• Què són les cèl·lules mare?
• Tipus de cèl·lula mare
a) Cèl·lula mare embrionària (ES)
b) Cèl·lula mare adulta
- Cèl·lula mare adulta en un teixit sa
- Cèl·lula mare tumoral (CSC)
Cèl·lules Mare i Càncer
El epitelio intestinal
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 1: The gut
Intestí prim Colon
Reyes et al, 2005.
El epitelio intestinal
Tinción histoquímica de tejido normal y tumoral
Normal Tumor
Células
madre
Células
diferenciadas
Cáncer de colon, una enfermedad con diferentes etapas
Desenvolupament
del càncer
Supervivència
als 5anys90% 70% 56% 7%
37% 63%
Stage I Stage II Stage III Stage IV
%
Diagnòstics
segons l’estadi
Reaparició del
tumor després
de la cirurgia5% 10% 40% -
Cáncer de colon, una enfermedad con diferentes etapas
adenoma adenocarcinoma
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 4: Adenoma formation
Cèl·lules que
inicien el tumor
Metàstasi
Adenoma
AvançatTumor Maligne
(Carcinoma)
Cèl·lula
Sana
Cèl·lula
Transformada
Tumor
Benigne
(Adenoma)
Mutacions
en gens de proliferacióInestabilitat
genòmica
Acumulació de mutacions
Mutacions
en gens de polarització
Mutacions
en gens de control de mutacions
Differentiated-like cells
ISC-like
cells
ISC
TA
Diff
ISC
ISC
Colon Sano Adenocarcinoma
Merlos-Suárez et al. Cell Stem Cell (2011)
Els tumors també tenen cèl·lules mare
Jung et al., Nature Medicine (2011)
Merlos-Suárez et al. Cell Stem Cell (2011)
Els tumors també tenen cèl·lules mare
Tumor IntestinalNou tumor o metàstasi
Cèl·lules mare
tumorals
Cèl·lules tumorals
diferenciades
Les cèl·lules mare tumorals poden generar nous tumors
Células Madre del Cáncer y Terapia
Curación
Tumor
Células Madre del CáncerCSCs
Las CSCs regeneran el tumor
Recidiva
TerapiaContra CSCs
TerapiaConvencional
Los tumores degeneran
No elimina las CSCs
Elimina las CSCs
Colon diseccionado
Tumor
Tejido normal
Tratamiento
químico
Enzimas (Colagenasa) +
Fuerza mecánica
Enzimas (Dispasa) +
Fuerza mecánica
Mezcla de Células
individuales
Mezcla de Células
individuales
2. Tinción con anticuerpos
Marcador
sanguíneoMarcador
ISC
Marcador
Epitelial
Rojo lejanoVerde Verde Rojo
Marcador
Epitelial
¿Cómo podemos aislar las células madre intestinales?
1. Aislamiento a partir de resecciones intestinales
Tubo 2:
Células madre
purificadas
Tubo 1:
Resto de células
Células madre marcadas
(fluorescencia roja)
3. Purificación de las células madre por citometría de flujo
Citómetro celular
Cultivo celular
in vitro
¿Cómo podemos aislar las células madre intestinales?
dia
0
dia
1
dia
2
dia
5
dia
7
dia
9
dia
11
dia
13
Organoides derivados de células madre intestinales en cultivo
in vitro
Gota de 50 μl matrigel
A partir de 2000 células plaqueadas
Jung et al., Nature Medicine, 2011
Organoides derivados de células madre intestinales en cultivo
in vitro
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 6: MiniGut 3D
Organoides dentro de
una gota de matrigelAñadir 1ml de
Matrisperse
Centrifugar
5min a 1000rpm
Descartar
el sobrenadante
Añadir 0.5ml
trispina-PBS 50%
Pipetear durante
2-3min
Añadir 0.5ml
de medio
Transferir 100µl a un
nuevo tuboCentrifugar
5min a 1000rpm
Descartar
el sobrenadante
Resuspender el
pellet en 50µl
de matrigel frío
Transferir el
matrigel con
células a un
nuevo pocillo
Incubar 5min a
37ºC y después
añadir 0.5ml
de medio
Pase celular de organoides
A partir del cultivo de células madre intestinales (normales y tumorales) estamos interesados
en:
- Identificar nuevos marcadores de célula madre
- Identificar marcadores específicos de célula madre tumoral
- Usar estos marcadores para aislar y caracterizar estas células
- Encontrar nuevas dianas terapéuticas para desarrollar fármacos contra las células
madre tumorales
- Desarrollar protocolos para el transplante de organoides sanos en pacientes con
enfermedades inflamatorias intestinales
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/research.html.
Movie 3: Transplantation
Proyectos de investigación en el laboratorio
Moltes Gràcies
