IVY ALEXANDRA CASTILLO BORRERO

LINA SOFIA POVEDA SANCHEZ

LEIDY MORENO TORRES

HEIDY CABALLERO

U N I V E R S I D A D C O O P E R A T I V A . V I L L A V I C E N C I O

F A C U L T A D D E M E D I C I N A

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EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS Y PROCEDIMIENTOS.

LABORATORIO ENZIMAS MITOCONDRIALES

MATERIALES.

PRACTICA DE ENZIMAS MITOCONDRIALES.

PROCEDIMIENTOS.

PRACTICA DE ENZIMAS MITOCONDRIALES.

1. ESTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y COENZIMAS.Tomamos 5 gr de hígado (libre de tejido y sangre)

Se tomo de 2 a 3 gr de arena y se llevo a un mortero junto con los 5 gr de hígado, se agrego de a 3 porciones de NaCl hasta completar 15 ml.

SE MACERO MUY BIEN HASTA OBTENER UNA MASA SUAVE.

Luego se transfirió la mezcla a un Erlenmeyer que posteriormente fue llevado a un baño de hielo durante 15 min.

Luego de los 15 min pasamos la mezcla a 2 tubos de centrifuga y se puso a centrifugar a 1500 rpm por 10 min.

Se tomaron 5 tubos de ensayo, se marcaron así: (B´, B´1, B´2, B´3, B´4) y se adicionaron los siguientes componentes en cada tubo.

REACTIVO BLANCO 1 2 3 4

NaCl 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0

Succinato de sodio. 1%

0.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Azul demetileno.

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Malonato de sodio. 1%

0.0 0.0 0.0 0.0 1.0

37°C X 10 min

Extractoenzimático.

1.0 0.5 1.0 1.5 1.0

Aceite mineral.

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Antes de agregar el extracto enzimático y el aceite mineral llevamos cada mezcla al baño serológico

Luego de 10 min en el baño serológico se agrego el extracto enzimático, se agito y se agrego el aceite mineral sin sacar los tubos del baño serológico.

Se tomaron otros 4 tubos de ensayo y se les adiciono los siguientes reactivos para hacer el seguimiento de la reacción catalizada por la citocromo oxidasa.

REACTIVO BLANCO 1 2 3

NaCl 1.0 1.0 1.0 1.0

Succinato de sodio. 1%

0.0 0.0 0.0 1.0

Cianuro de potasio 0.05 M

0.0 0.0 1.0 0.0

Agua destilada. 2.0 1.0 0.0 0.0

Extracto enzimático.

1.0 1.0 1.0 1.0

p-fenilendiamina1%

0.0 1.0 1.0 1.0

Luego de adicionar los reactivos en cada tubo se llevaron al baño serológico siendo revisado cada 5 min.