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FACULTAD DE QUÍMICADEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA(CLAVE 1807)
Licenciatura de QFB
Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro
Laura Carmona SalazarRosalinda Velázquez Salgado
2017-II
ESTUDIO DEL METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y DE LÍPIDOS
DESDE EL ENFOQUE DE LA BIOQUÍMICA CLÍNICA
Glucosa Glucógeno
Glucosa 6-fosfato
Fosfoenol-piruvato
Piruvato
Hexo-cinasa
GLUCONEO-GÉNESIS
GLUCÓ-LISIS
SÍNTESISDE ÁCIDOSGRASOS
b-OXIDACIÓNVÍA DELASPENTOSASFOSFATO
OxalacetatoCICLODEKREBS
FOSFORILACIÓN
OXIDATIVA
EL METABOLISMO SE ENCUENTRA
ALTAMENTE REGULADO
INSULINA
2
TRANSDUCCIÓN
TRANSPORTE YMETABOLISMO
TRANSDUCCIÓNDE LA SEÑAL
INSULINAMETABOLISMO DE
modificando la toma de glucosa
TRANSPORTE DE GLUCOSA
INSULINAMETABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
modificando vías metabólicas
ESTADO FISIOLÓGICO: ABUNDANCIA, BUENA NUTRICIÓN
LA INSULINADISMINUYE LOSNIVELES DEGLUCOSA
Metabolizay distribuye
JPEN (2004) 28:364-371
LA DIABETES MELLITUS (Diabetes sacarina)
Es un defecto en la producción o acción de la insulina
TIPO I: DIABETES JUVENIL O DEPENDIENTE DE INSULINA10%
TIPO II: NO DEPENDIENTE DE INSULINA O RESISTENTEA INSULINA
INSULINA
RESPUESTADISMINUIR LOS
NIVELES DE GLUCOSA
TRANSDUCCIÓNDE LA SEÑAL
SEÑAL
INSULINA
RESPUESTADISMINUIR LOS
NIVELES DE GLUCOSA
TRANSDUCCIÓNDE LA SEÑAL
SEÑAL
CONSECUENCIAS DE ESTA ENFERMEDAD
LA GLUCOSA NO PUEDE SER METABOLIZADA
NIVELES ELEVADOS DE GLUCOSA EN SANGRE Y EN ORINA
LA GLUCOSA NO PUEDE SER METABOLIZADA NI CAPTADA (TRANSPORTE DEPENDIENTE DE INSULINA)
EL ORGANISMO ES ENGAÑADO Y CREE QUE ESTA
EN UN ESTADO DE INANICIÓN
Glucosa 6-fosfato
Glucógeno Glucosa
Piruvato
Cuerpos
Hígado Glucosa
Cuerposcetónicos
Cerebro
ESTADO FISIOLÓGICO EN LA DIABETES MELLITUS
Síntesis de glucosa “de nuevo”Degradación del glucógeno
DEGRADACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS Y PROTEÍNAS
ACUMULACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS(COMO CONSECUENCIA DELA INHIBICIÓN DEL CICLO DE KREBS)
b-OXIDACIÓN CONSUME EL NAD+
Cuerposcetónicos
Ácidosgrasos
Amino-ácidos
Proteína
Proteínas
MúsculoCuerposcetónicos
Tejidoadiposo
TGCÁcidosgrasos
Glicerol
Movilizaciónde
ácidosgrasos
Degradación deáminoácidos
Formación de
cuerpos cetónicos
SÍNTOMAS DE LA DIABETES MELLITUSLos niveles o respuesta baja de insulina modifica el metabolismo de glucosa y el transporte, locual provoca una acumulación de glucosa en sangre “HIPERGLUCEMIA”
De baja a moderada concentración de glucosa en sangre: Puede ser que la persona aún no presente síntomas todavía.
De moderada a alta concentración de glucosa en sangre:• El cuerpo intenta eliminar el exceso de glucosa por la orina (GLUCOSURIA),lo cual provoca que la persona sienta la necesidad de ir al bañorecurrentemente (poliuria), incluso varias veces por las noches. Esto traecomo consecuencia una intensa deshidratación junto con una fuertesensación de sed insaciable, boca seca y fatiga excesiva.sensación de sed insaciable, boca seca y fatiga excesiva.•También la deshidratación provoca que la piel se torne seca, generandocomezón, piel agrietada y mala cicatrización en las heridas. (Polidipsiaconsumo de grandes cantidades de agua)•La pérdida de peso es otro síntoma que aparece cuando la glucosa nopuede entrar a la célula, ya que por falta de insulina no se puedeaprovechar la glucosa y como un mecanismo de defensa se utilizan lasproteínas y las grasas para obtener energía. (Polifagia, deseo excesivo decomer)•La vista suele hacerse borrosa.•Las infecciones de cualquier tipo se desarrollan con mucho más facilidaddebido al exceso de glucosa en sangre, la cual alimenta a las bacterias.•Se puede presentar falta de sensibilidad en las extremidades, así comohormigueo y dolores.
DIABETES SIN TRATAMIENTO E INSULINA BAJA
PRODUCCIÓN EXCESIVA DE CUERPOS CETÓNICOS
ACIDOSIS O DISMINUCIÓN DE pH SANGUÍNEO
COMPENSACIÓN A TRAVÉS DE LA UTILIZACIÓN DEL BICARBONATOCOMPENSACIÓN A TRAVÉS DE LA UTILIZACIÓN DEL BICARBONATO
LA DISMINUCIÓN DE BICARBONATO CONDUCE A UN AUMENTO DE CO2
(AGOTAMIENTO DE BICARBONATO: ACIDOSIS METABÓLICA)
MODIFICACIÓN DE LA RESPIRACIÓN PARA COMPENSAR A TRAVÉS DE LA EXCRECIÓN DE CO2 POR LOS PULMONES
ESTADO DE COMA
GLUCOSA PLASMÁTICA EN AYUNOLos individuos normales mantienen una concentración de glucosa plasmática tras el ayuno de 10 a
16 hrs de 80-90 mg/dL GLUCOSA EN ORINA
La glucosa en orina aparece cuando el nivel de glucosa sanguínea excede el umbral renal de glucosa.En general este umbral es inferior a 160-180 mg/dL
GLUCOSA PLASMÁTICA POST-PRANDIAL DE DOS HORASSe determina la glucosa plasmática dos horas después de que el paciente realiza una ingesta de
aproximadamente 100 g de carbohidratos.Niveles arriba de 200 mg/dL indica diabetesNiveles menores de 140 o usualmente de 120 mg/dL son normales
PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSAEs una prueba definitiva para el diagnóstico de diabetes en pacientes que tienen niveles de glucosa
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Es una prueba definitiva para el diagnóstico de diabetes en pacientes que tienen niveles de glucosainferiores a 140 mg/dL.
El protocolo es tomar antes y después de una ingesta oral de glucosa. HEMOGLOBINA GLUCOSILADA
Es una modificación que sufre la hemoglobina, una glucación en un aminoácido y guarda unarelación directa con la [glucosa] sanguínea
PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
PROTOCOLO:1. El paciente tiene actividad física sin limitaciones e ingiere una dieta sin restricciones que tenga por lo menos 150 g de carbohidratos durante 3 días antes de la prueba.2. La prueba se realiza tras un ayuno de 10 a 16 hrs, sólo se permite ingerir agua.3. Se obtiene la muestra para glucosa sanguínea en ayunas4. Se le proporciona una dosis de glucosa de 75 g en agua con saborizante para administrarse por vía oral.5. La glucosa plasmática se determina cada 30 min durante 2 hrs.
LA HEMOGLOBINA GLUCOSILADA COMO UN ANÁLISIS EFICAZ PARA EL CONTROL DE LA DIABETES
Los eritrocitos no requieren de insulina para el transporte de glucosa
La hemoglobina se glucosila por medio de una reacciónno enzimática, que se denomina glucación, entre laglucosa y un residuo de valina de la cadena beta de la Hb,donde se forma una base de Schiff lábil( aldimina) quesufre un reordenamiento para formar una cetoaminaestable. La reacción continua durante los 120 días de vidaestable. La reacción continua durante los 120 días de vidadel eritrocito y es proporcional a la concentración deglucosa
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
MUESTRAS BIOLÓGICASSuero no hemolizadoPlasmaSangre entera
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
MÉTODOS
QUÍMICOS
ENZIMÁTICOS
MÉTODOS QUÍMICOSMÉTODOS QUÍMICOS
Se basan en reacciones de oxido-reducción, donde la glucosa es un excelente reductor, típicamente reduce los iones cúpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+) y dependiendo de la naturaleza para la producción de color es que hay varios métodos.El método de Somogyi-Nelson que utiliza el arsenomolibdato, el cual se reduce con el ion cuproso y forma un compuesto azul de molibdenoEl método de la o-toluidina, que es una amina aromática que con la glucosa forma una glucosamina y una base de Schiff que tras reordenamientos forma un cromógeno de color verde que se mide a 630 nm
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA
MÉTODOS ENZIMÁTICOS
REFERENCIA.- HEXOCINASA que involucra un ensayo acoplado de dos reacciones:
GLUCOSA + ATP GLUCOSA-6-FOSFATO + ADP
GLUCOSA-6-FOSFATO + NADP+ 6-FOSFOGLUCONATO + NADPH + H+
HEXOCINASA
GLUCOSA-6
FOSFATO DESHIDROGENASA
GLUCOOXIDASA que cataliza la oxidación de glucosa a glucolactona y peróxido de hidrógeno (H2O2):
b-GLUCOSA + O2 D-GLUCONO-d-LACTONA + H2O2
Es específica para la b-glucosa
H2O2 + cromógeno reducido cromógeno oxidado + H2O
Trinder: 4-aminofenazona
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA GLUCOSILADA HbA1C
LA HEMOGLOBINA GLUCOSILADA SE FORMA DE MODO NO ENZIMÁTICO DONDE ESTA IMPLICADA UNA BASE DE SCHIFF (ALDIMINA LÁBIL) QUE SE REORDENA Y SE CONVIERTE EN UNA CETOAMINA ESTABLE
Se cuantifica en función de su carga, reactividad y estructura
CARGA: Cromatografía de intercambio iónico (la Hb glucosilada se une menos a la resina)HPLCHPLCELECTROFORESIS
REACTIVIDADColorimetría: Ácido tiobarbitúrico
ESTRUCTURACromatografía de afinidad
DETERMINACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS
78%
20% 2%EN SANGRE: CETONEMIAORINA: CETONURIA
PRUEBA DE NITROPRUSIATO: Solo reacciona el acetoacetato y acetona con el nitroprusiato en condiciones alcalinas dando un color púrpura.condiciones alcalinas dando un color púrpura.
ANÁLISIS ENZIMÁTICO: Para el acetoacetato y el ácido hidroxibutírico utilizando la b-hidroxibutírica deshidrogenasa (b-HBD):
NADH + H+ + ACETOACETATO b-HIDROXIBUTIRATO + NAD+
Cuya direccionalidad depende del pH, a pH neutro se favorece a la derecha y a pH de 8.5-9.5 hacia la izquierda.
b-HBD
RANGOS DE REFERENCIA: INFERIORES A 3 mg/dL (0.3 mM)
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
COLESTEROL = COLESTEROL + COLESTEROL TOTAL LIBRE ESTERIFICADO
FRACCIONAMIENTO DE LIPOPROTEÍNAS POR ELECTROFORESIS
QUILOMICRONES
LDL
VLDL
HDL
HDL Lipoproteína alfaLDL Lipoproteína betaVLDL Lipoproteína pre-beta
DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE LIPOPROTEÍNAS
1. Precipitación selectiva a través del uso de cationes bivalentes (Ca2+, Mg2+ y Mn2+) ensoluciones de amortiguadores, heparina o sulfato de dextrán para precipitarselectivamente VLDL y LDL, dejando el HDL en el sobrenadante.
2. Determinación de los niveles totales de colesterol y triglicéridos en suero3. Determinación de HDL en el sobrenadante del precipitado4. Establecimiento de los niveles de LDL y VLDL a través del uso de formulas.
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
lipoproteinlipasa
Glicerolfosfato deshidrogenasa
Peroxidasa4-aminofenazona
DETERMINACIÓN DESEABLE LIMITANTE INDESEABLE
COLESTEROL TOTAL <200 mg/dL 200-249 mg/dL ≥ 250 mg/dL
COLESTEROL HDL ≥55 mg/dL 35-54 mg/dL < 35 mg/dL
COLESTEROL LDL < 130 mg/dL 130-159 mg/dL ≥ 160 mg/dL
GUÍA PARA LA VALORACIÓN DE LAS AFECCIONES CORONARIAS
TRIGLICÉRIDOS < 250 mg/dL 250-500 mg/dL > 500 mg/dL