Metoso de cultivo "Microbiologia"

7/23/2019 Metoso de cultivo "Microbiologia"

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CULTIVOS DEPREPARACIONDE MEDIOS

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NIVERSIDAD NACIONAL DE H ANCAVELICA

FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERA

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL Y

SANITARIA

TEMA

:

ASIGNATURA :

MICROBIOLOGIA

SECCION :A

DOCENTE :

ESTUDIANTES:

ACUA MONTAEZ NOEMI

ANCCASI ESTEBAN CINTHIA

APUMAYTA HUAMANI ISHER

ARECHE QUISPE RENZO

CENTENO SOTO SECARIO

DIAZ ERNANDEZ IVAN

LEDESMA GIRALDEZ WILDER

ORTIZ ZUARNABAR RA AEL

RAMOS GOMEZ EDITH

ZEBALLOS APARCO ERNESTO

HUANCAVELICA !"#

GRUPO $: CAZADORES DE MCROBIO

NOTA


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ESTE PRESENTE TRABAJO LE DEDICAMOS A DIOS POR LA VIDA QUE NOS DA YPARA ENSEAR.


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PRACTICA N2

INTRODUCCION:

Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin de las bacterias, para

observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio, los medios de cultivos son

fuentes nutritivas naturales que se asemejan al nicho ecolgico de los

microorganismos en la cual se desarrollan.

Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento

que tratan de aumentar el nmero de bacteria existente, si consideramos que se

encuentran en cantidad muy exigua, a la ve que inhiben la flora de asociacin

acompa!ante y de aislamiento "que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es

decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades#$ Los

medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite el

crecimiento de una especie bacteriana, car%cter de importancias para su

identificacin, y los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que

testar alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores "sustancias


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que var&an su coloracin segn el p' del medio# u otros &ndices de reacciones

qu&micas definidas.

(ara estudiar los microorganismos es necesario cultivarlos en los medios

apropiados. La t)cnica y el medio seleccionado dependen de la naturalea de la

investigacin en general se pueden presentar tres situaciones:

*e puede levantar una cosecha de c)lulas de una especie en particular que se tiene.

(uede ser necesario determinara el nmero y tipos de microorganismos

+l objetivo cl%sico del aislamiento es la separacin de los microorganismos en

grupos, que puedan identificarse siguiendo los principios de la microbiolog&a.

"Ledesma, -/#


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I% OB&ETIVO: OB&ETIVO GENERAL

(roporcionar al estudiante el conocimiento cient&fico y las habilidades

pr%cticas de los m)todos y t)cnicas utiliados en 0icrobiolog&a para el

aislamiento e identificacin de los principales agentes patgenos para el

hombre a partir de muestras.

OB&ETIVO ESPECI ICO

(racticar el manejo as)ptico de medios de cultivo. 1prender a esteriliar el asa bacteriolgica. 2onocer las diferentes t)cnicas de siembra. 3ealiar la transferencia "repique# de bacterias desde un cultivo puro

"cepa# a diferentes tipos y medios de cultivo.

4rabajar con una muestra real. 0arcar "identificar# adecuadamente los medios de cultivo. 1prender a tomar una muestra de la pseudomona putida.

II% FUNDAMENTO TE'RICO:

5e manera general se denomina 6medio de cultivo7 a cualquier material que presenteuna adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento

del nmero de c)lulas de una poblacin microbiana. +n los Laboratorios de

0icrobiolog&a se utilia una gran variedad de medios de cultivos para mantener las

cepas, aislar o identificar microorganismos, tienen un uso creciente en

la 8iotecnolog&a y la proteccin medioambiental, por lo que es una necesidad de

mantenerlos de manera que las propiedades que los hacen importantes permanecan

estables.
http://www.ecured.cu/index.php/Biotecnolog%C3%ADahttp://www.ecured.cu/index.php/Biotecnolog%C3%ADa


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Uno de los sistemas m%s importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el

laboratorio. +l material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el 0edio

de 2ultivo y el crecimiento de los microorganismos es el 2ultivo.

(ara que las bacterias crecan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe

reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin

de ox&geno adecuado, as& como un grado correcto de acide o alcalinidad. Un medio

de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe

estar exento de todo microorganismo contaminante.

+l agar es un elemento solidificarte muy empleado para la preparacin de medios de

cultivo. *e lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al

enfriarse a 9- grados. 2on m&nimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento

de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en )l. La elatina es otro

agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan

su licuacin.

+n los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los

hidratos de 2arbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el

valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los

microorganismos que ayuden a identificarlos. +l suero y la sangre completa se a!aden

para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

+l desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado

por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por

completo al propio medio.

1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,

como m&nimo, carbono, nitrgeno, aufre, fsforo y sales inorg%nicas. +n muchos

casos ser%n necesarias ciertas vitaminas y otra sustancia inductoras del crecimiento.


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*iempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o

captadores de electrones para las reacciones qu&micas que tengan lugar.

2iertas bacterias tienen necesidades nutritivas espec&ficas por lo que se a!ade a

muchos medios sustancias como suero, sangre, l&quido asc&tico, etc. ;gualmente

pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,

magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,

generalmente de naturalea vitam&nica.

0uy a menudo se a!aden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como

indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de

inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO

(artiendo de un medio l&quido podemos modificar su consistencia a!adiendo

productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendr&amos medios en estado

semislido o slido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos

microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto

de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

1ctualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,

pero hay tambi)n gran cantidad de medios l&quidos cuyo uso est% ampliamente

extendido en el laboratorio.

3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES

ran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de ox&geno

normal. 1lgunas pueden obtener el ox&geno directamente de variados sustratos. (ero

los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollar%n adecuadamente en una

atmsfera sin ox&geno ambiental. +n un punto intermedio, los microorganismos

microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosf)ricas parcialmente anaerobias

"tensin de ox&geno muy reducida#, mientras los anaerobios facultativos tienen un

metabolismo capa de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.


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4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD

Un nivel m&nimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las c)lulas vegetativas microbianas en los

cultivos. 'ay que prever el mantenimiento de estas condiciones m&nimas en las estufas

de cultivo a


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crecimiento microbiano normal del o de los espec&menes inoculados en dichos medios.

+l sistema cl%sico para esteriliar los medios de cultivo es el autoclave "que utilia

vapor de agua a presin como agente esteriliante#.

(odemos decir que la microbiolog&a empiea su verdadero desarrollo como ciencia en

el momento en que se descubre el microscopio y comiena la observacin de los

primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de

cultivo y la utiliacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de

inflexin en su evolucin.

La primera noticia de la utiliacin de medios de cultivo nos llega del miclogo

8refeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realiados

a base de gelatina.

*in embargo este sistema no era adecuado para las bacterias "por su menor tama!o# y

no fue hasta el a!o B>B cuando Lister populari un m)todo enfocado al cultivo puro

basado en diluciones seriadas en un medio l&quido.

Cochreali sus investigaciones utiliando en un primer momento rodajas de patata

como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne l&quido,

dise!ado por Loeffler, al que, en BB, a!adi gelatina, logrando un medio slido

transparente ideal para la observacin de la morfolog&a macroscpica de las colonias

microbianas.

+n el a!o BB tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiolog&a en relacin

con los medios de cultivo: el m)dico alem%n Dalter 'esse introduce el agar=agar

"polisac%rido extra&do de algas rojas# como solidificante.

+n BB> un ayudante de Coch llamado (etri, comiena a utiliar placas de cristal

planas, que se llaman desde entonces placas de (etri, para sustituir a las cl%sicas

bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

8eijerincE y DinogradsEy, que desde de BBB realiaron sus investigaciones sobre las

bacterias quimioauttrofas "utiliacin de nitrgeno y aufre sobre todo# tuvieron gran

importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. 5ise!aron

este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qu&mica favorec&a el
http://www.danival.org/gente/koch.htmlhttp://www.danival.org/gente/koch.html


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crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos

metablicos, eran los nicos capaces de utiliar para su desarrollo ciertos nutrientes

del medio.

III% MATERIALES Y METODOS:3.1. MATERIALES:

MATERIAL

#UNCI$N IMAGEN

MEDIOSDE

CULTIVO

H%&'% * *+ ,*+. / 0.% %* * +%0+.% %'% *+ '*,'. * %'%,*,*'*, %'%+*, ,. * '% +'&*

ASA

BACTERE

OLOGICA

S* *+*% %% %,.%7 %%,%, .%,%,% '8+., (*9*:. .+*9* '** .;%',. * ,,*,'8)*,* +% ,.+'.* * %&%


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EMBUDO

DE

VIDRIO

+l embudo es un instrumento empleado

para

canaliar l&quidos y materialesslidos gran

ulares en recipientes con bocas estrechas.

+s usado principalmente en cocinas,

laboratorios, actividades

de construccin, industria, etc.

(ude ser devidrio,pl%stico.

VASO

PRECIPIT

ADO

Un vaso de precipitados o vaso de

precipitado es un recipiente cil&ndrico de

vidrio fino que se utilia muy comnmente

en ellaboratorio,sobre todo, para preparar

o calentar sustancias y traspasar l&quidos.eneralmente de vidrio pero tambi)n hay

de pl%stico y metal.

PROBETA

MILIMET

RADA

+s un instrumento volum)trico, que

permite medir volmenes considerables

con un ligero grado de inexactitud. *irve

para contener l&quidos.

5e vidrio.

MECHER

O

DE ALCO

HOLO

RON

*irve para calentar sustancias con alcohol

o ron.

5e vidrio o metal.

TUBO DE

ENSAYO

+s un tubo cil&ndrico peque!o utiliado en

la contencin de muestras l&quidas y

tambi)n para calentarla, etc.5e vidrio.

MATRAZ 3ecipiente de cristal donde se meclan las

soluciones qu&micas, generalmente de

forma esf)rica y con un cuello recto y

estrecho, que se usa para contener l&quidos$

se usa en los laboratorios.

5e vidrio.
http://www.monografias.com/trabajos14/propiedadmateriales/propiedadmateriales.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos35/materiales-construccion/materiales-construccion.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos16/industria-ingenieria/industria-ingenieria.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos5/plasti/plasti.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos14/propiedadmateriales/propiedadmateriales.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos35/materiales-construccion/materiales-construccion.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos16/industria-ingenieria/industria-ingenieria.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos5/plasti/plasti.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtml


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PLACA

PETRI:

La placa de (etri es un recipiente redondo,

de cristalopl%stico,con una cubierta de la

misma forma que la placa, pero algo m%s

grande de di%metro, para que se pueda

colocar encima y cerrar el recipiente,

aunque no de forma herm)tica. +s parte de

la coleccin conocida como Fmaterial de

vidrioG. *e utilia en 0icrobiolog&apara

cultivar c)lulas, observar la germinacin

de las semillas o examinar el

comportamiento de peque!os animales.

ESPTUL

A:La esp%tula es un material de laboratoriopara extraer los reactivos con sumo

cuidado para no contaminar el reactivo.

BALANZA

ANALTIC

A

8alana de laboratorio dise!ado para

medir peque!as masas.

3.2. METODO DE PREPARACION DE MEDIOS

DE CULTIVO:

+n este m)todo utiliamos 9 pasos muy b%sicos que son:


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x=(400ml )(38 gr)

1000ml

x=15.2gr de agar pseudomona .


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Utiliando < m)todos de cultivo de microorganismo para el agar

pseudomonas que son$ incorporacin, por superficie y por estr&a.

3.3. METODO DE CULTIVO DE

MICROORGANISMOS:

3.3.1 SIEMRA POR INCORPORACION: +steriliando nuestra %rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.

se abre la placa de (etri con mucho cuidado, con un %ngulo peque!o

para evitar el ingreso de las bacterias del aire.

se toma ml de muestra "bacteria (utida en disolucin# y se vierte

sobre una placa de petri.

la superficie del frasco que contiene el agar licuado debe soportar la

mano"estar frio# , para luego agregar este agar nutritivo de

pseudomona" aproximadamente -ml y la mitad de la placa# , sobre el

centro de una placa de (etri que contiene la bacteria en dislocacin y se

tapa,


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poner la placa sobre la mesa previamente esteriliado y hacer los

movimientos de homogeniacin con la mano uno en forma antihorio,

otro en forma horario otra en direccin hacia arriba y hacia abajo.

se procede al rotulado de la palca de (etri con : el nH de masa

nombre de la bacteria

nombre del personal que hace esta siembra

seccion:

invertir las placas de petri e encubar las a Hc por 9 a 9B horas


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luego usaos el m)todo de la observacin y se describe las formas de

colonias que crecieron sobre el agar.

3.3.2. SIEMRA POR SUPER!ICIE: 5esinfectar el %rea de trabajo con la ayuda del ron de J>H y con el mechero

prendido en esa %rea.

1l lado del mechero se realiara el cultivo de los microorganismos.

*e le agrega a la placa de (etri el caldo de cultivo hasta la mitad, y esperarhasta que se solidifique, pero siempre al lado de la flama para que no se

contamine el ambiente.

+stando ya solidificada agregar -. ml de la muestra 6solucin madre7 con laayuda de la pipeta.


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Limpiar el aa drigalEy con la ayuda del ron y llevarlo al mechero para as&desinfectar el material.

Una ve desinfectada, la aa se le enfr&a en la parte de la tapa de la placapara as& no da!ar a las bacterias.

Ia enfriada la aa, se esparce por toda la placa a las bacterias.

2on el fin de que las bacterias se reproducan aliment%ndose de todo elnutriente que se encuentran en toda la superficie.

3otular todas las muestras "placa de (etri#:

el nH de masa

nombre de la bacteria

nombre del personal que hace esta siembra

seccion:

invertir la placa de (etri e ;ncubarlas a H grados en la mufla por 9h o 9Bh.


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luego usaos el m)todo de la observacin y se describe las formas de colonias

que crecieron sobre el agar.

3.3.3. SIEMRA POR ESTRIA: +steriliando nuestra %rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.

se abre la placa de (etri con mucho cuidado, con un %ngulo peque!o

para evitar que entren las bacterias del aire y contaminen nuestro

resultado.

se vierte sobre una placa de (etri el medio de cultivo "agar nutritivo de

pseudomona# previamente licuado, es decir sin ninguna acumulacin de

grumos, aproximadamente la mitad de la placa de (etri "- ml de


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cantidad#, y se deja enfriar para luego poder solidificarse "condensarse o

fundirse# segn baje la temperatura.

*e realia el proceso de esteriliacin de la aa bacteriolgica de la

siguiente manera.

se sumerge la punta de la aa bacteriolgica en un poco de ron para

luego ser calentada al calor del mechera de forma verticalmente, es

decir formando un %ngulo de J-H hasta que este de color rojo brillante.

se toma con la otra mano el tubo de ensayo que esta contenido de la

bacteria (utida en solucin y con la otra enfriar la punta de la aa

bacteriolgica en las paredes del tubo"bacteria# para luego sumergirlo y

sacar "cargar# una pel&cula de bacteria (utida


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IV% RESULTADOSK. 5e las die siembras que realiamos solo unos el - M de las placas se reprodujeron

y Los resultados obtenidos se explican en el siguiente recuadro:

MTODOS DE CULTIO DE MICROORGANISMOS1 *iembra por

;ncorporacin

(or este m)todo

obtuvimos

menos resultados

solo de < se

reprodujeron.

2 *iembra en

superficie

(or este m)todo

solo de < las

cuales nos

indican que es

m%s preferible.

3 *iembra por estr&a (or este m)todo

obtuvimos

mejores

resultados < de

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