SIMPOSIO Nº 13:
“EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL LOXOSCELISMO EXPERIMENTAL EN Oryctolagus cuniculus”
Integrantes:
Alayo Rodríguez, Nilder Alvarado Valderrama, Lucia Bamberger Vazallo, Karla Corcio Nuñuvero, Henry Figueroa Sánchez, Irvin Iparraguirre Castillo, Nieves
Profesor: Mg. Lizardo Cruzado Razco
Ciclo: IX-“A”
TRUJILLO – PERÚ
2010
AgradecimientosA ti Señor:
Gracias por guiar nuestros Caminos
y permitir que nuestras metas sean logradas.
Gracias por el inmenso amor que nos tienes,
tus bendiciones y
el regalo de la vida.
A nuestros padres:
Desde lo más profundo de nuestro corazón
mil gracias por su compresión,
por sus sabios consejos, y
por su ayuda incondicional para
hacer realidad uno de nuestros más hermosos sueños,
El ser profesional.
Un especial agradecimiento a la
Cátedra de Toxicología
por la confianza y el apoyo
brindado, para que este trabajo
se realice.
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN…………………………………………….................... 1
MATERIAL Y MÉTODOS………………….…………..………….......... 5
RESULTADOS……………………………….……………........................ 9
DISCUSIÓN………………………………………………...…….….….…… 12
CONCLUSIONES…………………………………….............................. 15
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…..…………………..……….…..16
ANEXOS………………………………………..…………….…………..……..20
I. INTRODUCCIÓN
La mortalidad por incidentes con animales venenosos en el mundo, es un problema de
mayor magnitud de lo que se cree en el presente, donde la importancia de los artrópodos
como fuente potencial y real de accidentes no puede dejar de ser tomada en cuenta 1.
Las arañas del género Loxosceles se encuentran dentro del reducido grupo de arañas
capaces de producir la muerte al ser humano, ocupando a nivel nacional y mundial los
primeros lugares en cuanto a cantidad de accidentes y peligrosidad. Los accidentes
producidos por arañas del género Loxosceles pueden ser de diagnóstico difícil dado que
en ocasiones la araña o su mordedura pasan inadvertidas, la aparición de síntomas no es
inmediata y algunos de los mismos son inespecíficos 2.
En América hay más de 50 especies del género Loxosceles, distribuidas principalmente
en las zonas tropicales y templadas. Su área de distribución es amplia hallándose en:
Argentina, Chile, Bolivia, Brasil, Perú, Uruguay, así como en la mayoría de los
continentes.2
Se reconoce al loxoscelismo como un emponzoñamiento accidental secundario a la
mordedura por araña del género Loxosceles, estas arañas poseen glándulas
especializadas en secretar sustancias principalmente proteicas. En general, las arañas no
son parásitos sino más bien, animales depredadores; los casos en que el hombre es
comprometido accidentalmente son de importancia médica y de salud pública 2.
Los primeros casos de loxoscelismo comprobado, debidos a Loxosceles laeta fueron
descritos en Chile, donde se denominó al cuadro «Mancha gangrenosa de Chile» por
Machiavello en 1937. En E.E.U.U. hay accidentes ya descritos por Atkins en 1957
debidos a L. reclusa, la principal especie productora de loxoscelismo en ese país. En
Brasil se describió por primera vez loxoscelismo en 1959, siendo las especies de mayor
importancia sanitaria L. gaucho, L. intermedia y L. laeta 3.
En 1996, el CDC (Center for Disease Control and Prevention) de los E.E.U.U., ha dado
mayor significación a los casos de aracnoidismo como problema de salud pública. En el
Perú el loxoscelismo ya fue considerado en 1983 como un problema de salud pública
por Zavaleta y colaboradores. En ambos países no es obligatorio el reporte de casos, de
modo que la magnitud real del loxoscelismo se desconoce, particularmente en el Perú.
1
Esta falta de obligatoriedad de la notificación de estos accidentes y el escaso número de
investigaciones epidemiológicas en el país, contribuyen a que se desconozca
indicadores epidemiológicos básicos.1
En el Perú podemos encontrar hasta 3 géneros de arañas peligrosas para el hombre:
Latrodectus, Loxosceles y Lycosa, este último fue encontrado hace algunos años en
ciertas áreas de Arequipa 4,5,6.
Las arañas del género Loxosceles miden aproximadamente entre 0,75 cm y 1,5 cm de
longitud. Poseen 3 pares de ojos dispuestos, dos lateralmente y el otro al frente. Son de
color pardo rojizo (tostado), y su cefalotórax muestra una mancha de forma que
recuerda a un violín invertido, esto último hace que en algunos lugares se las conozca
como arañas "violín". Sus patas son más bien largas y su aspecto es endeble. No existen
evidencias que sean agresivas y sólo muerden si se las molesta. Prefiere vivir de manera
solitaria en áreas oscuras, su hábitat es en ciertos lugares del hogar y se alimentan
básicamente de insectos 2,3,7.
La toxicidad que provoca se debe al veneno que inyecta alrededor de 0,1-0,4 µl de este
que alcanza el espesor dérmico. Su componente principal es una esfingomielinasa D,
enzima responsable de la acción necrótica, el cual produce necrosis tisular, hemólisis
intravascular, coagulación, vasculitis y se han descrito también mielopatías. Además
produce coagulación intravascular diseminada (CID) con cuadros cutáneo - viscerales y
hemolíticos fatales 2,3.
Como consecuencia de la mordedura se puede observar edema, adelgazamiento del
endotelio vascular, acumulación de células inflamatorias, vasodilatación, degeneración
de las paredes vasculares y hemorragia. No todas las mordeduras provocan lesiones
necróticas ni sistémicas, existiendo susceptibilidades individuales diferentes en la
respuesta al veneno y en la aparición de cuadros viscerales hemolíticos. Esta diferencia
se observa también en los diferentes modelos de animales experimentales 2.
Los accidentes producidos por arañas venenosas constituyen una problemática de salud
pública, la cual debe ser enfrentada con educación de la comunidad y capacitación de
los profesionales de la salud, con el objeto de brindar un adecuado diagnóstico,
tratamiento y acciones de prevención 8.
2
Un estudio acerca de Loxoscelismo de la Dra. Silvia Cabrerizo y colaboradores
describen la patología endémica, con el objetivo de brindar una actualización sobre las
características de este envenenamiento, así como su diagnostico y tratamiento; además
identifican a los niños como una población con mayor riesgo debido a sus actividades
lúdicas, pues tienen contacto con ambientes infestados, por ello se destacan que las
medidas principales en lo referente al loxoscelismo deben dirigirse a la prevención de
los accidentes, esto implica fundamentalmente la limpieza periódica de los hogares y
evitar el depósito de materiales y objetos que pudieran dar lugar a la proliferación de
artrópodos. Finalmente aconsejan que ante una mordedura de araña desconocida con
manifestaciones cutáneas características o compromiso sistémico debe realizarse el
diagnóstico correcto y el seguimiento estricto del paciente por medio del interrogatorio
dirigido, que permite instaurar un tratamiento precoz 3.
En la Universidad Nacional de Trujillo se han realizado estudios experimentales como
el de Alcántara B. (1986) titulado: Loxoscelismo experimental en Oryctolagus
cunniculus, Cavia porcelus, Mus musculus alexandrinos, logrando diferenciar el efecto
del veneno en las tres especies, siendo el menos sensible entre ellos el Mus musculus
alexandrinos y el de mayor sensibilidad dermonecrótica el Oryctolagus cunniculus;
muriendo el 50% de ellos a las 24 horas. La acción viscerohemolítica se presentó en las
tres especies 9, 10, 11,12.
Otro estudio realizado por Campos J.; Rodríguez D: Efecto de la Termoterapia y
Crioterapia en el Loxoscelismo experimental en Oryctolagus cuniculus (1992), llegando
a la conclusión de que la crioterapia y la termoterapia son tratamientos efectivos contra
el proceso dermonecrótico del veneno Loxoscélico; fundamentándose en el hecho de
que las proteínas con actividad enzimática necesitan de condiciones óptimas, entre ellas
la temperatura, para poder actuar. Específicamente la termoterapia disminuye la
equimosis y flictenas a nivel de piel y es más efectiva que la crioterapia. Pero ninguna
de ellas es útil en el tratamiento de loxoscelismo sistémico 13, 14,15.
Existe uniformidad en algunos criterios básicos del tratamiento del loxoscelismo, como
que ningún procedimiento médico impide la difusión del veneno. Por ello el tratamiento
está dirigido a controlar los síntomas y a eliminar la extensión de la destrucción tisular.
En el intento de lograr un tratamiento inmediato, debido a las dificultades en la
obtención rápida de suero específico, se buscan procedimientos que estén al alcance del
3
hombre, por lo que en el presente experimento se intentará disminuir los efectos del
veneno con la variación de la temperatura 15.
Como servidores primarios de salud y primera fuente de consulta debemos estar
preparados para saber orientar a los pacientes, no sólo adquiriendo los conocimientos
profesionales necesarios y estar actualizados en cuanto a los protocolos de actuación,
sino también informándonos sobre las instituciones de nuestra comunidad y así saber a
dónde remitir al paciente sin pérdida de tiempo por antídotos ante mordeduras de ofidio,
de alacrán, de araña ponzoñosa u otros. Cada región tiene sus propios riesgos, y el
farmacéutico, integrante del equipo de salud de su comunidad, debe estar informado y
capacitado para brindar eficientemente la información necesaria para evitar
complicaciones o salvar una vida.
Por los antecedentes anteriormente expuestos nos planteamos el siguiente problema:
¿Cuál es el efecto de la temperatura en el loxoscelismo experimental en Oryctolagus
cuniculus?
Como hipótesis planteamos: debido a que el veneno loxoscélico esta constituido por
enzimas, las cuales son proteínas, necesitan de condiciones optimas para su actividad,
entre las que destacan: pH, temperatura, concentración de sustrato y otros factores. En
tal caso es posible que a bajas temperaturas y temperaturas mayores a 40ºC, respecto a
la temperatura normal de los mamíferos (37ºC), presenten efecto inhibitorio de los
componentes enzimáticos del veneno loxoscélico.
La contrastación de la hipótesis, se realizó intoxicando experimentalmente Oryctolagus
cuniculus, con veneno loxoscélico a la dosis del contenido de dos glándulas por cada
experiencia, 10 minutos después de inoculado el veneno se aplicará una torunda de
algodón embebida con agua helada a 4º C sobre el área inoculada de 5 ejemplares por
un periodo de 15 minutos, se repite este procedimiento cada 10 minutos hasta
completar 6 horas, similar procedimiento se aplicará a otros 5 ejemplares, pero
aplicando torundas de algodón embebidas en agua caliente a 45ºC, y otros 2 ejemplares
no recibirán tratamiento y servirán de testigos.
4
II. MATERIAL Y MÉTODO
1. MATERIAL
1.1. Material Biológico:
Arañas del género Loxosceles laeta, 24 ejemplares adultas hembras
y machos capturados en la provincia de Virú, departamento de la
Libertad.
Oryctolagus cuniculus; 12 ejemplares hembras y
machos, aparentemente sanos, de raza nueva Zelanda con un peso
promedio de 2 Kg, adquiridos en una granja de la ciudad de
Trujillo.
1.2. Material de Laboratorio:
Material de vidrio:
Pipetas de 10 mL “Corning” 05
unidades (un.)
Fiola de 100 mL “Corning” 01
un.
Probeta de 250 mL “Pirex”
02 un.
Reactivos:
Alcohol yodado “Dropaksa”
1000 mL
Solución Salina Fisiológica 1000
mL
Agua destilada
1000 m:
Otros:
Jeringas
descartables
Algodón
Viales
J
aula para conejos
Balanza
5
Refrigeradora
“Electrolux”
Cámara digital
Termómetro
Cocina
Bolsas de polietileno
Vasos descartables
Palillos de madera
2. METODO
1.1. CAPTURA DE ARAÑAS
La búsqueda se realizó en horas de la mañana y tarde, examinando debajo de
adobes, resto de maderas, cerca de piedras, ladrillos; una vez localizados, con
la ayuda de vasos de plástico con boca ancha (previamente agujereados) y una
espátula de madera se procedió a colocar el vaso en forma oblicua cerca del
arácnido y con la espátula se introdujo dentro del vaso, teniendo cuidado de no
dañar las partes del cuerpo; inmediatamente se tapó con bolsas de plástico y
cubriéndoles de la luz solar. Una vez capturados se acondicionó en cartones y
se alimentó con pequeños insectos (Musca domestica) durante una semana.
1.2. IDENTIFICACION DE LAS ARAÑAS :
Se realizó bajo el asesoramiento del Mg. Lizardo Cruzado Razco, docente de la
cátedra de Toxicología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo, se tuvo como base la característica
morfológica que identifica a Loxosceles laeta 16.
1.3. EXTRACCION DEL VENENO LOXOSCÉLICO
Se realizó según la técnica descrita por Knieris F, y Letonja T. modificada, las
arañas se sometieron a congelación a una temperatura de -30ºC por espacio de
20 – 30 minutos, luego se retiraron del congelador y se aisló el cefalotórax del
cual se separaron las glándulas por disección, una vez separadas, se les colocó
en un vial apropiado que contenía 0.5 mL de solución salina fisiológica, luego
las glándulas se presionaron para liberar el veneno 15.
6
1.4. PREPARACION DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACION
Se acondicionó la pata trasera de cada conejo, lugar donde se inoculó la toxina
loxoscélica.
1.5. INTOXICACION EXPERIMENTAL DE LOS ANIMALES POR
ADMINISTRACION DE LA TOXINA LOXOSCELICA
A cada ejemplar se inoculó por vía intradérmica en la pata trasera derecha una
dosis de 0.5 ml, de solución de toxina loxoscélica, el cual contenía veneno de
dos glándulas, luego se distribuyó a los ejemplares en tres grupos: A, B. C, en
número de 5 Oryctolagus cuniculus para el grupo A y B. Para el grupo C se
utilizó 2 Oryctolagus cuniculus 15.
1.6. TRATAMIENTO DE LOS ANIMALES INTOXICADOS
El tratamiento se inició 10 minutos después de administrada la toxina
loxoscélica.
Para el grupo “A” el tratamiento consistió en la aplicación de una torunda de
algodón embebida con agua helada (4ºC) sobre el área de inoculación por un
periodo de 15 minutos, se repitió este procedimiento cada 10 minutos, hasta
completar 6 horas.
Para el grupo “B” el tratamiento consistió en la aplicación de una torunda de
algodón embebida con agua caliente (45 ºC) sobre el área de inoculación por
un periodo de 15 minutos, se repitió este procedimiento cada 10 minutos, hasta
completar 6 horas.
Para el grupo “C” no hay tratamiento alguno por considerarse testigo.
1.7. AUTOPSIA DE LOS ESPECIMENES
7
A los ejemplares muertos como resultado del efecto del veneno, se realizó la
autopsia para lo cual se abrió el vientre y se extrajeron los órganos siguientes:
hígado, riñón, pulmones y corazón. Se lavó cada órgano con suero fisiológico y
se colocó en frascos que contenían formol al 10% por un periodo de 10 días. Se
condujo al laboratorio para su procesamiento y estudio anatomopatológico 7.
1.8. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS Y ESTUDIO
ANATOMOPATOLOGICO.
Las muestras seleccionadas se sometieron a la técnica convencional de
procesamiento histológico, para lo cual se hizo cortes de cada órgano y se
colorean con eosina y hematoxilina. Se evalúan las lesiones microscópicas de
los órganos viscerales de cada muestra, las lecturas de los resultados fueron
dirigidas por el médico citopatológico del Hospital Regional Docente de
Trujillo, el Dr. Wilmer Plasencia 15.
8
III. RESULTADOS
TABLA N° 1: RESULTADOS OBTENIDOS A NIVEL CUTANEO EN LOS GRUPOS EXPERIMENTALES Y TESTIGO
LEYENDA:
GRUPO A: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA HELADA (4°C)
GRUPO B: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA CALIENTE (45°C)
GRUPO C: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO SIN TRATAMIENTO
+/- : POCO EVIDENTE
9
GRUPO N° EDEMAS ERITEMAS EQUIMOSIS NECROSIS
GRUPO A
1 +/- + + +/-2 +/- + + +/-3 +/- + + +/-4 +/- + + +/-5 +/- + + +/-
GRUPO B
1 + + + +/-2 + + + +3 + + + +4 + + + +5 + + + +
GRUPO C1 ++ + + +
2 ++ + + +
+ : EVIDENTE
++ : MUY EVIDENTE
- : AUSENTE
TABLA N° O2: MORTALIDAD DE Oryctolagus cunniculus DESDE EL MOMENTO DE LA ADMINISTRACION DEL VENENO HASTA LAS 54 HORAS QUE DURO LA EXPERIENCIA
GRUPO N°
MUERTES PRODUCIDAS
0 horas
08 horas
12 horas
18 horas
24 horas
30 horas
40 horas
48 horas
54 horas
GRUPO A
50/5 0/5 1/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5 5/5
0% 0% 20% 20% 40% 60% 80% 100% 100%
GRUPO B 5
0/5 0/5 0/5 1/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5
0% 0% 0% 20% 20% 40% 60% 80% 100%
GRUPO C
20/2 2/2 2/2 2/2 2/2 2/2 2/2 2/2 2/2
0% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100%
LEYENDA:
GRUPO A: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA HELADA (4°C)
GRUPO B: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA CALIENTE (45°C)
GRUPO C: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO SIN TRATAMIENTO
10
11
TABLA N° O3: RESULTADOS O BTENIDOS DE LOS EFECTOS PRODUCIDOS POR LA TOXINA LOXOCELICA OBSERVADOS EN LOS CORTES HISTOLOGICOS
Leyenda:
GRUPO
GRUPO A: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA HELADA (4°C)
GRUPO B: ESPECIMENES INTOXICADOS CON VENENO LOXOSCÉLICO Y TRATADOS CON TORUNDAS DE ALGODÓN EMBEBIDAS EN AGUA CALIENTE (45°C)
GRUPO C : ESPECIMENES INTOXICADOS SIN TRATAMIENTO
PATOLOGIA
Leve: +
Moderada: ++
Severa: +++
Nula: -
PATOLOGIA
GRUPOCONGESTION ISQUEMIA HEMORRAGIA INFLAMACION OTROS
A
CORAZON ++ ++ - ++
HIGADO ++ ++ - + Trombosis
PULMON ++ - ++ ++ Trombosisedema, atelectacia
RIÑÓN ++ ++ - ++ Degeneración hidropica moderadaHinchazón túbulos proximales
B
CORAZON + + - +
HIGADO ++ + - ++
PULMON + - - + Alveolo enfisematoso
RIÑÓN + + - +
C
CORAZON +++ ++ - - NecrosisCoagulación
HIGADO +++ ++ ++ +++ Hiperplasia de células de Kupffer
PULMON +++ ++ +++ ++ Infiltrado inflamatorioRompimiento de alveolo, atelectacia
RIÑÓN +++ +++ - +++
IV. DISCUSION
Las experiencias realizadas con el veneno loxoscélico en Oryctolagus cuniculus, están
orientadas a comprobar el efecto que presenta el tratamiento con temperaturas de 4°C
(torundas de agua helada) y de 45°C (torundas de agua caliente), tras la administración
intradérmica del veneno.
En la tabla Nº 01 se describe los resultados obtenidos a nivel cutáneo tras la
administración de veneno loxoscélico por vía intradérmica en Orytolagus cuniculus,
durante el tiempo que duró la experiencia. El edema se presenta con mayor intensidad
en el grupo testigo (GRUPO C) debido a la actividad proteolítica del veneno loxoscélico
que lisa la membrana de las células cebadas liberando histamina, la cual a nivel de vasos
incrementa la permeabilidad y facilita la extravasación de líquidos; mientras que en los
grupos de tratamiento con torundas de algodón embebidas con agua helada ( 4°C ) y
con agua caliente (45°C) se observa en menor intensidad, debido a que las enzimas
(proteínas) que constituyen el veneno loxoscélico sufren alteración en su actividad, por
cambios de temperatura 15,17,18.
El veneno loxoscélico está constituido por metaloproteinasas, esfingomielinasas y
proteasas de serina, de éstas la esfingomielinasa, llamada F35, sería la de mayor
importancia, esta posee 3 porciones (P1, P2 y P3), de las cuales la P1 y P2 tienen
actividad esfingomielinasa – D e in vivo causan hemolisis y dermonecrosis, la P3 es
inactiva 9.
El eritema y la equimosis se presenta sin diferencias entre los grupos y son signos
característicos del efecto cutáneo que provoca el loxoscelismo, estos signos se deben a
la esfingomielinasa – D, enzima que induce la expresión de E – selectinas, relacionadas
con los procesos inflamatorios vasculares 2, 19, 20.
Con respecto a la necrosis, originada por la esfingomielinasa – D (la cual eleva el factor
de necrosis tumoral (FNT)), interleuquinas 6 y 10, factor estimulante de colonias de
macrófagos y granulocitos (GMC-SF), se observa que el efecto es menor en los grupos
con tratamiento, mientras que en el grupo control se evidencia con mayor intensidad,
debido a que el cambio de temperatura altera la composición de la esfingomielinasa, por
ende su actividad tóxica 20,21 22.
Los resultados obtenidos nos permiten afirmar que el tratamiento con torundas de
algodón embebidas con agua helada (4°C) presenta un menor daño cutáneo que con
temperatura de 45ºC mas no se pudo lograr una disminución del efecto viscero –
hemolítico. Este resultado coincide con diversos autores como Loyola y Guerrero que
en 1991 demostraron experimentalmente que el tratamiento con hielo en el área de
inoculación del veneno, no se observó un efecto proteolítico severo debido a que los
constituyentes del veneno que actúan sobre la piel y tejido muscular son de naturaleza
proteica con actividad enzimática, necesitando temperaturas óptimas, es decir 37º C 23.
En la tabla Nº 02 se describe la mortalidad de Oryctolagus cunniculus desde el
momento de la administración del veneno hasta las 54 horas que duró la experiencia, en
el cual se puede evidenciar que los dos especímenes que conforman el grupo testigo
(sin tratamiento) murieron después de 8 horas de administrado el veneno. A diferencia
del grupo “A” que murieron después de las 12 horas de administrado el tratamiento y el
grupo “B” después de las 18 horas, debido al efecto sistémico (viscerohemolitico).
El síndrome viscerohemolitico debemos entenderlo como hemolisis intravascular en
órganos internos, el cual es el causante principal de la muerte de los animales de
experimentación. La hemolisis que se observa en los cuadros viscerales, se produciría
por la modificación de componentes de la membrana eritrocitaria y la consiguiente
activación de la vía alternativa de complemento. Se ha comunicado recientemente que
la esfingomielinasa D actúa sobre la membrana del glóbulo rojo y activa
metaloproteinasas endógenas de la membrana eritrocitaria que clivan glicoforinas de la
superficie del eritrocito favoreciendo de esta manera la unión de factores de
complemento disparadores de la hemolisis. La aparición de cuadros hemolíticos y la
liberación de mediadores del proceso inflamatorio se han asociado a la deficiencia de la
enzima glucosa – 6 – fosfato deshidrogenasa 2, 24,25.
Los resultados en cuanto al efecto sistémico, descritos en la tabla Nº 03 es similar al
descrito por Campos J, Rodríguez D. y Salcedo C. los cuales manifiestan que la
termoterapia y crioterapia no son útiles en el tratamiento de loxoscelismo
viscerohemolitico. El calor es capaz de desnaturalizar las proteínas que conforman el
veneno loxoscélico, sin embargo, ante un aumento de temperatura los vasos sanguíneos
tienden a dilatarse, el calor provoca que las paredes de los vasos se dilaten, favoreciendo
la circulación y permitiendo un mayor riego sanguíneo a nivel de tejidos; de esta manera
el veneno loxoscélico llegaría de manera mas rápida a los tejidos aumentando la lesión
necrótica, sin embargo el daño viscerohemolítico será menor porque la proteína del
veneno llega desnaturalizada, pero llegaría mas rápido, lo que conllevaría finalmente a
la muerte por daño viscerohemolítico. Por otro lado las bajas temperaturas contraen los
vasos, produciéndose una vasoconstricción o disminución del flujo sanguíneo, por lo
que el daño necrótico tardaría más tiempo en presentarse, pero la proteína que conforma
el veneno quedaría solo inhibida más no desnaturalizada, por lo que también conduce a
la muerte por daño viscerohemolítico 11, 15.
V. RESUMEN Y CONCLUSIONES:
La mordedura de la araña parda (Loxosceles spp.) son un importante problema de salud
en América del Sur, donde predominan tres especies (Loxosceles laeta, Loxosceles
gaucho, Loxosceles intermedia) la mordedura de araña parda (loxoscelismo) inducen a
la necrosis cutánea y, con menor frecuencia, puede causar intoxicación sistémica fatal.
Al tener como hipótesis que el veneno loxoscélico esta constituido por enzimas, las
cuales son proteínas y necesitan de condiciones óptimas para su actividad, entre las que
destacan: pH, temperatura, concentración de sustrato y otros factores. En tal caso es
posible que a bajas temperaturas y temperaturas de 45ºC, respecto a la temperatura
normal de los mamíferos (37ºC), presenten efecto inhibitorio de los componentes
enzimáticos del veneno loxoscélico.
Para demostrar este efecto se realizó la intoxicación de Oryctolagus cunniculus con
veneno loxoscélico, simulando accidentes producidos por mordedura de araña del
género Loxsosceles. Se agrupó los animales de experimentación en tres grupo: A, B y C.
Al grupo A se le trató con torundas embebidas con agua helada (4ºC), al grupo B se le
trató con torundas embebidas con agua caliente (45ºC); y el grupo C, sirvió como
testigo. Nuestros resultados a nivel cutáneo en los especímenes que se les aplicó
tratamiento con temperatura fría y caliente demostraron menos daño en comparación
con el testigo. El daño fue evidenciado por la presencia de signos tales como: edema,
equimosis, eritema y necrosis. A nivel sistémico muestran que el tratamiento con calor
provocan un menor daño de los órganos en estudio: corazón, hígado, riñón y pulmones;
en comparación del tratamiento con frio, pero no fueron muy significativos.
Del análisis de los resultados se llega a las siguientes conclusiones:
1. El tratamiento con frio (4º C) y calor (45ºC) son efectivos para contrarrestar el
efecto dermonecrótico del veneno loxoscélico
2. EL tratamiento con frio es más efectivo que el tratamiento con calor como protector
a nivel cutáneo.
3. EL tratamiento con frio y con calor no son útiles en el tratamiento del loxoscelismo
sistémico aunque se muestra una leve protección con calor.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Saracco A., De Root A.: Loxososcelismo. Area de Medicina Legal.
Departamento de neurociencias. Facultad de Ciencia Medicas, Universidad
Nacional de Cuyo. Centro provincial de información y asesoramiento
toxicológico. Instituto nacional de Produccion de Biologicos – ANLIS. Revista
Medica Universitaria. Vol 4, Nº 1. Argetina 2008. Fecha de aaceso 03/06/10.
Disponible en: http://rmu.fcm.uncu.edu.ar/vol04_01/05/vol04_01_Art05.pdf.
2. De Roodt A, Salomón O, Lloveras S, Orduna T. Envenenamiento por Arañas
del Género Loxosceles. Centro Municipal de PAtologia Regional argentina y
Medicina Tropical (CEMPRA - MT), Hospital de Enfermedades infecciosas
Francisco J. Muñiz. Articulo especial 62: 83 – 94. Argentina 2002. Fecha de
acceso 03/06/10. Disponible en:
http://www.medicinabuenosaires.com/revistas/vol62-02/1/v62_n1_p83_94.pdf.
3. Cabrerizoa S., Docampoa P., Caria C., Ortiz de Rozasa, Díaza M. y et. all.
Loxoscelismo: epidemiología y clínica de una patología endémica en el país
Argent Pediatr 2009; 107(2):152-159 Citado el 03/06/10.Disponible en:
http://www.scielo.org.ar/pdf/aap/v107n2/v107n2a09.pdf
4. Sanabria H, Zavaleta A. Panorama Epidemiológico del Loxoscelismo en el Perú
Rev Med Exp. Vol. 14. Nº 2. 1997. Citado el 03/06/10.Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1726-
46341997000200006&script=sci_arttext
5. Vetter RS, Rust MK Influence of spider silk on refugia preferences of therecluse
spiders Loxosceles reclusa and Loxosceles laeta (Araneae: Sicariidae). J Econ
Entomol. 2010 Jun; 103(3):808-15. PubMed PMID: 20568627 Fecha de acceso
30/07/10. Disponible en:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
6. Pauli I, Minozzo JC, da Silva PH, Chaim OM, Veiga SS. Analysis of therapeutic
benefits of antivenin at different time intervals after experimental
envenomationin rabbits by venom of the brown spider (Loxosceles intermedia).
Toxicon. 2009 May;53(6):660-71. PubMed PMID: 19673081. 20568627 Fecha
de acceso 30/07/10. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
7. Silveira AL. [First synanthropic record of Loxosceles laeta (Nicolet, 1849)
(Araneae, Sicariidae) in the municipality of Rio de Janeiro, State of Rio de
Janeiro]. Rev Soc Bras Med Trop. 2009 Dec; 42 (6):723-6. Portuguese.
PubMed PMID: 20209362. 20568627 Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
8. López C. Martinez J; Vasquez A; Gonzales P.: Actividad Biologica del Veneno
de la araña de los rincones (Loxosceles laeta). Instituto de Salud Pública de
Chile. Chile 2002. Fecha de acceso 03/06/10. Disponible en:
http://www.ispch.cl/encabezado/noticias/publica/boletinfinal.pdf.
9. Alcántara B.: LOxoscelismo experimental en Oryctolagus cuniculus, Cavia
porcelus, Mus musculus alexandrinos. Tesis para optar el grado de Bachiller.
1986. Universidad Nacional de Trujillo.
10. Pauli I, Minozzo JC, da Silva PH, Chaim OM, Veiga SS. Analysis of therapeutic
benefits of antivenin at different time intervals after experimental envenomation
in rabbits by venom of the Brown spider (Loxosceles intermedia). Toxicon.
2009 Feb 4. [Epub ahead of print] PubMed PMID: 19470327. 20568627 Fecha
de acceso 30/07/10. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
11. Van den Berg C., Tambourgi D., A new sphingomyelinase D from Loxosceles
laeta venom gland: molecular cloning, expression, function and structural
analysis. Toxicon. 2009 Jun; 53(7-8):743-53. Epub 2009 Feb 26. PubMed
PMID: 19249326. Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
12. Ríos JC, Pérez M, Sánchez P, Bettini M, Mieres JJ, Paris E. [Prevalence and
epidemiology of Loxosceles laeta bite. Analysis of consultations to a poison
control center]. Rev Med Chil. 2007 Sep;135(9):1160-5. Epub 2007 Nov 15.
Spanish. PubMed PMID: 18064371. Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
13. Catalán A., Araya J., Varela H., Cortés W., Sagua H., González J. Evaluación
experimental de la eficiencia de una pintura repelente para arañas del género
Loxosceles Revista médica de Chile v.137 n.2 Santiago feb. 2009; 137: 240-
245 Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0034
14. Cermeño J., Carpio N. Aracnoidismo en el Hospital Universitario “Ruíz y Páez”,
estado Bolívar, Venezuela, y revisión de la literatura Rev. Soc. Ven.
Microbiol. v.24 n.1-2 Caracas ene. 2004 Fecha de acceso 30/07/10. Disponible
en:http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-
25562004000100017&lang=pt
15. Campos J. Rodriguez D: Efecto de la Termoterapia y crioterapia en el
Loxoscelismo experimental en Oryctolagus cuniculus. Tesis para optar el grado
de Bachiller. 1992. Universidad Nacional de Trujillo.
16. Abanto A.: Efecto del Veneno Loxoscélico sobre la acumulación de adrenalina
en capsulas suprarrenales de Oryctolagus cuniculus intoxicados
experimentalmente. Tesis para optar el grado de Bachiller 2000. Universidad
Nacional de Trujillo.
17. Docampo P, Cari C, Ortiz M, Diaz M, Roodt A, Curci O. Loxoscelismo:
Epidemiologia y clínica de una Patologia endémica en el país. Argentina 2009;
102(2): 152-159. Fecha de acceso 03/06/10. Disponible en:
http://www.sap.org.ar/docs/publicaciones/archivosarg/2009/v107n2a10.pdf.
18. David L. Swanson M., Richard S. Vetter S. Bites of Brown Recluse Spiders and
Suspected Necrotic Arachnidism N Engl J Med 2005; 352:700-707February 17,
2005 Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en:
http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMra041184
19. Wong SL, Schneider AM, Argenta LC, Morykwas MJ. Loxoscelism and
negative pressure wound therapy (vacuum-assisted closure): an experimental
study. Int Wound J. 2010 Jul 27. [Epub ahead of print] PubMed PMID:
20666855. Fecha de acceso 30/07/10. Disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
20. Nowatzki J, de Sene RV, Paludo KS, Veiga SS, Oliver C, Jamur MC, Nader
HB,Trindade ES, Franco CR. Brown spider venom toxins interact with cell
surface and are endocytosed by rabbit endothelial cells. Toxicon. 2010 Sep
15;56(4):535-43. Epub 2010 Jun 1. PubMed PMID: 20573594. Fecha de acceso
30/07/10. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
21. Vetter RS, Rust MK. Influence of spider silk on refugia preferences of the
recluse spiders Loxosceles reclusa and Loxosceles laeta Araneae: Sicariidae). J
Econ Entomol. 2010 Jun;103(3):808-15. PubMed PMID: 20568627. Fecha de
acceso 30/07/10. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed
22. Macías C. Moléculas de adhesión. Importancia en la respuesta inmune e
inflamatoria. Instituto de Hematología e Inmunología. Rev Cubana
Hematologia, Inmunologia y Hemoterapia 2006;22(2). Fecha de acceso
08/08/10. Disponible en:
http://www.bvs.sld.cu/revistas/hih/vol22_2_06/hih03206.html
23. Loyola C, Guerrero R. : Comparacion del efecto terapéutico de la Dexametasona
y el Hielo en el loxoscelismo experimental en Oryctolagus Cunniculus. Tesis
para optar el grado de Bachiller. 1991. Universidad Nacional de Trujillo.
24. Malbram, C.: Recomendaciones para la captura y transporte de Latrodectus
(“Viuda Negra”), Área Investigación y Desarrollo / Serpentario, Ministerio de
salud. Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Fecha de acceso 03/06/10.
Disponible en:http://www.webstore-inn.com.ar/Captura%20de
%20Latrodectus.pdf.
25. Borda, E. y otros. : Arácnidos de importancia médica de las especies Loxosceles
en la región de influencia de la Universidad Nacional del Nordeste. Centro
Nacional de Parasitología y Enfermedades Tropicales (CENPETROP).
Argentina. 2005. Fecha de acceso 03/06/10. Disponible en:
http://www.unne.edu.ar/Web/cyt/com2005/3-Medicina/M-141.pdf.
CAPTURA DE ARAÑAS
La búsqueda se realizó en horas
de la mañana y tarde,
examinando debajo de adobes,
resto de maderas, cerca de
piedras, ladrillos.
Con la ayuda de vasos de plástico con boca ancha y una espátula de madera se procedió a colocar el vaso en forma oblicua cerca del arácnido y con la
espátula se introdujo dentro del vaso, teniendo cuidado de no dañar las partes del cuerpo
IDENTIFICACION DE LAS ARAÑAS
EXTRACCION DEL VENENO
LOXOSCÉLICO
Inmediatamente se tapó con bolsas de plástico
y cubriéndoles de la luz solar
Una vez capturados se acondiciono en
cartones y se alimentó con pequeños
artrópodos durante una semana
Se realizó bajo el asesoramiento del Mg.
Lizardo Cruzado Razco, teniendo como
base la característica morfológica que
identifica el género Loxosceles.
Se retiraron del congelador y se aisló el cefalotórax del cual se separaron las glándulas
por disección
Una vez separadas, se les colocó en un vial apropiado que contenía 0.5 mL de solución
salina fisiológica, luego las glándulas son presionadas para liberar el veneno.
PREPARACION DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACION
Las arañas se someten a congelación a
una temperatura de -30ºC por espacio de
20 – 30 minutos
Se acondicionó la pata trasera de cada conejo, lugar donde se inoculó la toxina
loxoscélica.
INTOXICACION EXPERIMENTAL DE LOS ANIMALES POR
ADMINISTRACION DE LA TOXINA LOXOSCELICA
A cada ejemplar se inoculó por vía
intradérmica en el área acondicionada,
una dosis de 0.5 ml, de solución de toxina
loxoscélica, el cual contenía veneno de
dos glándulas
Se distribuyó a los ejemplares en tres grupos. A, B. C, en número de 5 Oryctolagus
cuniculus para el grupo A y B. Para el grupo C se utilizó 2 Oryctolagus cuniculus.
TRATAMIENTO DE LOS ANIMALES INTOXICADOS
El tratamiento se inició 10 minutos después de la inoculación de las toxinas loxoscélica
para lo cual se preparó torundas de algodón embebidas un grupo en agua caliente y otro
en agua fría.
EVOLUCION DEL LOXOSCELISMO
Pasada las 6 horas de aplicado el veneno se procedió al control de los animales
envenenados cada 3 horas observándose cambio en la zona inoculada tanto para los que
se aplicó torundas de agua caliente como para los que se aplicó agua fría
AGUA FRÍA
Para el grupo “A” el tratamiento consistió
en la aplicación de una torunda de
algodón embebida con agua helada a 4º C
sobre el área de inoculación por un
periodo de 15 minutos, se repitió este
procedimiento cada 10 minutos, hasta
completar 6 horas.
Para el grupo “B” el tratamiento consistió
en la aplicación de una torunda de algodón
embebida con agua caliente a 45 ºC sobre
el área de inoculación por un periodo de 15
minutos, se repitió este procedimiento cada
10 minutos, hasta completar 6 horas.
Para el grupo “C” no hay tratamiento
alguno por considerarse testigo.
1 2
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AGUA CALIENTE
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CONTROL
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5 6
AUTOPSIA DE LOS ANIMALES MUERTOS
A los ejemplares muertos como resultado del efecto del veneno, se realizó la autopsia
Se examinó el área donde se realizó la inoculación del veneno y el área regional.
Se abrió el vientre y se extrajeron
muestras de hígado, riñón, pulmones y
corazón.
Se lavó cada segmento con suero fisiológico y se colocó en frascos que contenían
formol neutro al 10% por un periodo de 10 días.
Se condujo al laboratorio para su procesamiento y estudio anatomopatologico.
EXAMEN ANATOMOPATOLOGICO
GRUPO “A” (FRIO)
- PULMON - HIGADO
- CORAZON - RIÑON
Congestión severa Inflamación aguda del parénquima Alveolos dilatado y colapsados
Congestión moderada multifocal Isquemia moderada Inflamación moderada
Congestión multifocal Degeneración hidrópica moderada Hinchazón túbulos proximales
Congestión
Congestión, isquemia e inflamación moderada
Hiperplasia células de Kupffer
GRUPO “B” (CALIENTE)
- RIÑON - CORAZON
- HIGADO - PULMON
Congestión sinusoidal severa Hiperplasia células de Kupffer Hemorragia
Débil proceso inflamatorio Congestión leve Ruptura de alveolos
Degeneración hidrópica leve Hemorragia Túbulos proximales hinchados
Isquemia Congestión leve superficial
TESTIGO
- RIÑÓN - HIGADO
- PULMON - CORAZON
Congestión severa multifocal Isquemia e inflamación severa
Congestión moderada multifocal Isquemia moderada Desaparición de núcleos de las células
Degeneración hidrópica moderada Túbulos proximales Hinchados
Atelectasia (espacios pequeños colapsados) Congestión severa Proceso inflamatorio agudo neutrofilico
Congestión moderada Isquemia
Congestión sinusoidal Congestión multifocal vascular Congestión intensa vena centrolobulillar
