+ All Categories
Home > Documents > Hydrogen peroxide plays a critical role in the defence response of tomato to Cladosporium fulvum

Hydrogen peroxide plays a critical role in the defence response of tomato to Cladosporium fulvum

Date post: 16-Oct-2016
Category:
Upload: stephanie-borden
View: 212 times
Download: 0 times
Share this document with a friend
10
Hydrogen peroxide plays a critical role in the defence response of tomato to Cladosporium fulvum STEPHANIE BORDEN* and VERNA J. HIGGINS { Department of Botany, University of Toronto, 25 Willcocks Street, Toronto, Ontario M5S 3B2, Canada (Accepted for publication 12 August 2002) The presence and localization of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) in compatible and incompatible interactions of Cladosporium fulvum and tomato were studied by light microscopy using the histochemical stain 3, 3 0 - diaminobenzidine (DAB). To obtain synchronous development of the fungus, inoculation of tomato was by injection of conidia into the intercellular area of the spongy mesophyll. Conidia were suspended in scavengers of reactive oxygen species (ROS), i.e., catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), and mannitol, or the nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase inhibitor, diphenylene iodonium (DPI), at the time of inoculation. Conidia and initial germ tubes in compatible and incompatible interactions caused a localized host reaction characterized by H 2 O 2 production and a variety of plant responses which included protein cross-linking, callose deposition, and accumulation of phenolic compounds. Further growth of an avirulent race was restricted by similar host responses whereas, hyphae of a virulent race grew as in a normal compatible interaction. In the incompatible interaction, treatment with CAT, SOD, or DPI generally resulted in increased fungal length and a decrease in the percentage of sites with host responses. These results support previous suggestions for this host±pathogen system of a critical role for ROS in limiting colonization, and this appears to be partly as a signal molecule for plant defence responses. * c 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: reactive oxygen species; catalase; superoxide dismutase; callose; cross-linked proteins; phenolics; Lycopersicon esculentum; disease resistance. INTRODUCTION The Cladosporium fulvum±tomato interaction is a well- described model system to study plant±pathogen inter- actions [20 ]. This interaction is based on a typical gene-for-gene relationship, i.e. for each dominant resis- tance (R) gene present in the plant, there is a matching dominant avirulence (Avr) gene present in the fungus [12 ]. Resistance in a gene-for-gene interaction occurs when an elicitor, the product of an Avr gene in the pathogen, and the product of the corresponding resistance gene in the plant, interact directly or indirectly and trigger the activation of an array of plant defence responses which result in an incompatible interaction [22 ]. Plant responses occurring following perception of an avirulent pathogen by host cells include reinforcement of the cell wall, production of potentially antimicrobial compounds such as phytoalexins and pathogenesis-related (PR) proteins, cell death, and induction of the rapid generation of reactive oxygen species (ROS). The C. fulvum±tomato interaction is typical of this model and all of the typical defence responses have been characterized, although not all incompatible interactions result in cell death [14 ]. Although, binding of elicitor by the R gene product is suggested, there is no evidence for speci®c binding between Avr and resistance gene products in the C. fulvum±tomato interaction [28 ]. One of the earliest plant responses to pathogens is the rapid generation of ROS, such as O 2 ,H 2 O 2 , and HO . [3 , 39 ]. Various enzyme systems have been proposed as the source for ROS in plants including a pH-dependent cell wall peroxidase and/or a nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase system similar to the system found in mammalian neutrophils [4 , 26 , 44 ]. In the C. fulvum±tomato interaction, there is evidence that suggests a NADPH oxidase system is responsible for production of ROS [36 , 46 ]. Physiological and Molecular Plant Pathology (2002) 61, 227±236 doi:10.1006/pmpp.2002.0435, available online at http://www.idealibrary.com on 0885-5765/02/$ - see front matter * c 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Abbreviations used in the text: CAT, catalase; DAB, 3, 3 0 - diaminobenzidine; DIC, dierential interference contrast; DMSO, dimethyl sulfoxide; DPI, diphenylene iodonium; MES, 2-[N-morpholino] ethanesulfonic acid; NADPH, nicoti- namide adenine dinucleotide phosphate; NBT, nitroblue tetra- zolium; p.i., post inoculation; ROS, reactive oxygen species; SDS, sodium dodecylsulphate; SOD, superoxide dismutase. * E-mail: [email protected] { To whom all correspondence should be addressed. E-mail: [email protected]
Transcript

�������� ������ � �� ������ � ���� �� ��� ������� ������� �� ��� ���� ���������� �� �

��������� ���� ��� ����� �� ��������

���������� ����� ���������� ���� �� �������� ������ ���� ������ ��� ��� ������

��������� ��� ���� ��� �� !" ��#�$� "%%"&

�'� ���$���� ��� ����� (�� �� �� ')���#�� ����* �� ��""& � ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$�� ���������� ����� ��� ��+��� ,��� $��� �� �) � #'� + ���$���) �$ �# �'� ' $���'�+ ��� $�� � -. -�/� �+ �����( � �� ���&� �� ���� � $)��'�����$ ��0����+��� �� �'� ���#�$. ������� �� �� ��+��� ,�$�) �1��� �� �� ��� � � ��� �'� ������������ ���� �� �'� $���#) +�$��')��� 2�� � � ,��� $�$������ �$��0��#��$ �� ����� 0� �*)#�� $��� �$ ���&. ���. ������$� �2��&. $�����* �� � $+���$� ���&. ���+��� ���. �� �'� � ��� ��+ �� ���� �� � ������� �� �'�$�'��� ������& �* ��$� �' � ���. � �'��)���� ���� �+ ����&. �� �'� � +� �� ������� ��� 2�� � � ��� � � �� #��+ ����$ � ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$ ���$�� � ����� (�� '�$� ����� �� �'������� (�� �) �"" ������� �� ��� �0�� ��) �� ����� ��$���$�$ ,' �' ������� ����� � ���$$/� �3 �#. �����$� ����$ � ��. ��� ����+���� �� ���'���� � ��+�����$� 4���'�� #��,�' �� �� �0 ������ ���� ,�$ ��$�� ���� �) $ + ��� '�$� ��$���$�$ ,'����$.')�'�� �� � 0 ������ ���� #��, �$ � � ���+�� ��+��� ��� ������� ��� �� �'� ���+��� ��� ������� ��.�����+��� , �' 2��. ��. �� ��� #�������) ��$����� � �����$�� ���#�� ���#�' ��� � ������$� � �'���������#� �� $ ��$ , �' '�$� ��$���$�$� �'�$� ��$���$ $������ ���0 ��$ $�##�$� ��$ ��� �' $ '�$�5���'�#��$)$��+ �� � �� � ��� ���� ��� �� � � + � �# ����� (�� ��. ��� �' $ ������$ �� �� �����) �$ � $ #��� +���������� ����� ������� ��$���$�$� �� "%%" ��$�0 �� �� ���� 6��� ��� � #'�$ ��$��0���

��������� ����� 0� �*)#�� $��� �$7 ������$�7 $�����* �� � $+���$�7 �����$�7 ���$$/� �3�� ����� �$7�'���� �$7 ��������� ����������7 � $��$� ��$ $������

������������

�'� ���������� �����5��+��� ������� �� $ � ,���/��$�� ��� +���� $)$��+ �� $���) �����5���'�#�� ����/��� ��$ 8�!9� �' $ ������� �� $ ��$�� �� � �)� ���#���/���/#��� ����� ��$' �. ��� ��� ���' ��+ ���� ��$ $/����� �"& #��� ���$��� � �'� �����. �'��� $ � +���' �#��+ ���� �0 ������� �#��& #��� ���$��� � �'� ���#�$ 8$�9���$ $����� � � #���/���/#��� ������� �� �����$ ,'�� ���� � ���. �'� ������� �� �� #�� #��� � �'� ���'�#��. ����'� ������� �� �'� �����$���� �# ��$ $����� #��� � �'������. ������� � �����) �� �� �����) ��� �� ##�� �'���� 0�� �� �� �� ����) �� ����� ������� ��$���$�$ ,' �'��$��� � �� ���+��� ��� ������� �� 8��9� ����� ��$���$�$

������ �# �����, �# ������� �� �� �� �0 ������ ���'�#���) '�$� ����$ ������ �� ������+��� �� �'� ���� ,���.������� �� �� ������ ���) ��� + ���� �� ��+�����$ $��'�$ �')�����* �$ ��� ���'�#���$ $/������� ���& ����� �$.���� ����'. ��� ����� �� �� �'� ��� � #������ �� ������� 0� �*)#�� $��� �$ ���&� �'� �% �����5��+��� ������� �� $ �)� ��� �� �' $ +���� ��� ��� �� �'� �)� ���������� ��$���$�$ '�0� ���� �'������� (��. ���'��#' ������ ���+��� ��� ������� ��$ ��$��� � ���� ����' 8$&9����'��#'. � �� �# �� �� � ��� �) �'� " #��� ������� $$�##�$���. �'��� $ �� �0 ����� ��� $��� :� � �� �#���,��� #�� ��� ��$ $����� #��� �������$ � �'��% �����5��+��� ������� �� 8�'9�

�� �� �'� ���� �$� ����� ��$���$�$ �� ���'�#��$ $ �'���� � #������ �� �� ��. $��' �$ �

" . �"". ��� ��

8� . �(9� ��� ��$ ��()+� $)$��+$ '�0� ���� �����$�� �$�'� $����� ��� �� � �����$ ����� �# � ��/������������� ,��� ����* ��$� ���;�� � � ��� ��+ �� ���� ��� ������� �� �'�$�'��� ������& �* ��$� $)$��+ $ + ����� �'� $)$��+ ����� � +�++�� �� �������' �$ 8& . �) .&&9� �� �'� �% �����5��+��� ������� ��. �'��� $ �0 ������'�� $�##�$�$ � ����� �* ��$� $)$��+ $ ��$���$ ��� ���������� �� �� �� 8�) . &)9�

*+����,���� ��� �������� *���� *��+�,� �"%%"& ��. ""<5"-=�� >!%�!%%=;�+���"%%"�%?-@. �0� ����� ��� �� �� '���>;;,,,� ���� ����)���+ ��

%AA@/@<=@;%";B / $�� ����� +����� �� "%%" ��$�0 �� �� ���� 6��� ��� � #'�$ ��$��0���

�����0 �� ��$ �$�� � �'� ��*�> 2��. ������$�7 ��. -. -�/� �+ �����( � ��7 ��2. � C����� �� ����������� ������$�7�D�. � +��')� $����* ��7 ���. � �'��)���� ���� �+7D��. "/8-/+���'�� ��9 ��'���$����� � �� �7 �����. � ��� /��+ �� ���� �� � ������� �� �'�$�'���7 ��. � ������� �����/(�� �+7 �� �. ��$� ������� ��7 ��. ����� 0� �*)#�� $��� �$7���. $�� �+ �����)�$���'���7 ��. $�����* �� � $+���$��

�/+� �> $���'������E'��+� ����+� �� ,'�+ ��� �����$�������� $'���� �� �����$$��� �/+� �>

' ## �$E�����)������������

����+���� �� �� �� ����� ���'�#�� �����3 $ �����$���� ����� ���� �� � 0�� ��) �� �)��$ �� �������. ����� �#����� �� �# �$ �� ��� + ���� �� ��+����� 8�. . �� . &�9. �$� ��� � ����� �� �'� ���+�� �� �� ���� ,��� ���� ��$ �'���#'�* ��� 0� ���$$/� �3 �# �� ���� ,��� $��������� ����� �$8� . )9. �$ �� ������ �� '�$� ���� ����' 8��9. ��� �$ �$�������) $ #��� +������� �� ��� 0��� ����'�� ���������$���$�$ 8�� . ��9�

D�$� $��� �$ �0�$� #�� �# �'� ������� �� �� �� � �'��% �����5��+��� ������� �� '�0� �$�� ����/$��� :��� � ���$ �� ����� $�$���$ �� �������� ��+��� ����$ 8&�9.���)�����$ 8�(9. �� ,'��� ���0�$ 8�.9� �� $��' $��� �$. '�$�����$ ��� �$�����) ��� $ +��������$�) FF�$$������GG �) ������ 0��) ' #' ���������� �� �� �� � ���� �'�$� $��� �$ ����� ���H�����) ��I��� �'� ��$$ ��� ���� �� �� � �'� �����������5���'�#�� ������� �� ,'��� �� � ��� ���������� ��$���$�+���) �� �� �� #�������) ��� ��� 0��) ����� (���

�'� �$)��'�����$ ������ �� $��+���� �������� �� �)�% ����� 8�&9 '�$ +��� � � J���� �� H���� ���� �'����H����) �� �� ����+���� �� ��� ��'�� �������$���$�$ �'�� ������ ���'��#' �� K � 8(9 $�##�$����'�� #���� ����$ ,��� ����$$��) ��� � � �� �# �'� ��$ $������$���$� � �'� �% �����5��+��� ������� ��. � ## �$8$)9 $'�,�� �'�� �'� �*������ � $��$� ����� ��$ ��������,'�� ��+��� ���I��$ ,��� ��������� �) �1��� �� ����� � � �� �)��$$ $��+���� �������� ��� ������������� �1��� �� �� ��� � � �� ���' 0 ������ ��� �0 ������ ����$�� �% ����� ��� ���� +�$��')�� �����$ ����� (����$���$�$ $��' �$ ���� ,��� ����$ � ��$ ��� ���� ���,� �#8$)9� ���+ ����$ �� 0 ������ ����$. '�,�0��. $��� #��,, �'��� ���$ �# � 0 $ ��� ��$���$� � +�$��')�� ����$. ����'�$� ')�'�� ���� ��� �� ����� (� '�$� � $$�� , �'�������'�� ����� �� �� ������� ��$���$�$� �� ������$�. �'�#��,�' �� �0 ������ ����$ $ H� �3�) ����$��� 8$)9�

�� �'� ���$��� $���). �'� ������� �� �� �� ,�$�*�+ ��� �� ������ � ��+��� �����$ �1��� ��/ ���������, �' ��� � � �� �% ����� , �' � 0�� ��) �� �'��+�����# /��� �����+���$ ��$ #��� �� ������ �'� �+���� �� �

" ���""� �'� �C��� �� $��' �����+���$ �� �'� �*���� �������� (�� �� �� �"". �� ���#�� #��,�'. ��� �� '�$� ����,��� ��$���$�$ ,�$ �����+ ����

����� �� �����

*���� ��� ��,�� ��������

����$ �� ��+��� �0� D���)+�3�� ��� 3��,� #���$ �����$ $����� �� �% ����� ��� ��++���) �������� �� �$ �/!&��� ����/ $�#�� � � �� �/(. �������� �) +��� ��� $��:�#�� � � �� �$���� $'�� 0 � :0� ���3���$$�$. ,��� �� # ����)���� ��� ���+ �� ��3�+�. ��$� ���� ��� ���� ������������ ���� �#. K�#�� �#��. �'� ���'������$� ����$,��� #��+ ����� � L/���� ���$� � ���3$ ����� � �#$��� � (�� $� � ����+ *. #������ �����$� #��, �# +�� �+.

���+ �� ���� ������� ����. ��. M�����&� �����$ ,���#��,� � � #��,�' ���+ , �' � != ' �'������ ���"%% �� +�" $�!& ��� � ��+�������� �� ""�2�

���� "�- �� �% ����� � $����� N @?M�& �$�� � �' $ $���),�$ �� # ����) $������ ���+ �0� ������ � � $���'������� � #����'��$� � !LA%. ��� +� ��� ��� �� �A%�2 �@% O #�)������ 4��#�� �������$ ,��� $���������� �� �/A1� �� �#�� 8��9 ��� +� ��� ��� �� ""�2 , �' � != '�'������ �� �"%% �� +�" $�!&�

*���� ���������

4�� ���)����� ������� ��. ��� � � ���+ !? ��) ����% ����� �������$ ,��� �������� � $��� �� %�%@ O�,���/"% � ,���� ��� ,�$'�� �) ����� ��#�� �� �'���� +�$ , �' �'� :��� $�$���$ �� �!%@ ��� � � +��!& �������� ��� ��C�� , �' �� , �'��� �'��+�����# ��������+���$ �� ������ ��� 2�� � �� $�$���$ ��$ ,��� �1����� ��� �'� ���* �� $������ �� ���)�����$ �� !? ��)��� ��+��� �����$ �$ �# � $��� �� -% �!;" ������ �� � ! ��$)� �#�� �������� 0��). ���)�����$ ,��� $���)/ ���������, �' �� ���+ (�� �� ��� 0�� ��� � � ���� �'� ���)�����$������� ���������� �����$ ,��� +� ��� ��� � � ' #''�+ � �) ��0 ���+��� �� ""�2 ��� �'� ����� �� �� �'��*��� +���. #�������) "? �� ?A ' �� �

*+������,���� ����������

��� $���� ��$ ��� �'��+�����# ��� �����+���$ ,��� ���$'�)�������� ������ ���' �*��� +���. ��� ��� ,��� ���+ � #+�2�� ���� 6�� $. D. M�����& ����$$ $����� ��'��, $��2�� � � ��� �1��� �� ,��� $�$������ �> !!%% M +��!

2�� �2��. ���+ #����,����� ��,��. �2 !�!!�!�=& � !% +D

"/8�/+���'�� ��9 ��'���$����� � �� � �D��& ��C��. ��=�@7 L%% M +��! $�����* �� � $+���$� ���. ���+ ��0 ����)�'���)��$7 �2�. �2 !�!@�!�!& � D�� ��C��7!!%% M +��! 2�� � L%% M +��! �� � D�� ��C��7@ +D +��� ��� � D�� ��C��7 @ �D ��� � %�%@ O� +��')� $����* �� ��D�7 � #+�&� �'� ������� ��� ����*��� +���$ ,�$ !% +D D�� ��C�� �*���� ��� �*��� /+���$ , �' ��� ,'��� %�%@ O �D� ,�$ �$���

0����,���� �1��������

2��)�����$ ,��� ��+�0�� �� �'� ��� ��� �� !". "?. �� ?A '�� � ��� ,��� :*�� ��� �������� (�� � �� � �# L@ O �0;0&��'����. ������� � �'����� ')����� �"�@ # +��!&. +�������� #��$$ $� ��$ � +�� :�� ��)��G$ +�� �+ 8�'9. ����*�+ ��� , �' �� �)+��$ ���0 $ �P<% + ���$������)+��$ �+�� ��. ����. D��0 ���. ��, Q��3. M�����&�H� ���� , �' � C����� �� ����������� ������$� ���2&��� �$� � # ��� + ���#���'$ ,��� �������� , �' � ����� # ��� ��+��� �� �#��$� � ��$���+���$ ����. ������ �#�� #'�$. D�. M�����& ��� �����$$�� , �' �+�#� ��� ���$$���,��� �D�� � 2)���#���� �$. � �0�� ��� �#. D�.

""A �% ����� ��� 2% 3% 0�,,���

M�����&� 4�� ���' �*��� +���. "@ $ ��$ ,��� �*�+ ������+ ���� $������� ��+��� ���)�����$ ���+ ���� � C����������$ � ��� � � !%%&� ��) �1����� ��� � � �'�� ,�������$ ��� ��)��� �'� � � �� ,���� $ �� ,��� ������� ��������� ��$��0�� ��$� �)�'�� ���#�' ��� �'� ���$���� ����$���� �� 0 $ ��� ����� ��$���$�$ �$$�� ���� , �' '�$� ����,���5')�'�� ������� $ ��$ ,��� �������� ��� ���' $ �� ��'� �����+���$� M� ��������� �������$ ,��� ��� ����$$��)�����$� �� �'� ��$�� �� �� �� ��$��0�� ��$ �� ,���5')�'��������� $ ��$. ��� �$ �1����� ����$ � ,' �' ��� � � ,�����$��� �����) $'�,�� $�� � �# �� ��'�� 0 $ ��� ��$���$�$�

�������� +���,�� ���1��� ��� �����1���

�� ����� (� �"" ��� �" � ��+��� ���)�����$ �

��$���$� �� ������� ��. �� �H����$ $���� �� �" +# +��!&�� -.-�/� �+ �����( � �� ���& � D�� ��C�� �� %�@ O� ������� �����(�� �+ ���& � D�� ��C�� ,�$ �1����� ��� �'� ���* �� $������ �� ��+��� ���)�����$ " ' ��-% + � ������ $�+�� �#. ��$���� 0��) 8$�9� �����. �'�$�� �$ �������� �'� �"" ��� �

" ���$��� ,'�� �'� $�� �$,��� �1����� ��� �'�� ����+���� �# �0�� �'� ��*�-% + � ��

" � �� " ' ��""&� � $$�� ,�$ ������� ��������$$�� �$ ���0� ��� ' $����# ��� �*�+ ��� ���

�������� ����/������ ���� 4��� ������� ������ ��� �+������

�� !". "?. �� ?A ' �� �. ��������� ���)�����$ ,��� ���/����� ��� ������ �� �� ����� � ���$$/� �3 �#. �����$�����$ � ��. �� �'���� � ����+���� ��� �� 0 $��� (� ����/� �� $ ��$ , �' �""/ ������ ���$$/� �3�� ����� �$. �+�� :�� 0��$ �� 8�$9 �� �'� ��������� ��$�� ��� �)�'�����/2'� $���$�� �� ��� 8&$9 ,�$ �$��� �� 0�� ��$ � +�$�� �. �1����� ���)�����$ ,��� :*�� ��� �������� (�� ��� � �# L@ O �0;0& ��'���� ��� �'��. �� ��+�0� $����������� �$. ,��� $��+��#�� � ! O ��� ��� - ��)$ �� A%�2��'� ���/ �$������ ����� �$ ,��� $��$�H�����) $�� ���, �' %�! O �,;0& 2��+�$$ � ���� �2��$�� ����� 6�����/��� �$. ����. K�$���. �. 2�����& � ?% O �0;0& ��'������� !% O �0;0& ���� � �� � ��� "% + �. �����,�� �)��$�� � �# � ?% O �0;0& ��'���� ��� !% O �0;0& ���� ��� �� � $$�� ,�$ +������ � �'� ��$�� � �# $���� �� ���� #'� + ���$���)� �'� ��+��� �� ���� ,���5')�'��������� $ ��$ , �' ���3 ���� ������. �� ��� �# ���$$/� �3������� �$. ,�$ ���������

�� ������ �����$� �� ����� �� $ ��$. ��������� ���)��/���$ ,��� :*�� ��� �������� (�� � �� � �# L@ O �0;0&��'����. �'�� �'� � $$�� ,�$ $��+��#�� � %�! D R�?

��C��. �� L�%. ��� "? ' �����,�� �) $�� � �# � %�%! O�� � �� ���� �4 $'�� �� ��� :� 2��. 4� � 6�,�. ��.M�����& � R�? ��C�� ��� " '� � $$�� ,�$ +������ ��'� R�? ��C�� ��� �*�+ ��� ����� ���� � #'��� I����$����� ����$ �� �����$� ����$ � �� I����$�� �� #'�)����,� 4�� $�+� �*��� +���$. �'� ���$���� �� �����$� ���

���$$/� �3�� ����� �$ ,�$ �������� $ +��������$�) � ��������� � $$�� �) $�� � �# �'� ��� ������� 2��+�$$ ����� $�� ��� ���)�����$ �$ ���0� , �' �� � �� ����� �'���+��� �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ , �' �����$�.��� , �' ���' �����$� ��� ���$$/� �3 �# ,�$ ���������

�'���� � ��+�����$ ,��� �������� �) ���� � �� �����$ �# � �������� �) G� �� �� ��� 8�&9� �������������)�����$ ,��� :*�� ��� �������� (�� � �� � �# L@ O�0;0& ��'���� �'�� $��+��#�� � @% +D � ����� ��C�� ��-�@. ��� ! '. �����,�� �) $�� � �# , �' %�%@ O ���� � ������ �D��'�$�� 2���+�� ��� ���. ���,���. �.M�����& � � ����� ��C�� ��� "% + �� �'���� � ��+�����$,��� 0 $��� (�� �$ ����;���H�� $� $�� � �#� �'� ��+��� ������ ,���5')�'�� ������� $ ��$ , �' �'���� � ��+�����$,�$ ���������

����������� ��������

�'� ���� ���$����� �����$��� +���$ �� ')�'�� ���#�'$ ����������#�$ �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ �������������+ "@ ����� �� $ ��$ �� ���' �� ���� ���)�����$ ��������+���� K'��� ����$$��). �'� ���$ �� ����$���+�� ��,�$ �$�� �� ���+�� (� ����� 2�+��� $��$ �� � C������$��$��0�� � ��� �*��� +���$ ,��� +��� �$ �# �'� �������G$�/��$� ,'��� *� %�%@ ,�$ ���$ ����� $ #� :����� ����*��� +���$ ,��� ������+�� �, �� , �' $ + ��� ��$���$7�)� ��� ���� ���+ ��� �*��� +��� ��� $'�,� � ���' :#����

�� ���

��5������ ������6�� ��� ��������6�� ����������� ���7����� ���������

�������� �� �) +���$ �� �1��� �� �� ��� � � �� �% �����,�$ � �$���� ���'� H�� �� ��$��� $)��'�����$ ��� � ��#��+ ��� �� ��� ���#�� #��,�' � ��+��� ���)�����$������ ������� �� �� �/! ��� �/( ����/ $�#�� � � ��$ ����+��� �0� D���)+�3�� , �' ��� � � �� �% ����� ���� "�-.�'� ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$ ,�����$��0��. ��$���� 0��)� D����$��� � $ #�$ �� � $��$� ��'� ��+��� ��� ������� �� ,��� �0 ���� �$ ����) �$ !% ��)$����� ������� �� ��� ������� ����$ �� ���$��) $������� �#+)��� �+ �� �'� ���* �� $������ �� ��+��� ���)�����$��������� ��. �� ��) ��'�� +����$��� � �0 ����� �� ����� ��. ,�$ ��$��� �� ���)�����$ � �'� ���+��� ��� ������� �� ���$���$ ��� $'�,�&� D ���$��� � �*�+ ��� ���� �� 0 ���� ��� � � �� "? ' �� � ,�$ �$�� ���� ���) �$+�$� ��� � � '�� #��+ ����� ��� ')�'�� #��,�' ,�$ $� ��� + ��� ����#' �� +��$���� ��+�� �# �� !" ' �� � ,�$ ��$��$�� � � � �� �*��� +���$ �� ������ ����) ������� �� ���""�

0���,�� ���1��� ��� �� ������� � 2����$��� �+ ���0�+ ""L

����8���� �������� 1�,�� �������

�� ����� (�� �� $�� � �#. �� ��� 0� �� �'� ����+���� ���� �

" . ,�$ ��$��0�� � ���)�����$ �� �'� � +� �� ��$�!" ��� "? ' �� �& �*�+ ��� � � �'�� �'� ��+��� ��� �� ���+��� ��� ������� �� ���$���$ ��� $'�,�&� �� � $$��, �' �� $�� � �# �� ������ �"". � ���� $'/���,� ��)����, ���� � ���� ,�$ ���$��� �� ����� ���� ,��� ����$ /� ��$ �'�� '�� ���+�� ���� ��� � � �� #��+ ����$84 #� !��& ��� ��&9� �' $ $�� � �# ,�$ ���:�+�� �� ��$��� :� ��� �"" �) ��/ �1��� �� �� �� ��� 2�� ��� ��������� ��+��� ���)�����$ " ' ������ $�+�� �#� �' $��/ �1��� �� $ #� :�����) ������$�� �'� ��������#� �� ,�������$ � ��$ , �' �� $�� � �# � ���' �'� ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$ ���$���$ ��� $'�,�&� � ��$� ����'� ���$���� �� ���H���� ����* ��$� ��� 0 �). �� ��� � �����'� �� ����� �� � �'� ���)�����$. �0��0�� ��/ �1��� ���� �� ��������� � $$�� , �' �� ��� %�! D �""� �� $��'���)�����$. �� $�� � �# ,�$ $��� ����# �'� �� ���+��

���� ,���� �� � ,���� �������. ��� ��/+ ��$ ������������)�����$. �� �������� �� ��+������� �� �'�� $��� , �'�� ,�$ ��$��0�� �� ,��� ����$ � ��$ ���� ')�'���

�$ ����) �$ !" ' �� �. ,��� ����$ � ��$ , �' ��$�� � �# ,��� ���$��� ,'��� �'� � � �� #��+ ����$��������� �'� �� ���+�� �� +�$��')�� ����� ���� ,�����'�$� ��/$�� ��� ,��� ����$ � ��$ ,��� $��� �$��� �� ��� ,��� �' �3�� �#$. �� �$ '���$ � $��� �� �'���� �� ��� ,���$ 84 #� !��&9� �� ���' ������� ��$ +�$� ���'� � � �� #��+ ����$ �������� �� $��� #��, �#. ������ � ���� #��+ ����$ ��0������ � �'� ��+��� ��� ������� ��. ��� �'�$� #�������) #��, , �'��� ���$ �#,��� ����$ � ��$ �� �� $�� � �# ��� #�������) ������������$� 84 #� !��&9� �� �'� ���+��� ��� ������� ��.��� � ���� #��+ ����$ #�������) ���$�� '�$� ����� ��$, �' �� $�� � �# $ + ��� �� �'�� $��� , �' � � �� #��+����$ 84 #� !��&9� 4�� ���� �). �'�$� ��� � ���� #��+ ����$, �� �� ���+�� �'� $�������) #��+ ����$ �� � $� �#� $'�'�+ ���+ �'� � � �� ��� +��)& #��+ ����$� �'� ����.

4��� !� 6 #'� + ���#���'$ ���2 ��� �$& �� ��+��� ���)�����$ �1��� ��/ ��������� , �' ���� "�- �� �% ����� ���$���� �# 0�� ��$����� ��$���$�$ �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ � ��+��� ��� ��/!& ��� ���+��� ��� ��/(& � ��$� ���$. "% �+&� �� $�� � �#. �� ��� 0� �� �"" �$+��� ����,'���$&. $ ���$��� �� $�+� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ � ���' ��+��� ��� ��& ��� ���+��� �����& ������� ��$ ��� ,�$ ��� ���$��� ������ � ����$� ')�'� ����#� ����,'���& � �'� ��+��� ��� ������� ��� ����+���� �� ���'���� �$ ��& �� � ������� $ �� �$ �������� �) ���� � �� ���� $�� � �# �����,'���& � �� ���+��� ��� ������� ��� ����� � ���$$/� �3 �# ��& �$ �������� �) 2��+�$$ � ���� �����,'���$& $ ���$��� � �'� ���+��� ��� ������� �� �� ������� $ ��$� �'� ���$���� ��

�����$� ��& � �'� $�+� � $$�� �$ � ��& ,�$ �� ����� �) �'� I����$����� �� �� � �� ���� ����� ���� � #'��

"-% �% ����� ��� 2% 3% 0�,,���

'�,�0��. ��� ,���5')�'�� ������� $ ��$ ������ ���'�� +��) ��� $�������) ')�'���

9:��� "�� ������,��� ��� �� -#�*0 1����� ��+�6���� "�� ����������� ��� ��,�� ,�4�+

�'� +�������� �� �� ����+���� �� � � + � �# �'�#��,�' �� �% ����� � ��+��� ���)�����$ ,�$ �*�+ ����) ��/ �1��� �� �� ��� � � , �' 2�� �� ������ �"".�� �� ��+�0� �

" . 2�� ��� �� ��+� ���. �'� ��

$��0��#�� +��� ���. ��� �'� ����� �* ��$� �' � ������ ��� �/! ��� �/( ��+��� ���)�����$�

�� �'� ��+��� ��� ������� �� �� �/!. �� $ #� :���� �����$�$ � ���#�� ���#�'. �$ ��+����� �� �'� D���������. ,��� ��$��0�� �� !" �� "? ' �� � � ��) �����+���$84 #� "��& ��� ��&9� �'� ��������#� �� ')�'�� �$$�� ����, �' �� $�� � �# �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$$ #� :�����) ������$�� � �� ��� 2�� � �� �����/+���$ �� "? ' �� � 84 #� -��&9 ��� �� � C������$ ,��� $����� !" ' �� � 84 #� -��&9 ,'�� ���) � ��, ��������#� ��$ ��$ ,��� ��/$�� ���� �'� ��# � �'� ���������� ���� $�� � �# �� $ ��$ ,'��� ')�'�� ������� �'� ����$. �$��+����� �� �'� ���+��� ��� ������� �� 84 #� -��& �����&9. $�##�$�$ $��,�� ����+���� �� �� �"" �� �'�$� $ ��$,' �' �����+ �����) �0��0� �� +��) ')�'��� �� "? '�� �. �� $ #� :���� � C������$ ,��� $��� � +��� ���#�����#�' � �'� +��� ��� �����+���. �$ ��+����� �� �'�������� �"<�< � !�< ��� -"�% � -�% �+ � ������� ���+��� ��� �����+���$. ��$���� 0��)&� ) !" ' �� �.��� �����+��� �� �'� ��+��� ��� ������� �� '�� ��$ #� :���� �C��� �� ')�'�� ���#�' 84 #� ?��&9 �� ��

�'� ��������#� �� ��/$�� ��� ,��� ����$ � ��$ ����')�'�� 84 #� ?��&9 �$ ��+����� �� �'� �D� ��������

�� �'� ���+��� ��� ������� �� �� �/(. �� $ #� :����� C������$ � ���#�� ���#�' ,��� ��$��0�� �� !" ' �� �. �$��+����� �� �'� D�� �������. '�,�0��. �� "? ' �� �.$ #� :���� �����$�$ � ���#�� ���#�' ,��� ��$��0�� � ���

10080604020

0

Mea

n l

engt

h o

f h

yph

ae (

µm)

(a) Cf–0 12 hpi

10080604020

0

(c) Cf–0 24 hpi

MES CAT SOD CAT+SOD

(b) Cf–9 12 hpi

(d) Cf–9 24 hpi

MES CAT SOD CAT+SOD

* * *

4��� "� �'� �C��� �� �'� �� $��0��#��$ 2�� ��� �� �����#�' �� ')�'�� � ��+��� ��� ��& ��� ��& ��� ���+��� ��� ��&��� ��& ������� ��$ �� �% ����� ��� ��+��� �� !" ��� "? ' �� � �� ������� ��. ��� � � ,��� $�$������ �> !!%% M +��! 2�� �!% +D D�� ��C��. L%% M +��! ��. �� !!%% � L%% M +��!

2�� � �� ��� � D�� ��C��� ���' ��� $ �'� +��� � �� ������ ���� ����$. , �' "@ $ ��$ ���'� �� �� ����$ �'�� 0����$ � C��

$ #� :�����) ���+ �'� D�� ������� �� *� %�%@�

80

60

40

20

0

Wal

l-h

yph

ae c

onta

ct s

ites

wit

hD

AB

sta

in (

%)

(a) Cf–0 12 hpi (b) Cf–9 12 hpi

* * *

80

60

40

20

0

(c) Cf–0 24 hpi (d) Cf–9 24 hpi

* *

* **

MES CAT SOD CAT+SOD MES CAT SOD CAT+

SOD

4��� -� �'� �C��� �� �'� �� $��0��#��$ 2�� ��� �� �� �'���������#� �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ , �' �� $�� � �# ���+��� ��� ��& ��� ��& ��� ���+��� ��� ��& ��� ��& ������� ��$���% ����� ��� ��+��� �� !" ��� "? ' �� � �� ������� ��. ��� � �,��� $�$������ �> !!%% M +��! 2�� � !% +D D�� ��C��.L%% M +��! ��. �� !!%% � L%% M +��! 2�� � �� ��� �D�� ��C��� " ' �� �� �� '��0�$�. �� �" +# +��!& ,�$ �1����� ��� ���)�����$� ���' ��� $ �'� +��� � �� �� ���� ���� ����$., �' "@ $ ��$ ���'� �� �� ����$ �'�� 0����$ � C�� $ #� :�����)

���+ �'� D�� ������� �� *� %�%@�

(c) Cf–030

20

10

0DMSO DPI

(a) Cf–060

40

20

0

(b) Cf–9

(d) Cf–9

DMSO DPI

*

*

Len

gth

of

hyp

hae

(µm

)W

all-

hyp

hae

con

tact

site

s w

ith

DA

B s

tain

(%

)

4��� ?� �'� �C��� �� �'� ����� �* ��$� �' � ��� ��� �����#�' �� ')�'�� ��& ��� ��& ��� �'� ��������#� �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ , �' �� $�� � �# ��& ��� ��& ���+��� ��� ��& ��� ��& ��� ���+��� ��� ��& ��� ��& ������� ��$ �� �% ����� ��� ��+��� �� !" ' �� � �� ������� ��.��� � � ,��� $�$������ �> %�%@ O �D� �� @ �D ��� ��D�� " ' �� �� �� '��0�$� �� �" +# +��!& ,�$ �1����� ��� ���)�����$� ���' ��� $ �'� +��� � �� �� ���� ���� ����$., �' "@ $ ��$ ���'� �� �� ����$ �'�� 0����$ � C�� $ #� :�����)

���+ �'� �D� ������� �� *� %�%@�

0���,�� ���1��� ��� �� ������� � 2����$��� �+ ���0�+ "-!

�����+���$ 84 #� "��& ��� ��&9� �� !" ' �� � �� $�� � �#84 #� -��&9 ,�$ $�� 3 �#�) +��� ���$� ����$ �'�� � �'���+��� ��� ������� �� 84 #� -��&9 ��� �'� ��������#� ����/$�� ��� $ ��$ ������$�� $ #� :�����) �� ���' !" ���"? ' �� � � ��� �����+���$ 84 #� -��& ��� ��&9� �� �'�+��� ��� �����+���. �� "? ' �� � � $+��� $ #� :����� C������ ,�$ ��$��0�� � +��� ���#�� ���#�'�!L�< � "�" �+ ��� "=�% � ?�- �+ � ������� ���+��� ��� �����+���$. ��$���� 0��)&� �)�'�� � ��������+���$ #��, $ #� :�����) +��� 84 #� ?��&9 ��� ,����$$�� ���� , �' $ #� :�����) ��,�� ��/$�� ��� $ ��$. �$��+����� �� �'� �D� ������� 84 #� ?��&9�

����/������, ����� ���� 4��� �������

2��$$/� �3 �# �� ����� ���� ,��� ����� �$ �� $����#�'�� �'�,��� '�$ ���� $�##�$��� �� �� � ������� ��$���$� �'�� $+�� ���� �) �"" 8�. )9� ����� � ���$$/� �3 �# ,�$�*�+ ��� � 2��/ �� ��/�������. ��� D�� �������� $$��� ����� �����+��� �� ��������� ��+��� ���)�����$, �' ��� �� ��+�0� $������ ���� ,��� ����� �$. ���$�� � �# , �' 2��+�$$ � ����. �'� ��+� � �# �$���������$$/� �3�� ����� �$ ,��� $��� + ���$��� ����) �$ ����$�� ��� ����$ �� ,��� ����$ � ��$ 84 #� !��&9� �� �'���+��� ��� ������� ��. 2�� ��� �� � � ��� ���$� �$ #� :���� ������$� � �'� ��������#� �� ����� �� $ ��$

, �' ����� � ���$$/� �3 �# �� "? ' �� �. �$ ��+����� �� �'�D�� ������� 84 #� @��&9� �� �'� ���+��� ��� ������� ��.�'� ��������#� �� ����� �� $ ��$ , �' ����� � ���$$/� �3 �#,�$ +��3���) ' #'�� �'�� � �'� ��+��� ��� ��� ,�$$ #� :�����) ������� � ���' 2�� ��� �� �����+���$�� "? ' �� �. �$ ��+����� �� �'� D�� ������� 84 #� @��&9���+��� ���)�����$ �'�� ,��� $���) ���������. ��� ��� ��������� �) +���$ �� �1��� ��. $'�,�� ����� � ���$$/� �3 �# ����� ��$ � ��+��� ��� �A O �� $��+���& ��� ���+��� ��� �== O �� $��+���& ������� ��$ ����� $��+�/��� �������� �� ���. �����$� �'� ��� �����+��� �� ��+�0�$������ ����� �$ $�0����) � $����$ �'� ���#� �) �� �'����)����� $������. ���) @% �������� �� $ ��$ ��� ���' ������� �� ,��� ��$��0���

������ ��� ����/������ ���� 4��� ������� �� ������ �����

2����$� ��� ���$$/� �3�� ����� �$ ,��� �*�+ ��� � �'�$�+� � $$�� �� "? ' �� � �$ �# �� � �� ���� ��� 2��+�$$ �����. ��$���� 0��) 84 #$ !��&. ��& ��� @9� K��� ����$ � ��$I����$��� �� #'� )����, � �� � �� ����/$�� ��� � $$�� �� ��� �# �'� ���$���� �� �����$�. ��� ,�$ ��$��� ���+������� � $$�� ������� , �' ��C�� ������ 2����$� ,�$�������� �� ,��� ����$ � ��$ � ���' ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$� �� �'� ��+��� ��� ������� ��.�'� �� $��0��#��$ 2�� ��� �� � � ��� $ #� :�����)

80

60

4020

0

(a) Cf–0 (b) Cf–9

* *

80

60

4020

0

(c) Cf–0

80

60

40

20

0

(e) Cf–0 (f) Cf–9

(d) Cf–9

* *

* *

MES CAT SOD MES CAT SOD

Cel

l w

all-

hyp

hae

con

tact

sit

esw

ith

cro

ss-l

ink

ing

and

call

ose

(%)

wit

h c

ross

-lin

kin

g (%

)w

ith

cal

lose

(%

)

4��� @� �'� �C��� �� �'� �� $��0��#��$ 2�� ��� �� �� ����� � ���$$/� �3 �# ��& ��� ��&. �����$� ��& ��� ��&. ��� ���$$/� �3 �#��� �����$� ��& ��� � �& �� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ � ��+��� ��� ��&. ��&. ��� ��& ��� ���+��� ��� ��&. ��&. ��� � �& ������� ��$ �� �% ����� ��� ��+��� �� "? ' �� � �� ������� ��. ��� � � ,��� $�$������ � !!%% M +��! 2�� � !% +D D����C��. �� L%% M +��! �� � D�� ��C��� �� $�+�� �# � +�. � $$�� ,�$ �������� ��� ������ �� �� �'� 0�� ��$ ��$���$�$� ���' ��� $�'� +��� � �� �� ���� ���� ����$. , �' "@ $ ��$ ���'� �� �� ����$ �'�� 0����$ � C�� $ #� :�����) ���+ �'� D�� ������� ��

*� %�%@�

"-" �% ����� ��� 2% 3% 0�,,���

������$� �'� ��������#� �� ����� �� $ ��$ , �' �����$������ �� "? ' �� � 84 #� @��&97 '�,�0��. �'��� ,�$ �$ #� :���� ������ �� � �'� ��������#� �� $ ��$ , �'�����$� �� ?A ' �� � � �'� �� �����+���. �$ ��+����� ���'� D�� ������� ����� ��� $'�,�&� �� �'� ���+��� ��� ������� ��. 2�� ��� �� �����+���$ ���' $ #� :�����)������$�� �'� ��������#� �� $ ��$ , �' �����$� ��+�$��H����) �� "? 84 #� @��&9 ��� ?A ' �� � ����� ��� $'�,�&����� �� �'� ��/���������� �� �����$� ��� ���$$/� �3������� �$ 84 #� @��& ��� � �&9. ��+����� , �' �'� ���/H����) �� ���������� �� ���' 84 #� @��&5��&9. �� �����'�� � �'� ��+��� ��� ������� �� ���#'�) @% O ��������� $ ��$ , �' �����$� ��$� '�� ���$$/� �3�� ����� �7 � ������$�. � �'� ���+��� ��� ������� �� ����� <@ O ��������� $ ��$ , �' �����$� ��$� ����� ��� ���$$/� �3������� �� �� �'� ��+��� ��� ������� ��. �����+��� , �'2�� �� �� � � ��� $��$���� ���) �'��#� �'� ��������#��� �����$� $ ��$ , �' ���$$/� �3�� ����� �$ ��� �'� ���+��� ��� ������� �� '�� +��3���) ��,�� ��������#�$�2��> �� -% O. ��> �� @% O&�

*+����� ������� �� ������ �����

���� � �� ���� $�� � �# �� ��� �# �'���� � ��+�����$,�$ #�������) �������� ��1����� �� ��� � � 84 #� !��&9 ����� ,��� ����$ � ��$ ���� ���#�� ')�'�� � ��+������)�����$� �'���� � ��+�����$ ,��� �������� �� �'�$�+� ����� �� �$ �����$� ��� ���$$/� �3�� ����� �$ ���,��� +��' ��$$ ���H���� � �'� ��+��� ��� ������� ��84 #� =��&9 �'�� � �'� ���+��� ��� ������� ��84 #� =��&9� ����� �����+��� , �' 2��. �'��� ,�$ ��$ #� :���� ������ �� � �'� ��������#� �� ��+��� ��� $ ��$, �' �'���� � ��+�����$ �� "? ' �� �. �$ ��+����� �� �'�D�� ������� 84 #� =��&9� �� �'� ���+��� ��� ����/��� ��. '�,�0��. �'��� ,�$ � $ #� :���� ������ �� � �'���������#� �� $ ��$ , �' �'���� � ��+�����$ , �' 2�������+��� 84 #� =��&9�

�� �� ���

�� �'� �% �����5��+��� ������� ��. � $ ����� �'�������, �# �'� ������� �� ���,��� �'� ���#�� ���������� ��� �'� '�$� � #��� �������. ��� $��$�H����$ #���� �# �0���$. +��) ����� 0� �������$ ��� ��� 0������')�����* � ������� �� 8$! . $$9. $)��'�$ $ �� �' � ��$�$��� #������$�$ 8�$9. ���� ����' 8$& . �&9. ��� �'� �����$� ���� 8�. . �( . &�9 ��� �+��# �'� ��$� �'������� (�� ���'�$� �������$� Q��. �'� �*���� �� ,' �' ��) ��� �� �'�$��'��#�$ $ �0��0�� � � + � �# #��,�' �� �'� ���#�$ $��3��,��

�'� #��� �� �' $ $���) ,�$ �� �����+ �� � ���������� � �'� �% �����5��+��� ������� �� ��� �0��0��� �����) �� �� �����) � ��$�� �� �# ���#�� #��,�'� ���0 ��$���� ���� ��� ���+ �� � ��� �����+��� �� ���� $�$���$ ���������$ 8&�9. ���)�����$ 8�(9. ��� ,'��� ���0�$ 8�.9$�##�$��� �'�� �� ��� �0��0�� � ����� ������� ����+��� �� �% ������ ��,�0��. $��' $��� �$ � ,' �'�� � ���$ ��� ����� ���� �� � ����� 0��) ' #' ���������� ��+�) �� ��� 3� �'� $��,��. ���$�+���) #������. �����$� ���� � ��� �) � #��+ ����� ���� �'� �*���� ��� ����� (�� �� ���"" ������� �� ,�$ ��� � ����� �) �� ������� ��+��'�� ,'����) ��� � � ,��� �1����� ��� ��+������)�����$ �� � ���+0��� �'� �$)��'�����$ ������ ��$��+���� �������� ��� �� � �� �*��� +���$ ���:�+�� �'���$���$ �� � ## �$ 8$)9 �'�� $'�,�� �'�� ���� $��� :� �),�$ ���� ��� �����, �# �1��� �� ������� ��� K� ��+/����� �'�$� ' $����# ����) ���������� �0���$ � ��+��� ������ ���+��� ��� ������� ��$ �'�� �������� �����, �# �'� � � �� ���/���� $��� :� '�$� ���� ����� �� �� �'� ��� � ���� � � �� #��+ ����� ����/���/#��� $��� :� $ #���$������ �� ������� �'�$� $��$�H���� �C���$� �� �' $ ������.�% ����� ���� "�- �,' �' �������$ ���L& ,�$ ��������� ��� �'� $�$���� ��� �0� D���)+�3�� ��/!& ��� �'���$ $���� ����/ $�#�� � �/( � ��� �'�� �*��� +���$ , �'���� "�?�@�L �,' �' ���3$ #��(& �� ���' �/! ��� �/(�����$ �������� ��$���$ $ + ��� �� �'�$� �������� ��� ����"�- �� �/! �����$ ������ ��� � ## �$. ������ $'��,��3&� �'� ��� � �� �1��� �� ���'� H�� ��+� ��� , �'�� $�� � �# ����,�� � �'��+�����# ��� �������' �,' �' $��0��#��$ �� �"" �2��& �� �

" ���& ����� ������� �� �'� ������$� �� �'� � +� �� ������� �� �� ��$��'� � �C��� �� �"" ����+���� �� ��� ')�'�� #��,�'$ +��������$�)�

�� +��) �����5���'�#�� ������� ��$ �� ��� ���/����� ��� �'� ���� �'�) ���) � ��$�� �� �� �� ���#��#��,�' $ ��� ����) ���� ������ ��+� �0 ����� $ ���0 ����) �'� ���������� �� + ���� �� 2��$. ,' �' ��� �$0 ������� ������$ ��� �# ���'�#���$ $ 8$� . &.9� D�����$��� �$ �� 9�4���� �+������+��� ��:� ��� � �� ��� 0 �)���$� ��$$ � $��$� �� ��� ��� 0 ����$ �'�� , ��/�)�������� � �� ��� �# �'�� �� +�) ��$� �� � 0 ������������� 8�.9� �� ��� � ��. �*�� � �� � ������$ �� ����H� ��� ��� �C��� 0� ���'�#���$ $ � �'� ����������

(a) Cf–080

60

40

20

0MES CAT

(b) Cf–9

MES CAT

Wal

l-h

yph

ae c

onta

ctsi

tes

wit

h p

hen

olic

s (%

)

*

4��� =� �'� �C��� �� �'� �� $��0��#�� 2�� �� �'� ��������#��� ���� ,���5')�'�� ������� $ ��$ , �' �'���� � ��+�����$ ���+��� ��� ��& ��� ���+��� ��� ��& ������� ��$ �� �% �������� ��+��� �� "? ' �� � �� ������� ��. ��� � � ,��� $�$������ � !!%% M +��! 2�� � !% +D D�� ��C��� �� $�+�� �# � +�.� $$�� ,�$ �������� ��� ������ �� �� �'���� �$ �$ �# ���� � ������� ���' ��� $ �'� +��� � �� �� ���� ���� ����$. , �' "@ $ ��$���'� �� �� ����$ �'�� 0����$ � C�� $ #� :�����) ���+ �'�

D�� ������� �� *� %�%@�

0���,�� ���1��� ��� �� ������� � 2����$��� �+ ���0�+ "--

����������5������� ������� �� �) ������� �# , �' �'��* ��� 0� ���$� 8.9� 2��$$/� �3 �# �� ����� ���� ,�������� �$. � �����$$ +�� ���� �) �"". ��$� ������$ ���� �0��0�� � ��$�� �� �# ���#�� �������� �� �� �� ���+������$ � �'� �����) ��,���) + ���,5�����) ������� ��8&$9� D�����$' �� ��� 8�$9 ����� �'�� �"" ������� �� ,�$�'� ���) ��$���$� � �'��� �����5���# ��+� ��� ��$ ������� �� �'� ������� ��� � +� ��� ����� �� ������� ��� �'��� ���� �� �'� ���# �� ���������� �� ��� �� �'�$� �'����*�+���$. �'� H� �$���� ����� �� �� ��+��� ���)�����$ �)���������+�� ������. �'� �� ���� �� �'� ���#�$ �� ���������,�$ ��+�$� ������) �� + ����� �) ������������ �1��� �� ��2�� �� �'� � +� �� ������� ���

�� �' $ $���). ' $���'�+ ��� $�� � �# , �' �� ���0���� �� �� �C��� 0� ����� ��� �"" ����+���� ��� �$ ����)�$ !" ' �� �. �� $�� � �#. �� ��� 0� �� �"". ,�$���$��� �� ����� ���� ,��� ����$ � ��$ ���+�� ��1����� ����� � � ��� #��+ ����$ � ���' �'� ��+��� ��� ��� ���+��� ��� ������� ��$� � + ��� �� $�� � �# ,�$ $����� '�$� ����� �� $ ��$ � �����) ����� ������� �� , �' �'������) ��,���) + ���, ���#�$ 8&$9 ��� � �'� �'��� ������� ��$ $��� �� �) D�����$' �� ��� 8�$9�

�� ����)$ �# �'� ��$���$ �� �' $ $���). � $ +������� ���� �I) ���$ ��� �'� ��$$ ��� $�����$ �� �""� � ������* ��$� $)$��+ $ + ��� �� �'�� �� +�++�� �� �������' �$+�) �� ��� $����� �� �� � �����$ 8& . &� . &)9� ��������$�. � $�+� �����5���'�#�� ������� ��$. �'� $������� �� ������$ �� �0��0� �*����������� ����* ��$�$ 0 � ������ �

" ����+�� ��� 8&9� ���'��#' ����� �* ��$�.�'� �����$�� $����� �� �"" � �'� �% �����5��+��� ������� �� 8$. . &)9. ��H� ��$ �

" �$ �'� � � �� ��. �������+��$ �� ����� (� �

" �$ �# �� � ���)�����$ �� ����4� ���� �� ������ �

" . ,'�� � $ � $�$������ ������$�� ���"". '�$ ���� ��$��0�� � ��'�� �����5���'�#�� ������� ��$ 8$( . ��9� �� �'�$� ������� ��$. �

" +�) ����� ��) � $+������ �� �"". ,' �' �'�$ ����+�$ �'�+�1�� �� �'�� ����+�����$� ����� �����+��� , �' ����/$��� :� �� � ���$ �� �% �����. �� $�� � �# ,�$ �������� � ���+��� ��� ��� ��� ��+��� ��� ������� ��$ ����+��� ���)�����$ �� " ' 8�(9 ��� ,�$ ��� �� �'� ���� �$�������� ��$���$�$ ������ �#� �� ��� � ��. �

" '�$ ��$����0 ��$�) ���� �������� � ��'�+ ����) � �'� �% �����5��+��� ������� �� �$ �# �� � ���/��+��� $�$���$ �� ����$8&�9 ��� ����� (�� ' $����# ����) � �� � ���/������� ��+������0�$ 8�.9� �� �' $ $���). ������� �� �� ��+������)�����$ , �' ��� � � $�$������ � �'� ������* ��$� �' � ��� ��� ��$����� � � ������$� � �'���������#� �� ')�'�� �$$�� ���� , �' �� $�� � �# � �'� ���+��� ��� ������� �� $������ �# �'� $�##�$��� 8�) .&)9 ���� ��� ����� �* ��$�. ���;�� ��'�� ��� $��$ � 0�$�����$ �� �"". � �' $ ������� ��$���$�� �'� �� ���� ����� �� ����'�� ������ �'� ��, ��������#� �� �� $�� � �#$ ��$ � �'� ��+��� ��� ������� �� $�##�$�$ �'�� �'� �""

�������� �� �'� � � �� ��������� 8$)9 �� �� +��) ')�'��, �' '�$� ����$ +�) �� # ���� �) ��� �$��$ � 0� �����$$�$

8� . &�9. ��� �'� $������$& �� �"" +�) � C�� ���,��� �'�'�$� $��� :� ����� �� ��� �'� ����) ���/$��� :� ����� ��$$��� � �'� ��+��� ��� ������� �� 8$)9� �'� $��,�� ���� ��,' �' �� $�� � �# �������� �� �'�$� $ ��$ � �'���+��� ��� �$ ��+����� �� �'� ���+��� ��� ������� ����$� $�##�$�$ �'� ��$$ � � �) �� � C����� $�����$ �� �""�

�'��� ��� +��) �����$�� ����$ ��� �"" � ������������ ��$���$�$ ����� �# ����� �� �# �$ �� ��� + ���/� �� ��+�����. � $ #��� �# +������� 8&�9. � ��� � ����� �����+�� �� �� ����� ���� ,��� ���� ��$. ��� �� ������ ������ ����' 8� . ' . �� . �! . �( . &!9� �� �' $ $���). � �'� ���+��� ��� ��� ��� �'� ��+��� ��� ������� ��. ���#��#��,�' #�������) �����$�� , �' � �'�� 2��. �� ����� �����+���$. ���0 � �# �0 ����� ��� �� �C��� �� �""

���;�� �" � ��$�� �� �# ���#�� #��,�'� ��������). �'�

�����$� � ')�'�� #��,�' �� �� ��� , �' ������� ��$�� � �# �� "? ' �� �. ��� �� !" ' �� � �� $�� � �# ,�$������� ��� ')�'�� #��,�' ,�$ ���� �' $ +�) $�##�$��'�� !" ' �� � ,�$ ����� �'� �� �� ,'�� ')�'�� #��,�',�$ ����$��� � �'� ���+��� ��� ������� ���

�� $'���� �� ����� �'�� ������� ��� FF����� �GG �������$��� �'� �*��� +���$ �0��0 �# �1��� �� �� 2�� �� �� ��� ���)�����$ �� ��� �* $�� ��������� ��()+�$ ����##��#���� ��� ��$$ $������ �'�� ��� 0� ����� �$ ��� �'�$ �������� ���� ���/���������. ����. ����� �$ $��' �$��0 �� $���+ ����+ � � C�� ���+ 2�� ��� �� ��+ �� �� � ������� ��� ���� ��) $�������� ��� �'�$ ��� ����� $��$� ����� �� � ������� $���) 8�$9 , �' �'��� ��'��'�$�5���'�#�� ������� ��$. �'� �C��� 0���$$ �� 2�� ��� ��C��� 0���$$ �� �� � ����� �# �� $�� � �# ��� �����$ �# �������� �� $����$$ ������� �'� ���� ��� $��' ��������� �����. � �' $ $���) ,' �� � $ ��� 3��) �'�� ����/$��� :� ����� � �C���. ��#� ���#�� ���� � �� ��$��0��# �# �� ��. ����� ������� ��� �'� ��$���$. �'����$$ � � �) ������ �� �� + ������

�'� �� ���� �� �'� ��+� ��� 2����� �����+��� �� �����$� ���#�� #��,�' �� �'� ��������#� �� ')�'���$$�� ���� , �' �� $�� � �#. �$ ��+����� �� �'� 2�� ���� ����� 84 #� "��&9 $�##�$�$ ���' 2�� ��� ���C��� �'� $�+� �'���+����� �� �� ����� �* ��$�$)$��+ $ �'� $����� �� +�$� �� � �'� �% �����5��+��� ������� ��. �'� ��� � �� �� �� �� ���)�����$ $'���� �����$� �'� ������� �� �� �""� ��,�0��. �� �����$� ��'� ��������#� �� ����� �� $ ��$ , �' �� $�� � �#. �$��+����� �� �'� D�� �������. ,�$ ��� ��$��0��� �'��C��� �� �� �� �'� �+���� �� ��. �'� +�$���� + ���� �� ��. ����� �� � ������ � �'� ���� ���� � �����$ �# ')�'�� #��,�'� �� �'� ���$���� ��4�-�. �

" ��� �"" ������� �� ������� �� 8� . �(9��� �� ������$ �'� �+���� �� �

" . ��� ���$�H�����)���$�$ � ������ �� � ��. ')�'�� #��,�' ,���� �� ��$$��$�� ����� �' $ ��$$ � � �) $ $�������� �) �����+���$, �' �'� �� $��0��#�� �+��� ���&. � ,' �' +������#�� ���#�' �����$�� $ #� :�����) � ���+��� ��� ������ ��+��� ��� ������� ��$� ��� � �����). � $ ��$$ ���

"-? �% ����� ��� 2% 3% 0�,,���

�'�� �� �'��#�$ �'� 3 ��� �$ �� �"" ����+���� �� �����#����� ��� 4�� �*�+���. � ,�$ �������) ��+��$�������'�� '��$���� $' ����* ��$� ��� �*����������� �������()+�& ��� ��� �$ � 2�� 8$'9 ��� �'�� $��0��#��$ ���

" . $��' �$ ������ ���+��'��� ��� ��. ��'����� �' $2��/� 3� ��� 0 �)� �� �'� �% �����5��+��� �*��� +�����$)$��+. �* $� �# ����* ��$�$. �� ���$ ������ � �'� ���+��� ��� ������� ��. +�) �����)(� � $ + ��� ����� ���� �'� ��� � �� �� ���

�� ������ ����� ��$���$�$ �'�� +�) �� �0��0�� ������ �+��� �� ���#�� ')�'�� ������ ���$$/� �3 �# �� ����,��� ����� �$. �����$� ����$ � ��$. ��� ����+���� �� ���'���� � ��+�����$� �'�$� �'��� �������$ �� ,���FF$����#�'�� �#GG ,��� ����� (�� , �' �"" ������ ��� � ���� � � �� #��+ ����$ � ���' ��+��� ��� ��� ���+��/� ��� ������� ��$ ��� ��$$ ���H�����) ������ �'� $�������)#��+ ����$ ���+�� ����� � �'� ��+��� ��� ������� ������'��#' ���$$/� �3 �# �� ,��� ����� �$ �� ���+ �� �$������ ����� � ���� �� $ � ,���/����+����� � �����C��� �� �"" ����+���� �� 8� . )9. �'� ����� ��$' � �������$� ����$ � �� ��� �'���� � ��+�����$ �� �""

������� �� $ ��$$ ������ �#� �. �'� �� � �) �� 2�� ����� �� ������$� �"" ����+���� �� ,�$ �$�� �� ��$� �'����� �� �"" �$ � $ #��� ��� �'� ���� ,��� �'��#�$� �� �'� ���+��� ��� ��� ��� �'� ��+��� ��� ������� ��. �'���������#� �� ,��� ����$ � ��$ ���� ���#�� ')�'�� , �'�'�$� �'��� ��$���$�$ #�������) ������$�� $ #� :�����). �$��+����� �� �'� D�� �������. $�##�$� �# �'�� �"" +�)�� � $ #��� ��� �'�$� ��$���$�$�

�"". ���$$/� �3 �#. �����$�. ��� �'���� �$ ,�������� (�� �� ,��� ����$ � ��$ ���� ���#�� ')�'�� ,' �'$�##�$� �'�� �'�$� ��$���$�$ ��� �0��0�� � � ����� ���������� ������� ��$���$�� �'� ��������#� �� ����$ � ��$, �' ���' �����$� ��� ���$$/� �3 �# ,�$ ' #'�$� � ���+��� ��� ������� �� $�##�$� �# � H��� ��� 0� � C��/���� � �'� ��+��$ � �� �� ,��� ����$ � ��$ , �' ,���$ ��'� ���+��� ��� ������� �� ������ FF��+����GG� 2����$�����$ � �� $ � ��++�� ����� (�� ��$���$� �� �����$ ������+���� �������� �� ��� $ ����� +���#����� , �'�'���� � ��+�����$. ,' �' +�) �� �0��0�� � ����������$� 8$ . � . ��9� �$ �% ����� ')�'�� #��, ���) � �'�������$�. �'�$� ,���/�$$�� ���� ��$���$�$ $'���� ����')$ ����) ��$�� �� ���#�� #��,�' ��� $��' $����������'��#�$ +�) ��$�� �� �'� ���,��� I�, �� ���� ���$ ���+'�$� ����$ ��� ���'��$ ���:�� '�$� ���� ���#��& �������$�� �'� ++�� ��� $ ��. ���'��$ �� �'� ���� +��� �� �'����#�$�

�'� ' #' ���H����) � ���+��� ��� ������� ��$ ��,��� ����$ � ��$ , �' �"". ���$$/� �3 �#. �����$�. ����'���� �$. ��� �'� ���� �'�� 2�� �� �� #�������)������$�� �'�$� ��$���$�$. $������ � +�1�� ���� �� �""

� ��$�� �� �# ���#�� #��,�'� � � ���� ��� + ���� �� �C����� �"" ������ �� �����+ ��� �$ ��� �� �'� ��$���$�$$��� �� ,��� #�������) ����� (�� �� �'� $�+� ����� �� ������� �'� $�+� � +�� �������) �'� +��� +������� ����

�� �"" $ �$ � $ #��� S8&�9 ��� ���������$ �'��� �T� �' $�*��� +����� $)$��+ +�) ��� � ���� ����'�� �'��+�����# /��� �������'�$ �� �����+ �� � ��'�� ����� 0� �������$ ��� �0��0�� � ��$�� �� �# �'� #��,�' �� �% ������

�'� ���'��$ �'��3 �� 2'���# ��� �*���� ���'� ����$$ $������ �' $ ,��3 ,�$ $�������� � ���� �) ����$���+ �'� ������� �� ����$ ��� ��# ���� �# ��$����'2���� � �� 2����� ��� �) � M� 0��$ �) �� ������� ���4����,$' � �� ���

���������

!� ���� �� !L<=� ��� ���� ��� ������� ,���� ���#$ �� ���������$� #����� "����4 *+�����+�,� �> !?@5!=-�

"� ���� ��� � ������ �� !LL!� ��0�$ �� �� �����$ �)��,���) + ���, ���# ��� �������� +��'�� $+$ ����$ $������ ��> 2��� ��. ���' �2. ��$� �+� ;��,�� ������� ������� <�������� �� *����� ��� #������� ��, Q��3. �Q.M�����> �����+ ���$$. -"!5-?@�

-� ����� ��� ������� �� !LL@� ��� 0� �*)#�� $��� �$ ������ ���'�#���$ $� #����� "����4 *+�����+�,� ��>"LL5-"!�

?� ������� ��� � �� � � !�"��� !�� #�$$����� � !LL@��'� �� # � �� �'� �* ��� 0� ���$� � �����$� ;��� "������"������+ %�> @!<5@-"�

@� ������& !�� '(���)�$ �� *�$) �� !LL"� �� � ���/ ���,����/ ������ �* ��� 0� ���$$/� �3 �# �� � ���� ��/� �'���� ,��� ����� �> � ��0��. ��� � �����$� ��$���$�� ���� +,>"!5-%�

=� ������� *-� .������� �� *�$) � !LL?� 4���� �� ���* ��� 0� ���$$/� �3 �# �� ���� ,��� $��������� ����� �$ ������ � $��$� ��$ $������ �+� *���� ���� �> !<%-5!<!"�

<� ������ �� ���� ��� !�/�$�� 0�� *�� � "%%%�*�� � �� �. � ���'�#�� � �) ������ �� ���������� �����/�����. $�����$$�$ �'� �* ��� 0� ���$� �� �'� '�$� ������ �+�*���� ���� �%> "!L!5"!LL�

A� !�� �� �������)���� � ����"�1 �� ��� 0����2 0�3�4�1 !� ��� ��� ��2�$ - "%%%� ���� ��� �� ��� �'���� 0� �*)#�� $��� �$ ��� �# ����� $���$$ ��$���$�$��������� ��� �������� �� �������� 5+> <<L5<L@�

L� !� ��� ���0 !L<<� � � #'� ��� $���� �# ��������/+ ���$��� � $���) �� ����� �� �� ��+��� �����$ �) 0 ��������� �0 ������ ����$ �� ���������� ������ -��+�������3����� *���� *��+�,� 6�> !%L5!""�

!%� !� ��� ���0� -��/� � !L<L� � C����� �� ����+���� �� ���')�����* �$ � ��+��� ���0�$. ��� ��� � ��� �$. ����� ������� �� , �' 0 ������ ��� �0 ������ ����$ �� �������/��� ������ *+����,���� *���� *��+�,� �5> "@<5"=<�

!!� !� ��� ���0� '���� � !LA!� ������ �� �� ���)����)��� ��')�����* �$ � ��������� ���������� ����� ������� ��, �' ���������� ����� ��� ��+���� *+����,���� *����*��+�,� �6> !?-5!?A�

!"� -��� 77 !L<!� 2������ $����$ �� �'� #���/���/#��� ��������#����� "����4 *+�����+�,� 8> "<@5"L=�

!-� ����� �� .��)��2� '�� �����2 � !LLA� ������ �� �� ����#�� �*����������� ������$� �) ��������� �������� ��� �# ����� �� �� �)�> ����� 0� ���� � ���'�#�� � �) ���$�����$$ �� �� '�$� �����$�� *+�����+�,� 66> <??5<@-�

!?� 7�$$���9'���/� '�� ����� �!� !LL?� ����+�������+ ����� �� ��+��� � #���$ ��� ��$ $����� �� �������/��� ������ �������� *����=����6� <���������� +> @A5<%�

0���,�� ���1��� ��� �� ������� � 2����$��� �+ ���0�+ "-@

!@� 7���� 0� !LLA� ��0��0�+��� �� ����� 0� �*)#�� $��� �$ ��'� ��$���$� �� ��$ $���� �')���$��$ � 0�& �� $�$���� �����,���$ �� �'� ��,��� ��$� ���#�$� -�4 *+���,��� ��6>"@!5"=-�

!=� 7�22��� �� !LA"� ��$���$� �� ��+��� �� ���� �1��� �� , �'��� � � �� 0 ������ ��� �0 ������ ����$ �� ���������������� *+����,���� *���� *��+�,� %,> !?@5!@@�

!<� 7�22��� ��� * 7� :��2 .� ����� �� �� $���� � !LLA��'� #���/���/#��� ������� ��� ��)���> ������� ��$ ���$ #���$� �������� 3����� *���� *��+�,� %,> !@%5!@<�

!A� 7���� �;�� 7����1���49� �4 �� ������$� ��� �����0�����/<1�9��1��"�� -� �/����0 "%%!� 2�����$�/� 3� �*)#��������� �� �) '��$���� $' ����* ��$� +�$� �����+ �����)�� �� ��()+�/�����)(�� ����� ��� #��+���� ���+���������� ���+����� �8%> "L@5-%"�

!L� 7 =/�����"�� �� '�2�� '97 !LLA� � $$��/$��� :� $����/�* �� #������ �� �� ������� �� $ ��$ � ��$ $���� ���$�$���� ��� ����/ $�#�� � �����) � ��$ �����3�� �) �'���,���) + ���, ���#�$ �9�����+� ,������� �� $�� +����&��������� *����=����6� <���������� ��> "L"5-%%�

"%� ������� 07��� !� ��� ���0 !LLL� �'� ��+���5���������� ����� ������� ��> � 0��$�� �� �*��� +�����$)$��+ �� $���) �����5���'�#�� ������� ��� #����� "����4 *+�����+�,� �+> --@5-=<�

"!� ������� 07��� ���)���� 70� ;������"�� 0��"�� *�� ��� �� "�� ��� ������ �.0� !� ������0 !LL@� �'� �')�����'�#�� � ���#�$ ��������������� $ ��� $��$ � 0� �� �'� �' � ��$�$ ��� �/!.-/#������$� �����$� ����� �$ �� �$ '�$�. ��+���� *+���/�,���� ��� �������� *���� *��+�,� �> ?@5@L�

""� '��� ;. !LL%� ����/���/#��� ��+���+����� �) � �����5���'�#�� ������� ��$� #����� "����4 >������� %>??<5?=-�

"-� *�$) �� !�>�� �� !LL<� �'� �* ��� 0� ���$� � ������ $��$� ��$ $������ #����� "����4 *���� *+����,� ��� *������������ ���,� 6> "@!5"<@�

"?� *�4���"��� �� 7�22��� �� !L<=� � $����# ��� ��+��� $���� ���������� ����� ���� ! �� ++���. ��$ $����. ���$�$���� ��� ��+��� 0�� �� �$� �������� 3����� ����� 5>""?5"-?�

"@� *�"��� �� .������� �� !�>�� �� *�$) � !LL?� �""���+ �'� �* ��� 0� ���$� ���'�$�����$ �'� ����� ')���$��/$ � 0� � $��$� ��$���$�� ���� +8> @A-5@L-�

"=� *�� � � 0������ �� !LL=� �'� �* ��� 0� ���$� � ����������$�> ����� �� ��� $ #��� ����$���� ��� *+����,��*�������� 8�> @--5@?"�

"<� * 7� 7�22��� �� !LLA� D��$���+��� �� ����� 0� �*)#��$��� �$ #�������� �� ������ � ��$���$� �� �� � ��� ���L ������������ ������ *+����,���� ��� �������� *���� *��+/�,� 5%> -@5@!�

"A� * ����� �� ��"�� � ; =��"��2�� .� 0����� ����� ��� 7��"�� 7�� ��� ��� 7���� ��*���$��� .� ����?���4 �90� �� $� �� ;�������� !�# ���$� !� ���"���� �� !� *����4� �� ����� �!��!� ��� ���0� ������� 07�� "%%!� �� �0 ����� ���� �� �# ���,��� ��$ $����� #��� ������� �/L �� ��+������ �0 ������� #��� ������� ���L �� ���������� �������������� *����=����6� <���������� �> A=<5A<=�

"L� 0�& 0�� 7�$$���9'���/� '�� ����� �!� !LL=���0��0�+��� �� ����� 0� �*)#�� $��� �$. #�����' ���+������ $+. ��� � � �/����* ��� �� � �'� �/#���/�����/���� �����$� ��$���$� �� ��+��� ���)�����$ ������ �)����/$��� :� �� � ���$ �� ���������� ������ *���� *+����,���,> !-=<5!-<L�

-%� 0���& 0� !LL?� ��� 0� �*)#�� $��� �$ � ����� �����$��#� �$� ���'�#��$� *���� *+����,� �,5> ?=<5?<"�

-!� 0������� !�� -� ��� 3�� 7�22��� ��� 7���� 0� "%%"��"" ���)$ � C����� ����$ � �����+ � �# �������� ���� ���� � �'��� � 0��$� �����5���#�� ������� ��$� �+�*���� 3����� %8> "@<5"=A�

-"� 0����� �0 !L@@� �/A 1� �� �#�� � #������ �����$� +�� �+��� ���# ��� ������ �� *+�����+�,� 5> ?=!5?="�

--� ;�/������ �*� 7�$$���/�$��� � !LL"� �'���� ���+�����$ ��� �'� � ���� � � $��$� ��$ $������ #�����"����4 *+�����+�,� �,> -=L5-AL�

-?� �@����� .�� -���� ;� 0/� ��& 0� !L=?� ���)�'��+�� �$�� � �# �� ����� ���� ,���$ �) ���� � �� ���� � *��������58> -=A5-<-�

-@� ���2 0� ' / � !LL"� ����* ��$�/#�������� ')���#������* �� �$ � $����� �� ��� ���#�� ��� 0 �) �� ���� ��� ��������� ���� � $3$� *+�����+�,� 6%> =L=5=LL�

-=� ������� �� 7�$$���9'���/� '�� 7������� '� ������!� !LLA� ��� � �/L/ ��� �0�L/��������� ������� ���� ��� 0� �*)#�� $��� �$ � ������� $�$���$ �� �������$��������� *����=����6� <���������� ��> !!@@5!!==�

-<� ����� �� -���4� .� *�A���� 09*� � "�2� �� .� ��� !��>A��� ! "%%!� �$$��� �� ���� �� $�����* �� � $+���$� ���'� ���'�#�� � �) �� 9�4���� �+������+��� $��� � -L-<��������� *����=����6� <���������� �> <@A5<=<�

-A� � $A? 0�� 7���� 0� !LA@� 2)����# ��� $��� �$ �� �'� ������� ��$ ���,��� �'� ��,��� ��$� ���#�$ ��� $ � ���/�������� 4����' ���� �����$� *+����,���� *���� *��+�,�%+> -=L5-A@�

-L� �������� 0� !LL!� �'� #������ �� �� �*)#�� ��� ���$��� �# '�$� ����� ��$���$�$ �� ����� ��� *+����,���� ����������� *���� *��+�,� �8> <L5L-�

?%� .������� �� *�"��� �� ������� *-� !�>�� ��� *�$) �!LL@� 4���� �� �� �'� �* ��� 0� ���$� � ')���$��$ � 0�� $��$� ��$ $������ *�������,� �+� -������ #������ �������� �%�%#% 8%> ?!@A5?!=-�

?!� .������9����������� 7� #���2 #� ��� B� ������2� !�!LL<� ����������� ����� (�� �� �� �"" � �����$� �""����+���� �� � ��� ���� ��� ')���$��$ � 0� ��$���$���� �# �'� �����)5��,���) + ���, ������� ��� �+�*���� 3����� ��> !!A<5!!L?�

?"� ����9�������� �� �� $���� �� 7�22��� �� !LL"� �C��� ��$��� :� �� � ���$ �� ���������� ����� �� ��+��� $�$���/$ �� ����$7 �0 ����� ��� �'� �0��0�+��� �� ��� 0� �*)#��$��� �$� *���� *+����,� 88> !"%A5!"!@�

?-� �����"�1 �� 3�4�1 !� ��� ��� ��2�$ - "%%"� � #�������$���� �� ��� �# �* ��� 0� $���$$� 3����� 91��������������� 5�> !""<5!"-=�

??� ��(���4�� � !LL<� * ��� 0� ���$�> �� ����) ����� ��$���$��� ���'�#�� ����� ��� ���+������ 3����� �%%> =A!5=L"�

?@� � �� ����� ��� *�����/� ��� *�"��� ���-��4��$$��� '�� ��� !0 !LL@� � $��$� ��$ $�������������� �) �*���$$ �� �� � #��� ����� �# �""/#������ �# #����$� �* ��$� � ����$#�� � ������ �����$��+� *���� ���� +> !-@<5!-=A�

?=� :��2 .� 7�22��� ��� �� $���� � !LL<� ����/$��� :��� � ���$ �� ���������� ����� ���+��� ����$����� �� ���)��$�� � ��+������$ �� ����� �* ��$� �� ���$+�+�+����� �� ��+��� ����$� �+� *���� ���� 8> "?L5"@L�

?<� : :C� ��� C "%%%� �� #,�6�������� ������$� $ �0 ������� ������ �0��0�� � ��+�� #���$ $� ������������6��,� �5> ?%<5?!?�

"-= �% ����� ��� 2% 3% 0�,,���


Recommended