Revista1 2007

CATEDRA Nº 1 DE FISIOLOGIA HUMANA 2007

U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l N o r d e s t e

F a c u l t a d d e M e d i c i n a C á t e d r a N º 1 d e F i s i o l o g í a H u m a n a

GUIAS DE TRABAJOS PRACTICOS Y TALLERES FISIOLOGIA DE MEDIO INTERNO Y SANGRE FISIOLOGIA DE LAS CELULAS EXCITABLES AUTORES : DRA. LILIAN BARRIOS

DR. OSCAR HECTOR POLETTI

2007


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U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l N o r d e s t e F a c u l t a d d e M e d i c i n a

C á t e d r a N º 1 d e F i s i o l o g í a H u m a n a

GUIAS DE TRABAJOS PRACTICOS Y TALLERES (Correspondientes al Primer Examen Parcial)

FISIOLOGIA DE MEDIO INTERNO Y SANGRE:

Propiedades fisicoquímicas de la sangre Fisiología de la hemostasia Inmunohematología

FISIOLOGIA DE LAS CELULAS EXCITABLES

Fisiología de las células excitables Fisiología del músculo estriado y el nervio periférico

2007 Editor: Centro de Fotocopiado de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional del Nordeste


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SANGRE: PROPIEDADES FÍSICO-

QUÍMICAS (Dra. Lilian BARRIOS)

TEMARIO: − Punc ión de vena y ex t racc ión de sangre − Hemog lob inometr ía : método

fo toco lor imét r i co − Hematocr i to : m icrohematocr i to

− Célu las de la sangre per i fé r i ca − Componentes de la sangre: o rgán icos e

inorgán icos . CONCEPTOS FUNDAMENTALES A CONOCER 1. Func iones de la sangre 2. Cant idad de sangre en e l o rgan ismo: en

porcen ta je de l peso corpora l y en ml x Kg de peso .

3. Componentes ce lu lares de la sangre: can t idad de g lóbu los ro jos , p laquetas y g lóbu los b lancos/uL. Rangos de norma l idad.

4. Conceptos de normoc i temia ; anemia ; po l i c i temia . Leucopen ia ; leucoc i tos is . T romboc i topen ia y t romboc i tos is .

5. Fórmula leucoc i ta r ia re la t i va . Porcen ta jes norma les . Rangos de norma l idad.

6. Plasma: componentes inorgán icos (expresados en mEq/L s í son iones , o en mg/dL ; g /dL . ó mM/L s i no son iones . Componentes o rgán icos (expresados en mg/dL ; g /dL y mM/L) .

7. Hemoglob ina: va lor norma l en e l hombre y en la mu jer en g /dL

8. Hematocr i to : m ic rométodo . Va lores norma les en e l hombre y en la mu jer .

9. Valores norma les de ru t ina med idos en la sangre para cont ro l de un pac iente .

10. Impor tanc ia de l conoc imien to de los va lo res norma les de los componentes de la sangre .

OBJETIVOS: a l f ina l i zar e l t raba jo prác t i co e l a lumno será capaz de • Exp l i car la t rascendenc ia de la func ión de

la sangre como nexo de un ión de todo e l o rgan ismo, permi t iendo e l func ionamien to de éste , como una un idad coord inada.

• Def in i r l a mantenc ión de la homeostas is como med io de pos ib i l i ta r e l es tado de norma l idad.

• Refer i r los va lores norma les de los componentes de la sangre y exp l i car la impor tanc ia de l conoc imien to de su a l te rac ión , como aux i l ia r en e l d iagnós t i co de mú l t ip les pa to log ías.

• Real iza r dete rminac iones hemato lóg icas senc i l las de labora to r io .

DESARROLLO DEL TRABAJO PRACTICO a) PROCEDIMIENTO PARA PUNCIÓN DE VENA EN ADULTOS. Se u t i l i za la vena bas í l i ca de la fosa an tecub i ta l . EL OPERADOR DEBE TRABAJAR CON GUANTES DE GOMA. E l b razo debe es tar b ien apoyado. Se ap l i ca un torn ique te en la par te med ia de l b razo , en t re e l codo y e l hombro , con una p res ión in termed ia con respec to a la p res ión s is tó l i ca y d ias tó l i ca . E l lugar en que se e fec tuará la punc ión se l imp ia con una torunda de a lgodón empapado en a lcoho l de 70° . Debe comprobarse e l a jus te de la je r inga a usar con la agu ja , mov iendo e l émbo lo hac ia ade lan te y hac ia a t rás . E l pu lgar de la mano l ib re se apoya d i rec tamente sobre la vena a punzar , a una d is tanc ia de 2 ,5 cm. y se e fec túa una l igera t racc ión . La je r inga se toma ent re e l pu lgar y los t res ú l t imos dedos de la mano derecha. Se co loca la agu ja por enc ima y d i rec tamente en la l ínea imag inar ia que s igue e l curso de la vena, asegurándose de que e l b ise l de la agu ja es té hac ia a r r iba .

Con un mov imien to ráp ido y seguro la agu ja debe inser tarse d i rec tamente en e l vaso . Es ta inserc ión debe hacerse de ta l manera que la penet rac ión a t ravés de la p ie l y de la vena, se haga en un so lo mov imien to . Cuando la agu ja penet ra en la luz de la vena, se adv ie r te una fac i l i tac ión de l mov imien to . La sangre f lu i rá en tonces l ib remente a la je r inga . Después de haber inser tado la agu ja en la luz de la vena , se e jerce sobre e l émbo lo una l ige ra t racc ión con la mano izqu ierda. La ex t racc ión debe hacerse len tamente , a f in de ev i ta r que se fo rme espuma. Cuando se ha obten ido la can t idad necesar ia de sangre, se a f lo ja e l to rn ique te y , u t i l i zando la mano izqu ie rda , se co loca la


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gasa es tér i l sobre e l punto de ent rada de la agu ja , la que se ex t rae en tonces con un mov imien to ráp ido de la mano derecha. b) DOSAJE DE HEMOGLOBINA (por el método de la cianmetahemoglobina) PRINCIPIO: deb ido a que la sangre c i rcu lan te posee una mezc la de hemog lob ina , ox ihemog lob ina , carbox ihemog lob ina y can t idades menores de o t ras formas de es te compues to co lo reado, se ha hecho necesar io buscar un der ivado es tab le de hemog lob ina para su cor rec ta med ic ión . Se ha consegu ido es te compues to es tab le med iante e l agregado de sa les de c ianuro a la sangre . Es tas sa les t rans fo rman a todas las fo rmas de hemog lob ina en c ianmetahemog lob ina (sa lvo la su l fohemog lob ina presente en escasa can t idad en cond ic iones normales) . MÉTODO: se u t i l i za un reac t ivo const i tu ido por : Bicarbonato de sodio: 1,0 g Cianuro de sodio: 0,5 g Ferricianuro de potasio: 2,0 g Agua destilada csp: 1.000 ml 1. Se co locan 5 ml de react i vo en un

f rasco o tubo l imp io . 2. Se toman 20 µL de sangre (venosa o de

punc ión de l pu lpe jo de l dedo) . y se agrega la m isma a los 5 ml de react ivo , mezc lando cu idadosamente . Los 20 µL de sangre pueden tomarse con p ipeta au tomát ica o con p ipeta de Sah l i .

3. Se de ja reposar 10 minu tos para permi t i r l a t rans fo rmac ión de la hemog lob ina en c ianmetahemog lob ina .

4. Se carga en un f rasco o tubo s im i la r a l usado en (1 . ) , 5 m l de reac t i vo .

LECTURA EN FOTOCOLORIMETRO PREVIAMENTE CALIBRADO EN 540 mµ DE LONGITUD DE ONDA • Se prende e l apara to 10 minu tos antes de

usar lo • Se co loca e l tubo con e l reac t i vo só lo , en

la cubeta de lec tura de l fo toco lor ímet ro , y se g radúa la agu ja en 100 de t ransmi tanc ia y 0 de dens idad óp t i ca .

• Se mu l t ip l i ca e l resu l tado ob ten ido por e l fac tor de ca l ib rac ión para la hemog lob ina que posee e l labora to r io . E l resu l tado de es ta operac ión nos ind ica d i rec tamente : l a can t idad de hemog lob ina /dL de sangre .

VALORES NORMALES: Hombre: 15,0 g/dL ± 2 Mujer: 14,2 g/dL ± 2 c) MICROHEMATOCRITO Ind ica e l porcen ta je de g lóbu los ro jos de la sangre de l pac ien te en es tud io . Se ob t iene med ian te la cen t r i fugac ión de la sangre a una ve loc idad suf i c ien te para empaquetar los g lóbu los ro jos en e l menor vo lumen pos ib le . Material necesario: 1. Cent r í fuga para mic ro tubos con ve loc idad

de 8 .000 a 12 .000 rpm, 2 . con p la to hor izon ta l para 6 a 24

mic ro tubos 3 . Micro tubos hepar in izados de 1 ,2 mm de

∅ por 75 mm de la rgo . 4 . Abaco para lec tura de l m ic rohematocr i to . PROCEDIMIENTO: • Se carga e l m ic ro tubo con sangre venosa

o por punc ión de l pu lpe jo de l dedo, has ta la m i tad de su long i tud .

• Se c ie r ra e l ex t remo l ib re de l tubo con fuego o p las t i l i na y se co loca en la cen t r í fuga para micro tubos por 5 m inu tos .

• Se lee e l va lo r ob ten ido en e l ábaco .

VALORES NORMALES Hombre: 40 a 50 % Mujer: 37 a 47 % d) CÉLULAS SANGUÍNEAS La sangre t ranspor ta cé lu las que cumplen func iones v i ta les para e l o rgan ismo. Es tas cé lu las son : l os g lóbu los ro jos , los leucoc i tos y las p laquetas . E l es tud io de las cé lu las de la sangre per i fé r i ca cons t i tuye un método impor tan te de aprox imac ión d iagnós t ica en pac ientes con d iversas pa to log ías. Un aspec to de l es tud io de es tas cé lu las se rea l i za en extend idos de sangre en por taob je tos . OBSERVACIÓN DE FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA Fro t i s de sangre per i fé r ica co loreados con May Grunwa ld - G iemsa se observarán con


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ob je t i vo de inmers ión (100x) , usando ace i te de cedro . Se reconocerán : Glóbulos rojos: ( las cé lu las más abundantes de la sangre) como d iscos anuc leados rosados . Leucoc i tos : se reconocerán los d is t in tos t ipos de leucoc i tos que norma lmente c i rcu lan en sangre per i fé r i ca . 1. Granulocitos neutrófilos: que

aparecen como cé lu las con un núc leo azu l púrpura , con dos a c inco lóbu los conec tados por h i los de c romat ina y c i top lasma con gránu los f inos de co lor rosado.

2. Granulocitos eosinófilos: con núc leo azu l púrpura con dos a t res lóbu los y c i top lasma con gruesos g ránu los de co lo r naran ja .

3. Granulocitos basófilos: con núc leo b i lobu la r , de co lor azu l púrpura y g ránu los oscuros que cubren e l c i top lasma y e l núc leo .

4. Monocitos: con núc leo de co lo r v io le ta pá l ido y c i top lasma gr isáceo con f inos g ránu los ro j izos .

5. Linfocitos: con núc leo de in tenso co lor azu l y c i top lasma ce les te , s in g ránu los.

Plaquetas: se reconocen como acúmulos de formac iones de a l rededor de 3 µ de d iámet ro , con un cent ro azu l oscuro y c i top lasma t ransparen te . E l f ro t i s de sangre per i fé r i ca permi te e l es tud io de:

1. l as caracte r ís t i cas mor fo lóg icas y t in tor ia les de los g lóbu los.

2. l a fó rmu la leucoc i ta r ia re la t i va y las caracte r ís t i cas mor fo lóg icas de las p laquetas.

En la ac tua l idad, en ins t i tuc iones hosp i ta lar ias o sana tor ia les (con g ran f lu jo de pac ientes) , las de terminac iones de labora tor io de l hemograma se rea l i zan con con tadores e lec t rón icos au tomat izados. Se cuen tan con var ios mode los en t re los cuá les se pueden menc ionar los con tadores óp t i cos con un de tec tor de f lu jo ce lu lar co locado en e l t rayec to de un rayo luminoso láser . Cada cé lu la sanguínea que pasa a t ravés de l rayo luminoso genera un impu lso e léc t r i co de tec tado por un sensor . E l rayo crea pa t rones de d ispers ión que a lgunos apara tos emplean para de f in i r e l

tamaño, e l vo lumen y la con f igurac ión de las cé lu las . E l equ ipo H18 (Techn icom Ins t rument Corpora t ion) p resen ta e l in forme t ipo de una mues t ra sanguínea most rado en F ig .1 en ho ja pos te r io r . Ad ic iona lmente , se rea l izó un gran avance en la eva luac ión de las pob lac iones ce lu lares hemato lóg icas en sangre y médu la ósea con e l emp leo de la c i tomet r ía de f lu jo . Es te apara to es un microscop io que ana l i za con g ran ve loc idad las prop iedades de las cé lu las sanguíneas suspend idas en un med io l íqu ido . Las cé lu las pasan a t ravés de un rayo luminoso y generan seña les de d ispers ión y f luorescenc ia . Es tas seña les se ampl i f i can , se conv ie r ten en seña les e léc t r i cas y se g ra f i can con e l aux i l io de computadoras . Es te equ ipo también permi te cuant i f i car los ác idos nuc le icos . Su mayor campo de es tud io se reg is t ra en e l aná l i s i s de los marcadores de super f i c ie de las cé lu las hemopoyét icas (por e j : CD 4 : marcador de l l in foc i to T he lper , l i n foc i to que se encuent ra a fec tado en e l S IDA) , ya que d ichos marcadores pueden ser de tectados med ian te an t icuerpos monoc lona les marcados con f luoroc loro . Es te equ ipamien to es de mucha u t i l i dad en e l d iagnós t i co , t ra tamien to y p ronós t i co de leucemias, l i n fomas, e tc . HEMOGRAMA: un hemograma comprende las s igu ien tes de te rminac iones :

Cantidad de eritrocitos x uL: Hemoglobina (g/dL): Hematocrito %: Cantidad de leucocitos /uL: FORMULA LEUCOCITARIA RELATIVA

Granulocitos neutrófilos: Basófilos: Eosinófilos Linfocitos: Monocitos: PREGUNTAS A CONTESTAR DURANTE LA AUTOINSTRUCCION 1. Los a lumnos deberán e laborar un

hemograma con va lores de labora to r io norma les para un hombre y una muje r adu l tos de 18 a 30 años de edad.

2. Los a lumnos deberán de tectar que

va lo res de l hemograma que con fecc ionaron var ia ran s í e l va lo r de e r i t roc i tos fuera de 2 .000.000 x µL


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3. Los a lumnos deberán enumerar las

func iones de las pro te ínas p lasmát icas 4. Los a lumnos deberán de f in i r : a) Func iones de la hemog lob ina b) Su capac idad de t ranspor te de O 2 c) Donde se rea l i za la s ín tes is de

hemog lob ina d) La inc idenc ia de l apor te de h ier ro de

la d ie ta en la concent rac ión de hemog lob ina .

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION: (en base a los con ten idos desar ro l lados en las c lases teór icas y los t raba jos prác t i cos . (Para desar ro l la r en su casa) . PREGUNTA Nº 1: Un hematocrito de 56% puede significar que existe: a) Una retención de líquido corporal con aumento

de la osmolaridad b) Una exagerada producción de glóbulos

blancos por la médula ósea c) Una exagerada pérdida de agua corporal no

compensada d) Un aumento de las proteínas plasmáticas por

encima de lo normal PREGUNTA Nº 2: Con referencia a la hemoglobina fetal: a) La afinidad de la hemoglobina fetal por el O2, a

igual PO2, es mayor que la hemoglobina del adulto

b) La afinidad de la hemoglobina fetal por el O2 es menor que la del adulto, por lo cual cede más O2 a los tejidos

c) Las cadenas gamma de la hemoglobina fetal son las responsables de la desviación hacia la derecha de la curva de disociación

d) La hemoglobina fetal necesita menor aporte de hierro para su síntesis

PREGUNTA Nº 3: Señale entre las opciones siguientes a la que Ud., considere correspondiente a las funciones de: -TRANSFERRINA -ALBÚMINA -FIBRINOGENO -INMUNOGLOBULINA G a) coagulación - anticuerpo - transporte - presión

coloidosmótica b) presión coloidosmótica-coagulación-

transporte-anticuerpo c) anticuerpo - presión coloidosmótica –

coagulación- transporte d) transporte - presión coloidosmótica –

coagulación - anticuerpo

PREGUNTA Nº 4: Señale, entre las siguientes opciones, la que Ud. considere correcta con referencia a: valor de la volemia expresado en porcentaje del peso corporal y en ml /kg de peso para un hombre adulto normal. a) 11% y 80 ml/kg b) 8 % y 80 ml/kg c) 5 % y 50ml/kg d) 20 % y 100 ml/kg PREGUNTA Nº 5: -A- ¿ Cuál es el valor promedio normal de las proteínas plasmáticas/dL de plasma?. RESPUESTA:................................ B- Una persona adulta, cuyo valor de albúmina plasmática es de 2 g/dL retendrá: MAYOR - MENOR cantidad de agua vascular que una persona normal. (Tache lo que no corresponde) PROBLEMA A RESOLVER: PROBLEMA Nº 1: En una paciente con dieta vegetariana, de 30 años de edad, se encuentran los siguientes resultados de su examen sanguíneo: HEMATOCRITO: 27% HEMOGLOBINA: 8,5 g/dL ERITROCITOS: 3,5 x 106 x mm3 a) Calcule el VCM; HCM y CHCM. b) Determine si estos valores son normales o

anormales c) En caso de no considerarlos normales analice

las posibles causas de su anormalidad teniendo en cuenta su historia alimentaria y el tipo de alteración encontrada

PROBLEMA Nº 2: En un paciente gastrectomizado (resección parcial del estómago) se encontraron los siguientes datos en su examen hematológico: HEMOGLOBINA: 13g/dL HEMATOCRITO: 35 % ERITROCITOS: 3 x 106 /mm3 a) ¿Qué tamaño y coloración tendrán sus glóbulos

rojos? b) Determine si los valores hallados son normales,

en caso contrario, analice cual podría ser la causa de su trastorno, teniendo en cuenta la resección parcial de estómago.


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Informe tipo de una muestra sanguínea (equipo H18 Technicom Instrument Corporation)


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TABLA DE VALORES SANGUINEOS

ERITROCITOS Mujer: 4.800.000 ± 600.000 /µL Hombre: 5.000.000 ± 600.000 /µL

LEUCOCITOS 5.000 a 10.000 (promedio: 7.000) /µL

ERITROSEDIMENTACION Mujer: 6 a 11 mm (1a hora) Hombre: 3 a 8 mm (1a hora) Embarazada: hasta 45 mm (1a hora) Niños: 4 a 20 mm (1a hora)

LEUCOCITOS FORMULA RELATIVA % CANTIDAD ABSOLUTA/µL

Neutrófilos 55 a 70 2.200 a 6.500 Eosinófilos 2 a 4 80 a 360 Basófilos 0 a 1 hasta 50 Monocitos 2 a 6 80 a 550 Linfocitos 25 a 40 1.000 a 3.600

HEMATOCRIT0 Mujer: 37 a 47 % Hombre: 40 a 50 % HEMOGLOBINA Mujer: 14,2 g/dL ± 2 Hombre: 15,0 g/dL ± 2

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM): 80 - 90 µ3 HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM): 26 - 32 pg CONCENTRACION HEMOGLOBINICA CORPUSCULAR MEDIA: 32 - 36 g/dL de eritrocitos

PLAQUETAS 150.000 a 300.000 / µL

RETICULOCITOS 0 a 2 %

pH plasmático 7,40 ± .05 (arterial)

IONES PLASMATICOS CATIONES

Calcio total: 5 mEq/L 2,23 a 2,65 mM/L 8,5 a 10,6 mg/dL Calcio ionizado: 2 a 2,5 mEq/L 1,00 a 1,25 mM/L 4,0 a 5,0 mg/dL Potasio 3,5 a 5,0 mEq/L 3,5 a 5,0 mM/L Sodio 135,0 a 145,0 mEq/L 135, 0 a 145,0 mM/L

ANIONES Cloruros 95,0 a 105,0 mEq/L 95,0 a 105,0 mM/L Fosfato inorgánicos 2,2 a 4,0 mg/dL


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Bicarbonato 21,0 a 29,0 mEq/L 21,0 a 29,0 mM/L

HIERRO 59 a 158 µg/dL TIBC (transferrina saturada con hierro) 250 a 400 µg/dL % SATURACION 13 a 45 %

COMPUESTOS ORGANICOS Glucemia 70 a 110 mg/dL 4 a 6 mM/L

Lípidos: (se consignan los lípidos que las normas clínicas actuales consideran como factores de

riesgo cardiovascular)

Colesterol total ≤ 200 mg/dL Triglicéridos ≤ 150 mg/dL Colesterol - LDL ≤ 100 mg/dL Colesterol – HDL :hombres

≥ 40 mg/dL

Colesterol – HDL :mujeres

≥ 50 mg/dL

(Fuente de información de consenso: - Sociedad Europea de Aterosclerosis (EAS). 1992 - Panel de Tratamiento del Adulto (ATPII) 1993 - Programa Nacional de Educación sobre Colesterol (NCEP) de los Institutos Nacionales de Salud

de los EEUU. 1993 - Grupo de Tareas Europeo. 1994

PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO Albúmina 3,7 a 4,1 g/dL Alfa 1 globulina 0,16 a 0,34 g/dL Alfa 2 globulina 0,45 a 0,85 g/dL Beta globulina 0,53 a 1,0 g/dL Gamma globulinas 0,91 a 1,7 g/dL

INMUNOGLOBULINAS IgG 800 a 1.800 mg/dL IgA 90 a 400 mg/dL IgM 60 a 200 mg/dL IgD 0,3 a 40 mg/dL IgE 0,01 a 0,043 mg/dL

Urea 10 a 40 mg/dL 2,5 a 6,7 mM/L Creatinina 0,8 a 1,2 mg/dL Billirrubina total 0,3 a 1,1 mg/dL 5 a 17 mM/L Bilirrubina indirecta 0,2 a 0,7 mg/dL 3,4 a 12 mM/L Bilirrubina directa 0,1 a 0,4 mg/dL 1,7 a 5,0 mM/L Fosfatasa alcalina 50 a 190 U/L Fosfatasa ácida 13,5 a 48 U/L AST (GOT): aspartato aminotransferasa

5 a 17 U/L

ALT (GTP): alanina aminotransferasa 5 a 23 U/L


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INMUNOHEMATOLOGIA

(Grupos sanguíneos: determinación) (Dr. Oscar Héctor Poletti y Dra. Lilian Barrios) CONCEPTOS FUNDAMENTALES A CONOCER: Componentes del sistema inmunológico:

Espec í f i cos : l i n foc i tos T y B , cé lu las p lasmát icas .

No espec í f i cos : macrófagos , neu t ró f i l os , e tc .

Órganos l in fo ides pr imar ios y secundar ios , sus func iones .

Mecan ismo de la inmun idad humora l , t i pos de inmunog lobu l inas .

Mecan ismo de la inmun idad ce lu lar . L in foc i tos cooperadores , supresores ,

k i l l e r , l i n foqu inas . OBJETIVOS: Al f ina l i za r e l p resen te t raba jo prác t ico , los a lumnos deberán estar en cond ic iones de :

Def in i r g rupo sanguíneo, s is tema ABO, an t ígeno de membrana de l er i t roc i to , ag lu tun inas .

Def in i r s i s tema Rh, ag lu t inógenos ag lu t in inas.

Selecc ionar las pruebas de labora tor io a u t i l i za r en la t ransfus ión de sangre .

Selecc ionar adecuadamente e l t ipo de sangre a u t i l i za r en una t rans fus ión .

Enumerar los d is t in tos componentes de la sangre que se pueden t rans fund i r y los r iesgos que ocas ionan.

BASES INMUNOLOGICAS PARA LA COMPRENSIÓN DE LOS GRUPOS SANGUÍNEOS Y SUS INCOMPATIBILIDADES:

Las reacc iones de incompat ib i l i dad

sanguínea (sobre todo los g rupos sanguíneos ABO y fac tor Rh) , se producen bás icamente por una respues ta inmuno lóg ica de l l i n foc i to B . Es ta respues ta puede desencadenarse por t rans fus iones incompat ib les , (s i tuac iones ev i tab les con

buenas pruebas de labora tor io ) ó por e l pasa je de l g lóbu lo ro jo Rh+ de l Fe to a una madre Rh− . También se puede produc i r por an t ígenos de l s is tema ABO (por e jemplo e l pasa je de g lóbu los ro jos con ant ígeno A una madre O) . La en t rada de un an t ígeno a l o rgan ismo materno , a l cua l és ta reconoce como ext raño , produce una respues ta inmuno lóg ica que es tá a cargo p r inc ipa lmente de l l in foc i to B materno , que in teracc ionan con e l ant ígeno a t ravés de sus receptores espec í f i cos y :

1. Ya sens ib i l i zado por e l an t ígeno, e l l i n foc i to B fo rma un c lon en expans ión .

2. Una par te de los l in foc i tos de l c lon , se d i fe renc ian a cé lu las p lasmát icas que s in te t i zan ant i cuerpos .

3. Otros l in foc i tos de d icho c lon no l legan a d i fe renc iarse y permanecen como cé lu las de memor ia .

Es ta respues ta de l l i n foc i to B (cuando se re lac iona por p r imera vez con e l an t ígeno) , se l l ama respues ta pr imar ia , y neces i ta de la p resenc ia y cooperac ión de l l i n foc i to T cooperador ( respues ta T depend ien te) . La respues ta pr imar ia se p roduce en los ó rganos l in fo ides secundar ios de la madre y cons ta de una secuenc ia de pasos que dura var ios d ías, duran te las cua les no aparecen todav ía los an t i cuerpos en e l p lasma. Luego de es te per íodo los an t i cuerpos de l p lasma aumentan en fo rma exponenc ia l has ta a lcanzar un p ico y luego d isminuyen. Son ant i cuerpos predominantes de l t ipo IgM. Los macró fagos (as í como las demás cé lu las presentadoras de ant ígeno) , p resen tan e l an t ígeno procesado en la super f i c ie de su membrana, a l l in foc i to T aux i l i a r , con jun tamente con e l an t ígeno de h is tocompat ib i l i dad mayor ( t ipo I I ) y secre tan una c i toqu ina que , in ic ia lmente se pensó que e ra la in ter leuqu ina 1 , pero que actua lmente se c ree que es la in ter leuqu ina 6 . Además, tanto los T CD 4 como los T CD 8 in teractúan con cé lu las presen tadoras de ant ígenos a t ravés de un segundo mecan ismo en e l que es tán invo luc radas una mo lécu la l lamada CD 1 1 de l l i n foc i to T y una mo lécu la l l amada LFA3 (an t ígeno


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asoc iado a la func ión l in foc i ta r ia ) , de las cé lu las p resen tadoras de an t ígeno. E l l i n foc i to T ac t i vado, desar ro l la recep tores para la in ter leuqu ina 2 as í como para o t ras c i toqu inas , y de es ta manera co labora en la p roducc ión de an t i cuerpos por las cé lu las p lasmát icas . E l pasa je de g lóbu los ro jos de l fe to a la madre se p roduce predominantemente en los ú l t imos es tad ios de l embarazo , p r inc ipa lmente e l momento de l par to . La p r imera vez que es to sucede ( respues ta p r imar ia) , no acar rea r iesgos para e l fe to , pues e l an t i cuerpo produc ido es e l t i po IgM, que por su gran tamaño no a t rav iesa la bar rera p lacen tar ia . La IgM aparece en la c i rcu lac ión a l qu in to d ía y a lcanza un p ico máx imo a l 8 º ó 9º d ía . A l m ismo t iempo, par te de los l in foc i tos B permanecen como cé lu las de memor ia . En e l segundo con tacto con e l m ismo an t ígeno (e j : un segundo embarazo de las mismas carac te r ís t i cas que e l p r imero) , se p roduce la l l amada respues ta secundar ia , con graves consecuenc ias para e l fe to , y que d i f ie re de la respues ta pr imar ia . La respues ta secundar ia es más ráp ida y más in tensa, e l per íodo la ten te es más breve y e l an t i cuerpo s in te t i zado es p redominante de l t ipo IgG, de ba jo peso mo lecu lar , lo cua l le permi te pasar la bar rera p lacentar ia . Este ant icuerpo t iene una af inidad de hasta 10.000 veces mayor que la IgM por el ant ígeno, y disminuye más lentamente su concentración plasmática. La respuesta secundar ia invo lucra e l fenómeno de la memor ia inmuno lóg ica en que están basadas las inmun izac iones con vacunas. En e l caso de incompat ib i l i dad Rh fe to - materna, la respues ta secundar ia puede t raer g raves consecuenc ias para e l fe to , porque los an t i cuerpos maternos IgG formado cont ra e l an t ígeno de los g lóbu los ro jos fe ta les son a l tamente espec í f i cos y porque pasan la bar rera p lacentar ia deb ido a su ba jo peso mo lecu lar . Una vez en la sangre de l fe to , se f i j an a l ant ígeno de l g lóbu lo ro jo , e l cua l es ráp idamente cap tado y des t ru ido por los macró fagos esp lén icos p roduc iendo as í la l l amada en fe rmedad hemol í t i ca de l rec ién nac ido cuya gravedad depende de la can t idad de an t i cuerpo que pasó la p lacen ta ,

que puede i r desde una anemia moderada has ta la muer te y macerac ión fe ta l . MÉTODO DE DETECCIÓN DE GRUPO ABO Y FACTOR Rh: Es un método de t ipo inmuno lóg ico, que se basa en e l p r inc ip io de hacer reacc ionar una go ta de sangre (donde se va a invest igar e l an t ígeno de l g lóbu lo ro jo de l grupo ABO y e l fac tor Rh) , con un react i vo que con t iene una a l ta concent rac ión de an t i cuerpos (ag lu t in inas) . Los usados para e l s i s tema ABO y Rh son los s igu ientes :

Suero an t i A (co lor azu l ) con a l to con ten ido de ag lu t in ina an t i A .

Suero an t i B (amar i l l o ) , con a l to con ten ido de ag lu t in inas an t i B .

Suero ant i D o ant i Rh ( t ransparen te) con a l to con ten ido de ag lu t in inas an t i D .

TRABAJO PRACTICO

Determinación de grupo sanguíneo ABO y factor Rh: Procedimiento:

Se depos i ta en una po l i cube ta una gota de suero an t i A , una go ta de suero an t i B y una go ta de suero an t i D .

Se agrega a cada gota una go ta de sangre obten ida por punc ión de l pu lpe jo de l dedo con una lanceta es tér i l o por punc ión venosa.

Una vez agregada la sangre, se mezc la la misma con un pa l i l l o , ten iendo cu idado de u t i l i za r un pa l i l l o d is t in to en cada caso .

S i se p roduce la ag lu t inac ión es ta se logra en pocos segundos y a l m inu to ya es demost rab le . La prueba se e fec túa en me jores cond ic iones cuando en vez de usar sangre to ta l de l pac ien te , se p repara una suspens ión de g lóbu los ro jos de la misma a l 50 % en so luc ión f i s io lóg ica . Pruebas de Compatibilidad Directa y Cruzada: S i r ven para de terminar la compat ib i l i dad en t re la sangre de l donante y la sangre de l recep tor :


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Se co loca una go ta de sangre en ambos ex t remos de un por taob je to .

A una de e l las se le añade una go ta de sangre que per tenezca a l m ismo grupo sanguíneo , m ien t ras que a la segunda go ta se le mezc la con una go ta de sangre de grupo d i fe rente .

Observar la reacc ión produc ida en cada caso .

En la prác t i ca las p ruebas de

compat ib i l i dad d i rec ta se e fec túan con una go ta de g lóbu los ro jos de l donante y una go ta de p lasma de l recep to r , y la de compat ib i l i dad c ruzada se e fec túa mezc lando una go ta de p lasma de l donante con una go ta de g lóbu los ro jos de l recep tor . Resultados: Si la sangre del donante y del receptor en estudio son del mismo grupo y factor no hay aglutinación. Si la sangre del donante y el receptor en estudio no son del mismo grupo y factor hay aglutinación.


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Resultado de determinaciones de grupos sanguíneos ABO y factor Rh

Si no aglutina con suero anti A, ni anti B, ni anti Rh (D) Si no aglutina con suero anti A, ni anti B, y si con anti D

Grupo 0 Rh-

Grupo 0 Rh+

Si aglutina con anti A, con anti B, y no con anti D Si aglutina con anti A, con anti B, y con anti D

Grupo AB Rh− Grupo AB Rh+

Si aglutina con anti A, no con anti B, y no con anti D Si aglutina con anti A, no con anti B, si con anti D

Grupo A Rh− Grupo A Rh+

Si no aglutina con anti A, si con anti B, no con anti Rh Si no aglutina con anti A, si con anti B, si con anti Rh

Grupo B Rh− Grupo B Rh+

CUESTIONARIO A CONTESTAR DURANTE LA

AUTOINTRUCCION 1. Hacer un esquema de la respuesta de inmunidad

celular. 2. Hacer un esquema de la respuesta de inmunidad

humoral. 3. Hacer un esquema que establezca los

componentes de la respuesta primaria y secundaria a una incompatibilidad feto - materna Rh.

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION PREGUNTA Nº 1: Entre las siguientes opciones, señale a la que contenga los enunciados que correspondan a la respuesta inmunológica humoral primaria: a) Participan el linfocito T cooperador y el linfocito B b) Se produce predominantemente inmunoglobulina G c) Se lleva a cabo en el timo d) Es más lenta, pero mas específica que la respuesta

humoral secundaria PREGUNTA Nº 2: Entre las siguientes opciones referidas a la respuesta inmunológica mediada por células, señale la que Ud. considera correcta: a) Uno de sus efectores es el linfocito T citotóxico

b) No es necesaria la participación de los macrófagos c) El resultado final es la destrucción celular por los

anticuerpos d) La hipersensibilidad retardada no forma parte de la

inmunidad celular. PREGUNTA Nº 3: Entre las opciones siguientes, señale a la que contenga a las inmunoglobulinas que corresponda a las siguientes funciones: 1 - Principal Ig en el plasma; 2 - Principal Ig formada en la respuesta primaria; 3 - Ig que tapiza la mucosas; 4 - Principal Ig. que se une al mastocito a) 1 - IgG; 2 - IgM; 3 - IgD; 4 - IgM b) 1 - IgG; 2 - IgA; 3 - IgM; 4 - IgE c) 1 - IgG; 2 - IgM; 3 - IgA; 4 - IgE d) 1 - IgA; 2 - IgM; 3 - IgG; 4 - IgD PREGUNTA Nº 4: Entre las siguientes opciones referidas al sistema de grupos sanguíneos ABO, señale la que Ud. considera correcta: a) Los antígenos A y B se heredan como caracteres

mendelianos dominantes y se sitúan en el plasma sanguíneo.


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b) Los antígenos A y B se encuentra presentes en muchos tejidos, además de la sangre y en nuestra población predomina el grupo AB.

c) Los portadores del grupo cero no contienen aglutininas en su plasma, por lo que se le puede considerar dadores universales

d) Los antígenos A y B son oligosacáridos complejos que se diferencian por su azúcar terminal, su síntesis está modificada por diferentes genes. Se sitúan en la membrana eritrocitaria y de otras células corporales.

PREGUNTA Nº 5: Entre las siguientes opciones, referidas al factor Rh, señale la que Ud. considere correcta: a) Los antígenos anti Rh, normalmente atraviesan la

barrera placentaria. b) Las personas Rh+, tienen aglutininas anti D. c) Las personas Rh- , normalmente no poseen

aglutininas anti Rh. d) Las personas Rh- , representan al 85% de nuestra

población. Problema Nº 1: Un paciente de un grupo A Rh negativo necesita ser transfundido con sangre. Seleccione entre los siguientes tipos de sangre disponibles, a la/s que podrían ser administradas sin que ocurra incompatibilidad. Explique el porque de su elección a) A Rh- b) O Rh+ c) AB Rh- d) O Rh- e) O Rh+ Problema Nº 2: Si la sangre de una persona no aglutina con suero anti A, pero aglutina con suero anti B y anti D, ¿Cuál es su grupo sanguíneo y factor?


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Figura Nº 1: Sistema de defensa inespecífico: Fagocitosis, Sistema del complemento Abbas AK, Litchman AH; Pober JS. Inmunología celular y molecular- 1999


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v Figura Nº 2: Sistema de defensa específico: Inmunidad Humoral y Tisular Abbas AK, Litchman AH; Pober JS. Inmunología celular y molecular-


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Fisiología de la hematopoyesis (Dra. Lilian Barrios)

Introducción

La formac ión adecuada de los d i fe rentes t ipos de cé lu las de la sangre c i rcu lan te es esenc ia l para e l desar ro l lo de un ind iv iduo norma l .

En e l adu l to , e l p roceso de hematopoyes is ocurre normalmente en la médula ósea e involucra a una heterogénea población de células precursoras y progenitoras con diferentes propiedades funcionales y fenotípicas, que se dividen y diferencian en estrecha proximidad del microambiente medular hemopoyético consti tuido por células , matriz extracelular y factores de crecimiento. (Fig. Nº 1)

Los componentes de l m ic roambien te

p roveen s i t ios de anc la je para las cé lu las hemopoyét icas y regu lan su p ro l i fe rac ión y madurac ión med ian te la secrec ión de c i toqu inas es t imu ladoras e inh ib idoras .

A l te rac iones a l p roceso norma l de

hematopoyes is dan lugar a pa to log ías hemato lóg icas y la comprens ión de l con t ro l mo lecu lar de su normal desenvo lv im ien to permi te con tes tar in ter rogantes acerca de l o r igen y pos ib le t ra tamien to de d ichas en fermedades .

E l p roceso de hematopoyes is se

carac ter iza fundamenta lmente por una capac idad i l im i tada de au tor renovac ión y de d i fe renc iac ión ce lu lar . E l comple jo de au tor renovac ión , compromiso y d i fe renc iac ión de las cé lu las hematopoyé t icas invo lucra a por lo menos t res grandes componentes in ter re lac ionados en t re s í : 1. Stem cells pluripotentes y células

progenitoras hematopoyéticas1. 2. Microambiente (células del estroma

medular, células accesorias, factores solubles y matriz extracelular)2.

3. Moléculas reguladoras del crecimiento

hemopoyético3.

Stem cells pluripotentes y células progenitoras hematopoyéticas Los p r imeros s tem ce l l s y cé lu las p rogen i toras son observados a n ive l ex t raembr ionar io , en e l saco v i te l ino , ent re los d ías 16 a 19 pos ter io res a la fecundac ión 4 . (Fig. Nº 2)

A l rededor de las 6 semanas de desar ro l lo embr ionar io , por mecan ismos aún no b ien de f in idos 5 , los s tem ce l l s y cé lu las p rogen i toras de l saco v i te l ino migrar ían a l h ígado fe ta l , que cumple un impor tan te pape l hematopoyé t ico hasta las 16 a 18 semanas .

O t ros órganos, ta les como e l t imo y

e l bazo también adqu ieren func ión hematopoyé t ica en es te per íodo de l desar ro l lo humano.

La hematopoyes is v iscera l es

máx ima duran te e l 3° a 4° mes de ges tac ión y re t rógrada en t re e l 6° y 7° .

La fase f ina l de la hematopoyes is

fe ta l t i ene lugar en la médu la ósea . Se reg is t ra ya en a lgunos huesos la rgos a las 10 semanas, pero en la mayor ía se comprueba a l conc lu i r la 120 semana.

A las 30 semanas de desar ro l lo fe ta l

ya se documentan todas las ser ies ce lu la res 6

En e l adu l to , la hematopoyes is ocur re pr inc ipa lmente en la médu la ósea .

La formac ión de las cé lu las

sanguíneas a n ive l medu la r es e l resu l tado de la pro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión de cé lu las hematopoyéticas que dif ieren ampliamente en su potencial para ambos procesos: los stem cel ls pluripotentes hematopoyéticos y las células progenitoras . (Fig. Nº 3) Los stem cells pluripotentes hematopoyéticos (PHSC) , que se encuent ran en número de 1 por cada 10 .000 o 1 cada 100.000 cé lu las medu la res 7 y a las cua les se cons idera es tán en es tad io G 0 de l c i c lo ce lu lar (qu iescen tes) duran te la hematopoyes is norma l 8 , son cé lu las capaces de autor renovarse según un mode lo es tocást i co y dar cé lu las igua les a s í


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mismas, o d iv id i rse y d i fe renc iarse dando cé lu las compromet idas o p rogen i toras 9

Las células progenitoras hematopoyéticas restringidas a dar una sola l ínea celular ta les como: G-CFU (unidades formadoras de colonias de granulocitos); CFU-E (unidades formadoras de colonias eritroides); Eo-CFU (unidades formadoras de colonias de eosinófilos), etc., así como células progenitoras multilíneas tal como GEMM-CFU (unidades formadoras de colonias de granulocitos, eritrocitos, macrófagos y megacariocitos) en cambio, están presentes en cantidad importante, t ienen al ta capacidad de prol iferación, pero más escasa potencialidad de autorrenovación y diferenciación, y son las encargadas de mantener una concentración normal de células sanguíneas periféricas a pesar del al to recambio que sufren éstas, por su corta vida media una vez que salen de la médula ósea (excepto quizás para los l infocitos) 1 0 , 1 1

El poo l de s tem ce l l s y cé lu las p rogen i toras, luego de un proceso de p ro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión , desar ro l lan ocho cé lu las sanguíneas d i fe rentes : cé lu las B y T , neu t ró f i l os , eos inó f i los , mast ce l l s , monoc i tos p laquetas y g lóbu los ro jos .

En los adultos, un pequeño número de stem cells y células progenitoras hemopoyéticas circulan normalmente en la sangre periférica.

Su número su f re un muy fuer te

inc remento después de la admin is t rac ión de agentes qu imio teráp icos o fac tores de c rec im iento hemopoyét icos recombinantes 1 2 , 1 3 .

Es ta c i rcunstanc ia ha permi t ido e l desar ro l lo de t ransp lan tes de cé lu las p rogen i toras sanguíneas c i rcu lan tes en sangre per i fé r i ca , en reemplazo de au to o a l lo t ransp lantes de médu la ósea , para res taurar la hematopoyes is luego de t ra tamientos mie lodepresores 1 4 .

Por o t ro lado , la ex is tenc ia de un

a l to número de progen i to res hemopoyét i cos p lu r ipo tenc ia les y res t r ing idos a una l ínea ce lu lar , en sangre de cordón umbi l i ca l , demost rado por Broxmeyer y co l 1 5 , l levaron a l empleo de progen i tores hematopoyét i cos

ob ten idos de la sangre de l cordón umbi l i ca l en e l momento de l par to para res taurar la hematopoyes is en pac ientes con anemia de Fancon i 1 6 , leucemia 1 7 , en t re o t ros . Microambiente Hemopoyético

Es tá cons t i tu ido por una ma l la de cé lu las de l es t roma medu la r , cé lu las accesor ias y sus p roductos (mat r i z ex t race lu lar y c i toqu inas ) 1 8 . Fig. Nº 4

Es te componente fue rea f i rmado a par t i r de l hecho de que en e l ind iv iduo adu l to en cond ic iones norma les , la hematopoyes is ocur re exc lus ivamente en la médu la ósea , (s i b ien los s tem ce l l s y a lgunas cé lu las p rogen i toras pueden c i rcu lar en sangre per i fé r i ca , no p roducen a l l í e l p roceso hemopoyét i co) .

En forma exper imenta l , l a impor tanc ia de l m ic roambien te en la hematopoyes is fue seña lada in ic ia lmente por Cur ry y Tren t in 2 en 1976 y luego ava lada por los exper imentos de Dexter y co laboradores 1 9 en 1977.

T rent in observó que los nódu los que aparec ían en ra tones i r rad iados, t ransp lan tados con cé lu las de médu la ósea de ra tón norma l , es taban en su mayor ía loca l i zados en la super f ic ie de l bazo y eran de con ten idos e r i t ro ide , m ien t ras que las co lon ias granu loc í t i cas se loca l i zaban en las t rabécu las esp lén icas.

Dex ter y co laboradores , logra ron desar ro l la r cu l t i vos in v i t ro de cé lu las de médu la ósea mur ina de var ios meses de durac ión, (an ter io rmente las cé lu las se desar ro l laban duran te dos a t res semanas en los cu l t i vos , y luego desaparec ían) co locando cé lu las es t romát icas medu lares que desar ro l laban una capa de cé lu las adheren tes en e l f rasco de cu l t i vo , lo que permi t ía la pro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión de las cé lu las sanguíneas duran te la rgo t iempo.

Por o t ro lado , e l t ransp lan te de médu la ósea, no imp l i ca técn icas qu i rú rg icas s ino la s imp le in t roducc ión de las cé lu las en e l to r rente sanguíneo , ind icando que los s tem ce l l s y las cé lu las p rogen i to ras hemopoyét icas t ienen la hab i l idad de reconocer y en lazarse con a l ta espec i f i c idad a las cé lu las es t romát icas de la médu la ósea .


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Este fenómeno se conoce como “homing” (vo lver a l hogar ) . En la médu la ósea, las cé lu las hematopoyét icas es tán d is t r ibu idas en cordones compactos , ub icados en espac ios ex t ravascu lares.

Los cordones de cé lu las

hemopoyét i cas es tán d ispersos y suspend idos en med io de senos venosos a rbor izados 2 0 , s iendo las cé lu las endote l ia les la ún ica bar rera en t re los espac ios in t ra y ext ravascu la r .

Los cordones de cé lu las hemopoyét i cas es tán rodeados por e l “microambiente hemopoyético” cons t i tu ido por las cé lu las de l es t roma ( f ib rob lastos , macró fagos , cé lu las endote l ia les , ad ipoc i tos) , cé lu las accesor ias ( l i n foc i tos T y monoc i tos) y sus produc tos (mat r i z ex t race lu lar y c i toqu inas) , que son capaces de in f luenc ia r la au tor renovac ión, p ro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión de los s tem ce l l s y cé lu las p rogen i to ras) .

En t re las cé lu las de l es t roma se

seña la un t ipo ce lu lar denominado “cé lu las bar rera” carac te r i zadas por su capac idad de inc rementar o d isminu i r en forma impor tante su número , tamaño y con tac tos con los s tem ce l l s o cé lu las p rogen i toras en respues ta a las cambian tes demandas de las d is t in tas cé lu las sanguíneas 2 1 .

Las cé lu las p rogen i toras

hematopoyét icas a su vez, es tán adher idas a las cé lu las de l es t roma de la médu la ósea, lo que permi te que e l las permanezcan en esa loca l i zac ión .

Ad ic iona lmente , es ta adhes ión

parece ser impresc ind ib le para su p ro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión 2 2 deb ido a que los procesos de p ro l i fe rac ión y d i fe renc iac ión de los s tem ce l l s hemopoyét icos y las cé lu las progen i toras se p roducen en un comple jo proceso de in teracc ión cé lu las hematopoyé t icas - cé lu las de l es t roma; cé lu las hematopoyé t icas - mo lécu las de la mat r i z ex t race lu lar y cé lu las hematopoyét i cas - fac tores de c rec im ien to hematopoyé t i co , p roduc idos en genera l , por cé lu las de l es t roma medu lar , (sa lvo en e l caso de e r i t ropoye t ina , s in te t i zada a n ive l rena l y t rombopoyet ina , s in te t i zada a n ive l hepát i co) .

Un e jemplo de la impor tanc ia de la in teracc ión cé lu las hematopoyét icas – cé lu las de l es t roma para e l p roceso hematopoyé t ico , es tá dado por la capac idad de los s tem ce l l s de médu la ósea t ransp lan tados de i r a loca l i za rse a n ive l de la médu la ósea .

Es tud ios de Tavasso ly e t a l 2 3 demost raron que la in teracc ión ent re lec t inas asoc iadas a la membrana de los p rogen i tores hemopoyét i cos con res iduos g lucocon jugados presentes en a lgunas cé lu las de l te j ido medu la r que los an ida, es tar ían invo luc radas en la loca l izac ión e lec t i va en médu la ósea de las cé lu las hematopoyé t icas t ransp lan tadas .

O t ro e jemplo de la impor tanc ia de la

in teracc ión cé lu las hematopoyét icas – cé lu las de l es t roma, en e l p roceso de hematopoyes is es tá dado por e l mecan ismo de acc ión de l fac to r de crec im ien to hematopoyé t ico KL (c-k i t l i gand) o S tem ce l l fac tor (SCF) en e l p roceso de au tor renovac ión de l s tem ce l l y d i fe ren tes es tad ios de d i fe renc iac ión de l m ismo a cé lu las p rogen i toras.

E l SCF es produc ido por cé lu las de l es t roma medu la r en dos formas: una forma en lazada a la membrana de su cé lu la p roduc tora y o t ra fo rma so lub le (probab lemente por d i fe ren tes ARNm) .

Ambas formas de l SCF producen

acc iones d i fe ren tes en la hematopoyes is : la fo rma so lub le (en lazada a su recep tor en la cé lu la hematopoyét ica) , p romueve la p ro l i fe rac ión hematopoyé t i ca , m ien t ras que la fo rma en lazada es t imu la la pro l i fe rac ión pero también func iona como un l igando para permi t i r la adhes ión cé lu la hematopoyé t i ca – cé lu la p roduc to ra de SCF 2 4 .

Con re lac ión a la in teracc ión cé lu la hematopoyé t ica – mat r i z ex t race lu lar , Zuckerman y Wicha 2 5 demost ra ron en cu l t i vos in v i t ro de la rga durac ión que los componentes de la mat r iz ex t race lu lar ta les como: f ib ronec t ina , lamin ina y var ios co lágenos y p ro teog l i canos produc idos por las cé lu las de l es t roma, deb ían depos i ta rse en e l cu l t i vo an tes de que se in ic ie la p ro l i fe rac ión de las cé lu las hematopoyé t i cas .

Se pos tu la que la in teracc ión p rogen i tores hemopoyét i cos – mic roambiente


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hemopoyét ico invo luc ra in f luenc ias regu ladoras pos i t i vas y negat ivas s iendo e l número ne to de cé lu las p roduc idas , e l re f le jo de l ba lance en t re ambas ac t iv idades regu ladoras .

Las células del microambiente son productoras de citoquinas capaces de estimular o inhibir la proli feración y di ferenciación de las distintas l íneas celulares hematopoyéticas1 8.

Se pos tu la que a lgunas de es tas

c i toqu inas , s in te t i zadas en cé lu las cons t i tuyentes de l m icroambiente , ac tuar ían sobre los p rogen i tores hemopoyét i cos adyacentes, anc lados en su cé lu la p roduc tora , o , en una moda l idad de es t imu lac ión yux tacr ina , s in d i fund i rse a l l íqu ido ext race lu lar 2 6 . Bibliografía 1. Till JE, and Mc Culloch EA. A direct measurement of

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22

Fig. 1: Esquema de la hematopoyesis. (Kozutsumi H. Hematopoiesis. The oncologist 1: 118-118, 1996). IL : interleuquina SCF: stem cell factor CFU- mast: unidad formadora de colonias de mastocitos CFU-Ba: unidad formadora de colonias de basófilos CFU-GM: unidad formadora de colonias de granulocitos – monocitos/macrófagos CFU-GEMM; unidad formadora de colonias de granulocitos, eritrocitos, monocitos/macrófagos y megacariocitos. GM-CSF: factor estimulante de colonias de granulocitos-monocitos/macrófagos


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G-CSF: factor estimulante de colonias de granulocitos M-CSF: factor estimulante de colonias de monocitos/macrófagos BFU - Meg: unidad formadora de grandes colonias de megacariocitos BFU -E: unidad formadora de grandes colonias eritroides CFU-E: unidad formadora de colonias eritroides TPO: trombopoyetina Epo: eritropoyetina

Fig. Nº 2: Períodos de desarrollo de la hematopoyesis en el embrión y el feto señalando la participación comparativa de los centros hematopoyéticos principales y los períodos aproximados en que aparecen los distintos tipos celulares


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Fig. Nº 3: Esquema de la organización jerárquica de los stem cells comparando su capacidad de autorrenovación y el estado del ciclo celular.


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Fig. Nº 4: Diagrama esquemático mostrando las interacciones entre las células del estroma, las células hemopoyéticas y los factores de crecimiento.


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FISIOLOGIA DE LA HEMOSTASIA (Dra. Lilian BARRIOS)

OBJETIVOS: al finalizar el trabajo práctico los alumnos deberán ser capaces de: o Explicar la función de la pared vascular en la

hemostasia. o Def in i r e l papel de las p laquetas en la

formación de l coágulo sanguíneo. o Nombrar los factores de la

coagulac ión e ind icar su lugar de producc ión.

o Descr ib i r deta l ladamente e l proceso de la coagulac ión de la sangre mediante los mecanismos ext r ínseco e in t r ínseco.

o Descr ib i r e l mecanismo de la f ibr ino l is is

o Citar los ant icoagulantes f is io lóg icos. o Evaluar a t ravés de las pruebas

func ionales de laborator io la normal idad de la func ión p laquetar ia y de los mecanismos in t r ínseco y ext r ínseco de la coagulac ión en la hemostas ia .

TRABAJO PRACTICO Método para el estudio de la función plaquetaria en la hemostasia. 1. PRUEBA DEL LAZO Se l leva a cabo co locando e l b raza le te de l es f igmomanómetro en e l te rc io med io de l brazo , con una pres ión in termed ia en t re la pres ión s is tó l i ca y d ias tó l ica . A l cabo de d iez minutos se re t i ra e l mecan ismo compresor y aparecen, cuando la p rueba es pos i t i va (anorma l ) una ser ie de pe tequ ias de tamaño var iab le y en número mayor de se is . La pos i t i v idad de la p rueba ind ica s iempre un impor tan te t ras torno p laqueta r io o cap i la r . Pruebas de laboratorio para el estudio de la hemostasia. 1- TIEMPO DE SANGRÍA ( técnica de Duke) Material: lanceta cronómetro papel de filtro Técnica:

√ Se l imp ia e l lóbu lo de la o re ja con a lcoho l .

√ Se hace una inc is ión en e l la , con p re ferenc ia sobre e l borde de l lóbu lo , con la lanceta . Conv iene tener e l lóbu lo apoyado sobre e l dedo o a lgo res is tente , para fac i l i ta r e l cor te de la lance ta .

√ Se mide e l t iempo t ranscur r ido ent re la inc is ión y e l momento en que la her ida de ja de sangrar , absorb iendo cada 30 segundos la sangre b ro tada , con pape l de f i l t ro . Se debe cu idar de no tocar los bordes de la her ida , con pape l de f i l t ro .

Normal hasta 7 minutos Consideraciones: con el tiempo de sangría se mide la hemostasia arterial y venular. No ex is ten t iempos acor tados, en cambio e l a largamien to pueden s ign i f i ca r : a) Alteración de un factor plasmático (enfermedad de

Willebrand) b) Alteración de un factor capilar (fragilidad capilar) c) Alteración de las plaquetas (especialmente en

número o adhesividad). A lgunos au tores dan tan ta impor tanc ia a la sangre b ro tada cada 30 segundos como a l t i empo de sangrado. Por deba jo de 50 .000 p laquetas /uL se a f i rma que e l t i empo de sangr ía va a ser anorma l . 2. TIEMPO DE COAGULACIÓN (técnica

de Lee White modificada) Material: baño María a 37 º C 2 jeringas, (una de ellas siliconada). 3 tubos de 12 x 10 mm con enrase de 1 ml 1 cronómetro Técnica:

Hacer la punc ión venosa t ra tando de que sea lo más ráp ida y l imp ia pos ib le .

Ext raer con la pr imera je r inga , 2 ó mas ml de sangre ,

Colocar la segunda je r inga (s i l i conada) , ex t rayendo la mues t ra de sangre , de la que se co locará 1 ml en cada uno de los 3 tubos. E l t i empo de coagu lac ión se empieza a med i r desde e l momento que en t ra sangre a la je r inga s i l i conada

Colocar los 3 tubos en baño Mar ía a 37 º C y de jar los en reposo duran te 5 minu tos .

Luego, comenzar a inc l inar los suavemente cada minuto , comenzando por e l p r imer tubo. Cuando, a l inver t i r e l p r imer tubo se observa que se ha formado e l coágu lo , se comienza a


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i nver t i r e l segundo tubo y luego que es te haya coagu lado , se comienza a inver t i r e l te rcero .

El t iempo t ranscur r ido en t re la en t rada de sangre a la je r inga s i l i conada y e l de formac ión de l coágu lo en e l te rcer tubo , es e l t i empo de coagu lac ión .

De haber mucha d i fe renc ia ent re los t iempos de los t res tubos , pueden expresarse los t res t iempos independ ien temente .

Normal: hasta 15´ Interpretación: T iempos cor tos (o h ipercoagu lab i l i dad) : no s iempre ha s ido aceptada su ex is tenc ia . No obs tan te , de l lamar la a tenc ión la rap idez en formar e l coágu lo , puede inves t igarse la h ipercoagu lab i l i dad por med io de o t ras técn icas ( tes t de res is tenc ia a la hepar ina) . T iempos a largados : s ign i f i can en rasgos genera les : • Déficit de factores tromboplásticos (XII, IX, VIII) • Anticoagulantes circulantes: espontáneos

; terapéuticos (heparina). • Por déficit de los factores del complejo protrombina

(II, V, VII y X) puede haber alargamiento del tiempo de coagulación, pero solo si el déficit es muy marcado, de tal modo que haya un bloqueo del ciclo coagulatorio.

3. RETRACCIÓN DEL COAGULO Técnica: se observa la re t racc ión de l coágu lo en los tubos en que se mid ió e l t i empo de coagu lac ión . La observación se hace a las 2 y 24 horas, de haber coagulado. La re t racc ión se expresa en la s igu iente escala: NEGATIVA: Ausencia de retracción +: Retracción leve ++: Retracción moderada +++: Retracción normal (50 % coágu lo y 50 % suero sobrenadante) ++++: Retracción extrema y precoz

NORMAL: ++ ó +++ a las 2 a 24 horas Consideraciones: es ta es una prueba que depende de l número y func ión de las p laquetas y e l f i b r inógeno. También t ienen impor tanc ia o t ros fac tores no l igados a la coagu lac ión, como e l vo lumen g lobu la r . En la po l ig lobu l ia , la re t racc ión es escasa y , lo con t rar io ocur re en la anemia .

4. TIEMPO DE PLASMA RECALCIFICADO: Técnica: En un tubo de Kahn pues to a baño Mar ía a 37 ºC se co loca :

0,2 ml de plasma pobre en plaquetas y se le agrega:

0,2 ml de Cl2 Ca 0,025 M Y se mide el tiempo de aparición de la malla de

fibrina. Conviene rea l izar la prueba por dupl icado. Esperar ent re 30 y 40 seg. antes de leer . Normal: Con plasma rico en plaquetas: 60 a 150 ´´ Con plasma pobre en plaquetas: 90a 180 ´´ 5. KPTT: (Tiempo de trompoplastina -

cefalina - caolín) Muestra: sangre obten ida con c i t ra to de sod io 3 ,13 g%, re lac ión 1 /10 . Se t raba ja con p lasma pobre en p laquetas, es dec i r , cen t r i fugado 30 minu tos a 300 revo luc iones por minu to . Materiales: Baño María. Pipetas de 0,1 ml. Centrífuga. Cronómetro. Reactivo: cefalina - caolín cloruro de calcio 0,025 M Procedimiento: Co locar en un tubo de hemól is is

0,1 ml de cefalina caolín (la cefalina reemplaza a las plaquetas y el caolín aumenta la superficie de contacto y permite reproducibilidad y sensibilidad)

0,1 ml de plasma Incubar tres minutos a 37ºC Agregar: 0,1 ml de CL Ca 0,025 M Disparar el cronómetro.

Normal: entre 30 a 50´´, midiéndose el tiempo final hasta la aparición del coágulo. 6. TIEMPO DE PROTROMBINA: Materiales: tubos de Kahn

pipetas de 0,1 ml o de 1 ml graduadas en 0,1 ml

tromboplastina Cl2 Ca 0,025 M Técnica: La sangre se ext rae como para las p ruebas ya descr ip tas, usando como so luc ión an t i coagu lan te c i t ra to de sod io , re lac ión 1 /10 de sangre. Se separa e l p lasma con cen t r i fugado ráp ido . Luego se t raba ja con ese p lasma.


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Se coloca 0,1 ml de plasma en un tubo: 0,1 ml de tromboplastina se incuba 15” a 37 ºC 0,1 ml de Cl2 Ca (Se pone en marcha el cronómetro) Normal: 10 a 14 segundos (Wiener Lab)

CUESTIONARIO A CONTESTAR DURANTE LA AUTOINSTRUCCION

1. ¿Qué pruebas deben realizarse para determinar si

un paciente presenta una adecuada formación de tapones plaquetarios?

2. ¿Cuales son las pruebas básicas que se deben

realizar para el estudio de la coagulación sanguínea en un paciente?

3. ¿Con que prueba de coagulación se controla a un

paciente anticoagulado con cumarínicos (competidores de vitamina K)?

4. ¿Con qué prueba de coagulación se controla a un

paciente anticoagulado con heparina? PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION PREGUNTA Nº 1: Entre las opciones abajo descriptas, señales a la que contenga el orden normal de los tiempos de la hemostasia a) Tiempo plaquetario, tiempo plasmático, tiempo

vascular, fibrinolisis b) Tiempo plasmático, tiempo plaquetario, tiempo

vascular, fibrinolisis c) Tiempo vascular, tiempo plaquetario, tiempo

plasmático, fibrinolisis d) Tiempo plasmático, fibrinolisis, tiempo vascular,

tiempo plaquetario. PREGUNTA Nº 2: La retracción del coágulo depende principalmente de: a) La concentración de los factores K dependientes b) La concentración y calidad de las plaquetas c) La concentración de los factores actuantes en el

mecanismo intrínseco d) La concentración del plasminógeno plasmático PREGUNTA Nº 3: El déficit de factor VIII de la coagulación, se asocia más frecuentemente con: a) Tiempo de sangría prolongado b) Tiempo de protrombina prolongado c) KPTT (Tiempo parcial de tromboplastina cefalina -

kaolín) prolongado d) Prueba del lazo positiva

PREGUNTA Nº 4: El dosaje de los productos de degradación del fibrinógeno (PDF) X; Y; D y E nos permite evaluar: a) La fisiología plaquetaria b) El mecanismo intrínseco de la coagulación c) El mecanismo de fibrinolisis d) Los factores K dependientes PREGUNTA Nº 5: Entre las siguientes opciones señale a la que contenga los componentes anticoagulantes fisiológicos: a) El dicumarol plasmático circulante b) La heparina y la antitrombina III c) Los fosfolípidos plaquetarios d) La trombomodulina y la proteína C reactiva PROBLEMA A RESOLVER En un paciente con coagulopatía (trastorno de la coagulación), el tiempo de protrombina es normal y el tiempo de cefalina (KPTT) está alargado aunque se normaliza con el agregado de plasma deficitario en factores V, IX y XI. a) ¿Qué vía de coagulación está alterada (vía

extrínseca, vía intrínseca, vía final común)? Razone la respuesta.

b) ¿Qué factor o factores estarían deficitarios? Razone la respuesta.

c) ¿En que alteración pensaría? (lesión hepática, déficit de vitamina K o hemofilia)?


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Fig. 1: Esquema de coagulación


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FISIOLOGIA DE LAS CELULAS EXCITABLES (Dra. Lilian BARRIOS) Conceptos fundamentales a conocer:

1. Componentes de la membrana ce lu lar invo lucrados en la func ión de las cé lu las exc i tab les. 2. Potenc ia l de reposo de las cé lu las exc i tab les. Su causa . 3. Potenc ia les loca les : po tenc ia l generador , po tenc ia l posts ináp t i co exc i ta to r io e inh ib i to r io ;

po tenc ia l de p laca . Mecan ismo de cada uno de es tos po tenc ia les y su re lac ión con e l po tenc ia l de acc ión .

4. Concepto de umbra l . Concepto de cana les ión icos qu ímicos y de vo l ta je . 5. Potenc ia l de acc ión: sus fases. Iones invo lucrados . Bomba de Na + K + ATPasa. Per íodos

re f rac tar ios . 6. Sinaps is : su c las i f i cac ión mor fo lóg ica y func iona l . Func ión de las s inaps is . 7. Neuro t ransmisores invo lucrados en e l fenómeno s ináp t i co .

OBJETIVOS: que el alumno

√ Describa las estructuras que en las células excitables transforman a la membrana citoplasmática en una entidad semipermeable selectiva que permite una diferente concentración de iones intra y extracelulares y el movimiento de iones determinado por neurotransmisores..

√ Explique detalladamente los mecanismos involucrados en la generación del potencial de reposo, los potenciales locales y los potenciales de acción propagados.

√ Explique la función de los potenciales de acción propagado en las neuronas y células musculares. √ Describa los disturbios funcionales que se producirán si estos fenómenos eléctricos están alterados.

DESARROLLO INTRODUCCION: Si b ien la mayor par te de las cé lu las an ima les posee una

d i fe renc ia de po tenc ia l e léc t r i co (vo l ta je) en t re e l in te r io r y e l ex ter io r de su membrana c i top lasmát ica ; e inc lus ive a lgunas suf ren var iac iones ampl ias en e l va lor de d ichos po tenc ia les (e j . : PMN, as t rog l ia , e tc . ) , so lo las neuronas y cé lu las muscu la res son capaces de generar un po tenc ia l de acc ión p ropagado.

A es tas cé lu las exc i tab les , capaces de generar potenc ia les de acc ión , se las denomina cé lu las exc i tab les .

Las cé lu las exc i tab les comprenden a : las neuronas y múscu lo es t r iado , card íaco y l i so , pero en este seminar io nos re fer i remos so lo a las neuronas y cé lu las muscu la res es t r iadas .

POTENCIAL DE REPOSO EN NEURONAS Y CELULAS MUSCULARES ESTRIADAS La membrana c i top lasmát ica ce lu la r cons t i tuye una barrera semipermeable selectiva ,

permi t iendo e l pasa je d i fus ivo l ib re de a lgunas mo lécu las y d i f i cu l tando o imp id iendo e l pasa je de o t ras . Ad ic iona lmente , la membrana de las cé lu las exc i tab les posee mecanismos de transporte activo de iones; canales iónicos químicos: de volta je y de fuga de Na+ y K+.

Las carac ter ís t i cas de semipermeab i l idad se lec t i va , y la presenc ia de cana les y bombas en la membrana, producen como consecuenc ia , una compos ic ión de l l íqu ido in t race lu la r muy d i fe rente a la de l l íqu ido ex t race lu lar .

Para comprender los p rocesos de exc i tab i l idad , nos in teresa recordar que en condiciones de reposo hay 10 veces más Na + por fuera que por dent ro . E l Ca + a su vez , en cond ic iones de reposo es un ion casi exclusivamente extracelular .

La suma de l to ta l de an iones y cat iones , tan to den t ro como fuera de la cé lu la , es de a l rededor de 150 a 160 mEq/L.


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Figura 1 : mecanismo de registro de cargas eléctricas en el exterior e interior de una

célula excitable

GENERACION DEL POTENCIAL DE REPOSO S i b ien la suma de an iones y cat iones in t ra y ex t race lu lares es s im i la r , la suma de

caracter ís t i cas ya menc ionadas de la membrana, genera en las cé lu las exc i tab les en reposo una diferencia de potencial entre la cara interna y externa de su membrana.

Si se in t roduce un microe lec t rodo en e l in ter io r de un axón o de una cé lu la es t r iada en reposo , podremos comprobar que ex is te una d i fe renc ia de po tenc ia l de a l rededor de – 70 a 90 mV, con cargas negativas por dentro y positivas por fuera.

La generac ión de l potenc ia l de reposo se debe a dos mecan ismos bás icos:

Potencial difus ivo de Na+; K+ y Cl – La permeab i l idad de la membrana en reposo es 100 veces super ior para e l K + que para e l

Na + . Es to genera una sa l ida de K + a t ravés de los cana les de fuga s igu iendo su g rad ien te de

concent rac ión . Este ion l leva cargas pos i t i vas a l ex ter io r de la membrana, de jando una e lec t ronegat iv idad re la t i va en e l in te r io r de la misma, deb ido a que los pr inc ipa les iones negat i vos in t race lu lares ( los fos fa tos orgán icos) no pueden a t ravesar la membrana para equ i l ib rar las cargas.

La sa l ida de K + a lcanza un va lor tope de terminado por la repulsión eléctrica que sufre esta molécula debido al acúmulo de cargas positivas del exterior de la membrana.

El va lor de po tenc ia l a lcanzado por la d i fus ión de K + (de te rminado por e l g rad ien te qu ímico “a favor ” y e l g rad iente e léc t r i co “en cont ra” ) se ob t iene ap l i cando la ecuac ión de Ners t para ion K + , cuyo va lo r es :

[K+] intracelular EMF = - 61 log = - 94 mV (en el [K+] extracelular interior)

Gradiente químico: permi te e l desp lazamiento de l K + de l lugar de mayor concent rac ión a l lugar de menor concent rac ión a t ravés de la membrana (que es 100 veces más permeab le a es te ion que a l Na + .


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Fig. 2: Gradientes determinantes del movimiento de los iones Na+ y K* en una célula excitable

E l g rad iente qu ímico genera una fuerza de desp lazamiento ión ico que se denomina fuerza de concent rac ión .

Gradiente eléctrico: l as cargas pos i t ivas de l ex ter io r de la membrana t ienden a rechazar

los iones que tengan la misma carga e léc t r i ca (ca t iones) . Por lo tanto se oponen a la sa l ida de K + . A es ta fuerza de repu ls ión se la denomina fuerza e léc t r i ca .

Cuando ambas fuerzas se igua lan , e l K + comienza a ser rechazado. El valor de potencial de membrana en que la fuerza de concentración y la fuerza eléctr ica se igualan ( impidiendo un mayor acumulo de K + en el exterior de la membrana, aún con gradiente químico favorable) se denomina potencial de equil ibrio del K + .

Su va lor se de termina por la ecuac ión de Ners t y en las cé lu las exc i tab les es de aprox imadamente –94 mV

S i b ien la membrana es poco permeab le para e l Na + , c ie r to número de estos ca t iones , penet ran a la cé lu la s igu iendo su g rad iente de concent rac ión.

E l va lor de la ecuac ión de Ners t par e l Na + es de aprox imadamente +61mV. Es ta pequeña penet rac ión de Na + en reposo , imp ide que e l va lo r de po tenc ia l de reposo

de la membrana sea igua l a l po tenc ia l de equ i l ib r io de K + . Ad ic iona lmente , hay una pequeña inc idenc ia por e l mov imien to de l ión C l - - .

E l va lor de l po tenc ia l de reposo generado por var ios iones se de termina por la ecuac ión de Go ldman, Hodgk in y Katz :

CK+i PK+ + CNa+i PNa+ + CCl- i + PCl- EMF = - 61. log CK+e PK+ + CNa+e PNa+ + CCl- e PCl-

CK+i: concentración intracelular de K+ CK+e: concentración extracelular de K+ PK+: permeabilidad de la membrana al K+ Idem para los otros iones.

TRANSPORTE ACTIVO DE IONES Las cé lu las exc i tab les poseen bombas Na + K+ ATPasa que env ían : 3 mo lécu las de Na + a l

ex te r io r y 2 mo lécu las de K + a l in ter io r ce lu lar ; p roduc iendo un e fec to neto de l igera negat i v idad


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en e l in ter io r de la membrana. Es te e fec to se suma a la negat iv idad p roduc ida por la d i fus ión de K + .

La suma de todos los mov imien tos ión icos descr ip tos da como resu l tado un va lor de po tenc ia l de reposo de – 90mV, en axones de gran d iámet ro y f ib ras muscu la res de gran tamaño. Es te va lor es d i fe ren te para axones pequeños o cé lu las muscu lares .

POTENCIALES LOCALES EN NEURONAS Y CELULAS MUSCULARES ESTRIADAS

Las cé lu las exc i tab les mot ivo de este seminar io : neuronas y cé lu las muscu lares est r iadas,

no pueden pasar en forma d i rec ta , de l po tenc ia l de reposo a un po tenc ia l de acc ión , deb ido a l mecan ismo de aper tura de los cana les ión icos de vo l ta je invo luc rados en la generac ión de un po tenc ia l de acc ión p ropagado.

Como su nombre lo ind ica , los cana les de vo l ta je de Na + y K + se abren y c ie r ran an te cambios de l va lo r de po tenc ia l de membrana, espec í f i cos para cada uno de e l los .

La aper tura de los cana les de Na+ y K + de vo l ta je ( fenómeno que permi te la generac ión de l po tenc ia l de acc ión) se logra an te un cambio de va lor de potenc ia l de la membrana en reposo que rec ibe e l nombre de umbral .

Este cambio de vo l ta je , desde e l va lo r de po tenc ia l de reposo a l va lor umbra l se logra med ian te fenómenos e léc t r i cos denominados potenc ia les loca les .

Hay po tenc ia les loca les espec í f i cos para las neuronas y e l múscu lo est r iado.

POTENCIALES LOCALES EN NEURONAS Las neuronas p resentan dos t ipos de po tenc ia les loca les :

1. Potencial postsináptico excitatorio (PPSE) 2. Potencial postsináptico inhibitorio (PPSI)

A es tos potenc ia les loca les espec í f i cos de todas las neuronas debemos agregar un tercer

po tenc ia l loca l que so lo se presenta en la te rmina l per i fé r i ca de las neuronas sensor ia les a ferentes , en con tac to con e l recepto r sensor ia l : el potencial generador ó potencial de receptor.

Estos potenc ia les loca les se p roducen por med io de s inaps is qu ímicas (PPSE y PPSI ) o por a l te rac ión de la permeab i l idad an te es t ímu los ex te rnos (po tenc ia l de receptor ) .

S i b ien se descr iben s inaps is e léc t r icas en e l s is tema nerv ioso cent ra l , d ichas s inaps is han s ido conf i rmadas so lo en an ima les in fer io res y no las descr ib i remos, pues so lo cons t i tuyen una h ipótes is en e l ser humano.

Potencial de receptor: constituye el potencial local que permite el

desencadenamiento de un potencial de acción en las f ibras aferentes sensitivas que están en contacto con los receptores sensoriales.

Los recep tores sensor ia les son est ruc turas espec ia l i zadas que t ransducen d i fe rentes formas de energ ía (mecán ica , química , té rmica) en potenciales de acción propagados que l levan la in formac ión que tomó e l recep tor sensor ia l en la per i fe r ia , a l s i s tema nerv ioso cen t ra l .

Los receptores sensor ia les t ienen espec i f i c idad (no abso lu ta ) para determinada forma de energ ía .

S i tomamos como e jemplo un mecanor receptor : el corpúsculo de Pacini , podemos descr ib i r e l mecan ismo de producc ión de un po tenc ia l de receptor de la s igu ien te manera:


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Fig. 3: Zona de generación de potencial de receptor en un corpúsculo de Pacini

Ante un es t ímu lo mecán ico (por e j . : p res ión sobre la p ie l ) , e l co rpúscu lo de Pac in i se de forma, produc iéndose un estiramiento de la terminación sensitiva que se encuentra en su interior . Es te es t i ramien to mod i f i ca la permeab i l idad de la te rmina l nerv iosa , en fo rma no se lec t iva , para ca t iones.

E l resu l tado es : una ent rada neta de Na + a l in ter io r de la f ib ra nerv iosa y su d is t r ibuc ión pas iva por e l c i top lasma cercano.

Cuando e l Na + que ingresó l lega a l p r imer nudo de Ranv ier de la f ib ra nerv iosa, zona a par t i r de la cua l aparecen abundantes cana les de vo l ta je de Na + y K + , s i su can t idad es su f i c iente para a lcanzar e l umbra l de esos cana les , se in ic ia rá un potenc ia l de acc ión propagado.

S i la pres ión en e l corpúscu lo de Pac in i es muy leve , l a can t idad de Na + ingresado será mín ima y , probab lemente no a lcanzará e l va lor umbra l para abr i r l os cana les de vo l ta je .

En ese caso, e l po tenc ia l de recep tor se mantendrá como un fenómeno loca l que se d is ipa en e l t iempo, s in propagarse .

S i la p res ión sobre e l corpúscu lo de Pac in i es lo suficientemente intensa como para que en t re suf i c ien te Na + para l l egar a l va lo r umbra l : se produc i rá la aper tu ra de los cana les de vo l ta je de Na + y K+ y se desencadenará un potenc ia l de acc ión p ropagado.

Propiedades del potencial de receptor:

Este potencial, al igual que los otros potenciales locales, aumenta su amplitud y duración con el

aumento del estímulo (a diferencia del potencial de acción que tiene siempre la misma intensidad y duración).

Dura más que el potencial de acción y, si antes de desaparecer el primero, se produce otro, ambos se suman.

Los potenciales locales no tienen períodos refractarios. E l po tenc ia l generador permi te que : es t ímu los produc idos por d i fe rentes t ipos de energía

que inc iden sobre los recep tores sensor ia les que es tán fuera de l s is tema nerv ioso cen t ra l , puedan in formarse a l s i s tema nerv ioso cen t ra l en fo rma de po tenc ia les de acc ión .

Potenciales postsinápticos excitatorio e inhibitorio: Los potenciales locales que se desencadenan en las neuronas son fenómenos sinápticos.

Se puede def in i r a la s inaps is como una un ión espec ia l i zada en t re dos neuronas , donde la neurona prev ia in f luye con su ac t i v idad e léct r i ca en la exc i tab i l i dad de la neurona s igu ien te med ian te la l ibe rac ión de sus tanc ias denominadas neuro t ransmisoras.

A es te t ipo de s inaps is se denomina sinapsis química.(También existen sinapsis eléctricas, que producen

en la neurona siguiente, un potencial de acción igual al de la neurona precedente, por paso de iones entre una y otra. Pero este tipo de sinapsis en el hombre es propia del músculo liso y cardíaco más que de la neurona, donde está discutida su presencia).

La in f luenc ia de la neurona prev ia sobre la neurona s igu iente , en las s inaps is qu ímicas ,

se e je rce a t ravés de po tenc ia les loca les denominados : potencial postsináptico excitatorio (PPSE) y potencial postsináptico inhibitorio (PPSI). A t ravés de es tos potenc ia les loca les se puede in f lu i r en las comun icac iones de l s is tema nerv ioso cent ra l , t ranspor tadas por los po tenc ia les de acc ión :

a) Bloqueando dichos potenciales de acción; b) Produciendo potenciales de acción únicos o en salvas; c) Integrando la influencia de varias neuronas previas sobre una siguiente neurona dando lugar a respuestas complejas


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Fig. 4: Potenciales locales excitador e inhibidor en neuronas

Anatomía funcional de la sinapsis química

Fig. 5: Sinapsis entre dos neuronas

La sinapsis entre neuronas y neuronas constan de:

Una porción presináptica denominada nudo terminal, botón o pie terminal; constituida por una terminal axónica desmielinizada de la neurona previa. (Esta terminal presenta vesículas que contienen moléculas de neurotransmisor. Los neurotransmisores pueden tener efecto excitatorio o inhibitorio sobre la neurona siguiente).

Nudo terminal, botón o pie terminal; constituido por una terminal axónica desmielinizada de la neurona previa. (Esta terminal presenta vesículas que contienen moléculas de neurotransmisor. Los neurotransmisores pueden tener efecto excitatorio o inhibitorio sobre la neurona siguiente).

Una membrana postsináptica (de tamaño semejante al del botón axónico presináptico), que en el 80 a 90 % de los casos se ubica en las dendritas y en el 10 a 20 % de los casos en el soma de la neurona siguiente. Esta membrana es rica en receptores para el neurotransmisor liberado por, la correspondiente terminal presináptica.

Cada neurona puede rec ib i r m i l la res de te rmina les axón icas p rocedentes de mú l t ip les

neuronas pres ináp t i cas (a lgunas rec iben 10 .000 o más termina les axón icas) . Potencial postsináptico excitatorio

Rec iben es te nombre los fenómenos e léc t r i cos p roduc idos en aque l las s inaps is cuyo neuro t ransmisor d isminuye e l va lor de po tenc ia l de reposo de la neurona pos ts ináp t i ca


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acercándo lo a l va lor umbra l (va lor que permi te la aper tura de los cana les de vo l ta je de Na + y K + , desencadenando e l po tenc ia l de acc ión) .

El valor de potencial de reposo de una neurona motora es de aproximadamente 70 mV y el valor umbral de –45 a –40 mV. Es dec i r que una descarga s ináp t ica exc i ta tor ia debe ba jar en t re 20 a 25 mV e l vo l ta je de la membrana pos ts ináp t i ca para que se descargue e l po tenc ia l de acc ión.

Fig. 6: Potencial postsináptico excitatorio en una neurona Por o t ro lado se es t ima que , cada te rmina l s ináp t i ca produce un cambio de vo l ta je de

a l rededor de 0 ,5 mV. Este cambio de 0 ,5 mV se denomina PPSE, y , como su va lor es muy pequeño, es fác i l deduc i r que la descarga de una so la termina l p res ináp t i ca exc i ta tor ia no logra por s í so la l legar a l va lor umbra l de la neurona .

Deben por lo tan to descargarse mú l t ip les termina les s ináp t i cas y sumarse su e fec to para lograr l l egar a l va lor umbra l y descargar un po tenc ia l de acc ión .

Tanto e l PPSE como e l PPSI duran unas 10 veces más que e l po tenc ia l de acc ión . Fenómenos iónicos producidos en un PPSE: l a te rmina l pres ináp t ica de una s inaps is de t ipo

exc i ta to r io l ibe ra mo lécu las de neurot ransmisor que , a l un i rse a su recep tor en la membrana subs ináp t i ca , mod i f i can la permeab i l idad de d icha membrana para e l Na + y e l K + . A l lugar de pasa je de estos iones , ab ie r to por la acc ión de l neurot ransmisor se lo denomina cana l qu ímico .

E l e fec to ne to de aumento de permeab i l idad produc ido por , e l neuro t ransmisor un ido a l

recep tor en la membrana subs ináp t i ca , es la en t rada de Na + (que supera a la can t idad de K + que sa le ) .

La ent rada de Na + en cada s inaps is exc i ta tor ia genera una d isminuc ión de la negat iv idad in terna de la membrana de a l rededor de 0 ,5 mV.

Esta variación de potencial de membrana se denomina potencial postsináptico excitatorio (PPSE) y, como acerca e l vapor de potencial de membrana al vapor umbral, se d ice que en es te momento la membrana está h ipopo lar izada .

Si se descargan al mismo tiempo, o muy seguidos en el tiempo, suficientes PPSE (entre 40 a

70), estos se suman y alcanzan a llevar el voltaje hasta el valor umbral, produciendo la apertura de los canales de Na+ y K+.

Como en la neurona los cana les de vo l ta je se encuent ran ub icados desde e l cono in ic ia l de l axón hasta las te rmina les axón icas p res inápt i cas , e l po tenc ia l de acc ión se in ic ia rá en e l cono in ic ia l de l axón y se propagará has ta d ichas termina les .

Potencial postsináptico inhibitorio (PPSI)

La termina l p res inápt i ca de una s inaps is inh ib i to r ia l i bera vesícu las de neurot ransmisor que , a l un i rse a su recep to r en la membrana pos ts ináp t i ca , abre cana les para los iones K + o C l - .

Es tos iones se mueven por d i fus ión , s igu iendo su g rad iente de concent rac ión . Tanto la sa l ida de K+ como la en t rada de C l - resu l tantes , producen un aumento de la negat i v idad de la cara in terna de la membrana.


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Por lo tan to , e l PPSI a le ja e l va lo r de vo l ta je de l in te r io r de la membrana de l va lo r umbra l , hac iendo necesar ia la presenc ia de un es t ímu lo de mayor in tens idad para l legar a l umbra l y descargar e l po tenc ia l de acc ión. Es ta s i tuac ión se descr ibe como h iperpo lar i zac ión de la membrana

Los PPSI se suman en forma a lgebra ica a los PPSE que se es tán descargando sobre una

neurona .

Fig. 7: Potencial postsináptico inhibitorio en una neurona

Activación de la neurona postsináptica

Conoc iendo los mecan ismos de los potenc ia les loca les neurona les se hace ev idente que la neurona pos ts ináp t i ca descargará un potenc ia l de acc ión , med ian te e l e fec to combinado de muchas descargas s ináp t i cas , permi t iendo que se integren muchas in formac iones sobre la misma.

Además, como cada po tenc ia l loca l t i ene una durac ión de aprox imadamente 10 veces mas t iempo que e l potenc ia l de acc ión , s i en determinado momento , se genera un PPSE de va lor umbra l o mayor a l umbra l , l a neurona descargará en forma repe t i t i va , m ien t ras dure e l po tenc ia l loca l en e l va lo r umbra l , so lo l im i tado e l número de po tenc ia les de acc ión descargados por los per íodos re f rac tar ios .

CELULA MUSCULAR ESTRIADA

En la cé lu la muscu la r es t r iada e l po tenc ia l loca l se denomina po tenc ia l de p laca te rmina l . Cada f ib ra muscu lar rec ibe una termina l axón ica de una motoneurona, const i tuyéndose en

la un ión de ambas: la s inaps is neuromuscu la r . Porción presináptica de la placa terminal: es tá cons t i tu ida por una termina l axón ica s in

mie l ina , en fo rma de bo tón . En su in te r io r hay múl t ip les mi tocondr ias y ves ícu las con ten iendo e l neuro t ransmisor ace t i l co l ina (Ach) , s in te t i zado por la neurona motora . Es ta zona p resenta cana les de vo l ta je de Ca+ ; m icro túbu los y micro f i lamentos .

Cuando se p roduce un po tenc ia l de acc ión en la motoneurona, a l a lcanzar e l bo tón s ináp t i co la despo la r i zac ión , se p roduce la aper tura de los cana les de Ca + que permi ten que las ves ícu las con neuro t ransmisores se peguen a la membrana y se desprendan por exoc i tos is . La Ach se l ibera de las vesícu las y se vue lca en e l espac io in ters ináp t i co .

Porción postsináptica de la placa terminal: es tá cons t i tu ida por una porc ión espec ia l i zada

de l sarco lema. Es ta zona de la membrana es tá ampl iamente p legada (aumentando en muchas veces la super f i c ie s ináp t i ca ) y presenta una g ran can t idad de recep tores para Ach .

Cuando la Ach se l iga a su receptor , se acc iona la aper tura de cana les ión icos que de jan pasar pre feren temente Na + .


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El Na + que en t ra por estos cana les qu ímicos , a l d ispersarse pas ivamente en e l c i top lasma, ba jan e l vo l ta je de la zona vec ina a la s inaps is , donde se in ic ian los cana les de vo l ta je de Na + y K+ .

Fig., 8: Componentes de una sinapsis neuromuscular

Como hay una gran can t idad de cana les qu ímicos deb ido a la de la membrana

subs ináp t ica , se logra fác i lmente l legar a l va lo r umbra l que produce la aper tura de los cana les de vo l ta je de Na + y K+ , in ic iándose un potenc ia l de acc ión .

E l po tenc ia l de p laca termina l siempre es de naturaleza excitatoria.

POTENCIAL DE ACCION Es un fenómeno b io lóg ico produc ido en las cé lu las exc i tab les , cuya carac te r ís t i ca

impor tan te es que : una vez p roduc ido en un pun to , se p ropaga por toda la super f i c ie de la cé lu la con las mismas carac te r ís t i cas .

Los mecan ismos b io lóg icos generadores de un po tenc ia l de acc ión se exp l i can por la teor ía ión ica de Hodgk in y Hux ley , es tando invo lucrados fundamenta lmente e l Na + y K + .

Las neuronas y las cé lu las muscu lares es t r iadas pueden desencadenar po tenc ia les de acc ión deb ido a que en la es t ruc tura de su membrana cuentan con cana les de vo l ta je de Na + y K+ .

E l po tenc ia l de acc ión cons ta de dos fases : o Despolarización: se produce cuando los cana les de vo l ta je de Na + y K + de la membrana se

abren . Es ta aper tura se logra med ian te potenc ia les loca les espec í f icos . Para la neurona: e l

po tenc ia l generador s i es una neurona a fe ren te sens i t i va o ; la suma a lgebra ica de PPSE y PPSI en e l res to de d ichas cé lu las . Para la célula muscular estriada la apertura de los canales de voltaje se logra mediante el potencial de placa.

La aper tura de los cana les de vo l ta je de Na + se produce en forma muy ráp ida . Cuando se l lega a l va lo r umbra l de la cé lu la , e l Na+ ingresa mas ivamente ( la

permeab i l idad de l Na+ con cana les de vo l ta je ab ie r tos es de 500 a 5000 veces mayor a l es tado de reposo) y la cara in te rna de la membrana pasa de vo l ta je negat ivo a vo l ta je pos i t i vo , a lcanzando un va lo r aprox imado de +35 mV.

E l va lo r de +35 mV en e l in ter io r de la membrana a su vez, p roduce e l c ie r re de los cana les de Na + de vo l ta je ( inact i vac ión de los cana les de Na + de vo l ta je ) .

S i med ian te un vo l t ímet ro se reg is t ra e l g rá f i co que d ibu jan los cambios ión icos en la cé lu la que descarga un po tenc ia l de acc ión , se observa que : se dibuja una curva ascendente denominada despolarización, producida por la entrada de Na+ por los canales de voltaje de Na +.


Fig. 9: Potencial de acción

Los cana les de K + , que in ic ian su aper tura en e l va lo r umbra l , rea l i zan esta aper tura en forma muy len ta , de manera que a lcanzan e l es tado de ab ier to to ta l , rec ién en e l momento de inac t i vac ión de los cana les de Na + de vo l ta je .

En ese momento e l K + sa le ráp idamente, s igu iendo su grad ien te de concent rac ión , y

vue lve a negat iv i zarse e l in ter io r de la membrana. Este período se marca como una curva descendente y recibe el nombre de repolarización.

El c ie r re de los cana les de vo l ta je de K + , que se p roduce aprox imadamente en e l va lo r de

vo l ta je de reposo , permi te que la cé lu la vue lva a su va lor de vo l ta je in ic ia l reposo. A veces , quedan ab ier tos a lgunos cana les de vo l ta je de K + , a pesar de haber l l egado a l

va lo r de reposo , y se produce una pro longac ión de la curva de repo lar i zac ión por deba jo de l va lor de po tenc ia l de reposo. Este período se denomina potencial ulterior negativo.

Cerrados todos los cana les de vo l ta je de K + y actuando la bomba Na + K + ATPasa (que

expu lsa e l Na + que en t ró a la cé lu la y recupera e l K + que escapó, duran te e l po tenc ia l de acc ión) , se recupera e l es tado in ic ia l de la cé lu la exc i tab le .

PERIODOS REFRACTARIOS

Duran te cas i todo e l desar ro l lo de l potenc ia l de acc ión , la membrana es re f ractar ia a

un nuevo es t ímu lo , aunque es te sea muy po ten te . A es te per íodo se denomina PERIODO REFRACTARIO ABSOLUTO.

Duran te la par te f ina l de la repo lar i zac ión , s in embargo , un segundo es t ímu lo umbra l no a l te ra e l fenómeno que es tá suced iendo, pero un es t ímu lo más in tenso puede vo lver a d isparar un nuevo potenc ia l de acc ión, antes de que se haya comple tado la repo lar i zac ión.

A es te per íodo , en e l cua l un es t ímulo supraumbra l puede vo lver a descargar un nuevo po tenc ia l de acc ión , se lo conoce con e l nombre de PERIODO REFRACTARIO RELATIVO.

PROPAGACION DEL POTENCIAL DE ACCION


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Hemos descr ip to e l po tenc ia l de acc ión generado en un pun to de la membrana. La

can t idad de Na + que en t ró mas ivamente en ese pun to , se d ispersa hac ia los pun tos vec inos de la membrana, ba ja e l vo l ta je de esas zonas , y produce la aper tura de los cana les de vo l ta je vec inos de Na + y K+ .

De esta manera, una vez que el estímulo logra abrir los primeros canales de voltaje de Na+ y K+ (esto se logra mediante los correspondientes potenciales locales), la cantidad de Na+ que penetra por los primeros canales de voltaje, es suficiente para producir la apertura de los siguientes, punto por punto, propagándose de esta manera el potencial de acción, por toda la célula excitable.

PREGUNTAS A CONTESTAR DURANTE LA AUTOINSTRUCCION 1. ¿Qué tipo de potenciales de membrana se pueden presentar en las neuronas? 2. Defina las características de concentración y movimientos de iones de cada uno de los potenciales que

pueden presentar las neuronas, y el tipo de cargas que generan a ambos lados de la membrana. 3. ¿Qué papel juegan las sumaciones de estímulos (tanto excitatorios como inhibitorios) en las respuestas

neuronales?

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN Entre las siguientes opciones referidas a los factores que permiten el potencial de reposo de las neuronas, señale a la INCORRECTA. a) Membrana con permeabilidad selectiva b) Aniones intracelulares no difusibles c) Bomba sodio-potasio ATPasa d) Entrada rápida de sodio

En el potencial de acción de una neurona: a) Se alcanza el valor umbral por entrada de sodio a través de canales operados por voltaje b) Se alcanza el valor máximo de despolarización por entrada de iones sodio por canales de voltaje c) Se produce repolarización por salida de iones potasio por los canales operados por neurotransmisores d) La despolarización se produce por entrada de sodio por canales operados por neurotransmisores . a) La conductancia al sodio será máxima durante el reposo b) La conductancia aal sodio será máxima durante la despolarización c) La conductancia para el potasio será mínima durante el reposo d) La conductancia para ambos iones será máxima durante el reposo


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Taller : Fisiología del músculo esquelético ((Dres. Lilian Barrios y Oscar H. Poletti) OBJETIVOS. Los a lumnos concur r i rán con su mater ia l b ib l iográ f i co y med iante au toes tud io gu iado por los docentes desar ro l la rán ac t i v idades que le permi tan cumpl i r los s igu ien tes ob je t i vos : - Descr ib i r la es t ruc tura func iona l de l

múscu lo esque lé t i co . - Caracter izar las molécu las más

impor tan tes que in terv ienen en la con t racc ión muscu la r .

- Ana l i zar la suces ión de eventos

ocur r idos duran te una cont racc ión muscu lar en forma in tegra l ( l legada de un po tenc ia l de acc ión , acop le e lec t ro mecán ico , con t racc ión, re la jac ión)

- Di fe renc ia r las con t racc iones isomét r i cas

e i so tón icas . - Descr ib i r l os mecan ismos energé t i cos

de l múscu lo esque lé t i co y su re lac ión con e l t i po de cont racc ión e fec tuada.

- Caracter i zar los d is t in tos t ipos de

múscu lo CONCEPTOS FUNDAMENTALES A DESARROLLAR EN EL TALLER: 1- Est ruc tura y o rgan izac ión de l múscu lo

esque lé t i co ( la sarcómera) 2 - Fenómenos e léc t r i cos de l múscu lo

esque lé t i co . 3 - Bases molecu la res de la con t racc ión

muscu lar . Acop le e lec t romecán ico 4 - Unidad motora , masas muscu la res . 5 - Cont racc ión i sométr i ca e i so tón ica .

Re lac ión long i tud - tens ión (curva) . Componente con t rác t i l , componente e lás t i co en ser ie y componente e lás t ico en para le lo de l múscu lo esque lé t i co .

6 - Clas i f i cac ión de l múscu lo esque lé t ico ,

según sus caracter ís t i cas mor fo lóg icas , func iona les y metabó l i cas : F ibras t ipo I ( len tas , ox ida t i vas) ; f ib ras t ipo I I ( ráp idas , g luco l í t i cas) .

7 - Fat iga muscu la r . Su d i fe renc iac ión con la fa t iga nerv iosa

Realización de contracciones isotónicas e isométricas a cargo de los alumnos Los a lumnos levan tarán y tendrán suspend idas cargas , para most ra r con t racc iones i so tón icas e i sométr i cas respec t i vamente . Bibliografía: Bases Fisiológicas de la Práctica Médica. Best y Taylor 2003- Edición. Editorial Panamericana. Fisiología Médica. William F Ganong. 16ª Edición. Editorial Manual Moderno. Fisiología Humana de Houssay. H.E. Cingolani - A. B Houssay. 2000- Edición. Editorial El Ateneo. Tratado de Fisiología Médica. Guyton. 10ª Edición. Editorial Interamericana. Fisiología del Ejercicio. J. López Chicharro - Almudena Fernández Vaquero. Editorial Panamericana. 1995. Fisiología del deporte. R.W. Bowers-E.L. Fox. 3ª Edición. Editorial Panamericana. Physiology. John Bullock:; Joseph Boyle; Michael B. Wang. 3rd edition.

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN PREGUNTA N° 1: Las funciones de la tropomiosina en el músculo esquelético incluyen: a) Deslizamiento de la actina para producir

acortamiento. b) Liberación de Ca+ después del comienzo de la

contracción. c) Fijación a la miosina durante la contracción. d) Función de proteína de relajación al cubrir los sitios

en los cuales se fija la miosina a la actina. PREGUNTA N° 2:Los puentes entrecruzados del sarcómero en el músculo esquelético están formados por: a) Actina. b) Miosina. c) Troponina. d) Tropomiosina. PREGUNTA N° 3: La respuesta contráctil en el músculo esquelético: a) Se inicia después que termina el potencial de

accción. b) Dura menos que el potencial de acción.


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c) Produce más tensión cuando la contracción es isotónica que cuando es isométrica.

d) Puede aumentar en magnitud con estimulación repetida (sumación temporal)

PREGUNTA N° 4: Se denomina acople eléctro mecánico a: a) Cuando el potencial de acción provoca liberación de

Ca++ que inicia la contracción. b) El potencial de que se transmite al túbulo T del

RSP. c) El hecho de que toda contracción es precedida por

un potencial de acción. d) Los cambios de voltaje del sarcolema durante el

potencial de reposo. PREGUNTA N° 5: La velocidad de contracción de la célula muscular esquelética depende de: a) Su número de filamentos de actina y miosina. b) Su contenido de ATPasa rápida, intermedia y lenta. c) La presencia de mioglobina. d) Su cantidad de vasos sanguíneos. PREGUNTAS A CONTESTAR DURANTE LA AUTOINSTRUCCIÓN 1. Describir la estructura micro y macroscópica del

músculo esquelético. 2. Explicar la secuencias de eventos sucedidos desde

un potencial de acción hasta la contracción del músculo esquelético y exponer el significado de cada uno.

3. Describir los distintos tipos de fuentes energéticas

para la contracción del músculo esquelético y su relación con el momento en que se efectúa la contracción..

4. La fuente principal de energía en los primeros 15

segundos de una contracción muscular está representada por :

a) Glucógeno muscular. b) ATP . fosfocreatina. c) Ácidos grasos. d) Glucosa. 5. Cuando levanta una carga el músculo esquelético: a) Aumenta su tensión. b) No varía su longitud. c) No varía su tensión. d) Aumenta su longitud.


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Nº 1: Músculo esquelético de mamífero- Se detallan: fascículo muscular; fibra muscular; miofibrilla; sarcómera y filamentos finos y gruesos


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Fig. Nº 2: Representación esquemática de los pasos del proceso contráctil. A: Posición de reposo. B: Cuando el Ca+ se enlaza a la troponina, la troponina sufre un cambio conformacional desplazando a la tropomiosina de manera que quedan expuestos los sitios de actina fijadores de miosina.. Durante esta etapa la cabeza de miosina se enlaza al sitio activo en la actina. C: En la siguiente etapa, la cabeza de la miosina se desplaza sobre su cola, produciendo el deslizamiento del filamento fino sobre el filamento grueso. Durante esta etapa se hidroliza el ATP y sus productos: ADP y Pi son liberados del puente cruzado. D: en esta etapa, una nueva molécula de ATP se enlaza al puente cruzado , y este se separa del sitio activo de la actina. En este momento se iniciará un nuevo ciclo, si el Ca+ se encuentra unido a la troponina. De otra manera, el músculo se relajará


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Fig. Nº 3: Respuesta eléctrica: A y mecánica: B de una fibra muscular esquelética. Como el período refractaria del potencial de acción ya ha finalizado antes del inicio del fenómeno mecánico, se pueden aplicar estímulos intensos y repetidos a la fibra muscular produciendo su semitetatinazión o tetanización

Fig. Nº 4: Respuesta eléctrica: A y mecánica: B de una fibra muscular esquelética. Como el período refractaria del potencial de acción ya ha finalizado antes del inicio del fenómeno mecánico, se pueden aplicar estímulos intensos y repetidos a l a fibra muscular produciendo su semitetatinazión o tetanización


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TALLER CON PROYECIÓN DE VIDEO SOBRE: “Efectos de distintos tipos de estímulos sobre preparado neuromuscular de gastrocnemio, aislado de batracio”. (Dres. Lilian Barrios y Oscar Poletti OBJETIVOS:

Di ferenc iar e l mecan ismo de es t imu lac ión f i s io lóg ica de l múscu lo esque lé t i co de o t ros es t ímulos exper imenta les (e léc t r i cos , qu ímicos , mecán icos e tc . )

Exp l i car las con t racc iones a is ladas

(sacud idas) , semi te tán icas y te tán icas y su re lac ión con la f recuenc ia de l es t ímu lo .

Dis t ingu i r la fa t iga muscu la r .

Di ferenc iar las con t racc iones

i sométr i cas e i so tón icas y su re lac ión con la carga muscu la r .

Exp l icar la suma tempora l y espac ia l de

es t ímu los .

Comprender los s is temas energé t icos . S is tema de los fos fágenos , g lucó l i s is anaerob ia , s i s tema aerób ico. Producc ión de ca lor por e l múscu lo (ca lo r de reposo; ca lor in ic ia l : ca lo r de recuperac ión ca lor de re la jac ión . :

Caracter i zar y de f in i r e l concepto de

e lec t romiograma. CONCEPTOS FUNDAMENTALES A CONOCER.

- Fenómenos eléctricos y mecánicos del músculo esquelético.

- Estímulos químicos, y eléctricos, estímulos

umbrales y subumbrales. - Suma temporal y espacial de estímulos. - Contracción isotónica y contracción isométrica - Adición de estímulos y fenómeno de la escalera. - Contracción tetánica y fatiga muscular. - Electromiograma. La proyecc ión de 1 v ídeo reemplaza a l t raba jo práct i co de l m ismo nombre en e l cua l se sacr i f i caba un ba t rac io por cada comis ión de a lumnos La exp l i cac ión de las ac t i v idades desar ro l ladas en e l v ídeo se rea l i za en e l apar tado : Desar ro l lo de l t raba jo prác t i co : Estud io de los fenómenos mecánicos del músculo est r iado Se decidió f i lmar este trabajo práct ico y confeccionar el v ídeo, con el objeto de que , ev itando el sacr i f ic io de animales, los alumnos puedan apreciar lo de igual manera. Se agregó a la f i lmación, el t ratamiento del tema electromiograma, del cual los alumnos deben tener nociones. ACTIVIDAD PREVIA A LA PROYECCIÓN DEL VÍDEO. Explicación previa del contenido del vídeo y formulación explícita de los objetivos a lograr.


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ACTIVIDAD PARA DESPUÉS DE LA PROYECCIÓN DEL VÍDEO . Discus ión de l con ten ido de l m ismo en pequeños g rupos . Producc ión de un resumen escr i to de los conceptos p r inc ipa les a l l í t ra tados. Contes ta r las s igu ien tes preguntas : PREGUNTA N° 1: La contracción tetánica de un músculo esquelético se logra cuando se somete a estímulos: a) De alta frecuencia. b) Alta intensidad. c) Alta intensidad y baja frecuencia. d) Baja frecuencia. PREGUNTA N° 2: La fuerza de la contracción de un músculo es máxima cuando el músculo efectúa una contracción: a) Simple. b) Semitetánica. c) Tetánica. d) Luego de un estímulo umbral de baja. .frecuencia. PREGUNTA N° 3: Se denomina sacudida muscular a: a) Una contracción y relación aislada b) Sólo al período de la contracción, excluida la

relajación c) Sólo al período de la relajación, excluida la

contracción d) A la contracción tetánica. PREGUNTA N° 4: Se denomina tiempo de latencia a: a) Al tiempo que media entre la aplicación del

estímulo y la contracción muscular. b) Al tiempo que dura la contracción muscular c) Al tiempo que abarca desde la aplicación del

estímulo y el término de la relajación muscular. d) A la diferencia de tiempo que hay el potencial de

acción del nervio y el potencial de acción del músculo.

PREGUNTA N° 5: La fuerza de contracción de un músculo es mayor a medida que la potencia del estimulo aumenta.

VERDADERO FALSO a) Falso porque el músculo sigue la ley del todo o

nada. b) Verdadero porque se estimulan mayor cantidad de

fibras musculares. c) Falso porque cualquiera que sea la potencia del

estímulo el músculo no varía su respuesta.

d) Es verdadero porque la célula muscular esquelética no sigue la ley del todo o nada como la célula nerviosa.

DESARROLLO DEL TRABAJO PRACTICO Es tud io de los fenómenos e léc t r icos y mecán icos de l múscu lo es t r iado . Se u t i l i za como an ima l de exper imentac ión e l sapo . Como apara to reg is t rador se usa un qu imógra fo y como generador de es t ímu los e léc t r i cos una bob ina t ipo Ruhmkford . 1- Se destruye la médula espinal del sapo por medio

de un alambre especialmente preparado para ese fin; con el objeto de obtener anestesia. Al realizar la maniobra se observan contracciones convulsivas del tipo tetánico durante algunos minutos.

2- Se secciona la piel circularmente, por encima de

la raíz de los músculos y, disecando con cuidado, se desprende la misma por tracción, hasta la punta de los dedos. Al terminar la operación, la piel queda separada integralmente del animal, como un guante invertido.

3- Se coloca al animal en una camilla de madera, de

cúbito dorsal y se investiga el nervio ciático y los vasos femorales, separando los músculos tríceps y semimembranosos.

4- Se levanta el nervio ciático con un gancho de vidrio

o de metal recubierto de plástico (SE DEBE TENER LA PRECAUCION DE NO USAR INSTRUMENTOS DE METAL EN EXPERIMENTOS DE BIOELECTRICIDAD), se llega hasta su nacimiento en el plexo sacro se lo fija con hilo de lino, dejando un cabo para poder manipularlo y se lo aísla, cortando entre el nudo y la médula espinal.

5- Se ligan fuertemente los vasos femorales para

evitar hemorragias. Se sigue luego el trayecto del ciático, hasta cercanías de la rodilla, donde el nervio se divide en dos ramas: la posterior que va al gastrocnemio y la anterior que se secciona.

6- A continuación, con el gancho de vidrio, se separa la masa muscular del gastrocnemio, separando los tejidos vecinos, buscando su tendón inferior, y se corta el mismo lo más cercano al talón.


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En este momento el músculo solo queda fijado por su inserción superior.

7. En el muslo, se cortan los distintos músculos a

nivel de su inserción en la rodilla y separándolos se deja libre el fémur. Se secciona este hueso a nivel de la diáfisis superior y queda así libre el

preparado neuromuscular que consta de fémur, gastrocnemio y ciático.

MIOGRAFIA: Se usa un miógrafo vertical.

- Fi ja r e l fémur med ian te una p inza t ipo

morsa (a is lada e léct r i camente , según se muest ra en la Fig. Nº 1).

-

Figura Nº 1 - Se per fora e l tendón de Aqu i les con e l

gancho preparado en forma de S, que se pasa de l lado p rox ima l de la l i gadura y se une e l gancho a la pa lanca insc r ip tora . La pa lanca insc r ip tora está un ida a l m ismo sopor te que la misma t ipo morsa que sost iene e l hueso .

- La tens ión de l sopor te y la long i tud de l

múscu lo se g radúan de manera ta l que , en pos ic ión de reposo, la pa lanca queda hor izon ta l y somet ida a una l igera tens ión . De es ta manera, tenemos l is to e l p reparado neuromuscu lar para es tud ia r con t racc iones i so tón icas , des t inadas a levan ta r cargas en con t ra de la acc ión de la acc ión .

Características de la bobina de Rhumkford

Es un apara to e lec t romagnét ico cuya

p rop iedad fundamenta l es que var ía la in tens idad de la cor r ien te , y por lo tan to e l vo l ta je , en func ión de l t iempo.

Consta de un car re te p r imar io que, a l se r a t ravesado por una cor r ien te var iab le con e l t i empo (cor r ien te p r imar ia) , genera un campo magnét ico e induce cor r ien te e léc t r i ca (cor r ien te induc ida o fa rád ica) en un car re te secundar io .

La cor r ien te induc ida es p roporc iona l a l número de esp i ras de cada uno de los


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car re tes ; a la d is tanc ia en t re los mismos ( la inducc ión es mayor cuan to más próx imos es tán los car re tes) y a la ve loc idad de var iac ión de cambio de in tens idad de la cor r ien te pr imar ia .

E l campo magnét ico desaparece a l in ter rumpi r la cor r ien te y e l conduc tor queda con su p rop io campo magnét ico , que es var iab le en e l momento de pasa je de la cor r ien te (c ie r re de l c i rcu i to ) o de in ter rupc ión de la m isma (aper tura de l c i r cu i to ) .

Aparecen en e l s is tema de au to inducc ión , de sen t ido con t ra r io a la de la bater ía , que en e l c ie r re , d isminuye la in tens idad de la cor r ien te induc ida y en la aper tura , lo aumentan .

En las dos s i tuac iones aparecen can t idades igua les de e lec t r i c idad induc ida, pues e l campo magnét ico es e l m ismo, pero es tas cor r ien tes c i rcu lan en t iempos d i fe rentes , s iendo la es t imu lac ión de menor in tens idad en e l c ie r re que en la aper tu ra .

Figura Nº 2 En l a F ig . N º 2 s e mues t ra l a r e l ac i ón en t re l a c o r r ien te i nduc to ra ( l í nea l l ena) y l as c o r r i en tes

i nduc idas ( l í nea d i sc on t i nua ) .

REGISTRO DE LA ACTIVIDAD MECANICA DE LA MASA MUSCULAR

Para ha l la r e l es t ímu lo mín imo para

ob tener una cont racc ión , in ic ie e l exper imento separando e l ca r re te secundar io co lóque lo ver t i ca lmente con respec to a l ca r re te pr imar io .

Opr ima la l l ave in ter rup tora de choques

a is lados y manténga la opr im ida . Observe s i hay con t racc ión muscu lar ; sue l te la l l ave

in te r rup tora y observe s i e l múscu lo se

con t rae. Repí tanse es tas operac iones , l l evando

e l secundar io a una pos ic ión más hor izon ta l y acercándo lo a l p r imar io , has ta obtener la aper tura en c ie r re y aper tu ra de l c i rcu i to . Recuerde la exp l i cac ión de l hecho observado.

Observe en e l t razado la curva de una cont racc ión muscu la r s imp le (para ana l i zar me jor , aumente la ve loc idad de l qu imógra fo ) .


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El reg is t ro g rá f i co p resen ta las caracter ís t i cas esquematizadas en la Fig. Nº 3.

Figura Nº 3

Marque en e l qu imógrafo la par te

que cor responde a la con t racc ión y a la re lac ión muscu la r y ca lcu le e l t iempo que toma cada una de estas fases .

Para rea l iza r es ta operac ión puede

med i rse con un cronómetro cuán tos

cen t ímet ros avanza e l pape l en un

segundo y hacer e l cá lcu lo cor respond ien te .

Ver i f i que qué pasa s i se ap l i can

es t ímu los umbra les repe t idos a d is t in ta f recuenc ia (Fig. Nº 4).

Figura Nº 4


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En cond ic iones f i s io lóg icas e l fenómeno de ad ic ión en la respuesta mecán ica de la masa muscu la r se a t r ibuye a l hecho de que a par t i r de c ier ta f recuenc ia de es t imu lac ión, la p r imera con t racc ión muscu lar aún no se ha acabado, cuando la segunda onda de cont racc ión l lega .

(La f recuenc ia de es t imu lac ión

necesar ia para ob tener es te t ipo de respues ta var ía con e l t ipo de múscu lo ; por e jemplo los múscu los len tos, neces i tan f recuenc ias menores) .

E l múscu lo en ese caso , ya se ha l la en

es tado de con t racc ión parc ia l , y la respues ta produce un acor tamien to mayor de la masa muscu lar con los es t ímu los s igu ientes .

Con f recuenc ias mayores de

es t imu lac ión, la sumac ión de con t racc iones aumenta cada vez más, porque las

cont racc iones suces ivas aparecen más cercanas a la anter io r .

A lgunos inves t igadores inc luyen como

exp l i cac ión de este fenómeno a las p rop iedades e lás t i cas pas ivas de l múscu lo ( l ínea z ; te j ido con jun t i vo ; tendones; hueso) .

En la pr imera con t racc ión i so tón ica

deben es t i ra rse todos los e lementos e lás t i cos en ser ie an tes de produc i r e l acor tamiento de l múscu lo . En caso de es t ímu los repe t idos , es tos e lementos es tar ían en tens ión, permi t iendo que un s igu iente es t ímu lo produzca un mayor acor tamiento de la masa muscu lar .

FENOMENO DE LA ESCALERA

Para ob tener es ta respues ta

c la ramente , e l múscu lo debe haber es tado en reposo duran te la rgo t iempo (Fig. Nº 5).

Figura Nº 5

Con la l l ave de choque s imp le , busque

e l es t ímu lo umbra l en aper tura y aumente la in tens idad , hasta obtener un est ímu lo que provoque una con t racc ión de ampl i tud med ia .

Es t imu le con una f recuenc ia de un choque por segundo.

Es te fenómeno denominado fenómeno

de la esca lera cons is te en que un múscu lo que ha es tado en reposo duran te la rgo t iempo, presen ta una fuerza in ic ia l de


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cont racc ión , menor que la de las cont racc iones suces ivas . La fuerza de las cont racc iones suces ivas va aumentando has ta l legar a una respues ta máx ima a par t i r de la cua l se es tab lece una meseta .

Se in ten ta exp l i ca r e l fenómeno de la esca lera , a t r ibuyéndo lo a un aumento de sa l ida de Ca + desde e l s is tema re t i cu losarcop lasmát ico hac ia e l sarcop lasma en las suces ivas con t racc iones , lo cua l podr ía aumentar la fuerza de la masa con t ráct i l .

O t ros inves t igadores, por e l con t rar io , es t iman que un so lo potenc ia l de acc ión l ibera más ca lc io de l necesar io para exponer e l máx imo de s i t ios act i vos de ac t ina.

De manera que después de un po tenc ia l de acc ión s imp le , las pro te ínas de cada

cé lu la muscu la r ya es tar ían p roduc iendo la máx ima tens ión de que son capaces .

Es tos invest igadores op inan que e l

fenómeno de la esca lera es tar ía re lac ionado en par te , con var iac iones de las prop iedades e lás t icas pas ivas de l múscu lo como en e l caso de la ADICION.

TETANOS

Acerque e l ca r re te secundar io a l

p r imar io has ta ob tener un est ímu lo supraumbra l . Med iante la l l ave de choques env íe es t ímulos de f recuenc ia crec ien te y observe e l e fec to .

Compare la f recuenc ia de es t imu lac ión

con la curva ob ten ida (Fig. Nº 6)

Figura Nº 6

Emplee ahora e l in te r rup tor que

conec ta a l v ib rador de l car re te de inducc ión . La f recuenc ia de los es t ímu los puede graduarse dent ro de c ier tos l ím i tes

por med io de l to rn i l lo de contacto . Es t imu le y observe la con t racc ión te tán ica que se p roduce (Fig. Nº 7).

Figura Nº 7


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En la Fig. Nº 6 obs e rv amos en es tado de s ub te tan i z ac ión y en l a Fig. Nº 7 l a t e tan i z ac ión de l a ma s a mus c u la r .


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Estas respuestas muscu lares se deben a que e l múscu lo est imu lado a f recuenc ia c rec ien te , es capaz de fus ionar las cont racc iones suces ivas , has ta a lcanzar una f recuenc ia en la cua l ya no se d is t ingue una con t racc ión de o t ra .

En es te momento se produce una ad ic ión máx ima denominada TETANOS. Cuanto mayor es la f recuenc ia de es t imu lac ión, tan to mayor es la fuerza p roduc ida , has ta l legar a una máx ima f recuenc ia , por enc ima de la cua l la fuerza no aumenta mas y en e l reg is t ro g rá f ico se p roduce una meseta .

Es ta es la mayor fuerza que puede desar ro l la r e l múscu lo y genera lmente es de 3 a 4 veces mayor , que la con t racc ión p roduc ida por un so lo est ímu lo .

Duran te la te tan izac ión máx ima, una f ib ra muscu la r con una carga l igera se acor ta aprox imadamente un 40 % de su long i tud de reposo.

Con cargas mayores , e l múscu lo te tan izado se acor ta cada vez menos, has ta que se l lega a una carga máx ima, que la fuerza muscu la r no puede vencer , y en ese caso , e l múscu lo queda te tan izado en con t racc ión isométr i ca .

E l per íodo en que puede mantener un es tado de con t racc ión te tán ica , depende de la d ispon ib i l idad de ATP de l múscu lo . En las cont racc iones te tán icas los múscu los consumen e l ATP con ve loc idad y pueden ago ta r lo . Esta s i tuac ión p roduce FATIGA MUSCULAR.

La apar ic ión de la fa t iga muscu lar var ía cons iderab lemente de un múscu lo a o t ro .

EFECTO DE LA FATIGA SOBRE LOS MUSCULOS

Abra y c ier re la mano ráp idamente con fuerza , contando e l número de veces que puede hacer lo en ve in te segundos . Rep i ta eso 10 veces , ano tando e l número de mov imien tos que puede hacer en cada lapso de 20 s .

T race una g rá f i ca de l número de mov imien tos por lapso en las ordenadas (e je ver t i ca l ) y e l número de lapsos en las absc isas (e je hor izon ta l ) .

¿Cuá l es e l e fecto de la fa t iga , según sus resu l tados? Exp l ique la causa .

CONTRACCION MUSCULAR ISOMETRICA E ISOTONICA

Los es tud ios an ter io res rea l i zados en e l sapo, se re f ie ren a con t racc iones i so tón icas , pues e l m iógra fo u t i l i zado no t iene sens ib i l i dad adecuada para es tud iar

con t racc iones i somét r i cas en e l p reparado neuromuscu la r de l sapo.

Por e l lo rea l i zamos e l exper imento s igu iente comparando con t racc iones i sométr i cas e i so tón icas de un mismo grupo muscu la r .

Experimento: S ién tese descansadamente co locando su brazo sobre la mesa, con la pa lma hac ia a r r iba , y co loque en e l la un ob je to demas iado pesado para levan tar lo . Mantenga su codo sobre la mesa y t ra te de levan ta r e l peso . Observe y s ien ta los múscu los de l b razo . Exp l ique qué var iac ión su f r ie ron los múscu los de la pos ic ión de reposo a la pos ic ión de in tentar levan tar e l peso .

¿Se neces i ta energ ía para esta cont racc ión?

S ién tese igua l que en e l exper imento an ter io r y co loque en la pa lma de la mano un ob je to que pueda levantar f lex ionando e l an tebrazo .

¿Se neces i ta energ ía para esta cont racc ión?

Def ina la con t racc ión i so tón ica e i somét r i ca en términos de : cambio más no tor io en los múscu los de l an tebrazo y de la presenc ia o ausenc ia de mov imien to .

Menc ione qué masas muscu lares t iene Ud. en con t racc ión i somét r i ca , en la pos ic ión de sen tado, en momentos en que es tá rea l i zando es te exper imento .

EXCITACIÓN ELECTRICA DEL NERVIO

CIATICO DEL SAPO Haga los es tud ios que rea l i zó

an ter io rmente exc i tando d i rec tamente la masa muscu la r de l gas t rocnemio en e l sapo, exc i tándo lo a t ravés de l nerv io c iá t i co . Exp l ique los resu l tados ob ten idos .

PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

PREGUNTA Nº 1: El potencial de acción se propaga a toda la células excitables con la misma intensidad porque: (Coloque una cruz en la/s opción/es que Ud. considere correcta/s) a) Las células excitables tienen dimensiones pequeñas b) Depende de la apertura de los canales de voltaje de

Na+ y K+ c) Depende de la entrada de Na+ d) A diferencia de la situación de reposo, hay poca

permeabilidad para el K+ PREGUNTA Nº 2: Grafique en un sistema de coordenadas los fenómenos eléctricos de la membrana de una neurona donde:


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- el potencial de reposo es de -90 mV - el umbral es de -70 mV - cada descarga sináptica genera 1 mV

de cambio de voltaje cuando en esa neurona se descargan simultáneamente: 63 PPSE y 42 PPSI. (Coloque los valores de abscisas y ordenadas)

PREGUNTA Nº 3: Mencione los potenciales locales correspondientes a: (complete la línea de puntos) Las terminales de una neurona aferente sensorial: ........................................................................... Las sinapsis entre neurona y neurona: ............................................................................ La sinapsis neuromuscular: ............................................................................ PREGUNTA Nº 4: Cómo se puede aumentar la fuerza desarrollada por una masa muscular? 1. Aumentando:.....................................................

Aumentando:...............................................

PREGUNTA Nº 5: En el siguiente gráfico: Indique si las características descriptas corresponden a músculos rojos o a músculos blancos.

CARACTERISTICAS MUSCULO

S ROJOS MUSCULOS BLANCOS

1- Gran cantidad de capilares sanguíneos

SI NO SI NO

2- Fibras de gran φ SI NO SI NO 3- Escasas mitocondrias SI NO SI NO 4- Contienen mioglobina SI NO SI NO 5- Poseen depósitos de glucógeno

SI NO SI NO

PREGUNTAS PARA CONTESTAR DURANTE LA AUTOINSTRUCCION

1. Qué función cumplen las contracciones isométricas

en el organismo. 2. Qué función cumplen las contracciones isotónicas

en el organismo. 3. Qué es una unidad motora y qué importancia tienen

para el desempeño muscular. 4. Qué fuentes energéticas brindan energía para la

contracción muscular. Bibliografía (de referencia para toda la guía de Trabajos Prácticos : FISIOLOGIA DE MEDIO INTERNO Y SANGRE.

FIIOLOGIA DE LAS CELULAS EXCITABLES). BEST Y TAYLOR. Bases Fisiológicas de la Práctica Médica. Edición 2003 . Editorial Panamericana. WILLIAM F GANONG . Fisiología Médica. 18ª Edición. Editorial Manual Moderno. H.E. CINGOLANI-A. B HOUSSAY. Fisiología Humana de Houssay. Año 2000-. Editorial El Ateneo. GUYTON A Tratado de Fisiología Médica. 11ª Edición. Editorial Interamericana. 2005 J. LÓPEZ CHICHARRO-ALMUDENA FERNÁNDEZ VAQUERO. Fisiología del Ejercicio. Editorial Panamericana. 1995. R.W. BOWERS- E.L. FOX. Fisiología del deporte. 3ª Edición. Editorial Panamericana. TRESGUERRRES JAF - Fisiología Humana 2a - 1999 BERNE R LEVY M - Fisiología 2a edición - 1994 MCKENNA BR - Fisiología Ilustrada - 1993 CORDOBA A - Compendio de Fisiología 1a edición - 1994 KARP G - Biología celular 2A edición - 1987 BRUCE A - Molecular biology of the cell 2a edición - 1989 WINTROBE - Hematología clínica 9a edición - 1994 HARRISON - Principios de Medicina Interna 13a edición - 1994 ABBAS AK - Inmunología celular y molecular 2a edición -1995 ROITT J - Inmunología 7a edición - 1994 YEN S - Endocrinología de la reproducción 3a edición - 1993 SMITH - KAMPINE - Fisiología circulatoria - 3a edición.

BULLOCK – Physiology. 1997

ANNUAL REVIEW OF PHYSIOLOGY

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Revista1 2007

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