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ENTEROBACTERIAS

P.Q.C. MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

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• Las Enterobacteriaceae habitan en:

– Distribuidas en suelo, – agua,– alimentos.– Flora normal del intestino de humanos y

animales.

Características Generales:

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• MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES– Bacilos o cocobacilos cortos gram

negativos, – no esporulados, – mótiles (flagelos perítricos) o no, – capsulados o no, – pilis.

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• BIOQUÍMICAS– Anaerobios facultativos, – catalasa positiva, (excepto Shigella

dysenteriae Tipo 1)– oxidasa negativa, – fermentan la glucosa, – reducen nitratos a nitritos.

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Reacción de catalasa

• Esta prueba detecta la presencia de citocromooxidasas

• La prueba se hace con peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3% sobre un portaobjetos. La producción inmediata y abundante de burbujas indica la conversión del H202 en agua y oxígeno gaseoso.

• La prueba de la catalasa debe realizarse a

partir de un medio que no contenga sangre porque los eritrocitos pueden producir una reacción de catalasa débil.

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Prueba de la catalasa

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Reacción de citocromo oxidasa• Los citocromo son

hemoproteinas que contienen hierro y actuan como último eslabón de la cadena de la respiración aerobia ; transfireren electrones de Hidrógeno al Oxígeno, con la formación de agua.

• El sistema citocromo se encuentra presente en microorganismos aerobios, microaerofílicos y en algunos anaerobios facultativos, pero nunca en anaerobios estrictos.

Dimetil-p-fenilendiamina al 1%

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• Los modos de transmisión a los seres humanos son:

– Infecciones Nosocomiales • ( E. coli)

– Ingesta de alimentos o agua.• Salmonella, • Shigella,• Yersinia enterocolitica.

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Enterobacteriaceae

Patógenos oportunistas

.

Patógenos evidentes.

Citrobacter.

Enterobacter.

Klebsiella.

Proteus.

Serratia

•Salmonella tiphy – (fiebre tifoidea.)

•Shigella – (Disentería).

•Y. Pestis (peste negro).

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MEDIOS DE CULTIVO

1. Medios no selectivos: agar sangre

2. Medios selectivos-diferenciales: agar McConkey, agar EMB, SS agar, agar XLD.

McConkey: colonias rosadas (fermentan lactosa) y colonias transparentes

(no fermentan lactosa).

Agar EMB: colonias azules (fermentan lactosa) y colonias transparentes (no fermentan lactosa).

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Mac Conkey

• Gram positivas ven inhibido - sales biliares y cristal violeta.

• Fermenten la lactosa liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará gracias al rojo neutro.

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Aspectos de las colonias.

• En agar sangre y agar chocolate las colonias son:– Grandes.– Gris.– Lisas.

• Klebsiella o Enterobacter.– Mucoides – (polisacáridos).

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• E. Coli – ( Beta hemolítica).

P. mirabilis.

• Motilidad. P. penneri.

P. Vulgaris.

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

1. Pruebas bioquímicas

2. Pruebas serológicas

3. Pruebas de biología molecular

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• Estudia el metabolismo de la bacteria

• Estudio basado en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano

• Se detecta a través de medios de cultivo especiales

Pruebas bioquímicas

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Los medios de cultivo generalmente están formados por:

• El sustrato sobre los cuales actúan las enzimas

• Un indicador que puede detectar la disminución del sustrato o la presencia de un producto metabólico especifico

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La medición de las diferentes características metabólicas de un microorganismo permiten identificar la especie

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Metabolismo fermentativo

• Mide la capacidad del microorganismo para utilizar los hidratos de carbono

• Microorganismo actúa sobre los carbohidratos y acidifica el medio

• El indicador presente vira

Pruebas bioquímicas

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICAS

Prueba TSI (triple azúcar hierro)

Contiene lactosa 10 g, sacarosa 10 g y glucosa 1 g.

Resultados: Superficie inclinada/fondo: - ácida/ácida: Bacterias fermentadoras de lactosa: E. coli, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, etc

- alcalina/ácida: Bacterias no fermentadoras de lactosa. Salmonella (H2S+), Shigella (H2S -), Yersinia.

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TSI

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TSI

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CITRATO DE SIMMONS

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• Mide la capacidad de un organismo para utilizar el citrato como única fuente de carbono

• Citrato compuesto orgánico constituye uno de los metabolitos del ciclo de Klebs

• Las bacterias al utilizar citrato extraen nitrógeno de la sal de amonio con producción de amoniaco que hace vire el indicador

CITRATO DE SIMMONS

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• Para esta prueba se utiliza el agar de citrato de Simmons que contiene citrato de sodio y azul de timol como indicador.

• La única fuente de carbono en este medio es el citrato.

• Si la reacción es positiva el indicador vira a azul.

• En la reacción negativa los microorganismos no crecen y el medio conserva su color verde

CITRATO DE SIMMONS

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• El medio también contiene sales de amonio que la bacteria usa como fuentes de nitrógeno

• Fosfato de amonio amoniaco alcalinización del medio

CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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Los medios contienen:

•Peptona•Extracto de carne•Glucosa•Aminoácido •Purpura de bromocresol

MEDIO DE LIA

Descarboxilasas de aminoácidos(arginina, lisina, ornitina

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• Los aminóacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en aminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol) vira a violeta

R – CH - NH2 - COOH R- CH2 - NH2 + CO2 Aminoácido Amina Dióxido de carbono

pH alcalino

Descarboxilasas de aminoácidoslisina, ornitina

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Ejemplo:

Aminoácido amina + dióxido de carbono

Lisina lisina descarboxilasa cadaverina

L- Ornitina Ornitina descarboxilasa Putrescina + CO2

Descarboxilaciòn lisina (LIA y MIO)

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Descarboxilaciòn lisina (LIA)

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Descarboxilaciòn lisina (LIA)

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Prueba que se utiliza para investigar:

Motilidad (M)

Producción de Indol (I)

Descarboxilación Ornitina.

INDOL

MEDIO DE MIO

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INDOL

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Indol

• El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano.

• Las bacterias que poseen la triptofanasa .

• La prueba de indol está basada cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído.

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Medio de MIO

(p-dimetilaminobenzaldehído)

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INDOL

Prueba positiva

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INDOL

Prueba negativa

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E. coli

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Escherichia coli.

• Mac Conkey.– Colonias Planas.– Colonias secas.– Colonias Rosadas.

(LF)

• INDOL (+)

TSI LIA

K/A k/A Ó A/A

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Escherichia coliClasificación de las cepas productoras de

diarrea1. E. coli enterotoxigénica2. E. coli enteropatógena3. E. coli enterohemorrágica4. E. coli enteroinvasiva5. E. coli enteroagregante

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E. coli

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Klebsiella pneumoniae

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Klebsiella.

• Mac Conkey– LF.– Mucoides. (polisacáridos).

• Indicaciones de laboratorio:– Lysine +– Citrato + – Indol – – +/+ TSI (con gas) – No-motile– Ornithine –

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Klebsiella pneumoniaeCápsula

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Klebsiella pneumoniae

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Proteus

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Proteus.

• Género que contiene varias especies, de las cuales dos tienen importancia médica: – P. mirabais. INDOL (-)– P. vulgaris. INDOL (+)

• Mac Conkey.– NFL.– Swarning.– Olor a podrido.

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Enterobacter

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Enterobacter.

• Mac Conkey.– LF.– Pueden ser Mucoides.MIO:*MOVILIDAD (+)*INDOL: (+) E. agglomeras.*INDOL: (-) E. aerogenas (LIA +), E. cloacae (LIA-).

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Enterobacter

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Shigella

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Shigella

S. dysenteriae

S. flexneri

S. sonnei

S. boydii

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Shigella• Mac Conkey:

– NLF.

• TSI: alcalina/ácida, H2S negativo.

• LIA: K/A o A/A.

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Crecimiento de Shigella en medio MacConkey

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Salmonella

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SalmonellaClasificación

• S. enteritidis• S. typhimurium• S. typhi• S. paratyphi A• S. paratyphi B (Salmonella schottmuelleri)• S. typhi C (Salmonella hirschfeldii)

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Salmonella enteritidis

• Mac Conkey: NFL.• TSI: alcalina/ácida y H2S +

S. typhimurium.• INDOL (-)

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SALMONELLA SSA

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Salmonella XLD

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Bibliografía:

• MANUAL DE TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. M. V. Álvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA. 1990.

• DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO CLÍNICOS POR EL LABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-Sanford-Davidsohn. Tomo I y II. 8ª Edición. Salvat Editores. 1988.

• DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. TEXTO Y ATLAS COLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. Editorial Médica Panamericana. 2ª Reimpresión. 1990.