamine that gives a consistently negative result, and the lowest concentration of amphetamine and methamphetamine that gives a consistently positive result, between ± 25% of the cutoff value. The samples were tested in both qualitative and semi-quantitative modes. No interference was observed by the addition of the compounds up to the concentrations listed in the following table.
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References1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds.
Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
Chemical Toxicology Institute; 2000.6. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
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Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007).10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final
Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9):11983.
11. Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance
of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document. 2004.
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit)
AnwendungsbereichDer DRI® Amphetamintest dient der qualitativen oder semiquantitativen Bestimmung von Amphetaminen im menschlichen Urin. Der Testbereich beträgt 0 bis 2000 ng/ml mit Cutoff-Konzentrationen von 500 und 1000 ng/ml. Der Test bietet eine einfache und schnelle Möglichkeit zum Nachweis von Amphetaminen in menschlichem Urin.
Dieser Test bietet lediglich ein vorläufiges Testergebnis. Um ein bestätigtes Analyseergebnis zu erhalten, muss ein genaueres, alternatives, chemisches Verfahren eingesetzt werden. Gaschromatographie/Massenspektrometrie (GC/MS) ist das bevorzugte Bestätigungsverfahren.1,2 Es sollten klinische Erwägungen und sachverständige Beurteilung bei jedem Testergebnis in Betracht gezogen werden, die auf Drogenmissbrauch hindeuten, insbesondere dann, wenn vorläufige positive Ergebnisse verwendet werden.
Zusammenfassung und Erklärung des TestsAmphetamine sind synthetische Derivate von Ephedrin. Zu den häufigsten Amphetaminen zählen d-Amphetamin, d-Methamphetamin und d,l-Amphetamin. Sie dienen als Aufputschmittel für das zentrale Nervensystem. Amphetamin ist das sympathomimetischste Amin.3,4 Wird Amphetamin eingenommen, wird es relativ schnell in der Leber deaktiviert oder unverändert über den Urin ausgeschieden. Andere Ephedrinderivate wie Methamphetamin können umgewandelt und im Urin als Amphetamin ausgeschieden werden.5
Der DRI Amphetamintest ist ein flüssiges, einsatzbereites, homogenes Enzymimmunoassay.6 Der Test verwendet spezielle Antikörper, die Amphetamin und/oder Methamphetamin im Urin nachweisen können, ohne mit verschiedenen, rezeptfreien, strukturell unterschiedlichen Verbindungen zu reagieren. Der Test basiert auf dem Wettstreit einer Droge, die mit einem Enzym (Glokose-6-Phosphatdehydrogenase [G6PDH]) belegt ist, und der Droge aus der Urinprobe um eine feste Anzahl von bestimmten antikörperbindenden Stellen. Ist die freie Droge nicht in der Probe enthalten, bindet der spezielle Antikörper die Droge, die mit G6PDH markiert ist, und verringert die Enzymaktivität. Ist die freie Droge enthalten, besetzt die freie Droge die antikörperbindenden Stellen, wodurch die drogenmarkierte G6PDH mit dem Substrat interagieren und eine Enzymaktivität verursachen kann. Dieses Phänomen führt zu einem direkten Verhältnis zwischen der Drogenkonzentration im Urin und der Enzymaktivität.Die Enzymaktivität wird spektrophotometrisch bei 340 nm bestimmt, indem die Fähigkeit gemessen wird, Nikotinamidadenindinukleotid (NAD) in NADH umzuwandeln.
Vorsichtsmaßnahmen und WarnhinweiseGEFAHR: 1. Dieser Test ist nur für die In-Vitro-Diagnostik vorgesehen. Die Reagenzien sind
schädlich, wenn sie geschluckt werden. 2. Reagenzien, die in den Testparametern verwendet werden, enthalten
≤0,09 % Natriumazid, das mit Blei- oder Kupferrohren reagieren kann und möglicherweise explosive Metallazide bildet. Wenn Sie solche Reagenzien entsorgen, spülen Sie immer mit großen Mengen Wasser nach, um die Bildung von Aziden zu verhindern.
4. Verwenden Sie keine Reagenzien nach deren Haltbarkeitsdatum.
H317 - Kann allergische Hautreaktionen verursachen.H334 - Kann bei Einatmen Allergie, asthmaartige Symptome oder Atembeschwerden verursachen.
Einatmen von Nebel oder Dampf vermeiden. Kontaminierte Arbeitskleidung nicht außerhalb des Arbeitsplatzes tragen. Schutzhandschuhe/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen. Bei unzureichender Belüftung Atemschutz tragen. Bei Berührung mit der Haut: Mit viel Wasser und Seife waschen. Bei Einatmen: Bei Atembeschwerden an die frische Luft bringen und in einer Position ruhigstellen, die das Atmen erleichtert. Bei Hautreizung oder -ausschlag: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen. Bei Symptomen der Atemwege: Giftinformationszentrum oder Arzt anrufen. Kontaminierte Kleidung vor erneutem Tragen waschen. Inhalt/Behälter gemäß lokalen/regionalen/nationalen/internationalen Vorschriften der Entsorgung zuführen.
ReagenzienAntikörper-/Substratreagenz: Enthält monoklonale Anti-Amphetamin-Antikörper, Glukose-6-Phosphat (G6P) und Nikotinamidadenindinukleotid (NAD) in Tris-Puffer mit Natriumazid als Konservierungsmittel.
Enzymkonjugatreagenz: Enthält Amphetamine, die mit Glukose-6-Phosphatdehydrogenase (G6PDH) in Tris-Puffer markiert sind, und Natriumazid als Konservierungsmittel.
Präparation und Lagerung von ReagenzienDie Reagenzien sind gebrauchsfertig. Es ist keine Präparation der Reagenzien erforderlich. Alle Testbestandteile sind bis zum Verfallsdatum auf der Verpackung stabil, wenn sie bei 2-8 °C gelagert werden.
Weitere erforderliche Materialien (separat erhältlich):
Satzbeschreibung 1664 DRI Negativkalibrator, 10 mL 1388 DRI Negativkalibrator, 25 mL 1588 DRI Multi-Drug-Kalibrator 1, 10 mL 1589 DRI Multi-Drug-Kalibrator 1, 25 mL 1591 DRI Multi-Drug-Kalibrator 2, 10 mL 1592 DRI Multi-Drug-Kalibrator 2, 25 mL 1594 DRI Multi-Drug-Kalibrator 3, 10 mL 1595 DRI Multi-Drug-Kalibrator 3, 25 mL 1597 DRI Multi-Drug-Kalibrator 4, 10 mL 1598 DRI Multi-Drug-Kalibrator 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Pegel 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Pegel 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Pegel 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Pegel 5, 6 x 18 mL
Sammlung und Behandlung von ProbenSammeln Sie Urinproben stets in Kunststoff- oder Glasgefäßen. Es sollte darauf geachtet werden, dass die chemische Integrität der Urinprobe vom Entnahmezeitpunkt bis zum Untersuchungszeitpunkt gewahrt bleibt.
Proben, die bei Raumtemperatur aufbewahrt und innerhalb von 7 Tagen7 nach der Ankunft im Labor keinem Eingangstest unterzogen werden, können einige Wochen lang in einer sicheren Kälteeinheit bei 2 bis 8 °C gelagert werden.8 Bei einer längeren Lagerung vor der Untersuchung oder zur Aufbewahrung der Proben nach der Untersuchung sollten diese bei -20 °C aufbewahrt werden.9
Studien haben gezeigt, dass Amphetamin-Analyte im Urin bei -20 °C unbegrenzt haltbar sind.8
Labore, die nach den verbindlichen SAMHSA-Richtlinien arbeiten, sollten sich an die SAMHSA-Bestimmungen zur „Kurzzeitigen gekühlten Lagerung“ und zur „Langfristigen Lagerung“ halten.10
Zum Schutz der Probenintegrität sollte Schaumbildung sowie wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermieden werden. Pipettierte Proben sollten möglichst frei von groben Verschmutzungen gehalten werden. Es wird empfohlen, stark eingetrübte Proben vor der Analyse zu zentrifugieren. Tiefgekühlte Proben sind vor der Analyse vollständig aufzutauen und gründlich zu vermischen. Eine Verfälschung von Urinproben kann zu fehlerhaften Ergebnissen führen. Falls eine Verunreinigung vermutet wird, sollte eine weitere Probe genommen und beide Proben an das Labor geschickt werden.
Alle Urinproben sind wie potenziell infektiöses Material zu behandeln.
TestverfahrenFür diesen Test können Analysegeräte verwendet werden, die eine gleichbleibende Temperatur halten, Proben pipettieren, Reagenzien vermischen, die Enzymrate bei 340 nm messen und die Reaktion genau zeitlich festhalten können.
Bevor Sie den Test durchführen, lesen Sie bitte das Protokollblatt für das Analysegerät durch, in dem die Parameter und/oder zusätzlichen Anweisungen für den Gebrauch enthalten sind.
Qualitätskontrolle und KalibrierungGemäß guter Laborpraxis sollten Kontrollproben verwendet werden, um die korrekte Testperformance sicherzustellen. Verwenden Sie Kontrolllösungen beim Cutoff-Kalibrator, um die Kalibrierung zu validieren. Die Kontrollergebnisse müssen innerhalb der feststehenden Bereiche liegen, die mithilfe von Laborverfahren und Richtlinien festgelegt wurden. Liegen die Ergebnisse außerhalb der feststehenden Bereiche, sind die Testergebnisse ungültig. Alle Qualitätskontrollen sollten in Übereinstimmung mit örtlichen, Landes- und/oder Bundesvorschriften bzw. Akkreditierungsbestimmungen durchgeführt werden. Jedes Labor sollte die Häufigkeit von Kalibrierung und Kontrolle selbst festlegen.
Qualitative AnalyseVerwenden Sie für die qualitative Analyse von Proben den DRI Mehrfach-Urinkalibrator 1 oder 2. Der Kalibrator 1 enthält 500 ng/mL d-Methamphetamin, das als Cutoff-Referenz zur Unterscheidung von "positiven" und "negativen" Proben bei einem 500 ng/mL Cutoff verwendet wird. Der Kalibrator 2 enthält 1.000 ng/mL d-Methamphetamin, das als Cutoff-Referenz zur Unterscheidung von "positiven" und "negativen" Proben bei einem 1.000 ng/mL Cutoff verwendet wird.
Halbquantitative AnalyseVerwenden Sie für eine halbquantitative Analyse alle Kalibratoren.
Ergebnisse und SollwerteQualitative ErgebnisseEine Probe, die eine Änderung des Absorptionswerts ( A) aufweist, der gleich oder größer ist als der Wert, der mit dem Cutoff-Kalibrator erhalten wurde, wird als positiv angesehen. Eine Probe, die eine Änderung des Absorptionswerts ( A) aufweist, der kleiner ist als der Wert, der mit dem Cutoff-Kalibrator erhalten wurde, wird als negativ angesehen.
Proben-konz., ng/
mL
Ergeb-nismit-tel, ng/
mL
Präzision im Durchlauf Gesamtpräzision
500 Cutoff #Neg /#Pos
1.000 Cutoff #Neg /#PosSA,
ng/mL % KV SA, ng/mL % KV
d-Methamphetamin
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1.250 1.284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1.500 1.515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Cutoff-CharakterisierungProben in der Nähe der Cutoff-Werte wurden präpariert, indem d-Amphetamin und d-Metamphetamin einzeln im negativ gepoolten Urin hochgesetzt werden. Die Proben wurden in Wiederholungen von 20 in den qualitatitven und halbquantitativen Modi getestet. Im qualitativen Modus wurden alle Proben korrekt erkannt, wobei die negativen Proben weniger als die Cutoff-Kalibratoren wiedergewannen und die positiven Proben mehr als die Cutoff-Kalibratoren wiedergewannen. Im halbquantitativen Modus gewannen die Proben im Fehlerbereich von ± 12 % ihrer Nennwerte zurück. Die Präzision der 20 Wiederholungen war niedriger als 1 % KV für den qualitativen Modus und weniger als 4 % KV für den halbquantitativen Modus.
Genauigkeit160 klinische Urinproben wurden mit dem DRI Amphetamintest auf dem Beckman Coulter AU680 und GC/MS getestet. Die Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen angezeigt.
Einige abweichende Ergebnisse wurden erhalten, als der Test zur individuellen Erkennung von Amphetamin und Metamphetamin verwendet wurde. Der Test kann das Vorhandensein von Amphetamin und Metamphetamin mit 100 % Kreuzreaktivität auf beide Drogen erkennen. Aus diesem Grund können Proben, die nur auf ein Analyt getestet werden, falsche positive Ergebnisse liefern, da das andere Analyt vorhanden ist.Qualitative Analyse: Die Gesamtübereinstimmung zwischen DRI Amphetamintest und GC/MS auf Amphetamin lag bei 58,0 % für den 500 Cutoff und bei 59,4 % für den 1.000 Cutoff.
Verteilte Ergebnisse
DRI
Negativwert niedrig
mit GC/MS (weniger als
-50 %)
Negativwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen -50 % und
Cutoff)
Positivwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen Cutoff und
+50 %)
Positivwert hoch mit GC/MS
(größer als +50 %)
Prozent Überein-stimmung mit GC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positiv 34 24 14 49 100,0 %
Negativ 16 1 0 0 22,7 %
1.000 ng/mL Cutoff
Positiv 40 15 19 20 97,5 %
Negativ 35 8 1 0 43,9 %
Qualitativ500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Halbquantitative Analyse: Die Gesamtübereinstimmung zwischen DRI Amphetamintest und GC/MS auf Amphetamin lag bei 58,0 % für den 500 Cutoff und bei 58,7 % für den 1.000 Cutoff.
Verteilte Ergebnisse
DRI
Negativwert niedrig
mit GC/MS (weniger als
-50 %)
Negativwert bei Cutoff mit GC/MS
(zwischen -50 % und Cutoff)
Positivwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen Cutoff und
+50 %)
Positivwert hoch mit GC/MS
(größer als +50 %)
Prozent Überein-stimmung mit GC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positiv 34 24 14 49 100,0 %
Negativ 16 1 0 0 22,7 %
1.000 ng/mL Cutoff
Positiv 41 15 19 20 97,5 %
Negativ 34 8 1 0 42,9 %
Halbquantitative ErgebnisseEine ungefähre Schätzung der Drogenkonzentration in den Proben kann durchgeführt werden, indem eine Standardkurve mit allen Kalibratoren erstellt und Proben von der Standardkurve quantifiziert werden. Die Probeergebnisse über dem hohen Kalibrator sollten mit negativem Urin verdünnt und erneut getestet werden. Die Halbquantifizierung von positiven Ergebnissen ermöglicht es Laboren, eine passende Verdünnung der Proben zur Bestätigung durch ein Bestätigungsverfahren zu bestimmen, etwa GC/MS. Sie erlaubt es dem Labor auch, Qualitätskontrollverfahren festzulegen und die Kontrollperformance zu beurteilen.
Einschränkungen 1. Ein positives Ergebnis bei diesem Test zeugt nur die Anwesenheit von Amphetamin oder
Methamphetamin an und korreliert nicht unbedingt mit dem Ausmaß der körperlichen oder psychologischen Wirkungen.
2. Ein positives Ergebnis durch diesen Test sollte durch eines anderes, nicht immunologisches Verfahren, wie GC, TLC oder GC/MS bestätigt werden.
3. Der Test ist nur für den Gebrauch mit menschlichem Urin vorgesehen. 4. Es ist möglich dass andere Substanzen und/oder Faktoren (z. B. technischer oder
prozesstechnischer Art), die nicht in der Spezifitätsliste aufgeführt sind, auf den Test wirken und falsche Ergebnisse verursachen.
Bestimmte PerformanceeigenschaftenTypische Ergebnisse der Performancedaten auf dem Analysegerät Beckman Coulter AU680 sind unten angezeigt.11
Verdünnungserholung und LinearitätEine hohe Patientenurinprobe mit 2.000 ng/mL Methamphetamin wurde mit analytfreiem Urin in Schritten von 10 % verdünnt und in fünf Wiederholungen im halbquantitativen Modus getestet. Alle Proben wurden in einem Fehlerbereich von ± 10 % des Sollwerts gewonnen und der R-Wert betrug 0,9998.
PräzisionProben mit Spitzenwerten verschiedener Mengen von d-Amphetamin und d-Methamphetamin wurden im qualitativen und halbquantitativen Modus mithilfe eines CLSI (EP05-A2)-Präzisionsprotokoll getestet.12 Die Proben wurden in Wiederholungen von 2, zwei Mal am Tag für 20 Tage (insgesamt N = 80) getestet. Die Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen angezeigt.
Qualitative Analyse:
Konzentration der Probe, ng/mL
Anzahl derBestimmungen
500 Cutoff#Neg / #Pos
1.000 Cutoff#Neg / #Pos
d-Amphetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
d-Methamphetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
Halbquantitative Analyse:
Proben-konz., ng/
mL
Ergeb-nismit-tel, ng/
mL
Präzision im Durchlauf Gesamtpräzision
500 Cutoff #Neg /#Pos
1.000 Cutoff #Neg /#PosSA,
ng/mL % KV SA, ng/mL % KV
d-Amphetamin
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1.250 1.317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1.500 1.467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
2
Halbquantitativ
500 ng/mL GC/MS
1.000 ng/mL GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
Zusammenfassung der Amphetamindiskordantergebnisse:Genauigkeitsproben wurden nur gemäß der d-Amphetaminkonzentration laut GC/MS kategorisiert. Die Tabelle unten identifiziert diese Proben mit einer d-Amphetaminkonzentration unterhalb des Cutoff, bei der das beobachtete DRI Amphetamintestergebnis positiv war.
Qualitative Analyse: Die Gesamtübereinstimmung zwischen DRI Amphetamintest und GC/MS auf Metamphetamin lag bei 87,4 % für den 500 Cutoff und bei 87,4 % für den 1.000 Cutoff.
Verteilte Ergebnisse
DRI
Negativwert niedrig
mit GC/MS (weniger als
-50 %)
Negativwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen -50 % und
Cutoff)
Positivwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen Cutoff und
+50 %)
Positivwert hoch mit GC/MS
(größer als +50 %)
Prozent Überein-stimmung mit GC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positiv 3 11 11 60 100,0 %
Negativ 19 7 0 0 65,0 %
1.000 ng/mL Cutoff
Positiv 5 9 22 31 100,0 %
Negativ 35 9 0 0 75,9 %
Qualitativ500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Verteilte Ergebnisse
DRI
Negativwert niedrig
mit GC/MS (weniger als
-50 %)
Negativwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen -50 % und
Cutoff)
Positivwert bei Cutoff mit GC/MS (zwischen Cutoff und
+50 %)
Positivwert hoch mit GC/MS
(größer als +50 %)
Prozent Überein-stimmung mit GC/MS
500 ng/mL Cutoff
Positiv 3 11 11 60 100,0 %
Negativ 19 7 0 0 65,0 %
1.000 ng/mL Cutoff
Positiv 5 10 22 31 100,0 %
Negativ 34 8 0 0 74,1 %
Halbquantitativ500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Zusammenfassung der Metamphetamindiskordantergebnisse:Genauigkeitsproben wurden nur gemäß der d-Metamphetaminkonzentration laut GC/MS kategorisiert. Die Tabelle unten identifiziert diese Proben mit einer d-Metamphetaminkonzentration unterhalb des Cutoff, bei der das beobachtete DRI Amphetamintestergebnis positiv war.
a Probe enthielt auch MDA ~288 ng/mL und MDMA ~2.530 ng/mL.b Probe enthielt auch PPA ~1.000 ng/mL und Pseudoephedrin ≥ 40 µg/mL.
SpezifitätDie Spezifität des Tests wurde beurteilt, indem verschiedene, strukturell ähnliche und unterschiedliche Verbindungen auf Kreuzreaktivität getestet wurden. Die potenziell kreuzreaktive Verbindung wurde in einen negativen Urinpool mit den aufgeführten Konzentrationen eingeführt und im qualitativen und halbquantitativen Modus getestet. Von Proben, die positiv oder größer als die Cutoff-Konzentration getestet wurden, wurde angenommen, dass sie mit dem Test kreuzreagierten, und bei Proben, die negativ oder niedriger als die Cutoff-Konzentration reagierten, wurde angenommen, dass sie keine signifikante Kreuzreaktivität aufwiesen.
4
Die folgenden Ausgangsverbindungen und Metaboliten, wenn sie mit dem DRI Amphetamintest getestet wurden, führten bei den unten angegeben Konzentrationen zu einem positiven Ergebnis.
Verbindung 500 Cutoff- Konzentration, ng/mL
1.000 Cutoff- Konzentration, ng/mL
d-Amphetamin 500 1.000
d-Methamphetamin 500 1.000
Methylendioxyamphetamin(MDA)
1.400 2.500
Methylendioxymethamphetamin(MDMA)
800 1.300
Strukturell unterschiedliche Verbindungen und/oder gleichzeitig verwendete Drogen führten bei den unten angegebenen Konzentrationen zu negativen Ergebnissen.
Verbindung 500 Cutoff- Konzentration, ng/mL
1.000 Cutoff- Konzentration, ng/mL
Acetaminophen 1.000.000 1.000.000
Acetylsalicylsäure 1.000.000 1.000.000
Benzoylecgonin 1.000.000 1.000.000
Benzphetamin 20.000 20.000
Benzylpiperazin 40.000 63.000
Bupropion 13.000 50.000
Cetirizindihydrochlorid 1.000.000 1.000.000
Chlorpromazin 500.000 500.000
Codein 1.000.000 1.000.000
d,l-Ephedrin 200.000 700.000
d-Ephedrin 1.000.000 2.000.000
Dextromethorphan 1.000.000 1.000.000
d-Pseudoephedrin 75.000 250.000
Fenfluramin 1.200 4.000
Isomethepten 6.000 20.000
Isoxsuprin 100.000 100.000
Koffein 1.000.000 1.000.000
l-Amphetamin 12.500 12.500
l-Ephedrin 100.000 350.000
l-Methamphetamin 3.500 10.000
l-Pseudoephedrin 15.0000 250.000
Meperidin 1.000.000 1.000.000
Mephentermin 15.000 25.000
Methadon 1.000.000 1.000.000
Methapyrilen 100.000 500.000
Methylphenidat 150.000 500.000
Metronidazol 1.000.000 1.000.000
Morphium 1.000.000 1.000.000
Nor-pseudoephedrin 600.000 1.000.000
Oxazepam 500.000 500.000
Phencyclidin 1.000.000 1.000.000
Phendimetrazin 40.000 200.000
Phenethylamin 30.000 100.000
Phenmetrazin 1.500 4.000
Phenobarbital 1.000.000 1.000.000
Phenothiazin 10.000 10.000
Phentermin 17.500 25.000
Phenylephrin 300.000 500.000
Tabelle Forts.
Verbindung 500 Cutoff- Konzentration, ng/mL
1.000 Cutoff- Konzentration, ng/mL
Phenylpropanolamin 200.000 250.000
Procainamid 13.000 20.000
Promethazin 500.000 500.000
Propranolol 200.000 200.000
Ranitidin 250.000 600.000
Scopolamin 35.000 100.000
Secobarbital 1.000.000 1.000.000
Thioridazin 1.000.000 1.000.000
Trifluoperazin 1.000.000 1.000.000
Triflupromazin 1.000.000 1.000.000
Tyramin 300.000 500.000
3-OH-Tyramin 500.000 500.000
InterferenzDas Potenzial von pH-Wert, endogenen und exogenen Substanzen auf die Erholung von Amphetaminen mit dem DRI Amphetamintest wurde beurteilt, indem bekannte Mengen potenziell störend wirkender Substanzen in zwei Pools mit drogenfreiem Urin hinzugefügt wurden, von denen einer die höchste Konzentration von Amphetaminen und Metamphetaminen besaß, die ein durchgehend negatives Ergebnis lieferte, und der niedrigsten Konzentration von Amphetaminen und Metamphetaminen, die ein durchgehend positives Ergebnis lieferte, zwischen ± 25 % des Cutoff. Die Proben wurden im qualitativen und halbquantitativen Modus getestet. Durch das Hinzufügen von Verbindungen bis zur den in der folgenden Tabelle aufgeführten Konzentrationen wurden keine Störungen beobachtet.
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Referenzen1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds.
Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
Chemical Toxicology Institute; 2000.6. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
Journal of Chromatography B, (2006) 84:93.8. Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) 4.9. C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline –
Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007).10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final
Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9):11983.
11. Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance
of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document. 2004.
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (kit de 100 mL) 0018 (kit de 500 mL)
ApplicationLe dosage des amphétamines DRI® est destiné à la détermination qualitative ou semi-quantitative des amphétamines dans l’urine humaine. La plage de dosage est comprise entre 0 et 2 000 ng/ml avec des valeurs de seuil de 500 et 1 000 ng/ml. Le dosage fournit une procédure de dépistage analytique à la fois simple et rapide pour détecter les amphétamines dans l’urine.
Il fournit uniquement un résultat d'analyse préliminaire. Une autre méthode chimique plus spécifique doit être employée pour obtenir un résultat d'analyse confirmé. La chromatographie en phase gazeuse/spectrométrie de masse (GC/MS) représente la méthode de confirmation privilégiée.1,2 Adopter un point de vue clinique et émettre un jugement professionnel pour tout résultat d'analyse de toxicomanie, notamment lorsque les résultats préliminaires sont positifs.
Résumé et explication du testLes amphétamines sont des dérivés synthétiques de l'éphédrine. Les variétés les plus courantes sont la d-amphétamine, la d-méthamphétamine et la d,l-amphétamine. Ces substances ont une action de stimulation du système nerveux central. L'amphétamine est la principale amine sympathomimétique.3,4 Lorsqu'elle est ingérée, elle est soit désactivée rapidement dans le foie, soit excrétée telle quelle dans l'urine. D'autres dérivés de l'éphédrine, notamment la méthamphétamine, peuvent être métabolisés et excrétés dans l'urine sous fome d'amphétamine.5
Le dosage des amphétamines DRI est un dosage immunoenzymatique homogène liquide prêt à l'emploi.6 Il fait appel à des anticorps spécifiques qui peuvent détecter l'amphétamine et/ou la méthamphétamine dans l'urine avec une réactivité croisée minime avec divers composants en vente libre structurellement non apparentés. Ce dosage repose sur la compétition d'une drogue marquée à l'enzyme glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PDH) et la drogue présente dans l'échantillon d'urine pour une quantité définie de sites de fixation de l'anticorps spécifique. En l'absence de drogue libre dans l'échantillon, l'anticorps spécifique se lie à la drogue marquée à la G6PDH et provoque une diminution de l'activité enzymatique. En présence de drogue libre, celle-ci occupe les sites de fixation des anticorps, ce qui permet à la drogue marquée à la G6PDH d'interagir avec le substrat et ainsi de produire une activité enzymatique. Ce phénomène établit une corrélation directe entre la concentration en drogue dans l'urine et l'activité enzymatique. L'activité de l'enzyme est déterminée par spectrophotométrie à 340 nm, en mesurant sa capacité à convertir la nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) en NADH.
Précautions et avertissementsDANGER: 1. Ce test est exclusivement réservé à un usage diagnostique in vitro. Les
réactifs sont nocifs en cas d’ingestion. 2. Les réactifs utilisés dans les composants du dosage contiennent ≤0,09 %
de l’azoture de sodium, qui peut réagir avec le plomb ou le cuivre des canalisations pour former des azides métalliques potentiellement explosifs. Lors de l’élimination de ces réactifs, toujours rincer avec de grands volumes d’eau pour éviter l’accumulation d’azoture.
3. Le dosage d’amphétamines DRI (100 ml) contient ≤ 0,5 % d’anticorps spécifiques au médicament et ≤ 0,2 % d’albumine de sérum bovin (BSA).
4. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.
H317 - Peut provoquer une allergie cutanée.H334 - Peut provoquer des symptômes allergiques ou d’asthme ou des difficultés respiratoires par inhalation.
Éviter de respirer les gaz ou vapeurs. Les vêtements de travail contaminés ne devraient pas sortir du lieu de travail. Porter des gants de protection/un équipement de protection des yeux/du visage. Lorsque la ventilation du local est insuffisante, porter un équipement de protection respiratoire. En cas de contact avec la peau : laver abondamment à l’eau et au savon. EN CAS D’INHALATION : s’il y a difficulté à respirer, transporter la victime à l’extérieur et la maintenir au repos dans une position où elle peut confortablement respirer. En cas d’irritation ou d’éruption cutanée : consulter un médecin. En cas de symptômes respiratoires : appeler un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin. Laver les vêtements contaminés avant réutilisation. Éliminer le contenu/contenant dans un endroit conforme aux réglementations locales/régionales/nationales/internationales.
RéactifsRéactif à base d'anticorps/substrat : Contient des anticorps monoclonaux anti-amphétamines, du glucose-6-phosphate (G6P) et de la nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) dans un tam-pon Tris contenant de l'azoture de sodium comme conservateur.
Réactif à base de conjugué enzymatique : Contient des amphétamines marquées par de la glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PDH) dans le tampon Tris contenant de l'azoture de sodium comme conservateur.
Préparation et conservation des réactifsLes réactifs sont prêts à l'emploi. Aucune préparation n'est requise. Lorsqu'ils sont conservés entre 2 et 8 °C, tous les composants du dosage sont stables jusqu'à la date de péremption indiquée sur l'étiquette.
Description du kit 1664 Étalon négatif DRI, 10 mL 1388 Étalon négatif DRI, 25 mL 1588 Étalon pléiotrope DRI 1, 10 mL 1589 Étalon pléiotrope DRI 1, 25 mL 1591 Étalon pléiotrope DRI 2, 10 mL 1592 Étalon pléiotrope DRI 2, 25 mL 1594 Étalon pléiotrope DRI 3, 10 mL 1595 Étalon pléiotrope DRI 3, 25 mL 1597 Étalon pléiotrope DRI 4, 10 mL 1598 Étalon pléiotrope DRI 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Niveau 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Niveau 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Niveau 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Niveau 5, 6 x 18 mL
Prélèvement et manipulation des échantillonsRecueillir les échantillons d’urine dans des récipients en verre ou en plastique. Prendre toutes les précautions requises pour préserver l’intégrité chimique de l’échantillon d’urine entre le moment du prélèvement et celui du dosage.
Les échantillons conservés à température ambiante et qui ne font pas l’objet d’un test initial dans les 7 jours7 suivants leur arrivée au laboratoire doivent être placés dans une unité de réfrigération sécurisée entre 2 et 8 °C pendant plusieurs semaines.8 Pour un stockage avant analyse plus long ou pour une conservation après analyse, les échantillons d’urine doivent être conservés à -20 °C.9 Des études ont montré que les analytes d’amphétamine présents dans l’urine sont stables à -20 °C indéfiniment.8
Les laboratoires suivant les directives obligatoires de la SAMHSA doivent consulter ses exigences en matière de conservation réfrigérée à court et long termes.10
Afin de préserver l’intégrité de l’échantillon, ne pas faire mousser et éviter la congélation et la décongélation répétées. Il convient de veiller à éviter la présence de débris conséquents dans les échantillons prélevés. Il est recommandé de centrifuger les échantillons à forte turbidité avant analyse. Avant d’être analysés, les échantillons congelés doivent être décongelés et mélangés. La falsification d’un échantillon d’urine peut engendrer des résultats erronés. En cas de falsification soupçonnée, prélever un autre échantillon et les transférer tous deux au laboratoire pour analyse.
Manipuler tous les échantillons d’urine comme s’ils étaient potentiellement infectieux.
Procédure de dosageLes analyseurs en mesure de maintenir une température constante, pipeter des échantillons, mélanger des réactifs, mesurer des taux enzymatiques de 340 nm et prévoir la réaction avec précision peuvent être utilisés pour effectuer ce dosage.
Avant de réaliser un dosage, se reporter à la fiche de protocoles spécifique à l'analyseur, qui précise les paramètres et/ou donne des instructions d'utilisation supplémentaires.
Contrôle qualité et étalonnageLes bonnes pratiques de laboratoire suggèrent d'utiliser des échantillons de contrôle pour garantir des performances de dosage correctes. Utiliser des contrôles proches de l'étalon seuil pour valider l'étalonnage. Les résultats des contrôles doivent se situer dans les plages définies par les procédures et consignes du laboratoire. S'ils sont hors gamme, les résultats du dosage ne sont pas valides. Toutes les exigences de contrôle qualité doivent être satisfaites, conformément aux règlements locaux, régionaux et/ou nationaux ou aux exigences d’agrément. Chaque laboratoire est tenu d'établir ses propres valeurs d'étalonnage et de contrôle.
Analyse qualitativePour l'analyse qualitative des échantillons, utiliser l'étalon d'urine pléiotrope DRI 1 ou 2. L'étalon 1 contient 500 ng/mL de d-méthamphétamine, qui sert de seuil de référence pour distinguer les échantillons « positifs » des échantillons « négatifs » lorsque le seuil est établi à 500 ng/mL. L'étalon 2 contient 1 000 ng/mL de d-méthamphétamines qui sert de seuil de référence pour distinguer les échantillons « positifs » des échantillons « négatifs » lorsque le seuil est établi à 1 000 ng/mL.
Analyse semi-quantitativePour l'analyse semi-quantitative, utiliser tous les étalons.
Résultats et valeurs attenduesRésultats de l'analyse qualitativeUn échantillon présentant un changement dont la valeur d'absorbance ( A) est égale ou supérieure à la valeur obtenue avec un étalon seuil est considéré comme positif. Un échantillon présentant un changement dont la valeur d'absorbance ( A) est inférieure à la valeur obtenue avec l'étalon seuil est considéré comme négatif.
Conc. de l'échantillon,
ng/mL
Résultat moyen, ng/mL
Précision intra-test Précision totale Seuil de
500 Nbr nég./Nbr pos.
Seuil de 1 000
Nbr nég./Nbr pos.
ET, ng/mL % CV ET,
ng/mL % CV
d-méthamphétamine
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1 250 1 284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1 500 1 515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Caractérisation du seuilDes échantillons proches des valeurs seuil ont été préparés en dopant de l'urine poolée négative avec de la d-amphétamine et de la d-méthamphétamine séparément. Les échantillons ont été dosés en 20 répétitions, en modes qualitatif et semi-quantitatif. En mode qualitatif, tous les échantillons ont été détectés avec précision : les échantillons négatifs ont moins récupéré que les étalons seuil, alors que les échantillons positifs ont eu une récupération supérieure aux étalons seuil. En mode semi-quantitatif, les échantillons ont affiché une récupération à ± 12 % d'erreur de leurs valeurs nominales. La précision des 20 répétitions était inférieure à 1 % de CV pour le mode qualitatif et inférieure à 4 % de CV pour le mode semi-quantitatif.
Exactitude160 échantillons d'urine cliniques ont été testés avec le dosage des amphétamines DRI sur l'analyseur Beckman Coulter AU680 et par GC/MS. Les résultats sont présentés dans les tableaux suivants.
Des résultats discordants ont été obtenus lorsque le dosage était utilisé pour détecter individuellement les analytes d'amphétamine et de méthamphétamine. Le dosage est en mesure de détecter la présence des analytes d'amphétamine et de méthamphétamine avec une réactivité croisée de 100 % avec les deux drogues. Les échantillons testés à la recherche d'un analyte peuvent donc produire de faux positifs en raison de la présence de l'autre analyte.Analyse qualitative : La concordance globale entre le dosage des amphétamines DRI et la GC/MS pour l'amphétamine a été de 58,0 % pour le seuil de 500 et de 59,4 % pour le seuil de 1 000.
Résultats stratifiés
DRI
Faiblement négatif
par GC/MS (inférieur à
-50 %)
Négatif proche du seuil par
GC/MS (entre -50 % et le
seuil)
Positif proche du seuil par
GC/MS (entre le seuil et
+50 %)
Très positif par GC/MS (supérieur à +50 %)
Concor-dance en pourcen-tage avec
CG/MS
Seuil de 500 ng/mL
Positif 34 24 14 49 100,0 %
Négatif 16 1 0 0 22,7 %
Seuil de 1 000 ng/mL
Positif 40 15 19 20 97,5 %
Négatif 35 8 1 0 43,9 %
Analyse qualitative500 ng/mL
GC/MS1 000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Analyse semi-quantitative : La concordance globale entre le dosage des amphétamines DRI et la GC/MS pour l'amphétamine a été de 58,0 % pour le seuil de 500 et de 58,7 % pour le seuil de 1 000.
Résultats stratifiés
DRI
Faiblement négatif
par GC/MS (inférieur à
-50 %)
Négatif proche du seuil par
GC/MS (entre -50 % et le
seuil)
Positif proche du seuil par
GC/MS (entre le seuil et
+50 %)
Très positif par GC/MS (supérieur à +50 %)
Concor-dance en pourcen-tage avec
CG/MS
Seuil de 500 ng/mL
Positif 34 24 14 49 100,0 %
Négatif 16 1 0 0 22,7 %
Seuil de 1 000 ng/mL
Positif 41 15 19 20 97,5 %
Négatif 34 8 1 0 42,9 %
2
Résultats de l'analyse semi-quantitativeIl est possible d'obtenir une estimation approximative de la concentration de drogue dans les échantillons en traçant une courbe standard avec tous les étalons, puis en quantifiant les échantillons hors de cette courbe. Les échantillons dont le résultat est supérieur à l'étalon élevé doivent être dilués avec de l'urine négative, puis de nouveau testés. La semi-quantification des résultats positifs permet aux laboratoires de déterminer la dilution appropriée de l'échantillon, qu'une méthode de confirmation de type GC/MS doit confirmer. Elle permet également au laboratoire d'établir des procédures de contrôle qualité et d'évaluer les performances du contrôle.
Limites 1. Un résultat positif à ce dosage indique seulement la présence d'amphétamine ou
de méthamphétamine ; il n'est pas nécessairement corrélé à l'ampleur des effets physiologiques et psychologiques.
2. Un résultat positif à ce dosage doit être confirmé par une autre méthode non-immunologique (GC, TLC ou GC/MS, par exemple).
3. Le test est conçu pour être utilisé avec de l'urine humaine uniquement. 4. Il est possible que d'autres substances et/ou facteurs (par ex. techniques ou de procédure)
non répertoriés dans le tableau de spécificité interfèrent avec le test et faussent le résultat.
Caractéristiques de performance spécifiquesLes données de performance types déduites des résultats obtenus sur l'analyseur Beckman Coulter AU680 sont présentées ci-dessous.11
Récupération après dilution et linéaritéUn échantillon élevé d’urine de patient, contenant environ 2 000 ng/mL de méthamphétamines, a été dilué en série avec de l'urine sans analyte par paliers de 10 % et testé en 5 répétitions en mode semi-quantitatif. Tous les échantillons ont été récupérés avec une erreur de ± 10 % de la valeur attendue et une valeur R de 0,9998.
PrécisionDes échantillons dopés avec diverses quantités de d-amphétamine et de d-méthamphétamine ont été testés en modes qualitatif et semi-quantitatif à l'aide d'un protocole de précision du CLSI (PE05-A2).12 Ils ont été testés en 2 répétitions, deux fois par jour pendant 20 jours, pour un total de N = 80. Les résultats sont présentés dans les tableaux suivants.
Analyse qualitative :
Concentration de l'échantillon, ng/mL
Nombre dedéterminations
Seuil de 500Nbr nég. / Nbr pos.
Seuil de 1 000Nbr nég. / Nbr pos.
d-amphétamine
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1 250 80 0 / 80 0 / 80
1 500 80 0 / 80 0 / 80
d-méthamphétamine
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1 250 80 0 / 80 0 / 80
1 500 80 0 / 80 0 / 80
Analyse semi-quantitative :
Conc. de l'échantillon,
ng/mL
Résultat moyen, ng/mL
Précision intra-test Précision totale Seuil de
500 Nbr nég./Nbr pos.
Seuil de 1 000
Nbr nég./Nbr pos.
ET, ng/mL % CV ET,
ng/mL % CV
d-amphétamine
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1 250 1 317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1 500 1 467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
Analyse semi-quantitative500 ng/mL
GC/MS1 000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
Résumé des résultats discordants pour l'amphétamine :L'exactitude des résultats a été classée selon la concentration en d-amphétamine dans les échantillons par GC/MS uniquement. Le tableau ci-dessous identifie les échantillons dont la concentration en d-amphétamine était inférieure au seuil et où le résultat du dosage des amphétamines DRI était positif.
Analyse qualitative : La concordance globale entre le dosage des amphétamines DRI et la GC/MS pour la méthamphétamine a été de 87,4 % pour le seuil de 500 et de 87,4 % pour le seuil de 1 000.
Résultats stratifiés
DRI
Faiblement négatif
par GC/MS (inférieur à
-50 %)
Négatif proche du
seuil par GC/MS (entre -50 % et le
seuil)
Positif proche du seuil par
GC/MS (entre le seuil et
+50 %)
Très positif par GC/MS
(supérieur à +50 %)
Concor-dance en pourcen-tage avec
CG/MS
Seuil de 500 ng/mL
Positif 3 11 11 60 100,0 %
Négatif 19 7 0 0 65,0 %
Seuil de 1 000 ng/mL
Positif 5 9 22 31 100,0 %
Négatif 35 9 0 0 75,9 %
Analyse qualitative500 ng/mL
GC/MS1 000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Résultats stratifiés
DRI
Faiblement négatif
par GC/MS (inférieur à
-50 %)
Négatif proche du
seuil par GC/MS (entre -50 % et le
seuil)
Positif proche du seuil par GC/MS
(entre le seuil et +50 %)
Très positif par GC/MS
(supérieur à +50 %)
Concor-dance en pourcen-tage avec
CG/MS
Seuil de 500 ng/mL
Positif 3 11 11 60 100,0 %
Négatif 19 7 0 0 65,0 %
Seuil de 1 000 ng/mL
Positif 5 10 22 31 100,0 %
Négatif 34 8 0 0 74,1 %
Analyse semi-quantitative500 ng/mL
GC/MS1 000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Résumé des résultats discordants pour la méthamphétamine :L'exactitude des résultats a été classée selon la concentration en d-méthamphétamine dans les échantillons par GC/MS uniquement. Le tableau ci-dessous identifie les échantillons dont la concentration en d-méthamphétamine était inférieure au seuil et où le résultat du dosage des amphétamines DRI était positif.
a L'échantillon contenait également de la MDA ~288 ng/mL et de la MDMA ~2 530 ng/mL.b L'échantillon contenait également de la PPA ~1 000 ng/mL et de la pseudo-éphédrine ≥ 40 µg/mL.
SpécificitéLa spécificité du dosage a été évaluée en testant divers composés structurellement apparentés et non apparentés en termes de réactivité croisée. Le composant présentant une réactivité croisée potentielle a été dopé dans un pool d'urine négatif aux concentrations indiquées, puis testé en modes qualitatif et semi-quantitatif. Les échantillons testés positifs ou supérieurs à la concentration seuil ont été considérés comme présentant une réactivité croisée avec le dosage, alors que les échantillons testés négatifs ou inférieurs à la concentration seuil ont été considérés comme ne présentant pas de réactivité croisée significative.
4
Le composant parent et les métabolites suivants ont produit un résultat positif aux concentrations répertoriées ci-dessous lorsqu'ils ont été testés avec le dosage des amphétamines DRI.
Composant Concentration seuil de 500, ng/mL
Concentration seuil de 1 000, ng/mL
d-amphétamine 500 1 000
d-méthamphétamine 500 1 000
Méthylènedioxyamphétamine(MDA)
1 400 2 500
Méthylènedioxyméthamphétamine(MDMA)
800 1 300
Les composés qui ne sont pas structurellement apparentés et/ou les drogues utilisées en concurrence ont produit un résultat négatif aux concentrations répertoriées ci-dessous.
Composant Concentration seuil de 500, ng/mL
Concentration seuil de 1 000, ng/mL
Acide acétylsalicylique 1 000 000 1 000 000
Benzoylecgonine 1 000 000 1 000 000
Benzphétamine 20 000 20 000
Benzylpipérazine 40 000 63 000
Bupropion 13 000 50 000
Caféine 1 000 000 1 000 000
Cétirizine dihydrochloride 1 000 000 1 000 000
Chlorpromazine 500 000 500 000
Codéine 1 000 000 1 000 000
d,l-éphédrine 200 000 700 000
d-éphédrine 1 000 000 2 000 000
Dextrométhorphane 1 000 000 1 000 000
d-pseudoéphédrine 75 000 250 000
Fenfluramine 1 200 4 000
Isométheptène 6 000 20 000
Isoxsuprine 100 000 100 000
l-amphétamine 12 500 12 500
l-éphédrine 100 000 350 000
l-méthamphétamine 3 500 10 000
l-pseudoéphédrine 150 000 250 000
Mépéridine 1 000 000 1 000 000
Méphentermine 15 000 25 000
Méthadone 1 000 000 1 000 000
Méthapyrilène 100 000 500 000
Méthylphénidate 150 000 500 000
Métronidazole 1 000 000 1 000 000
Morphine 1 000 000 1 000 000
Norpseudoéphédrine 600 000 1 000 000
Oxazépam 500 000 500 000
Paracétamol 1 000 000 1 000 000
Phencyclidine 1 000 000 1 000 000
Phendimétrazine 40 000 200 000
Phénéthylamine 30 000 100 000
Phénmétrazine 1 500 4 000
Phénobarbital 1 000 000 1 000 000
Phénothiazine 10 000 10 000
Phéntermine 17 500 25 000
Phényléphrine 300 000 500 000
Suite du tableau
Composant Concentration seuil de 500, ng/mL
Concentration seuil de 1 000, ng/mL
Phénylpropanolamine 200 000 250 000
Procaïnamide 13 000 20 000
Prométhazine 500 000 500 000
Propranolol 200 000 200 000
Ranitidine 250 000 600 000
Scopolamine 35 000 100 000
Sécobarbital 1 000 000 1 000 000
Thioridazine 1 000 000 1 000 000
Trifluopérazine 1 000 000 1 000 000
Triflupromazine 1 000 000 1 000 000
Tyramine 300 000 500 000
3-OH-tyramine 500 000 500 000
InterférenceLes effets potentiels du pH, ainsi que des substances endogènes et exogènes sur la récupération des amphétamines à l'aide du dosage des amphétamines DRI ont été évalués en ajoutant des quantités connues de substances potentiellement interférences dans deux pools d'urine exempte de drogue et présentant pour l'un la concentration maximale d'amphétamine et de méthamphétamine produisant un résultat constamment négatif et, pour l'autre la concentration minimale d'amphétamine et de méthamphétamine produisant un résultat systématiquement positif, à ± 25 % de la valeur seuil. Les échantillons ont été testés en modes qualitatif et semi-quantitatif. Aucune interférence n'a été observée suite à l'ajout des composés jusqu'aux concentrations répertoriées dans le tableau suivant.
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Microgenics Corporation, part of Thermo Fisher Scientific46500 Kato RoadFremont, CA 94538 États-UnisService après-vente et assistance technique aux États-Unis :1-800-232-3342
Bibliographie1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds.
Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
Chemical Toxicology Institute; 2000.6. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
Journal of Chromatography B, (2006) 84:93.8. Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) 4.9. C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline –
Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007).10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final
Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9):11983.
11. Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of Precision Performance of
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit)
Uso previstoIl saggio per anfetamine DRI® è destinato alla determinazione qualitativa o semi-quantitativa delle anfetamine nell’urina di origine umana. Il range di misurazione del saggio è di 0-2000 ng/ml con livelli di cutoff di 500 e 1000 ng/ml. Il saggio fornisce una procedura di screening analitico semplice e rapida per rilevare le anfetamine nell’urina.
Il saggio garantisce unicamente un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo chimico alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas cromatografia o la spettrometria di massa (GC/MS) costituiscono il metodo di conferma d'elezione.1,2 Avvalersi di considerazioni cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi test sull'uso o l'abuso di droghe soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari.
Riepilogo e presentazione del testLa anfetamine sono derivati sintetici dell'efedrina. Le anfetamine più comuni comprendono la d-anfetamina, la d-metanfetamina, e la d,l-anfetamina. Agiscono come stimolanti del sistema nervoso centrale. L'anfetamina è l'ammina più simpatomimetica.3,4 Se ingerita, viene rapidamente disattivata a livello epatico o escreta inalterata nell'urina. Altri derivati dell'efedrina, quale la metanfetamina possono essere metabolizzati ed escreti nell'urina come anfetamina.5
Il test di rilevamento delle anfetamine DRI è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea liquido e pronto per l'uso.6 Il saggio utilizza specifici anticorpi in grado di rilevare l'anfetamina e/o la metanfetamina contenute nell'urina con minima cross-reattività a numerosi composti da banco non strutturalmente correlati. Il saggio si basa sulla concorrenza tra la sostanza psicotropa (droga) marcata con un enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) e la droga contenuta nel campione di urina per un quantitativo determinato di siti di legame di uno specifico anticorpo. Se il campione non contiene droga libera, l'anticorpo specifico si lega alla droga marcata con la G6PDH determinando una riduzione dell'attività enzimatica. In presenza di droga libera, questa occupa i siti di legame dell'anticorpo, consentendo alla G6PDH marcata per la droga di interagire con il substrato, determinando un'attività enzimatica. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della droga nell'urina e l'attività enzimatica. L'attività enzimatica viene determinata mediante spettrofotometria a 340 nm misurando la sua abilità di convertire il NAD (nicotinammide adenina dinucleotide) in NADH.
Precauzioni e avvertenzePERICOLO: 1. Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono dannosi
se ingeriti. 2. I reagenti contenuti nei componenti del saggio contengono ≤0.09 % azoturo
di sodio, che può reagire con il piombo o il rame delle condutture e formare azoturi metallici potenzialmente esplosivi. Nello smaltire i reagenti aver cura di sciacquare sempre con acqua abbondante onde prevenirne l’accumulo.
3. Il dosaggio DRI per anfetamine (100 mL) contiene ≤ 0,5% di anticorpo specifico anti-droga e ≤0,2% di albumina sierica bovina (BSA).
4. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. In caso di ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle: lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è difficile, trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il contenuto/contenitore in conformità alle normative locali/regionali/nazionali/internazionali.
ReagentiReagente anticorpo/substrato: contiene anticorpi monoclonali anti-anfetamine, glucosio-6-fosfato (G6P), e il nicotinammide adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Reagente enzima-coniugato: contiene anfetamine marcate con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Preparazione e conservazione dei reagentiI reagenti sono pronti per l'uso. Non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti del saggio, conservati alla temperatura di 2 – 8 °C sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta.
Descrizione del kit 1664 Calibratore negativo DRI, 10 mL 1388 Calibratore negativo DRI, 25 mL 1588 Calibratore multidroga DRI 1, 10 mL 1589 Calibratore multidroga DRI 1, 25 mL 1591 Calibratore multidroga DRI 2, 10 mL 1592 Calibratore multidroga DRI 2, 25 mL 1594 Calibratore multidroga DRI 3, 10 mL 1595 Calibratore multidroga DRI 3, 25 mL 1597 Calibratore multidroga DRI 4, 10 mL 1598 Calibratore multidroga DRI 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Livello 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Livello 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Livello 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Livello 5, 6 x 18 mL
Raccolta e manipolazione del campionePrelevare i campioni di urina in contenitori di plastica o vetro. Prestare attenzione a salvaguardare l’integrità chimica del campione di urina dal momento del prelievo fino all’esecuzione dell’analisi.
I campioni mantenuti a temperatura ambiente che non vengono inizialmente analizzati entro 7 giorni7 dall’arrivo in laboratorio devono essere riposti in un’unità di refrigerazione sicura a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C per diverse settimane.8 La conservazione dei campioni di urina per periodi più lunghi prima dell’analisi o quella dopo l’analisi deve essere effettuata a una temperatura di -20 °C.9 Gli studi hanno dimostrato che gli analiti dell’anfetamina nell’urina sono stabili a -20 °C a tempo indefinito.8
I laboratori che seguono le linee guida obbligatorie SAMHSA devono fare riferimento ai requisiti SAMHSA “Short-Term Refrigerated Storage” (Conservazione refrigerata a breve termine) e “Long-Term Storage” (Conservazione a lungo termine).10
Per proteggere l’integrità del campione, non indurre la formazione di schiuma ed evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Cercare di ottenere campioni pipettati senza detriti di grandi dimensioni. Si raccomanda di centrifugare i campioni notevolmente torbidi prima dell’analisi. I campioni congelati devono essere scongelati e miscelati prima dell’analisi. L’adulterazione del campione di urina può portare a risultati errati. Se si sospetta un’adulterazione del campione, prelevarne un altro e inoltrare entrambi i campioni al laboratorio per l’analisi.
Maneggiare tutti i campioni di urina come materiale potenzialmente infettivo.
ProcedimentoPer l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori in grado di mantenere una temperatura costante, di pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici a 340 nm e i tempi di reazione con accuratezza.
Prima di eseguire il saggio, consultare la documentazione protocollare dell'analizzatore che contiene parametri e/o ulteriori istruzioni per l'uso.
Controllo della qualità e calibrazioneLa buona pratica di laboratorio raccomanda di utilizzare campioni di controllo per assicurare la corretta esecuzione del saggio. Utilizzare controlli prossimi al calibratore di cutoff per convalidare la calibrazione. I risultati del controllo devono ricadere entro intervalli prestabiliti, determinati dalle procedure e dalle linee direttive del laboratorio. Se ricadono esternamente agli intervalli predefiniti, il saggio deve essere considerato non valido. Tutti i requisiti di controllo della qualità devono essere eseguiti in osservanza dei requisiti locali, regionali e statali o dei requisiti di accreditamento vigenti. Ogni laboratorio deve stabilire una propria frequenza di calibrazione e di controllo.
Analisi qualitativaPer l'analisi qualitativa dei campioni, utilizzare il calibratore multidroga per urina DRI 1 o 2. Il calibratore 1 contiene 500 ng/mL di d-metanfetamina, che è utilizzata quale riferimento di cutoff per distinguere i campioni "positivi" da quelli "negativi" con cutoff di 500 ng/mL. Il calibratore 2 contiene 1.000 ng/mL di d-metanfetamina, valore utilizzato come riferimento di cutoff per distinguere i campioni "positivi" da quelli "negativi" con cutoff di 1.000 ng/mL.
Analisi semi-quantitativaPer l'analisi semi-quantitativa, utilizzare tutti i calibratori.
Risultati e valori attesiRisultati qualitativiUn campione in cui si rileva una variazione del valore di assorbanza ( A) uguale o superiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato positivo. Un campione che rilevi una variazione del valore di assorbanza ( A) inferiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato negativo.
Conc. del campione,
ng/mL
Media dei risultati,
ng/mL
Precisione intrasequenza
Precisione totale Cutoff 500
N° Neg /N° Pos
Cutoff 1.000 N° Neg /N°
PosSD ng/mL % CV SD,
ng/mL % CV
d-metanfetamina
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1.250 1.284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1.500 1.515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Caratterizzazione di cutoffCampioni prossimi ai valori di cutoff sono stati preparati addizionando separatamente d-anfetamina e d-metamfetamina in campioni di urina delle 24 ore negativi. I campioni sono stati saggiati in repliche di 20 in modalità qualitativa e semi-quantitativa. In modalità qualitativa, tutti i campioni sono stati rilevati accuratamente con i campioni negativi recuperanti meno dei calibratori di cutoff e i campioni positivi recuperanti più dei calibratori di cutoff. In modalità semi-quantitativa, la percentuale di recupero dei campioni era compresa entro ± 12 % di errore rispetto ai relativi valori nominali. La precisione dei 20 replicati era inferiore ad un CV dell'1 % per la modalità qualitativa e inferiore ad un CV del 4 % per la modalità semi-quantitativa.
Accuratezza160 campioni clinici di urina sono stati sottoposti a test con il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI su Beckman Coulter AU680 e con gas cromatografia/spettrometria di massa (GC/MS).
Sono stati registrati alcuni risultati discordi quando il saggio è stato utilizzato per rilevare l'anfetamina e la metanfetamina quali singoli analiti. Il saggio è in grado di rilevare la presenza degli analiti anfetamina e metanfetamina con cross-reattività del 100 % per entrambe le droghe. Pertanto i campioni saggiati per un analita possono dare luogo a risultati falsi positivi per la presenza dell'altro analita.
Analisi qualitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI e la gas cromatografia/spettrometria di massa (GC/MS) per l'anfetamina era del 58,0 % per il cutoff 500 e del 59,4 % per il cutoff 1.000.
Risultati stratificati
DRI
Basso negativo con GC/MS (inferiore a
-50 %)
Prossimo al cutoff negativo con GC/MS (tra -50 % e il cutoff)
Prossimo al cutoff positivo con GC/MS (tra
il cutoff e +50 %)
Alto positivo con GC/MS (superiore a
+50 %)
Percentuale di accordo con GC/MS
Cutoff 500 ng/mL
Positivo 34 24 14 49 100,0 %
Negativo 16 1 0 0 22,7 %
Cutoff 1.000 ng/mL
Positivo 40 15 19 20 97,5 %
Negativo 35 8 1 0 43,9 %
Qualitativo500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Analisi semi-quantitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI e la gas cromatografia/spettrometria di massa (GC/MS) per l'anfetamina era del 58,0 % per il cutoff 500 e del 58,7 % per il cutoff 1.000.
Risultati stratificati
DRI
Basso negativo con GC/MS (inferiore a
-50 %)
Prossimo al cutoff negativo con GC/MS (tra -50 % e il cutoff)
Prossimo al cutoff positivo con GC/MS (tra
il cutoff e +50 %)
Alto positivo con GC/MS (superiore a
+50 %)
Percentuale di accordo con GC/MS
Cutoff 500 ng/mL
Positivo 34 24 14 49 100,0 %
Negativo 16 1 0 0 22,7 %
Cutoff 1.000 ng/mL
Positivo 41 15 19 20 97,5 %
Negativo 34 8 1 0 42,9 %
2
Risultati semi-quantitativiUna stima approssimativa della concentrazione della sostanza psicotropa nei campioni può essere ottenuta eseguendo una curva standard con tutti i calibratori e quantificando i campioni esterni alla curva standard. I risultati dei campioni eccedenti il calibratore alto devono essere diluiti con urina negativa e ritestati. La semi quantificazione dei risultati positivi consente al laboratorio di determinare una diluizione appropriata del campione a sostegno di un metodo di conferma quale una GC/MS (gas cromatografia/spettrometria di massa). Consente inoltre al laboratorio di istituire procedure di controllo della qualità e di valutare la performance del controllo.
Limitazioni 1. Un risultato positivo di questo saggio è unicamente indicativo della presenza di
anfetamina o metamfetamina e non è necessariamente correlato con l'entità degli effetti fisiologici e psicologici.
2. Un risultato positivo del saggio deve essere confermato da un altro metodo non immunologico quale una gascromatografia (GC), una cromatografia su strato sottile (TLC, thin-layer chromatography) o una gascromatografia/spettrometria di massa (GC/MS).
3. Il test è indicato per l'uso unicamente con urina umana. 4. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. tecnici o procedurali) non
elencati nella tabella delle specificità possano interferire con il test causando dei falsi risultati.
Caratteristiche prestazionali specificheI risultati prestazionali tipici ottenuti sull'analizzatore Beckman Coulter AU680 sono elencati in basso.11
Studi sui recuperi e linearità della diluizioneUn campione "alto" di urina di un paziente contenente circa 2.000 ng/mL di metanfetamina è stato diluito serialmente con urina priva di analita per incrementi del 10 % e sottoposto a test in 5 repliche in modalità semi-quantitativa. Tutti i campioni sono stati recuperati con un errore compreso entro ± 10 % del valore atteso e il valore R era di 0,9998.
PrecisioneDei campioni addizionati con quantità variabili di d-anfetamina e di d-metanfetamina sono stati saggiati in modalità qualitativa e semi-quantitativa utilizzando un protocollo di precisione CLSI (EP05-A2).12 I campioni sono stati saggiati in repliche di 2, due volte al dì per 20 giorni, in totale N = 80. I risultati sono riportati nelle tabelle seguenti.
Analisi qualitativa
Concentrazione del campione, ng/mL
Numero dideterminazioni
Cutoff 500N° Neg / N° Pos
Cutoff 1.000N° Neg / N° Pos
d-anfetamina
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
d-metanfetamina
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
Analisi semi-quantitativa:
Conc. del campione,
ng/mL
Media dei risultati,
ng/mL
Precisione intrasequenza
Precisione totale Cutoff 500
N° Neg /N° Pos
Cutoff 1.000 N° Neg /N°
PosSD ng/mL % CV SD,
ng/mL % CV
d-anfetamina
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1.250 1.317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1.500 1.467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
Semi-quantitativo500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
Riepilogo dei risultati discordi per le anfetamine:I campioni per lo studio dell'accuratezza sono stati suddivisi per categorie in base unicamente alla concentrazione GC/MS di d-anfetamina. La tabella seguente identifica tali campioni con una concentrazione di d-anfetamina inferiore al cutoff, in cui il risultato osservato del saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI era positivo.
Valore di cutoff(ng/mL)
Risultato DRI
AnfetaminaGC/MS (ng/mL)
MetanfetaminaGC/MS (ng/mL)
500 Positivo 47 1.653
500 Positivo 68 1.621
500 Positivo 68 334
500 Positivo 69 1.666
500 Positivo 69 1.707
500 Positivo 70 444
500 Positivo 70 1.513
500 Positivo 76 1.679
500 Positivo 82 533
500 Positivo 83 481
500 Positivo a 100 538
500 Positivo 100 675
500 Positivo 109 1.446
500 Positivo 123 661
500 Positivo 128 503
500 Positivo 128 1.221
500 Positivo 141 1.259
500 Positivo 148 942
500 Positivo 160 1.254
500 Positivo 161 1.415
500 Positivo 168 1.319
500 Positivo 168 1.595
500 Positivo 184 548
500 Positivo 189 1.067
500 Positivo 200 1.024
500 Positivo 202 393
500 Positivo 203 1.230
500 Positivo 211 1.421
500 Positivo 212 1.241
500 Positivo 214 97
500 Positivo 231 1.782
500 Positivo 232 207
500 Positivo 140 449
500 Positivo 246 460
500 Positivo 258 1.029
500 Positivo 264 1.642
500 Positivo 270 479
500 Positivo 271 1.338
500 Positivo 272 1.080
500 Positivo 273 516
500 Positivo 298 2.772
500 Positivo 300 101
500 Positivo 307 2.411
500 Positivo 317 2.668
Tabella (segue)
Valore di cutoff(ng/mL)
Risultato DRI
AnfetaminaGC/MS (ng/mL)
MetanfetaminaGC/MS (ng/mL)
500 Positivo 325 2.828
500 Positivo 330 2.543
500 Positivo 374 693
500 Positivo 380 709
500 Positivo 402 132
500 Positivo 407 747
500 Positivo 417 1.088
500 Positivo 426 1.599
500 Positivo 450 828
500 Positivo 486 860
500 Positivo 490 1.287
500 Positivo 493 1.005
500 Positivo 494 924
500 Positivo 498 919
1.000 Positivo 47 1.653
1.000 Positivo 68 1.621
1.000 Positivo 68 334
1.000 Positivo 69 1.666
1.000 Positivo 69 1.707
1.000 Positivo 70 1.513
1.000 Positivo 76 1.679
1.000 Positivo 100 538
1.000 Positivo 109 1.446
1.000 Positivo 128 1.221
1.000 Positivo 141 1.259
1.000 Positivo 148 942
1.000 Positivo 160 1.254
1.000 Positivo 161 1.415
1.000 Positivo 168 1.319
1.000 Positivo 168 1.595
1.000 Positivo 189 1.067
1.000 Positivo 200 1.024
1.000 Positivo 203 1.230
1.000 Positivo 211 1.421
1.000 Positivo 212 1.241
1.000 Positivo 231 1.782
1.000 Positivo 258 1.029
1.000 Positivo 264 1.642
1.000 Positivo 271 1.338
1.000 Positivo 272 1.080
1.000 Positivo 298 2.772
1.000 Positivo 307 2.411
1.000 Positivo 317 2.668
1.000 Positivo 325 2.828
1.000 Positivo 330 2.543
1.000 Positivo 374 693
1.000 Positivo 407 747
1.000 Positivo 417 1.088
1.000 Positivo 426 1.599
1.000 Positivo 450 828
1.000 Positivo 486 860
1.000 Positivo 490 1.287
1.000 Positivo 493 1.005
3
Tabella (segue)
Valore di cutoff (ng/mL)
Risultato DRI
Anfetamina GC/MS (ng/mL)
Metanfetamina GC/MS (ng/mL)
1.000 Positivo 494 924
1.000 Positivo 498 919
1.000 Positivo 500 1.989
1.000 Positivo 513 938
1.000 Positivo 522 957
1.000 Positivo 541 1.013
1.000 Positivo 572 1.050
1.000 Positivo 576 1.052
1.000 Positivo 595 2.396
1.000 Positivo 656 2.533
1.000 Positivo 715 2.415
1.000 Positivo 771 1.190
1.000 Positivo 780 287
1.000 Positivo 814 2.984
1.000 Positivo b 816 0
1.000 Positivo 929 0
1.000 Positivo 998 367
1.000 Negativo 1.101 0
Analisi qualitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI e la gas cromatografia/spettrometria di massa (GC/MS) per la metanfetamina era dell'87,4 % per il cutoff 500 e dell'87,4 % per il cutoff 1.000.
Risultati stratificati
DRI
Basso negativo
con GC/MS (inferiore a
-50 %)
Prossimo al cutoff
negativo con GC/MS (tra -50 % e il
cutoff)
Prossimo al cutoff
positivo con GC/MS (tra il cutoff e
+50 %)
Alto positivo con GC/
MS (superiore a +50 %)
Percentuale di accordo
con GC/MS
Cutoff 500 ng/mL
Positivo 3 11 11 60 100,0 %
Negativo 19 7 0 0 65,0 %
Cutoff 1.000 ng/mL
Positivo 5 9 22 31 100,0 %
Negativo 35 9 0 0 75,9 %
Qualitativo500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Risultati stratificati
DRI
Basso negativo
con GC/MS (inferiore a
-50 %)
Prossimo al cutoff
negativo con GC/MS (tra -50 % e il
cutoff)
Prossimo al cutoff
positivo con GC/MS (tra il cutoff e
+50 %)
Alto positivo con GC/MS (superiore a
+50 %)
Percentuale di accordo
con GC/MS
Cutoff 500 ng/mL
Positivo 3 11 11 60 100,0 %
Negativo 19 7 0 0 65,0 %
Cutoff 1.000 ng/mL
Positivo 5 10 22 31 100,0 %
Negativo 34 8 0 0 74,1 %
Semi-quantitativo500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Riepilogo dei risultati discordi per la metanfetaminaI campioni per lo studio dell'accuratezza sono stati suddivisi in categorie in base unicamente alla concentrazione GC/MS di d-metanfetamina. La tabella seguente identifica tali campioni con una concentrazione di d-metanfetamina inferiore al cutoff, in cui il risultato osservato del saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI era positivo.
Valore di cutoff (ng/mL)
Risultato DRI
Anfetamina GC/MS (ng/mL)
Metanfetamina GC/MS (ng/mL)
500 Positivo 300 101
500 Positivo 402 132
500 Positivo 232 207
500 Positivo 780 287
500 Positivo 68 334
500 Positivo 1.142 339
500 Positivo 1.203 356
500 Positivo 998 367
500 Positivo 202 393
500 Positivo 70 444
500 Positivo 240 449
500 Positivo 246 460
500 Positivo 270 479
500 Positivo 83 481
1.000 Positivo 780 287
1.000 Positivo 68 334
1.000 Positivo 1.142 339
1.000 Positivo 1.203 356
1.000 Positivo 998 367
1.000 Positivo 100 538
1.000 Positivo 374 693
1.000 Positivo 407 747
1.000 Positivo 450 828
1.000 Positivo 486 860
1.000 Positivo 498 919
1.000 Positivo 494 924
1.000 Positivo 513 938
1.000 Positivo 148 942
1.000 Positivo 522 957
a Il campione conteneva anche MDA ~288 ng/mL e MDMA ~2.530 ng/mL.b Il campione conteneva anche PPA ~1.000 ng/mL e pseudoefedrina ≥ 40 µg/mL.
SpecificitàLa specificità del saggio è stata valutata saggiando numerosi campioni strutturalmente correlati e non correlati per la cross-reattività. Il potenziale composto cross-reattivo veniva addizionato ad un pool di urina negativo alle concentrazioni elencate e saggiato in modalità qualitativa e semi-quantitativa. I campioni che risultavano positivi o superiori alla concentrazione di cutoff erano considerati in grado di manifestare cross-reattività con il saggio e i campioni che risultavano negativi o inferiori alla concentrazione di cutoff erano considerati non manifestare una cross reattività significativa.
4
I seguenti composti precursori e metaboliti, quando venivano sottoposti a test con il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI, producevano un risultato positivo alle concentrazioni sottoelencate.
Composto Concentrazione cutoff 500, ng/mL
Concentrazione cutoff 1.000, ng/mL
d-anfetamina 500 1.000
d-metanfetamina 500 1.000
Metilenediossianfetamina(MDA)
1.400 2.500
Metilendiossimetamfetamina(MDMA)
800 1.300
Alcuni composti strutturalmente non correlati e/o farmaci utilizzati in concomitanza hanno prodotto un risultato negativo alle concentrazioni sottoelencate.
Composto Concentrazione cutoff 500, ng/mL
Concentrazione cutoff 1.000, ng/mL
Acido acetilsalicilico 1.000.000 1.000.000
Benzfetamina 20.000 20.000
Benzilpiperazina 40.000 63.000
Benzoilecgonina 1.000.000 1.000.000
Bupropione 13.000 50.000
Caffeina 1.000.000 1.000.000
Cetirizina dicloridrato 1.000.000 1.000.000
Clorpromazina 500.000 500.000
Codeina 1.000.000 1.000.000
d,l efedrina 200.000 700.000
D-efedrina 1.000.000 2.000.000
Destrometorfano 1.000.000 1.000.000
d-pseudoefedrina 75.000 250.000
Fenciclidina (PCP) 1.000.000 1.000.000
Fendimetrazina 40.000 200.000
Fenfluramina 1.200 4.000
Fenilefrina 300.000 500.000
Feniletilamina 30.000 100.000
Fenilpropanolamina 200.000 250.000
Fenmetrazina 1.500 4.000
Fenobarbital 1.000.000 1.000.000
Fenotiazina 10.000 10.000
Fentermina 17.500 25.000
Isometeptene 6.000 20.000
l-Anfetamina 12.500 12.500
L-efedrina 100.000 350.000
l-Metanfetamina 3.500 10.000
l-pseudoefedrina 150.000 250.000
Mefentermina 15.000 25.000
Meperidina 1.000.000 1.000.000
Metadone 1.000.000 1.000.000
Metapirilene 100.000 500.000
Metilfenidato 150.000 500.000
Metronidazolo 1.000.000 1.000.000
Morfina 1.000.000 1.000.000
Norpseudoefedrina 600.000 1.000.000
Oxazepam 500.000 500.000
Paracetamolo 1.000.000 1.000.000
Tabella (segue)
Composto Concentrazione cutoff 500, ng/mL
Concentrazione cutoff 1.000, ng/mL
Procainamide 13.000 20.000
Prometazina 500.000 500.000
Propranololo 200.000 200.000
Ranitidina 250.000 600.000
Scopolamina 35.000 100.000
Secobarbital 1.000.000 1.000.000
Tioridazina 1.000.000 1.000.000
Tiramina 300.000 500.000
Trifluoperazina 1.000.000 1.000.000
Triflupromazina 1.000.000 1.000.000
Vasosuprina 100.000 100.000
3-OH-tiramina 500.000 500.000
InterferenzaI potenziali effetti del pH, delle sostanze endogene ed esogene sul recupero delle anfetamine utilizzando il saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI sono stati valutati aggiungendo quantità note di sostanze potenzialmente interferenti a due pool di urina priva di droga contenenti la massima concentrazione di anfetamina e metanfetamina che produce un risultato costantemente negativo, e la minima concentrazione di anfetamina e metanfetamina che produce un risultato costantemente positivo, tra ± 25 % del valore di cutoff. I campioni sono stati saggiati sia in modalità qualitativa, sia semi-quantitativa. Non sono risultate osservabili interferenze con l'aggiunta dei composti alle concentrazioni elencate nella tabella seguente.
Per gli aggiornamenti del foglio illustrativo, visitare:www.thermoscientific.com/diagnostics
Negli altri paesi:Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific locale di zona.
0138-12-IT2017 08
Microgenics Corporation, part of Thermo Fisher Scientific46500 Kato RoadFremont, CA 94538 USAServizio di assistenza tecnica e alla clientela negli USA:1-800-232-3342
Bibliografia1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds.
Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
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New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
Journal of Chromatography B, (2006) 84:93.8. Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) 4.9. C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline –
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Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9):11983.
11. Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance of
10014585 (3 x 18 ml) 0017 (100 ml Kit) 0018 (500 ml Kit)
IndicacionesEl ensayo de anfetaminas DRI® está concebido para la determinación cualitativa o semicuantitativa de anfetaminas en orina humana. El intervalo del ensayo es de 0 a 2.000 ng/ml con niveles discriminatorios de 500 y 1.000 ng/ml. El ensayo ofrece un procedimiento analítico sencillo y rápido para la detección de anfetaminas en orina.
Este ensayo únicamente ofrece un resultado analítico cualitativo preliminar. Es necesario utilizar un método químico alternativo más específico con el fin de obtener un resultado analítico confirmado. El método de confirmación preferente es la cromatografía de gases/espectrometría de masas (CG/EM).1,2 Se han de aplicar las consideraciones clínicas y el buen juicio profesional ante cualquier resultado de una prueba de drogas duras, en particular cuando los resultados preliminares resulten positivos.
Resumen y explicación de la pruebaLas anfetaminas son derivados sintéticos de efedrina. Las anfetaminas más comunes son d-anfetamina, d-metanfetamina y d,l-anfetamina. Estas sustancias actúan como estimulantes del sistema nervioso central. La anfetamina es la amina más simpaticomimética.3,4 Tras su ingestión, la anfetamina se desactiva rápidamente en el hígado o se excreta sin cambios por la orina. Otros derivados de efedrina, como la metanfetamina, pueden ser metabolizados y excretados en la orina en forma de anfetamina.5
El ensayo de anfetaminas DRI es un inmunoensayo enzimático homogéneo líquido listo para usar.6 El ensayo utiliza anticuerpos específicos capaces de detectar la presencia de anfetamina y/o metanfetamina en la orina, con una mínima reactividad cruzada con diversos compuestos de venta sin receta estructuralmente no relacionados. El ensayo se basa en la competencia entre una droga marcada con la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) y la droga presente en la muestra de orina por un número determinado de sitios de unión del anticuerpo específico. En ausencia de droga libre en la muestra, el anticuerpo específico se une a la droga marcada con G6PDH, con lo que provoca un descenso de la actividad de la enzima. En presencia de la droga libre, esta ocupa los sitios de unión del anticuerpo, de modo que la droga marcada con G6PDH puede interaccionar con el sustrato, lo que se traduce en la actividad enzimática. Este fenómeno da lugar a una relación directa entre la concentración de la droga en la orina y la actividad enzimática. La actividad enzimática se determina por espectrofotometría a 340 nm, midiendo su capacidad de convertir nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) en NADH.
Precauciones y advertenciasPELIGRO: 1. Esta prueba está diseñada exclusivamente para uso diagnóstico in vitro.
Los reactivos son nocivos por ingestión. 2. Los reactivos utilizados en los componentes del ensayo contienen ≤0,09 %
azida de sodio, que puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Al verter estos reactivos por el desagüe, hágalo siempre con grandes volúmenes de agua para evitar la acumulación de azidas.
3. El ensayo de anfetaminas DRI (100 ml) contiene ≤0,5% de anticuerpo específico de una sustancia y ≤0,2% de albúmina sérica bovina (BSA).
4. No utilice los reactivos después de su fecha de caducidad.
H317 - Puede provocar una reacción alérgica en la piel.H334 - Puede provocar síntomas de alergia o asma, o dificultades respiratorias en caso de inhalación.
Evitar respirar los vapores o la neblina. Las prendas de trabajo contaminadas no podrán sacarse del lugar de trabajo. Usar guantes y ropa de protección/equipo de protección para los ojos y la cara. En caso de ventilación insuficiente, llevar equipo de protección respiratoria. En caso de contacto con la piel: Lavar la zona con abundante agua y jabón. EN CASO DE INHALACIÓN: Si la víctima respira con dificultad, transpórtela al exterior y manténgala en reposo en una posición en la que respire con comodidad. En caso de irritación o erupción de la piel: Buscar asesoramiento o asistencia médica inmediata. En caso de experimentar síntomas de dificultad respiratoria: Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGÍA o a un médico. Lavar las prendas contaminadas antes de volver a usarlas. Eliminar el contenido/el recipiente en un lugar que esté en conformidad con las normativas locales, regionales, nacionales e internacionales.
ReactivosReactivo de anticuerpo/sustrato. Contiene anticuerpos monoclonales anti-anfetaminas, gluco-sa-6-fosfato (G6P) y nicotinamida adenina nucleótido (NAD) en tampón Tris con azida de sodio como conservante.
Reactivo enzimático conjugado. Contiene anfetaminas marcadas con glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) en tampón Tris con azida de sodio como conservante.
Preparación y almacenamiento de los reactivosLos reactivos están listos para su uso. No es necesario preparar los reactivos. Si se conservan a 2–8 °C, todos los componentes del ensayo son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Materiales adicionales necesarios (se venden por separado):
Descripción del kit 1664 Calibrador negativo DRI, 10 ml 1388 Calibrador negativo DRI, 25 ml 1588 Calibrador multidroga DRI 1, 10 ml 1589 Calibrador multidroga DRI 1, 25 ml 1591 Calibrador multidroga DRI 2, 10 ml 1592 Calibrador multidroga DRI 2, 25 ml 1594 Calibrador multidroga DRI 3, 10 ml 1595 Calibrador multidroga DRI 3, 25 ml 1597 Calibrador multidroga DRI 4, 10 ml 1598 Calibrador multidroga DRI 4, 25 ml DOAT-2 MAS® DOA Total – Nivel 2, 6 x 18 ml DOAT-3 MAS® DOA Total – Nivel 3, 6 x 18 ml DOAT-4 MAS® DOA Total – Nivel 4, 6 x 18 ml DOAT-5 MAS® DOA Total – Nivel 5, 6 x 18 ml
Recogida y preparación de las muestrasRecoja las muestras de orina en recipientes de plástico o de vidrio. Debe extremarse el cuidado para mantener la integridad química de la muestra de orina desde el momento de su recogida hasta el del ensayo.
Las muestras mantenidas a temperatura ambiente que no se analicen en los 7 días7 posteriores a su llegada al laboratorio deben conservarse en una unidad de refrigeración segura a entre 2 y 8 °C durante varias semanas.8 Para almacenarlas durante más tiempo antes del análisis o para la retención de muestras después del análisis, las muestras de orina deben almacenarse a -20 °C.9 Estudios realizados demuestran que los analitos de anfetamina en la orina son estables a -20 °C de forma indefinida.8
Los laboratorios que sigan las directrices obligatorias de la SAMHSA deben cumplir los requisitos de la SAMHSA sobre almacenamiento refrigerado a corto plazo y almacenamiento a largo plazo.10
Para proteger la integridad de la muestra, no induzca la formación de espuma y evite la congelación y descongelación repetidas. Debe hacerse todo lo posible para mantener las muestras pipeteadas libres de residuos macroscópicos. Se recomienda que las muestras muy turbias se centrifuguen antes del análisis. Las muestras congeladas deben descongelarse y mezclarse antes del análisis. La adulteración de las muestras de orina puede generar resultados erróneos. Si sospecha que la muestra puede estar adulterada, obtenga otra muestra y envíe ambas al laboratorio para su análisis.
Manipule todas las muestras de orina como si fueran potencialmente infecciosas.
Procedimiento del ensayoPara realizar este ensayo, se pueden utilizar analizadores de bioquímica capaces de mantener una temperatura constante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir las tasas enzimáticas a 340 nm y cronometrar la reacción con precisión.
Antes de realizar el ensayo, consulte la hoja de protocolos de cada analizador específico para conocer los parámetros y/o las instrucciones de uso adicionales.
Control de calidad y calibraciónLas buenas prácticas de laboratorio sugieren el uso de muestras de control con el fin de garantizar un correcto funcionamiento. Utilice controles cerca del calibrador discriminatorio para validar la calibración. Los resultados del control deben encontrarse dentro de los intervalos establecidos, según lo determinado por los procedimientos de laboratorio y las directrices. Si los resultados están fuera de los intervalos establecidos, los resultados del ensayo no serán válidos. Todos los requisitos de control de calidad se han de realizar de conformidad con las regulaciones o requisitos de acreditación locales, estatales y/o federales. Cada laboratorio debe establecer su propia frecuencia de calibración y control.
Análisis cualitativoPara el análisis cualitativo de las muestras, utilice el calibrador multidroga en orina DRI 1 o 2. El calibrador 1 contiene 500 ng/ml de d-metanfetamina, y se utiliza como referencia discriminatoria para distinguir entre muestras «positivas» y «negativas» con un nivel discriminatorio de 500 ng/ml. El calibrador 2 contiene 1.000 ng/ml de d-metanfetamina, y se utiliza como referencia discriminatoria para distinguir entre muestras «positivas» y «negativas» con un nivel discriminatorio de 1.000 ng/ml.
Análisis semicuantitativoPara el análisis semicuantitativo, utilice todos los calibradores.
Resultados y valores esperadosResultados cualitativosUna muestra que presente un cambio en el valor de la absorbancia ( A) igual o mayor que el valor obtenido con el calibrador discriminatorio se considera positiva. Una muestra que presente un cambio en el valor de la absorbancia ( A) menor que el valor obtenido con el calibrador discriminatorio se considera negativa.
Conc. de la
muestra, ng/ml
Resul-tado
medio, ng/ml
Precisión intraensayo Precisión total Discrimi-
natorio 500
n.º Neg/ n.º Pos
Discrimi-natorio
1.000 n.º Neg/ n.º Pos
DE, (ng/ml) % CV DE,
(ng/ml) % CV
d-metanfetamina
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1.250 1.284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1.500 1.515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Caracterización del nivel discriminatorioSe prepararon muestras cercanas a los valores discriminatorios por adición de d-anfetamina y d-metanfetamina por separado a mezclas de orina negativas. Las muestras se analizaron en repeticiones de 20 tanto en el modo cualitativo y como semicuantitativo. En el modo cualitativo, todas las muestras se detectaron con exactitud, es decir, las muestras negativas presentaron una recuperación inferior a los calibradores discriminatorios y las muestras positivas presentaron una recuperación superior a los calibradores discriminatorios. En el modo semicuantitativo, las muestras presentaron una recuperación dentro de un error de ± 12 % de sus valores nominales. La precisión de las 20 repeticiones fue inferior al 1 % CV en el modo cualitativo y menos del 4 % CV en el modo semicuantitativo.
ExactitudSe analizaron 160 muestras de orina con la prueba de anfetaminas DRI en el Beckman Coulter AU680 y mediante CG/EM. Los resultados se presentan en las tablas siguientes.
Se obtuvieron algunos resultados discordantes cuando el ensayo se utilizó para detectar los analitos anfetamina y metanfetamina de forma individual. El ensayo es capaz de detectar la presencia de ambos analitos anfetamina y metanfetamina con una reactividad cruzada del 100 % a ambas drogas. Por lo tanto, las muestras analizadas para detectar solo uno de los analitos pueden dar lugar a falsos resultados positivos debido a la presencia del otro analito.Análisis cualitativo: la concordancia general entre el ensayo de anfetaminas DRI y el método de CG/EM para anfetamina fue del 58,0 % en el nivel discriminatorio de 500 y del 59,4 % en el nivel discriminatorio de 1.000.
Resultados estratificados
DRI
Negativo bajo por CG/EM (menos del -50 %)
Negativo cerca del
discriminato-rio por CG/EM (entre -50 % y el discrimina-
torio)
Positivo cerca del discrimi-natorio por
CG/EM (entre el discrimi-natorio y el
+50 %)
Positivo alto por CG/
EM (más del +50 %)
Porcentaje de concor-dancia con
CG/EM
Nivel discriminatorio de 500 ng/ml
Positivo 34 24 14 49 100,0 %
Negativo 16 1 0 0 22,7 %
Nivel discriminatorio de 1.000 ng/ml
Positivo 40 15 19 20 97,5 %
Negativo 35 8 1 0 43,9 %
Resultados cualitativos500 ng/ml
CG/EM1.000 ng/ml
CG/EM
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Análisis semicuantitativo: la concordancia general entre el ensayo de anfetaminas DRI y el método de CG/EM para anfetamina fue del 58,0 % en el nivel discriminatorio de 500 y del 59,7 % en el nivel discriminatorio de 1.000.
2
Resultados semicuantitativosEs posible obtener una estimación aproximada de la concentración de la droga en las muestras realizando una curva patrón con todos los calibradores y cuantificando las muestras a partir de la curva patrón. Los resultados de las muestras por encima del calibrador alto deben diluirse con orina negativa y analizarse de nuevo. La semicuantificación de los resultados positivos permite a los laboratorios determinar una dilución apropiada de la muestra para su confirmación mediante un método de confirmación, tal como CG/EM. Además, permite al laboratorio establecer procedimientos de control de calidad y evaluar el funcionamiento del control.
Limitaciones 1. Un resultado positivo en este ensayo solo indica la presencia de anfetamina o
metanfetamina y no está correlacionado necesariamente con la magnitud de los efectos fisiológicos y psicológicos.
2. Un resultado positivo en este ensayo debe ser confirmado por otro método no inmunológico, como CG, CCF o CG/EM.
3. La prueba está diseñada para su aplicación exclusiva a orina humana. 4. Existe la posibilidad de que otras sustancias y/o factores (p. ej., errores de la técnica o
del procedimiento) no indicados en la tabla de la especificidad pudiesen interferir con la prueba y dar lugar a resultados falsos.
Características específicas de funcionamientoA continuación se muestran los resultados típicos de funcionamiento obtenidos en el analizador Beckman Coulter AU680.11
Recuperación de la dilución y linealidadUna muestra de orina de paciente con alta concentración, en torno a 2.000 ng/ml de metanfetamina, se diluyó en serie con orina exenta del analito en incrementos de 10% y se analizó en 5 repeticiones de modo semicuantitativo. Todas las muestras presentaron una recuperación dentro de un error de ± 10% del valor esperado y el valor de R fue de 0,9998.
PrecisiónSe analizaron muestras adicionadas con diversas cantidades de d-anfetamina y la metanfetamina-d en modo cualitativo y semicuantitativo, siguiendo un protocolo de precisión del CLSI (EP05-A2).12 Las muestras se analizaron en repeticiones de 2, dos veces al día durante 20 días, con un total de N = 80. Los resultados se presentan en las tablas siguientes.
Análisis cualitativo:
Concentración de la muestra (ng/ml)
Número dedeterminaciones
Discriminatorio 500n.º Neg/n.º Pos
Discriminatorio 1.000n.º Neg/n.º Pos
d-anfetamina
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
d-metanfetamina
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
Análisis semicuantitativo:
Conc. de la
muestra, ng/ml
Resul-tado
medio, ng/ml
Precisión intraensayo Precisión total Discrimi-
natorio 500
n.º Neg/ n.º Pos
Discrimi-natorio
1.000 n.º Neg/ n.º Pos
DE, (ng/ml) % CV DE,
(ng/ml) % CV
d-anfetamina
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1.250 1.317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1.500 1.467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
Resultados estratificados
DRI
Negativo bajo por CG/EM (menos del -50 %)
Negativo cerca del
discriminato-rio por CG/EM (entre -50 % y el discrimina-
torio)
Positivo cerca del
discriminato-rio por
CG/EM (entre el discrimi-natorio y el
+50 %)
Positivo alto por CG/EM
(más del +50 %)
Porcentaje de concor-dancia con
CG/EM
Nivel discriminatorio de 500 ng/ml
Positivo 34 24 14 49 100,0 %
Negativo 16 1 0 0 22,7 %
Nivel discriminatorio de 1.000 ng/ml
Positivo 41 15 19 20 97,5 %
Negativo 34 8 1 0 42,9 %
Resultados semicuantitativos500 ng/ml
CG/EM1.000 ng/ml
CG/EM
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
Resumen de los resultados discordantes de anfetamina:Las muestras de exactitud fueron clasificadas basándose únicamente en la concentración de d-anfetamina hallada por CG/EM. La siguiente tabla identifica las muestras con una concentración de d-anfetamina por debajo del nivel discriminatorio en las que el resultado observado con el ensayo de anfetaminas DRI fue positivo.
Valor discriminatorio(ng/ml)
ResultadoDRI
AnfetaminaCG/EM (ng/ml)
MetanfetaminaCG/EM (ng/ml)
500 Positivo 47 1.653
500 Positivo 68 1.621
500 Positivo 68 334
500 Positivo 69 1.666
500 Positivo 69 1.707
500 Positivo 70 444
500 Positivo 70 1.513
500 Positivo 76 1.679
500 Positivo 82 533
500 Positivo 83 481
500 Positivo a 100 538
500 Positivo 100 675
500 Positivo 109 1.446
500 Positivo 123 661
500 Positivo 128 503
500 Positivo 128 1.221
500 Positivo 141 1.259
500 Positivo 148 942
500 Positivo 160 1.254
500 Positivo 161 1.415
500 Positivo 168 1.319
500 Positivo 168 1.595
500 Positivo 184 548
500 Positivo 189 1.067
500 Positivo 200 1.024
500 Positivo 202 393
500 Positivo 203 1.230
500 Positivo 211 1.421
500 Positivo 212 1.241
500 Positivo 214 97
Cont. de la tabla
Valor discriminatorio(ng/ml)
ResultadoDRI
AnfetaminaCG/EM (ng/ml)
MetanfetaminaCG/EM (ng/ml)
500 Positivo 231 1.782
500 Positivo 232 207
500 Positivo 140 449
500 Positivo 246 460
500 Positivo 258 1.029
500 Positivo 264 1.642
500 Positivo 270 479
500 Positivo 271 1.338
500 Positivo 272 1.080
500 Positivo 273 516
500 Positivo 298 2.772
500 Positivo 300 101
500 Positivo 307 2.411
500 Positivo 317 2.668
500 Positivo 325 2.828
500 Positivo 330 2.543
500 Positivo 374 693
500 Positivo 380 709
500 Positivo 402 132
500 Positivo 407 747
500 Positivo 417 1.088
500 Positivo 426 1.599
500 Positivo 450 828
500 Positivo 486 860
500 Positivo 490 1.287
500 Positivo 493 1.005
500 Positivo 494 924
500 Positivo 498 919
1.000 Positivo 47 1.653
1.000 Positivo 68 1.621
1.000 Positivo 68 334
1.000 Positivo 69 1.666
1.000 Positivo 69 1.707
1.000 Positivo 70 1.513
1.000 Positivo 76 1.679
1.000 Positivo 100 538
1.000 Positivo 109 1.446
1.000 Positivo 128 1.221
1.000 Positivo 141 1.259
1.000 Positivo 148 942
1.000 Positivo 160 1.254
1.000 Positivo 161 1.415
1.000 Positivo 168 1.319
1.000 Positivo 168 1.595
1.000 Positivo 189 1.067
1.000 Positivo 200 1.024
1.000 Positivo 203 1.230
1.000 Positivo 211 1.421
1.000 Positivo 212 1.241
1.000 Positivo 231 1.782
1.000 Positivo 258 1.029
1.000 Positivo 264 1.642
1.000 Positivo 271 1.338
1.000 Positivo 272 1.080
3
Cont. de la tabla
Valor discriminatorio
Resultado DRI
Anfetamina CG/EM (ng/ml)
Metanfetamina CG/EM (ng/ml)
1.000 Positivo 298 2.772
1.000 Positivo 307 2.411
1.000 Positivo 317 2.668
1.000 Positivo 325 2.828
1.000 Positivo 330 2.543
1.000 Positivo 374 693
1.000 Positivo 407 747
1.000 Positivo 417 1.088
1.000 Positivo 426 1.599
1.000 Positivo 450 828
1.000 Positivo 486 860
1.000 Positivo 490 1.287
1.000 Positivo 493 1.005
1.000 Positivo 494 924
1.000 Positivo 498 919
1.000 Positivo 500 1.989
1.000 Positivo 513 938
1.000 Positivo 522 957
1.000 Positivo 541 1.013
1.000 Positivo 572 1.050
1.000 Positivo 576 1.052
1.000 Positivo 595 2.396
1.000 Positivo 656 2.533
1.000 Positivo 715 2.415
1.000 Positivo 771 1.190
1.000 Positivo 780 287
1.000 Positivo 814 2.984
1.000 Positivo b 816 0
1.000 Positivo 929 0
1.000 Positivo 998 367
1.000 Negativo 1.101 0
Análisis cualitativo: la concordancia general entre el ensayo de anfetaminas DRI y el método de CG/EM para metanfetamina fue del 87,4 % en el nivel discriminatorio de 500 y del 87,4 % en el nivel discriminatorio de 1.000.
Resultados estratificados
DRI
Negativo bajo por CG/EM (menos del -50 %)
Negativo cerca del
discriminato-rio por CG/EM (entre -50 % y el discrimina-
torio)
Positivo cerca del discrimi-
natorio por CG/EM (entre el
discriminato-rio y el +50 %)
Positivo alto por CG/EM (más del
+50 %)
Porcentaje de concor-dancia con
CG/EM
Nivel discriminatorio de 500 ng/ml
Positivo 3 11 11 60 100,0 %
Negativo 19 7 0 0 65,0 %
Nivel discriminatorio de 1.000 ng/ml
Positivo 5 9 22 31 100,0 %
Negativo 35 9 0 0 75,9 %
Resultados cualitativos500 ng/ml
CG/EM1.000 ng/ml
CG/EM
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Resultados estratificados
DRI
Negativo bajo por CG/EM (menos del -50 %)
Negativo cerca del
discriminato-rio por CG/EM (entre -50 % y el discrimina-
torio)
Positivo cerca del
discriminato-rio por CG/EM (entre el dis-
criminatorio y el +50 %)
Positivo alto por CG/
EM (más del +50 %)
Porcentaje de concor-dancia con
CG/EM
Nivel discriminatorio de 500 ng/ml
Positivo 3 11 11 60 100,0 %
Negativo 19 7 0 0 65,0 %
Nivel discriminatorio de 1.000 ng/ml
Positivo 5 10 22 31 100,0 %
Negativo 34 8 0 0 74,1 %
Resultados semicuantitativos500 ng/ml
CG/EM1.000 ng/ml
CG/EM
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Resumen de los resultados discordantes de metanfetamina:Las muestras de exactitud fueron clasificadas basándose únicamente en la concentración de d-metanfetamina hallada por CG/EM. La siguiente tabla identifica las muestras con una concentración de d-metanfetamina por debajo del nivel discriminatorio en las que el resultado observado con el ensayo de anfetaminas DRI fue positivo.
Valor discriminatorio
Resultado DRI
Anfetamina CG/EM (ng/ml)
Metanfetamina CG/EM (ng/ml)
500 Positivo 300 101
500 Positivo 402 132
500 Positivo 232 207
500 Positivo 780 287
500 Positivo 68 334
500 Positivo 1.142 339
500 Positivo 1.203 356
500 Positivo 998 367
500 Positivo 202 393
500 Positivo 70 444
500 Positivo 240 449
500 Positivo 246 460
500 Positivo 270 479
500 Positivo 83 481
1.000 Positivo 780 287
1.000 Positivo 68 334
1.000 Positivo 1.142 339
1.000 Positivo 1.203 356
1.000 Positivo 998 367
1.000 Positivo 100 538
1.000 Positivo 374 693
1.000 Positivo 407 747
1.000 Positivo 450 828
1.000 Positivo 486 860
1.000 Positivo 498 919
1.000 Positivo 494 924
1.000 Positivo 513 938
1.000 Positivo 148 942
1.000 Positivo 522 957
a La muestra también contenía MDA ~288 ng/ml y MDMA ~2.530 ng/ml.a La muestra también contenía PPA ~1.000 ng/ml y pseudoefedrina ≥ 40 µg/ml.
4
EspecificidadLa especificidad del ensayo se evaluó analizando la reactividad cruzada de diferentes compuestos estructuralmente relacionados y no relacionados. El compuesto con potencial de causar reactividad cruzada se añadió a una muestra de orina negativa a las concentraciones indicadas y se analizó en modo cualitativo y semicuantitativo. Se considera que las muestras que dieron un resultado positivo o mayor que la concentración discriminatoria presentan reacción cruzada con el ensayo, mientras que se considera que las muestras que dieron un resultado negativo o menor que la concentración discriminatoria no presentan una reacción cruzada significativa.
Los siguientes compuestos originales y metabolitos, analizados con el ensayo de anfetaminas DRI, dieron lugar a un resultado positivo en las concentraciones que se indican a continuación.
CompuestoConcentración con discriminatorio 500,
ng/ml
Concentración con discriminatorio 1.000,
ng/ml
d-anfetamina 500 1.000
d-metanfetamina 500 1.000
Metilendioxianfetamina(MDA)
1.400 2.500
Metilendioximetanfetamina(MDMA)
800 1.300
Los compuestos no relacionados estructuralmente y/o las drogas/fármacos utilizados de forma concomitante produjeron un resultado negativo a las concentraciones que se indican a continuación.
CompuestoConcentración con
discriminatorio 500, ng/ml
Concentración con discriminatorio
1.000, ng/ml
Ácido acetilsalicílico 1.000.000 1.000.000
Benzfetamina 20.000 20.000
Benzilpiperacina 40.000 63.000
Benzoilecgonina 1.000.000 1.000.000
Bupropión 13.000 50.000
Cafeína 1.000.000 1.000.000
Clorpromacina 500.000 500.000
Codeína 1.000.000 1.000.000
d,l-efedrina 200.000 700.000
d-efedrina 1.000.000 2.000.000
Dextrometorfano 1.000.000 1.000.000
Diclorhidrato de cetirizina 1.000.000 1.000.000
d-pseudoefedrina 75.000 250.000
Escopolamina 35.000 100.000
Fenciclidina 1.000.000 1.000.000
Fendimetrazina 40.000 200.000
Fenetilamina 30.000 100.000
Fenfluramina 1.200 4.000
Fenilefrina 300.000 500.000
Fenilpropanolamina 200.000 250.000
Fenmetracina 1.500 4.000
Fenobarbital 1.000.000 1.000.000
Fenotiazina 10.000 10.000
Fentermina 17.500 25.000
Isometepteno 6.000 20.000
Isoxsuprina 100.000 100.000
l-anfetamina 12.500 12.500
l-efedrina 100.000 350.000
l-metanfetamina 3.500 10.000
l-pseudoefedrina 150.000 250.000
Mefentermina 15.000 25.000
Meperidina 1.000.000 1.000.000
Metadona 1.000.000 1.000.000
Metapirileno 100.000 500.000
Metilfenidato 150.000 500.000
Cont. de la tabla
CompuestoConcentración con discriminatorio 500,
ng/ml
Concentración con discriminatorio 1.000,
ng/ml
Metronidazol 1.000.000 1.000.000
Morfina 1.000.000 1.000.000
Nor-pseudoefedrina 600.000 1.000.000
Oxazepam 500.000 500.000
Paracetamol 1.000.000 1.000.000
Procainamida 13.000 20.000
Prometazina 500.000 500.000
Propranolol 200.000 200.000
Ranitidina 250.000 600.000
Secobarbital 1.000.000 1.000.000
Tioridazina 1.000.000 1.000.000
Tiramina 300.000 500.000
Trifluoperazina 1.000.000 1.000.000
Triflupromazina 1.000.000 1.000.000
3-OH-tiramina 500.000 500.000
InterferenciasSe evaluaron los posibles efectos del pH, de las sustancias endógenas y exógenas en la recuperación de las anfetaminas mediante el ensayo de anfetaminas DRI, mediante la adición de cantidades conocidas de sustancias con potencial de interferir a dos mezclas de orina exentas de drogas que contenían la mayor concentración de anfetamina y metanfetamina que da lugar a un resultado consistentemente negativo, y la concentración más baja de anfetamina y metanfetamina que da un resultado consistentemente positivo, entre ± 25 % del valor discriminatorio. Las muestras se analizaron tanto en el modo cualitativo como en el semicuantitativo. No se observó interferencia como consecuencia de la adición de los compuestos hasta las concentraciones que figuran en la siguiente tabla.
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Bibliografía1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds.
Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
Chemical Toxicology Institute; 2000.6. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
Journal of Chromatography B, (2006) 84:93.8. Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) 4.9. C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline –
Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007).10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final
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11. Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance
of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document. 2004.
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit)
Tiltenkt brukDRI® Amphetamines Assay er ment for kvalitativ eller semi-kvantitativ bestemmelse av amfetaminer i human urin. Analyseområdet er 0–2000 ng/ml med grensenivåene 500 og 1000 ng/ml. Analysen gir en enkel og rask analytisk screeningprosedyre for å påvise amfetaminer i human urin.
Analysen gir kun et foreløpig analytisk testresultat. Det må brukes en spesifikk, alternativ, kjemikaliebasert metode for å få et bekreftet analytisk resultat. Gasskromatografi/massespektrometri (GC/MS) er den foretrukne bekreftelsesmetoden.1,2 Kliniske vurderinger og faglig skjønn må legges til grunn for alle resultater av testing for misbruk av narkotiske stoffer, særlig når man benytter foreløpige positive resultater.
Sammendrag og forklaring av testenAmfetaminer er syntetiske derivater av efedrin. De vanligste amfetaminene inkluderer d-amfetamin, d-metamfetamin og d,l-amfetamin. De stimulerer sentralnervesystemet. Amfetamin er det mest sympatomimetiske aminet.3,4 Når amfetamin inntas, blir det enten raskt deaktivert i leveren eller utskilt uendret i urin. Andre efedrinderivater som metamfetamin kan metaboliseres og skilles ut i urin som amfetamin.5
DRI Amphetamines Assay er en immunanalyse med homogent enzym i væskeform, som er klar til bruk.6 Analysen benytter spesifikke antistoffer som kan påvise amfetamin og/eller metamfetamin i urin, med minimal kryssreaktivitet med ulike reseptfrie, strukturelt ikke-relaterte forbindelser. Analysen er basert på konkurranse mellom et stoff merket med glukose-6-fosfat-dehydrogenase (G6PDH) og stoff fra urinprøven om et bestemt antall spesifikke steder som binder antistoffer. Hvis det ikke er fritt stoff i prøven, vil det spesifikke antistoffet binde stoffet merket med G6PDH, noe som gir redusert enzymaktivitet. Hvis det finnes fritt stoff i prøven, tar det frie stoffet opp stedene som binder antistoffer, noe som lar stoffet merket med G6PDH, reagere med substratet, og dette resulterer i enzymaktivitet. Dette fenomenet skaper en direkte forbindelse mellom stoffkonsentrasjonen i urinen og enzymaktiviteten. Enzymaktiviteten bestemmes med spektrofotometri ved 340 nm gjennom måling av enzymets evne til å omdanne nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) til NADH.
Forholdsregler og advarsler
FARE: 1. Denne testen er kun for in vitro-diagnostikk. Reagensene er skadelige hvis de svelges.
2. Reagensene som brukes i analysekomponentene, inneholder ≤ 0,09 % natriumazid, som kan reagere med bly- eller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Ved kasting av slike reagenser må du alltid skylle med en stor mengde vann for å hindre opphopning av azider.
3. DRI Amphetamines Assay (100 mL) inneholder ≤ 0,5 % medikamentspesifikt antistoff og ≤ 0,2 % bovint serumalbumin (BSA).
4. Ikke bruk reagenser etter utløpsdatoen.
H317 – Kan utløse en allergisk hudreaksjon.H334 – Kan gi allergi eller astmasymptomer eller pustevansker ved innånding.
Unngå innånding av tåke/damp. Tilsølte arbeidsklær må ikke fjernes fra arbeidsplassen. Benytt vernehansker/vernebriller/ansiktsskjerm. Ved utilstrekkelig ventilasjon skal åndedrettsvern benyttes. VED HUDKONTAKT: Vask med mye såpe og vann. VED INNÅNDING: Hvis det blir tungt å puste, skal offeret bæres ut i frisk luft og legges i en hvilestilling som gjør det komfortabelt å puste. Ved hudirritasjon eller utslett: Søk legehjelp. Ved symptomer i luftveiene: Kontakt et GIFTINFORMASJONSSENTER eller lege. Tilsølte klær må vaskes før de brukes på nytt. Innhold/beholder skal kasseres i henhold til lokale/regionale/nasjonale/internasjonale bestemmelser.
ReagenserAntistoff/substrat-reagens: Inneholder monoklonale anti-amfetamin-antistoffer, glukose-6-fosfat (G6P) og nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) i Tris-buffer med natriumazid som konserve-ringsmiddel.
Enzymkonjugat-reagens. Inneholder amfetaminer merket med glukose-6-fosfat-dehydrogenase (G6PDH) i Tris-buffer med natriumazid som konserveringsmiddel.
Klargjøring og oppbevaring av reagensReagensene er klare til bruk. Det kreves ingen klargjøring av reagenser. Alle analysekomponentene er stabile til utløpsdatoen som er angitt på etiketten, forutsatt at de oppbevares ved 2–8 °C.
Ytterligere materialer som er nødvendig (men som ikke følger med):
Beskrivelse av settet 1664 DRI Negative Calibrator, 10 mL 1388 DRI Negative Calibrator, 25 mL 1588 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 10 mL 1589 DRI Multi-Drug Calibrator 1, 25 mL 1591 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 10 mL 1592 DRI Multi-Drug Calibrator 2, 25 mL 1594 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 10 mL 1595 DRI Multi-Drug Calibrator 3, 25 mL 1597 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 10 mL 1598 DRI Multi-Drug Calibrator 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Level 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Level 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Level 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Level 5, 6 x 18 mL
Innhenting og håndtering av prøvematerialeInnhent urinprøver i beholdere av plast eller glass. Vær nøye med å bevare den kjemiske integriteten til urinprøven fra innhentingstidspunktet til analysen utføres.
Prøver som oppbevares ved romtemperatur og ikke gjennomgår en innledende test innen 7 dager7 fra de ankommer laboratoriet, må plasseres i en sikker kjøleenhet ved 2–8 °C i flere uker.8 For lengre lagring før analyse eller for oppbevaring av prøven etter analyse kan urinprøver lagres ved –20 °C.9 Undersøkelser har vist at amfetaminanalytter i urin er stabile på ubestemt tid ved –20 °C.8
Laboratorier som følger de obligatoriske SAMHSA-retningslinjene, bør referere til SAMHSA-kravene "Short-Term Refrigerated Storage" og "Long-Term Storage".10
For å beskytte integriteten til prøven må man ikke fremkalle skumdannelse og unngå gjentatt frysing og opptining. Hold pipetterte prøver frie for store rester. Det anbefales å sentrifugere ekstremt uklare prøver før analysering. Frosne prøver må tines opp og blandes før analyse. Uttynning av urinprøven kan gi feilaktige resultater. Innhent en ny prøve ved mistanke om uttynning, og send begge prøver til testing i laboratoriet.
Alle urinprøver skal håndteres som om de er potensielt smittefarlige.
AnalyseprosedyreAnalyseapparater som kan opprettholde en konstant temperatur, pipettere prøver, blande reagenser, måle enzymhastigheter ved 340 nm og beregne reaksjonen nøyaktig, kan brukes til å utføre denne analysen.
Se det analysatorspesifikke protokollarket, som inneholder parametre og/eller ytterligere instruksjoner, før analysen utføres.
Kvalitetskontroll og kalibreringI henhold til god laboratoriepraksis bør det brukes kontrollprøver for å sikre tilfredsstillende analyseytelse. Bruk kontroller nær grenseverdikalibratoren for å validere kalibreringen. Kontrollresultatene må være innenfor laboratoriets etablerte områder, som fastsatt i laboratoriets prosedyrer og retningslinjer. Hvis resultatene faller utenfor de etablerte områdene, er analyseresultatene ugyldige. Alle påkrevde kvalitetskontroller skal utføres i samsvar med lokale, regionale og/eller nasjonale bestemmelser og godkjenningskrav. Hvert laboratorium bør etablere sine egne kalibrerings- og kontrollrutiner.
Kvalitativ analyseBruk DRI Multi-Drug Urine Calibrator 1 eller 2 for kvalitativ analyse av prøver. Calibrator 1 inneholder 500 ng/ml d-metamfetamin, som brukes som en grensereferanse for å skille mellom positive og negative prøver for en grenseverdi på 500 ng/ml. Calibrator 2 inneholder 1000 ng/ml d-metamfetamin, som brukes som en grensereferanse for å skille mellom positive og negative prøver for en grenseverdi på 1000 ng/ml.
Semi-kvantitativ analyseBruk alle kalibratorene for semi-kvantitativ analyse.
Resultater og forventede verdierKvalitative resultaterEn prøve som viser en endring i absorbansverdi ( A) som er større enn eller lik verdien som er oppnådd med grenseverdikalibratoren, vurderes som positiv. En prøve som viser en endring i absorbansverdi ( A) som er mindre enn eller lik verdien som er oppnådd med grenseverdikalibratoren, vurderes som negativ.
Prøvekons.,ng/ml
Resultat-gjennom-
snitt,ng/ml
Innen-kjøring-presisjon Total presisjon 500 gren-
severdi #Neg /#Pos
1000 gren-severdi #Neg /#Pos
SD,ng/ml % CV SD,
ng/ml % CV
d-metamfetamin
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1250 1284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1500 1515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Karakterisering av grenseverdiPrøver nær grenseverdinivåene ble fremstilt ved å tilsette d-amfetamin og d-metamfetamin hver for seg til utvalg av negativ urin. Prøvene ble analysert 20 ganger i både kvalitativ og semi-kvantitativ modus. I kvalitativ modus ble alle prøvene korrekt registrert, med negative prøver som gjenvant mindre enn grenseverdikalibratorene og positive prøver som gjenvant mer enn grenseverdikalibratorene. I semi-kvantitativ modus gjenvant prøvene med mindre enn ± 12 % feil i forhold til de nominelle verdiene. Presisjonen for de 20 gjenmtatte prøvene var mindre enn 1 % CV for kvalitativ modus og mindre enn 4 % CV for semi-kvantitativ modus.
Nøyaktighet
160 kliniske urinprøver ble testet med DRI Amphetamines-analyse på Beckman Coulter AU680 og GC/MS. Resultatene vises i de følgende tabellene.
Noen avvikende resultater ble oppnådd da analysen ble brukt til å påvise amfetamin- og metamfetaminanalytter enkeltvis. Analysen kan påvise tilstedeværelse av både amfetamin- og metamfetaminanalytter med 100 % kryssreaktivitet til begge stoffene. Dette innebærer at prøver
testet foe én analytt kan gi falske positive resultater på grunn av tilstedeværelse av den andre analytten.
Kvalitativ analyse: Det totale samsvaret mellom DRI Amphetamines-analysen og GC/MS for amfetamin var 58,0 % for grenseverdien på 500 og 59,4 % for grenseverdien på 1000.
Stratifiserte resultater
DRI
Lav negativ med GC/MS(mindre enn
–50 %)
Nær grenseverdi negativ med
GC/MS(mellom –50 %
og grenseverdi)
Nær grenseverdi positiv med
GC/MS(mellom
grenseverdi og +50 %)
Høy positiv med GC/
MS(større enn
+50 %)
Prosentvis samsvar med GC/
MS
500 ng/ml grense
Positiv 34 24 14 49 100,0%
Negativ 16 1 0 0 22,7%
1000 ng grense
Positiv 40 15 19 20 97,5%
Negativ 35 8 1 0 43,9%
Kvalitativ500 ng/ml
GC/MS1000 ng/ml
GC/MS
DRI
+ –
DRI
+ –
+ 63 58 + 39 55
– 0 17 – 1 43
Semi-kvantitativ analyse: Det totale samsvaret mellom DRI Amphetamines-analysen og GC/MS for amfetamin var 58,0 % for grenseverdien på 500 og 58,7 % for grenseverdien på 1000.
2
Semi-kvantitative resultaterEt omtrentlig anslag av stoffkonsentrasjon i prøven kan fås ved å kjøre en standardkurve med alle kalibratorer og deretter kvantitere prøver fra standardkurven. Prøveresultater over den høye kalibratoren må tynnes ut med negativ urin og testes på nytt. Med semi-kvantitering av positive resultater kan laboratorier fastslå en passende fortynning av prøven for bekreftelse ved hjelp av en bekreftelsesmetode som GC/MS. Det gir også laboratoriet mulighet til å etablere prosedyrer for kvalitetskontroll og vurdere kontrollresultater.
Begrensninger1. Et positivt resultat fra denne analysen angir bare forekomst av amfetamin eller metamfetamin,
og samsvarer ikke nødvendigvis med graden av fysiologiske og psykologiske virkninger.2. Et positivt resultat av denne analysen må bekreftes av en annen, ikke-immunologisk
metode, for eksempel GC TLC eller GC/MS.3. Testen er kun beregnet på bruk med human urin.4. Det er mulig at andre stoffer og/eller faktorer (f.eks. tekniske eller prosedyremessige) som
ikke er oppført i spesifisitetstabellen, kan påvirke testen og forårsake feilaktige resultater.
Spesifikke ytelsesegenskaperTypiske ytelsesresultatdata oppnådd på en Beckman Coulter AU680-analysator vises nedenfor.11
Fortynningsgjenvinning og -linearitetEn høy pasienturinprøve som inneholdt ca. 2000 ng/ml metamfetamin, ble fortynnet serielt med analyttfri urin i trinn på 10 % og testet 5 ganger i semi-kvantitativ modus. Alle prøvene ble gjenvunnet med mindre enn ± 10 % feil i forhold til den forventede verdien, og R-verdien var 0,9998.
PresisjonPrøver tilsatt ulike mengder d-amfetamin og d-metamfetamin ble testet i kvalitativ og semi-kvantitativ modus ved bruk av CLSI (EP05-A2)-presisjonsprotokoll.12 Prøvene ble testet med 2 replikater, to ganger per dag i 20 dager, totalt N = 80. Resultatene vises i de følgende tabellene.
Kvalitativ analyse:
Prøvekonsentrasjon, ng/ml
Antall bestemmelser
500 grenseverdi #Neg / #Pos
1000 grenseverdi #Neg / #Pos
d-amfetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1250 80 0 / 80 0 / 80
1500 80 0 / 80 0 / 80
d-metamfetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1250 80 0 / 80 0 / 80
1500 80 0 / 80 0 / 80
Semi-kvantitativ analyse:
Prøvekons.,ng/ml
Resultat-gjennom-
snitt,ng/ml
Innen-kjøring-presisjon Total presisjon 500 gren-
severdi #Neg /#Pos
1000 gren-severdi #Neg /#Pos
SD,ng/ml % CV SD,
ng/ml % CV
d-amfetamin
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1250 1317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1500 1467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
Tabell forts.
33
Tabell forts.Stratifiserte resultater
DRI
Lav negativ med GC/
MS(mindre
enn –50 %)
Nær grenseverdi negativ med
GC/MS(mellom –50 %
og grenseverdi)
Nær grenseverdi positiv med
GC/MS(mellom
grenseverdi og +50 %)
Høy positiv med GC/
MS(større enn
+50 %)
Prosentvis samsvar med GC/
MS
500 ng/ml grense
Positiv 34 24 14 49 100,0%
Negativ 16 1 0 0 22,7%
1000 ng grense
Positiv 41 15 19 20 97,5%
Negativ 34 8 1 0 42,9%
Semi-kvantitativ500 ng/ml
GC/MS1000 ng/ml
GC/MS
DRI
+ –
DRI
+ –
+ 63 58 + 39 56
– 0 17 – 1 42
Sammendrag av avvikende resultater for amfetaminNøyaktighetsprøvene ble kategorisert basert bare på GC/MS-konsentrasjonen av d-amfetamin. Tabellen nedenfor viser prøvene med d-amfetaminkonsentrasjoner under grenseverdien der det observerte DRI Amphetamines-analyseresultatet var positivt.
Grenseverdi(ng/ml)
DRI-resultat Amfetamin GC/MS (ng/ml)
MetamfetaminGC/MS (ng/ml)
500 Positiv 47 1653
500 Positiv 68 1621
500 Positiv 68 334
500 Positiv 69 1666
500 Positiv 69 1707
500 Positiv 70 444
500 Positiv 70 1513
500 Positiv 76 1679
500 Positiv 82 533
500 Positiv 83 481
500 Positiv a 100 538
500 Positiv 100 675
500 Positiv 109 1446
500 Positiv 123 661
500 Positiv 128 503
500 Positiv 128 1221
500 Positiv 141 1259
500 Positiv 148 942
500 Positiv 160 1254
500 Positiv 161 1415
500 Positiv 168 1319
500 Positiv 168 1595
500 Positiv 184 548
500 Positiv 189 1067
500 Positiv 200 1024
500 Positiv 202 393
500 Positiv 203 1230
500 Positiv 211 1421
500 Positiv 212 1241
500 Positiv 214 97
Grenseverdi(ng/ml)
DRI-resultat Amfetamin GC/MS (ng/ml)
MetamfetaminGC/MS (ng/ml)
500 Positiv 231 1782
500 Positiv 232 207
500 Positiv 140 449
500 Positiv 246 460
500 Positiv 258 1029
500 Positiv 264 1642
500 Positiv 270 479
500 Positiv 271 1338
500 Positiv 272 1080
500 Positiv 273 516
500 Positiv 298 2772
500 Positiv 300 101
500 Positiv 307 2411
500 Positiv 317 2668
500 Positiv 325 2828
500 Positiv 330 2543
500 Positiv 374 693
500 Positiv 380 709
500 Positiv 402 132
500 Positiv 407 747
500 Positiv 417 1088
500 Positiv 426 1599
500 Positiv 450 828
500 Positiv 486 860
500 Positiv 490 1287
500 Positiv 493 1005
500 Positiv 494 924
500 Positiv 498 919
1000 Positiv 47 1653
1000 Positiv 68 1621
1000 Positiv 68 334
1000 Positiv 69 1666
1000 Positiv 69 1707
1000 Positiv 70 1513
1000 Positiv 76 1679
1000 Positiv 100 538
1000 Positiv 109 1446
1000 Positiv 128 1221
1000 Positiv 141 1259
1000 Positiv 148 942
1000 Positiv 160 1254
1000 Positiv 161 1415
1000 Positiv 168 1319
1000 Positiv 168 1595
1000 Positiv 189 1067
1000 Positiv 200 1024
1000 Positiv 203 1230
1000 Positiv 211 1421
1000 Positiv 212 1241
1000 Positiv 231 1782
1000 Positiv 258 1029
4
Tabell forts.
Grenseverdi(ng/ml)
DRI-resultat Amfetamin GC/MS (ng/ml)
MetamfetaminGC/MS (ng/ml)
1000 Positiv 264 1642
1000 Positiv 271 1338
1000 Positiv 272 1080
1000 Positiv 298 2772
1000 Positiv 307 2411
1000 Positiv 317 2668
1000 Positiv 325 2828
1000 Positiv 330 2543
1000 Positiv 374 693
1000 Positiv 407 747
1000 Positiv 417 1088
1000 Positiv 426 1599
1000 Positiv 450 828
1000 Positiv 486 860
1000 Positiv 490 1287
1000 Positiv 493 1005
1000 Positiv 494 924
1000 Positiv 498 919
1000 Positiv 500 1989
1000 Positiv 513 938
1000 Positiv 522 957
1000 Positiv 541 1013
1000 Positiv 572 1050
1000 Positiv 576 1052
1000 Positiv 595 2396
1000 Positiv 656 2533
1000 Positiv 715 2415
1000 Positiv 771 1190
1000 Positiv 780 287
1000 Positiv 814 2984
1000 Positiv b 816 0
1000 Positiv 929 0
1000 Positiv 998 367
1000 Negativ 1101 0
Kvalitativ analyse: Det totale samsvaret mellom DRI Amphetamines-analysen og GC/MS for metamfetamin var 87,4 % for grenseverdien på 500 og 87,4 % for grenseverdien på 1000.
Stratifiserte resultater
DRI
Lav negativ med GC/
MS(mindre
enn –50 %)
Nær grenseverdi negativ med
GC/MS(mellom –50 %
og grenseverdi)
Nær grenseverdi positiv med
GC/MS(mellom
grenseverdi og +50 %)
Høy positiv med GC/MS(større enn
+50 %)
Prosentvis samsvar med GC/
MS
500 ng/ml grense
Positiv 3 11 11 60 100,0%
Negativ 19 7 0 0 65,0%
1000 ng/ml grense
Positiv 5 9 22 31 100,0%
Negativ 35 9 0 0 75,9%
Kvalitativ500 ng/ml
GC/MS1000 ng/ml
GC/MS
DRI
+ –
DRI
+ –
+ 71 14 + 53 14
– 0 26 – 0 44
Stratifiserte resultater
DRI
Lav negativ med GC/
MS(mindre
enn –50 %)
Nær grenseverdi negativ med
GC/MS(mellom –50 %
og grenseverdi)
Nær grenseverdi positiv med
GC/MS(mellom
grenseverdi og +50 %)
Høy positiv med GC/MS(større enn
+50 %)
Prosentvis samsvar med GC/
MS
500 ng/ml grense
Positiv 3 11 11 60 100,0%
Negativ 19 7 0 0 65,0%
1000 ng grense
Positiv 5 10 22 31 100,0%
Negativ 34 8 0 0 74,1%
Semi-kvantitativ500 ng/ml
GC/MS1000 ng/ml
GC/MS
DRI
+ –
DRI
+ –
+ 71 14 + 53 15
– 0 26 – 0 43
Sammendrag av avvikende resultater for metamfetamin:Nøyaktighetsprøvene ble kategorisert basert bare på GC/MS-konsentrasjonen av d-metamfetamin. Tabellen nedenfor viser prøvene med d-metamfetaminkonsentrasjoner under grenseverdien der det observerte DRI Amphetamines Assay-resultatet var positivt.
Grenseverdi(ng/ml)
DRI-resultat Amfetamin GC/MS (ng/ml)
Metamfetamin GC/MS (ng/ml)
500 Positiv 300 101
500 Positiv 402 132
500 Positiv 232 207
500 Positiv 780 287
500 Positiv 68 334
500 Positiv 1142 339
500 Positiv 1203 356
500 Positiv 998 367
500 Positiv 202 393
500 Positiv 70 444
500 Positiv 240 449
500 Positiv 246 460
5
Tabell forts. Tabell forts.
Grenseverdi(ng/ml)
DRI-resultat Amfetamin GC/MS (ng/ml)
Metamfetamin GC/MS (ng/ml)
500 Positiv 270 479
500 Positiv 83 481
1000 Positiv 780 287
1000 Positiv 68 334
1000 Positiv 1142 339
1000 Positiv 1203 356
1000 Positiv 998 367
1000 Positiv 100 538
1000 Positiv 374 693
1000 Positiv 407 747
1000 Positiv 450 828
1000 Positiv 486 860
1000 Positiv 498 919
1000 Positiv 494 924
1000 Positiv 513 938
1000 Positiv 148 942
1000 Positiv 522 957
a Prøven inneholdt også MDA~288 ng/ml og MDMA~2530 ng/ml.b Prøven inneholdt også PPA ~1000 ng/ml og pseudoefedrin ≥ 40 µg/ml.
SpesifisitetAnalysens spesifisitet ble vurdert ved å teste ulike strukturelt relaterte og urelaterte forbindelser for kryssreaktivitet. Den potensielt kryssreaktive forbindelsen ble tilsatt til utvalg av negativ urin ved de oppgitte konsentrasjonene og testet i kvalitativ og semi-kvantitativ modus. Prøver som testet positivt eller høyere enn grenseverdien for konsentrasjon, ble ansett for å kryssreagere med analysen, og prøver som testet negativt eller lavere enn grenseverdien for konsentrasjon, ble ansett for å ikke ha noen kryssreaktivitet av betydning.
De følgende opprinnelige forbindelsene og metabolittene ga positive resultater når de ble testet med DRI Amphetamines-analysen ved de konsentrasjonene som er oppført nedenfor.
Forbindelse 500 grenseverdi for konsentrasjon ng/ml
1000 grenseverdi for konsentrasjon ng/ml
d-amfetamin 500 1000
d-metamfetamin 500 1000
Metylendioksyamfetamin(MDA)
1400 2500
Metylendioksymetamfetamin(MDMA)
800 1300
Strukturelt urelaterte forbindelser og/eller legemidler brukt samtidig ga negative resultater ved de konsentrasjonene som er oppført nedenfor.
Forbindelse 500 grenseverdi for konsentrasjon ng/ml
1000 grenseverdi for konsentrasjon ng/ml
Acetaminofen 1 000 000 1 000 000
Acetylsalisylsyre 1 000 000 1 000 000
l-amfetamin 12 500 12 500
Bensoylekgonin 1 000 000 1 000 000
Bensfetamin 20 000 20 000
Benzylpiperazin 40 000 63 000
Bupropion 13 000 50 000
Koffein 1 000 000 1 000 000
Cetirizindihydroklorid 1 000 000 1 000 000
Klorpromazin 500 000 500 000
Kodein 1 000 000 1 000 000
Dextrometorfan 1 000 000 1 000 000
d-efedrin 1 000 000 2 000 000
l-efedrin 100 000 350 000
Forbindelse 500 grenseverdi for konsentrasjon ng/ml
Oppdateringer knyttet til pakningsvedlegg finner du på:www.thermoscientific.com/diagnostics
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0138-12-NO2017/08
Microgenics Corporation, en del av Thermo Fisher Scientific46500 Kato RoadFremont, CA 94538 USAKundestøtte og teknisk støtte for USA:1-800-232-3342
6
InterferensDe potensielle effektene av pH, endogene og eksogene stoffer på gjenvinningen av amfetaminer ved hjelp av DRI Amphetamines Assay ble vurdert ved å tilføre kjente mengder av potensielt interfererende stoffer til to prøver av urin uten stoffer som inneholder den høyeste konsentrasjonen av amfetamin og metamfetamin som konsekvent gir et negativt resultat, og den laveste konsentrasjonen av amfetamin og metamfetamin som konsekvent gir et positivt resultat, innenfor ± 25 % fra grenseverdien. Prøvene ble testet i både kvalitativ og semi-kvantitativ modus. Det ble ikke observert interferens ved tilsettelse av forbindelsene opp til konsentrasjonsnivåene som er oppført i den følgende tabellen.
Referanser1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986. 2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008:71877. 3. Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; 1992.4. Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. I: Giannini AJ, Slaby AE, eds. Drugs
of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; 1989.5. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA:
Chemical Toxicology Institute; 2000.6. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, 846. 7. Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine.
Journal of Chromatography B, (2006) 84:93.8. Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) 4.9. C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline –
Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007).10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final
Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9):11983.
11. Data på fil hos Microgenics Corporation, en del av Thermo Fisher Scientific.12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance
of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document. 2004.
DRI® Amphetamines Test Kiti İn Vitro Diyagnostik Kullanım İçin
Rx Only
10014585 (3 x 18 mL) 0017 (100 mL Kit) 0018 (500 mL Kit)
Kullanım AmacıDRI® Amphetamines Assay, insan idrarında kalitatif veya semikantitatif amfetamin tayinine yönelik tasarlanmıştır. Test aralığı, 500 ve 1000 ng/ml hassasiyet düzeyleriyle 0-2000 ng/ml’dir. Test, idrarda amfetamin tespit etmeye yönelik basit ve hızlı bir analitik tarama prosedürü sağlar.
Bu test kiti yalnızca preliminer bir analitik test sonucu verir. Onaylanmış bir analitik sonuç elde etmek amacıyla daha spesifik bir alternatif kimyasal yöntem kullanılmalıdır. Tercih edilen onay yöntemi gaz kromatografisi/kütle spektrometrisidir (GC/MS).1,2 Özellikle preliminer pozitif sonuçlar kullanılıyorsa, kötüye kullanılan maddelerin test sonuçları için klinik değerlendirme yapılmalı ve profesyonel muhakeme yapılmalıdır.
Test Özeti ve AçıklamasıAmfetaminler efedrinin sentetik türevleridir. En yaygın amfetaminler arasında d-amfetamin, d-metamfetamin ve d,l-amfetamin bulunmaktadır. Bunlar merkezi sinir sistemi üzerinde stimülan etkisi yapar. Amfetamin en sempatomimetik amindir.3,4 Amfetamin yutulduğunda karaciğerde hızla etkisiz hale gelir ya da değişmeden idrar içerisinde boşaltılır. Metamfetamin gibi diğer efedrin türevleri metabolize edilebilir ve amfetamin olarak idrar içerisinde boşaltılır.5
DRI Amphetamines test kiti kullanıma hazır sıvı reaktifler kullanan homojen bir enzim immün testidir.6 Test kiti, yapısal olarak ilgisiz reçetesiz satılan muhtelif bileşiklerle minimal düzeyde çapraz reaktiviteye girerek, idrardaki amfetamin ve/veya metamfetamini tespit edebilen spesifik antikorlar kullanır. Test, sabit bir spesifik antikor bağlanma bölgesi miktarı için glikoz-6-fosfat dehidrojenaz (G6PDH) enzimiyle işaretlenmiş bir ilaçla idrar numunesinden elde edilen ilaç arasındaki rekabete dayanır. Numuneden elde edilen serbest ilacın yokluğunda, spesifik antikor G6PDH ile işaretlenen ilaca bağlanır, böylece enzim aktivitesinde bir azalmaya neden olur. Numuneden elde edilen serbest ilacın varlığında, serbest ilaç antikor bağlanma bölgelerine yerleşir ve G6PDH ile işaretlenen ilacın substrat ile etkileşimine izin vererek enzim aktivitesiyle sonuçlanır. Bu fenomen idrardaki ilaç konsantrasyonuyla enzim aktivitesi arasında doğrudan bir ilişki meydana getirir. Enzim aktivitesi, nikotinamid adenin dinükleotidi (NAD) NADH’ye dönüştürme becerisi ölçülerek spektrofotometrik olarak 340 nm’de belirlenir.
Önlemler ve UyarılarTEHLİKE: 1. Bu test sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir. Reaktifler yutulduğu takdirde sağlığa zarar verir. 2. Bu test kitinde kullanılan reaktifler ≤ %0,09 sodyum azit içerir, bu da kurşun veya bakır tesisatla
reaksiyona girerek potansiyel patlayıcı metal azitler oluşturabilir. Bu gibi reaktifleri imha ederken, azit birikimini engellemek için her zaman bol miktarda suyla yıkayın.
3. DRI Amfetamin Testi (100 ml), ≤%0,5 İlaca özgü antikor ve ≤%0,2 bovin serum albümini (BSA) içerir. 4. Son kullanma tarihlerinden sonra reaktifleri kullanmayın.
H317 - Alerjik cilt reaksiyonuna neden olabilir.H334 - Solunması durumunda alerji veya astım semptomlarına veya nefes alma güçlüğüne neden olabilir.
Buğu veya buhar solumaktan kaçının. Kontamine olan çalışma giysisi işyerinin dışına çıkmamalıdır. Koruyucu eldivenler/koruyucu gözlük/yüz koruyucu takın. Yetersiz havalandırma olması durumunda solunum koruması takın. Cilde temas etmesi halinde: Bol sabun ve suyla yıkayın. SOLUNMUŞSA: Maruz kalan nefes almada güçlük çekiyorsa temiz havaya çıkarın ve nefes alması için rahat bir konumda tutun. Ciltte tahriş veya döküntü oluşursa: Tıbbi yardım/destek alın. Solunum semptomları yaşanıyorsa: ZEHİR MERKEZİNİ veya doktoru/hekimi arayın. Yeniden kullanmadan önce kontamine olan giysileri yıkayın. İçerikleri/kabı, yerel/bölgesel/ulusal/uluslararası yönetmeliklere uygun şekilde bertaraf edin.
ReaktiflerAntikor/Substrat Reaktifi: Koruyucu madde olarak sodyum azit içeren Tris tamponu içerisinde monoklonal anti-amfetamin antikorları, glikoz-6-fosfat (G6P) ve nikotinamid adenin dinükleotid (NAD) içerir.
Enzim Eşlenik Reaktifi: Koruyucu madde olarak sodyum azit içeren Tris tamponu içerisinde glikoz-6-fosfat dehidrojenaz (G6PDH) ile etiketlenmiş amfetaminler içerir.
Reaktif Hazırlama ve SaklamaReaktifler kullanıma hazırdır. Reaktif hazırlamaya gerek yoktur. Tüm test kiti bileşenleri 2 ila 8 °C’de saklandığında kutunun üzerindeki etikette belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir.
Gereken Ek Malzemeler (ayrı satılır):
Kit Açıklaması 1664 DRI Negatif Kalibratör, 10 mL 1388 DRI Negatif Kalibratör, 25 mL 1588 DRI Çoklu Madde Kalibratör 1, 10 mL 1589 DRI Çoklu Madde Kalibratör 1, 25 mL 1591 DRI Çoklu Madde Kalibratör 2, 10 mL 1592 DRI Çoklu Madde Kalibratör 2, 25 mL 1594 DRI Çoklu Madde Kalibratör 3, 10 mL 1595 DRI Çoklu Madde Kalibratör 3, 25 mL 1597 DRI Çoklu Madde Kalibratör 4, 10 mL 1598 DRI Çoklu Madde Kalibratör 4, 25 mL DOAT-2 MAS® DOA Total – Düzey 2, 6 x 18 mL DOAT-3 MAS® DOA Total – Düzey 3, 6 x 18 mL DOAT-4 MAS® DOA Total – Düzey 4, 6 x 18 mL DOAT-5 MAS® DOA Total – Düzey 5, 6 x 18 mL
Numune Toplama ve Çalışmaİdrar numunelerini plastik veya cam kaplarda toplayın. Toplandığı zamandan test edildiği zamana dek idrar numunesinin kimyasal bütünlüğünü korumak için özen gösterilmelidir.
Oda sıcaklığında tutulan ve laboratuvara getirildikten sonraki 7 gün7 içinde başlangıç testi yapılmayan numuneler, güvenli bir soğutma ünitesinde 2 ila 8°C sıcaklıkta birkaç hafta saklanmalıdır.8 Analiz öncesinde daha uzun süre saklanmaları veya analiz sonrasında numunelerin tutulması gerekirse idrar numuneleri -20°C’de saklanabilir.9 İdrarda amfetamin analit görülen çalışmalar, -20°C sıcaklıkta süresiz olarak stabildir.8
Zorunlu SAMHSA yönergelerine tabi olan laboratuvarlar, SAMHSA’nın “Kısa Süreli Soğuk Saklama” ve “Uzun Süreli Saklama” gerekliliklerini referans almalıdır.10
Numune bütünlüğünü korumak için köpüklemeyi endüklemeyin ve tekrarlayan dondurma ve çözme işlemlerinden kaçının. Pipetle alınmış numunelerde çok miktarda yabancı madde olmamasına çalışılmalıdır. Analizden önce çok yüksek türbiditeli numunelerin santrifüje sokulması önerilir. Dondurulan numunelerin analizden önce buzu çözdürülerek karışmaları sağlanmalıdır. İdrar numunesinin saflığının bozulması hatalı test sonucuna neden olabilir. Numune saflığının bozulduğundan şüphelenilirse test için başka bir numune alınmalı ve her iki numune de test edilmek üzere laboratuvara gönderilmelidir.
Tüm idrar numunelerinin potansiyel olarak enfeksiyöz olduğu kabul edilerek çalışılmalıdır.
Test ProsedürüSabit bir sıcaklık sağlayan, numuneleri pipetleyen, reaktifleri karıştıran ve enzimatik oranları 340 nm’de ölçen ve tepkime zamanlamasını doğru bir şekilde sağlayan analizörler bu test kitini çalıştırmak için kullanılabilir.
Testi uygulamadan önce parametreler ve/veya kullanım için ek bilgiler içeren, analizöre özel protokol sayfasına başvurun.
Kalite Kontrolü ve Kalibrasyonİyi laboratuvar uygulamaları, uygun test performansının sağlanması için kontrol numunesi kullanımını önermektedir. Kalibrasyonu doğrulamak için hassasiyet kalibratörüne yakın kontroller kullanın. Kontrol sonuçlarının, laboratuvarınızca belirlenen prosedürler ve ilkeler dahilinde olması gerekir. Sonuçların sabitlenen değerler dışında kalması durumunda test sonuçları geçersizdir. Tüm kalite kontrolü koşulları yerel, eyalet ve/veya federal yönetmeliklere ve akreditasyon koşullarına uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Her bir laboratuvar kendi kalibrasyon ve kontrol sıklığını oluşturmalıdır.
Niteliksel AnalizNumunelerin niteliksel analizi için DRI Çoklu Madde İdrar Kalibratörü 1 veya 2 kullanın. Kalibratör 1, 500 ng/mL hassasiyet için “pozitif” ile “negatif” arasında ayırım yapmak için hassasiyet referansı olarak kullanılan 500 ng/mL d-metamfetamin içerir. Kalibratör 2, 1.000 ng/mL hassasiyet için “pozitif” ile “negatif” arasında ayırım yapmak için hassasiyet referansı olarak kullanılan 1.000 ng/mL d-metamfetamin içerir.
Yarı niceliksel analizYarı niceliksel analiz için tüm kalibratörleri kullanın.
Sonuçlar ve Beklenen DeğerlerNiteliksel sonuçlarAbsorbans değişim değeri ( A), hassasiyet kalibratörü ile elde edilen değere eşit veya bu değerden büyük bir numune pozitif olarak değerlendirilir. Absorbans değişim değeri ( A), hassasiyet kalibratörü ile elde edilen değerden düşük bir numune negatif olarak değerlendirilir.
Yarı niceliksel sonuçlarNumunelerdeki ilaç konsantrasyonunun kaba bir tahmini, tüm kalibratörlerle bir ölçüm eğrisini çalıştırarak ve numuneleri ölçüm eğrisinden nicelikselleştirerek elde edilebilir. Yüksek kalibratör üzerindeki numune sonuçları negatif idrar ile seyreltilmeli ve tekrar test edilmelidir. Pozitif sonuçların yarı nicelikselleştirilmesi, laboratuvarlara örneğin uygun bir seyreltisinin onaylanmak üzere GC/MS gibi bir onay yöntemi ile tayin edilmesi olanağını verir. Ayrıca, laboratuvara kalite kontrol prosedürlerini belirlemekte ve kontrol performansını değerlendirmekte yardımcı olur.
Kısıtlamalar 1. Bu testten alınan pozitif bir sonuç, yalnızca amfetamin veya metamfetamin varlığını belirtir; ancak fizyolojik
ve psikolojik etkilerin kapsamı ile orantılı değildir.
2. Bu test kiti ile elde edilen pozitif sonuç GC, TLC veya GC/MS gibi bir diğer immünolojik olmayan yöntem ile onaylanmalıdır.
3. Test sadece insan idrarı ile kullanım için tasarlanmıştır.
4. Spesifisite tablosunda belirtilmeyen diğer maddelerin ve/veya faktörlerin (örn. teknik veya prosedür) testi etkilemesi ve hatalı sonuçlara neden olması mümkündür.
Spesifik Performans ÖzellikleriBeckman Coulter AU680 analizöründe elde edilen genel performans verileri aşağıda gösterilmiştir.11
Doğruluk160 klinik idrar örneği DRI Amphetamines test kit ile Beckman Coulter AU680 ve GC/MS ile test edilmiştir. Sonuçlar aşağıdaki tablolarda sunulmuştur.
Test kiti amfetamin ve metamfetamin analitlerini birbirinden ayrı olarak tespit etmek için kullanıldığında, bazı uyumsuz sonuçlar alınmıştır. Test kiti amfetamin ve metamfetamin analitlerinin her ikisini de %100 çapraz reaktivite ile tespit edebilme kapasitesine sahiptir. Bu nedenle bir analit için test edilen numuneler diğer analitin varlığı nedeniyle yanlış pozitif sonuçlar verebilir.Niteliksel Analiz: DRI Amphetamines test kiti ve amfetamin için GC/MS arasındaki genel konkordans 500 hassasiyet için %58,0 ve 1.000 hassasiyet için %59,4 olmuştur.
Katmanlaştırılmış Sonuçlar
DRI
Düşük Negatif
GC/MS ile(-%50 altında)
Yaklaşık Hassasiyet Negatif
GC/MS ile(-%50 ve
hassasiyet arası)
Yaklaşık Hassasiyet Pozitif
GC/MS ile(hassasiyet ve +%50 arası)
Yüksek Pozitif
GC/MS ile(+%50 üzeri)
GC/MSile
YüzdeUyumluluk
500 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 34 24 14 49 %100,0
Negatif 16 1 0 0 %22,7
1.000 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 40 15 19 20 %97,5
Negatif 35 8 1 0 %43,9
Niteliksel500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 55
- 0 17 - 1 43
Yarı Niceliksel Analiz: DRI Amphetamines test kiti ve amfetamin için GC/MS arasındaki genel konkordans 500 hassasiyet için %58,0 ve 1.000 hassasiyet için %58,7 olmuştur.
Katmanlaştırılmış Sonuçlar
DRI
Düşük Negatif
GC/MS ile(-%50
altında)
~ Hassasiyet Negatif
GC/MS ile(-%50 ve
hassasiyet arası)
~ Hassasiyet Pozitif
GC/MS ile(hassasiyet ve +%50 arası)
Yüksek Pozitif
GC/MS ile(+%50 üzeri)
GC/MSile
YüzdeUyumluluk
500 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 34 24 14 49 %100,0
Negatif 16 1 0 0 %22,7
1.000 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 41 15 19 20 %97,5
Negatif 34 8 1 0 %42,9
Yarı niceliksel500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 63 58 + 39 56
- 0 17 - 1 42
2
Seyreltme Geri Kazanımı ve LineerlikYaklaşık 2.000 ng/mL metamfetamin içeren bir yüksek hasta idrar numunesi, analit içermeyen idrar ile %10 artışlarla seri olarak seyreltilmiştir ve yarı niceliksel modda 5 tekrarla test edilmiştir. Tüm numuneler beklenen değerin ± %10’u hata ile geri kazanılmıştır ve R değeri 0,9998 olmuştur.
HassasiyetFarklı miktarlarda d-amfetamin ve d-metamfetamin eklenmiş numuneler, CLSI (EP05-A2) kesinlik protokolü kullanarak niteliksel ve yarı niceliksel modda test edilmiştir.12 Numuneler çift tekrarlar halinde, 20 gün süresince günde iki kez ve toplamda N = 80 kez test edilmiştir. Sonuçlar aşağıdaki tablolarda sunulmuştur.
Niteliksel Analiz:
Numune konsantrasyonu, ng/mL
Determinasyonsayısı
500 Hassasiyet#Neg / #Poz
1.000 Hassasiyet#Neg / #Poz
d-Amfetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
d-Metamfetamin
0 80 80 / 0 80 / 0
150 80 80 / 0 80 / 0
375 80 80 / 0 80 / 0
625 80 0 / 80 80 / 0
750 80 0 / 80 80 / 0
1.250 80 0 / 80 0 / 80
1.500 80 0 / 80 0 / 80
Yarı niceliksel Analiz:
Numune Kons.,ng/mL
SonuçOrtalama,
ng/mL
Çalışma içiHassasiyet
ToplamHassasiyet
500Hassasiyet
#Neg /#Poz
1.000Hassasiyet
#Neg /#Poz
SD,ng/mL %CV SD,
ng/mL %CV
d-Amfetamin
150 145,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / 0
375 372,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / 0
625 683,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / 80 80 / 0
750 775,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / 80 80 / 0
1.250 1.317,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / 80
1.500 1.467,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80
d-Metamfetamin
150 168,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / 0
375 392,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / 0
625 626,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / 80 80 / 0
750 770,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / 80 80 / 0
1.250 1.284,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / 80
1.500 1.515,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80
Hassasiyet KarakterizasyonuHassasiyet değerlerine yakın numuneler, negatif idrar havuzuna birbirinden ayrı olarak d-amfetamin ve d-metamfetamin eklenerek hazırlanmıştır. Numuneler niteliksel ve yarı niceliksel modların her ikisinde de 20 tekrar yapılarak test edilmiştir. Niteliksel modda tüm numuneler doğru şekilde tespit edilmiştir; negatif numuneler hassasiyet kalibratörlerinden daha az geri kazanmış, pozitif numuneler hassasiyet kalibratörlerinden daha fazla geri kazanmıştır. Yarı niceliksel modda numuneler nominal değerlerinin ± %12’si hata ile geri kazanmıştır. 20 tekrarın kesinliği niteliksel mod için %1 CV altında ve yarı niceliksel mod için %4 CV altında olmuştur.
Amfetamin Uyumsuz Sonuçların Özeti:Doğruluk numuneleri yalnız d-amfetamin GC/MS konsantrasyonu temelinde kategorize edilmiştir. Aşağıdaki tablo DRI Amphetamines test kiti sonuçlarının pozitif olduğu gözlemlenen, hassasiyet değerinin altında d-amfetamin konsantrasyonuna sahip numuneleri belirtmektedir.
Hassasiyet Değeri(ng/mL)
DRI Sonuç
AmfetaminGC/MS (ng/mL)
MetamfetaminGC/MS (ng/mL)
500 Pozitif 47 1.653
500 Pozitif 68 1.621
500 Pozitif 68 334
500 Pozitif 69 1.666
500 Pozitif 69 1.707
500 Pozitif 70 444
500 Pozitif 70 1.513
500 Pozitif 76 1.679
500 Pozitif 82 533
500 Pozitif 83 481
500 Pozitif a 100 538
500 Pozitif 100 675
500 Pozitif 109 1.446
500 Pozitif 123 661
500 Pozitif 128 503
500 Pozitif 128 1.221
500 Pozitif 141 1.259
500 Pozitif 148 942
500 Pozitif 160 1.254
500 Pozitif 161 1.415
500 Pozitif 168 1.319
500 Pozitif 168 1.595
500 Pozitif 184 548
500 Pozitif 189 1.067
500 Pozitif 200 1.024
500 Pozitif 202 393
500 Pozitif 203 1.230
500 Pozitif 211 1.421
500 Pozitif 212 1.241
500 Pozitif 214 97
500 Pozitif 231 1.782
500 Pozitif 232 207
500 Pozitif 140 449
500 Pozitif 246 460
500 Pozitif 258 1.029
500 Pozitif 264 1.642
500 Pozitif 270 479
500 Pozitif 271 1.338
500 Pozitif 272 1.080
500 Pozitif 273 516
500 Pozitif 298 2.772
500 Pozitif 300 101
500 Pozitif 307 2.411
500 Pozitif 317 2.668
500 Pozitif 325 2.828
500 Pozitif 330 2.543
500 Pozitif 374 693
500 Pozitif 380 709
Tablo devamı
Hassasiyet Değeri(ng/mL)
DRI Sonuç
AmfetaminGC/MS (ng/mL)
MetamfetaminGC/MS (ng/mL)
500 Pozitif 402 132
500 Pozitif 407 747
500 Pozitif 417 1.088
500 Pozitif 426 1.599
500 Pozitif 450 828
500 Pozitif 486 860
500 Pozitif 490 1.287
500 Pozitif 493 1.005
500 Pozitif 494 924
500 Pozitif 498 919
1.000 Pozitif 47 1.653
1.000 Pozitif 68 1.621
1.000 Pozitif 68 334
1.000 Pozitif 69 1.666
1.000 Pozitif 69 1.707
1.000 Pozitif 70 1.513
1.000 Pozitif 76 1.679
1.000 Pozitif 100 538
1.000 Pozitif 109 1.446
1.000 Pozitif 128 1.221
1.000 Pozitif 141 1.259
1.000 Pozitif 148 942
1.000 Pozitif 160 1.254
1.000 Pozitif 161 1.415
1.000 Pozitif 168 1.319
1.000 Pozitif 168 1.595
1.000 Pozitif 189 1.067
1.000 Pozitif 200 1.024
1.000 Pozitif 203 1.230
1.000 Pozitif 211 1.421
1.000 Pozitif 212 1.241
1.000 Pozitif 231 1.782
1.000 Pozitif 258 1.029
1.000 Pozitif 264 1.642
1.000 Pozitif 271 1.338
1.000 Pozitif 272 1.080
1.000 Pozitif 298 2.772
1.000 Pozitif 307 2.411
1.000 Pozitif 317 2.668
1.000 Pozitif 325 2.828
1.000 Pozitif 330 2.543
1.000 Pozitif 374 693
1.000 Pozitif 407 747
1.000 Pozitif 417 1.088
1.000 Pozitif 426 1.599
1.000 Pozitif 450 828
1.000 Pozitif 486 860
1.000 Pozitif 490 1.287
1.000 Pozitif 493 1.005
3
Tablo devamı
Hassasiyet Değeri(ng/mL)
DRI Sonuç
AmfetaminGC/MS (ng/mL)
MetamfetaminGC/MS (ng/mL)
1.000 Pozitif 494 924
1.000 Pozitif 498 919
1.000 Pozitif 500 1.989
1.000 Pozitif 513 938
1.000 Pozitif 522 957
1.000 Pozitif 541 1.013
1.000 Pozitif 572 1.050
1.000 Pozitif 576 1.052
1.000 Pozitif 595 2.396
1.000 Pozitif 656 2.533
1.000 Pozitif 715 2.415
1.000 Pozitif 771 1.190
1.000 Pozitif 780 287
1.000 Pozitif 814 2.984
1.000 Pozitif b 816 0
1.000 Pozitif 929 0
1.000 Pozitif 998 367
1.000 Negatif 1.101 0
Niteliksel Analiz: DRI Amphetamines test kiti ve metamfetamin için GC/MS arasındaki genel konkordans 500 hassasiyet için %87,4 ve 1000 hassasiyet için %87,4 olmuştur.
Katmanlaştırılmış Sonuçlar
DRI
Düşük Negatif
GC/MS ile(-%50
altında)
~ Hassasiyet Negatif
GC/MS ile(-%50 ve
hassasiyet arası)
~ Hassasiyet Pozitif
GC/MS ile(hassasiyet ve +%50 arası)
Yüksek PozitifGC/MS ile
(+%50 üzeri)
GC/MSile
YüzdeUyumluluk
500 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 3 11 11 60 %100,0
Negatif 19 7 0 0 %65,0
1.000 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 5 9 22 31 %100,0
Negatif 35 9 0 0 %75,9
Niteliksel500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 14
- 0 26 - 0 44
Katmanlaştırılmış Sonuçlar
DRI
Düşük Negatif
GC/MS ile(-%50
altında)
~ Hassasiyet Negatif
GC/MS ile(-%50 ve
Hassasiyet arası)
~ Hassasiyet Pozitif
GC/MS ile(hassasiyet ve +%50 arası)
Yüksek PozitifGC/MS ile
(+%50 üzeri)
GC/MSile
YüzdeUyumluluk
500 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 3 11 11 60 %100,0
Negatif 19 7 0 0 %65,0
1.000 ng/mL Hassasiyet
Pozitif 5 10 22 31 %100,0
Negatif 34 8 0 0 %74.1
Yarı niceliksel500 ng/mL
GC/MS1.000 ng/mL
GC/MS
DRI
+ -
DRI
+ -
+ 71 14 + 53 15
- 0 26 - 0 43
Metamfetamin Uyumsuz Sonuçların Özeti:Doğruluk numuneleri yalnız d-metamfetamin GC/MS konsantrasyonu temelinde kategorize edilmiştir. Aşağıdaki tablo DRI Amphetamines test kiti sonuçlarının pozitif olduğu gözlemlenen hassasiyet değerinin altında d-metamfetamin konsantrasyonuna sahip numuneleri belirtmektedir.
Hassasiyet Değeri(ng/mL)
DRI Sonuç
AmfetaminGC/MS (ng/mL)
MetamfetaminGC/MS (ng/mL)
500 Pozitif 300 101
500 Pozitif 402 132
500 Pozitif 232 207
500 Pozitif 780 287
500 Pozitif 68 334
500 Pozitif 1.142 339
500 Pozitif 1.203 356
500 Pozitif 998 367
500 Pozitif 202 393
500 Pozitif 70 444
500 Pozitif 240 449
500 Pozitif 246 460
500 Pozitif 270 479
500 Pozitif 83 481
1.000 Pozitif 780 287
1.000 Pozitif 68 334
1.000 Pozitif 1.142 339
1.000 Pozitif 1.203 356
1.000 Pozitif 998 367
1.000 Pozitif 100 538
1.000 Pozitif 374 693
1.000 Pozitif 407 747
1.000 Pozitif 450 828
1.000 Pozitif 486 860
1.000 Pozitif 498 919
1.000 Pozitif 494 924
1.000 Pozitif 513 938
1.000 Pozitif 148 942
1.000 Pozitif 522 957
a Numune ayrıca MDA~288 ng/mL ve MDMA~2.530 ng/mL içeriyordu.b Numune ayrıca PPA ~1.000 ng/mL ve Psödoefedrin ≥ 40 µg/mL içeriyordu.
SpesifisiteTest kitinin spesifisitesi, yapısal olarak ilişkili ve ilişkisiz farklı bileşiklerle çapraz reaktivite için değerlendirilmiştir. Potansiyel çapraz reaktant bileşik negatif, listelenen konsanstrasyonlarda idrar havuzuna eklenerek niteliksel ve yarı niceliksel modda test edilmiştir. Test sonucu pozitif veya hassasiyet konsantrasyonundan daha büyük olan numunelerin test kiti ile çapraz reaksiyon gösterdiği, test sonucu negatif veya hassasiyet konsanstrasyonundan daha az olan numunelerin önemli bir çapraz reaktivite göstermediği kabul edilmiştir.
4
Aşağıdaki ana bileşik ve metabolitler, DRI Amphetamines test kiti ile test edildiklerinde aşağıda listelenen konsantrasyonlarda pozitif sonuç üretmiştir.
Bileşik 500 Hassasiyet Konsantrasyon, ng/mL
1.000 HassasiyetKonsantrasyon, ng/mL
d-Amfetamin 500 1.000
d-Metamfetamin 500 1.000
Metilendioksiamfetamin(MDA)
1.400 2.500
Metilendioksimetamfetamin(MDMA)
800 1.300
Yapısal olarak ilgisiz bileşikler ve/veya eş zamanlı olarak kullanılan maddeler, aşağıda listelenen konsantrasyonlarda negatif sonuç vermiştir.
Bileşik 500 Hassasiyet Konsantrasyon, ng/mL
1.000 HassasiyetKonsantrasyon, ng/mL
Asetaminofen 1.000.000 1.000.000
Asetilsalisilik Asit 1.000.000 1.000.000
l-Amfetamin 12.500 12.500
Benzoilekgonin 1.000.000 1.000.000
Benzfetamin 20.000 20.000
Benzilpiperazin 40.000 63.000
Bupropion 13.000 50.000
Kafein 1.000.000 1.000.000
Setirizin Dihidroklorür 1.000.000 1.000.000
Klorpromazin 500.000 500.000
Kodein 1.000.000 1.000.000
Dekstrometorfan 1.000.000 1.000.000
d-Efedrin 1.000.000 2.000.000
l-Efedrin 100.000 350.000
d,l-Efedrin 200.000 700.000
Fenfluramin 1.200 4.000
İsomethepten 6.000 20.000
İsoxsuprin 100.000 100.000
Meperidin 1.000.000 1.000.000
Mefentermin 15.000 25.000
Metadon 1.000.000 1.000.000
l-Metamfetamin 3.500 10.000
Metaprilen 100.000 500.000
Metilfenidat 150.000 500.000
Metronidazol 1.000.000 1.000.000
Morfin 1.000.000 1.000.000
Nor-psödoefedrin 600.000 1.000.000
Oksazepam 500.000 500.000
Fensiklidin 1.000.000 1.000.000
Fendimetrazin 40.000 200.000
Fenetilamin 30.000 100.000
Fenmetrazin 1.500 4.000
Fenobarbital 1.000.000 1.000.000
Fenotiazin 10.000 10.000
Fentermin 17.500 25.000
Fenilefrin 300.000 500.000
Fenilpropanolamin 200.000 250.000
Prokainamit 13.000 20.000
Prometazin 500.000 500.000
Tablo devamı
Bileşik 500 Hassasiyet Konsantrasyon, ng/mL
1.000 HassasiyetKonsantrasyon, ng/mL
Propranolol 200.000 200.000
d-Psödoefedrin 75.000 250.000
l-Psödoefedrin 150.000 250.000
Ranitidin 250.000 600.000
Skopolamin 35.000 100.000
Sekobarbital 1.000.000 1.000.000
Tiyoridazin 1.000.000 1.000.000
Trifluoperazin 1.000.000 1.000.000
Triflupromazin 1.000.000 1.000.000
Tiramin 300.000 500.000
3-OH-Tiramin 500.000 500.000
GirişimDRI Amphetamines test kitini kullanan amfetaminlerin geri kazanımı üzerinde pH, endojen ve ekzojen maddelerin potansiyel etkisi değerlendirilmiştir; bu değerlendirme için bilinen miktarlarda potansiyel olarak girişim yapan maddeler, kararlı şekilde negatif sonuç veren en yüksek amfetamin ve metamfetamin konsantrasyonu içeren ve kararlı şekilde pozitif sonuç veren en düşük amfetamin ve metamfetamin konsantrasyonu içeren (hassasiyet değerinin ± %25’i arasında), maddeden arınmış iki idrar havuzuna eklenmiştir. Numuneler, test kitinde niteliksel ve yarı niceliksel olarak test edilmiştir. Aşağıdaki tabloda listelenen bileşiklerin listede gösterilen konsantrasyonlara kadar eklenmesi ile hiçbir girişim gözlenmemiştir.
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