+ All Categories
Home > Documents > High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

Date post: 25-Aug-2016
Category:
Upload: f
View: 215 times
Download: 0 times
Share this document with a friend
9

Click here to load reader

Transcript
Page 1: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

������������ �� �� ����� � ��� ��� �� ��������� �������� ���� ������ ���� �� �������� �� �� ����������� ����� ���� ������ �� �� � �� � �� �� ������ ������ �������� � ���� �� ���� �� �� ����� �� ����������� ���� ����� ��� �� ��� ������ �� �� �������

����� ����!�� � ����"��� �#� $�% &�������� � � ������� �� ��� ��� ��� � ������� ���� ������� ���'����� ��� !��� ����� �(� )�� "� �� �� ��� �� � ������ ��'�� �������� ���� ��� �� � ������ �� � ��� ������� ��!���� ������% *�������� �� ��������� ���� ����!��� ���� �� !� ������� � ��� ������ �� ��+,-�' ������� �� � ���� �� ������ �.�%

��� ��������� ��� �� �� ����� � ����� ������� ����!��� ����� !�� �� �� �� ����������� ��� ��� � � ��� ��� �"� �!�����/ ��0��� ��1 ��������� ��2�% �����0 ��� ����� ���!���� ����� ��� ��� + ����� �'������ ���������� � ���� �� ��� ��� ��������� ���� ������������ ������ ��% ���� ��� ������ ! 3 �������� � � �� ��� � �� ��� �� 4�� � ��� ����'� ���

5 �!������ � 4�2226 �/ �� )7��#$

���� ����� ����� � ���� ���������� �� ���������� ��� � ���� �� ������� ����������� ��������� �� �������� ����������� �� ������� ��� ���������

� 5��������� �� 8� � ��� ��� ����� ������ &�� � ��� 9��� �� �� :������� &�� � ��� -� ���� �� �� ;������� ;������� :����� 5��������� �� ����� ������ ��� 5 ������ � &�� � ��� 9��� �� �� +������ ���������� -� ���� �� �� ;������� ;������� :����

� 9�� ����'<����� �222

���� ��

������������� �� ���� � ��������� ��� � ��� �� ����"�� ��������� =�� ������ ���!���� �������� �'������ � ������� ��� �� ��� ���� ���� ���� ���"� ���'���� ���� ��� ��� �� ������� ����� � ��� ������� ���� ����� �� ������ ��% , ���� � ���"� �!�� ��� ��'���� ������������ � ������ ������� ��� �� ��� ����� ��% ; !��!����� ����� ������� ������� " �������� ����� ����� ��� ��� �� �������� ����� ������ ��� ������������� � ���3�% >� � � "�� �� ����'��� ��� ������ �� � �� ������ ���������� �� �� ��'��� ���� ��������� � ���� � !��!�����%������ ; !��!����� "��� �!�� ��� !� �� � ! ��� ����� ���"� �� �"� � ������� ������ ���������� ���%?� �������� �������� ������� �� !� *�'�8* ��� ����!���� �� ��� �������� ����� =�� �� !� ��'�������������% ������ ���!���� ������ �� ��� ���'� � ������� "��� ������� !� ���������� �� ��'����% ������ � "�� ������ ��� !� ��� � � !��� ����� � �� ��� �������'� ��� ��� ��%

������� ?� ���" ���� ����� ���"� � � ��� � " ��� �� ������ ���������� �� ����"��� ����� ��'��� ���� ��������� ��� �������� �������� ������'� �� ������� � ��� ��� �� ��� ������� �'$ �������%?� ���� � �� ��1( �� ��� �� � �� ���� � �������� ������� � ����� ���������% ;���������� � �� ��'���� ���������� �� �� ������ ��� �����!�� �� ��1( ��� � ��'� �� �������� ������� �� ��� ��� ����� ����� �����%��������������������� + ��� ���� �� � ���'3����� �������� ��� ��� ������������ � � � ������� ��� � ��� ������� ��������� �������� � �� ��� ��'� �� �� ������ ���!���� ������������� "� �������'� =� ���� �� ��������� ���� � ���� � ��� ���������'� � �� ������� ����� ��� ��� �� � �!����% �5 �'!������ � 4�2226 �/ �� )7��#$�

������ 8��� �� ������� �'$� �� �� ���� � ��'������� ������� �� ������������ �%

*��� ���/ . ;�!���� �222 ��� � ��� ��� ����/ �# &�� �222

���������� ������ 5�% ;% 5 < �� � �� 5��������� �� ��'��� ������ ��� 5 ������ � &�� � ��� 9��� �� �� +������ ��'�������� -� ���� �� �� ;������� < � @����� � $� :' �22 ;��'����� :����������������� 8��� ��� � �� �� ���������A @=��� @��=�����A �8��B� � ��������� � ���� 8��B ���������� ��A �&� ����'!�� ��� ����� �������A ,�9� � ������������� ��%

Page 2: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

����� �����6 ���� ������ �� �� ��� �!����� ��� ��� '����� !� ��� �� ������ ��� ���� 5�� � � ���� ��������� 4-��6� +��� ����% ��� ��1 ��� � ��� ���� ��� ��� � � ����'����� �� �������� ������ ��� '����� !� ������������ �� ��� ���������� � �� ������� ����� � ����'����� �������� ��� �� ��� � ��� �' � �� �'�� ��'�'!��� � �� � 4+@6 ���������% 9��'�� � ������� ��1 �!� �� 4��1� �� ��1(6 ���� !��������� ��� ��3����� ����% ���� ��1 ������������1( 4���� ���� ���"� �� ��C6 ��� ��������� ��� ������� �� � ��� !��� ���"� �� !� ������� � ���������� ����� �� �� ������ ��� ���� ��� ����� �� ��'����� ���7�#�% &�������� ������ ���� ������ ���� �� ��������� ���� ��� ���� ��� ��� �� �� ��� ������� �� ��������� ������ ������ �@ 4D;'�@6 ��� ������ �������� ��� ����� � ����� 4D;�6 ��$� �(�%

?� ���� ���� ���� ���"� ���� ���� � !��!������������ ��1( ��� ���� �� ���� �� �� ����� ����� !�� �� ���������� ��� �� �� ����� ��������� � '������ ���� �� ��� ������� �� ��� ��� ���������������� �� :,'$ ��)�%

:� � ������ ���� ������ ���� ���� � !��!����� ������ � ��������� ������� ���� � ������� ���� � ������������� � �� ������������� � ���3� ��� � ������'���� ����� ��� ��� �� � �!���� ��.� �2�% :� �� � ����"� ����� ����� ��� ������ �� � �� ������ ���������'� �� �� � !��!���� ��������� �� ��� � ��� � ��� ����� �������� � ���� ��� � �!�� � � ������ ����������� � =�� � !��!����� �� ������ �� �� ���� ��� ���������!�� �� � ��� ������%

� ��� � �� �����

����� E��� � !��!����� "��� �!�� ��� ���� � �� � ! ���� ����� ����� �� ������ �� ��� ������� � ��� ������� ���������%; !��!����� "��� ������ � 5&�&� ����������� " ���2F ;89 �� �"� � ������� �'������ ���������� ��� 4#%# ����� ����G�6 �� �(H8% :���� ����� ����� ! ����� � !��!�����"��� ��� � ��� �"� !������ ��� ���"� � ��� �������� �� #%#�� �� ����G� �'������% �� ������ ��� ���� !�� ���� �� �����'��� � ��� ���� ��� "�� �������� ����� ����� �� ��� � ���'�� � �� #%# �'������ �� !� �� ����� ������� �� �� � ���� �3 �'����� �� ���� �� ��� ��� � ����� � �� �� �����G� �'������%D� � �������� � ��������� "�� �!������ !��"��� ���������"� � ��� �������� �� �$%# ����G� ���� ��� �� #%# ����G�������% ���� ��� ����� �������� ����� "��� ��������� ��������� � � 3 � � ������% ;�� ���� ����� ����� � !��!�����"��� ���"�� ��� ���"� �� ����� !�� �!���% �� ����� �����"��� ���� � ����� ���� 3 ��� ��� ����� ��� � ��� �������%

������� �������������������� ����� ������� ������� ����� *D "�� ��������� ���� � !��!����� �� ����� !�� ���� '���� ����% *������ ������ �� �� "�� ���� �� �� � �� ��� ���'��" �� ���� � � �� ����/ ������ #�'+ �8+ �++ +�+ ++ �+'��A ��� ������ ��'��8 �8+ �++ �+� +��+� ++'��A ��� ���!� "�� #�'�8 �+8 8� 8 888�� 88'�I% >� �������� ��� "��� ������� =�� !� &'&�� ���+������', �� 9� ���� 4; ���=�� :����6% ,�!��� �� �� ��� ���!���� !���� �� "��� ���� �� �� �� ����� !�� � 5 �'��!��� ����� ������ �� ��������� 4@���� ���� &����� �� +������6%��� *�'�8* ������� "��� ����� ������ � �%�F ������� ���

��� ����������� �� � ��� � ���� ������� ����� ���!���� 4:8D@ ���� ���� ����� >� �6 !� � ���� !���� �� ������4@ �'*�� ,�!������ ��� E������� 8�� �%� -96 ��� � �% E�'!� � =�� �� � ����� "��� �������� !� ������ �� �� ���� �� '�������� ����� ��!�� �� " �� � � �� �� �� ��� '� ��� ��� �;�! ���J����� �� ����� �� �����������%

!����������� 8���� "��� ����� � � ��� � !���� ����� � ���22 ����G� ������� � ����G� K�E�> � � ����G� &�9> �#%# ����G� ������� �2 ����G� E���9� � ����G� !��=�� � ���� ����G� �&9;� 2%� �� 5D��� ��� 2%� �� *D��� !� ������������=�G���" �� 4����� ������6% ����� �� "��� ��������� ��(%#F 959 ����������� �� ��� ����� ��� !������ ����� ��� ��� ����������� �����% ��� ��!! � ���������� ��� '��CG��1( ��'�� "�� � ���� ���� ��� !� 5� +% @��� 49����� ��������� '��� *������� :��� ���'+������ 9" �=������6 ��� "�� ��� �� �� �� �� �� �/�22 � �"��� �2 �*:9'!������ ��� �� 4�@9�6!���� 4�2 ����G� �*:9'8�� �#2 ����G� D�8�� 2%�F �"����2� �E )%26% 9�������� ! "�� � ���� ��� '��!! � ! ���J���'�� �� ����� �� �����������%

!����"���������� ;�� ��������������� � !��!�����"��� ������ �� ����� ������� ��� � ���� " �� �@9 ��� � ���" �� �F ���������������� � �@9% ; ��� ����� "��� ������'! � =�� " �� �� ��� 1'�22 4�2 � �� 2%�F � �@96� ��!������� �2 � � � ;89 4�F � �@96� � ���� ��� ��!���� �� H8����� ��� " �� ��� �� ���� ��� !��� 4�� � �/#2 � �� ��6% ������������ ��� !��� ��������� � ���� �������� 4;:�86'��!����� ��� '��!! �� "�� ����� �� � �/�22 � �� �� ��� �2 � �%@���� �� ����� ����� " �� ��� ���� �� ��� ��� ��� =�� ��"��� ���� �� ����� ������ � �� �� ��� �� ���� ��� !���% 8����"��� ���� ��������� � ���� ��� �!������ " �� � ���� � :&�'� >����� 4>����� >�� ��� 8�%� ������ L����6 �� � ��'�22D ��� 4D ��� 8�%� ������ L����6 ����������� � ��������%

������ ��������� 8������ � ��� ��� �� "�� ������� ���� '���� ����� " �� ��� ��=8��� 8������'� ���� K � 4&����������!��� ������ >��%� -96 �� �� ����� !� ��� ��� �������%��=��� ��� � �� "�� ������� �� ������� � ������������� �� �� �� #�2 M # ��� � �� ��� ��� �� �� )# M # ��� ������ ����������% ��� ����������� ������� � ��� !� �22 ���� ���������� ���� � � �2# � !��!����� ��!���� � � " ��# ����G� �� �� �(H8 ������������ �� �22 �! ����� -� ��%

!�������#���$ �������� :������� �'$ "�� ������� " �� ���@ �9���� 8��������� :��������� � � 4@ �9���� :������'� ���� 8���� ���� 8�� �%� -96%

����������� " ����� �������� ������� 8������ � ����'�� ���!���� ������ �� "��� ������� " �� ��� ������������� ! �'������ �� ��� "��������� �� � # 2 �� #)2 ��� �� ��'��� !�� ���� ���� ��)�% -����� �����" �� ������� ��� ����� '����� "��� ���� �� �(H8 � ��� �� ��� � ����� � ��A��# ����G� D�8�� # ����G� K8�� � ����G� &�9> � � ����G�D��E�> � #%# ����G� ������� # ����G� D�E8>� ����2 ����G� E���9� � ��� �!����� �� �������� �� 8��B

� ����G�% :� ��� �!����� �� 8��B� �+� 2%# ����G� "�� �����%�� ����������� ����������� "��� ���� � � ���� �'�����,9#2 ����������� ����� 4���� �'������ D��"���� 8���%�-96 �3 ���� " �� � ���������� ����� ���������� ������������ ��� � ������ � �� ����%

��������� "��� ��%& �'��%&(� "��������� 8���� "��� ������

" �� ��� ���������� �� ����� ;�� �G& 4@���� ���� &��'�� � @ ��� � ��� +������6� �� � ���������� �� �� � ����G���� �2 � � �� �(H8 � � ��� �� ���� �� ����� � �� 8��B% �������� ��� ����� "��� � ���� ��� ��� ������� �� "��� ������ � �

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � ��������� �� .

Page 3: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

���������� ����� ���������� 4�(�86 ���'"��������� �������'���� ����� 4���� �'����� ,9#26� �3 ���� " �� � 3���= �'����� ������% &��������� �� ����������� "�� �!�� ��� " ���������� �� ��� ��� �� "���������� �� � 2 ��� �)2 �� ��� ���� �� �� "��������� �� #2# ��% ?� �������� �8��B� � ������� �� ���� � �� ��� ����� ��� � �J��� �� �� ������ �� ���'������� ��� �� ������ ��� ���� 8�� � �� �� ��������� 48��6�!��=��� �� 4@=��6 ���� 2%�# �� �%2 ����G��%

����

?� ���� ���� ���� ���"� ���� ���� � !��!����� ��'����� ��� ��1( �������� ��� ���� �� � �������� � ��'���� �� ������ ���!���� ������! � �� ���������8��B ���� ��� ����������� ������� �� �� � ���'��� ���� �� ��� �� � ��� �� ���� ���+��� ��������4��)� ��� ; �%�8� ����"�6% ,��� ��!�� �� � � �������� 4�� ����G�6 �������� ������ ���� ��1( �����'���'��������� � ������ ���� �� ��� � ��� � �� �� �'����� � ���� ����!�� ����� �� �� ��� ��'� �� ���������������� � �� � ��� ��� � ��% @� �� 4�'�6 �� ���� ��!� �� �� !� ��� ��1( ���� �� @=�� �� ������ �������� �� �� ��� ��������� � ��� ��� ��������������� ������� �� � ��"�� �� ����� ���� � � !��!��������� �� � ���� 4; �%�;� ����"�6 �������� " �� ��"�������� 4; �%�@6 ���������� ��% :� ��� �������� ��� ����G� @=�� � �� ������ ���������� �� �������� ����� ��� ��������� �� � �!�� #2F �� ��� �����4; �%�+� ����"�6 ��� ������� ���������� ���� ����!������% ��������� 4� '�6 �� ���� �� " ��@=�� ����� ��� ���������� �� ������� ��� ��'� �� ��������� ������ �� ���� ��� ��� � �� �����4; �%�E� ����"�6% & ������ ��� ������ �� ��� ���'���� ������� �� "��� ���� ������ !�� ��� ��������� ��� �� ���� � ���� �� �� !� ��������� " �� �����1( ������� �� KD$� 4��� ���"�6%

9� ���� �� �� ��� ��1( ��������� � ���"� �� �� �'��� ������� � �� ������� ���� ����� ���7�#�� ���� � '!��!����� ���� ��"����� �� ������ �� �� "� "��� �'�!�� �� ������ ��� ������� � ������ ��������� ����1( ��� ��� �� � � !��!����� ���"� � # ����G� ��'����� � � � ��� ����� �� ������� ���� ��)�% >� ������������ ��� � ���� �� " �� ��� ������ �� �� �� ���'�� ��1('��������� ���������� � �� ������ ������'���� �� ���� � =�� � !��!����� �� ��� ���'������� � ��'���� �� �� �� �� ������� @=��% 9� ���� �� " ����� ��� �� 4# ����G�6 �� ���� ����� � ���� �'���!�� ���� �� ��� ��������� �� �� ������ ����'��� � 4; �%�5� ����"�6 ���� "�� ��������� �������� ��� ��� ������������ � � �% � � ��� ���'������� ���� � ��� ��!� � �� ��"�� ���������� ���� "�� ���� ��'������ !� @=�� 4��� ���"�6% D��� ���� ���� ������� ��!�� �� � � �� ������ ���������� ��� " ���� �� ������ ����� ���� ������� �� ���� ��4; �%�86% �� ������ ������ ��� ���'������� � ��� � '�� �� ��1( �� ���� �� � � �� ������ ���������� ���"� ���� ������� ��'��������� ��� ��� �� �� ���'���� �% �� � ���� �� �������� "�� ��� ����� �� � � ����

����� � � !��!����� ���� � �� ���� � #%# ����G� ��'���� 4; �%�6% 8������ ��� ��� �� "�� �������� ������!� ��� ���� � � ��1( �� ! ���� �� � =�� �� 4������"�6%

?� ���� ����� ����� ��� ������ �� � �� ���������������� ��� �� ��� ������� �� ��� ���' ���������'�� ����� �� :,'$% :� �� ���� �� "��� "� ���"������ ������������ �� ����� :,'$ ������� ���� � '!��!����� �� ��� " �� ����!�� ��� ����� �������4�&6 ��� !����� �� ������� � 4,�96 ��)�% E �� ��'���� ���������� �� �������� ��� ������� �� �� � ����'� �� !��� ���� !���� ��� �� ������ ���� � ���4; �% 6% ?� ���� ���� �� �� !� "����� !� ������������� �� �� �� ����� :,'$ ������ �� �� ��� ��"��� ���'�� ��� 4�2 ��� �2 ����G�6 ��� �� � ������ �� �� ������"�� ������ �� � ���� ���������� ��� � � �� �� ��'���� �� ����������� �� ����� � ����� �� ��0 �����'����%

�� ���� "������ �� �������� ��� � �� �� ��� ��1(�������� ���� !� ������� !�� ��� ����� �������� "� ����� ����� ��'��������� ������ ���!���� ��'����� =�� �� ��� ����������� 8��B ��������� �"� ��'������� ���"� �� !� ��������� �� ��1( �� ���� ��%��� �� ��� �� ������ �� ���������� �� 4�8#26 "����� ������ �!�� ������� !� � �� ������ �� � "��)22 ��� ))2 ����G� ��� � !��!����� ���� � �� ��#%# ����G� ������� ������� ����� � ��� �������� ���!����� �� ������������ 8��B 4; �%#6% >� ��� ���'������ ��� ��� �� �������� "�� �������� "��� ��'������ � ��� �������� �� �!����� �� ������������8��B% E �� ������ ���������� �� ���� � =�� � !��'!����� �� ��� ������� = �� ������ �� ��� ������ �� ��1(���� �� @=�� 4; �%#6� ����� ���� �� ��� ��"�� ���'� �� �����% @��� ����� �!�� ��� �� #%# ��� �� ����G������� ������� ������ �� �� �!�� ��� ���� @=������������ �� 42%#7�%2 ����G�6% ��� �8��B� ������� � �������� �� �� "�� ���� �������� !� � �� ��'���� ���������� �� 4; �%$6A !���� �8��B� �� ��� ���'����� "�� ��� � ������� � � !��!����� ���"� � �������� � �� ������ ���������� ��� ����� �� ������ ��(( M �# 4� N ��6 ��� (� M �� 4� N ��6 � ������ ��� �� ������ ���������� ���� ������� �����% �� ����� � ��0 ��������� "��� ������ ���� � � �� ���������������� ���� "� ��� �� � �� ����� ��� ������ ��8�� ���� ���� �� ��� �� ��)� ��� ���"� �� !� ���!��� ���� �� ��� 8��B ������� ���� ������ � ����� � '!��!���� ������ ���% :� ��� !��� ���"� ���� ����

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � �����������#2

�������� &�������� ��� ������� ��� ����� !� � �� ���������������� ��% 8������ � !��!����� ���"� �� #%# ����G� ������4�6� #%# ����G� ������ ��� 2%# ����G� @=�� ��� � � 4�6�#%# ����G� ������ ��� � ����G� @=�� ��� � � 46�#%# ����G� ������ ��� � ����G� @=�� ��� � � 4�6� �������� !��!����� ���"� �� �� ����G� ������ 4�6� �� ����G� ��������� 2%# ����G� @=�� ��� � � 4 6� �� ����G� ������ ���� ����G� @=�� ��� � � 4�6� �� ����G� ������ ��� � ����G�@=�� ��� � � 4�6% &��� � ��� ��� �#2 O

Page 4: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � ��������� ��#�

Page 5: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

���� 8�� � �3 ������ " �� ��� ����� ������ ��� ����� )���� ��0 �������� ��$�� ������� � � �� �'��� �� ��� ��� ������ �� ��0 ���������%

:� ������ ��� � ������ �� ������� !�� ��� �� � ��'������ ���� � � ��� "� ����� ����� ��1( �������� ��'����� �� � � !��!����� ���� ���� � ���� ����� ���'��� ���� � ���% *������� ������� ��� ������� �� ����*D ��� ����� � ����� "��� ��"����� ��� �������!� ��� �������� ��!�� 4� �6 �� � � ��� �������� �� �� ������ ���������� ��� 4; �%(6% :� ����� ��� ���������� 4�2 � � ��� ��������6 ��!�� �� � � �������� ���������� �� ����� � ����� �� � ��1( ��'����� �� 4; �%(6% �� � ������ � ��� �!������ �� ��'����� � ���� ������� 4��1('���� � !��!�����6 �� ��������� ��������� ��� ������� �� ������ !� @=��"��� ��� �� �� ������ �� �� ������������ � ��������� ��� !����� ��"�'������ �� �� ��1( "�� �����'����� !� �� �������� ��������� ���� �� � ������ ��������� �� ��� �� ������� �%

?� ���� �������� ��� ������� � ��� !� �� �� �����1( �������� !� ��������������� " �� � ���� � ���� !���% :� � !��!����� ���� � � �� ������ ������'���� ���� � ���������� ��� '��1( ! ��������� � ��'� �� ���!���� �������� �� ��� ����� =�� �� ��� ��'� ����� �� ��� ���� 4; �%)86% 9�� ��1( �������� ��'�������� "��� ���� ������ �!������ �� ���� ���� ��������� ���������� ��� 4; �%)6%

�������

:� "�� ������ �� � �������� ���� ��� ��1( �� ���� ��!���� "�� ���� ��������� !� ���� �����% :� ����"����� ����� ���� ���� ���� ����� ��� � ���� ��'����� ��1(� ��!� � �� � ��"�� ����� ���� ���� �������(�% E��� � !��!����� ������� ��1( �� ��� �*D��� ����� � ����� ��� ��� ������� �� �� ��1( ������ ��� ����� ��� �� @=��% ������ � ���� �������1( ��� !��� ����� ���� " �� ���� � � ���� ���� �� !��!����� ��� ��� 3��� �� � �� �� ���� �� ��� ���� �'��� ��� � �� � ����� �� ��� �� �� �������% -�� � ������� ��� � "�� ��!��� ���� �� "�� �������� ������ ������������ � � � � ������ ��� � ��� �� ��� '���� ��� ��1( �������� !� ��" � � !���� �� �'����� ���� �� ���� ���� ������� �� �� !� ���'��� ������� ��� � ��� ��� ������ ���� ��� ������ �� � ��)7���� ��� �� � ������ �� � �!� ���� �������� ��'

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � �����������#�

�������� ������ �� � �� ������ ���������� �� �� ���������������� ��% ; !��!����� ���"� �� #%# ����G� ������ 4�6�#%# ����G� ������ ��� # ����G� �� ��� $ � 4�6� �� ����G������� 46� �� ����G� ������ ��� # ����G� �� ��� $ � 4�6%� ��� ��� �� �� � ��!�� �� ����� "��� ��� ��� " ���22 ����G� ��� � � !��� ��% ���"� �� �� �� ������ ����' �� ��� ���������� ��% &��� � ��� ��� �$2 O

Page 6: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

������������ �� � ��� �� � ��� ������� ��� ��������� �� ��� ����������� ����� ��% :� "� ���� ������� ����� �� ���� ��� � �� �� ������ ���!��������'������ � �������� �� !� ��"�'�������� �� ����������� � ��� ����� ���� � � � ���� ���� ��������'���� �� ��� ��������%

������ � "�� ���"� � ��� �.(( ���� ����'����������� � !��!����� ��������� � ������! � = ���� �������� ����� ��" ���"� �� !� ��1( � ���� � ���� ������� �� "�� ��� ��!�� �� ���� � !��!���� �� '���� ������% ; !��!����� ��� "��� ���"� ��� !� ��

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � ��������� ��#�

����� ������ �� ���� ���� ��� ��� � �� ������ ���������� ���� ������� � ��� ��� ��% 8���� "��� �� ������ " �� # ����G��� ��� ������ �� ��������� ����� " �� 2%�F �� ��� 1'�22��� ��!���� ��� ��� �� ����� � �� � ��� �������� �� ��� ���'���� �!������% 5��� ��� �������� M 95 �� �� �� ���� ������'����� ���� � � ���� ����� ���� �������� �� ����� � ������� ��'��� ���% 9 =� �� ���!��� �������� ���� �� ��� ����� !���%� #%# ����G�� � #%# ����G� B ��� � �� ����G�� � �� ����G�B ��

������� �� ����'���������� ����� �� ������ ���'!���� ������� =�� ��% ; !��!����� "��� ��!���� � ��� ���'������� ������ �� �(H8 �� � ���������� �� �� # � �2# �����G�� � ��� �������� �� �22 ����G� ! �'������ ��� �� ������" �� ������ �� �� 4�� �6 �� @=�� 46% :� � ��� ��� �'�!�� �� ��� � ����� ��� � ����G� 8��B% :� �� ��� ��!�'� �� ��� � ����� ��� �� ����� 8��B ��� 2%# ����G� �+�%5������ =�� �� "�� ��������� �� ���������� �� ��� ��� ���� ������ !� �2 ����G� K8�% 5��� ��� �������� M 95 �� �� �� '���� ����������� ���� � � ���� ����� ���� �������� ������� � ������� ����� ���% � #%# ����G� ������� � �� ����G�������

����� ������ �� ������������ � �� :,'$ �������% 8���� "������������� " �� �& 4�22 ����G�6 ��� ,�9 4� ��G��6 ��� � ���� ���� ���������� " �� ������ �� �� ���������� ��� ���� �% � ��� ��� �� �� � ��!�� �� ����������� "��� " �����"���� ������� ��� :,'$ �������% ������� ����� ������� "���������� " �� �& �� ,�9 ����� �� ���� ��� �� �� ����� 4��������6% >��� !���� #%# ����G� ������% 8����� !������ ����G� ������% 5��� ��� �������� M 95 �� � � ������'����� ���� ����� �������� ����� �����

Page 7: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

��� ��J�� �������� �� ������������ ���� � !� ���� ����� ���� ��� ���� ������� � ��� ������� � �� �����'������ ��� ����� ��� � � ��� ���� � �� �% ;�����'����� ���� ����� ������� ��������� �� �� " �� ������������� ����� ������ ���� � ��� �� � ��� ������ ���� ������� ���� ��#�% ���� ���� ���� � ���� � ��� ��'��������� �� ��� ����� ����� �� ������������� � ���'��� ��� ���� �� �������� ���� � ��� ���������� ��� ��� ��� ��� ������� � ������������ ���� � ��$� �!'������ � � �!����% ;�� ����� �������� � !��!��������� ���� !��� �������� �� � ���� �� � �� �������� ��� ����� ��� �� �� ������� ��������� � � �!�� ��!J���� ��(�%

?� ��� ������ ���� ���� ���� ���"� ���� � �������� ���������� �� ������ ���� ������� ���� ��'������� ��� �� ������ ���!���� ���������'�����'

���� �������� � �8��B� �� ������ �� �� ��� �������'���� ����� ��� ��� �� :,'$ ��� �D; ��)� �.�% �����1( �������� ��� � ����� 8��B' ������ �� ��� � ����� � ���� ������ �� ������� �� :,'$ ���� ���� � '!��!�����% ��� "� "������� "������ ��������� ���� ���� ���� !� �������� !� ������������ �% >������� ���" ����� �� !��"��� ������������ � �����1( �������� ����� =�� �� ��� ���� ��% >� ��� �������� ��!�� �� � � �� ������ ���������� �� � ���� ������ �!�� ������ ��� ����� �� ������� �� ���� � �������� !� �� ��� ����� � ������� ������� �� ���'���� ����� =�� �� ��� �� ��� ������ �� �� ������������������ ����� =�� �� ��� ��� ����� �� ��� ���� �� ��� ��� �� ���� �������% &����� �� �� ������ �� ������� �� �� ��� ���������� ��� ��� ���"� !� "�"��� ��� !� ���� ��� � ���� "��� ������� !�� ������ �������� ���� � � �� �� �� �� � !��!����� ��'����� �� � �� ������ ���������� ��%

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � �����������#

��� �� � ������ �� � �� ������ ���������� �� �� �8��B� �'������� ��� ���� !� �� 4�6 ��� 8�� 4�6% ; !��!����� "��� ��!���� � ��� ���������� ������ �� �(H8 �� � ���������'� �� �� �2$ �����G�� ��� �� ������ " �� ������ �� ������ �������% 9� ������ �8��B� ���������� �� "�� ������� �� ���� �������% 5��� ��� �������� M 95 �� �� �� ���� ������ ��� ������� � � ���� ����� ���� �������� �� ����� � ������� ����� ���� #%# ����G� ������� � �� ����G� ������

���!�� � ��1( ������� �� �� #%# ��� �� ����G� ������% *�'�8* 4�6 �� ��1( �*D ��� ����!��� 4�6 �� ��1( ����� ���������� ���� ���� ����������� 4����� �6� � !��!��������"� � #%# ����G� ������ ��� $ 4����� �6 ��� �2 4����� 6 ���'����� �� � !��!����� ���"� � �� ����G� ������ ��� $ 4����� �6��� �2 4����� #6 ��������% D��� ���� ��� �������� !��� � ������� ���A ��� ��"�� � �� � ���� � �� �����'����� �� !���

Page 8: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

>� �!������ ��� ���� ���� ����� � ����� !� �� ����� ��������� �� �� ��� ���������� � �� ������'������� � ���3�% 8����� ������� � ������������� ��������� � ������� ������ �� ��� ����� �� !��"���� � � ������� �� ��� ����������� ���� ���� �������� �!��3��� ������� ����� ��� �� !� ����� ������ ���"�� ������� � ��� ����� �� ������������� ����3� � 2�% :� ��� ���3�� � ����� �� ��� ���"�� ���'��� ���"��� �������� ��� �������� � � � ����!�� ���

������� �������� ��� ������ ����� ���� � ���� ����� ���� ����� ��%

9��� � =�� �� �� �� ���� ���� � �������� ���� ���� ������ �� !� "� �� ������������ � ����� � '���������� ������ � � �!�� � ��� ����� �� �� ������ ���� �� ��" ������ �� ���������� �� � �������������� �� �� :,'$� ��� ������� �� � ��� ������������ ������ ������� � ��� ������ "��� ��� �� ��� ������� � �� ������ �� ���������� �� � �� ����� ������� ����� ������!�� �� � ��� ������% �� � ������� ������ ���� ��� ����� ��������� � ���3� ������ ������� � �� � ��" ���������� � ������ �� �� ����� ���� ����������� ��� ���� ��������� ������������� ������� � � �!�� � ��� ���� � �� ��%

:� �� � � �"� ��� ����������� �� ���� ������ �� ��'������ !������� " �� ���� �� !����� ��������� ������� ���� ��� ���� �� �� � �������� � ���� �������'���� ��� ����� � ��������� �� � ������ ���� ������ :: � �!����%

��#�*���������� �� � "��� "�� �������� !� ��� :��� ��& � ���� ��� 9� ��� � � *������� 4 2F ��� $2F6� ��� :��� ��D�� ���� *������� 8��� � 4������ ���J��� �� @ �����������6���� :��� �� ���� �� �� ��� 8����� *������� 4:*86� ���������� :���� ��� !� � ���� �� ����� ���� ��� = ���� >������ ����� ������� 9% ���� ;������� :����% ;% 5 < �� � � ���� " ������ �����"����� ������ !� ��� 8����� �� @ ������������ -� '���� �� �� ;������%

�����

�% 5��= �� EE� ?������� 5� 4�.. 6 *�������� ��� ���� �� �'����� ��� ��� ������ ���/ �!����� � ��� ��� � ��� !� ������ �������� ��������� =�� ��% ��������� *�� $/ .7 $$

�% @�������� L&� ������� L5 4�..26 �� �� ��������� ��������� �������� �� �����/ ���� ���� ��� � �� � ����� ����������� �� ������ ���% ������ ��������� 9� �/ � 7�(

�% �������� 5� +�!�� 8 4�.. 6 :������� �'�@ ������ ����� ������� � �������� �� �� ��� � ��� � �% L @ �� 8����$./ �#�.#7�#�2�

% ;����� 5� 8� �== �� ;��=�� 9� E��� 9� 5 < �� � � ;4�..(6 �� ���� � ������ �� �� ������� �'�� ����������� � ����� �� ����� �� ������ " �� !����� �� ������� � L ��� &�� �)#/ #(.7#)�

#% ;������ 8� *������ &� @����� �� 5 < �� � � ; 4�..#6 ��'���������� �� ��� ����� � ������� � ����� �� ����"��� ���� 9����� �����% @ ����� L ���/ �$.7�(

$% 8��� C'�� K���=� ��� &� ���� �� ��% 4�..$6 ������� �� ��'���������� ������ ��� � ��� � � ����/ ������ �� �� ����'����� ��������'��� ���� ����������� ��������� � ������'�����'��� ��� ���7� �����% ������ ������ ��(/ � )7�#$

(% ,�!�� ����'&�� �� &&� 8����� L� , ���� ;� <������ +4�...6 9������� ���� � � �� �� ������ ��� ��� ��� ���������� ��� �� ���� ��� ������� ������� ��� �������� �� L ��������� #./ �((7�)$

)% @���� �� ;� &��� ��� ?L 4�.))6 ������ �� �������� ����� ��� ��� ��������� ������ ��� ��� �� � ����� ��� �'�� � ������� � �������� � ���� �����% @ ��� � @ ����� ���.(2/ ���7��.

.% ; ����� 0� @����� 8� ,P��� 8 4�...6 �� ���� � �� ! � ���� ������ ��������� � ���� ���������% L @ �� 8��� �( /(##7($�

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � ��������� ��##

���"��� ��1( �������� � ��� !� �� �� #%# ��� �� ����G�������% ; !��!����� ��!���� ���� " �� ��� ��������� !%4�6 ��!���� � #%# 4�6 �� �� ����G� 46 ������% 9������"��� ��������� ��� ��� ��� �� ����� !�� � &���� ��� ����������% ���"� �� ���� � ��'� �� �������� ������ ������� ��� !� ��� ��� '��1( !% &��� � ��� ��� .22 O

Page 9: High glucose modulates P2X 7 receptor-mediated function in human primary fibroblasts

�2% !!����� � &�� @������� + 4�.. 6 �� ���������/ �������� ��� � �� �� ��1 ��� ��0 �� ���������Q ������������� $ / #7 (#

��% ,�� � K5� 9� � K� @���� L� L� � 5 4�..�6 ������'� �� ���� �� �� �� �� �������� ���� ���� ����!�����'�� �����% ���� D��� ��� 9� -9 .2/ #���7#��(

��% @��� +D� *��������� ; 4�..)6 ��1/ ��� ������� � �����'��� ��� ������������ �� 5�� 5�� *�� #/ ��#7��.

��% 5 < �� � � ; 4�..#6 ��� ��C ��������/ �� ��� � �� ���� � ��� ��� �������� �� ��� ���� �����% :����� ����� �$/#� 7#�)

� % ;����� 5� 8� �== �� ;��=�� 9 �� ��% 4�..(6 �������������� �� ����� :,'�� ������� !� ��� ��� �� ��� �� ���� ���C �������� �� ���� �����������% L :����� �#./� #�7� #)

�#% + @� @������ ,+� ? ��� L9 4�..)6 ����� �� �� ����'�����' ����� ����� �� �� 85�� ��� ,'������ � 485$�,6���� ����������� � ��� ���� !� ��� ���� �������� !� � �'������ ����������������% @���� .�/ . $7.#�

�$% ;����� 5� ?�����!��� 9� @��� &K� 9���=�'>������ K4�..(6 ������������ �� ��� ����� ������� �� �� ������D;'�@ ������ ��� ��C �� �������� !� ������ ���� ������' �� D;'�@ �$# 4*��6% L 8��� @ �� ��./ �$�#7�$ �

�(% ;����� 5� 9���� 8� 9���=�'>������ K 4�...6 ��1(G��C�� ����������'��� ���� ��� ��� �� �� ������� �� �� ������D;� � � ����� �� �����% L @ �� 8��� �( / ���2#7����2

�)% 9�� � � 8� �== �� &����� � ;��� � *� 5 < �� � � ;4�...6 E��� �� ���� � !��!����� � � ��� ������� � �� �'��� � ��1( �������� ������ �� �� ������ � ������� ��������� �� ��� :,'$ �������% L 8��� 9� ���/ �.(7�2#

�.% ��������� �� E�" ���� �� ;����� :� D ������ K� @����� +4�..(6 &��� !��!����� ��� ����� ���� ������� � � ���� � '�!�� � �����������% � L K ���� 5 � �./ .��7.�)

�2% ����"� &� 9������=��� >� &�������'K!��� �8�9�������� L� @��"� 8@� D���� & 4�..(6 &��� !��!�������� ��� �������� �� �� � �!�� � �����������% D������ 5 ������������ ��/ �7#2

��% 8����=���� �� 9���� D 4�.)(6 9 ���� ���� ������ ��*D ����� �� !� �� � ��� � � � ����� �����'������'���������� ������� ��% ��� @ ����� �$�/ �#$7�#.

��% ,����� -K 4�.(26 8������� �� �������� ����� �� �� ����� �����!�� �� ��� ���� �� !����� ������ � % D���� ��(/$)27$)#

��% C�������� �� @����� <� *����� � � ==� �� 5 < �� � � ;4�..26 *�������� �� ���� ����������� �� ��������������% ::% ������������ �� ����� ���� ����'��������� ��� ���� 5D ���������� ��% L :����� � #/ �# #7�##2

� % 9���=�',����� �� E�� 8� *��� 9 �� ��% 4�..)6 ���������'��� �� ����� ������� � ��� ������ � �� ������ �����'� �� ����� � � ��CG��1( ��������% � L ���� �� �(#/ ;.$�';.(�

�#% 8�� ���'9 ��� *� ������� � �� 5� 8��� @ ���� � * �� ��%4�...6 ��CG��1( ��������'��������� ������� � �� ����� �' � �����% � L ���� �� �($/ 8���.'8�� (

�$% @������� 05� 5��� ,� K �� @;� ?� ����� D� @������� +4�..(6 ����� ������� �� �� � ����� ������ �� �������� ���� ����� ����� �� )���� ��!����% L @ �� 8��� �(�/��#)�7��#.2

�(% 5 < �� � � ;� < ��"����� <� ;����� 5 4�2226 >� ��� ������ ��� ��1( �������� � ��� ���� ������% :�/ &� !'!����� � ��� &? �� ��� 4���6 E���!��� �� ����� ������������������% 9�� ���� <������ @��� � 4 � �����6

�)% ?��� ?8� ,�=���"�� �*� @����� *8 4�..)6 8��� � � '!��� � ��������!���� ��������' ���������� ������� ����% L @ �� 8��� �(�/ � 2#�7� 2#)

�.% & ������ 8E� 8���R 5� &�+� �� &� 9���� *� 8 ���&& 4�..)6 ������� ������ �� ��� ������ �� � ������ � ��� �� ���� �� �����% ���� D��� ��� 9� -9 .#/(�( 7(�()

�2% 8��� �� &,� , � LE� ����'*��� ��� �� ��% 4�..)6 8��'��� �� ������� ���� � � ����� �� !� �������� �� �� ��'�����% ���� D��� ��� 9� -9 .#/ �#(�#7�#( 2

��% &����� ,� C������'&���� >� &������� �+� ���=�� &�+�� ���� ,L< 4�...6 ���� �� ������ �� �� �����'���� '� �� �� �� �������� � � �"�� �� ���� �� ����� !� ������ ��%L @ �� 8��� �( / ��(2�7��(2(

��% *�!��� 98� K��=����� �� 9 ���� L@ �� ��% 4�..(6 ,��� ���� � ���������������� ��� � �� " �� �������� �� ���� ��� '��� ��% L ��� &�� �)#/ �#�7�$�

��% *�=����� �� E����� ,� ;� ��!��� : 4�.((6 ������ �� ��'������ �� �� ��� ������! � �� ������� �� �� �����'������ ������ �� ���� ���� � ���% L @ �� 8��� �#�/ #) 7 #.2

� % 9 ���� � &�� �� ;� ������� E �� ��% 4�...6 ; !��!����'����� ��'������������ ���� � ������� ��� � "��� ���� �%8�� ��� ������ .�/ .#7�2�

�#% 9���� �� D� � 8E� 5���� 5� 4�..(6 :������� �� �� ����'���� �� ����� ��� � !��!����� " �� ��� � �� � !� � ���"����/���� � ������������� �% ������������ � ��./ .7�#

�$% ���� ��� *� 0 � L� 9�� �� ,� , ,K� < !��� + 4�..(6 ��'������ �������� ������� � � ������ �� � � !��!����� ���� ��� �'��������� � �!�� � ��� ���� " �� �����������%L � 9�� D������ )/ ����7���.

�(% ?���� &� 9��� ��� :8� L������ @� ������ * 4�..�6 !'������ ��� ��� �� �� �������� ������� � � � !��!����� ����D:55& �!J����/ �� ����� ��� �� �!������ �� ���� � � �������� ����!�� ��% 5 �!���� �/ #)�7#).

�)% 9�� � � 5 < �� � � ;� 9�� �� � @����� � &� 8������ +�D���� � * 4�..$6 :����������� ���� � ����� �� !� � !��'!����� ���� ���' ��� � ��������� � �!�� � ��� ���� " ����� " ���� ��������� �� ��� � �����!� �� �% K ����:�� #2/ $�)7$�$

�.% &������� &� ;J ��"� K� -�� ��� :� D���� ; 4�..$6+�����'��������� ������� �'$ ��� ���� ������ � ���'��� ������ �� !� ���� ��� ������ !���� ��������� �� ���% 5 �!���� #/ .# 7.#.

2% ������ &,� @��������� 8& 4�..�6 :�������� �� � ������������ ���������% 8 ����� �� ))/ )227)2�

�% ,����� &� ,���� 9 4�..(6 �� ��� ����� �� � ����������� ������ � � �!����% 5 �!���� *�� #/ �. 7��#

�% E������ 9&� ,���� 9� *������� �� ������� K� ,����� &4�..)6 &����� �� ���� �������� ����� � ����� � �!J����" �� ���� � � �!���� ��� � ���� �!�� � �!J���� " �� ���" ���� �� �� ������� �� ������ ��% D ���� L &�� ��./��.7��

%9�� � �� ��%/ E����������� � ��� �� ���� � �����������#$


Recommended