Food Chemistry I Browning Reactions
อาจารยเปรมศร โรจนสจจะกล
Contents
Enzymatic Browning 1
Maillard Reaction 2
Caramelization 3
Ascorbic Acid Oxidation 4
Browning Reactions
เกดขนระหวางกระบวนการผลตอาหารและการเกบรกษา
เปน Secondary reaction: มหลายๆ ปฏกรยาเกดขนรวมกน
Enzymatic browning reaction
ปฏกรยาการเกดสนาตาลทเรงดวยเอนไซม
Nonenzymatic browning reaction
ปฏกรยาการเกดสนาตาลทไมมเอนไซม
The Maillard reaction
Caramelization
Amino acid Oxidation
Enzymatic Browning Reaction
มผลตอสของ ผก ผลไม และ อาหารทะเล
Polyphenol oxidase (PPO)
EC 1.10.3.1; o-diphenol oxidoreductase
• Phenoloxidase
• Phenolase
• Monophenol oxidase
• Diphenol oxidase
• Tyrosinase
Enzymatic Browning Reaction
Enzymatic Browning Reaction
Desirable Color : ผลไมแหง; ลกเกด, ลกพรน, อนทผลม, มะกอก Color & flavor : โกโก, ชา, กาแฟ PPO : สตวทะเล ; รกษาแผล, เปลอกแขงตวหลง ลอกคราบ
Melanoidin Antibacterial Anticancer Antioxidant Antifungal
Undesirable Color : ผก, ผลไม, กง ผก : ผกใบเขยว, ผกกาดหอม, มนฝรง, มนเทศ, เหด ผลไม : แอปเปล, อะโวกาโด, กลวย, องน, มะกอก ลกแพร, ลกทอ
Enzymatic Browning Reaction
Enzymatic Browning Reaction
Melanosis
การเกดสนาตาลโดยเอนไซมในอาหารทะเล
เกดมากเมอเกบกงทยงมหว
ปองกน
• แยกหวกง ลางกงใหสะอาด (กาจด protease)
ไมเปนอนตราย ไมมผลตอกลนรสของกง
ผบรโภคคดวากงเกดการเนาเสย
การลอกคราบของกง
• 1. Postmoult 2. Intermoult
• 3. Premoult 4. Moult
Enzymatic Browning Reaction
Different developmental stages in the formation of Flarida Spiny
Lobster cuticle
Enzymatic Browning Reaction
การลอกคราบ
A : กงลอกคราบแลว (postmoult)
• ไมมเปลอกแขง (cuticle) มแตชน epidermis
• PPO activity ตามาก
B : intermoult stage
• ชวงเรมแรกของเกดเปลอกแขงใหมแทนทเปลอกแขงเกา
PPO activity สงในชวง premoult
C : early premoult
• เกดเปลอกแขงใหมตอจาก intermoult stage
D : later premoult
• เปลอกแขงใหมเกดขนสมบรณ
• ใชเวลา 2-3 วนเพอใหเปลอกแขงใหมแขงตว
Enzymatic Browning Reaction
Black spot
การเกดจดดาในกง
เกด melanosis
ตารางท 1 Colour scale used to describe the progression of
melanosis (black spot) on pink shrimp.
Melanosis Scale Description
0 Absent
2 Slight, noticeable on some shrimp
4 Slight, noticeable on most shrimp
6 Moderate, noticeable on most shrimp
8 Heavy, noticeable on most shrimp
10 Heavy, totally unacceptable
Enzymatic Browning Reaction
Melanosis progression scale of shrimp
Enzymatic Browning Reaction
การยบยงการเกดสนาตาลทเกดโดยเอนไซม
สมบตของเอนไซม
สบสเตรต
ตวยบยงปฏกรยา
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties Oxidoreductase: oxidised phenolic cpds
O2 ตวรบ H
พช PPO ; Mw 57-62 kDa
Active between pH 5-7
Inactivate at pH < 3
Cu cofactor
PPO catalysis 2 reactions
• 1. Hydroxylation
–ท Hydroxyl group (-OH) of monophenol
–Monophenol oxidase or cresolase
– Slow reaction
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
PPO catalysis 2 reactions
• 1. Hydroxylation
Cresolase reaction
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties PPO catalysis 2 reactions
• 2. Oxidation –Oxidation of diphenol เปน o-benzoquinone – โดย diphenol oxidase
» catecholase (catechol oxidase) » laccase
Monophenol oxidase • สตว :
– Tyrosinase : Major monophenolic cpd. = L-tyrosine
» เกยวของกบการลอกคราบ (molting) – Cresolase : Major monophenolic cpd. = cresol
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase pathway
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
Monophenol oxidase : tyrosinase, cresolase
Monophenol oxidase pathway producing the diphenol
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties Monophenol oxidase
• ไมนยมวดคา monophenol oxidase activity ในพช –Rate of reaction
»Hydroxylation < oxidation – Product of oxidation
»Quinone : สารตงตนในการเกดปฏกรยา สนาตาล
Diphenol oxidase : catecholase, laccase • High catalysis activity • Fast reaction • Product = quinones
– สารตงตนในการเกด สารใหสนาตาล (melanoidins)
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
Diphenol oxidase
Diphenol oxidase pathway Prodicing the quinones
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
Diphenol oxidase
• Laccase
– EC 1.10.3.2 ; p-diphenol oxidase, DPO
– Substrate = p-diphenol
– Pure laccase สนาเงนเขม
–Glycoprotein; Mw 60-80 kDa
– ม Carbohydrate 15-41%
– Cu 2-4 atoms : 1 molecule laccase or unit
–พบในเชอรา พชชนสง ลกทอ apricots
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
ในพช
• monophenol oxidase activity : diphenol oxidase activity = 1:40 to 1:10
• catecholase activity > cresolase activity
–Most phenolic cpds in plants
»dihydroxyphenol
• PPO pH ทเหมาะสม 5-7
• PPO ถกยบยงการทางานท pH <3
Enzymatic Browning Reaction
Polyphenol oxidase Properties
Laccase
Comparison of reactions catalysed by catecholase (o-DPO) & laccase (p-DPO)
Enzymatic Browning Reaction
Sustrates : Phenolic compounds
Aromatic rings
ม hydroxyl group 1 group
หมทถกแทนทอนๆ
• simple phenolic cpds, cinnamic acid derivatives, flavonoids
เปนตวกาหนดชนดของ PPO
Flavonoids : anthocyanidins, flavonols
cinnamic acid derivatives
• Flavonols : flavones, flavanones
–Anthoxanthin pigments : สเหลองออน
–Quercetin, myricetin, kaempferol
Enzymatic Browning Reaction
Substrates
Catechins
• พบในธรรมชาต
• โครงสรางคลาย flavonoids
Enzymatic Browning Reaction
Substrates : Bone structure of flavonoids
Enzymatic Browning Reaction
Substrates : Phenolic compounds
Enzymatic Browning Reaction
Substrates : Phenolic compounds
Catechol : o-dihydroxyphenol
• ใชศกษา model of enzymatic oxidation
Tyrosine : monohydroxy phenol
• Hydroxylation of tyrosine
–Dihydroxyphenylalanine (DOPA)
Enzymatic Browning Reaction
Substrates : Phenolic compounds
Caffeic acid derivatives
• o-diphenolic compounds
• Chlorogenic (caffeoylquinic) acid
– Substrate in apple
• Caftaric (caffeoyltartaric) acid
– Substrate in grape
Enzymatic Browning Reaction
Substrates : Phenolic compounds
Substrates ของ PPO ในผก & ผลไม
• Catechins
• Cinnamic acid esters
• 3,4-dihydroxy phenylalanine (DOPA)
• Tyrosine
• กลวย : dopamine
(3,4-dihydroxy phenylalanine)
• อนทผลม : 3-o-caffeoylshikimic acid
(dactylifric acid)
• มนแกว : catecholamine
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
ผก & ผลไม
• Substrates in vacuole
• PPO in cytoplasm
• ปอกเปลอก หน ตด เกดสนาตาลโดยเอนไซม
อตราการเกดปฏกรยา ขนอยกบ
• ปรมาณของ PPO
• ปรมาณของสบสเตรท
• คา pH
• อณหภม
• ปรมาณออกซเจน
Enzymatic Browning Reaction
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
กาจด/ปองกน สารทจาเปนตอการเกดปฏกรยา
• ออกซเจน เอนไซม ทองแดง สบสเตรท
กาจดออกซเจนจากผวของผก & ผลไม
• แชผก/ผลไม ในนา นาเชอม นาเกลอ
• บรรจแบบสญญากาศ
– ยบยง Clostridium botulinum
Enzymatic browning inhibitors
• ความเปนพษ
• ความปลอดภย
• ผลกระทบทมตอรสชาต กลนรส และเนอสมผส
• ราคา
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
Enzymatic browning inhibitors
Reducing agents sulphiting agents
ascorbic acid and analogs
cysteine
glutathione
Chelating agents phosphates
EDTA
organic acids
Acidulants citric acid
phosphoric acid
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
Enzymatic browning inhibitors
Enzyme inhibitors aromatic carboxylic acids
aliphatic alcohol
anions
peptides
substituted resorcinols
Enzyme treatments oxygenases
o-methyl transferase
proteases
Complexing agents cyclodextrins
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
Reducing agents
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Reducing agents
• Thiol
– 2-mercaptoehtanol »ยบยงการเกด polymerization ของ o-quinone » เปน reductant ทาให o-quinone เปน
o-dihydroxyphenol • Sulphiting agents
–ควบคมการเกดสนาตาลทงแบบทใชและไมใชเอนไซม
– SO2 sulphur dioxide (g) – SO3
2- sulphite –HSO3
- bisulphate – S2O5
2- metabisulphite
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
กาซซลเฟอรไดออกไซด
• ยบยง PPO ไดดทสด
• ยบยงแบบถาวรไมกลบคน
• ผลไมอบแหง : ลกเกด
• ขอเสย : เกดกลน เปนอนตรายตอสขภาพ เกดการแพ เกดอาการหอบหด
• FAO: รบประทานในหนงวนไดไมเกน
0.7 mg SO2 / kg of body weight
• Sulfhydryl group (-SH) ของสารประกอบซลเฟอรจบท active site ของเอนไซม
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
กาซซลเฟอรไดออกไซด
• ซลไฟตทาปฏกรยากบ o-quinone เปน sulphoquinones ท PPO ไมสามารถทาปฏกรยาได
• ซลไฟตยบยงปฏกรยา melanosis (blackspot) ใน กง เหด แอปเปล ผก & ผลไม
• Antimicrobial activity
• ทาใหไวนมสทคงตว มกลนรสทด
• ปรมาณทใชขนอยกบสบสเตรท
– ใชปรมาณนอย
»Monophenol : tyrosine ในมนฝรง
– ใชปรมาณมาก
»Diphenols ในอะโวกาโด
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล L-ascorbic acid
• strong reducing agent
• Oxygen scavenger : จบกบ O2
• รดวซ o-benzoquinone เปน o-diphenol
• L-ascorbic acid ถกออกซไดซ L-dehydroascorbic acid แบบผนกลบไมได
• อนพนธของกรดแอสคอบก
– Erythrobic acid
– 2- and 3-phosphate derivatives of ascorbic acid
– Phosphate esters of ascorbic acid
–Ascorbyl-6-fatty acid esters of ascorbic acid
Enzymatic Browning Reaction
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Erythorbic acid & sodium erythorbate
• Strong reducing agents
• Oxygen scavenger
• D-isomer ของ ascorbic acid
• ไมม vitamin C activity
• ใชรวมกบ citric acid แทนซลไฟต
• ควบคมการเกดสนาตาลในผลไมแชแขง
Cysteine
• Sulfhydryl amino acids
• เกด complex กบ PPO หรอ จบกบสบสเตรท
• จบกบ Cu ของ copper prosthetic group ของ PPO
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Acidulants
• ทาใหอาหารม pH ตา
• PPO เสยสภาพ ไมสามารถเกดปฏกรยา catalyst
• citric acid, malic acid, phosphoric acid
• ใชรวมกบ antibrowning agents ชวยเสรมประสทธภาพการทางาน
• citric acid
– นยมใชในอตสาหกรรมอาหาร
– 0.5-2% (w/v)
– ใชรวมกบ ascorbic or erythorbic acids and its salts
– ยบยง PPO : ลดคา pH, ดง Cu จาก active site ของเอนไซม
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Chelating agents
• จบกบโลหะท active site ของเอนไซม
• จบกบ copper and iron ions
• Sorbic acid, polycarboxylic acid (citric, malic, tartaric, oxalic, and succinic acid), polyphosphates (ATP and pyrophosphates), macromolecules (porphyrins, proteins), EDTA
• ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)
– Chemical preservatives: calcium disodium EDTA, disodium EDTA
– จบกบ iron, copper, calcium
– ใชรวมกบ ascorbic acid, citric acid
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Chelating agents
• Phosphates
– Polyphosphates, sodium acid pyrophosphate, metaphosphate
– ละลายไดนอยในนาเยน
–ผกสด & ผลไมสด ปอกเปลอก
»0.5-2% ใน dip solution
– SporixTM : acidic polyphosphate mixture
»Sodium acid pyrophosphate
»Citric acid
»Ascorbic acid
»Calcium chloride
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Maltol
• 3-hydroxy-2-methyl-4H-pyran-4-one
• -pyrone derivative
• จบกบ Cu ท active site ของ PPO
• ทาให o-benzoquinone เปลยนกลบเปน
o-dihydroxyphenol
Polysaccharides
• Sulfated polysaccharides
– Carrageenans, amylose sulfate, xylan sulfate
–Browning inhibitor ใน นาแอปเปล แอปเปลแหง
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสน าตาล
Polysaccharides
• Pectin
– 5-10% ยบย งการเกดสน าตาลในน าแอปเปล
»Carboxyl group ของ pectin จบกบ Cu ใน PPO
Kojic acid
• 5-hydroxy-2-hydroxymethyl-4H-pyran-4-one
• -pyrone derivative
• เกดจากเมตาบอลซมของเช อรา Aspergillus & Penicillium
• จบกบ Fe (III), Cu (II)
• พบในอาหารหมกดองพ นบาน
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Kojic acid
• Antibacterial & antifungal activities • ใชรวมกบ ascorbic acid • ปองกนการเกด melanosis ในพช & อาหารทะเล
– จบกบ Cu ท active site ของ tyrosinase Complexing agents
• Cyclodextrins – Cyclic oligosaccharides –ภายในวง CD เปน hydrophobic –ภายนอกวง CD เปน hydrophilic – จบกบสบสเตรทของเอนไซม PPO เกดเปน
โครงสราง inclusion complex –Beta-CD: ยบยงการเกดสนาตาลในนา แอปเปล
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
Chemical structure of beta-cyclodextrin
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Heat treatments
• Steam treatments
– ยบยงการเกดสนาตาลในผก & ผลไม บรรจกระปอง/แชแขง
– ไมเหมาะกบผก & ผลไมสด
– อณหภมทใชขนอยกบชนดของเอนไซม
• Pasteurization 60-85C
• Blanching 70-105C หรอสงกวา
– 70-90C ทาลาย catalytic activity ของ PPO
–การลวกถวลนเตา: temp. 82C, time > 3.5 min
»ทาลาย catalase, lipoxygenase, PPO ไดเกอบสมบรณ
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Heat treatments
• Blanching –ปองกน chlorophyll & carotenoids
pigments ไมใหถกทาลายโดยเอนไซม –คณคาทางอาหารลดลง – สญเสยวตามน กลนรส ส เนอสมผส
คารโบไฮเดรต สารประกอบทละลายในนา – เปลองพลงงาน –หลงลวกตองทาใหเยน (cooling) ทนทกอน
การแชแขง Natural antibrowning agents
• นาผง • Papaya latex extract
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล Natural antibrowning agents
• Banana leaf extract
– ใชเพยงตวเดยว หรอใชรวมกบ ascorbic acid และ
»4-hexylresorcinol
»Onion juice
»Onion oil
»สารละลาย citric acid, calcium chloride, garlic extract
Minimal processing fruits & vegetables
• การยบยงการทางานของ PPO
– ลวกผกโดยใชไมโครเวฟ หรออาจใช antibrowning agents รวมดวย
Enzymatic Browning Reaction
การควบคมปฏกรยาการเกดสนาตาล
Minimal processing fruits & vegetables
• การยบยงการทางานของ PPO
– CO2 treatments – ใช Sodium or calcium chloride and
lactic acid ในการลวกผก
–การเคลอบผลไม
»Edible whey protein isolate-bees wax
–การบรรจในบรรยากาศทมออกซเจนสง (>70% O2)
–Modify atmosphere
»90.5% N2 + 7% CO2 + 2.5% O2
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Caramelization
Ascorbic Acid Oxidation
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
พบครงแรก ค.ศ. 1912 โดย Louis Maillard
อาหารไดรบความรอน
• สญเสยนา (dehydration)
• สลายตว (degradation)
• เกดการรวมตวกน (condensation)
– Carbonyl group : reducing sugar, aldehydes, ketones
–Amine group : amonia, amino acid, peptides, proteins
• พฒนาเปนสารประกอบเชงซอนสเหลองถงนาตาล และนาตาลแดง
• เกดกลน และรสชาตเฉพาะ
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Beneficial
• Food processing : การอบขนม การทอด
การคว การยาง การเผา
• กลนรส และ สทดในผลตภณฑ
– เนอยางหรออบ กาแฟ ชา ชอคโกแลต ถว มนฝรงทอด ขนมปงกรอบ เบยร ซอสถวเหลอง
• โปรดกซทไดจากปฏกรยาเมลลารด
–Antimutagenic agents
–Antimicrobial agents
–Antioxidants พบใน นาผง และ tomato purees
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Undesirable
• ปฏกรยาเมลลารดทเกดขนระหวางกระบวนการ pasteurization, sterilization, drying, storage
• สญเสย essential amino acids : lysine
• เกดสนาตาลและกลนทไมเปนทตองการ
• การวเคราะหปรมาณ lysine
–ตวบงชการเกดปฏกรยาเมลลารด
–ขนมปง ผลตภณฑอาหารเชา อาหารทารก ไขผง นมผง
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Undesirable
• การทอด/ยาง เนอและปลา
–Mutagenic/carcinogenic heterocyclic amine
–ปรมาณขนกบ อณหภม เวลา และ เทคนด และ เครองมอทใช
– อาหารทมโปรตนสง
»Acrylamide 5-50 ppb
– อาหารทมคารโบไฮเดรตสง : มนฝรง
»Acrylamide 150-4000 ppb
– อาหารดบและอาหารตม
» ไมพบ Acrylamide
Nonenzymatic Browning Reaction
การเกด acrylamide จากปฏกรยาเมลลารด
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปฏกรยาระหวาง หมอะมโนของแอมโมเนย กรดอะมโน เพปไทด หรอโปรตน และ หมคารบอนล ของนาตาลรดวซ เปน N-substituted glycosylamine และ เกดปฏกรยาตอเนองจนไดสารสนาตาล
โปรตนเกดการเสอมเสยระหวางกระบวนการผลตหรอการเกบรกษา
สญเสยคณคาทางอาหาร: กรดอะมโนจาเปน
เกดสารระเหยและไมระเหย
เกด 3 ขนตอนหลก: initial, intermediate, final stages
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Condensation (amine/carbonyl)
Rearangement (or enolization)
Fragementation
Strecker degradation
Polymerization-brown color
Initial stage
• ปฏกรยา condensation ระหวาง amino group ของกรดอะมโน เพปไทด โปรตน กบ carbonyl group ของ นาตาลรดวซ (aldose, ketose)
• เกดปฏกรยา dehydration สญเสยนา
• เกด imines หรอ Schiff’s base
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Initial stage
• เกด cyclization เปน N-substituted glycosamine ทไมเสถยร
• เกด Amadori rearangement ของ imine
–Amadori product
»1-amin 1-deoxy-2-ketose or aldoseamine เมอ reducing sugar เปน hexose
»Heyns compound or ketoseamine เมอ reducing sugar เปน ketose
»สารตงตนในการเกดสารใหกลนรส และสารประกอบทมสนาตาล
• pH 5: เกดปฏกรยาตอเนอง
Nonenzymatic Browning Reaction
Carbonylamine reaction
and Amadori rearrangement
Leading to formation of
1-amino-1-deoxy-2-ketose
in the Maillard reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
ปฏกรยา condensation ของ amine group กบ carbonyl group
Nonenzymatic Browning Reaction
Amadori rearangement ของปฏกรยาเมลลารด
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction Intermediate stage
• ในสภาวะ pH = 4-7
–การแตกตว (fragmentation) ของ Amadori compound
– เกดเปน 3-deoxyglucosane (-dicarbonyl compound)
– เกดปฏกรยา dehydration ตอได HMF =
5-hydroxymethyl-2-furaldehyde
– ในสภาวะทเปนกรด เกดสารประกอบพวก Osones และ furfural
– Furfural เกดปฏกรยา condensation กบ amino compounds และเกด polymerization เปน melanoidins (nitrogenous dark brown polymers)
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Intermediate stage
• ในสภาวะทเปนดาง
– เกดอตราการเกดสนาตาลมากขน: เกดการแตกตวของนาตาลเปน free radical ตางๆ
– เกดปฏกรยา enolization ของ 1-amino-deoxy-1-ketose ทตาแหนง 2 และ 3
– เกด 2,3-enediols เปลยนเปน reductones
– เกดปฏกรยา decomposition, dehydration, fragmentation ได
»สารประกอบใหกลน: aldehydes, furans, maltol, isomaltol, diacetyls
Nonenzymatic Browning Reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
acidic condition
basic condition
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Strecker degradation
• กรดอะมโนทาปฏกรยากบ intermediate dicarbonyl compound จาก amadori cpd
• เกดปฏกรยา decarboxylation ได สารสนาตาลเขม & CO2 (g)
• โปรดกซ : aminoketones, aldehyde, CO2
• Strecker aldehyde มจานวนคารบอนนอยกวากรดอะมโนเรมตน 1 อะตอม
• โปรดกซ: heterocyclic compounds
– Pyrazines, pyrrolines, oxazole, oxazolines, thiazole derivative
– ใหกลนของอาหารทผานความรอน
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction Final stage
• HMF เกด polymerization เปน nitrogen-containing brown polymers= Melanoidins
• Melanoidin
– สารทมส (pigments)
– โครงสรางทางเคม มวลโมเลกล และปรมาณไนโตรเจน ผนแปรไปตามชนดของสารตงตน
สารประกอบคารบอนล & เอมนทมความคงตวตา ทสลายตวไดงาย
• สามารถเกดปฏกรยาเมลลารดไดทอณหภมหอง ระหวางการเกบรกษา
Nonenzymatic Browning Reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Strecker degradation
• Aldehyde & aminoketone = สารใหกลนทสาคญในอาหาร
• Strecker aldehyde
– Ethanal (fruity, sweet aroma)
–Methylpropanal (malty)
– 2-phenylethanal (flowery/honey like aroma)
• Aminoketone
– เกดปฏกรยา condensation & cyclization
– เกดเปน aldehyde
Nonenzymatic Browning Reaction
Strecker degradation
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction Strecker degradation
• Aminoketone –Heterocyclic compounds : pyrazine,
pyrroline, pyrilodines, pyridines, oxazole, oxazolins, thiazole derivatives, carbocyclic compounds, furanones, pyrrolinones, cyclopentenones
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction Strecker degradation
• Pyrazine
– สารใหกลนทสาคญในอาหาร : ผลตภณฑเนอสตว ผลตภณฑจากถวเหลอง เนยแขง กาแฟ มนฝรง ชา
– เกดจากปฏกรยา condensation ของ aminoketone
• Pyrroles
–Heterocyclic compounds
– เกดจาก ปฏกรยา cyclization ของ methyldicarbonyl compounds
• Oxazoles & Oxazolines
– สารระเหยใหกลนทพบใน กาแฟ มนฝรงอบ ถวลสงคว
Nonenzymatic Browning Reaction
การเกดสารประกอบ pyrroles จากปฏกรยาเมลลารด
Nonenzymatic Browning Reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
Strecker degradation
• Thiazoles
– เกดจาก sulfur amino acids
– สารระเหยใหกลนทพบใน กาแฟ ถวลสงคว เนอทผานการใหความรอน มนฝรงทอด
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การวดปฏกรยาเมลลารด
• Initial stage
– เกด Schiff base, Amadori/Heyns products ทไมมความคงตว
– ไมดดกลนแสง UV
–ตดตามการเกดปฏกรยาโดยการตดตามการเปลยนแปลงคา pH ของสารละลาย
»หมอะมโนทมสมบตเปนดางถกทาลาย ทาใหมปรมาณนอยลง ทาใหคา pH เปลยน
• Intermediate stage
– วดการดดกลนแสง UV ของ dicarbonyl & HMF
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การวดปฏกรยาเมลลารด
• Final stage
– วดความเขมของสนาตาล (dark brown color) ทเกดขน
– วดคาการดดกลนแสงในชวงความยาวคลน
420-490 nm
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• คาวอเตอรแอคตวต
• คา pH
• องคประกอบทางเคมของอาหาร
• อณหภม
– อตราการเกดปฏกรยาเมลลารดเพมขน
»คา pH และ/หรอ อณหภม ของระบบเพมขน
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• อณหภม
–ผลของ pH ตอการเกด Maillard browning ของ L-lysine, L-alanine,
L-arginine
» ใหความรอนพรอม D-glucose
ท 121C, 10 min
»ทความเปนเบส จะเกด 2,3-enolization pathway ไดด
Nonenzymatic Browning Reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• คา pH
– pH ตา ยบยงปฏกรยาระหวางคารบอนลกบเอมน
»pH = 3 นาตาลมความคงตวมากทสดในรป pyranose hemiacetal ring
»pH ลดลงทาใหอตราการเกดปฏกรยาเมลลารด ลดลง
– pH สง นาตาลอยในรป reactive acyclic aldehyde
» เกดปฏกรยารวมตวกนระหวางนาตาลและเอมนอยางรวดเรว
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• ชนดของนาตาลรดวซ
– อตราการเกดปฏกรยา
»Pentose (ribose) > hexose (glucose) > disaccharide (lactose)
– นาตาลนอนรดวซง เชน ซโครส
» เกดปฏกรยาไดเมอถกไฮโดรไลซเปนนาตาลรดวซแลว
–นาตาลรดวซ
» Fructose เกดปฏกรยาไดดทสด
»D-galactose > D-mannose > D-glucose
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• ชนดของกรดอะมโน
– -amino acid : glycine เกดปฏกรยาไดเรวทสด
»กรดอะมโนขนาดโมเลกลใหญขน เกดปฏกรยาชาลง
–-amino acid
» เกดปฏกรยาเมลลารดไดเรวขนเมอความยาวของสายในโมเลกลเพมขน
–กรดอะมโนทอยในโมเลกลของโปรตน
»หมอะมโนในโมเลกลของ lysine เกดปฏกรยาไดเรวทสด
Nonenzymatic Browning Reaction
การเกดสนาตาลในสารละลายกลโครส และสารละลายทประกอบดวยกลโครส และกรดอะมโนจาเปนชนดตางๆ เมอใหความรอนทอณหภม 100C ท pH 7.5
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• คาวอเตอรแอคตวต
– สภาวะแหงกลโครสกบกรดอะมโนไกลซนจะคงตว ไมเกดปฏกรยาเมลลารด ถงแมจะมอณหภมถง 50 C
– มนาเลกนอย ปฏกรยาเมลลารดจะเกดขน
–ปฏกรยาเกดขนนอยเมอ aw สง
»ท aw สง สารตงตนในการเกดปฏกรยามความเจอจาง
–ปฏกรยาเกดขนมากขนเมอ aw ตาลง
»สารตงตนในการเกดปฏกรยาเคลอนทไดจากด และมความเขมขนเพมมากขน
Nonenzymatic Browning Reaction
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• คาวอเตอรแอคตวต
–ปฏกรยาเมลลารดเกดไดดท aw ระหวาง 0.5-0.8
»aw ของอาหารแหงและอาหารกงแหง
–ปรมาณนาสงสดในการเกดปฏกรยาเมลลารด ประมาณ 30%
• ออกซเจน
– ไมมผลตอปฏกรยาเมลลารด
– ออกซเจนชวยออกซไดซสารอนใหอยในรปทไวตอการเกดปฏกรยา
–ปฏกรยาเมลลารดเกดไดในสภาวะทไมมออกซเจน
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
ปจจยทมผลตอปฏกรยาเมลลารด
• สารประกอบเชงซอนของ metals-amino acids มผลในการเรงอตราการเกดปฏกรยา
– Cu2+ และ Fe3+
– Fe3+ มผลในการเรงการเกดปฏกรยาไดดกวา Fe2+
–Manganese (Mn) และ ดบก (Sn) เปนตวยบยงการเกดปฏกรยา
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การควบคมปฏกรยาเมลลารด
• กาจดสารเรมตนทเปนสบสเตรทของปฏกรยา
–กาจดนาตาลกลโครส โดยออกซไดซใหเปนกรดกลโคนก ดวยเอนไซม glucose oxidase
• การลาง
– ลดปรมาณนาตาล และกรดอะมโนออกจากผวนอก
• มนฝรง : เกบรกษาไวระยะเวลาหนง
– นาตาลจะเปลยนเปนสตารช ลดการเกดปฏกรยาการเกดสนาตาลใหนอยลง ระหวางการแปรรป
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การควบคมปฏกรยาเมลลารด
• ภาวะทใชในการแปรรปอาหาร หรอ การเกบรกษาผลตภณฑ
– ใชอณหภมตา ลดการเกดปฏกรยาเมลลารด
• ควบคมปรมาณนาในอาหาร
– ใหนอยลง หรอ
– เพมปรมาณนาใหมากขน: สบสเตรทเจอจาง
• ลดคา pH
–Dried egg powders
» เตมกรดในกระบวนการ dehydration
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การควบคมปฏกรยาเมลลารด
• SO2 (g)
–ทาปฏกรยากบ degradation product ของ aminosugar ปองกนไมใหเกดการรวมตว หรอ เกด polymerization เปน melanoidin
–ขอเสยของ SO2
»SO2 ทาปฏกรยากบ วตามนบหนง และโปรตน
»คณคาทางโภชนาการของอาหารลดลง
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การควบคมปฏกรยาเมลลารด
• ใชสารเคมยบยงการทาหนาทของ carbonyl group
– Sodium/ potassium metabisulfite
»จบกบ carbonyl group ของ นาตาลรดวซ
» เกดเปน hydroxysulfonate สญเสย reducing properties
Nonenzymatic Browning Reaction
The Maillard Reaction
การควบคมปฏกรยาเมลลารด
• Carbohyl compounds ทเกดจากปฏกรยาออกซเดชนของลพด
– ใช antioxidants
• การปรงอาหารดวยไมโครเวฟ
– ไมเกดปฏกรยาเมลลารด
– เตม browning precursors
» เพอใหเกดสนาตาลขนระหวางการใหอาหารรอนดวยไมโครเวฟ
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
เกดบรเวณผวของอาหารทไดรบความรอนสง ระหวางการอบ การคว
ระหวางกระบวนการผลตอาหารทมปรมาณนาตาลสง ทงรดวซและนอนรดวซ
• แยม นาผลไม การผลตไวน
เกดกลน caramel และสนาตาล ใชเปน food additive
เกดสาร mutagenic และรสขม
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
การใชความรอนสง
• สลายโมเลกลของนาตาลใหแตกออก
• เกดโพลเมอไรเซชนของสารประกอบคารบอนไดเปนสารสนาตาล
สารเรมตนในการเกดปฏกรยา : นาตาล
การเผานาตาลกลโคสทอณหภม 200C
• นาถกกาจดออกจากโมเลกลของนาตาล (dehydration)
• เกดสารประกอบทมพนธะค และเปนวงแหวน (anhydro ring)
• มความหนด รสขม สเขมขน แปรผนไปตามระยะเวลาและ อณหภมทใช
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Dehydration (water elimination)
Isomerization
เกด enediol และ dicarbonyl เปน caramel flavor และ pigments
นาตาลไดรบความรอน (200C)
Sugar Isosacchrosan Caramelan
Caramelin (humin) Caramelen
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Isosacchrosan
• นาตาลไดรบความรอน สญเสยนา 5.5%
• ไมเกดการสลายตว
• C12H20O10
Caramelan
• นาตาลไดรบความรอน สญเสยนา 9%
• สญเสยนาออกจากโมเลกลนาตาล 2 โมเลกล
• เกดการรวมตวของนาตาล 2 โมเลกล
• Dehydro sugar
• C24H36O18
• ละลายไดในนา
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Caramelen
• นาตาลไดรบความรอน สญเสยนา 13.6%
• เกดการรวมตวกนของนาตาลซโครส 3 โมเลกล
• สญเสยนาออกไป 8 โมเลกล
• C36H50O25
Caramelin (humin)
• การใหความรอน caramelen
• สารสดา ไมละลายนา
• C125H188O80
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Caramel
• สารใหส จาก Caramelization
• ประกอบดวย C, H และ O
• ละลายนามสภาวะเปนกรด pH 2.0-4.5
การเกด caramel
• Acid degradation
• Alkaline degradation
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization การเกด Caramel
• Acid degradation
• Organic acid = ตวเรงปฏกรยา
• pH 2.2-2.9
• Lodry de Bruyn-Alberda van Ekenstein transformation
• Isomerization เกด 1,2-enediols & Dehydration
• Product = Furaldehyde
– 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde (HMF) – เกดจาก hexose
– 2-furaldehyde – เกดจาก pentose
D-glucose D-fructose D-mannose
Nonenzymatic Browning Reaction
Lodry de Bruyn-Alberda van Ekenstein
transformation
mechanism of sugar
dehydration and
formation of HMF,
a precursor of caramel
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
การเกด caramel
• Alkaline degradation
–การสลายตวของนาตาลในสภาวะทเปนดาง
– นาตาลเปลยนเปน 1,2-enediol & 2,3-enediol
– โดยปฏกรยา enolization
– เกด cleavage และ fragmentation
– เกดสารประกอบใหกลน
– saccharinic acid, lactic acid, 2,4-dihydroxybutyric acid, ethyl alcohol, aromatic compounds, benzene, maltol, catechol, และ benzaldehyde
Nonenzymatic Browning Reaction
Alkaline degradation
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
อตราการเกดปฏกรยาคาราเมลไลเซชน ขนกบ
• อณหภม
• คา pH
• ระยะเวลาการใหความรอน
• สารตงตน
ปฏกรยาเกดไดดท temp. > 120C คา pH > 9 หรอ คา pH < 3
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
การใชอณหภมตา
• เกดสดกวาเกดกลน
• การเกบรกษาสารละลายนาตาล
– fructose, xylose, glucose, maltose, lactose, sucrose
–ท temp. 45-65C คา pH 4-,6 aw 0.9
» Fructose & xylose เกดสนาตาลไดมากกวาและเรวกวานาตาลชนดอน
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Caramel
• สารใหสในเครองดมโคลา ขนมอบ ลกอม นาเชอม และ ซอสปรงรส
• สารละลายคอลลอยดทมประจลบ
Sucrose + ammonium bisulfite (NH4HSO3) caramel heat
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization
Caramel
• สนาตาลแดง
• สารละลายคาลาเมล = สารละลายคอลลอยดทมประจบวก
• pH 4.2-4.8
• สารใหสในผลตภณฑขนมอบ นาเชอม พดดง
Sucrose + ammonium salts caramel heat
Nonenzymatic Browning Reaction
Caramelization Caramel
• การใหความรอนกบนาตาลเพยงอยางเดยว ไมมการใชเกลอแอมโมเนย – ใหสนาตาลแดง – สารละลายคาลาเมล = สารละลาย
คอลลอยดทมประจลบเพยงเลกนอย – pH 3-4 – สารใหสในเบยร เครองดมแอลกอฮอล – มโมเลกลเปนโพลเมอร – โครงสรางทางเคมผนแปรตามสภาวะและ
สารตงตนทใช – อตราการเกด caramel เรวขนเมอเพม
temp. & คา pH ใหสงขน »อตราการเกดคาลาเมลไลเซชนท pH 8
เกดไดเรวกวาท pH 5.8 ถง 10 เทา
Nonenzymatic Browning Reaction
Pyrolysis
การเผานาตาลดวยความรอนสง
เกดสารใหสและสารประกอบทมกลนเฉพาะตว
• Maltol (3-hydroxy-2-methylpyran-4-one)
• Isomaltol (3-hydroxy-2-acetylfuran)
– เกดกลนในขนมปง
• 2H-4-hydroxy-5-methylfuran-3-one
– สารใหกลนและรสหวาน
Nonenzymatic Browning Reaction
ผลตภณฑทเกดจากปฏกรยา pyrolysis ของนาตาล
Nonenzymatic Browning Reaction
Ascorbic Acid Oxidation
ความรอนทาใหกรดแอสคอบกแตกตว
เกดการเสอมเสยของ citrus productsหนอไมฝรง บอคคอล กะหลาปล ถว ผกขม มนฝรง แอปเปล เมลอน สตอเบอร ขาวโพด และผลไมแหง
Nonenzymatic Browning Reaction
Ascorbic Acid Oxidation ปจจยทมผลตอการแตกตวของกรดแอสคอบก
• อณหภม
• ความเขมขนของเกลอและนาตาล
• คา pH
• ปรมาณออกซเจน
• เอนไซม
• โลหะทเปนตวคะตะไลซ
• กรดอะมโน
• สารททาใหเกดปฏกรยาออกซเดชน/ปฏกรยารดกชน
• ปรมาณกรดแอสคอบกเรมตน
• อตราสวนระหวางกรดแอสคอบกและกรดดไฮโดรแอสคอบก
Nonenzymatic Browning Reaction
Ascorbic Acid Oxidation ในระบบทมออกซเจน
• กรดแอสคอบกแตกตวได dehydroascorbic acid (DHAA) ทไมมความคงตว
• เปลยนเปน 2,3-diketo-L-gulonic acid
• เกดปฏกรยา decarboxylation ได xylosone และเกดการเปลยนเปน reductones
ในสภาวะทไมมอากาศ
• กรดแอสคอบกแตกตวเปน diketogulonic acid
• ตามดวยปฏกรยา -elimination ท C4
• ปฏกรยา dehydroxylation ไดเปน
3-deoxypentosone
• สลายตวเปน furfural
Ascorbic Acid Degradation
Nonenzymatic Browning Reaction
Ascorbic Acid Oxidation
ในสภาวะทมกรดอะมโน
L-AA, DHAA, furfural, reductone,
3-deoxypentosone
• เกดปฏกรยากบกรดอะมโน เปนปฏกรยาเมลลารด
Ascorbic acid oxidation จากปฏกรยาของเอนไซม
• Ascorbic acid oxidase (Cu-containing enzyme)
• เกดในอาหารประเภทซตรส
– เกดมากในระหวางการสกดนาผลไม
Nonenzymatic Browning Reaction
Ascorbic Acid Oxidation Ascorbic acid oxidation จากปฏกรยาของ
เอนไซม
• เกดในอาหารประเภทซตรส
– ยบยงการทางานของเอนไซม
»การสกดนาผลไมอยางรวดเรวท temp. ตา
» ระหวางการผสมตองไมมอากาศ
»พาสเจอไรซ: ยบยง enzymatic activity
– เกดการสลายตวของกรดแอสคอบกของผวสมทใชทาแยมผวสม (marmalade)
»ลวกผวสมเพอลดการสญเสยกรดแอสคอบก
Browning Reactions
Browning Reactions