LASER CAPTURE MICRODISSECTION (LCM)

Microdissecção a Laser•1996 – National Cancer Institute dos EUA (Emmert-Buck MR et al, 1996)

•Tornou-se uma ferramenta extremamente importante na pesquisa biológica, potencialmente ampliando o uso de técnicas já existentes de Biologia Molecular.

•Assim, a área de aplicação desta tecnologia reúne vários grupos como: a Patologia, as Neurociências, a Genética, a Botânica e a Medicina Forense entre outras

Leica LMD6000Laser microdissection system

•Arcturus - PixCell IIe™ LCM Station

Animação 1

Gravidade

•Lâmina contém um filme transparente termoplástico (ethylene vinyl acetate polymer)

•Laser de dióxido de carbono

Animação2

Animação 4Animação 3

Microdissecção a Laser

•Muito preciso,•Sem contato mecânico, •As espécies são coletadas com baixo risco de contaminação

•O contato com o laser preserva a morfologia das células e seu material genético, permitindo análise molecular.

•Extração de populações celulares homogêneas, garantindo que apenas as células de interesse sejam isoladas (células epiteliais, por exemplo)

Microdissecção a Laser•O material extraído pode ser previamente fixado em parafina (material de arquivo) ou congelado

•TÉCNICAS:•Avaliar a expressão gênica (RNA ou DNA), •Western blotting•Técnicas protêomicas

•Quantidade de material•Extração de RNA, por exemplo de 10 células a 15000 células•50.000 células para análise em gel 2-D •20.000 células para Western Blot

•ISOLAR: •Grupos de células semelhantes, •Estruturas multicelulares•Células únicas•Cromossomos

•IDENTIFICAÇÃO DAS CÉLULAS E/OU TECIDO

•Coloração de rotina HE, AT•Imunocitoquímica,•Imunofluorescencia•DIC (diferencial de contraste de interferencia)

Dificuldades

• Preservação do material

MORFOLOGIA

INTEGRIDADEDNA,RNA,PROTEÍNAS

E

ED

Citoquímica de lectina DBA

http://www.direxlim.fm.usp.br/Coordenador(es) Thais MauadChin Jia LinLuiz Fernando Ferraz da Silva