Srs2: The “Odd-Job Man” in DNA repairVictoria Marinia and Lumir Krejcia,b,⁎

aDepartment of Biology, Faculty of Medicine, Masaryk University, Brno CZ-625 00, Czech Republic.bNational Centre for Biomolecular Research, Faculty of Science, Masaryk University, Brno CZ-625

00, Czech Republic.

J. Benito López Salguero

Recombinación Homóloga (HR)

• Mantenimiento de la integridad del genoma– Replicación– Reparación de DSBs– Reparación de la horquilla de

replicación

• Helicasas

• Srs2 de Saccharomyces cerevisiae• “Asegura que los trabajos se

realicen cuando y donde se necesiten”

Propiedades Bioquímicas• SRS2 codifica una superfamilia de

Helicasas DNA I – homologos Rep, PcrA y UvrD

• región C-terminal – interacciones proteína-proteína– blanco de modificaciones

postraduccionales

• Tiene actividad ATPasa dependiente de ssDNA – Kcat ≥3000 desenrollamientos de

DNA/min con polaridad 3-5´

• Srs2 se puede translocar en el ssDNA como un monómero – procesividad de casi 1600 nt – tasa de 300 nt/s

Regulación de HR

• No interfiera con otras vías de reparación– intermediarios tóxicos– DNA dañado– bloquéo de la

progresión de la horquilla de replicación

• Varias vías

Vías de Eliminación de Intermediarios Indeseables

• actividad helicasa de Srs2– suprime HR

desmantelando el filamento presinaptico de Rad51

• Mph1 – desarma D-loops

producidos por Rad51

• BLM/Sgs1 junto con Top3– resolución de dHJ

Actividad Antirecombinasa de Srs2

• sgs1 srs2 acumulan intermediarios tóxicos que no pueden resolverse en ausencia de helicasas

• Srs2 desmantela el filamento presináptico formado por Rad 51– mediante actividad

translocasa dependiente de ATP

Mantenimiento de la Horquilla de Replicación

• Un daño a un templete de DNA bloquea la progresión de la horquilla de replicación

• Proteínas checkpoint reducen la frecuencia de HR– evitando desestabilización

de la horquilla de replicación e intermediarios tóxicos

• Srs2 está implicado directamente en el checkpoint de la replicación

Red de Integridad del Genoma

• Varias helicasas participan en los mecanismos de control de la recombinación y otros procesos de reparación

Reparación Post-replicativa (PRR)

• Srs2 actúa como un switch molecular entre la PRR y HR

• Sistema intricado de varias vías independientes– mecanismos libre de errores y propenso a errores

Srs2 Como Mecanismo de Control de Calidad

• DSBs • Horquillas dañadas • Srs2 antagoniza con

Rad52

Papeles Adicionales de Srs2

• Actividad recombinasa – también repara DSB por SDSA

• Durante SDSA – facilita el desplazamiento de la

cadena y/o desplazamiento de Rad51 de un ssDNA (no invasivo) en la estructura D-loop (previniendo un second-end capture)

• La habilidad de Srs2 para remover Rad51 de ssDNA – puede requerirse en otras vías

de reparación (BIR y SSA)

Regulación de Srs2• Comunicación Srs2 con los checkpoints

– Ayudan a elegir el método más apropiado para restaurar la horquilla de replicación estancada y otros tipos de daño

• Modificaciones postraduccionales de Srs2 – Regulan la disponibilidad de substratos específicos de DNA que favorecen la

recombinación homóloga u otras vías de reparación

• Srs2 se expresa en bajos niveles – coordinada con genes de síntesis de DNA en la transición G1-S– inducida por UV en células G2

• Fosforilación– Después de la activación del checkpoint intra-fase S– Requiere las cinasas Dun1, Mec1 y Rad53

• Gracias!!