Molecular Biology

Sneider A. Torres Soto

School of medicine

Retinal Protective

Effects of Resveratrol via

Modulation of

Nitric Oxide Synthase on

Oxygen-induced

Retinopathy.

INTRODUCTION

The Retinopathy of

prematurity (ROP)

is a disease that

affects immature

vasculature in the

eyes of premature

babies.

INTRODUCTION

• The resveratrol is a

phytoalexin produced by a

variety of plants such as

grapes, peanuts, and berries

in response to

stress, injury, ultraviolet

irradiation,and fungal

infection.

INTRODUCTION

• The resveratrol is a stimulation of NO

production in endothelial cells to exert

vasodilatory effect on blood vessels.

• The NO Sintase are a family of eukaryotic

enzymes that catalyze the production of

nitric oxide (NO) from L-arginine.

GENERAL OBJETIVE

• Determine the protective effect of

resveratrol in premature retinopathy.

METODOS

Modelos Animales (in vivo)

• Ratas expuestas a condiciones

hiperoxicas.

• Grupos:

• Grupo 1 normoxia.

• Grupo 2 hiperoxia sin tratamiento.

• Grupo 3 hiperoxia + resveratrol.

METODOS

Tinción H & E

• Obtención de la muestra.

• Tinción

• Fijación

• Microscopía.

METODOS

Modelo animal (in vitro)

• Extracción de ojos de ratas postnatales.

• GRUPOS:

• Normoxia (N)

• Hiperoxia (H)

• Hiperoxia + resveratrol (HR)

METODOS

MTT ensayo

• Proliferación y crecimiento celular.

• Lectura de absorbancia.

• ELISA (Prueba de inmunoabsorcion ligado

a enzimas)

METODOS

Extraccion de proteína de la retina.

• Separación de la retina del segmento

anterior.

• Congelación.

• Centrifugación.

METODOS

Western blot.

• Separación de proteínas por SDS-PAGE

poliacramida gel electroforesis.

• Transferencia de proteínas a PVDF.

• Adición de anticuerpos de conejos y de

ratas.

• Detección del anticuerpo unido al

anticuerpo.

METODOS

Extracción de RNA y PCR tiempo

completo.

• Separación de RNA del ADN Y de

proteínas.

• Transcripción inversa.

• Obtención del DNA

RESULTADOS

Modelo animal (in vivo)

Grupo N ninguna patologia.

Grupo H neovascularizacion

retiniana, crecimiento

fibrovascular, desprendimiento de retina

Grupo HR pequeñas fisuras en la

membrana.

RESULTADOS

A B C

RESULTADOS

Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en

modelo in vivo Western blot y PCR

• Expresión de RNAm de la iNOS

• Expresión de RNAm de eNOS y nNOS

RESULTADOS

• Viabilidad celular en el modelo in vitro.

• Ensayo de MMT determina la

concentración optima de resveratrol

(5ug/ml).

RESULTADOS

Cambios morfológicos en el modelo (in

vitro).

• Grupo N Normal.

• Grupo H inflamación celular.

• Grupo HR aspecto similar al grupo N.

RESULTADOS

Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en

modelo in vitro Western blot.

• Expresión de RNAm de la iNOS

• Expresión de RNAm de eNOS y nNOS

RESULTADOS

RESULTADOS

Expresión de iNOS, eNOS y nNOS en

modelo in vitro PCR.

• Expresión de RNAm de la iNOS

• Expresión de RNAm de eNOS y nNOS

DISCUSSIONAuthor What he said check

Love S. Resveratrol also possesses

antioxidant effects.

Agree.

Chan MM, at el. Resveratrol inhibits NOS

activity and modifies iNOS

expression.

Not agree.

King RE ,at el. Resveratrol

reduces oxidation and

proliferation of human

retinal pigment

epithelial cells via

extracellular signal-

regulated kinase

Inhibition.

Agree.

Rotondo S, at el. Resveratrol exhibits anti-

inflammatory activity by

inhibition

of inflammatory mediators

Agree.

CONCLUSIONS

• The resveratrol is a important compound

in the premature retinophaty.

• Should continue investigating the effects

of resveratrol in various pathologies.

CONCLUSIONS

• To do a good dosage of oxygen therapy

to prevent this disease.

• Proper use of animal models can still

provide great advances in modern

medicine.