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British Journal of DermatologyVolume 170,Issue 1,pages
7886,January 2014
Sealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 previene la apoptosis de la
clulas edoteliales derivadas del Hemangioma Y. Ji,1,2 S. Chen,1,3
K. Li,1 X. Xiao,1 T. Xu1 and S. Zheng1 1Division of Oncology,
Department of Pediatric Surgery, Childrens Hospital of Fudan
University, 399 Wanyuan Road, Shanghai 201102, China Current
address: 2Department of Pediatric Surgery and 3Pediatric Intensive
Care Unit, West China Hospital of Sichuan University, Chengdu
610041, ChinaDra. Mara Cecilia Isernia
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Hemangioma infantil (IHS): tumor vascular ms comn de la
infancia, que afecta a un 5-10% de todos los nios.
Dramtico crecimiento y el desarrollo de una masa desorganizada
de los vasos sanguneos.
Involucin espontnea lenta comienza en aproximadamente 1 ao de
edad y contina durante 7-10 aos
Un tercio de las clulas apopttica de los hemangiomas en
involucin se han identificado como clulas endoteliales (EC).
IntroduccinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan
apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170,
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Este alto nivel de apoptosis de las CE, a pesar de la
proliferacin celular en curso, puede explicar la disminucin de la
tasa de crecimiento observado en las fase involutiva del ciclo de
vida del tumor.
Para la mayora de los nios con IH, las lesiones son pequeas y no
representan una amenaza o potencial de complicacin, pero en algunos
casos, IHs crecen de manera espectacular y destruyen el tejido y
pueden incluso poner en peligro la vidaIntroduccinSealizacin
autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis de HaemECsBritish
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Las clulas endoteliales derivadas de hemangioma (HaemECs) son
distintas de las EC que recubre los vasos normales, tanto a nivel
de la transcripcin y funcionales.
VEGF regula la proliferacin de CE, la migracin y la
diferenciacin a travs de interacciones con VEGFR-2.
Adems de estimular la proliferacin y migracin de EC, VEGF inhibe
la apoptosis de las CE de forma concomitante.
Participacin de una sealizacin autocrina dependiente de VEGF en
clulas madre hematopoyticas y la supervivencia de clulas malignas,
lo que conduce a la activacin de VEGFR-2.
IntroduccinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan
apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170,
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Se presenta una serie de estudios que se realizaron para
determinar si la sealizacin autocrina del VEGF poda manipular la
supervivencia HaemEC.
El VEGF, tiene un papel clave como un importante factor
angiognico en IHS.
Nuestros resultados demuestran que la activacin persistente de
VEGFR-2 en HaemECs, junto con la funcionalidad de la sealizacin
autocrina del VEGF, desempean papeles crticos en la supervivencia
de HaemECs.
ObjetivoSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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Materiales y MtodosReactivosSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2
regulan apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume
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PreparacinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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PreparacinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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PreparacinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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ResultadosSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170, Issue 1, pages
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ResultadosSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170, Issue 1, pages
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ResultadosSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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ResultadosSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
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El presente estudio encontr que las HaemECs que estn en fase de
proliferacin poseen caractersticas bsicas similares pero una mayor
supervivencia en comparacin con los EC normal
HaemECs puede adquirir progresivamente fenotipos alterados como
resultado de un microambiente anormal.
En IHS, se ha informado de un proceso de mltiples etapas que
implica mutaciones tanto en el compartimento intersticial y
mesenquimales, lo que sugiere una posible interaccin recproca entre
HaemECs y las clulas circundantes.
Alternativamente, se podra especular que HaemECs se originan a
partir de clulas progenitoras, que son conocido para mostrar mayor
proliferacin y capacidades de clonacin.
ConclusionesSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan
apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170,
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La estimulacin de la apoptosis CE puede inhibir el suministro de
sangre del tumor y resultar en la regresin del tumor.
Un inhibidor de VEGFR-2 reduce drsticamente la supervivencia de
HaemEC, y el bloqueo de VEGF con un anticuerpo anti-VEGF tiene
efectos similares.
Las clulas malignas y EC derivadas del cncer, HaemECs pueden ser
capaz de adaptarse al entorno fsico anormal del tumor al someterse
a una forma de reprogramacin que implica un aumento de la
resistencia a la apoptosis y regulacin por incremento de un
polipptido VEGFConclusionesSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2
regulan apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume
170, Issue 1, pages 78-86, 13 JAN 2014 DOI: 10.1111/bjd.12592
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Mecnicamente, el VEGF activa la va PI3K/Akt promotora de la
supervivencia.La activacin de Akt a su vez estimula la expresin de
protenas anti-apoptticas, tales como Bcl-2, y de ese modo inhibe la
ejecucin de la apoptosis.Adems, la Akt activa la NO sintasa
endotelial, lo que lleva a una mayor sntesis de NO, que promueve la
supervivencia de las CE mediante la inhibicin de la actividad de la
proteasa cistena de la caspasa-3.ConclusionesSealizacin autocrina
del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis de HaemECsBritish Journal of
Dermatology Volume 170, Issue 1, pages 78-86, 13 JAN 2014 DOI:
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La apoptosis inducida por Propranolol podra ser parcialmente
anulada por una regulacin de VEGF, en concreto una accin autocrina
que implica VEGFR-2, en HaemECs.la apoptosis inducida por
propranolol HaemEC puede no ser especfica en la CE sino ms bien un
fenmeno ms comn
ConclusionesSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan
apoptosis de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170,
Issue 1, pages 78-86, 13 JAN 2014 DOI: 10.1111/bjd.12592
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ConclusinSealizacin autocrina del VEGF/VEGFR2 regulan apoptosis
de HaemECsBritish Journal of Dermatology Volume 170, Issue 1, pages
78-86, 13 JAN 2014 DOI: 10.1111/bjd.12592
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/******EBM: Endotelio medio basal, FBS: suero bovino fetal, BSA:
albumina de suero bovino, PBS: solucin salina tamponada con
fosfato, SingleQuot (factor de crecimiento epidrmico humano, VEGF,
factor de crecimiento de fibroblastos bsico humano, factor de
crecimiento similar a la insulina, hidrocortisona, heparina, cido
ascrbico y gentamicina / anfotericina B)
*Tincin TUNEL : usando fluorescena-12-dUTPIsotiocianato de
fluorescena(FITC) es un derivado defluorescena En las clulas
viables normales, la fosfatidilserina (PS) se encuentra en la
superficie citoplasmtica de la membrana celular.Sin embargo, en las
etapas intermedias de la apoptosis, la PS se transloca desde el
interior hacia el exterior, la exposicin de PS para el entorno
celular externo, en donde puede ser detectado. Conjugados de
anexinn V/ Propidium iodide altamente fluorescentes proporcionan
mtodos de deteccin rpida y fiable para el estudio de la
externalizacin de la fosfatidilserina.*EBM: Endotelio medio basal,
FBS: suero bovino fetal, BSA: albumina de suero bovino, PBS:
solucin salina tamponada con fosfato, SingleQuot (factor de
crecimiento epidrmico humano, VEGF, factor de crecimiento de
fibroblastos bsico humano, factor de crecimiento similar a la
insulina, hidrocortisona, heparina, cido ascrbico y gentamicina /
anfotericina *Las caspasas son mediadores esenciales de los
procesos deapoptosis, la muerte celular programadaEl Ensayo de la
Caspasa-3 de Innoprot permite una cuantificacin rpida y eficaz de
la actividad de esta enzima. El ensayo colorimtrico se basa en la
deteccin espectrofotomtrica del cromforo p-nitroanilide (pNA)
despus del corte del sustrato marcado acetyl-Asp-glu-Val-Asp
p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA). La concentracin de pNA se mide por
absorbancia a 405 nm. La actividad caspasa-3 se calcula en mol de
pNA liberado por minuto y mililitro del lisado celular.*Tampn RIPA
(buffer) tampn de lisis comnmente usado parala inmunoprecipitaciny
general de extraccin de protena a partir de clulas y tejidos.
TBST(oTTBS) es una mezcla desolucin salina tamponada con TrisyTween
20.Se trata de untampnutilizado para el lavado de la membrana de
nitrocelulosa enel Western Bloty pocillos de la placa de
microtitulacin enELISAensayos.**
Resistance to apoptosis in HaemECs compared with HUVECs. (a)
Representative fields of cultured ECs under serum or serumfree
conditions for 24h. Each culture was simultaneously stained for
nuclear morphology (Hoechst 33343 and TUNEL). (b) Typical quadrant
analysis of annexinV/PI flow cytometry to evaluate EC apoptosis.
ECs were cultured in the presence of 10% FBS or in serumfree
conditions for 24h. The data for 30104 cells were collected in the
list mode. (c) Percentage of apoptotic (fragmented) nuclei in ECs.
Apoptosis was evaluated using the TUNEL assay after 1248h of serum
starvation. The results are shown as the meanSD of duplicated
assays from one of three identical experiments. EC, endothelial
cell; FBS, fetal bovine serum; HaemEC, haemangiomaderived
endothelial cells; HUVEC, human umbilical vein endothelial cells;
PI, propidium iodide; TUNEL, terminal deoxynucleotidyl
transferasemediated dUTPbiotin nickend labelling method.
This slide is made available for non-commercial use only. Please
note that permission may be required for re-use of images in which
the copyright is owned by a third party.*
Autocrine VEGF/VEGFR2 loop maintains Bcl2 expression in HaemECs.
(a) ECs were cultured in serumfree conditions in the presence or
absence of 2gmL1 of VEGF Ab. The expression of Bcl2 protein was
then detected. GAPDH was used as an internal control. (b) PTK787
treatment decreased the Bcl2 expression in HaemECs. Immediately
after exposing HaemECs to serum starvation conditions, PTK787
(10nmolL1) was added to the cells. The cells were harvested after
24h, and Bcl2 expression was analysed by Western blot. Data are
representative of three independent experiments. Ab, antibody; EC,
endothelial cells; GAPDH, glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase;
HaemEC, haemangiomaderived endothelial cells; VEGF, vascular
endothelial cell growth factor; VEGFR, VEGF receptor.
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The survival activity of the autocrine VEGF/VEGFR2 loop is
inhibited by the PI3K inhibitor LY294002. (a) ECs were cultured in
the absence of serum with recombinant VEGF (100ngmL1) or LY294002
(100nmolL1), or the combination of VEGF and LY294002, for 24h.
Apoptotic cell death was determined by TUNEL staining. *P
