SAMPLE INJECTION OF HPLC

INSTRUMENTASI HPLC

Chromatography II: HPLCHewlett-Packard

Series 1100 HPLC

solvent

pump

injector

column

detector

Prinsip kerja HPLC

•Dengan bantuan pompa fasa gerak cair

dialirkan melalui kolom ke detektor.

•Cuplikan dimasukkan kedalam aliran fasa

gerak dengan cara penyuntikan.

•Didalam kolom terjadi pemisahan

komponen-komponen campuran.

•Karena perbedaan kekuatan interaksi

antara solut-solut terhadap fasa diam.

•Setiap komponen yang keluar dari kolom

dideteksi oleh detektor

Sistem injeksi

Memasukkan sampel ke dalam

HPLC dengan menggunakan

syringe

alat penyuntik yang terbuat dari

tembaga tahan karat

PRINSIP KERJA SISTEM

INJEKSI

Sampel-sampel cair dan

larutan disuntikkan secara

langsung ke dalam fase

gerak yang mengalir di

bawah tekanan menuju

kolom menggunakan alat

penyuntik yang terbuat dari

tembaga tahan karat dan

katup Teflon yang dilengkapi

dengan keluk sampel (sample

loop)

Beberapa tehnik pemasukan

cuplikan ke dalam sistem HPLC:

•INJEKSI SYRINGE

Alat yang paling dulu ada dan paling mudah untuk memasukkan cuplikan adalah

syringe. Syringe disuntikkan melalui septum (seal karet) dan untuk ini dirancang

syringe yang tahan tekanan sampai 1500 psi.•INJEKSI ‘STOP FLOW’Injeksi stop flow adalah jenis injeksi syringe kedua tetapi disini aliran pelarut

dihentikan sementara, sambungan pada ujung kolom dibuka dan cuplikan

disuntikkan langsung ke dalam ujung kolom setelah menyambungkan kembali

kolom maka pelarut dialirkan kembali

•KRAN CUPLIKAN

jenis pemasukan cuplikan ini disebut juga loop dan paling banyak digunakan.

Untuk memasukkan cuplikan ke dalam aliran fasa gerak perlu dua langkah: (a)

sejumlah volume cuplikan disuntikkan ke dalam loop dalam posisi ‘load’, cuplikan

masih berada di dalam loop. (b) keran diputar untuk mengubah posisi ‘load’menjadi posisi ‘injeksi’ dan fase gerak membawa cuplikan ke dalam kolom. Loop

dapat diganti-ganti dan tersedia berbagai ukuran volume dari 5 – 500 µL. dengan

sistem pemasukan cuplikan ini memungkinkan memasukkan cuplikan pada

tekanan 7000 psi dengan ketelitian tinggi. Juga loop mikro tersedia dengan

volume 0,5 – 5 µL

Sistem Injeksi pada HPLC

(a) jarum suntik diisi dengan sampel / larutan standar

(b) Kemudian luar jarum suntik tersebut dibersihkan dengan tisu

(c) Jarum suntik ditempatkan ke dalam injector dari kromatografi

sementara dalam posisi ‘load‘

(d)posisi katup diaktifkan ke posisi ‘inject' untuk memasukkan

sampel ke dalam kromatograf

Injektor dan loop injektor

Sistem ini memiliki

mode load dan mode

injeksi

Injektor posisi Load dan Inject

Tombol diatur pada posisi "LOAD"

untuk injeksi sampel, seperti yang

ditunjukkan pada gambar sebelah kiri.

Menggunakan microsyringe, sampel

dapat disuntikkan ke dalam loop

sampel,

Tombol diaktifkan ke posisi "INJECT".

Aliran eluen melalui loop dari pompa

kemudian memberikan sampel ke

kolom. Autosampler dapat melakukan

pekerjaan yang sama secara otomatis,

yang memungkinkan operasi terus-

menerus.

Injeksi HPLC memiliki persyaratan tertentu:

• Volume injeksi untuk semua sampel di

bawah percobaan harus sama

• Volume injeksi HPLC sangat kecil dan

berada di kisaran mikro liter

• Sampel disuntikkan harus bebas dari partikel

• Sampel injeksi seharusnya tidak memiliki

gelembung udara

• Injeksi HPLC selalu dilakukan ketika fase

gerak disimpan di bawah laju aliran konstan

melalui kolom

Autosampler/autoinjector

KESIMPULAN

Berdasarkan uraian di atas maka dapat

disimpulkan bahwa:

• Injeksi HPLC secara singkat adalah teknik

untuk memuat sampel yang diuji ke dalam

sistem HPLC

• Injektor dan Loop Injektor pada sistem HPLC

adalah sistem injeksi yang memiliki mode

load dan mode injeksi.

• Sistem injeksi biasanya otomatis dengan

menggunakan autosampler

•SEKIAN

•DAN

•TERIMA KASIH

Injector Animations

http://www.restek.com/Tech

nical-Resources/Injector-

Animations