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新しい蛍光色素、Spark Blue™ 550とSpark NIR™ 685スペクトル・アンミキシング型フローサイトメーターに

CD4 Spark Blue™ 550

CD8a

Pac

i�c

Blue

™

105

1051041030

104

103

0

CD4 Alexa Fluor® 532

CD8a

Pac

i�c

Blue

™

105

104

103

0

22以上のパラメータを統合可能なスペクトル型サイトメーターが利用できるようになったことで、特異的なスペクトルを有する蛍光色素に対する需要が増えつつあります。BioLegendは、このような研究者のニーズを満たすため、スペクトル型サイトメーター用の新しい蛍光色素、Spark BlueTM 550とSpark NIRTM 685を開発しました。

Spark蛍光色素について: biolegend.com/spark

Spark Blue™ 550Spark BlueTM 550は、CytekTM AuroraやNorthern Lights等のスペクトル・アンミキシング型サイトメーター用マルチカラーパネルに簡単に追加できます。この蛍光色素は488 nmの青色レーザーで励起され、550 nmの蛍光を発します。これは、Alexa Fluor® 488やFITCとPE (R-Phycoerythrin)の最大蛍光波長間の波長に該当します。405 nmの紫色レーザーにより励起され発する蛍光が、蛍光色素のアンミキシングをより正確なものとします。

1051041030

ヒト末梢血リンパ球をanti-CD8 Pacific BlueTMとanti-CD4 (clone SK3) Spark BlueTM 550 （左）またはanti-CD4 (clone SK3) Alexa Fluor® 532（右）で染色しました。

Spark BlueTM 550はFITCやPEと同時に使用可能

CD19 Spark Blue™ 550

CD4

BV57

0™

CD38

PE

106

105104103-102

105

104

103

CD19 Spark Blue™ 550

CD40

FIT

C

-103

105104103102

CD19 Spark Blue™ 550

105104103-102

106

105

104

103

-102

106

105

104

103

-103

ヒト全血をanti-CD19 Spark BlueTM

550、anti-CD4 BV570TM、anti-CD38 PEおよびanti-CD40 FITCで染色しました。補正ビーズと細胞を用いてCytekTM Auroraサイトメーター上でアンミキシングを行いました。全てのプロットはリンパ球にゲートを設定した結果を示しています。

同時検出を検証済みの蛍光色素（3レーザー搭載Auroraによる）Violet 405 nm Blue 488 nm Red 633 nm

Brilliant Violet 421™ FITC or Alexa Fluor® 488 APCPacific Blue™ Spark Blue™ 550 Alexa Fluor® 647Brilliant Violet 510™ PE Spark NIR™ 685Brilliant Violet 570™ PE/Dazzle™ 594 Alexa Fluor® 700

Brilliant Violet 605™ PE/Cyanine5APC/Cyanine7 or APC/Fire™ 750

Brilliant Violet 650™ PerCP/Cyanine5.5Brilliant Violet 711™ PE/Cyanine 7Brilliant Violet 750™Brilliant Violet 785™

Spark BlueTM 550の蛍光スペクトルはFITCやPEのそれとは十分に異なっています。そのため、検出したい複数の抗原が共発現しているかどうかに関わらず、FITCやPE標識抗体と同時に使用できます。

Auroraスペクトル型アナライザーについて : biolegend.com/en-us/aurora-spectra-analyzer

Alexa Fluor® 488 PE Spark Blue™ 550

106 106

Spark BlueTM 550はAlexa Fluor® 532と同等以上の明るさ

新しい蛍光色素、Spark BlueTM 550とSpark NIRTM 685

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Spark NIR™ 685 これまで、633 nm赤色レーザーを用いる蛍光色素は2色から3色に限られていました。それは、近赤外 (NIR) 領域における蛍光スペクトルの幅が広いことと、800 nmを超える蛍光波長に対する光電子増倍管 (PMTs) の感度が低いためです。スペクトル・アンミキシング型サイトメーターを用いると、APCとAlexa Fluor® 700の蛍光スペクトルのピーク間の隙間をSpark NIRTM 685のような新しい蛍光色素の検出に使用できます。

Spark NIRTM 685は633 nm赤色レーザーで励起され、最大蛍光波長685 nmの蛍光を発するため、Alexa Fluor® 660と同等の蛍光色素として使用可能です。蛍光波長がかなり重複しているような組み合わせの蛍光色素を使う場合（下記パネルAとパネルBを参照）、それらの蛍光の互いへの漏れ込みを考慮する必要があります。また、抗原の発現に合う蛍光輝度を有する蛍光色素の組み合わせを考慮してパネルを作成することが必要です。

Spark NIRTM 685は赤色レーザーを用いる他の蛍光色素と併用可能ヒト全血をパネルAまたはパネルBの組み合わせを用いて染色しました。どちらも同一提供者からの血液です。パネルAでは、anti-CD4 Spark NIRTM 685、anti-CD19 Alexa Fluor® 700、anti-CD8 APC/FireTM 750、anti-CD3 PEおよびanti-CD56 APCを用いて染色しました。パネルBは参照として、事前に最適化された組み合わせの蛍光色素を用いた結果を示しています。パネルBでは、anti-CD4 FITC、anti-CD19 Alexa Fluor® 700、anti-CD8 Pacific BlueTM、anti-CD3 PEおよびanti-CD56 PE/Cy7で染色しました。解析の前に細胞を洗浄し、FluorofixTMで固定しました。

A.

B.

CD8 Pacific Blue™

CD4

FITC

106

105

104

-102

105104-103

103

106

41.1% 0.78%

25.9% 32.3%

CD56 PE/Cy7

CD4

FITC

106

106104

105

104

103

-102

-102

41.4% 0.36%

38.5% 19.8%105

CD4

FITC

106

105

104

102

-102

103

CD19 Alexa Fluor® 700106104-103 0

41.7% 0.15%

50.2% 7.9%105

CD56 APC

CD4

Spar

k N

IR™

685

106

105

104

-103

106104-103 105

42.3% 0.33%

39.2% 18.2%106104-103

106

105

104

-103

CD19 Alexa Fluor® 700

CD4

Spar

k N

IR™

685

105

42.3% 0.03%

49.2% 8.0%

CD8 APC/Fire™ 750

CD4

Spar

k N

IR™

685

106

105

104

-103

105104-103 106

41.9% 0.79%

24.3% 33.0%

マルチカラーパネル作成をサポートしますフローサイトメトリーのマルチカラーパネルで使用する蛍光色素数が増えるにつれて、パネル作成はより複雑になっています。BioLegendでは、パネル作成をお手伝いします。パネル作成のアドバイスが必要な場合は、テクニカルサービス tech@biolegend.com へメール（英語）でお問い合わせください。

最良の結果を得るために、パネルを設計する際にはマルチカラー染色ガイドラインに従ってください。

テクニカルサービスへのお問い合わせはこちら（英語）: tech@biolegend.comマルチカラーパネルをご自身で作成する場合はこちら: biolegend.com/panelselector

Brilliant Violet™ is a trademark of Sirigen Group Ltd. Alexa Fluor® and Pacific Blue™ are registered trademarks of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Cytek™ is a trademark of Cytek Biosciences.

Alexa Fluor® 647 Alexa Fluor® 700 APC Spark NIR™ 685

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