RAPID HPLC/UV METHOD FOR ANALYSIS OF URINARY AND

PLASMA/SERUMPARACETAMOL CONCENTRATIONS/ RAPID HPLC / UV METODE UNTUK ANALISIS KEMIH DAN PLASMA /

SERUMKONSENTRASI PARASETAMOL

PREETHI SOYSA* AND SAMAN KOLAMBAGEDEPARTMENT OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY,

FACULTY OF MEDICINE, UNIVERSITY OF COLOMBO, KYNSEY ROAD. COLOMBO 8.

OLEH YENI SUWITA0911013100

ABSTRAKParasetamol adalah salah satu obat yang paling umum digunakan hampir untuk semua pereda nyeri dan penurun demam. Namun, overdosis berakibat kerusakan hati , selain itu overdosis parasetamol juga menyebabkan kematian pasien karena terlambat dalam penanganan. Untuk memberikan diagnosis yang akurat dan pengobatan cepat atas keracunan parasetamol, analisis cepat parasetamol pada jaringan pasien diperlukan.

CONTINUE

Dalam studi ini, kromatografi cair kinerja tinggi cepat dan simple dikembangkan untuk menganalisis plasma / serum dan urin dari parasetamol menggunakan 100 uL dari spesimen. Parasetamol secara kromatogarfi diselesaikan, dengan fase gerak isokratik diikuti oleh deteksi UV setelah presipitasi protein. β-Hydroxyethyltheophyllin digunakan sebagai standar internal. Elusi parasetamol dan standar internal dicapai dalam waktu 8 menit.

Kurva kalibrasi linier selama 0,25-200 mg / L. Metode ini menghasilkan akurasi yang sangat baik dan presisi di semua matriks diuji. antar hari variabilitas dan Intra kurang dari 5%. Batas deteksi adalah 0,13 mg / L untuk plasma dan 0,43 mg / L untuk urin, sedangkan batas kuantifikasi adalah 0,68 mg / L untuk plasma, dan 2,25 mg / L untuk urin. Tidak ada efek matriks yang diamati dengan zat endogen. Metode ini diterapkan untuk menganalisis kadar parasetamol dalam serum dari pasien keracunan karena kecelakaan ataupun dirinya sendiri.

PENDAHULUANParasetamol, juga dikenal sebagai acetaminophen, adalah salah satu analgesik yang paling sering digunakan dan obat antipiretik yang tersedia . Setelah oral administrasi dan penyerapan dari pencernaan saluran, parasetamol memasuki darah, didistribusikan seluruh tubuh dan dimetabolisme di hati. Pada dosis terapi, parasetamol sebagian besar dikonversi menjadi metabolit aktif melalui konjugasi dengan sulfat atau glukuronat dan dikeluarkan dalam waktu 24 jam. Toksisitas Parasetamol kemungkinan terjadi setelah konsumsi minimum dari 140 mg / kg .

Beberapa metode kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) untuk

analisis parasetamol dalam urin dan dalam serum telah dilaporkan

dalam literatur. harus dipertimbangkan dalam mengembangkan

metode analisis untuk mendeteksi tingkat parasetamol.

rumus kimia :

Pelarut gerak yang digunakan dalam Metode asli

adalah asetonitril: air (1:11) dengan asam asetat

(0.05%) and trietilamin (0.08%), pada metode ini asam

(0,05%) dan trietilamin (0,08%), diganti dengan 10%

asetonitril untuk metode ekstraksinya.

METODE DAN BAHAN

Bahan : sampel urin segar digunakan , untuk mempersiapkan

standar yang diperoleh dari relawan sehat dari kedua jenis kelamin, yang tidak meminum parasetamol . selama tiga atau lebih.

Sebagai aplikasi metode ini, serum dianalisis dari sampel darah (n = 80) dan dikirim ke laboratorium untuk analisis parasetamol. dengan berbagai sumber, termasuk Nasional Rumah Sakit Sri Lanka. Selain itu, sampel forensik dari anak umur satu setengah tahun yang memiliki gejala toksisitas parasetamol.

Alat dan Metoda :

KCKT dilakukan dengan Shimadzu LC 10AS sistem pengiriman pelarut dilengkapi dengan UV / VIS variabel panjang gelombang detektor Shimadzu SPD 10A (Shimadzu Corporation, Jepang), degasser Shimadzu DGU-14A (Shimadzu Corporation, Japan) dan integrator Shimadzu C-R8A (Shimadzu Corporation, Jepang). Kromatografi resolusi parasetamol dalam serum dan urin dicapai pada x 3,9 mm, 300 Bondpack C-18 HPLC column (Waters, Milford, MA) terpasang ke Spherisorb kolom penjaga 10x4.6 (Waters, USA).

Dengan cara pengenceran standar dengan matriks yang relevan dan digunakan untuk membangun kurva kalibrasi. Matriks awalnya diputar untuk mengkonfirmasi ada tidaknya parasetamol. Standar internal, yang digunakan adalah β-hydroxyethyltheophylline pada konsentrasi 200 mg L-1 dalam asetonitril (100%). kondisi kromatografi yang dioptimalkan untuk mengelusi parasetamol adalah tanpa campur standar internal (pada konsentrasi yang ditentukan) dan zat hadir dalam matriks serum / plasma atau urine pada panjang gelombang 254 nm. Semua standar disimpan pada -20oC.

HASIL

Komposisi pelarut dan laju aliran, dioptimalkan untuk meminimalkan gangguan matriks. fase gerak yang digunakan dalam pengujian ini disediakan baik didefinisikan pemisahan parasetamol dan internal standar dengan resolusi kromatografi yang sangat baik (Gambar 1). Puncak diidentifikasi oleh waktu retensi dan spiking standar otentik untuk kosong dan uji sampel (plasma dan urin). dan standar internal yang dielusi pada 5,53 ± 0,19 menit dan 6,46 ± 0,30 menit, masing-masing. Tidak mengganggu co-eluting puncak hadir baik dalam plasma, serum atau urin atau kosong karena zat endogen kafein dalam formulasi menunjukkan selektivitas yang sangat baik. Kurva kalibrasi dibangun dengan 10 standar kerja adalah linier lebih 0,25-200 mg L -1 untuk plasma dan urin matriks dengan R2 biasanya melebihi 0,99 (Gambar 2).

standar yang disediakan pemulihan koreksi meningkatkan keakuratan pengukuran. sangat baik dari kurva kalibrasi menunjukkan kecukupan β-hydroxyethyltheophylline sebagai standar internal untuk analisis parasetamol. Metode kekokohan sangat baik dengan variasi diterima di masa retensi (Tabel 1) setelah mengubah persentase kandungan organik dalam fase gerak dan laju alir tanpa co-eluting interferensi. Meskipun mengubah parameter metode, (R yang dihasilkan kurva kalibrasi linearitas (R 2 > 0.99) menunjukkan adaptasi dari metode (Tabel 1).

Gradien (rata-rata ± standar deviasi) dari kurva kalibrasi dibuat dalam plasma dan urin tetap stabil selama rentang konsentrasi seluruh, setelah 24 jam, satu minggu, empat minggu dan enam minggu (0,0155 ± 0,0003 dan 0.0167±0.0006 , 0,0167 ± 0,0006 untuk plasma dan urin masing-masing) ketika disimpan pada -20 oC. Nilai-nilai tersebut kompatibel dengan lereng dari membuat standar baru (Gambar 2) menunjukkan pendek dan jangka panjang stabilitas parasetamol dalam matriks dengan intraday minimal (n = 6) dan interday (n = 10)

KURVA PADA DETEKTOR

KETELITIAN Keakuratan metode ini memadai dan melebihi 94% di semua

matriks mempelajari dan relatif standard standar deviasi pengukuran ulang dari tiga tingkat QC berkisar 2,2-3,0 dan 2,3-3,2% dari yang diamati untuk masing-masing plasma dan urin Reprodusibilitas interday disajikan di CV% dari berulang analisis parasetamol (n = 6) selama 45 hari di tiga QC tingkat dan nilai kurang dari 5% untuk baik serum dan urin . LOD adalah 0,13 mg L dalam plasma, dan 0,68 mg / L dalam urin, sedangkan, LOQ adalah 0,43 mg L dalam plasma dan 2,25 mg L dalam urin.

Dalam rangka menerapkan metodologi, tingkat darah parasetamol pada sukarelawan sehat di Sri Lanka penduduk (n = 5) telah ditentukan pada waktu yang berbeda interval setelah pemberian tunggal parasetamol pada dosis 1 g. Konsentrasi serum parasetamol dalam darah adalah 10,71 ± 3,95 mg L (N = 5) pada 1 jam setelah administrasi oral parasetamol (data tidak dipublikasikan) pada dosis g 1. Rata-rata (± standar deviasi) serum konsentrasi parasetamol dari sampel dikirim ke lebih dari laboratorium untuk analisis dalam overdosis parasetamol diduga adalah 52,06 ± 44,77 mg L (N = 80). Sampel postmortem menunjukkan konsentrasi parasetamol dari 39,7 mg L

KURVA KONSENTRASI PARASETAMOL

DISKUSI

Metode analisis yang disukai untuk estimasi mendesak konsentrasi acetaminophen plasma HPLC Sebagian besar metode yang digunakan dalam hubungannya dengan HPLC solid-fase ekstraksi dengan UV atau elektrokimia deteksi dan ekstraksi sampel prosedur yang melibatkan banyak, memakan waktu ekstraksi organik dan pelarut Positif diagnosis keracunan parasetamol memerlukan analisis cepat tingkat parasetamol dalam tubuh cairan pasien overdosis. Karena semakin meningkat sengaja keracunan dan usaha bunuh diri yang disengaja terkait dengan parasetamol, analisis cepat adalah penting untuk manajemen yang efektif keracunan parasetamol.

Sebuah akurat metode analitis dan selektif telah dikembangkan yang membutuhkan penanganan sampel minimal untuk kuantifikasi parasetamol. Penggunaan ekstraksi cair-cair parasetamol dari serum sangat umum di sebagian besar dilaporkan metode waktu ekstraksi cair-cair mengkonsumsi, pengeringan dan langkah-langkah pemulihan dalam pekerjaan kita saat ini meminimalkan pengolahan waktu dan biaya analisis sampel. Penggunaan standar internal dalam asetonitril disediakan presipitasi sekaligus meminimalkan cairan sampel dibandingkan dengan presipitasi protein lainnya metode yang dijelaskan oleh beberapa penulis dalam plasma parasetamol analisis Pemusingan di x10, 000 g memadai dihapus protein dan residu yang tidak larut lainnya dari serum, plasma dan urin. Tidak ada buffer digunakan dalam metode ini sebagaimana dijelaskan dalam beberapa penelitian

TERIMA KASIH