laboratorio de micro.docx

7/21/2019 laboratorio de micro.docx

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UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FALCULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS yBIOQUÌMICA

Informe de Laboratoro de

C!r"o # M$robo%o&'a

Tema # M(todo" de Co%ora$)n

*rofe"or # +a$nto

A%!mno" #

LIMA,*ERU

-./0, I

M(todo" de Co%ora$)n

Mar$o Te)r$o

Co%ora$)n Sm1%e#



Aquella coloración en la que se utiliza solo un colorante, el cual va a permitir visualizar la morfología de los

microorganismos.

Co%ora$)n Gram#

Es posiblemente la tinción más usada.

La diferenciación de Gram se basa en el color que adquieren las bacterias cuando se tratan con el colorante crist

violeta seguido por una solución yodoyodurada de potasio, para luego someterlas a una decoloración despus de

la cual se usa una coloración de contraste, casi siempre safranina. Las bacterias gram!positivas "coloración azumorada# son resistentes a la decoloración y conservan el comple$o cristal violeta!yodo, los microorganismos gram

negativos, toman la coloración de contraste "coloración rosa o ro$a#.

Co%ora$)nA$do,Re""tente2Co%ora$)n d3e4% Nee%"e

En este mto

de tinción, el

colorante

primario,

fucsina acida

se formula con fenol para permitir el pas

a travs de las paredes celulares de las

micobacterias. El portaob$eto se

calienta para facilitar la penetración y se utiliz

alco%ol etílico como decolorante. &in embarg

el reactivo se prepara con ácido

clor%ídrico para ayudar a la

decoloración de las clulas que no s

acido! resistentes.

Co%ora$)n de E"1ora"#

'ara la observación de espora, es necesario que el colorante penetre la pared de la espora, la cual es

relativamente impermeable, razón por la que se necesita de calentamiento.

Co%ora$)n Ne&at6a#

La tcnica de la tinción negativa incorpora materiales tales como la nigrosina o la tinta c%ina, que al estar

compuesta de partículas demasiado grandes para penetrar en una clula, permiten observar algunos

microorganismos que permanecen sin te(ir y que resaltan sobre un fondo oscuro, se utiliza principalmente para

observar la cápsula bacteriana.



Venta7a" de %a" tn$one"#

) Eficacia conocida

) *aratas

) +ápidas de llevar a cabo

) o necesitan un equipo que no e-ista ya en la mayoría de laboratorios.

In$on6enente"#

) ecesitan de equipo especializado "microscopio, en algunos casos de fluorescencia#

) +equieren interpretación "personal e-perimentado#

Com1eten$a"#

apacita y adiestra al estudiante para que "el# "la#/

•

+ealice manualmente mtodos de tinción %abituales usados en la preparación de láminas de observación• 0escriba minuciosamente sus observaciones, al microscopio.

Matera%e" y e8!1o"

C!%t6o" ba$terano"

ultivo de Esc%eric%ia coli

ultivo de &tap%ylococcus aureus

Co%ora$)n "m1%e

A9!% de met%eno



Co%ora$)n Gram#

Co%ora$)n A$do,Re""tente

*ara e"ta t($n$a "e !t%9) %a ba$tera E: $o%

Rea$t6o de %!&o%2mordente5

A%$o4o%,a$etona2de$o%orante5

Vo%eta de&en$ana$o%orante1rmaro

F!$"na b;"$a2$o%orante de$ontra"te5

A9!% de met%eno2$o%orante de$ontra"te5



Co%ora$)n de e"1ora"

Co%ora$)n ne&at6a#

A%$o4o%,a$do2de$o%orante5

F!$"na fen$adaa% 0< 2$o%orante

1rmaro)

So%!$)n"at!rada

a%$o4)%$a deeo"na

!$)n de a9!% demet%eno

Tnta $4na



*ro$edmento

Co%ora$)n "m1%e#

Seguidamente se

esteriliza con el mechero.o primero que se debe

alizar antes de realizar

el frotis se desinfecta

lámina portaobjeto.

'reparar un frotis a partir

del cultivo de &. aureus

Se realiza el frotis

con la técnica

enseñada por el

docente.

Se ja al

calor



Re"!%tado

F!ndamento

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares.

La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y las estructur

celulares básicas.

&e usa un 1nico reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno "compuesto que da

color al tinte# con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa

que atraen y enlazan el cromógeno. &e utilizan solamente para incrementar el contraste2 todas las clulas

absorberán el colorante y quedarán te(idas del mismo color. 'or tanto, la tinción simple me$ora la observación de

la clula completa.

ubre el frotis con el

colorante azul de metileno y

de$a actuar por 3 a 4

minutos.Lava con ag

de$a seca

5bserva al

microscopio con

ob$etivo de inmersión.



Co%ora$)n Gram#

*ro$edmento

Se utilizó el

cultivo de .

coli.

&e prepara

frotices de

cultivos de E. coli.

&e de$a secar al aire

y fi$a con calor.

ubrir el frotis con

reactivo de cristal violeta

durante un minuto.

Lava los portaob$etos

con agua corriente

durante 4 segundos.

ubre el frotis con la

solución de lugol y

de$a actuar durante 6

minutos.

Lava con agua

corriente



,

Re"!%tado

Aplica lentamente el alco%ol!

acetona y seguirá agregando %asta

que la tintura ya no fluya del frotis

Lava

inmediatam

con agu

corrient

ubrirá el frotis con la solución de

safranina durante 37 segundos

Lava con agua corriente

y de$a secar la

preparación.

5bserva al microscopio utilizandoel lente de inmersión.



F!ndamento

La tinción de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con elpeptidoglicano de la pared bacteriana. 'osteriormente, se coloca, lugol, el cual sirve como mordiente e impide lasalida del cristal violeta por la formación de un comple$o cristal violetayodo que satura los espacios delpeptidoglicano de la pared bacteriana alco%ol!acetona, la cual des%idrata la pared bacteriana y cierra los poros dela misma, tambin destruye la membrana e-terna de las bacterias Gram negativas debido a que sta es soluble ala acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alco%olacetona.Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza estecomple$o, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. 'o1ltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para te(ir lasbacterias que no pudieron retener el comple$o cristal violeta!yodo. 8ay bacterias de un mismo gnero que puedeobservarse en la misma muestra como Gram positivas y como Gram negativas, a este evento se le llama tinciónGram variable secundaria a alteración en nutrientes, temperatura, p8 o concentración de electrolitos.

Co%ora$)n A$do,Re""tente#



'ara realizar esta tcnica se

utilizó el cultivo de E. coli

ubre el frotis proporcionado confucsina fenicada al 49 "carbol fucsina#

y de$arlo reposar de 37 a :7 segundos

antes de calentarlo.

alienta la preparación con

suavidad, %aciendo pasar el

mec%ero de alco%ol por deba$o del

portaob$eto. &eguir calentando %asta

que se observe el desprendimiento

de vapores. Evitar que el colorante

%ierva. +epetir 6 veces más.

Enfría y lava con agua

corriente.

colora con alco%ol!acido

sta que no arrastre

orante.



Re"!%tado

Lava con agua

corriente.

ubrirá el frotis con

azul de metileno,durante ; minuto.

Lava con agua

corriente y de$a

secar al aire.

5bserva al microscopio con lente de

inmersión. Las bacterias acido!alco%ol

resistente se ti(en de ro$o y los demás

microorganismos de color azul.



F!ndamento

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos "ácidos micólicos# de cadena larg

"47 a <7 átomos de carbono# que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alco%ol!ácido, despu

de la tinción con colorantes básicos. 'or esto se denominan ácido!alco%ol resistente.

Co%ora$)n de E"1ora"#

En e"ta 1arte de %a 1r;$t$a "o%o "e 1ra$t$) %a t($n$a no "e rea%9) e% "embrado de %a e"1ora:

*ro$edmento

Se procede adesinfectar la lámina

porta objeto con

alcohol



8aga un frotis fino

y fi$e a la llama.

ubre con azul de

metileno y calienta %asta

%ervir en forma

intermitente por ; minuto.

Lava con agua

destilada.

ubre con una mezcla de

solución saturada alco%ólica de

Eosina por 37 segundos.

Lava con agua

destilada y de$asecar al aire.

&olo se realizó la tcnica.



F!ndamento

Las endosporas poseen unas cubiertas e-clusivas que las %acen resistentes a los factores ambientales adversos

Además, estas cubiertas %acen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringente

y de difícil tinción. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes/ ;.! =erde malaquita/ capaz de te(ir laesporas en caliente. 6.! &afranina/ colorante de contraste que ti(e las formas vegetativas. Las endosporas, tras la

primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo %arán las formas vegetativas, que quedará

te(idas con el segundo colorante.

Co%ora$)n ne&at6a

*ro$edmento#

E-amina al

microscopio con

lente de

inmersión.

!ara esta técnicautilizamos el cultivo de

S. aureus

oloca varias asadas de

cultivo en un portaob$eto

limpio, cerca de uno de los

bordes.oloca un

volumen igual detintas c%ina cerca

del cultivo.



,

>ezcla bien con el asa y luego

e-tiende la mezcla a lo largo del

portaob$etos, utilizando la tcnica

del frotis sanguíneo.

0e$ar secar el frotis

ubre con safranina

durante ;7 segundos

Luego en$uaga con

cuidado y de$a

secar al aire.



Re"!%tado

F!ndamento

El colorante no ti(e los microorganismos, se queda alrededor de ellos. &e usa tinta c%ina "suspensión de partícul

de carbón coloidal# o nigrosina "colorante negro insoluble en agua#&e usa para encontrar presencia de cápsulas

alrededor de las clulas microbianas y micóticas, ya que este elemento no se ti(e con bases. 'ara e-aminar esta

tinciones debe aumentarse el contraste cerrando el diafragma del condensador, la cápsula parece un %alo que se

ve grisen el fondo negro.

Con$%!")n#

En esta practica pudimos aprender las diferntes tecnicas de tinciones es cual es una

herramienta muy útil en el laboratorio de microbiología así como en los análisis clínicos

diagnosticos medicos siendo fundamental conocer sus fundamento y procedimientos,

para poder tener un correcto resultado y consiguiente interpretación de los datos que

5bserva al microscopio con lente de

inmersión. Al e-aminar la preparación, la

capsula aparecerá como una zona

trasparente que rodea a la pared celular.

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