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Transicin del Estado de la

Cromatina durante el Proceso de

Recuperacin de Estrs Hdrico enArabidopsis thaliana

Programa Doctorado en Ciencias m. Ingeniera Gentica Vegetal

Instituto de Biologa Vegetal y Biotecnologa

Universidad de Talca

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Introduccin

En Eucariontes las modificaciones epigenticas se correlacionan conla actividad gnica de varios procesos biolgicos, incluyendo

respuesta a estrs.

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NucleosomaCore de histonasextremo

N-terminalmodificaciones en K, S,R.

Enzimas modificadoras de histonas: HAT

HDAC

HMT

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H3K4me3

H3K9ac

Pueden ser usados como marcadores de estado activo de

la expresin de genes (Justin et al., 2010)

Se han observado modificaciones en las lisinas de la

histona H3, que forman parte de nucleosomas de

genes de respuesta a estrs hdrico (Kim et al., 2008).

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Kim et al.

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Estudios de perfiles de expresin usando DNA microarray mostraron

que genes inducibles por deshidratacin son inactivados por

rehidratacin (Oono et al., 2003).

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Se sabe poco acerca de cambios en la estructura de

la cromatina en respuesta a la deshidratacin.

Se determin la ocupancia del nucleosoma,acumulacin de RNAP II, alteraciones de H3Km3 y

H3K9ac, mediante ChIP en:

Genes inducidos por sequa: RD29A, RD20 yAtGOLS2

Genes inducidos por rehidratacin: ProDH

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Materiales y mtodos

Plantas deArabidopsis thaliana ecotipo Columbia, de

15 das, crecidas en placas petri en medio GM, con

sales MS, 1% sacarosa, 0,8% bacto-agar bajo

condiciones de da largo (16h luz/ 8h osc.) a 22C. Sometidas a estrs por shock deshidratante.

Las muestras de plantas se tomaron antes del

tratamiento por deshidratacin, 4 h despus de

tratamiento, y 1, 2, 3 y 5 h despus de los

tratamientos de rehidratacin.

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Se aisl RNA total

Se realiz sntesis de cDNA, con primers especficos, mediante

RT-PCR. Producto se ti con SYBR-Gold, se detect seal con

Flourolmager SI.

Observar perfiles de acumulacin de RNA durante el ensayo.

At5g52310 spliced RD29A

unspliced RD29A

At2g3380 RD20

At1g56600 AtGOLS2

At3g30775 ProDH

At5g09810 ACT7

At5g55670

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Immnunoprecipitacin de Cromatina (ChIP)

Se realiz utilizando los siguientes anticuerpos: Anti-H3K4me3

Anti-H3K9ac

anti-histone H3

Anti-RNAPII

Evaluacin por qPCR

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Resultados

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RNAP II responde rpidamente a la inactivacin por

rehidratacin de los genes de respuesta a estrs por

deshidratacin.

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Cambios en la densidad del nucleosoma ocurren

durante el proceso de recuperacin de estrs por

deshidratacin.

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Enriquecimiento de H3K4me3 es mantenido en genes

inducidos por deshidratacin despus de la inactivacin

por rehidratacin.

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H3K9ac rpidamente responde a la inactivacin de

genes por rehidratacin y es drsticamente reducida en

genes inducidos por deshidratacin.

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En resumen

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Conclusiones y proyecciones futuras

La alteracin de modificaciones de histonas, tales comola adicin y remocin de H3K4me3 y H3K9ac, afectan laactivacin e inactivacin de genes regulados porestrs.

Se sabe poco acerca de cuales enzimas modificadorasde histonas y factores de remodelacin de cromatinacatalizan estas reacciones.

La identificacin de estas enzimas ser esencial para

aumentar el conocimiento de las redes regulatoriastranscripcionales en respuesta a estrs abitico.

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