Facultad de Ciencias Agrarias

E.A.P. Ingeniería CURSO :

DOCENTE:

AÑO:

ALUMNO:

BIOQUIMICA

AGUIRRE CUBILLAS LISBETH CAQUI CABALLERO JOSE MEZA RODRIGUEZ DIANA REYES DEL VALLE ROY OLIVARES RIOS DAVID

INFORME DE PRACTICA 5, 6, 7,8 Y 9

Ing. SolórzanoGutiérrez María

2do

DEDICATORIA

A todos los docentes por su sabiduría y esfuerzo que comparten, todos los días buscando una calidad de enseñanza y aprendizaje en el campo de la Investigación e Innovación Educativa.

GRADECIMIENTO

Al docente del curso de bioquímica de la Facultad de Ciencias agrarias

de la escuela académica profesional ingeniería agroindustrial de la

UNHEVAL; quien nos incentiva para hacer este tipo de trabajos; por

nuestro bien y para los estudiantes y la juventud que nos espera en el

camino, con quienes seguiremos la misión de ser ingenieros.

INDICE

LABORATIO DE BIOQUIMICA

I. INFORME N° 5 -RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS CON EL

REACTIVO DE SUDAN III

II. INFORME N° 6 - SAPONIFICACION DE GRASAS

III. INFORME N° 7 - RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

IV. INFORME N° 8 - DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

V. INFORME N° 9 - ANALISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS

VI. INFORME N° 10- ACCION DE LA ENZIMA CATALASA

INFORME N°5

RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS CON EL REACTIVO DE SUDAN III

I. OBJETIVO

Determinar la presencia de lípidos en alimentos. Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos,

algunas de las cuales pueden servirnos para su identificación.

II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS

- MATERIALES- Tubo de ensayo- Vaso de precipitado con agua- Aceite vegetal- Gradillas - Solución de sudan III en frasco de cuentagotas

guinda, rojo, cereza.- matraz Erlenmeyer- Alcohol

- MATERIA PRIMA- clara de huevo- yema de huevo- aceite

- REACTIVOS- SUDAM III

III. PROCEDIMIENTO

1) aceite + Reactivo sudan III

2) clara de huevo

+ Sudan III

3) Yema de huevo + Sudan III

ACEITE 1ml

CLARA 1ml

YEMA 1ml

IV. RESULTADOS Según la muestra analizada

V. CONCLUCION

- El reactivo Sudán III, por contener un solvente orgánico, solubiliza la grasa, permitiendo la determinación cualitativa de lípidos.

VI. ANEXOS.

PRACTICA N° 6

SAPONIFICACION DE GRASAS

Grasas esteres hidrolisisacido Base

I. OBJETIVO

- Elaboración de jabón a partir de grasas y aceites caseros por medio de la reacción de saponificación.

II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS Materiales.

Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Bunsen Pinzas para tubo de ensayo

MATERIA PRIMA aceite

REACTIVOS NaOHEtanol HCl 0,2 N Aceite vegetal H2SO4(ácido sulfúrico) Agua destilada

III. PROCEDIMIENTO

1) ACEITE + CALENTAR. NaOH

2) SOL SAPO

+ 5 GOTAS + Cl Na

H2 S04

IV. RESULTADOS

Cuando hemos disuelto la sosa que estaba en estado sólido en el agua, hemos observado que ha tenido lugar una reacción exotérmica ya que la disolución del agua con NaOH se calienta al desprender calor. Al mezclar el aceite con NaOH obtenemos una mezcla de color amarillento-marrón, y cuando mezclamos la grasa con NaOH obtenemos una mezcla de color más blanquecino.

Cuando hemos calentado estas mezclas y pasado un tiempo, hemos podido observar en el recipiente 3 capas: la inferior que contiene la solución de sosa sobrante con la glicerina formada; la intermedia, semisólida, constituida por jabón, y la superior, amarilla de aceite que no ha reaccionado. Esta reacción ha tenido lugar por un proceso de saponificación en la que a partir de grasa y NaOH obtenemos jabón y glicerina.

V.  CONCLUSIONES:- Los jabones se forman por saponificación que es la hidrólisis

en medio básico de las grasas.- Las conclusiones a las que hemos llegado tras la realización

de la práctica son que los jabones se forman mediante una reacción denominada “saponificación”. Esta reacción consiste en una hidrólisis en medio básica de las grasas, que, de este modo, se descomponen en sales de potasio o sodio (jabones) y glicerina..

VI. ANEXO :

INFORME N° 07

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

I. OBJETIVO

Determinar la presencia de proteínas Extraer la caseína de la leche y reconocer su naturaleza

proteica. Utilizar misma técnica para reconocer la naturaleza

proteica de otras muestras. Identificar a través de pruebas bioquímicas las proteínas

existentes en soluciones problemas.

II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS

MATERIALES: Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Vasos de precipitados

MATERIA PRIMA:

Glicina Albúmina Chocho

Arveja

REACTIVOS: NaOH HNO3 CuSO4 

III. PROCEDIMIENTOS

a) REACCION DE BIORET.

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven portanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción laproducen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debea la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse losaminoácidos.

El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un mediofuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos

formando uncomplejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

Valina + NaOH obs + CuSo4= azul, negro

Glicina + NaOH obs + CuSo4

= verde oscuro, negro

Albumina + NaOH obs + CuSo4

= lila y proteína

Chocho + NaOH obs + CuSo4

= celeste, v erde y tiene proteína y lila

Arveja + NaOH obs + CuSo4 = verde claro + proteína y lila

b) REACCION XANTOPROTEINA

Valina + NaO3 obs + NaOH

Glicina + NaO3 obs + NaOH = se ha hecho negativo

Albumina + NaO3 obs + NaOH = blanco + la proteína se separa

Chocho + NaO3 obs + NaOH = se ha hecho positivo

Arveja + NaO3 obs + NaOH= normal se ha vuelto hinchar en blanco y es positivo.

IV. RESULTADOS Y DISCUCIONES

¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?

La desnaturalización de proteínas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albúminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente ilíquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa sólida intercomunicada. Esa misma desnaturalización puede producirse a través de una desnaturalización química, por ejemplo volcándola en un recipiente con acetona

Desnaturalización irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida disolubilidad, causada por la alta temperatura (mientras se la fríe)

¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.

¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocidas una proteína?

Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína se utiliza el Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con(KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

¿Qué coloración da la reacción del Biuret?

La coloración que presenta es el color violeta, indicando la presencia de proteínas.

¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 ªC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. Si una proteína coagulada podría dar la reacción de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier proteína, liquida o sólida, por ejemplo cuando haces una cuantificación de proteínas en suero (liquida) o cuando haces una prueba cualitativa en huevos, carne, papas, etc,

Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido cómo la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta manera, la glicina dio una prueba negativa. Además en

la reacción xantoprotéica da negativo porque carece de grupos aromáticos.

V. RECOMENDACIONES

Este siguiente practica su uso es muy importante ya que se

para asi saber el reconocimiento de dicho producto.

VI. CONCLUCION

La albúmina, el chocho y la arveja contienen proteínas y la

glicina no por ser un aminoácido.

Las proteínas constituyen una de las moléculas

más importantes en el organismo ya que cumplen muchas

funciones

Las proteínas están constituidas por aminoácidos por

los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de

los aminoácidos

Al realizar las diferentes pruebas con la albúmina se pudo

comprobar experimentalmente efectivamente que se trata

de una proteína

Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas

(mercurio, cobre ,plomo) formando precipitados

En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a

un cambio en el estado físico de la proteína , mientras que

en la coagulación se ha producido un cambio en el estado

físico y en la estructura química por eso es irreversible

VII. ANEXOS

INFORME N° 07

DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

I. OBJETIVO Identificar los diferentes factores que afectan la estabilidad de las

proteínas Observar el comportamiento de una proteína globular

hidrosoluble en solución acuosa en función de la fuerza iónica.

II. MATERIALES, MATERIA PRIMA Y RACTIVOS

MATERIALES:

Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Bunsen Pinzas para tubo de ensayo

MATERIA PRIMA: Albúmina

REACTIVOS: HCl NaOH HNO3 CuSO4

III. PROCEDIMIENTO

1) Clara de huevo

+ Albumina

H20

2) albumina + calentar NaOH HCl

3) Albumina + Calentar NaOH HNO3

4) Albumina + Calentar NaOH

Cu SO4 enfriar

5) albumina + + Cu SO4 NaOH

6) albumina + calentar Acetado de plomo

IV. RECOMENDACIONES

MUESTRAS OBSERVACIONES

Albúmina con Acetona se desnaturalizò, quedò como peganda en las paredes del vaso

Albúmina con Etanol se desnaturalizò. Se separò un poco y una parte quedò flotando sobre el etanol

Albúmina con Bicarbonato de Na Saturado.

se desnaturalizò una parte ya que se veìa sòlo de unas partes como separado

Albúmina con Jugo de Limón

si se desnaturalizó

Albúmina con Aceite de cocina

no se esnaturalizò, se veìa normal pero grasoso y ya

Albúmina con Jugo de no desnaturalizò, no pasò

Naranja nadaAlbúmina con Cloruro de Na Saturado.

si se desnaturalizò un poco

Albúmina con Vinagre si hay desnaturalización.

V. CONCLUCION

Existen diversos factores que contribuyen a la desnaturalización de las proteínas, por ejemplo cambio de temperatura, pH de las sustancias, etc. en este caso vimos más con pH, cuando el pH es ácido hay una desnaturalización o por lo menos más notoria al instante y en medio básico por lo regular no ocurre nada.

VI. ANEXOS

INFORME N° 08

ANALISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS

I. OBJETIVO

Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o vegetal mediante reacciones químicas específicas.

Identificar la acción de la catalasa, peróxidos y tirosidasa.

II. MATERIALES

3.1 Muestra

•Papa cruda.

•Trocitos de tomate

•Jugo de limón

•Zanahoria

•Carne cruda

•Rábano

3.2   Material   de   vidrio

•Tubos de ensayo

•Gradilla

•Varillas de vidrio

•Mechero

•Cocina eléctrica

•Rejilla de asbesto por cocina

•Vasos de precipitado de 150 – 250 ml (12 unidades)

•Pipetas

•Rallador 

•Cronómetro

•Embudo

•Papel de filtro alimentario (para infusiones filtrantes)

•Gasa

•Mortero

3.3 Reactivos

•Peróxido de hidrógeno (Agua Oxigenada)

III. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS,

1) hojas + Peróxido de H

2) papas + Peróxido de H

3) hojas papas + Peróxido + peróxido Legía de H. legía de H.

IV. RECOMENDACIÓN

En esta práctica de laboratorio de bioquímica que con las diferentes muestras que teníamos solamente algunas reaccionaban dando asi la presencia de enzimas en ellas.

V. CONCLUCION

los agentes precipitantes inhiben la actividad enzimática por desnaturalización de la enzima.

La velocidad de una reacción enzimática depende de varios factores. Entre estos está el pH. Cada enzima tiene un rango de pH en el que su actividad enzimática es óptima. Fuera de este rango la enzima por ser una proteína empieza a desnaturalizarse por la protonación o desprotonación de susaminoácidos constituyentes.

La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimática. Se puededecir que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la reacción hasta quellega un punto en el que la velocidad disminuye con el aumento en el calor.

Otro factor fundamental en la velocidad a la que se realiza una reacción es laconcentración de enzima y de sustrato. Esto se sabe teóricamente

debido aque todas las reacciones cumplen con la reacción de Michaelis-Menten, donde si la concentración de sustrato o de enzima es muy baja, la velocidadaumenta proporcionalmente al aumento de concentración

VI. ANEXOS.

PRACTICA N° 10

ACCION DE LA ENZIMA CATALASA

I. OBJETIVO Determinar la acción de la enzima catalasa en diferentes

sustancias orgánicas Comprobar si la enzima catalasa contenida en los

peroxisomas del hígado y riñón degrada el peróxido de hidrógeno.

II. MATERIALES , MATERIALES Y RACTIVOS

MATERIALES: Tubos de ensayo Pipeta

MATERIA PRIMA: Papa Hígado Hojas

REACTIVOS: Peróxido de hidrógeno HCl

III. PROCEDIMIENTO

1). PAPA

Obs + peróxido de H

HCl

2). Hígado

Obs. + Peróxido de H.

HCl

3). HOJAS

Obs + peróxido de H

HCl

4).

Papa hojas hígado

Peróxido dePeróxido de Peróxido de H H H

IV. CONLUCION hemos logrado cumplir con nuestro objetivo, es decir

comprobar la actividad catalasica en diversos tejidos animales

y vegetales.

El equipo llego a la conclusión, que el cambio de ph si afecta la

actividad enzimática por que cuando se le agrego el hcl

disminuyeron las reacciones con las muestras, por lo

consiguiente, con el peróxido de hidrogeno ya que el hcl

desnaturalizo a la catalasa que esta es una proteína. también

en el caso del azúcar y la sal no hubo reacción ya que estos

son seres no vivos por lo tanto no tiene enzimas. Una reacción

para ver la presencia de catalasa en nuestro organismo es

Cuando sufrimos una cortada y en ese momento le agregamos

agua oxigenada muchas personas solo saben que es para

matar a las bacterias, pero no porque hay efervescencia y el

motivo es por la presencia de catalasa en nuestros tejidos.

V. ANEXOS

CUESTIONARIO

1. ¿QUE SON ENZIMAS?2. ENZIMAS HOLOSTÉRICAS3. ENZIMAS LUDUCIBLES4. COFACTOR5. COENZIMA6. APOENZIMA7. MENCIONE UNA TÉCNICA DE RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS

1. ¿Qué son enzimas?

Sustancia macromolecular, natural o sintética, compuesta principalmente de proteína, que cataliza una o más reacciones bioquímicas de forma más o menos específica, a temperaturas relativamente bajas. En algunos casos, lasenzimas poseen iones metálicos, grupos prostéticos o carbohidratos unidos de forma covalente o fuertemente asociados. Los RNA con actividad catalítica (ribosomas) también se incluyen en esta categoría.

Se encuentran en todo tipo de células y catalizan las reacciones químicas de los seres vivos (biocatalizadores).Un catalizador es

una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reacción química, sin verse alterada ella misma en el proceso global. Son por tanto, las responsables del metabolismo celular. Son específicas de las reacciones que catalizan y de los sustratos que intervienen.

Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces (aumentan la velocidad de las reacciones entre 103 y 109 veces). No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución. Simplemente se alcanza más rápido el estado de equilibrio.

2. ¿Qué son Enzimas Alostéricas?

Las enzimas alostéricas son las que adquieren otras formas, otra conformación, por la unión de moduladores. Estos moduladores pueden ser inhibidores o activadores que se unen a la enzima en un sitio diferente al sitio activo e inducen un cambio conformacional en la estructura de la enzima tal que cambia la estructura del sitio activo.

3. ¿Que son Enzimas Inducibles?

Enzima sintetizada por la célula en cantidades muy pequeñas y cuya velocidad de síntesis puede ser aumentada por otra molécula denominada inductor.Son aquellas enzimas que se sintetizan cuando su sustrato está presente en la célula.

4. ¿Qué son Cofactores?

Son sustancias de características no proteicas que, actúan junto con la enzima y el sustrato, en algunas reacciones.Estas sustancias:

no se modifican al finalizar la reacción, si sufren alguna modificación durante la reacción, pero se

regenera en una reacción acoplada.

Tipos de cofactores:

Iones: manejan las cargas de los sitios activos. Ej.: Mg es cofactor de las enzimas que transfieren grupos fosfato.

Coenzimas: produce interacciones débiles y colaboran con los procesos anexos a las funciones catalíticas en sí. Ej.: NAD, NADH y ATP.

Grupos prostéticos: Son sustancias que se unen en forma covalente con la enzima siendo imposible separarlas.

Holoenzima = Apoenzima + Grupo prostético

Ej.: En las catalasas y peroxidasas de los peroxisomas, es el Hemo.Las flavinas (FAD, FMN).

5. ¿Que son Coenzima?

Muchas enzimas realizan su función catalítica en presencia de otras moléculas generalmente más pequeñas, no proteicas y denominadas coenzimas (algunos las denominan grupos prostéticos si la asociación de estas con la enzima es de carácter covalente). El complejo resultante se denomina holoenzima donde la parte proteica se llama apoenzima (termolábil, no dializable) y la parte no proteica y relativamente pequeña se denomina coenzima (termoestable, no proteica).

Tanto oxido reductoras, isomerasas y ligasas requieren de coenzimas. Las coenzimas participan activamente en la reacción, por ejemplo en las oxidorreductasas aceptan o ceden hidrógenos o electrones y en las transferasas aceptan o ceden los grupos. Además se asocian a vitaminas (como las del grupo B) lo que demuestra la importancia fisiológica de las mismas y su ingesta

Luego, tenemos que una coenzima no es específica para un tipo de reacción sino que la porción de la enzima que da la especificidad es la apoenzima

Por ejemplo, el lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa y glutamato deshidrogenasa utilizan NAD como coenzima (aceptora de H) así como también otras oxidorreductasas

6. ¿Que son Apoenzima?

Parte proteica de una enzima que, para ser activa, requiere estar unida a la correspondiente coenzima. También se denomina apoproteína. No puede llevar a cabo su acción catalítica desprovista de los cofactores necesarios, ya sean iones metálicos (Fe, Cu, Mg, etc.) u orgánicos, que a su vez puede ser una coenzima o un grupo prostético, dependiendo de la fuerza de sus enlaces con la apoenzima. La apoenzima, es por tanto, catalíticamente inactiva, hasta que se le une el cofactor adecuado.

7. MENCIONE UNA TÉCNICA DE RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN

Mediante esta experiencia, vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente en la saliva. Esta enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. Es importante recordar las reacciones características de glúcidos para comprender esta experiencia.