ColiformesColiformes, , ColiformesColiformes
Fecales Fecales and and E. coliE. coli
LaboratorioLaboratorio de de MicrobiologiaMicrobiologia
de de AlimentosAlimentosDraDra. Esther Z. Vega. Esther Z. Vega
ColiformesColiformes
Aeróbicos Aeróbicos y y facultativos anaerfacultativos anaeróóbicosbicos
Gram Gram negativonegativo
No No formadores formadores de de esporasesporas
Forma de Forma de bacilobacilo
Fermentan lactosaFermentan lactosa, con , con produccproduccióión n dede
áácido cido y gas y gas dentro dentro de 48 hr a 35de 48 hr a 35ooCC
Coliformes- ImportanciaColiformes- Importancia
Organismo indicador Organismo indicador (no (no necesariamentenecesariamente
un un patpatóógenogeno))
–– Coliformes fecalesColiformes fecales
Potencial Potencial contaminate en carnecontaminate en carne
–– PatPatóógeno potencialgeno potencial
EnterobacterEnterobacter en en ffóórmularmula de de infantesinfantes
Coliformes Coliformes no no fecales fecales –– aguaagua, , suelosuelo,,
ambienteambiente
Medio selectivo Medio selectivo y y diferencialdiferencial
SelectivoSelectivo
–– Se Se añade añade un un ingrediente ingrediente al al medio para hacerlomedio para hacerlo
selectivo para ciertos tipos selectivo para ciertos tipos de de organismos organismos o o para para unun
grupo grupo de de microorganismosmicroorganismos
DiferencialDiferencial
–– Se le Se le aañañade algo para diferenciar entre organismosde algo para diferenciar entre organismos
diferentesdiferentes
i.e. i.e. cambio cambio en coloren color
Métodos para DetectarMétodos para Detectar
ColiformesColiformes
MPNMPN
–– Basado Basado en en probabilidad estadprobabilidad estadíísticastica
–– NO NO es contaje directoes contaje directo
–– Técnica líquidaTécnica líquida
SólidoSólido
–– Contaje directo Contaje directo en en mediomedio
ColiformesColiformes
MPN - MPN - ContinuaciónContinuación
El El objetivoobjetivo eses ““diluirdiluir el el organismoorganismo
SeleccioneSeleccione la la muestramuestra másmás diluídadiluída con con
todostodos loslos tubostubos positivospositivos y y loslos próximospróximos
dosdos
–– 3,2,1 3,2,1 –– NuestraNuestra combinacióncombinación
Determine el MPN Determine el MPN utilizandoutilizando la la tablatabla de de
MPNMPN
ColiformesColiformes
MPNMPN
Puede tambPuede tambííen utilizarse en utilizarse 5 5 tubos paratubos para
MPN MPN –– Aumenta Aumenta la la exactitudexactitud
EXACTITUD EXACTITUD –– Cuan cercano Cuan cercano a a los valoreslos valores
realesreales
PRECISION PRECISION –– Cuan cercano Cuan cercano son son loslos
números uno números uno al al otrootro
Asegúrate Asegúrate de de usar usar la la tabla apropiadatabla apropiada
Se Se asume asume en MPNen MPN
Distribución Distribución al al azar azar de la bacteriade la bacteria
Los Los organismos organismos no se no se aglutinanaglutinan
Si Si hay un hay un microorganismo presentemicroorganismo presente,,
crecercreceráá
Existen las condiciones apropiadas paraExisten las condiciones apropiadas para
crecercrecer
Ventajas sobre Ventajas sobre el el uso uso dede
placasplacas
El El tamaño tamaño de la de la muestra puede muestra puede ser mayorser mayor
Mejor para números bajos Mejor para números bajos de de organismosorganismos
El El medio líquido es más medio líquido es más suave suave para para elelorganismo porque organismo porque no se no se expone expone al al calorcalor
Requiere preparación Requiere preparación de de medio medio conconantelaciónantelación
Medio Medio - LST- LST
LaurylLauryl Sulfate Sulfate TryptoseTryptose Broth Broth
PruebaPrueba PRESUMPTIVA PRESUMPTIVA parapara coliformescoliformes
–– Se Se informainforma comocomo ““presumptive presumptive coliforms/gcoliforms/g””
IngredientesIngredientes
–– LaurylLauryl Sulfate Sulfate –– AlgunasAlgunas bacteriasbacterias no no puedenpuedencrecercrecer - - SelectivoSelectivo
–– LactosaLactosa –– ProducciónProducción de gas de gas –– DiferencialDiferencialw/durhamw/durham tubotubo
–– NaClNaCl –– AumentaAumenta razónrazón de de reproducciónreproducción
–– TryptonaTryptona –– FuenteFuente de de NitrógenoNitrógeno
IncubeIncube a 35 C a 35 C porpor 48 48 horashoras
Medio Medio - BGLB- BGLB
Brilliant Green Lactose BileBrilliant Green Lactose Bile
IncubeIncube a 35 C a 35 C porpor 48 48 horashoras
ProducciónProducción de gas de gas –– PositivoPositivo
IngredientesIngredientes
–– OxgallOxgall –– forma de forma de bilisbilis
–– Brilliant Green Dye Brilliant Green Dye –– InhibeInhibe Gram + Gram +
ResultadosResultados son son coliformescoliformes confirmadosconfirmados
No utilize BGLB No utilize BGLB directamentedirectamente –– AltamenteAltamenteinhibitorioinhibitorio
Medio Medio –– EMB Agar EMB Agar
Eosine Methylene Eosine Methylene Bile AgarBile Agar
Placas ya servidasPlacas ya servidas
Estriado para aislar Estriado para aislar del MPNdel MPN
Ingredientes Ingredientes - - DiferencialDiferencial
–– Peptona Peptona –– ProteProteíínana
–– Lactosa Lactosa –– ProducciProduccióón n de de áácidocido
–– Tinte Eosine Tinte Eosine –– InhibitorioInhibitorio
–– Azul Azul de de metileno metileno –– Indicador Indicador de pHde pH
E. coliE. coli and and EnterobacerEnterobacer
–– Nucleated, dark centered, with or without aNucleated, dark centered, with or without ametallic green sheen metallic green sheen –– CONFIRMED CONFIRMEDCOLIFORMSCOLIFORMS
ColiformsColiforms
ColiformsColiforms
Método SólidoMétodo Sólido
VRBAVRBA
–– Violet Red Bile AgarViolet Red Bile Agar
Peptona Peptona –– Fuente Fuente de de nitrnitrógenoógeno
Lactosa Lactosa –– ProducciProducción ón de de ácidoácido
Rojo Rojo Neutral Neutral –– Indicador Indicador (6.8 (6.8 rojorojo, 8.0 , 8.0 amarilloamarillo))
Crystal Crystal Violeta Violeta –– Inhibe Inhibe Gram +Gram +
NaCl NaCl –– Aumenta razAumenta razón ón de de crecimientocrecimiento
Sales Sales biliaresbiliares
VRBAVRBA
Típica Típica –– Rojo-púrpuraRojo-púrpura, , Colonias ElípticasColonias Elípticas,,puede puede ser ser una zona una zona de de precipitaciónprecipitación
Se Se recomiendan placas recomiendan placas con 10-100con 10-100coloniascolonias–– Colonias más grandes Colonias más grandes
Ponga una capa Ponga una capa de agar de agar luego que luego que lalaprimera solidifiqueprimera solidifique
Resultados Resultados –– Presumptive Presumptive ColiformesColiformes
ColiformesColiformes
