Test de Osteocalcina

Osteocalcin

For use on IMMULITE® 2000 systems

IMMULITE® 2000 Osteocalcin

2 IMMULITE 2000 Osteocalcin (PINL2KON-2 {15}, 2012-02-09)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers — for the quantitative measurement of osteocalcin in human serum or heparinized plasma, as an aid in monitoring mineral and bone metabolism.

Catalog Number: L2KON2 (200 tests)

Test Code: OCN Color: Dark Gray

Summary and Explanation Osteocalcin is a vitamin K dependent protein with a molecular mass of approximately 5,800 Dalton. The protein has been implicated as a bone GLA protein (BGP) due to the 3 gamma carboxyglutamic acid (GLA) residues in its primary structure involved in calcium and hydroxyapatite binding.1 Osteocalcin is one of the most abundant non-collagenous proteins of the bone, constituting up to 3% of total bone protein. Bone tissue is perpetuated through a dynamic process of bone formation and elimination. Osteocalcin is thought to function in bone tissue formation as it is produced by osteoblasts,2 cells necessary in this process. In addition, osteocalcin is directly influenced by calcium regulating hormones (calcitonin,3 parathyroid hormone, vitamin D4-6) required in normal bone mineralization. Osteocalcin has been extensively discussed as a prognostic indicator of bone disease progression. Elevated osteocalcin levels may occur in different diseases including osteomalacia,7 Paget's disease of the bone,8 hyperthyroidism,9 primary hyperparathyroidism and renal osteodystrophy.10 In addition, osteocalcin levels can also be elevated in postmenopausal osteoporosis due to increased or decreased bone turnover. Depressed levels of osteocalcin have been reported in hypoparathyroidism11,12 and during long-term corticosteroid therapy.13

The IMMULITE 2000 Osteocalcin assay measures only the intact osteocalcin

molecule and does not detect fragmented forms.16

Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Osteocalcin is a solid-phase, two-site chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-osteocalcin antibody in buffer.

The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, osteocalcin in the sample forms an antibody sandwich complex with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody on the bead and enzyme conjugated polyclonal rabbit anti-osteocalcin antibody in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme.

Incubation Cycles: 1 × 30 minutes Time to First Result: 35 minutes

Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution.

Collect blood by venipuncture14 (avoiding hemolysis) into iced plain or heparinized tubes, noting the time of collection. The tubes should be immersed in an ice bath following collection. Separate the serum or plasma from the cells by centrifugation in a refrigerated centrifuge, then aliquot and freeze immediately in plastic tubes.

Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants.

IMMULITE 2000 Osteocalcin (PINL2KON-2 {15}, 2012-02-09) 3

IMMULITE 2000 Osteocalcin has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested.

Volume Required: 10 µL serum or heparinized plasma.

Storage: 2 hours at 2–8°C or 30 days at –20°C.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use.

Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in accordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing.

Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight (see insert).

Water: Use distilled or deionized water.

Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay.

Osteocalcin Bead Pack (L2ON12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-osteocalcin antibody. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KON2: 1 pack

Osteocalcin Reagent Wedge (L2ONA2) With barcode. 11.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-osteocalcin. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KON2: 1 wedge

Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the

barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid.

Osteocalcin Adjustors (LONL, LONH) Two vials (Low and High) of lyophilized osteocalcin in a protein/buffer matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 2.0 mL distilled or deionized water, placing Adjustors on ice immediately after making this addition. Use volumetric pipets and mix by gentle, intermittent swirling until the lyophilized material is fully dissolved. It is important to keep the Adjustors cold throughout this process. Stable at 2–8°C for 1 day after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. L2KON2: 1 set

Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader.

Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable)

LONCM: Bi-level control containing osteocalcin (protein-based)

Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual.

See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures.

Recommended Adjustment Interval: 4 weeks

Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of osteocalcin.


Expected Values A reference range study for IMMULITE 2000 Osteocalcin was performed on 186 apparently healthy adults yielding a central 95% reference range of:

< 2.0–22 ng/mL.

Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.

Limitations Samples may not maintain strict linearity under dilution in the presence of degradation products of osteocalcin.

Heterophilic antibodies in human serum/plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.)

Reportable Range: 2 to 100 ng/mL

The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures.

Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A17): 0.19 ng/mL

Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A17): 0.45 ng/mL

Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP17-A17 and CLSI EP5-A218): 0.81 ng/mL

High-dose Hook Effect: None up to 60,300 ng/mL

Precision: Samples were processed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See “Precision” table.)

Linearity: Samples may not maintain strict linearity under dilution in the presence of degradation products of osteocalcin. (See “Linearity” table for representative data.)

Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three osteocalcin solutions (101, 201, and 402 ng/mL) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.)

Specificity: The antibody is highly specific for intact osteocalcin.16 (See "Specificity" table.)

Bilirubin: Conjugated and unconjugated bilirubin when added in concentrations of 100 mg/L and higher may interfere with the assay causing depression of values. (See “Bilirubin” table for representative data.)

Hemolysis: May interfere with the assay, causing a depression of values at levels above 150 mg/dL. (See “Hemolysis” table.)

Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay.

Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from volunteers into plain, lithium-heparin, sodium-heparin, PST® and SST® plastic vacutainer tubes. All tubes were from Becton Dickinson. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of osteocalcin, to obtain values throughout the reportable range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Osteocalcin procedure.


By linear regression:

(Li Heparin) = 1.07 (Serum) – 1.60 ng/mL r = 0.979, n = 47 Means: 13.5 ng/mL (Li Heparin) 14.2 ng/mL (Serum)

(Na Heparin) = 1.01 (Serum) – 0.98 ng/mL r = 0.988, n = 44 Means: 12.9 ng/mL (Na Heparin) 13.7 ng/mL (Serum)

(PST) = 1.13 (Serum) – 2.14 ng/mL r = 0.984, n = 40 Means: 14.5 ng/mL (PST) 14.7 ng/mL (Serum)

(SST) = 0.99 (Serum) – 0.59 ng/mL r = 0.990, n = 47 Means: 13.5 ng/mL (SST) 14.2 ng/mL (Serum)

Method Comparison: The assay was compared to a Nordic Bioscience Diagnostics N-MID® assay on 71 patient samples. (Concentration range: approximately 2.4 to 86 ng/mL. See graph.) By linear regression:

(IML 2000) = 0.54 (Nordic N-MID®) – 0.72 ng/mL r = 0.907

Means: 15.7 ng/mL (IMMULITE 2000) 30.3 ng/mL (Nordic N-MID®)

References

1) Poser JW, Esch FS, Ling NC, Price PA. Isolation and sequence of the vitamin K-dependent protein from human bone. J Biol Chem 1980;255:8685-91. 2) Price PA, Williamson MK, Lothringer JW. Origin of the vitamin K-dependent bone protein found in the plasma and its clearance by kidney and bone. J Biol Chem 1981;256:12760-6. 3) Civitelli R, Gonnelli S, Zacchei F, Bigazzi S, Vattimo A, Avioli LV, Gennari C. Bone turnover in postmenopausal osteoporosis: effect of calcitonin treatment. J Clin Invest 1988;82: 1268-74. 4) Caniggia A, Nuti R, Galli M, Loré F, Turchetti V, Righi GA. Effect of long-term treatment with 1,25-dihydroxyvitamin D3 on osteocalcin in postmenopausal osteoporosis. Calcified Tissue Int 1986;38:328-32. 5) Zerwekh JE, Sakhaee K, Pak CYC. Short-term 1, 25-dihydroxyvitamin D3 administration raises serum osteocalcin in patients with postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab 1985;60:615-17. 6) Kerner SA, Scott RA, Pike JW. Sequence elements in the human osteocalcin gene confer basal activation and inducible response to hormonal vitamin D3. Proc Nat Acad Sci USA 1989;86:4455-59.

7) Demiaux B, Arlot ME, Chapuy MC, Meunier PJ, Delmas PD. Serum osteocalcin is increased in patients with osteomalacia: correlations with biochemical and histomorphometric findings. J Clin Endocrinol Metab 1992;74:1146-51. 8) Merle B, Delmas PD. Normal carboxylation of circulating osteocalcin (bone Gla-protein) in Paget's disease of bone. Bone Miner 1990;11:237-45. 9) Lukert BP, Higgins JC, Stoskopf MM. Serum osteocalcin is increased in patients with hyperthyroidism and decreased in patients receiving glucocorticoids. J Clin Endocrinol Metab 1986;62:1056-8. 10) Charhon SA, Delmas PD, Malaval L, Chavassieux PM, Arlot M, Chapuy MC, Meunier PJ. Serum bone Gla-protein in renal osteodystrophy: comparison with bone histomorphometry. J Clin Endocrinol Metab 1986;63:892-7. 11) Duda RJ, O'Brien JF, Katzmann JA, Peterson JM, Mann KG, Riggs BL. Concurrent assays of circulating bone Gla-protein and bone alkaline phosphatase: effects of sex, age, and metabolic bone disease. J Clin Endocrinol Metab 1988;66:951-57. 12) Kruse K, Kracht U, Wohlfart K, Kruse U. Biochemical markers of bone turnover, intact serum parathyroid hormone and renal calcium excretion in patients with pseudohypoparathyroidism and hypoparathyroidism before and during vitamin D treatment. Eur J Pediat 1989;148:535-539. 13) Ekenstam EA, Ljunghall S, Hällgren R. Serum osteocalcin in rheumatoid arthritis and other inflammatory arthritides: relation between inflammatory activity and the effect of glucocorticoids and remission inducing drugs. Ann Rheum Dis 1986;45:484-90. 14) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 15) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1994. 16) Fassbender WJ, Steinhauer B, Stracke H, Schumm-Draeger P-M, Usadel K-H. Validation of a new automated immunoassay for measurement of intact osteocalcin. Clin Lab 2002;48:31–8. 17) NCCLS. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS document EP17-A [ISBN 1-56238-551-8] NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA, 2004. 18) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline – Second Edition. CLSI document EP5-A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA, 2004.

Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor.


www.siemens.com/diagnostics

The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 4.0 0.19 4.8% 0.28 7.0%

2 6.2 0.25 4.0% 0.52 8.4%

3 10.1 0.32 3.2% 0.78 7.7%

4 31.3 0.96 3.1% 2.52 8.1%

5 43.5 1.07 2.5% 4.09 9.4%

6 47.3 1.52 3.2% 4.93 10.4%

Dansk. 1I samme kørsel, 2Total, 3Middelværdi, 4Standardafvigelse, 5Varianskoefficient. Eesti. 1Mõõtmisseeria sisene, 2Seeriate vaheline, 3Keskmised väärtused, 4Standardhälve, 5Variatsioonikoefitsent. Latviski. 1Sērijas robežās, 2Kopā, 3Vidējā vērtība, 4SD, 5Variāciju koeficients. Lietuviškai. 1Vieno tyrimo metu, 2Bendrai, 3Vidurkiai, 4SD, 5CV. Norsk. 1Innen serien, 2Total, 3Middelverdi, 4SD, 5CV. Svenska. 1Inom serie, 2Totalt, 3Medel, 4SD, 5CV.

Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 17.4 — —

4 in 8 9.36 8.70 108%

2 in 8 4.47 4.35 103%

1 in 8 2.25 2.17 104%

2 8 in 8 17.5 — —

4 in 8 9.29 8.75 106%

2 in 8 4.75 4.37 109%

1 in 8 2.49 2.19 114%

3 8 in 8 23.9 — —

4 in 8 13.2 12.0 110%

2 in 8 6.89 5.98 115%

1 in 8 3.21 2.99 107%

4 8 in 8 34.3 — —

4 in 8 20.7 17.1 121%

2 in 8 11.1 8.57 130%

1 in 8 5.47 4.29 128%

5 8 in 8 37.3 — —

4 in 8 21.0 18.7 112%

2 in 8 11.1 9.33 119%

1 in 8 5.48 4.66 118%

6 8 in 8 42.9 — —

4 in 8 26.0 21.5 121%

2 in 8 12.6 10.7 118%

1 in 8 6.57 5.36 123%

Dansk. 1Fortynding, 2Observeret, 3Forventet, 4%Obs./ Forv., 5Ufortyndet. Eesti. 1Lahjendus, 2Täheldatud (T), 3Oodatud (O), 4% T/O, 58 8-st. Latviski. 1Atšķaidījums, 2Novērots (N), 3Gaidīts (G), 4% N/G, 58 : 8. Lietuviškai. 1Skiedimas, 2Nustatyta (N), 3Tikėtasi (T), 4% N/T, 58 iš 8. Norsk. 1Fortynning, 2Observert (O), 3Forventet (E), 4% O/E, 5Ufortynnet. Svenska. 1Spädning, 2Observerat (O), 3Förväntat (E), 4% O/E, 5Ospätt.


Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 1.71

A 6.56 6.65 99%

B 10.9 11.7 93%

C 20.0 21.7 92%

2 — 6.56

A 10.3 11.3 91%

B 15.2 16.3 93%

C 24.8 26.4 94%

3 — 9.16

A 11.8 13.7 86%

B 15.6 18.8 83%

C 25.2 28.8 88%

4 — 14.4

A 17.7 18.7 95%

B 22.8 23.7 96%

C 31.9 33.8 94%

5 18.3

A 21.1 22.4 94%

B 26.4 27.5 96%

C 35.0 37.5 93%

6 35.6

A 38.6 38.8 99%

B 42.7 43.8 97%

C 54.0 53.9 100%

Dansk. 1Opløsning, 2Observeret, 3Forventet, 4%Obs./ Forv. Eesti. 1Lahus, 2Täheldatud (T), 3Oodatud (O), 4% T/O. Latviski. 1Šķīdums, 2Novērots (N), 3Gaidīts (G), 4% N/G. Lietuviškai. 1Tirpalas, 2Nustatyta (N), 3 Tikėtasi (T), 4% N/T. Norsk. 1Løsning, 2Observert (O), 3Forventet (E), 4% O/E. Svenska. 1Lösning, 2Observerat (O), 3Förväntat (E), 4% O/E.

Hemolysis (ng/mL)

Hemoglobin1

Unspiked2 150 mg/dL 300 mg/dL 600 mg/dL

1 3.63 3.19 2.92 3.08

2 3.50 3.11 2.79 2.80

3 7.66 6.71 6.31 6.61

4 24.5 20.2 20.5 20.0

5 33.5 28.7 28.4 27.1

6 35.8 27.5 26.7 25.8

Dansk. 1Hæmoglobin, 2Uden tilsætning. Eesti. 1Hemoglobiin, 2Rikastamata. Latviski. 1Hemoglobīns, 2nav pievienots. Lietuviškai.

1Hemoglobinas, 2nesumaišytas. Norsk. 1Hemoglobin, 2Uten tilsetning. Svenska. 1Hemoglobin, 2utan tillsats.

Bilirubin (ng/mL)

Conjugated1 Unconjugated2

Unspiked3 100 mg/L 200 mg/L 100 mg/L 200 mg/L

1 3.63 3.45 3.47 3.46 3.39

2 3.50 3.22 3.25 3.06 3.20

3 7.66 7.08 6.92 7.38 7.12

4 24.5 21.0 22.2 21.8 22.8

5 33.5 29.5 29.1 31.1 30.7

6 35.8 27.7 27.3 30.4 29.1

Dansk. 1Konjugeret, 2Ukonjugeret, 3Uden tilsætning. Eesti. 1Konjugeeritud, 2Konjugeerimata, 3Rikastamata. Latviski. 1konjugētais, 2nekonjugētais, 3nav pievienots. Lietuviškai. 1Konjuguotas, 2nekonjuguotas, 3nesumaišytas. Norsk. 1Konjugert, 2Ukonjugert, 3Ufortynnet. Svenska. 1Konjugerat, 2Okonjugerat, 3Utan tillsats.

Specificity

Compound1

Amount Added2

% Cross-reactivity3

Osteocalcin fragment 1-43

1,000 ng/mL ND

Fosamax 50 ng/mL ND

IGF-1 400 ng/mL ND

Salicylic acid 500 µg/mL ND

IGFBP-3 6 µg/mL ND

Biotin 1,000 pM ND

Bone Alkaline Phosphatase

140 U/L ND

Parathyroid Hormone 4,000 pg/mL ND

Pyrilinks D 15,000 ng/mL ND

Rheumatoid Factor 2,330 IU/mL ND

ND: not detectable.4

Dansk. 1Stof, 2Tilsat mængde, 3% Krydsreaktivitet, 4UD: Under detektionsgrænsen. Eesti. 1Substants, 2Lisatud kogus, 3Ristmõju %-s, 4MM: Mittemääratav. Latviski. 1Savienojums, 2Pievienotais daudzums, 3% krusteniskā reaktivitāte, 4NN: nav nosakāms. Lietuviškai. 1Mišinys, 2Pridėtas kiekis, 3% Kryžminis reaktyvumas, 4N: neišmatuojama. Norsk. 1Substans, 2Tilsatt mengde, 3% Kryssreaktivitet, 4ND: Not Detectable / ikke påvisbart. Svenska. 1Substans, 2Tillsatt mängd, 3% Korsreaktivitet, 4ND: Not Detectable/ej detekterbart.


Method Comparison

0

20

40

60

80

100

0 20 40 60 80 100

Nordic Bioscience Diagnostics N-MID®, ng/mL

IMM

UL

ITE

200

0 O

steo

calc

in

(IML 2000) = 0.54 (Nordic N-MID®) – 0.72 ng/mL r = 0.907

English. Osteocalcin. Dansk. Osteocalcin. Eesti. Osteokaltsiin. Latviski. Osteokalcīns. Lietuviškai. Osteokalcinas. Norsk. Osteokalcin. Svenska. Osteokalcin.

Dansk

IMMULITE 2000 Osteocalcin Anvendelsesområde: Til brug ved in vitro diagnostik på IMMULITE 2000-systemernes analyseinstrumenter til kvantitativ måling af osteocalcin i humant serum eller heparinplasma som hjælp ved overvågning af mineral- og knoglemetabolisme.

Katalognummer: L2KON2 (200 test)

Testkode: OCN Farve: Mørkegrå

Baggrund og forklaring Osteocalcin er et K-vitaminafhængigt protein med en molekylvægt på cirka 5800 dalton. Proteinet er blevet beskrevet som et knogle-GLA-protein (bone GLA protein; BGP) på grund af resterne af 3-gamma carboxyglutaminsyre (GLA) i proteinets primære struktur, som binder kalcium og hydroxypatit.1 Osteocalcin er et af de mest almindelige ikke-kollagene proteiner i knoglerne, og udgør op til 3% af proteinerne i knoglerne. Knoglevævet fornyes gennem en dynamisk proces med nedbrydning og dannelse af knoglen. Det menes, at osteocalcin har en funktion i forbindelse med knoglevævsdannelse, eftersom det produceres af osteoblaster,2 som er celler, der er nødvendige for denne

proces. Derudover påvirkes osteocalcin direkte af kalcium-regulerende hormoner (calcitonin,3 parathyroideahormon, D-vitamin4-6), som er nødvendige for den normale knoglemineralisering. Brugen af osteocalcin som en prognostisk indikator for progression af knoglesygdomme er blevet diskuteret indgående. Der kan optræde et forhøjet osteocalcinniveau i forbindelse med forskellige sygdomme, herunder osteomalaci,7 Pagets knoglesygdom,8 hyperthyreoidisme,9 primær hyperparathyreoidisme og nyre-osteodystrofi.10 Desuden kan der findes forhøjede osteocalcinniveauer ved postmenopausal osteoropose på grund af forøget eller reduceret knogleomsætning. Der er blevet rapporteret om sænkede osteocalcinniveauer i forbindelse med hypoparathyreoidisme11,12 og ved langtidsbehandling med kortikosteroider.13

IMMULITE 2000 Osteocalcin måler kun det intakte osteocalcinmolekyle og detekterer ikke de fragmenterede former.16

Analyseprincip IMMULITE 2000 Osteocalcin er en fastfasebaseret tosidig immunometrisk metode med kemiluminescens. Den faste fase (en kugle) er coatet med monoklonale museantistoffer rettet mod osteocalcin. Den flydende fase består af alkalisk fosfatase (udvundet fra kalvetarm) konjugeret til polyklonalt kaninantistof rettet mod osteocalcin, i buffer.

Patientprøven og reagenset inkuberes sammen med den coatede kugle i 30 minutter. I løbet af dette tidsrum danner osteocalcin i prøven et antistofsandwich-kompleks med monoklonale museantistoffer rettet mod osteocalcin på kuglen og enzymkonjugerede polyklonale kaninantistoffer rettet mod osteocalcin i reagenset. Ubundet patientprøve og enzymkonjugat fjernes derefter ved centrifugalvask. Til sidst tilføjes kemiluminescens-substrat til prøvekoppen med kuglen, og signalet dannes i forhold til det bundne enzym.

Inkubationstid (cykler): 1 x 30 minutter Tid til første resultat: 35 minutter

Prøveopsamling Det anbefales at bruge ultracentrifugering for at oprense lipæmiske prøver.


Hæmolyserede prøver kan tyde på, at disse ikke er blevet behandlet korrekt før ankomst til laboratoriet, og derfor bør analyseresultaterne tolkes med forsigtighed.

Blodprøver opsamles ved venepunktur.14

(undgå hæmolyse) i frosne prøverør tilsat heparin eller uden tilsætning, og prøveopsamlingstidspunktet registreres. Prøverørene bør sættes på isbad efter opsamling. Serum eller plasma separeres fra cellerne ved centrifugering i en kølecentrifuge og udportioneres og nedfryses umiddelbart derefter i plastikrør.

Blodprøverør fra forskellige producenter kan give forskellige resultater, afhængigt af materiale og tilsætning til røret, herunder gel- eller fysisk barriere, koagulationsfremmende middel og/eller antikoagulantia. IMMULITE 2000 Osteocalcin er ikke blevet testet med alle tilgængelige variationer af prøverør. I afsnittet ”Alternativt Prøvemateriale” findes oplysninger om de prøverør, der er blevet testet.

Prøvevolumen: 10 µl serum eller heparinplasma.

Opbevaring: 2 timer ved 2–8°C eller 30 dage ved –20°C.

Advarsler og forholdsregler Til brug ved in vitro diagnostik.

Reagenser: Opbevares ved 2–8°C. Bortskaffes i henhold til gældende lovgivning.

Følg generelle forholdsregler, og sørg for, at alle komponenter behandles som potentielle smittekilder. Anvendt kildemateriale fra humant blod blev analyseret og viste sig at være ikke-reaktivt for syfilis, for antistoffer mod HIV 1 og 2, for hepatitis B overfladeantigen og for antistoffer mod hepatitis C.

Natriumazid < 0,1 g/dl er tilsat som konserveringsmiddel. Ved kassation af reagens efterskylles med store mængder vand for at undgå ophobning af potentielt eksplosive metalazider i bly- og kobberafløbsrør.

Substrat til Kemiluminescens: Undgå kontaminering og eksponering for direkte sollys (se indlægsseddel).

Vand: Brug destilleret eller ionbyttet vand.

Medfølgende materiale Komponenterne er dele af et sammenhængende sæt. De medfølgende stregkodeetiketter skal bruges ved analysering.

Kuglebeholder, Osteocalcin (L2ON12) Med stregkodemærkning til identifikation. 200 kugler, coatede med monoklonale museantistoffer rettet mod osteocalcin. Stabil ved 2–8°C indtil udløbsdato. L2KON2: 1 beholder

Reagensbeholder, Osteocalcin (L2ONA2) Med stregkodemærkning til identifikation. 11,5 ml alkalisk fosfatase (udvundet fra kalvetarm) konjugeret til polyklonale kaninantistoffer rettet mod osteocalcin. Stabil ved 2–8°C indtil udløbsdato. L2KON2: 1 beholder

Før brug trækkes den øverste del af etiketten af ved perforeringen uden at beskadige stregkoden. Fjern beskyttelsesfolien fra toppen af reagensbeholderen. Tryk skydelåget ned i skinnen på reagensbeholderen.

Justeringsopløsninger, Osteocalcin (LONL, LONH) To flasker (lav og høj) med frysetørret osteocalcin i en protein/buffer-matrix, tilsat konserveringsmiddel. Indholdet i hver flaske skal genopløses med 2,0 ml destilleret eller ionbyttet vand, og efter tilsætningen af vandet skal justeringsopløsningerne straks lægges på is. Anvend pipetter og bIand ved forsigtig vending i intervaller, indtil det frysetørrede materiale er fuldstændigt opløst. Det er vigtigt, at justeringsopløsningerne holdes afkølede under hele processen. Flaskernes indhold er stabilt ved 2–8°C i 1 dag efter genopløsning eller i 6 måneder (udportioneret) ved –20°C. L2KON2: 1 sæt

Før justeringsopløsningen køres, sættes én af de medfølgende stregkodeetiketter på et prøverør, således at stregkoden kan læses af stregkodelæseren i instrumentet.

Materiale som bestilles separat L2SUBM: Substrat til kemiluminescens L2PWSM: Vaskeopløsning L2KPM: Rengøringssæt LRXT: Prøvekopper (engangs)


LONCM: Osteocalcin-kontrolmodul i to niveauer (proteinbaseret)

Derudover kræves Destilleret eller ionbyttet vand, prøverør, kontroller

Fremgangsmåde Bemærk: For at udstyret skal fungere optimalt, er det vigtigt at gennemføre al rutinemæssig vedligeholdelse som beskrevet i brugermanualen til IMMULITE 2000-systemerne.

Se brugermanualen til IMMULITE 2000-systemerne for information om: forberedelse, opsætning, fortynding, justering, analyse og kvalitetskontrol.

Anbefalet justeringsinterval: 4 uger

Prøver til kvalitetskontrol: Brug kommercielt tilgængelige kontroller eller egne kontroller med mindst to osteocalcinniveauer (høj og lav).

Forventede værdier Der blev udført et studie for at fastlægge referenceområdet for IMMULITE 2000 Osteocalcin, omfattende 186 tilsyneladende raske voksne, der viste et centralt 95%-referenceområde på:

< 2,0–22 ng/ml.

Ovenstående værdier skal kun betragtes som vejledende. Hvert laboratorium bør fastlægge sine egne referenceområder.

Begrænsninger Prøverne opretholder muligvis ikke streng linearitet i fortyndingsrække ved tilstedeværelse af nedbrydningsprodukter af osteocalcin.

Heterofile antistoffer i humant serum kan reagere med de immunglobuliner, som indgår i metodens komponenter, og derigennem forårsage interferens med in vitro immunoanalyser. [Se Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Prøver fra patienter, som regelmæssigt eksponeres for dyr eller serumprodukter fra dyr, kan udvise denne type af interferens, der muligvis kan medføre et afvigende resultat. Reagenserne er formuleret på en sådan måde, at interferensrisikoen er minimeret. Der er dog mulighed for interaktioner

mellem sjældne serumtyper og metodens komponenter. Til diagnostiske formål bør analyseresultater, der er opnået med denne metode, altid bruges sammen med andre kliniske undersøgelser, patientens anamnese og andre fund.

Præstationsdata Se afsnittet ”Tabeller og figurer” for data, der er repræsentative for metodens præstationsevne. Resultaterne angives i ng/ml. (Medmindre andet oplyses, stammer alle resultater fra serumprøver udtaget i prøverør uden gel-barriere eller koagulationsfremmende tilsætningsstoffer).

Rapporteringsområde: 2–100 ng/ml

Metoden kan spores til en intern standard, der er fremstillet ved brug af gennemprøvede materialer og måleprocedurer.

Analytisk følsomhed: Limit of Blank (højeste forventede værdi for en prøve uden analytter; bestemt i overensstemmelse med CLSI EP17-A17): 0,19 ng/ml

Detektionsgrænse (laveste målbare concentration; bestemt i overensstemmelse med CLSI EP17-A17): 0,45 ng/ml

Funktionel følsomhed: (koncentration med 20% varianskoefficient bestemt i overensstemmelse med CLSI EP17-A17 og CLSI EP5-A218): 0,81 ng/ml

Hook-Effekt Ved Høj Dosis: Ingen op til 60 300 ng/ml

Præcision: Prøver blev analyseret i dobbeltbestemmelse i løbet af 20 dage, to kørsler pr. dag. I alt blev der udført 40 kørsler og 80 bestemmelser. (Se tabellen “Precision”.)

Linearitet: Prøverne opretholder muligvis ikke streng linearitet i fortyndingsrække ved tilstedeværelse af nedbrydningsprodukter af osteocalcin. (Se tabellen “Linearity” for repræsentative data.)

Genfinding: Prøver tilsat 3 forskellige osteocalcin-opløsninger (101, 201, og 402 ng/ml) i forholdet 1:19 blev analyseret. (Se tabellen ”Recovery” for repræsentative data.)


Specificitet: Antistoffet har en høj specificitet for intakt osteocalcin.16 (Se tabellen “Specificity”.)

Bilirubin: Konjugeret og ukonjugeret biliribun kan interferere med metoden og føre til en reduktion i værdierne ved tilsætning i koncentrationer på 100 mg/l og derover. (Se tabellen “Bilirubin” for repræsentative data.)

Hæmolyse: Kan interfere med metoden, hvilket medfører reducerede værdier ved niveauer over 150 mg/dl. (Se tabellen “Hemolysis”.)

Lipæmi: Tilstedeværelse af triglycerider i koncentrationer op til 3000 mg/dl har ingen effekt på resultater inden for metodens præcision.

Alternativt prøvemateriale: For at vurdere effekten af forskellige prøvematerialer blev der opsamlet blodprøver fra forsøgspersoner i henholdsvis plastikprøverør uden tilsætning, plastikprøverør tilsat litium-heparin, natrium-heparin, PST® og SST® (Vacutainer). Alle rør var fremstillet af Becton Dickinson. Lige store mængder af disse prøver blev tilsat forskellige koncentrationer af osteocalcin for at opnå værdier inden for hele metodens rapporteringsområde og derefter analyseret ved brug af IMMULITE 2000 Osteocalcin. Ved lineær regression:

(Li Heparin) = 1,07 (Serum) – 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Middelværdier: 13,5 ng/ml (Li Heparin) 14,2 ng/ml (Serum)

(Na Heparin) = 1,01 (Serum) – 0,98 ng/ml r = 0,988, n = 44 Middelværdier: 12,9 ng/ml (Na Heparin) 13,7 ng/ml (Serum)

(PST) = 1,13 (Serum) – 2,14 ng/ml r = 0,984, n = 40 Middelværdier: 14,5 ng/ml (PST) 14,7 ng/ml (Serum)

(SST) = 0,99 (Serum) – 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Middelværdier: 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (Serum)

Metodesammenligning: Metoden blev sammenlignet med en Nordic Bioscience Diagnostics N-MID®-metode ved analysering af 71 patientprøver.

(Koncentrationsområde: cirka 2,4 til 86 ng/ml. Se figur). Ved lineær regression:

(IML 2000) = 0,54 (Nordic N-MID®) – 0,72 ng/ml r = 0,907

Middelværdier: 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID®)

Teknisk support Kontakt den nationale distributør for teknisk support.


Kvalitetssystemet for Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. er registreret ifølge ISO 13485:2003.

Eesti

IMMULITE 2000 Osteokaltsiin Kasutamisotstarve: in vitro diagnostikaks IMMULITE 2000 süsteemide analüsaatoritel osteokaltsiini kvantitatiivseks mõõtmiseks inimseerumis või hepariniseeritud plasmas, abivahendina mineraalide ja luude metabolismi jälgimisel.

Katalooginumber: L2KON2 (200 testi)

Testi kood: OCN Värv: tumehall

Kokkuvõte ja selgitus Osteokaltsiin on K-vitamiinist sõltuv valk molekulmassiga 5800 daltonit. Nimetatud valku on peetud luude GLA valguks (BGP) 3 selle põhistruktuuris leiduva gamma-karboksüglutaamse happejäägi (GLA) tõttu, mis osalevad kaltsiumi ja hüdroksüapatiidi sidumisel.1 Osteokaltsiin on üks külluslikumaid mitte-kollageenseid luuvalke, mis hõlmab kuni 3% kõigist luuvalkudest. Luukudet jätkatakse luude dünaamilise moodustumis- ja ahendamisprotsessiga. Osteokaltsiini peetakse osaks luukoe moodustamisest kuna seda toodavad osteoblastid,2 selleks protsessiks vajalikud rakud. Lisaks mõjutavad osteokaltsiini vahetult kaltsiumit reguleerivad hormoonid (kaltsitoniin,3 kõrvalkilpnäärme hormoon, D-vitamiin4-6), mida on vaja normaalseks luude mineraliseerimiseks. Osteokaltsiini on


laialdaselt kaalutud luuhaiguste arengu prognostilise indikaatorina. Kõrgendatud osteokaltsiini tasemeid võib esineda erinevate haiguste, sh osteomalaatsia,7 luude Paget' haiguse,8 hüpertüroidismi,9 primaarse hüperparatüroidismi ja renaalse osteodüstroofia10 puhul. Lisaks võivad osteokaltsiini tasemed olla kasvanud või kahanenud luude ainevahetuse tõttu kõrgendatud menopausijärgse osteoporoosi puhul. Langenud osteokaltsiinitasemeid on täheldatud hüperparatüroidismi11, 12 ning pikaajalise kortikosteroidipõhise ravi puhul.13

IMMULITE 2000 Osteokaltsiini analüüs mõõdab vaid intaktse osteokaltsiini molekuli ning ei tuvasta fragmenteerunud vorme.16

Protseduuri põhimõte IMMULITE 2000 Osteokaltsiini analüüsimeetod on tahkefaasiline kemiluminestsents-immunomeetriline analüüs. Tahke faas (kuulike) on kaetud hiire monoklonaalse osteokaltsiinivastase antikehaga. Vedel faas koosneb puhvris küüliku polüklonaalsesse osteokaltsiinivastasesse antikehasse konjugeeritud aluselisest fosfataasist (vasika soole päritolu).

Esimeses tsüklis inkubeeritakse patsiendiproov ja reagent 30 minutiks koos kaetud kuulikesega. Selle aja jooksul moodustub proovi osteokaltsiini ning kuuli monoklonaalse hiire osteokaltsiinivastase antikeha ja reagendi ensüümi konjugeeritud polüklonaalsesse hiire osteokaltsiinivastase antikeha vahel antikeha sandwich-komleks. Seondumata patsiendi proov ja ensüümi konjugaat eemaldatakse tsentrifuugpesu käigus. Lõpuks lisatakse reaktsiooniklaasi kemiluminestsents-substraat ning genereeritakse ümbritsenud ensüümile vastav signaal.

Inkubatsioonitsüklid: 1 × 30 minutit Aeg esimeste tulemusteni: 35 minutit

Proovimaterjali kogumine Lipeemiliste proovide selgitamiseks soovitatakse kasutada ultratsentrifuugimist.

Hemolüüsunud proovid võivad viidata materjali valesti käsitsemisele enne proovimaterjali saabumist laborisse.

Seetõttu tuleks selliste proovide analüüsimisel saadud tulemusi tõlgendada äärmise ettevaatusega.

Võtke verd veenipunktuuriga14 (vältides hemolüüsi) külmutatud tavalistesse või hepariniseeritud katsutitesse, märkides seejuures üles proovi võtmise aja. Katsutid tuleks sukeldada kogumise järel jäävanni. Eraldage seerum või plasma rakkudest külmutatud tsentrifuugi abil, seejärel jaotage osadeks ning külmutage koheselt plastkatsutites.

Vere kogumiseks kasutatavad katsutid erinevatelt tootjatelt võivad mõjutada analüüsitulemusi, sõltuvalt valmistamisel kasutatud materjalidest ja lisanditest, sh geel- või füüsilistest tõketest, hüübimisaktivaatoritest ja/või antikoagulantidest. IMMULITE 2000 Osteokaltsiini ei ole testitud kõigi võimalike katsutitüüpidega. Testitud katsutitüübid on ära toodud alalõigus „Alternatiivsed proovikatsutid”.

Vajalik kogus: 10 µL seerumit või hepariniseeritud plasmat.

Säilitamine: 2 tundi 2–8°C juures või 30 päeva –20°C juures.

Hoiatused ja ettevaatusabinõud In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.

Reagendid: säilitada temperatuuril 2–8°C. Kõrvaldamine peab toimuma vastavalt kehtivatele seadustele.

Järgige universaalseid ettevaatusabinõu- sid. Kõikidesse patsiendiproovidesse tuleb suhtuda kui potentsiaalselt infitseeritud materjalidesse. Inimverest pärinevaid ja antud testikomplektis kasutatavaid komponente on testitud süüfilise, HIV 1 ja HIV 2 antikehade, B-hepatiidi pinnaantigeeni ja C-hepatiidi antikehade suhtes ning reaktsiooni ei esinenud.

Konservandina on lisatud naatriumasiidi kontsentratsiooniga vähem kui 0,1 g/dL. Utiliseerimisel uhta suure hulga veega, et ära hoida võimalike plahvatusohtlike metallasiidide kogunemist pliist või vasest kanalisatsioonitorustikku.

Kemiluminestsents-substraat: vältige saastumist ning kokkupuudet otsese päikesevalgusega (vt pakendi infolehte).

Vesi: kasutage destilleeritud või deioniseeritud vett.


Tarnitavad komponendid Komponendid moodustavad kokkusobiva komplekti. Sisepakendi sildid on analüüsiks vajalikud.

Osteokaltsiini kuulide konteiner (L2ON12) Konteiner on varustatud triipkoodiga ja sisaldab 200 kuuli, mille pind on kaetud monoklonaalse anti-osteokaltsiiniga. Stabiilne temperatuuril 2–8°C kuni säilivusaja. L2KON2: 1 konteiner

Osteokaltsiini reagendi konteiner (L2ONA2) Triipkoodiga. 11,5 mL puhvris küüliku polüklonaalsesse anti-osteokaltsiini konjugeeritud aluselist fosfataasi (vasikasoole päritoluga). Stabiilne temperatuuril 2–8°C kuni säilivusaja. L2KON2: 1 konteiner

Enne kasutamist rebige sildi ülaosa murdejoone järgi ära, seejuures triipkoodi kahjustamata. Eemaldage konteineri ülaosalt fooliumkinnis; lükake libisev kate alla reagendi konteineri korgi soontesse.

Osteokaltsiini kalibraatorid (LONL, LONH) Kaks viaali (madala ja kõrge kontsentratsiooniga) lüofiliseeritud osteokaltsiini proteiin-/puhvermaatriksis, koos konservandiga. Taastage iga viaal lisades 2,0 mL destilleeritud või deioniseeritud vett, paigutades kalibraatorid koheselt peale seda lisamist külma. Kasutage volumeetrilisi pipette ja segage õrnalt ja katkematult kuni kogu lüofiliseerunud materjal on lahustunud. Tähtis on hoida kalibraatoreid selle protsessi vältel jahedana. Stabiilne temperatuuril 2–8°C 1 päeva pärast avamist või 6 kuud (osadeks jaotatuna) –20°C juures. L2KON2: 1 komplekt

Enne seadistuste tegemist paigaldage katsutitele vastavad jaotamissildid (komplektiga kaasas) nii, et triipkoode oleks võimalik lugeda analüsaatori triipkoodilugejaga.

Eraldi tarnitavad komplekti komponendid L2SUBM: kemiluminestsents-substraat L2PWSM: pipeti otsiku pesulahus

L2KPM: pipeti puhastuskomplekt LRXT: reaktsioonikatsutid (ühekordselt kasutatavad)

LONCM: kahetasemeline osteokaltsiini sisaldav kontrollmaterjal (valgupõhine)

Lisaks on vajalikud: destilleeritud või deioniseeritud vesi, katsutid, kontrollmaterjal

Analüüsi käik Optimaalse kasutamise tagamiseks on väga oluline täita kõik rutiinsed hooldusprotseduurid, nii nagu näeb ette IMMULITE 2000 süsteemide kasutusjuhend.

Tutvuge IMMULITE 2000 süsteemide kasutusjuhendiga töö ettevalmistuse, seadistamise, lahjendamise, kalibreerimise ja analüüsi teostamise ning kvaliteedikontrolli protseduuride teostamisel.

Soovitatav kalibreerimisintervall: 4 nädalat

Kvaliteedikontrolli proovid: kasutage vähemalt kahe tasemega (kõrge ja madal) osteokaltsiini kontrollmaterjale ja proovivalimeid.

Oodatavad väärtused 186 eeldatavalt hea tervise juures täiskasvanuga viidi läbi IMMULITE 2000 Osteokaltsiini referentsvahemiku uuring, mille keskseks 95% vahemikuks oli:

< 2,0–22 ng/mL.

Nimetatud piirväärtustesse tuleb suhtuda kui orienteeruvatesse juhistesse. Iga laboratoorium peaks välja töötama oma referentsväärtused.

Piirangud Proovid ei pruugi osteokaltsiini lagunemisproduktide olemasolul säilitada lahjendamisel jäika lineaarsust.

Inimseerumi heterofiilsed antikehad võivad reageerida analüüsikomponentide hulgas leiduvate immunoglobuliinidega, põhjustades häireid in vitro immuunanalüüsides. [Vt Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988: 34: 27-33.] Seda tüüpi häireid, mis põhjustavad anomaalseid tulemusi, võib esineda regulaarselt loomade või loomse


seerumi toodetega kokkupuutuvate patsientide proovide puhul. Käesolevad reagendid on loodud häirete ohu minimeerimiseks. Sellele vaatamata võib esineda vastastikuseid mõjusid seerumite ja testi haruldaste komponentide vahel. Diagnostilistel eesmärkidel tuleb analüüsi tulemusi vaadelda alati koos kliinilise läbivaatuse, patsiendi anamneesi ja teiste leidudega.

Analüütiline iseloomustus Andmed, mis on tüüpilised konkreetsele analüüsimeetodile, on toodud allpool olevates tabelites ja graafikutel. Kõik tulemused on väljendatud ng/mL kohta. (Kui ei ole märgitud teisiti, siis on kõik tulemused saadud geelibarjäärita või hüübimisaktivaatoriteta katsutitesse võetud seerumiproove analüüsides).

Tulemusvahemik: 2 kuni 100 ng/mL

Test on jälgitav kvalifitseeritud materjalide ja mõõtmisprotseduuridega toodetud sisestandardi järgi.

Analüütiline tundlikkus: tühiproovi piir (kõrgeim oodatav väärtus analüüdita proovi puhul; määratletud vastavalt CLSI EP17-A-le17): 0,19 ng/mL

Tuvastuspiir (madalaim tuvastatav kontsentratsioon; määratletud vastavalt CLSI EP17-A-le17): 0,45 ng/mL

Funktsionaalne tundlikkus: (kontsentratsioon, mille variatsioonikoefitsent (CV) on 20%; määratletud vastavalt CLSI EP17-A-le17 ja CLSI EP5-A2-le18): 0,81 ng/mL

Kõrge doosi „prozone’i“ efekt: puudub kuni kontsentratsioonini 60 300 ng/mL.

Hajuvus: prooviduplikaate analüüsiti 20 päeva jooksul, kaks korda päevas, kokku 40 korda, luues 80 replikaati (vt tabelit „Hajuvus“).

Lineaarsus: proovid ei pruugi osteokaltsiini lagunemisproduktide olemasolul säilitada lahjendamisel jäika lineaarsust (vt tabelit „Lineaarsus“).

Saagis: analüüsiti proove, mida oli suhtes 1:19 rikastatud kolme kontsentratsiooniga osteokaltsiini lahusega (vastavalt 101, 201 ja 402 ng/mL) (vt tabelit „Saagis“).

Spetsiifilisus: kasutatavad antikehad on väga spetsiifilised intaktse osteokaltsiini16 suhtes (vt tabelit „Spetsiifilisus“).

Bilirubiin: konjugeeritud või konjugeerimata bilirubiini olemasolu võib kontsentratsioonidel üle 100 mg/L analüüsi häirida, põhjustades väärtuste langust (vt vastavaid andmeid tabelis „Bilirubiin“).

Hemolüüs: võib analüüsi häirida, põhjustades tasemetel üle 150 mg/dL väärtuste langust (vt tabelit „Hemolüüs“).

Lipeemia:triglütseriidide olemasolu kontsentratsioonis kuni 3000 mg/dL ei avalda analüüsitulemustele mingisugust mõju analüüsi täpsusastmest lähtuvalt.

Alternatiivsed proovikatsutid: alternatiivsete proovikatsutite mõju hindamiseks koguti vabatahtlikelt verd tavalistesse, liitium-hepariin, naatrium-hepariin, PST® ja SST® vakutainer plastkatsutitesse. Kõik katsutid pärinesid Becton Dickinson’ilt. Võrreldavate proovide võrdsetele kogustele lisati erinevates kontsentratsioonides müoglobiini, et saada kogu kalibreerimisvahemiku vältel väärtuseid, mida seejärel analüüsiti IMMULITE 2000 Osteokaltsiini protseduuriga. Lineaarse regressiooniga:

(Li-hepariin) = 1,07 (seerum) – 1,60 ng/mL r = 0,979, n = 47 Keskmised: 13,5 ng/mL (Li-hepariin) 14,2 ng/mL (seerum)

(Na-hepariin) = 1,01 (seerum) – 0,98 ng/mL r = 0,988, n = 44 Keskmised: 12,9 ng/mL (Na-hepariin) 13,7 ng/mL (seerum)

(PST) = 1,13 (seerum) – 2,14 ng/mL r = 0,984, n = 40 Keskmised: 14,5 ng/mL (PST) 14,7 ng/mL (seerum)

(SST) = 0,99 (seerum) – 0,59 ng/mL r = 0,990, n = 47 Keskmised: 13,5 ng/mL (SST) 14,2 ng/mL (seerum)

Meetodite võrdlus: analüüsi võrreldi 71 proovi puhul Nordic Bioscience Diagnostics N-MID® analüüsiga. (Kontsentratsioonide vahemik: ligikaudu 2,4 kuni 86 ng/mL. Vt graafikut). Lineaarse regressiooniga:

(IML 2000) = 0,54 (Nordic N-MID®) – 0,72 ng/mL r = 0,907


Keskmised: 15,7 ng/mL (IMMULITE 2000) 30,3 ng/mL (Nordic N-MID®)

Klienditugi Tehnilise abi saamiseks, võtke ühendust oma müügiesindusega.


Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. kvaliteedisüsteem omab sertifitseeritud ISO 13485:2003.

Latviski

IMMULITE 2000 Osteokalcīna Pielietojums: Tests paredzēts diagnostikai in vitro, izmantojot IMMULITE 2000 sistēmu automātiskos analizatorus. Ar šo testu veic osteokalcīna kvantitatīvus mērījumus cilvēku serumā vai heparinizētā plazmā, kā palīglīdzekli minerālvielu un kaulu metabolisma novērošanā.

Kataloga numuri: L2KON2 (200 tests)

Testa kods: OCN Krāsu kods: Tumši Pelēks

Apraksts un Klīniskā Nozīme Osteokalcīns ir vitamīna K atkarīgs proteīns, kura molekulmasa ir aptuveni 5800 daltoni. Proteīns ir organiski saistīts kaulu GLA proteīns (BGP), jo tā primārajā struktūrā esošās 3-gamma karboksiglutamīnskābes atlikums nodrošina kalcija un hidroksiapatītu saistīšanos.1 Osteokalcīns ir viens no piesātinātākajiem nekolagēnajiem kaulu proteīniem, un tas veido līdz 3% no kopējā proteīnu daudzuma kaulos. Kaulaudi ir dinamisko kaula formēšanās un eliminācijas procesu rezultāts. Osteokalcīnu producē osteoblasti2 – šūnas, kas ir nepieciešamas kaulu formēšanās procesā. Osteokalcīnu tieši ietekmē kalciju regulējošie hormoni (kalcitonīns,3 parathormons, vitamīns D4-6), kas nepieciešami normālā kaulu mineralizācijas procesā. Osteokalcīns tiek plaši apspriests kā kaulu slimību prognostisks kritērijs. Paaugstināts osteokalcīna līmenis ir novērojams dažādu slimību gadījumos, piemēram, osteomalācija,7 Pedžeta (Paget) kaulu

slimība,8 hipertireoīdisms,9 primārs hiperparatireoīdisms un renāla osteodistrofija.10 Pie tam, paaugstināts osteokalcīna līmenis var būt arī postmenopauzālas osteoporozes gadījumā, sakarā ar pastiprinātu vai samazinātu vielmaiņu kaulos. Pazemināts osteokalcīna līmenis ir novērojams hipoparatireoīdisma gadījumā11, 12 un ilgstošas kortikosteroīdu terapijas laikā.13

Ar IMMULITE 2000 osteokalcīna testu var noteikt tikai intaktas osteokalcīna molekulas, ar to nevar noteikt fragmentētas formas.16

Procedūras Princips IMMULITE 2000 Osteokalcīna tests ir cietās fāzes hemiluminiscentā imunometriskā metode. Cietā fāze (lodīte) ir pārklāta ar monoklonālajām peļu anti-osteokalcīna antivielām. Šķidro fāzi veido sārmainā fosfatāze (teļa zarnu), kas ir konjugēta buferšķīdumā ar poliklonālajām truša anti-osteokalcīna antivielām.

Pacienta paraugs un reaģents 30 minūtes tiek inkubēti kopā ar pārklātajām lodītēm. Pa šo laiku, osteokalcīns, kas ir pacienta paraugā, veido antivielu “sendviča” tipa kompleksu ar monoklonālajām peļu anti-osteokalcīna antivielām, ar ko pārklātas lodītes un ar ar enzīmu saistītajām poliklonālajām truša anti-osteokalcīna antivielām reaģentā. Nesaistītais pacienta paraugs un enzīmu konjugāts tiek atdalīts centrifugējot. Nobeigumā, lodītei, kas ir reakcijas kivetē, tiek pievienots hemiluminiscentais substrāts un ģenerētais signāls ir proporcionāls saistītā enzīma daudzumam.

Inkubācijas cikli: 1 × 30 minūtes Laiks līdz pirmajam rezultātam: 35 minūtes

Izmeklējamais Materiāls Nepārprotami lipēmiskiem paraugiem ir ieteicama ultracentrifugēšana.

Hemolizēti paraugi var norādīt uz nekorektu apiešanos ar paraugiem pirmslaboratorijas posmā, tāpēc rezultāti jāinterpretē piesardzīgi.

Paraugu savākt punktējot vēnu14 (lai izvairītos no hemolīzes) atdzesētā parastā vai heparinizētā stobriņā, piefiksēt savākšanas laiku. Savākto paraugu


stobriņi uzreiz ir jāiegremdē ledus vannā. Atdalīt plazmu no šūnām centrifugējot refrižeratorcentrifūgā, nekavējoties sadalīt alikvotās un sasaldēt plastmasas stobriņos.

Asins paraugu stobriņi no dažādiem ražotājiem var uzrādīt dažādas vērtības, atkarībā no materiāla un piedevām, ieskaitot gēla vai fiziskās barjeras, recēšanas aktivizētājus un/vai antikoagulantus. IMMULITE 2000 Osteokalcīna nav pārbaudīts ar visiem iespējamajiem stobriņu tipiem. Skatīt sadaļu Atšķirīgie paraugu tipi.

Nepieciešamais parauga tilpums: 10 µL seruma vai heparinizētas plazmas.

Uzglabāšana: 2 stundas 2–8°C temperatūrā vai 30 dienas –20°C temperatūrā.

Brīdinājumi un Piesardzības Pasākumi Tikai in vitro diagnostikai.

Reaģenti: Uzglabāt 2–8°C. Utilizēt atbilstoši spēkā esošajiem noteikumiem.

Strādājot ar reaģentiem ievērot vispārējos piesardzības pasākumus, apieties ar tiem kā ar potenciāli infekciozu materiālu. No cilvēka asinīm iegūtie izejmateriāli ir rūpīgi pārbaudīti un apstiprināti kā nereaktīvi uz sifilisa izraisītāju, antivielām pret HIV1 un 2, uz hepatīta B virsmas antigēnu un antivielām pret hepatītu C.

Atsevišķi komponenti kā konservantu var saturēt nātrija azīdu (mazāk nekā 0,1 g/dL). Mazgājot skalot ar lielu ūdens daudzumu, lai novērstu potenciāli eksplozīvo metālu azīdu veidošanos svina un vara cauruļvadu sistēmās.

Hemiluminiscentais Substrāts: Izvairīties no piesārņošanas un tiešas saules gaismas iedarbības (skatīt ieliktni).

Ūdens: Lietot destilētu vai dejonizētu ūdeni.

Testa Komplekts Komplektā ietilpstošie komponenti ir savstarpēji saskaņoti. Svītrkodi satur informāciju par testu.

Osteokalcīna Lodīšu Paka (L2ON12) Ar svītrkodu. 200 lodītes pārklātas ar monoklonālajām peļu anti-osteokalcīna

antivielām. Stabilas 2–8°C līdz derīguma termiņa beigām. L2KON2: 1 paka

Osteokalcīna Reaģentu Konteiners (L2ONA2) Ar svītrkodu. 11,5 mL sārmainās fosfatāzes (teļa zarnu) konjugētas ar poliklonālajām truša anti-osteokalcīna antivielām. Stabilas 2–8°C līdz derīguma termiņa beigām. L2KON2: 1 konteiners

Pirms lietošanas atplēst uzlīmi, nesabojājot svītrkodu. Noņemt folija uzlīmi no konteinera virsmas, pievienot slīdošo vāciņu reaģenta vāciņam.

Osteokalcīna Kalibratori (LONL, LONH) Divas pudelītes (Low un High) liofilizēta cilvēka osteokalcīna proteīnu buferšķīdumā, ar konservantu. Katras pudelītes saturu izšķīdināt ar 2,0 mL destilēta vai dejonizēta ūdens, kalibratorus pēc lietošanas nekavējoties novietot uz ledus. Lietot volumetriskās pipetes un uzmanīgi maisīt, līdz liofilizētais materiāls ir pilnīgi izšķīdis. Atšķidīšanas laikā, ir svarīgi turēt kalibratorus vēsumā. Stabili 2–8°C 1 dienu pēc izšķīdināšanas vai 6 mēnešus (alikvotas) –20°C. L2KON2: 1 komplekts

Pirms kalibrēšanas stobrus, kuros iepilda kalibratorus, marķē ar komplektam klātpievienotajām svītrkodu uzlīmēm.

Testa veikšanai nepieciešamie materiāli, kas nav iekļauti komplektā L2SUBM: Hemiluminiscentais substrāts L2PWSM: Pipetes-zondes mazgāšanas šķīdums L2KPM: Pipetes-zondes tīrīšanas šķīdums LRXT: Reakcijas kivetes (vienreizējās lietošanas)

LONCM: Osteokalcīnu saturoša divu līmeņu kontrole (uz proteīnu bāzes)

Vēl Nepieciešams Destilēts vai dejonizēts ūdens, teststobri, kontroles

Testēšanas Procedūra

Lai optimāli veiktu testēšanu, svarīgi ir visas ikdienas ekspluatācijas procedūras


izdarīt kā aprakstīts IMMULITE 2000 sistēmu lietotāja rokasgrāmatā.

Skatīt IMMULITE 2000 sistēmu lietotāja rokasgrāmatu, kur aprakstītas paraugu sagatavošanas, atšķaidīšanas, testu uzstādīšanas, kalibrēšanas, testēšanas un kvalitātes kontroles procedūras.

Ieteicamais Piekalibrēšanas Intervāls: 4 nedēļas

Kvalitātes Kontroles Paraugi: Lietot vismaz divu līmeņu (zemais un augstais) osteokalcīna kontroles vai paraugu pulus.

Sagaidāmās Vērtības References vērtību pētījums IMMULITE 2000 Osteokalcīna testam tika viekts izmantojot 186 vispārēji veselus pieaugušos un kas sniedza centrālo 95% references diapazonu:

< 2,0–22 ng/mL.

Dotās vērtības nav absolūtas un tās jāaplūko kā vispārīgi ieteikumi. Katrā konkrētā laboratorijā jāievieš savas references robežas.

Ierobežojumi Atšķaidot, paraugi var nesaglabāt precīzu linearitāti, sakarā ar osteokalcīna degradācijas produktu klātbūtni.

Cilvēka seruma heterofīlās antivielas var reaģēt ar testa komponentos iekļautajiem imunoglobulīniem, traucējot imunoloģisko reakciju norisi in vitro. [Skatīt Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Pacientu paraugi, kas bijuši pakļauti dzīvnieku produktu vai dzīvnieku seruma produktu iedarbībai, demonstrē šīs mijiedarbības veidu radot viltus rezultātus. Šiem reaģentiem ir jānodrošina minimāls interferences risks, tomēr ir iespējama mijiedarbība starp tīru serumu un testa komponentiem. Diagnostiskiem nolūkiem testa rezultāti jāizmanto saistībā ar citu izmeklējumu rezultātiem, pacienta klīnisko anamnēzi un citu attiecīgu informāciju.

Veiktspējas Dati Zemāk dotajās tabulās un grafikos apkopoti testa veiktspējas dati. Rezultāti ir izteikti ng/mL. (Ja nav īpaši atzīmēts, visi rezultāti iegūti testējot seruma paraugus,

kas savākti stobros bez gela barjeras un recēšanas veicinātāju piedevām.)

Rezulātu Diapazons: 2–100 ng/mL

Tests ir izsekojams līdz iekšējam standartam, kas izgatavots izmantojot atbilstošus materiālus un mērīšanas metodes.

Analītiskais Jutīgums: Tukša parauga robežvērtība (augstākā, kas sagaidāma paraugā, kurā nav analizējamās vielas; noteikta saskaņā ar CLSI EP17-A17): 0,19 ng/mL

Detekcijas robežvērtība (zemākā nosakāmā koncentrācija; noteikta saskaņā ar CLSI EP17-A17): 0,45 ng/mL

Funkcionālais Jutīgums: (koncentrācija ar 20% variāciju koeficientu (CV) noteikts saskaņā ar CLSI EP17-A17 un CLSI EP5-A218): 0,81 ng/mL

Augstas Devas “Aizķeršanās” Efekts: nenovēro līdz 60 300 ng/mL

Precizitāte: Paraugi tika testēti dubultatkārtojumā 20 dienu laikā, divas sērijas dienā, pavisam kopā 40 sērijas un 80 atkārtojumi. (Skatīt tabulu “Precision”.)

Linearitāte: Atšķaidot, paraugi var nesaglabāt precīzu linearitāti, sakarā ar osteokalcīna degradācijas produktu klātbūtni. (Skatīt tabulu “Linearity”.)

Atkārtojamība: Paraugi, apzīmēti 1–19, tika izmeklēti trīs osteokalcīna atšķaidījumos (101, 201 un 402 ng/mL). (Skatīt tabulu “Recovery”.)

Specifiskums: Tests ir augsti specifisks attiecībā uz intaktu osteokalcīnu.16 (Skatīt tabulu “Specifity”.)

Bilirubīns: Konjugētais un nekonjugētais bilirubīns koncetrācijā 100 mg/L un vairāk, var ietekmēt testu, izraisot vērtību samazināšanos. (Skatīt tabulu “Bilirubin”.)

Hemolīze: Koncetrācijā virs 150 mg/dL, var ietekmēt testu, izraisot vērtību samazināšanos. (Skatīt tabulu “Hemolysis”.)

Lipēmija: Triglicerīdi koncentrācijā līdz 3000 mg/dL testa rezultātus, ieskaitot precizitāti neietekmē.

Dažādi paraugu tipi: Lai novērtētu atšķirīgu paraugu tipu ietekmi, paraugi no brīvprātīgajiem tika savākti tukšos, Li-heparīna, Na-heparīna, PST® un SST® plastmasas vakutaineru stobriņos. Visi


stobriņi bija no Becton Dickinson. Vienādam paraugu tilpumam jauktā kārtībā tika pievienots osteokalcīns dažādās koncentrācijās, lai iegūtu lielumus visā testa rezultātu diapazonā, un tad tika veikta IMMULITE 2000 Osteokalcīna testēšanas procedūra. Lineārā regresija:

(Li Heparīns) = 1,07 (Serums) – 1,60 ng/mL r = 0,979, n = 47 Vidējās vērtības: 13,5 ng/mL (Li Heparīns) 14,2 ng/mL (Serums)

(Na Heparīns) = 1,01 (Serums) – 0,98 ng/mL r = 0,988, n = 44 Vidējās vērtības: 12,9 ng/mL (Na Heparīns) 13,7 ng/mL (Serums)

(PST) = 1,13 (Serums) – 2,14 ng/mL r = 0,984, n = 40 Vidējās vērtības: 14,5 ng/mL (PST) 14,7 ng/mL (Serums)

(SST) = 0,99 (Serums) – 0,59 ng/mL r = 0,990, n = 47 Vidējās vērtības: 13,5 ng/mL (SST) 14,2 ng/mL (Serums)

Metožu salīdzinājums: Tests tika salīdzināts ar komerciāli pieejamo Nordic Bioscience Diagnostics N-MID® testu, izmantojot 71 pcientu paraugu. (Koncentrāciju diapazons: aptuveni 2,4–86 ng/mL. Skatīt grafiku.) Lineārā regresija:


Vidējās vērtības: 15,7 ng/mL (IMMULITE 2000) 30,3 ng/mL (Nordic N-MID®)

Tehniskais atbalsts Tehnisku jautājumu risināšanai kontaktēties ar vietējo izplatītāju.


Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. kvalitātes sistēmai ir ISO 13485:2003 sertifikāts.

Lietuviškai

IMMULITE 2000 osteokalcinas Paskirtis: diagnostiniam naudojimui in vitro su IMMULITE 2000 Sistemų analizatoriais — kiekybiniam osteokalcino matavimui žmogaus serume arba heparinizuotoje plazmoje, kaip priemonė, naudojama mineralinių medžiagų ir kaulų metabolizmui stebėti.

Katalogo numeriai: L2KON2 (200 tyrimų)

Tyrimo kodas: OCN Spalva: Tamsiai pilka

Santrauka ir Paaiškinimai Osteokalcinas yra nuo vitamino K priklausantis baltymas, turintis 5800 daltonų molekulinę masę. Dėl jo pirminėje struktūroje esančių trijų gama karboksigliutamininės rūgšties (GLA) liekanų, dalyvaujančių kalciui susijungiant su hidroksiapatitu, šis baltymas dar vadinamas kaulų GLA baltymu (BGP – bone GLA protein).1 Osteokalcinas – vienas gausiausių kaulo nekolageninių baltymų, sudarantis iki 3% visų kaulo baltymų. Kaulo audinyje nuolat vyksta dinamiškas kaulo formavimosi ir rezorbcijos procesas. Manoma, kad osteokalcinas dalyvauja kaulo audinio formavimesi, kadangi jį gamina osteoblastai,2 šiam procesui būtinos ląstelės. Be to, osteokalciną betarpiškai veikia kalcį reguliuojantys hormonai (kalcitoninas,3 parathormonas, vitaminas D4-6), reikalingi normaliam kaulų mineralizacijos procesui. Pasaulyje buvo plačiai diskutuojama apie osteokalciną kaip prognostinį kaulų ligų progresavimo rodiklį. Manoma, kad aukštu osteokalcino lygiu gali pasižymėti įvairios ligos, tokios kaip osteomaliacija,7 Paget‘o kaulų liga,8 hipertiroidizmas,9 pirminis hiperparatiroidizmas ir inkstų osteodistrofija.10 Padidėjusi osteokalcino koncentracija taip pat gali būti stebima pomenopauzinės osteoporozės atveju – dėl padidėjusios arba sumažėjusios medžiagų apykaitos kauluose. Buvo paskelbta apie sumažėjusį osteokalcino lygį hipoparatiroidizmo11,12 ir ilgalaikės kortikosteroidinės terapijos atvejais.13


IMMULITE 2000 osteokalcino tyrimu matuojamas tik intaktinių osteokalcino molekulių kiekis, o šių molekulių fragmentai nėra aptinkami.16

Atlikimo Metodika IMMULITE 2000 osteokalcinas yra kietos fazės, chemiliuminescencinis, imunometrinis tyrimas. Kietos fazės rutuliukas yra padengtas monokloniniais pelės prieš osteokalciną verikiančiais antikūnais. Skystą fazę sudaro šarminė fosfotazė (iš veršiuko žarnos), konjuguota su polikloniniais triušio prieš osteokalciną veikiančiais antikūnais buferyje.

Kietosios fazės rutuliukas, reagentas ir paciento mėginys kartu inkubuojami 30 minučių. Inkubacijos metu mėginyje esantis osteokalcinas jungiasi su kietos fazės monokloniniais pelės prieš osteokalciną veikiančiais antikūnais ir reagento sudėtyje esančiais polikloniniais triušio prieš osteokalciną veikiančiais antikūnais, rutuliuko paviršiuje sudarydami sluoksniuotą kompleksą. Neprisijungęs paciento mėginio ir fermento konjugatas išplaunamas centrifuguojant. Galiausia, į reakcijos indelį su rutuliuku įpilama chemiliuminescencinio substrato, kuris generuoja signalą (išspinduliuojamą fotonų srautą), proporcingą prisijungusio fermento kiekiui.

Inkubacijos ciklai: 1 × 30 minučių Laikas iki pirmojo rezultato: 35 minučių

Mėginio Paėmimas Lipeminių mėginių išvalymui rekomenduojama naudoti ultracentrifugavimą.

Hemolizuoti mėginiai gali reikšti netinkamą mėginio paėmimą ir paruošimą prieš jam patenkant į laboratoriją; taigi tokius rezultatus reikia interpretuoti atsargiai.

Kraują venipunktūra14 (stengdamiesi išvengti hemolizės) paimkite į atšaldytus paprastus arba heparinizuotus mėgintuvėlius ir pažymėkite paėmimo laiką. Po šios procedūros mėgintuvėliai turi būti sudėti į vonelę su ledu. Atšaldyta centrifuga atskirkite serumą arba plazmą nuo ląstelių, išpilstykite mažesniais kiekiais į plastikinius mėgintuvėlius ir nedelsiant užšaldykite.

Naudojant skirtingų gamintojų kraujo paėmimo mėgintuvėlius galimi skirtingi

rezultatai, priklausantys nuo medžiagų ir priedų, įskaitant gelio ar fizines pertvaras, krešėjimo skatintojus ir/arba antikoaguliantus. IMMULITE 2000 osteokalcinas nebuvo testuotas su visais galimais mėgintuvėlių tipais. Pastraipoje „Mėginio tipų sukeitimas“ pateikiama informacija apie patikrintus mėgintuvėlius.

Reikalingas kiekis: 10 µl serumo arba heparinizuotos plazmos.

Saugojimas: 2 valandas 2–8°C temperatūroje arba 30 dienų –20°C temperatūroje.

Perspėjimai ir Atsargumo Priemonės Diagnostiniam naudojimui in vitro.

Reagentai: saugokite 2–8°C temperatūroje. Šalinkite vadovaudamiesi galiojančiomis taisyklėmis.

Laikykitės darbo saugos taisyklių. Su visais komponentais elkitės kaip su medžiagomis, galinčiomis perduoti infekciją. Medžiagos, gautos iš žmogaus kraujo, buvo patikrintos – nustatyta, kad jos nereaktyvios sifiliui, prieš ŽIV 1 ir 2 veikiantiems antikūnams, hepatito B paviršiniams antigenams ir prieš hepatitą C veikiantiems antikūnams.

Kaip konservantas buvo panaudotas mažesnės nei 0,1 g/dl koncentracijos natrio azidas. Šalindami nuplaukite dideliu kiekiu vandens siekiant apsisaugoti nuo potencialiai sprogių metalo azidų susikaupimo švininiuose ir variniuose vamzdžiuose.

Chemiliuminescencinis substratas: saugokite nuo užteršimo ir tiesioginių saulės spindulių (žr. aprašą).

Vanduo: naudokite distiliuotą arba dejonizuotą vandenį.

Pateikiamos Priemonės Pateikiami komponentai sudaro vientisą rinkinį. Pakuotėje esantys brūkšninių kodų lipdukai reikalingi tyrimų atlikimui.

Osteokalcino rutuliukų paketas (L2ON12) Su brūkšniniu kodu. 200 rutuliukų, padengtų monokloniniais pelės prieš osteokalciną veikiančiais antikūnais, su konservantu. 2–8°C temperatūroje


stabilūs iki nurodytos galiojimo datos. L2KON2: 1 paketas

Osteokalcino reagento indelis (L2ONA2) Su brūkšniniu kodu. 11,5 ml šarminės fosfotazės (iš veršiuko žarnos), konjuguotos su polikloniniais triušio prieš osteokalciną veikiančiais antikūnais buferyje. 2–8°C temperatūroje stabilūs iki nurodytos galiojimo datos. L2KON2: 1 indelis

Prieš naudojimą nuplėškite lipduko viršų ties pažymėta linija, nepažeisdami brūkšninio kodo. Nuo indelio viršaus nuimkite apsauginę folinę plėvelę; įstatykite į vietą ir užfiksuokite slankiojantį reagento indelio dangtelį.

Osteokalcino kalibratoriai (LONL, LONH) 2 buteliukai (žemas ir aukštas kalibratoriai) liofilizuoto žmogaus osteokalcino baltymo/buferio matricoje, su konservantu. Kiekvieną buteliuką atskieskite 2,0 ml distiliuoto arba dejonizuoto vandens, o atlikę šią procedūrą kalibratorius nedelsiant įdėkite į ledą. Skiedimui naudokite tūrio matavimo pipetes, liofilizuotą medžiagą išmaišykite atsargiai, su pertrūkiais judindami buteliukus. Labai svarbu šio proceso metu kalibratorius laikyti šaltai. 2–8°C temperatūroje stabilūs 1 dieną po atskiedimo arba 6 mėnesius (išpilstyti mažais kiekiais) –20°C temperatūroje. L2KON2: 1 rinkinys

Prieš kalibratorių tyrimą ant mėgintuvėlių užklijuokite reikiamus lipdukus (jie pateikiami rinkinyje), kad brūkšninius kodus galėtų nuskaityti analizatoriuje esantis skaitytuvas.

Atskirai Pateikiami Rinkinio Komponentai

L2SUBM: Chemiliuminescencinis substratas L2PWSM: Adatos ploviklis L2KPM: Adatos valymo rinkinys LRXT: Reakcijos indeliai (vienkartiniai)

LONCM: dviejų lygių, baltymo pagrindu pagaminta kontrolė, kurios sudėtyje yra osteokalcino

Taip pat reikia: distiliuoto arba dejonizuoto vandens; mėgintuvėlių, kontrolių

Tyrimo Procedūra Atminkite, kad siekiant užtikrinti optimalų darbo procesą svarbu atlikti visas įprastinės priežiūros procedūras, nurodytas IMMULITE 2000 Sistemų vartotojo instrukcijoje.

IMMULITE 2000 Sistemų vartotojo instrukcijoje aprašomos šios procedūros: paruošimas, nustatymas, skiedimas, kalibracija, tyrimų atlikimas ir kokybės kontrolė.

Rekomenduojamas kalibracijos intervalas: 4 savaitės

Kokybės kontrolės mėginiai: kontroles arba serumo mėginius naudokite bent su dviem osteokalcino lygiais (žemu ir aukštu).

Tikėtinos Reikšmės Normos ribų tyrime IMMULITE 2000 osteokalcino procedūra buvo išanalizuoti 186 sveikų suaugusiųjų mėginiai. Remiantis tyrimo rezultatais buvo gautas šis centrinis 95% normos intervalas:

< 2,0–22 ng/ml.

Šias ribas vertinkite tik kaip orientacines. Kiekviena laboratorija turi nustatyti savas normos ribas.

Apribojimai Skiedžiami mėginiai gali neišlaikyti griežto linijiškumo dėl osteokalcino skilimo produktų buvimo.

Žmogaus serume esantys heterofiliniai antikūnai gali reaguoti su tyrimo komponentų sudėtyje esančiais imunoglobulinais, sukeldami interferenciją in vitro imunotyrimuose (žr. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33). Pacientų, dažnai kontaktuojančių su gyvūnais ar gyvūnų serumo produktais, mėginiuose gali įvykti nurodyta interferencija, potencialiai nulemdama klaidingą rezultatą. Šie reagentai buvo sukurti siekiant minimizuoti interferencijos pavojų, tačiau nedidelė sąveikos tarp retų serumo ir tyrimo komponentų galimybė išlieka. Rezultatai, gauti atlikus šį tyrimą, diagnostiniais


tikslais visada turi būti įvertinti atsižvelgiant į klinikinę apžiūrą, paciento ligos istoriją ir kitus duomenis.

Tyrimo Duomenys Tyrimo duomenis rasite lentelėse ir grafikuose. Rezultatai išreikšti ng/ml (jei kitaip nenurodyta, visi rezultatai gauti tiriant serumo mėginius, paimtus į mėgintuvėlius be gelio pertvarų ar krešėjimą skatinančių priedų).

Pranešamų rezultatų intervalas: 2–100 ng/ml

Tyrimas kontroliuojamas remiantis vidiniu standartu sukurtu naudojant sertifikuotas medžiagas ir matavimo procedūras.

Analitinis jautrumas: tuščio matavimo riba (aukščiausia reikšmė, kurios galima tikėtis tiriant mėginį, neturintį analitės; riba nustatyta remiantis CLSI EP17-A17): 0,19 ng/ml

Aptikimo riba (mažiausia tyrimo aptinkama analitės koncentracija; riba nustatyta remiantis CLSI EP17-A17): 0,45 ng/ml

Funkcinis jautrumas: (koncentracija esant 20% variacijos koeficientui (CV), nustatytam remiantis CLSI EP17-A17 ir CLSI EP5-A218): 0,81 ng/ml

Prozonos efektas: nėra iki 60 300 ng/ml.

Tikslumas: sudvejinti mėginiai buvo tirti 20 dienų kurso metu, dviem tyrimo ciklais per dieną, iš viso – 40 tyrimo ciklų ir 80 kartotinių tyrimų (žr. lentelę „Precision“).

Linijiškumas: skiedžiami mėginiai gali neišlaikyti griežto linijiškumo dėl osteokalcino skilimo produktų buvimo (tyrimo duomenis žr. lentelėje „Linearity“).

Atstatomumas: buvo ištirti mėginiai, santykiu 1:19 sumaišyti su trimis skirtingos koncentracijos (101, 201 ir 402 ng/ml) osteokalcino tirpalais (žr. lentelę „Recovery“, kurioje pateikiami gauti duomenys).

Specifiškumas: tyrime naudojami antikūnai yra labai specifiški intaktiniam osteokalcinui16 (žr. lentelę „Specificity“).

Bilirubinas: didesnė nei 100 mg/l konjuguoto ir nekonjuguoto bilirubino koncentracija gali sąlygoti interferenciją tyrime, nulemdama klaidingą reikšmių sumažėjimą (gauti duomenys pateikiami lentelėje „Bilirubin“).

Hemolizė: gali sąlygoti interferenciją tyrime, kai jos lygis viršija 150 mg/dl ribą, nulemdama klaidingą tyrimo rezultatų sumažėjimą (žr. lentelę „Hemolysis“).

Lipemija: trigliceridų koncentracija iki 3000 mg/dl neturi poveikio rezultatams.

Mėginio tipų sukeitimas: siekiant išmatuoti mėginio tipų sukeitimo efektą tyrimo savanorių kraujas buvo paimtas į paprastus, ličio-heparino, natrio-heparino, PST® ir SST® plastikinius vakuuminius mėgintuvėlius. Visi mėgintuvėliai pagaminti „Becton Dickinson“ kompanijoje. Vienodi atitinkamų mėginių kiekiai buvo sumaišyti su įvairiomis osteokalcino koncentracijomis, siekiant gauti reikšmes visame pranešamų rezultatų intervale, o tada atliktas IMMULITE 2000 osteokalcino tyrimas. Pagal tiesinę regresiją:

(Li-heparinas) = 1,07 (serumas) – 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Vidurkiai: 13,5 ng/ml (Li-heparinas) 14,2 ng/ml (serumas)

(Na-heparinas) = 1,01 (serumas) – 0,98 ng/ml r = 0,988, n = 44 Vidurkiai: 12,9 ng/ml (Na-heparinas) 13,7 ng/ml (serumas)

(PST) = 1,13 (serumas) – 2,14 ng/ml r = 0,984, n = 40 Vidurkiai: 14,5 ng/ml (PST) 14,7 ng/ml (serumas)

(SST) = 0,99 (serumas) – 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Vidurkiai: 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (serumas)

Metodų palyginimas: aprašomas tyrimas buvo palygintas su Nordic Bioscience Diagnostics N-MID tyrimu. Palyginimas atliktas ištyrus 71 paciento mėginius (koncentracijos intervalas: apytiksliai nuo 2,4 iki 86 ng/ml. Žr. grafiką). Pagal tiesinę regresiją:


Vidurkiai: 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID®)

Techninė Pagalba Dėl techninės pagalbos, susisiekite su vietiniu atstovu.



Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. kokybės sistema sertifikuota pagal ISO 13485:2003.

Norsk

IMMULITE 2000 Osteokalcin Anvendelsesområde: For in vitro diagnostisk bruk med IMMULITE 2000 – instrumentene til kvantitativ måling av osteokalcin i humant serum eller heparinisert plasma, som et hjelpemiddel ved overvåkning av mineral- og bein metabolismen.

Katalognummer: L2KON2 (200 tester)

Analysekode: OCN Farge: Mørk grå

Sammendrag og forklaring Osteokalcin er et K-vitamin avhengig protein med en molekylvekt på cirka 5800 dalton. Proteinet har blitt beskrevet som bein-GLA-protein (BGP) på grunn av restene av 3 gamma carboxyglutamin syre (GLA) i proteinets primæare struktur, som binder kalsium og hydroxypatit.1 Osteokalcin er et av de mest alminnelige ikke-kollagene proteiner i beinmassen, det utgjør opptil 3 %. Beinvev fornyes gjennom en dynamisk prosess med nedbrytning og dannelse av bein. Det hevdes at osteokalcin har en funksjon i forbindelse med beinvevsdannelse ettersom det produseres av osteoblaster,2 som er celler som er nødvendige for denne prosessen. I tillegg påvirkes osteokalcin direkte av kalsium regulerende hormoner (calcitonin,3 parathyroideahormone, vitamin D4-6), som er nødvendig for den normale beinmineraliseringen. Bruken av osteokalcin som en prognostisk indikator for progresjon av beinsykdommer er blitt diskutert inngående. Forhøyede osteokalcin nivåer kan oppstå i forbindelse med forskjellige sykdommer, herunder osteomalacia,7 Paget's beinsykdom,8 hyperthyreoidisme,9 primær hyperparathyroidisme og nyre osteodystrofi.10 Dessuten kan det forekomme forhøyede osteokalcin nivå ved postmenopausal osteoporose på grunn av forhøyet eller nedsatt bein omsetning. Det er blitt rapportert om nedsatte osteokalcinnivåer ved

hypoparathyroidisme11,12 og ved langtidsbehandling med kortikosteroider.13

IMMULITE 2000 Osteokalcin måler kun det intakte osteokalcinmolekylet og detekterer ikke fragmenterte former.16

Analyseprinsipp IMMULITE 2000 Osteokalcin er en kjemiluminescens enzymmerket immunometrisk analyse med dobbel binding med fast fase. Den faste fasen (kulen) er dekket med monoklonale museantistoffer rettet mot osteokalcin. Den flytende fasen består av alkalisk fosfatase (bovine kalvetarm), konjugert til polyklonalt kaninantistoff rettet mot osteokalcin, i buffer.

Pasientprøven og reagenset inkuberes sammen med den dekkede kulen i 30 minutter. I løpet av dennne tiden danner osteokalcin i prøven et antistoff sandwich- kompleks med monoklonale museantistoffer rettet mot osteokalcin på kulen og enzymkonjugert polyklonale kaninantistoffer rettet mot osteokalcin i reagenset. Ubundet pasient prøve og enzymkonjugat fjernes deretter med sentrifugal vask. Tilslutt tilsettes kjemiluminescent substrat til reaksjonskoppen med kulen, og signal dannes I forhold til det bundne enzym.

Inkubasjon: 1 × 30 minutter Tid til første resultat: 35 minutter

Prøvetaking Til behandling av lipemiske prøver anbefales bruk av en ultrasentrifuge.

Hemolyserte prøver kan tyde på feilhåndtering av prøven før mottak på laboratoriet, og resultatet må derfor tolkes med forsiktighet.

Bruk venepunksjon14 (unngå hemolyse) og tapp blod i frosne prøverør tilsatt heparin, eller uten tilsetning, noter prøvetakingstidspunkt. Rørene skal settes i isbad etter prøvetaking. Separer serum eller plasma fra cellene ved sentrifugering i en kjølesentrifuge, materialet fordeles deretter umiddelbart i plastrør og fryses.

Rør for prøvetaking fra forskjellige produsenter kan gi avvikende resultater. Dette avhenger av materialer og tilsetningsstoffer, inkludert gel eller fysiske barrierer, koagulasjonsaktivatorer og/eller


antikoagulasjonsmidler. IMMULITE 2000 Osteokalcin er ikke blitt testet med alle mulige varianter av rørtyper. I avsnittet „Altenativt prøvemateriale“ finnes opplysning om de prøverør som hsr blitt testet.

Nødvendig volum: 10 µl serum eller heparinised plasma.

Oppbevaring: 2 timer ved 2–8°C eller 30 dager ved –20°C.

Advarsler og forholdsregler Kun for diagnose in vitro.

Reagenser: Oppbevares ved 2–8°C. Destrueres i henhold til gjeldende lover og forskrifter.

Følg generelle forsiktighetsregler, og håndter alle komponenter som om de var smittefarlige. Kildemateriale fra humant blod er blitt testet og funnet negativt for syfilis, antistoffer mot HIV 1 og 2, hepatitt B-overflateantigen og antistoffer mot hepatitt C.

Natriumazid i konsentrasjoner under 0,1 g/dl er tilsatt som konserveringsmiddel. Ved avhending direkte i avløp, skyll med store mengder vann for å hindre utvikling av potensielt eksplosive metallazider i bly- og kobberrør.

Kjemiluminescent substrat: Unngå kontaminering og eksponering for direkte sollys (se pakningsvedlegg).

Vann: Bruk destillert eller deionisert vann.

Materiale som følger med Komponentene i analysekitet er tilpasset hverandre. Etikettene på innsiden av esken er nødvendige for analysen.

Osteokalcin – kulepakning (L2ON12) Med strekkode, 200 kuler, dekket med monoklonale museantistoffer rettet mot osteokalcin. Stabil ved 2–8°C t.o.m. utløpsdatoen. L2KON2: 1 pakning

Osteokalcin – reagensbeholder (L2ONA2) Med strekkode. 11,5 ml alkalisk fosfatase (bovine kalvetarm) konjugert til polyklonale kaninantistoffer rettet mot osteokalcin. Stabil ved 2–8°C t.o.m. utløpsdatoen. L2KON2: 1 beholder

Før bruk, riv av den øverste delen av etiketten ved perforeringen uten å skade strekkoden. Fjern folieforseglingen fra toppen av beholderen, dra glidehylsteret nedover og inn i sporene.

Osteocalcin – justerere (LONL, LONH) To flasker (lav og høy) med frysetørket osteokalcin i en protein/buffer matriks, tilsatt konserveringsmidler. Løs opp hver flaske med 2,0 ml destillert eller deionisert vann, sett justererne umiddelbart på is etter tilsetning. Bruk volumetriske pipetter og bland periodisk ved å rotere forsiktig til alt frysetørret materiale er helt oppløst. Det er viktig å holde justererne kalde gjennom hele denne prosessen. Stabile ved 2–8°C 1 dag etter oppløsning, eller 6 måneder (porsjonert) ved –20°C. L2KON2: 1 sett

Før justering settes de riktige etikettene på (følger med kitet) prøverørene slik at strekkoden kan leses av strekkodeleseren.

Kitkomponenter som leveres separat L2SUBM: Kjemiluminescent substrat L2PWSM: Vaskeløsning L2KPM: Rengjøringskit for prober LRXT: Reaksjonskopper (engangs)

LONCM: Kontrollmodul for osteokalcin på på to nivåer (proteinbasert)

Også nødvendig Destillert eller deionisert vann, prøverør, kontroller

Analyseprosedyre For å oppnå optimal ytelse er det viktig å utføre alle rutinemessige vedlikeholdsprosedyrer som er angitt i brukermanualen for IMMULITE 2000 instrumentene.

Les i brukermanualen for IMMULITE 2000 instrumentene for å få informasjon om klargjøring, oppsett, fortynning, justering, analysering og kvalitetskontroll.

Anbefalt justeringsintervall: 4 uker

Kvalitetskontroll: Bruk kontroller eller samleserum med minst to nivåer (lavt og høyt) av osteokalcin.

Forventede verdier En referansestudie for IMMULITE 2000 Osteokalcin som ble utført på 186


tilsynelatende friske personer gav et sentralt 95 % referanse intervall på:

< 2,0–22 ng/ml.

Disse grensene må anses som veiledende. Hvert laboratorium må etablere sine egne referanseområder.

Begrensninger Prøvene viser ikke nødvendigvis streng linearitet i fortynningsrekker ved tilstedeværelse av nedbrytningsprodukter av osteokalcin.

Heterofile antistoffer i humant serum/plasma kan reagere med immunglobulinene i denne metoden, noe som forårsaker interferens med immunologiske analyser in vitro. [Se Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: 27-33.] Prøver fra pasienter som rutinemessig eksponeres for dyr eller dyreserumprodukter, kan vise denne typen interferens, som potensielt kan gi et anormalt resultat. Disse reagensene er satt sammen for å minimere risikoen for interferens, men potensielle interaksjoner kan i sjeldne tilfeller inntre mellom sera og bestanddeler i metoden. Til diagnostiske formål skal resultatene som oppnås med denne metoden, alltid brukes i kombinasjon med en klinisk undersøkelse, pasientens sykehistorie og andre funn.

Resultatdata Se ”Tables and Graphs” for data som er representative for metodens resultater. Resultatene er uttrykt i ng/ml. (Med mindre annet er angitt, ble alle generert på serumprøver som ble tatt i rør uten gel eller tilsetning av koagulasjonsaktivatorer.)

Arbeidsområde: 2–100 ng/ml

Analysen er sporbar til en intern standard fremstilt av kvalitetsikrede materialer og måleprosedyrer.

Analytisk sensitivitet: Grense for blank (høyeste forventede verdi for en prøve uten analytt; bestemt i henhold til CLSI EP17-A17): 0,19 ng/ml

Deteksjonsgrense (laveste påvisbare konsentrasjon; bestemt i henhold til CLSI EP17-A17): 0,45 ng/ml

Funksjonell sensitivitet: (konsentrasjon med 20 % variasjons koeffisient (CV) bestemt i henhold til CLSI EP17-A17 og CLSI EP5-A218): 0,81 ng/ml

“Hookeffekt” ved høy dose: Ingen opptil 60 300 ng/ml

Presisjon: Prøvene ble analysert i duplikater i løpet av 20 dager med to kjøringer om dagen, noe som ga totalt 40 kjøringer og 80 replikater. (Se tabellen “Precision”.)

Linearitet: Prøvene viser ikke nødvendigvis streng linearitet i fortynningsrekker ved tilstedeværelse av nedbrytningsprodukter av osteokalcin. (Se tabellen “Linearity” for representative data.)

Recovery: Prøver fortynnet 1 til 19 med 3 osteokalcin løsninger (101, 201, og 402 ng/ml) ble analysert. (Se tabellen "Recovery" for representative data.)

Spesifisitet: Antistoffet har høy spesifisitet for intakt osteokalcin.16 (Se tabellen "Specificity".)

Bilirubin: Konjugert og unkonjugert bilirubin kan interferere med analysen og føre til en reduksjon i verdiene ved tilsetning i konsentrasjoner på 100 mg/l og høyere. (Se tabellen “Bilirubin” for representative data.)

Hemolyse: Kan interferere med analysen og resultere i lavere verdier ved nivåer over 150 mg/dl. (Se tabellen“Hemolysis”.)

Lipemi: Triglycerider i konsentrasjoner på opptil 3000 mg/dl har ingen innvirkning på analysen innenfor analysens presisjon.

Alternativ prøvetype: For å vurdere effekten av alternative prøvematerialer ble det tappet blod fra frivillige personer i litiumheparin-, natriumheparin-, PST® og SST® plastrør, samt rør uten tilsetning. Alle rør var produsert av Becton Dickinson. Like volumer av de samsvarende prøvene ble tilsatt ulike mengder osteokalcin for å oppnå verdier analysens arbeidsområde, deretter ble de analysert med IMMULITE 2000 Osteokalcin prosedyren. Ved lineær regresjon:

(Li Heparin) = 1,07 (Serum) – 1,60 ng/ml r = 0,979, n = 47 Middelverdi: 13,5 ng/m (Li Heparin) 14,2 ng/ml (Serum)


(Na Heparin) = 1.01 (Serum) – 0.98 ng/ml r = 0.988, n = 44 Middelverdi: 12.9 ng/ml (Na Heparin) 13.7 ng/ml (Serum)

(PST) = 1,13 (Serum) – 2,14 ng/ml r = 0,84, n = 40 Middelverdi: 14,5 ng/mL (PST) 14,7 ng/mL (Serum)

(SST) = 0,99 (Serum) – 0,59 ng/ml r = 0,990, n = 47 Middelverdi: 13,5 ng/ml (SST) 14,2 ng/ml (Serum)

Metodesammenligning: Analysen ble sammenlignet med en Nordic Bioscience Diagnostics N-MID® analyse på 71 pasienter. (Konsentrasjonsområde: cirka 2,4 to 86 ng/ml. Se figur.) Ved lineær regresjon:


Middelverdi: 15,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 30,3 ng/ml (Nordic N-MID®)

Teknisk support For kundestøtte, vennligst ta kontakt med lokal teknisk service eller din forhandler.


Produsert av Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. under kvalitetssystemet ISO 13485:2003.

Svenska

IMMULITE 2000 Osteokalcin Avsedd användning: För in vitro diagnostisk användning med IMMULITE 2000-systemens analyzers — för kvantitativ mätning av osteokalcin i humant serum eller heparinplasma, som en hjälp vid kontroll av mineral- och benmetabolism.

Katalognummer: L2KON2 (200 tester)

Testkod: OCN Färg: Mörkgrå

Sammanfattning och Förklaring Osteokalcin är ett vitamin K-beroende protein med en molekylär massa på ca 5800 Dalton. Proteinet har klassats som ett ben-GLA-protein (BGP) eftersom de tre resterna av gamma-karboxyglutaminsyra (GLA) som finns i dess primärstruktur deltar i kalcium- och hydroxyapatitbinding.1 Osteokalcin är ett av de vanligaste icke-kollagena proteinerna i benvävnad och utgör upp till 3 % av allt benprotein. Benvävnad förnyas genom en dynamisk process av nedbrytning och återbildande av ben. Osteokalcin anses delta i återbildandet av benvävnad eftersom det produceras av osteoblaster,2 celler som är nödvändiga i denna process. Dessutom påverkas osteokalcin direkt av kalciumreglerande hormoner (kalcitonin,3 paratyreoideahormon, vitamin D4-6) som är nödvändiga vid normal benmineralisering. Man har utförligt diskuterat osteokalcin som prognostisk indikator på utvecklingen av bensjukdomar. Förhöjda osteokalcinnivåer kan förekomma vid olika sjukdomar, däribland osteomalaci,7 Pagets bensjukdom8, hypertyreoidism,9 primär hyperparatyreoidism och renal osteodystrofi.10 Osteokalcinnivåerna kan även vara förhöjda vid postmenopausal osteoporos beroende på ökad eller minskad benförnyelse. Sänkta osteokalcinnivåer har rapporterats vid hypoparatyreoidism11,12 och vid långvarig kortikosteroidbehandling.13

Analysmetoden IMMULITE 2000 Osteokalcin mäter enbart den intakta osteokalcinmolekylen och detekterar inte fragmenterade former.16

Princip IMMULITE 2000 Osteokalcin är en tvåläges kemiluminiscent, immunometrisk analys med fast fas. Den fasta fasen (kulan) är coatad med monoklonal mus-anti-osteokalcin-antikropp. Vätskefasen består av alkaliskt fosfatas (bovin kalvtarm) konjugerat till polyklonal kanin-anti-osteokalcin-antikropp i buffert.

Patientprovet och reagenset inkuberas tillsammans med den coatade kulan under 30 minuter. Under denna tid bildar osteokalcin i provet ett antikropps-sandwich-komplex med monoklonal mus-anti-osteokalcin-antikropp på kulan


och enzymkonjugerad polyklonal kanin-anti-osteokalcin-antikropp i reagenset. Obundet patientprov och enzymkonjugat tvättas sedan bort. Slutligen adderas kemiluminiscent substrat till reaktionsröret med kulan och signalen genereras proportionellt mot det bundna enzymet.

Inkubationscykler: 1 × 30 minuter Tid till första resultat: 35 minuter

Provtagning Användning av ultracentrifug rekommenderas för att klarna lipemiska prover.

Hemolyserade prover kan tyda på dålig behandling av proverna innan de nått laboratoriet, därför ska resultaten tolkas med försiktighet.

Ta blod genom venpunktion14 (undvik hemolys) och fyll i vanliga provrör eller heparinrör som ska vara nedkylda i isbad. Notera tidpunkten för provtagningen. Rören ska stå i isbad efter provtagning. Separera serum eller plasma från cellerna med centrifugering i kylcentrifug, dela upp i alikvoter och frys omedelbart i plaströr.

Rör för provtagning från olika tillverkare kan ge olika värden beroende på material och tillsatser, inklusive gel- och fysiska barriärer, koagulationsaktiverare och/eller antikoagulationsmedel. IMMULITE 2000 Osteokalcin har inte testats med alla möjliga varianter på rörsorter. Se avsnittet om Alternativt provmaterial för information om de rör som har testats.

Erforderlig volym: 10 µL serum eller heparinplasma.

Förvaring: 2 timmar vid 2–8°C eller 30 dagar vid −20°C.

Varningar och Försiktighetsåtgärder För in vitro diagnostisk användning.

Reagenser: Förvara vid 2–8°C. Kassera i enlighet med gällande lagar.

Följ allmänna försiktighetsåtgärder, och hantera alla komponenter som potentiellt smittobärande. Källmaterial från humant blod testades och var icke-reaktivt för syfilis, för antikroppar mot HIV 1 och 2, för hepatit B ytantigen och för antikroppar mot hepatit C.

Natriumazid, med en koncentration mindre än 0,1 g/dL, är tillsatt som konserveringsmedel. Vid kassering, spola stora mängder vatten för att undvika bildande av potentiellt explosiva metallazider i bly- och kopparrörledningar.

Kemiluminescenssubstrat: Undvik kontaminering och exponering för direkt solljus (se instruktion).

Vatten: Använd destillerat eller avjoniserat vatten.

Medföljande Material Komponenterna består av en matchande uppsättning. Etiketten på insidan av lådan behövs för analysmetoden.

Osteocalcin Bead Pack / Osteokalcin Kulkassett (L2ON12) Med streckkod. 200 kulor, coatade med monoklonal mus-anti-osteokalcin-antikropp. Stabil vid 2–8°C t o m utgångsdatum. L2KON2: 1 förpackning

Osteocalcin Reagent Wedge / Osteokalcin Reagensförpackning (L2ONA2) Med streckkod. 11,5 mL alkaliskt fosfatas (bovin kalvtarm) konjugerat till polyklonalt kanin-anti-osteokalcin. Stabil vid 2–8°C t o m utgångsdatum. L2KON2: 1 förpackning

Före användning, dra av tejpen som säkrar locket. Var försiktig så att streckkoden inte skadas. Ta bort folieförslutningen på översidan av förpackningen och tryck ner det glidande locket.

Osteocalcin Adjustors / Osteokalcin Justerare (LONL, LONH) Två flaskor (låg och hög) med frystorkat osteokalcin i en protein-/buffertmatrix med konserveringsmedel. Rekonstituera varje flaska med 2,0 mL destillerat eller avjoniserat vatten och placera justerarna på is omedelbart efter rekonstituering. Använd volymetriska pipetter och blanda genom försiktig, regelbunden vippning tills det frystorkade materialet är fullständigt upplöst. Det är viktigt att hålla justerarna nedkylda under denna process. Stabil vid 2–8°C i 1 dag efter rekonstituering, eller i 6 månader (portionerad) vid −20°C. L2KON2: 1 uppsättning


Före justering, placera rätt etikett (medföljer i kitet) på respektive rör så att streckkoderna kan avläsas i streckkodsläsaren.

Kitkomponenter Som Levereras Separat L2SUBM: Chemiluminescent Substrate / Kemiluminescenssubstrat L2PWSM: Probe Wash / Tvättlösning L2KPM: Probe Cleaning Kit / Rengöringskit LRXT: Reaction Tubes / Reaktionsrör (engångs)

LONCM: Tvånivåkontroll med osteokalcin (proteinbaserad)

Även nödvändigt: destillerat eller avjoniserat vatten, provrör, kontroller

Metodutförande Observera att för att uppnå optimalt resultat är det viktigt att utföra allt rutinunderhåll enligt beskrivning i IMMULITE 2000-systemens operatörsmanual.

Se IMMULITE 2000-systemens operatörsmanual för: förberedelser, iordningställande, spädningar, justeringar, tillvägagångssätt för metod- och kvalitetskontroller.

Rekommenderat justeringsintervall: 4 veckor

Kvalitetskontroller: Använd kontroller eller provpooler med minst två nivåer (hög och låg) av osteokalcin.

Förväntade värden En referensintervallsstudie för IMMULITE 2000 Osteokalcin utfördes på 186 synbarligen friska vuxna personer vilket gav ett referensintervall för de mittersta 95 % på:

< 2,0–22 ng/mL.

Betrakta dessa gränser enbart som riktlinjer. Varje laboratorium ska fastställa sina egna referensintervall.

Begränsningar Proven kanske inte bibehåller strikt linearitet vid spädning på grund av nedbrytningsprodukter från osteokalcin.

Heterofila antikroppar i humant serum kan reagera med immunglobulin i reagenset, vilket orsakar interferens i in vitro immunoanalyser. [Se Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: 27-33.] I prover från patienter som rutinmässigt exponeras för djur eller djurserum kan denna typ av interferens uppträda, vilket potentiellt kan leda till onormala resultat. Dessa reagenser har anpassats för att minimera risken för interferenser, potentiell samverkan kan dock ske mellan ovanliga serum och reagenskomponenter. För diagnostisk användning ska resultaten från denna metod alltid användas i kombination med kliniska undersökningar, patientens sjukdomshistorik och andra fynd.

Resultatdata Se Tabeller och grafer för data som är representativa för metodens resultat. Resultaten uttrycks i ng/mL. (Såvida inte annat anges, baseras allt på serumprov som tagits i rör utan gelbarriär eller tillsatser av koagulationsaktiverare.)

Rapporteringsintervall: 2–100 ng/mL

Analysen är spårbar till en intern standard, tillverkad med kvalitetsmaterial och mätprocedurer.

Analytisk sensitivitet: Blankgräns (högsta värde som förväntas för ett prov utan analyt; fastställs i enlighet med CLSI EP17-A17): 0,19 ng/mL

Detektionsgräns (lägsta detekterbara koncentration; fastställs i enlighet med CLSI EP17-A17): 0,45 ng/mL

Funktionell sensitivitet: (koncentration med 20 % variationskoefficient (CV); fastställs i enlighet med CLSI EP17-A17

och CLSI EP5-A218): 0,81 ng/mL

Högdos hook-effekt: Ingen upp till 60 300 ng/mL

Precision: Proverna analyserades i duplikat under en period av 20 dagar, två körningar per dag, i totalt 40 körningar och med 80 replikat. (Se tabellen ”Precision”.)

Linearitet: Proven kanske inte bibehåller strikt linearitet vid spädning på grund av nedbrytningsprodukter från osteokalcin. (Se tabellen ”Linearity” för representativa data.)


Utbyte: Prover spädda 1:20 med tre osteokalcin-lösningar (101, 201 och 402 ng/mL) analyserades. (Se tabellen ”Recovery” för representativ data.)

Specificitet: Antikroppen är synnerligen specifik för osteokalcin.16 (Se tabellen ”Specificity”.)

Bilirubin: Om konjugerat och okonjugerat bilirubin läggs till i en koncentration av 100 mg/L eller högre kan detta störa metoden vilket leder till en sänkning av värdena. (Se tabellen ”Bilirubin” för representativa data.)

Hemolys: Kan störa metoden och orsaka en sänkning av värdena vid nivåer över 150 mg/dL. (Se tabellen ”Hemolysis”.)

Lipemi: Förekomst av triglycerider i koncentrationer upp till 3000 mg/dL har ingen effekt på resultaten, inom precisionen för metoden.

Alternativt provmaterial: För att bedöma effekten av alternativa provmaterial togs blod från frivilliga personer i litiumheparin-, natriumheparin-, PST® och SST®-plaströr samt rör utan tillsats. Alla rör kom från Becton Dickinson. Lika volymer av de matchade proverna fick tillsatser av olika mängder osteokalcin för att få värden från metodens hela rapporteringsintervall, och analyserades sedan med IMMULITE 2000 Osteokalcin. Genom linjär regression:

(Li-heparin) = 1,07 (serum) – 1,60 ng/mL r = 0,979, n = 47 Medel: 13,5 ng/mL (Li-heparin) 14,2 ng/mL (serum)

(Na-heparin) = 1,01 (serum) – 0,98 ng/mL r = 0,988, n = 44 Medel: 12,9 ng/mL (Na-heparin) 13,7 ng/mL (serum)

(PST) = 1,13 (serum) – 2,14 ng/mL r = 0,984, n = 40 Medel: 14,5 ng/mL (PST) 14,7 ng/mL (serum)

(SST) = 0,99 (serum) – 0,59 ng/mL r = 0,990, n = 47 Medel: 13,5 ng/mL (SST) 14,2 ng/mL (serum)

Metodjämförelse: Metoden jämfördes med en Nordic Bioscience Diagnostics N-MID®-metod på 71 patientprover.

(Koncentrationsintervall: ca 2,4–86 ng/mL, se graf.) Genom linjär regression:


Medel: 15,7 ng/mL (IMMULITE 2000) 30,3 ng/mL (Nordic N-MID®)

Teknisk hjälp Utanför Sverige, kontakta din nationella distributör.


Kvalitetssystemet för Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. är certifierat enligt ISO 13485:2003.

IMMULITE® is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics.

© 2012 Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved.

Origin: UK

Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom

2012-02-09

PINL2KON – 2 {15}

Changes in this Edition:

cc#EU21078, cc#EU21078A: Removed references to Osteocalcin Sample Diluent (LONZ).

Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English

Symbolforklaring Da Dansk

Sümbolite seletus Et Eesti

Simbolu skaidrojumi Lv Latviski

Kaip suprasti simbolius Lt Lietuviškai

Forklaring av symboler No Norsk

Teckenförklaring Sv Svenska


The following symbols may appear on the product labeling: / Følgende symboler kan forekomme på produktmærkningen: / Toote siltidel võivad olla järgmised sümbolid: / Uz produktu uzlīmēm var parādīties sekojoši simboli: / Produktų etiketėse gali pasitaikyti šie simboliai: / Følgende symboler kan stå på produktmerkingen: / Följande symboler kan förekomma på produktetiketten:

Symbol Definition

En: In vitro diagnostic medical device Da: Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik Et: In vitro diagnostika meditsiiniline seade Lv: Medicīniska iekārta in vitro diagnostikai Lt: In vitro diagnostinis medicininis prietaisas No: Medisinsk utstyr til in vitro diagnostisk Sv: Medicinsk utrustning för in vitro-diagnostik

En: Catalog Number Da: Katalognummer Et: Kataloogi number Lv: Kataloga numurs Lt: Katalogo numeris No: Katalognummer Sv: Katalognummer

En: Manufacturer Da: Producent Et: Tootja Lv: Ražotājs Lt: Gamintojas No: Produsent Sv: Tillverkare

En: Authorized Representative in the European Community Da: Autoriseret repræsentant i EFEt: Volitatud esindaja Euroopa Ühenduses Lv: Autorizēts pārstāvis Eiropas Savienībā Lt: Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje No: Autorisert representant i EU Sv: Auktoriserad representant inom europeiska gemenskapen

En: CE Mark Da: CE-mærke Et: CE märk Lv: CE zīme Lt: CE ženklas No: CE-merke Sv: CE-märke

Symbol Definition

En: CE Mark with identification number of notified body Da: CE-mærke og identifikationsnummer for bemyndiget organ Et: CE märk koos volitatud asutuse identifitseerimisnumbrigaLv: CE zīme ar reģistrācijas organizācijas identifikācijas numuru Lt: CE ženklas su notifikuotosios įstaigos identifikaciniu numeriu No: CE-merke med ID-nummer for teknisk kontrollorgan Sv: CE-märke med identifieringsnummer på tillståndsmyndighet

En: Consult instructions for use Da: Se den medfølgende brugsanvisning Et: Kasutamiseks tutvu juhendigaLv: Skatīt lietošanas instrukcijas Lt: Vadovaukitės naudojimo instrukcijomis No: Se bruksanvisningen Sv: Läs igenom användarinstruktionerna

En: Caution! Potential Biohazard Da: Advarsel! Potentiel biologisk smittefare Et: Hoiatus! Võimalik bioloogiline oht Lv: Uzmanību! Potenciāli bioloģiski bīstams Lt: Atsargiai! Biologiškai pavojingos medžiagos No: Forsiktig! Potensiell biologisk smittefare Sv: Viktigt! Potentiell biologisk smittorisk

En: Temperature limitation (2–8°C) Da: Temperaturbegrænsning (2–8°C) Et: Temperatuuride vahemik (2–8°C) Lv: Temperatūras diapazons (2–8°C) Lt: Temperatūros ribos (2–8°C) No: Temperaturgrense (2–8°C) Sv: Förvaringstemperatur (2–8°C)


Symbol Definition

En: Upper limit of temperature (≤ -20°C) Da: Øvre temperaturgrænse (≤ -20°C) Et: Temperatuuri ülemine piir (≤ -20°C) Lv: Temperatūras augšējā robeža (≤ -20°C) Lt: Viršutinė temperatūros riba (≤ -20°C) No: Øvre temperaturgrense (≤ -20°C) Sv: Högsta temperatur (≤ -20°C)

En: Lower limit of temperature (≥2°C) Da: Nedre temperaturgrænse (≥2°C) Et: Temperatuuri alumine piir (≥2°C) Lv: Temperatūras apakšējā robeža (≥2°C) Lt: Apatinė temperatūros riba (≥2°C) No: Nedre temperaturgrense (≥2°C) Sv: Lägsta temperatur (≥2°C)

En: Do not freeze (> 0°C) Da: Må ikke nedfryses (> 0°C) Et: Mitte külmutada (> 0°C) Lv: Nesaldēt (> 0°C) Lt: Neužšaldykite (> 0°C) No: Må ikke fryse (> 0°C) Sv: Får ej frysas (> 0°C)

En: Do not reuse Da: Må ikke genbruges Et: Mitte taaskasutada Lv: Nelietot atkārtoti Lt: Pakartotinai nenaudoti No: Ikke til gjenbruk Sv: Återanvänd ej

En: Keep away from sunlight Da: Undgå direkte sollys Et: Hoida päikesevalguse eest Lv: Izvairīties no saules staru iedarbības Lt: Saugokite nuo tiesioginių saulės spindulių No: Unngå direkte sollys Sv: Skyddas mot solljus

LOT

En: Batch code Da: Batchkode Et: Partiinumber Lv: Partija Lt: Partijos kodas No: Lotnummer Sv: Tillverkningskod

Symbol Definition

En: Contains sufficient for (n) tests Da: Indeholder tilstrækkeligt til (n) test Et: Sisaldab piisavalt materjali (n) analüüsi jaoks Lv: Saturs pietiekams (n) testiemLt: Turinio užtenka (n) tyrimų No: Inneholder nok til (n) analyserSv: Räcker till (n) antal tester

2008-01 En: Date format (year-month) Da: Datoformat (år-måned) Et: Kuupäeva formaat (aasta-kuu)Lv: Datuma formāts (gads-mēnesis) Lt: Datos formatas (metai-mėnuo)No: Datoformat (år-måned) Sv: Datumformat (år-månad)

En: Use by Da: Anvendes før Et: Kasutada kuni Lv: Izlietot līdz Lt: Naudotinas iki No: Bruk før Sv: Utgångsdatum

En: Harmful Da: Sundhedsskadelig Et: Ohtlik Lv: Kaitīgs Lt: Pavojinga No: Skadelig Sv: Hälsoskadlig

En: Corrosive Da: Ætsende Et: Söövitav Lv: Kodīgs Lt: Ėdi No: Etsende Sv: Frätande

En: Toxic Da: Giftig Et: Toksiline Lv: Toksisks Lt: Toksiška No: Giftig Sv: Giftig

En: Dangerous for the environment Da: Miljøfarlig Et: Keskonnale ohtlik Lv: Bīstams apkārtējai videi Lt: Pavojinga aplinkai No: Miljøfarlig Sv: Miljöfarlig


Symbol Definition

BEAD PACK

En: Bead Pack Da: Kuglebeholder Et: Kuulide konteiner Lv: Lodīšu Paka Lt: Rutuliukų paketas No: Kulepakning Sv: Kulkassett

TEST UNIT

En: Test Unit Da: Testenheder Et: Testüksus Lv: Testvienības Lt: Tyrimo indeliai No: Testenheter Sv: Testenheter

REAG WEDGE

REAG WEDGE A

REAG WEDGE B

REAG WEDGE D

En: Reagent Wedge Da: Reagensbeholder Et: Reagendi konteinerLv: Reaģentu Konteiners Lt: Reagento indelis No: Reagensbeholder Sv: Reagensförpackning

ADJUSTOR

En: Adjustor Da: Justeringsopløsning Et: Kalibraator Lv: Kalibrators Lt: Kalibratorius No: Justerer Sv: Justerare

ADJUSTOR L

En: Adjustor, low Da: Justeringsopløsning, lav Et: Kalibraator, madal Lv: Kalibrators, low Lt: Kalibratorius, žemasNo: Justerer, lav Sv: Justerare, låg

ADJUSTOR H

En: Adjustor, high Da: Justeringsopløsning, høj Et: Kalibraator, kõrge Lv: Kalibrators, high Lt: Kalibratorius, aukštas No: Justerer, høy Sv: Justerare, hög

Symbol Definition

ADJUSTOR AB

En: Adjustor Antibody Da: Justeringsopløsningsantistof Et: Kalibraator- antikeha Lv: Antivielas Pret Kalibratoriem Lt: Kalibratoriaus antikūnai No: Justerer- antistoff Sv: Justerarantikropp

DIL

En: Sample Diluent Da: Fortyndingsvæske til prøver Et: proovilahjendaja Lv: Paraugu Diluents Lt: Mėginių skiediklis No: Fortynningsvæske Sv: Spädningsvätska

CONTROL

CONTROL 1

CONTROL 2

CONTROL 3

En: Control Da: Kontrol Et: Kontrollmaterjal Lv: Kontrole Lt: Kontrolė No: Kontroll Sv: Kontroll

CONTROL +

En: Positive Control Da: Positiv kontrol Et: Positiivne kontrollmaterjal Lv: Pozitīvā kontrole Lt: Teigiama kontrolė No: Positiv kontroll Sv: Positiv kontroll

CONTROL + L

En: Low Positive Control Da: Positiv kontrol i lav koncentration Et: Madal positiivne kontrollmaterjal Lv: Vāji pozitīvā kontrole Lt: Silpnai teigiama kontrolė No: Lav positiv kontrollSv: Låg positiv kontroll

CONTROL –

En: Negative Control Da: Negativ kontrol Et: Negatiivne kontrollmaterjal Lv: Negatīvā kontrole Lt: Neigiama kontrolė No: Negativ kontroll Sv: Negativ kontroll


Symbol Definition

CONTROL AB

En: Control Antibody Da: Kontrolantistof Et: KontrolI antikeha Lv: Antivielas pret Kontrolēm Lt: Kontrolės antikūnai No: Kontroll-antistoff Sv: Kontrollantikropp

PRE A

PRE B

En: Pretreatment Solution Da: Forbehandlingsopløsning Et: Eeltöötluse lahus Lv: Pirmapstrādes šķīdums Lt: Paruošimo tirpalas No: Forbehandlingsløsning Sv: Förbehandlingslösning

DITHIOTHREITOL

En: Dithiothreitol Solution Da: Dithiothreitol-opløsning Et: Ditiotreitoollahus Lv: Ditiotreitola šķīdums Lt: Ditiotreitolio tirpalasNo: Ditiotreitol løsning Sv: Ditiotreitollösning

BORATE-KCN BUF

En: Borate-KCN Buffer Solution Da: Borat-KCN-bufferopløsning Et: Borate-KCN puhverlahus Lv: Borātu-KCN buferšķīdums Lt: Boro-KCN buferio tipalas No: Borat-KCN bufferSv: Borat-KCN buffertlösning

Date post:	20-Feb-2016
Category:	Documents
Upload:	rodrigo-vargas
View:	43 times
Download:	1 times

Test de Osteocalcina

Documents