PRUEBA DE PIRÓGENOS

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

E.A.P. DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA DPTO. ACADÉMICO DE FARMACOTECNIA Y ATENCIÓN FARMACÉUTICA.

INTEGRANTES: BECERRA CAMARENA, Merlly Daisy CALIXTO FLORES, Victor David CHÁVEZ CARBAJAL, Lucero HUIZA RAMOS, Cristiam Miguel MAZA CASTAÑEDA, Janet Rosemary MENDOZA JULCA, Liz Katerine PILLACA PULLO, Omar Santiago  VALERIO MUNGUIA, Jenny Laura

Noviembre - 2010

PIRÓGENOSINTRODUCCIÓN

TEST L.A.L.

L.A.L.(Limulus amebocite Lisate) permite el ensayo semicuantitativo de endotoxinas bacterianas.

La reacción de coagulación es resultado de una serie de reacciones proteolíticas activadas por al presencia de endotoxinas.

TEST L.A.L.

Pueden clasificarse los procedimientos de determinación de endotoxinas en:

•MÉTODO CUALITATIVO. La formación de coágulo indica que la reacción ha sido positiva.

•MÉTODO CUANTITATIVO. Se genera para-nitroanilina de color amarillo como consecuencia de la ruptura de enlaces.

PRUEBA DE PIRÓGENOS Farmacopea Europea

PRUEBA DE PIROGENOSEl ensayo consiste en medir el aumento de temperatura en el

conejo, provocado por la inyección intravenosa de una disolución estéril de la sustancia a examinar.

No deben utilizarse conejos que hayan sido utilizados previamente para:a) Otro ensayo de pirogenos que diera resultado negativo, y se haya realizado con

menos de tres días de anterioridad.b) Otro ensayo de pirógenos, llevado a cabo con menos de tres semanas de

anterioridad, en la que la sustancia no satisficiera el ensayo.c) Otro ensayo de pirógenos, realizado en cualquier momento, en el que la

respuesta media de los animales haya excedido el 1,2 ° C.

Conejos adultos, machos o hembras, en buen estado de salud, cuya masa no sea inferior a 1.5 kg, alimentados siguiendo un régimen completo, equilibrado y sin antibióticos y que no hayan experimentado perdida de peso en la semana anterior al ensayo

SELECCIÓN DE LOS ANIMALES

EQUIPO

MATERIAL DE VIDRIO EQUIPOS Y AGUJAS

DISPOSITIVO DE SUJECCIÓN

Medir la temperatura con una precisión de 0.1|CSe introduce en el recto del conejo a unos 5 cm de profundidad. Constante para cada conejoEl dispositivo eléctrico se introduce 90 min antes de la inyección y se mantiene durante todo el tiempo.

Termómetros: termómetro o dispositivo eléctrico

Se lavan cuidadosamente con el agua para preparaciones inyectables y se esterilizan en una estufa de aire a 250°C x 30 min. Ó a 200°C x 1h

Los conejos, cuyas temperaturas se miden con dispositivos eléctricos se colocan en cajas provistas de un dispositivo que mantiene al animal sujeto por la nuca con la ayuda de un collar que le ajuste holgadamente. Este dispositivo al dejar libre el resto del cuerpo, le permite mantener una postura normal.Los animales no deben sujetarse con correas o dispositivos análogos que pudieran causarles algún daño.Se colocan las cajas 1h antes del ensayo debiendo permanecer en ellas hasta que finalice.

ENSAYO PRELIMINAR1 A 3 DIAS ANTES DE ENSAYAR EL PRODUCTO

Se les inyecta por vía intravenosa y por kg de masa corporal, 10 ml de una disolución apirogénica de cloruro sódico al 0.9 por ciento.

El ensayo se realiza en una habitación sin ruidos y cuya temperatura ambiente no se desvíe mas de 3° C de la habitación en donde los conejos han estado durante las 18 h anteriores al ensayo

Se les priva de alimento de alimento desde la noche anterior al ensayo y hasta el final del mismo; a lo largo del ensayo se les priva también de agua.

Se mide la temperatura de cada conejo desde por lo menos 90 min antes de la inyección y durante las 3h siguientes. El animal que presente una variacion de temperatura superior a 0,6 ° C debe descartarse.

ENSAYO DEFINITIVOSe efectua el ensayo en un grupo de 3 conejos.

INTERPRETACÍON DE RESULTADOS

Numero de conejos

La sustancia satisface el

ensayo si la suma de respuestas no

excede a:

La sustancia no satisface el

ensayo si la suma de respuestas es

superior a:

3 1.15°C 2.65°C

6 2.80°C 4.30°C

9 4.45°C 5.95°C

12 6.60°C 6.60°C

PRUEBA DE PIRÓGENOS

Farmacopea de los Estados Unidos de América: USP 30/NF25

PRUEBA DE PIRÓGENOS

• Diseñada para limitar a un nivel aceptable el riesgo de reacción febril en pacientes a los que se inyecta un determinado producto.

• Este ensayo está diseñado para productos que pueden ser tolerados por conejos en una dosis que no exceda de 10ml por Kg del peso del conejo, inyectados por vía intravenosa durante no más de 10 minutos.

APARATOS Y DILUYENTES

• Se deben realizar periódicamente pruebas de control de pirógenos en porciones representativas de los diluyentes y soluciones que se emplean para lavado y enjuague de los dispositivos o sistemas de inyección parenteral.

REGISTRO DE LA TEMPERATURA

• Emplear dispositivos sensores de temperatura exactos que aseguren una exactitud de ±0.1°C para registrar la temperatura corporal del animal de prueba.

ANIMALES DE PRUEBA

• Emplear conejos adultos y sanos.• Mantenerlos a un T ° 20 °C - 23 °C• Antes de emplear por primera vez un conejo se

lo debe acondicionar.• No usar el mismo conejo más de una vez cada

48 hrs, ni antes de que hayan transcurrido dos semanas después de un aumento de 0.6 °C o más.

PROCEDIMIENTO

• Se debe realizar en un área exclusiva destinada para prueba de pirógenos.

• Durante el periodo de prueba se suspenderá de todo alimento a los conejos.

• Determinar la “temperatura control” de cada conejo no más de 30 minutos antes de la inyección de la dosis de prueba.

• Seleccionar a los conejos cuya temperatura control no varíe más de 1°C de los demás.

• Inyectar en una vena de la oreja, 10 ml de la solución de prueba por kg de peso.

INTERPRETACIÓN

• El producto cumple con los requisitos de la prueba para determinar ausencia de pirógenos si ningún conejo muestra un aumento de 0.5 °C o más por encima de su temperatura control respectiva.

• Si algún conejo posee un aumento de 0.5 °C o más, continuar la prueba con otros 5 conejos más:▫ No más de 3 de los 8 conejos tienen un aumento de 0.5

°C o más y si la suma del aumento máximo de las temperaturas individuales de los 8 conejos no excede de 3.3 °C.

FARMACOPEA ESPAÑOLA

PRUEBA DE PIROGENOS

El ensayo consiste en medir el aumento de temperatura corporal en el conejeo, provocado por la inyección intravenosa de una

disolución estéril de la sustancia a examinar.

Selección de animales

EMPLEO DE CONEJOS

•Adultos, machos o hembras, buena salud, peso 1.5 Kg.

•No utilizarse conejos que se hayan utilizado en otros ensayos.

HOGAR

MATERIALES

ENSAYO PRELIMINAR

SELECCIÓN DE ANIMALES

INYECCIÓN INTRAVENOSA

10 mL de NaCl 9 g/l, por cada kilogramo de peso,

calentada aproximadamente a 38.5

ºC

MEDIR LA TEMPERATURA

NO VARIAR MAS DE 0.6ºc

ENSAYO DEFINITIVO

•Calentar la muestra problema a 38.5ºC.

•Disolver en NaCl 9 g/l

•Inyectar en la vena marginal de la oreja , no mas de 4 min.

•Volumen a inyectar no menor de 0.5 mL por kilogramo ni superior a 10 mL por kilogramo.

PREPARACION E INYECCIÓN

DE LA MUESTRA

•TEMPERATURA INICIAL: media de 2 valores medidos en los minutos anteriores a la inyección.

•TEMPERATURA MAXIMA: La temperatura mas alta registrada en las siguientes 3 horas.

•Comenzar a medir la temperatura 90 min. Antes de la inyección con intervalo de 30 min como mínimo.

DETERMINACIÓN DE LA

TEMPERATURA INICIAL Y MÁXIMA

•Los conejos que muestran una variación de temperatura que sobrepasa 0.2ºC entre dos lecturas sucesivas , para la determinación de la temperatura inicial se desechan.

OBSERVACIÓN

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• 3Conejos

1º GRUPO

• Hasta un total de 4 grupos.

REPETIR

Numero de conejos

La sustancia satisface el ensayo si la suma de respuestas no rebasa :

La sustancia no satisface el ensayo si la suma de respuestas rebasa:

3 1.15ºC 2.65ºC

6 2.8ºC 4.3ºC

9 4.45ºC 5.95ºC

12 6.6ºC 6.6ºC

BIBLIOGRAFÍA

•http://www.med.unne.edu.ar/catedras/medicinai/semioclas/fiebre.pdf