Trabajo Práctico N°4:

Extracción simple de DNA

Integrantes: Nicolás Arenas      Fransheska Claure

  Ramón Parraguez  Profesor: Dr. Ricardo CabreraCurso: Biología General I

21 Abril 2016

Resumen

Este trabajo práctico consistió en realizar una extracción simple de DNA de una frutilla mediante un proceso en el cual se utilizan materiales básicos de laboratorio, además de ver cuál es la concentración mínima de etanol con la cual precipita el DNA, Se llevó a cabo  con la cuidadosa trituración de una frutilla -cuya masa inicial fue 26.43g- con el objetivo de destruir su estructura celular y facilitar el siguiente paso, el cual consiste en mezclarlo durante 10 minutos con una sustancia que contenía una cucharada de sal, 1 ml de lavalozas y 9 ml de agua destilada, en la cual tanto el detergente como la sal cumplian la función de romper las membranas celulares y desarmar el núcleo para dejar la cromatina que contiene al DNA libre.

Luego de la espera se trasvasijó a un tubo tipo falcon, se masó el producto y comparó con un grupo que cuya masa de producto fuera similar a la nuestra con el fin de balancear a ambas, también para que el centrifugado no tuviese demasiadas alteraciones. Durante cinco minutos fue centrifugada a 6000 rpm, ya que era la frecuencia ideal para separar la materia maciza de la mezcla y también para que no se dañara el ADN.

Después que se realizó el filtrado, el producto dejó un sobresaliente o pellet en el contenedor falcon y el líquido centrifugado posteriormente fue vertido en una probeta para su medición. El volumen total de éste se dividió en cinco tubos de ensayo de manera similar que rondaba los 3 ml en cada uno, luego fueron rotulados de acuerdo al grado de etanol que poseía cada uno de alcoholes (60%, 70%, 80%, 90% y 95%). Se dejaron enfriar simultaneamente durante 4 minutos los cinco tubos de ensayo y en una final observación se pudo divisar cómo gradualmente iba apareciendo el DNA en cada uno de ellos, volviendo menos notoria la muestra de DNA a medida que descendía el porcentaje de etanol.

Introducción

DNA, cuyo significado es “ácido desoxirribonucleico”, es un biopolímero que corresponde a la información genética de cada célula, la cual se codifica en los procesos de división celular mitosis y meiosis otorgando las características tanto genotípicas como fenotípicas de los organismos.

El DNA además de ser una macromolécula es un polímero compuesto por varios nucleótidos, los cuales se encuentran conformados por un grupo fosfato, la desoxiribosa y una base nitrogenada (Adenina, Timina, Guanina, Citocina), formando dos cadenas distintas en cuanto al ordenamiento de sus bases nitrogenadas, las cuales se unen mediante puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas- A==T con doble enlace; G≡≡C triple enlace- formando lo que se conoce como Doble hélice de DNA.

El DNA se encuentra en células eucariotas dentro de un núcleo en un superenrollamiento, pero no lo hace por sí solo, es decir como una doble hélice a secas ya que existe un conjunto de proteínas denominadas histonas, la cual mantienen compacto al DNA en una estructura denominada cromatina.

Materiales y métodos

En este práctico utilizamos un mortero en el cual fue molida una muestra que fue previamente pesada (en nuestro caso la muestra fue frutilla), cuando ya estaba lo más molida posible se le adiciono la mezcla de agua lavalozas y sal la cual poseía un volumen de 10ml, luego de dejar reposar la muestra se trasvasijo en un tubo tipo falcón y se llevó a centrífuga, posterior a esto se filtró para solo trabajar con el sobrenadante el cual se separó en cinco tubos de ensayo procurando que estos tuvieran el mismo volumen y finalmente se le agregó a cada tubo unas gotas de alcohol de distinto porcentaje, se dejó enfriar en hielo y luego de unos minutos se observó la aparición de DNA en los tubos.

A diferencia del método original en el cual se usaba pisco, aquí se usó distintos porcentajes de alcohol los cuales fueron 95, 90, 80, 70 y 60 con el fin de demostrar que el grado de etanol afecta en la aparición de DNA. También se utilizó plátano en algunos grupos con el fin de comparar si en ambas muestras (frutilla y plátano) había la misma cantidad de DNA.

Resultados

DNA de frutilla en alcohol al 95%.

DNA de frutilla en alcohol al 90%.

DNA de frutilla en alcohol al 80%.

DNA de frutilla en alcohol al 70%.

DNA de frutilla en alcohol al 60%.

Tubos de ensayo tabulados según el porcentaje de alcohol de la muestra.

Discusión y Conclusión

Si bien los resultados fueron los esperados en la frutilla, no se esperaba que en el plátano hubiese más abundancia de DNA se esperaba que ambos resultados fuesen muy parecidos entre sí. Los factores que puede que hayan determinado estos resultados son, la sal la cual neutraliza los grupos fosfatos y vuelve insoluble el DNA en alcohol, este es un factor debido a que la cantidad de sal que utilizó cada grupo de trabajo tuvo ligeras variaciones en su masa. También puede haber afectado el lavalozas el cual ayuda al rompimiento de las membranas celulares por disolución de los lípidos, la forma en que este puede haber afectado es cuando se mezcló con la sal y agua donde se obtuvo un líquido espeso y no se disolvió completamente la sal.

Otros factores que pueden haber generado la diferencia de las muestras son la centrifugación la cual puede haber dejado más material pesado en la frutilla que en el plátano, o el tiempo de incubación en alcohol frío (el cual ayudaba a precipitar el DNA) haya sido muy poco.

Para finalizar cabe destacar que de haber usado pisco (el cual tiene un porcentaje de alcohol entre 30 a 43) al menos en la frutilla no hubiese aparecido material genético ya que al usar alcohol con un porcentaje de 60 ya era prácticamente nada lo que había de DNA.

Bibliografía y referencias

www.bteduc.bio.br/guias_es/69_Extraccion_de_ADN_(procedimiento_basico).pdf Febrero 2016

Herrera D. “Estructura y Composición de ADN”. Genética Moderna por: Daniel Alejandro Herrera. Sitio web: biologiaytuadn.blogspot.cl. Chile, 2011.

Coirini H. ADN - EL CÓDIGO DE LA VIDA. Enciclopedia de Biótico, disponible en internet: enciclopediadebioetica.com/index.php/todas-las-voces/225-adn--el-codigo-de-la-vida. Editora: Lic. Ursula Bremer de la Ossa. Argentina, 2011

Autor desconocido. “La extracción y purificación de ADN para el análisis de PCR. Mitos y realidades”. Revista NEWSLETTER. España, 2009.

Puerta y Ureña. “Prácticas de biología molecular” págs 15-16. Editorial Pontificia Universidad Javeriana, año 2005.

“www.sag.cl/sites/default/files/MANUAL_BEBIDAS_ALCOHOLICAS.pdf” pág 36. Noviembre 1999.