248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
1
Основные показания для ПГД - Пары, у которых в анамнезе были случаи рождения детей с наследственной и врожденной патологией; - пары , в кариотипе которых имеются сбалансированные хромосомные аберрации; - пары, возраст которых превышает 35 лет; - пары, в анамнезе которых было 2 и более неудачных попыток ЭКО; - пары, у которых в анамнезе были случаи пузырного заноса, невынашивание беременности; - пары, с мужским фактором бесплодия;
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
2
NGS
CGH
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
3
1. Не требуются референсные образцы, линейная шкала копийности хромосом вместо логарифмической при 24sure;
2. проводится определении последовательности нуклеиновых кислот;
3. полученные данные представлены с более «низким шумом» по сравнению с 24sure;
4. более точно представлены частичные делеции, дупликации, мозаицизм
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
4
CGH NGS
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
5
Эта технология в последнее время все больше вытесняет метод CGH и находит более широкое применение в клиниках ВРТ за рубежом. Публикации разных авторов доказывают преимущества применения ее по сравнению с другими.
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
6
К основным этапам NGS можно отнести: 1. выделение, получение фрагментов определенной длины ДНК; 2. прикрепление адаптеров по краям фрагментов; 3. амплификация каждого фрагмента ДНК; определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК; 4.биоинформатический анализ данных.
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
7
На результат анализа влияют: 1) проведение биопсии; 2) низкое качество исходной ДНК; 3) ошибки проведения WGA; 4) ошибки в подготовке библиотеки
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
8
АНЕУПЛОИДИИ, ВЫЯВЛЕННЫЕ МЕТОДОМ NGS В ЭМБРИОНАХ
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
9
ТРИПЛОИДНЫЙ ХРОМОСОМНЫЙ НАБОР
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
10
ДЕЛЕЦИИ/ДУПЛИКАЦИИ, ВЫЯВЛЕННЫЕ МЕТОДОМ NGS В ЭМБРИОНАХ
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
11
МОЗАИЦИЗМ, ВЫЯВЛЕННЫЙ МЕТОДОМ NGS В ЭМБРИОНЕ
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
12
ВСЕГО МЕТОДОМ NGS БЫЛО ПРОАНАЛИЗИРОВАНО
1032 ОБРАЗЦА
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
13
В исследование было включено 910 эмбрионов, полученных от 303 пациенток в возрасте от 22 до 49 лет (средний возраст 35.9 лет). Все эмбрионы были получены оплодотворением методом ИКСИ. В исследование были взяты супружеские пары с нормальным кариотипом.
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
14
Анализ секвенирования показал, что в 567 образцах из 910 (62,3%) была выявлена генетическая патология.
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
15
Частота патологии эмбрионов в разных возрастных группах
51%
62%
77%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
До 35 лет 35-40 лет Старше 40 лет
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
16
Количество патологических изменений в эмбрионе в разных возрастных группах.
50,8%
48,1%
32,1%
15,8%
27,1%
23,3%
33,4%
24,8%
44,6%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
До 35 лет 35-40 лет Старше 40 лет
1 хромосома
2 хромосомы
Более 2 хромосом
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
17
Детальный анализ результатов показал, что частота встречаемости патологии (моносомия, трисомия, делеции, дупликации, мозаицизм) хромосом 15, 16, 21, 22 была выше по сравнению с другими хромосомами
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
18
0%
20%
40%
60%
80%
100%
До 35 лет
35-40 лет
Старше 40 лет
20,4% 23,6% 32,8%
16,2% 22,1%
41,2% 17,9% 10,9%
4,2%
45,5% 43,4%
21,8%
Мозаицизм
Делеции/дупликации
Трисомия
Моносомия
СТРУКТУРА ХРОМОСОМНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППАХ
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
19
Частота отмены переноса после ПГС в разных возрастных группах
12,9%
31,7%
66,7%
16,5%
40,2%
69,2%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
до 35 лет 35-40 лет старш 40 лет
С учетом рекомендаций PGDIS
Отмена в случае мозаицизма
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
20
ИСХОДЫ ПРОГРАММ ВРТ ПОСЛЕ ПГС МЕТОДОМ NGS
Всего было 94 переноса 55 клинических беременностей Наступление беременностей - 58, 5%
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
21
УРОВЕНЬ АНЕУПЛОИДИИ В ЭМБРИОНАХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВОЗРАСТА
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
22
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
23
УРОВЕНЬ МОЗАИЦИЗМА, ВЫЯВЛЯЕМЫЙ NGS
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
24
МОЗАИЦИЗМА И КЛИНИЧЕСКИЕ ИСХОДЫ
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
25
Как было показано выше, метод NGS дает возможность четко диагностировать в эмбрионах мозаицизм, делеции и дупликации. Выявление данной патологии требует новых подходов к консультированию пациентов клиническим генетиком. Врач должен знать роль тех или иных обнаруженных вариаций в биологических процессах, свободно владеть базами данных, в которых собрана информация о значении генетических изменений. В настоящее время, создано несколько баз. В зависимости от того, какие данные врач хочет проверить, он может выбрать определенную базу.
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
ПОЗИЦИЯ Preimplantation Genetic Diagnosis International Society ( PGDIS ) О ХРОМОСОМНОМ МОЗАИЦИЗМЕ И АНЕУПЛОИДИИ НА СТАДИИ БЛАСТОЦИСТЫ
Основное, тезисы:
1) Для определения мозаицизма идеально должно быть пробиопсировано 5 клеток;
2) Эмбрионы с мозаицизмом до 20% считать нормальными, с 80% - с анеуплоидией:
3) Мозаицизм от 20-80 % требует консультации клинического генетика;
4) Пациенты, которым будут перенесены эмбрионы с мозаицизмом, должны быть предупреждены о всех рисках (отсутствие наступления беременности, выкидышах и т д);
5) Пациентам, у которых наступила беременность в результате переноса эмбрионов с мозаицизмом, рекомендуют: мониторинг и пренатальную диагностику (предпочтительно амниоцентез);
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
ПОРЯДОК ВЫБОРА ПРЕДПОЧТЕНИЯ ПЕРЕНОСА ЭМБРИОНОВ С МОЗАИЦИЗМОМ 1) Предпочтение эмбрионам с эуплоидией/моносомией чем эмбрионам с эуплоидией/трисомией;
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
2) С трисомией порядок переноса по хромосомам: 1, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 17,19, 20, 22, Х, Y;
3) Эмбрионы мозаики/трисомии хромосом 14, 15 переносить в крайних случаях (потенциально могут давать однородительские дисомии);
4) Эмбрионы мозаики/трисомии хромосом 2,7,16 переносить в крайних случаях (потенциально могут давать неразвивающиеся беременности).
5) Эмбрионы мозаики/трисомии хромосом 13,18,21 переносить в крайних случаях!!! ПО ПОНЯТНЫМ ПРИЧИНАМ (OBVIOUS REASONS)
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
29
ПРОВЕДЕНИЕ ПГД У ПАЦИЕНТА С КАРИОТИПОМ 47,XXY
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
30
46,XY,t(4;5)(q25;q22)
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
31
46, XY,t(1;5)(q42;q13)
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
32
ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОК НЕРАЗВИВАЮЩЕГОСЯ ХОРИОНА
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
33
46,XX,t(3;22)(q27;q11.2)
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0
34
Исследование ткани плаценты с частичным пузырным заносом методом NGS Кесарево сечение в 23-24 нед.берем. Недоношенная девочка. Сторона плаценты с пузырным заносом
248 196 0
233 140 0
210 66 0
140 45 106
162 26 39
185 36 78
191 192 13
74 160 112
73 137 163
45 91 131
255 255 255
0 0 0 Группа «Мать и Дитя». Все права защищены. 2014 г. ©
Доктор биологических наук Глинкина Жанна Ивановна +7 916 609 60 12
www.genetik-glinkina.ru www.mamadeti.ru
