REGIÓN: ORIZABA - CÓRDOBA

MEDICO CIRUJANO

DRA. MARIA DE JESUS HUERTA CORTES

DR. RAUL MARISCAL REYES

DRA. MIRIAM DEL CARMEN SANCHEZ FLORES

FORMACIÓN: BÁSICA

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA

INDICE

Practica 1 – Introducción, Material, Reglamento De RPIB...............................................3

Practica 2 – Determinación Del Colesterol HDL..............................................................12

Practica 3 – Determinación Del Colesterol LDL ..............................................................14

Practica 4 – Determinación De La Urea.........................................................................16

Practica 5 – Determinación De La Creatinina.................................................................19

Practica 6 – Determinación Del Acido Úrico...................................................................22

Practica 7 – Separación De Creatinina En Orina De 24 Hrs............................................27

Practica 8 – Formula Roja..............................................................................................31

Practica 9 – Formula Blanca...........................................................................................32

Practica 10 – Conteo De Plaquetas................................................................................33

Practica 11 – Tiempo De Sangrado................................................................................34

Practica 12 – Banco De Sangre......................................................................................37

Practica 13 – Examen General De Orina Macroscópico.................................................41

Practica 14 – Examen General De Orina Microscópico..................................................43

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PRÁCTICA # 1REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO Y EXPLICACION DE RPBI

GENERALIDADESEl laboratorio tiene una ubicación especifica dotada de espacios físicos como: área

de trabajo con medad provistas de instalaciones de agua, gas, regadera, cuarto de preparación de reactivos, almacén de reactivos y materiales, cuarto de aparatos y equipos, lavabos, pizarrones, bancos y gavetas.

Cuenta con personal de laboratorio específicamente capacitado para el trabajo de estos.

Se trabaja con reactivos químicos, equipo de reactivos de determinación cuantitativa para diagnóstico, fármacos, medios, reactivos de tinción, desinfectantes, antisépticos.

El material biológico de trabajo incluye: animales, cepas microbiológicas vivas, atenuadas y muertas, órganos, tejidos, fluidos corporales (principalmente sangre, plasma, suero y orina), heces fecales, exudados (principalmente de mucosas).

El alumno debe de contar con: Bata blanca de manga larga Guantes desechables Cubrebocas Estuche de disección Manual o libro de texto Atlas (Por ejemplo de Orina –microscopio del sedimento urinario- de

microbiología) Libreta de apuntes Lápices o plumines de colores

REGLAS BASICAS DE SEGURIDAD Usar siempre la bata Cargar la bata y los guantes en una bolsa, el cubrebocas y los pañuelos en otra No introducir ni consumir alimentos No fumar Al finalizar, dejar limpia el área de trabajo y comprobar que las llaves y válvulas de

gas queden cerradas Terminando el trabajo, lavarse minuciosamente las manos antes de salir

MANEJO DE REACTIVOS Los reactivos únicamente serán provistos por el(la) encargado(a) del laboratorio No deberán ser manejados de manera directa sino usando siempre guantes, lentes

de seguridad y material especifico para su manipulación (pipetas, espátulas, perillas, pinzas, etc) y bajo la estricta supervisión del profesor(a) o del encargado

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Las sustancias toxicas o venenosas, causticas, irritantes o que constituyan un riesgo o peligro (explosivas, inflamables, corrosivas) únicamente podrán ser manejadas por el profesor(a) o por el(la) encargado(a).

Cualquier reactivo derramado no deberá tocarse directamente para recogerlo. Llámese inmediatamente al profesor(a) y/o encargado(a) del laboratorio para que se ocupe de ello.

Nunca se proceda a utilizar un reactivo si se desconocen su identidad y manejo Toda duda acerca del manejo y disposición de un reactivo deberá ser aclarada por

el profesor(a) antes de proceder a utilizarlo.

MANEJO DE ESPECIMENES Vigilar antes de sacar los especímenes de los frascos, que el área este bien

ventilada, abrir ventanas. Portar cubrebocas. Usar lentes de seguridad. Usar guantes desechables. Siempre manejar el espécimen dentro de una charola

Nota: Si accidentalmente cae formol en los ojos y/o boca, lavar únicamente con abundante agua.

MANEJO DE PREPARACIONES O LAMINILLAS Las preparaciones o laminillas requieren ser transportadas preferentemente en

charolas. No deberá haber grasa o crema en las manos para revisar el microscopio. Marcar con plumín el campo por señalar. Nunca usar aceite de inmersión sin indicación del académico Si alguna preparación o laminilla se rompe, avisar inmediatamente al académico o

encargado(a).

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MANEJO Y DISPOSICION DE RESIDUOS BIOLOGICOS (DE ADUERDO A LA NORMA OFICIAL PARA EL MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICOS-INFECCIOSOS Y TOXICOS –MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BI-UV-OP-01- )

EN TODOS LOS CASOS DEBERA USARSE: BATA, GUANTES, CUBREBOCAS, Y SI ES NECESARIO, LENTES DE SEGURIDAD)

1. SANGRE: sangre caduca o contaminada, sangre coagulada, muestras de sangre de análisis, suero, plasma, paquete globular, depositar en RECIPIENTE HERMETICO ROJO (líquidos).

2. SANGRE: bolsas de sangre de transfusión, tubos de ensaye, algodones con sangre, se depositaran en BOLSA ROJA (sólidos).

3. PATOLOGICOS: orinas, salivas, vomito, liquido amniótico, liquido cefalorraquídeo, liquido espermal, depositar en RECIPIENTE HERMETICO AMARILLO (líquidos)

4. PATOLOGICOS: Órganos, partes del cuerpo, tejidos, heces fecales, cadáveres de animales pequeños (conejos, ratas, etc), partes corporales y desechos de animales, depositar en BOLSA AMARILLA (sólidos).

5. CEPAS Y CULTIVOS: Cultivos, inoculos, mezcla de microorganismos en medio de cultivo inoculados, caldos de cultivo con caja de Petri desechable, depositar en BOLSA ROJA (sólidos).

6. NO ANATOMICOS: Guantes, cubrebocas, cofias, gasas, torundas, algodones, abatelenguas, hisopos, aplicadores, papel, vendas, curitas, batas desechables, pañales, toallas sanitarias, espejos vaginales, dispositivo intrauterino, equipo de venoclisis sin aguja, equipo de diálisis, aserrín de camas de bioterio, se deben depositar en BOLSA ROJA (sólidos).

7. PUNZOCORTANTES: Agujas hipodérmicas, ampolletas, jeringas (con o sin aguja acoplada), lancetas, bisturíes, recipientes de vidrio rotos o intactos tales como pipetas de Pasteur, pipetas graduadas, vacutainers, tubos para sangre, placas de cultivos, cajas de Petri, portaobjetos, cubreobjetos, etc. Depositar en RECIPIENTE ROJO.

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BI UV OP 01 PARA EL MANEJO DE RESIDUOS PEIGROSOS BIOLOGICO-INFECCIOSOS Y TOXICOS

Separación y Envasado de Residuos Biológico Infecciosos

1. OBJETIVO: Separar y envasar los residuos biológicos-infecciosos que se generen en las diversas áreas que se realicen prácticas de docencia, investigación y de centro de atención medica.

2. REFERENCIAS2.1 NOM-052-ECOL-1993. Que establece las características de los residuos peligrosos, el listado de los mismos y los limites que hacen peligrosos a un residuo por su toxicidad el medio ambiente.2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece que los requisitos de separación, envasado, almacenamiento, recolección, trasporte, tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológicos-infecciosos que se generan en los establecimientos que presentan atención médica.2.3 NOM-001-ECOL-1996. Que establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas residuales en aguas y bienes nacionales.2.4 NOM-001-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los edificios, locales, instalaciones, y áreas de los centros de trabajo.2.5 NOM-004-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan, almacenen o manejen sustancias químicas capaces de generar contaminación en el medio ambiente laboral.2.6 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equilibrio de protección personal para los trabajadores.

3. POLITICAS3.1 El personal que genere los residuos deberá portar obligatoriamente el equipo básico de seguridad acorde a la actividad que esté desarrollando.3.2 Los recipientes para envasar los diferentes tipos de residuos, estarán colocados en lugares estratégicos dentro de las áreas de generación.3.3 De acuerdo al tipo y estado físico del residuo se llevara a cabo su envasado.3.4 Los recipientes para almacenamiento temporal de Residuos Biológicos no son reciclables.3.5 Los recipientes deberán estar rotulados con el símbolo de riesgo biológico.3.6 Se llevara a cabo una supervisión operativa por lo menos una vez a la semana, para observar el cumplimiento de las disposiciones oficiales e institucionales

4. DESARROLLOUna vez generado el residuo lo identifica, lo separa y lo envasa de acuerdo a la siguiente tabla

CLASIFICACION TIPO DE RECIPIENTE PARA RESIDUO

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ENVASADO

RPNE 1.2/01 SANGRE

Recipiente Hermético Rojo (líquidos)

Sangre caduca o contaminada, sangre coagulada, muestras de sangre de análisis, suero, plasma, paquete globular.

Bolsa Roja (sólidos)Bolsas de sangre de transfusión, tubos de ensaye, algodones con sangre.

RPNE 1.2/02 PATOLOGICOS

Recipiente Hermético Amarillo (liquido)

Orinas, saliva, vomito, liquido amniótico, liquido cefalorraquídeo, liquido espermal.

Bolsa Amarilla (sólidos)

Órganos, partes del cuerpo, tejidos, heces fecales, cadáveres de animales pequeños (conejos, ratas, etc.), partes corporales y desechos animales.

RPNE 1.2/03 CEPAS Y CULTIVOS

Bolsa Roja (sólidos)

Cultivos, inoculos, mezcla de microorganismos en medios de cultivo inoculados, caldos de cultivo con caja Petri desechable.

RPNE 1.2/04 NO ANATOMICOS Bolsa Roja (sólidos)

Guantes, cubrebocas, cofias, gasas, torundas, algodones, abatelenguas, isopos, aplicadores, papel, vendas, curitas, batas desechables, pañales, toallas sanitarias, espejos vaginales, dispositivo intrauterino, equipo de venoclisis sin aguja, equipo de diálisis, aserrín de camas de bioterio

RPNE 1.2/05 PUNZOCORTANTES

Recipiente Rojo

Agujas hipodérmicas, ampolletas, jeringas (con o sin aguja acoplada), lancetas, bisturíes, recipientes de vidrio rotos o intactos, tales como pipetas de Pasteur, pipetas graduadas, vacutainers, tubos para sangre, placas de cultivos, cajas Petri, portaobjetos, cubreobjetos, etc.

Recolección Interna de Residuos Peligrosos

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1. OBJETIVO: Recolectar los residuos peligrosos de las áreas de generación y enviarlas al almacén temporal respectivo.

2. REFERENCIAS2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecológico y la Protección al

Ambiente en Materia de Residuos Peligrosos2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la separación,

envasado, almacenamiento, recolección, transporte, tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológico-infecciosos que se generan en los establecimientos que prestan atención medica.

2.3 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equipo de protección personal para los trabajadores.

3. POLITICAS3.1 El personal encargado de la recolección interna deberá portar

obligatoriamente el equipo básico de seguridad personal.3.2 El personal encargado de la recolección deberá realizar esta por separado de

la recolección de los residuos biológico-infecciosos de los residuos químicos, radiactivos y municipales.

3.3 La recolección de los residuos desde el área de generación hasta el almacén temporal, se deberá llevar a cabo bajo una ruta de recolección establecida.

3.4 La recolección de los residuos deberá llevarse a cabo en horarios de bajo flujo de personas, para evitar al máximo accidente.

3.5 La recolección interna se debe llevar a cabo con materiales y equipo de seguridad de acuerdo al tipo de residuo.

3.6 Se llevara a cabo una supervisión operativa por lo menos una vez a la semana, para observar el cumplimiento de las disposiciones oficiales e institucionales.

4. DESARROLLO4.1 La recolección interna de los Residuos Peligrosos Biológico-Infecciosos se

debe realizar de acuerdo a una ruta de recolección acorde a las características de la edificación de las instalaciones de la institución.

4.1.1 Se deberán depositar los recipientes perfectamente cerrados en el carrito recolector exclusivo de Residuos Biológico-Infecciosos.

4.1.2 El personal deberá verificar en el momento de la recolección que los residuos biológico-infecciosos se encuentren perfectamente envasados

4.1.3 Los recipientes para envasar residuos de punzocortantes, los retirara solo cuando alcancen su capacidad al 90%

4.1.4 Los residuos envasados en las bolsas rojas, deben estar perfectamente cerrados, antes de ser depositados en el carrito recolector.

4.1.5 Los recipientes que contengan residuos en estado liquido deben estar perfectamente cerrados, antes de depositarlos en el carrito recolector.

4.1.6 Concluida la recolección, se dirigirá al almacén temporal, para su respectivo almacenamiento de los residuos.

4.1.7 Los carritos manuales no deben rebasar su capacidad de carga durante su uso.

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4.1.8 Una vez depositados los residuos en el almacén, se debe lavar y desinfectar el carrito recolector.

4.2 La recolección de reactivos químicos debe hacerse con cuidado para evitar algún derrame, deberán estar envasados en recipientes de acuerdo a su estado físico y a sus características físico-químicas y debidamente etiquetados de acuerdo a sus características CRETI: corrosivo, reactivo, explosivo, toxico y su símbolo universal, como requisito, para poder ser retirados del área de generación.

Almacenamiento temporal de Residuos Peligrosos

1. OBJETIVO: Almacenar temporalmente los residuos que han sido recolectados, en un área específica asignada dentro de la institución, cuidando que cumplan con las normas de seguridad e higiene.

2. REFERENCIAS2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecológico y la Protección al Ambiente en Materia de Residuos Peligrosos.2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la separación, envasado, almacenamiento, recolección, transporte, tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológico-infecciosos que se generan en los establecimientos que prestan atención medica.2.3 NOM-001-STPS-1999. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los edificios, locales, instalaciones y áreas de los centros de trabajo.2.4 NOM-002-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad para la prevención y protección contra incendios en los centro de trabajo2.5 NOM-004-STPS-1993. Relativa a los sistemas de protección y dispositivos de seguridad en la maquinaria, equipos y accesorios en los centros de trabajo.2.6 NOM-005-STPS-1998. Relativa a las condiciones de seguridad en los centros de trabajos para el mantenimiento, transporte y manejo de sustancias inflamables y combustibles.2.7 NOM-009-STPS-1999. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene para el almacenamiento, transporte y manejo de sustancias corrosivas, irritantes y toxicas en los centros de trabajo.2.8 NOM-010-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centro de trabajo donde se produzcan, almacenen o manejen sustancias químicas capaces de generar contaminación en el medio ambiente.2.9 NOM-017-STPS-1993. Relativa la equipo de protección personal para los trabajadores.2.10 NOM-026-STPS-1994. Seguridad – Colores y su aplicación.2.11 NOM-026-STPS-1997. Colores y señales de seguridad e higiene, e identificación de riesgos por fluidos conducidos por tuberías.2.12 NOM-114-STPS-1994. Sistemas para la identificación y comunicación de riesgos por sustancias químicas en los centros de trabajo.

3. POLITICAS

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3.1 El personal que maneje los residuos en el almacen temporal deberá portar obligatoriamente el equipo básico de seguridad personal.3.2 Los residuos biológico-infecciosos no podrán almacenarse con otro tipo de residuos peligrosos3.3 El almacén temporal debe contar con señalización y acceso restringido3.4 El personal responsable del almacenamiento debe tener la capacitación adecuada para esa actividad.3.5 El almacén temporal debe cumplir con los requerimientos de construcción de acuerdo a las normas oficiales mexicanas vigentes.3.6 Se llevara a cabo una supervisión operativa por lo menos una vez a la semana, para observar el cumplimiento de las disposiciones oficiales e institucionales.

4. DESARROLLO4.1 Los residuos biológico-infecciosos deberán cuantificarse y anotar los datos en las bitácoras correspondientes, previo a su almacenamiento temporal.

4.1.1 Los residuos los deberán depositar en los contenedores con el símbolo universal de riesgo biológico correspondientes, ubicados en el almacén de la siguiente manera:

Bolsas rojas: contenedores rojos. Bolsas amarillas y recipientes herméticos amarillos: en refrigeración (4°C) Recipientes de punzocortantes: en los anaqueles del almacén.

4.2 Los residuos de tipo químico antes de enviarlos a su almacenamiento se deberán tomar en cuenta su estado físico, sus características fisicoquímicas y de compatibilidad.4.3 Los residuos del área de Rayos X, deberá colocarlos en los estantes de forma segura y en la que observe la etiqueta de recipiente que contiene el residuo.

4.3.1 Las placas de Rayos X deben mantenerse fuera de toda posible humedad

4.4 Terminado de estibar los recipientes, cerrar de forma segura el almacén temporal.

Seguridad en Laboratorios y Centros de Trabajo

1. OBJETIVO: Proveer de un ambiente seguro de trabajo en los laboratorios de la Universidad Veracruzana.

2. REFERENCIAReglamento Federal de Seguridad, Higiene y Medio Ambiente de Trabajo.

3. DEFINICIONES3.1 Actividades peligrosas. Es el conjunto de tareas derivadas de los procesos de trabajo, que generan condiciones inseguras y sobreexposición a los agentes físicos, químicos o biológicos capaces de provocar daños a la salud de los trabajadores o al centro de trabajo.3.2 Contaminantes del medio de trabajo. Son los agentes físicos, químicos y biológicos capaces de modificar las condiciones del medio ambiente de trabajo,

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que por sus propiedades, concentración, nivel y tiempo de exposición o acción pueden alterar la salud de los trabajadores.3.3 Material. Es todo elemento, compuesto o mezcla, ya sea de materia prima, producto, subproducto, residuo o desecho que se utiliza o genera en las operaciones y procesos en los centro de trabajo.3.4 Materiales y sustancias químicas peligrosas. Son aquellos que por sus propiedades físicas y químicas al ser manejados, transportados, almacenados o procesados, presentan la posibilidad de inflamabilidad, explosividad, toxicidad, reactividad, radiactividad, corrosividad o reacción biológica dañina, y pueden afectar a la salud de las personas expuestas o causar daños materiales a instalaciones o equipos.3.5 Microorganismo patógeno. Organismo viviente microscópico, causante de enfermedades.

4. DESARROLLO4.1 Identificar el tipo de riesgos a los que se exponen los profesores, estudiantes, trabajadores y visitantes que ingresan a cada uno de los laboratorios y centros de trabajo.4.2 Utilizar el equipo de protección personal indicado por el responsable del laboratorio o centro de trabajo.4.3 El profesor, jefe de área y jefe de departamento son los responsables de realizar la primera demostración de cómo se debe usar el equipo de protección personal, así como de efectuar demostraciones periódicas.4.4 Dependiendo del grado de riesgo de cada área o centro de trabajo, algunos equipos de protección personal deberán ser manejados como residuos peligrosos después de su uso.4.5 Los profesores, estudiantes, trabajadores y visitantes que entran en contacto con materiales potencialmente infecciosos, deben de lavarse las manos tan pronto como sea posible. El lavado debe de hacerse vigorosamente por al menos diez segundos utilizando un detergente suave. Las manos deben de lavarse tan pronto como sea posible después de haberse quitado los guantes y antes de salir del laboratorio o centro de trabajo.4.6 Queda prohibido comer, beber, fumar, aplicarse cosméticos y manipular lentes de contacto en el laboratorio o centro de trabajo.4.7 Queda prohibido almacenar alimentos y bebidas en los refrigeradores donde se guarde material de laboratorio.4.8 Mantener ordenados los bancos de trabajo y limpiarlos con un desinfectante al menos una vez por día e inmediatamente después de un derrame de material potencialmente peligroso.4.9 queda prohibido pipetear directamente con la boca.4.10 Queda prohibido dejar que el contenido de la pipeta caiga desde la altura hasta el contenedor. Esta operación debe hacerse dejando resbalar por la pared contenedor.

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4.11 El uso de agujas y otros materiales punzocortantes debe eliminarse tanto como sea posible.4.12 Los materiales empleados en las prácticas deben de desinfectarse tan pronto como sea posible.4.13 Los derrames de sangre y fluido corporales deben de limpiarse inmediatamente con toallas absorbentes desechables, lavarse con detergente y agua, y desinfectarse con blanqueadores casero diluido a 1:10 si la superficie es porosa y 1:100 si la superficie es dura.

BIBLIOGRAFIAManual de procedimientos para el manejo de residuos peligrosos biológico-infecciosos y tóxicos

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PRACTICA # 2COLESTEROL DE ALTA DENSIDAD

(COLESTEROL HDL)

Objetivo: Determinar la aplicación clínica de la prueba. Conocer la preparación de un paciente candidato a dicha prueba. Interpretar correctamente los resultados.

Fundamento:La lipoproteína de alta densidad es el colesterol acarreado por las lipoproteínas alfa. Una concentración alta de HDL alfa-1 es una indicación de un sistema metabólico sano en una persona libre de enfermedad del hígado o intoxicación de cualquier tipo. Se considera que las lipoproteínas de alta densidad sirven como transportadoras que liberan el colesterol de los tejidos periféricos y los llevan de nuevo al hígado para su catabolia y excreción. Las HDL probablemente inhiban también la captación celular en las lipoproteínas de baja densidad. Estos dos mecanismos ayudan a explicar cómo es que las lipoproteínas de alta densidad producen una protección con relación al riesgo de una coronariopatía.Técnica:Precipitación1.-Pipetear en un tubo de ensaye:

0.2 mLReactivo B 0.5 mL

2.-Agitar y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente3.-Centrifugar durante 10 minutos a un mínimo de 4,000 RPM4.-Recoger con cuidado el sobrenadanteReacción colorimétrica5.-Dejar atemperar el reactivo A durante unos minutos a temperatura ambiente.6.-Pipetear en tubos de ensaye:

Blanco Patrón MuestraAgua destilada 50 uL --- ---

Patrón --- 50 uL ---Sobrenadante --- --- 50 uL

Reactivo A 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

7.-Agitar bien e incubar los tubos durante 30 minutos a temperatura ambiente o durante 10 minutos a 37ºC8.-Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra frente al blanco a 500 nm.

Cálculos :A muestra/ A patrón x 140 = mg/dL Colesterol HDLValores normales :

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Hombres : 30 – 60 mg/dLMujeres : 40 – 70 mg/dL

Actividades a realizar:1.- ¿Cuál es su resultado?__________________________________________________________________

2.- ¿Qué interpretación clínica tiene ese resultado?__________________________________________________________________

3.- ¿Con qué se relacionan los valores incrementado, particularmente superiores a 100 mg/dl?__________________________________________________________________

4.- ¿Con qué se relacionan los valores disminuidos, particularmente entre 20-30 mg/dl?__________________________________________________________________

5.- ¿En qué otras patologías pueden encontrarse niveles altos o bajos?__________________________________________________________________

6.- ¿Qué factores intervienen en la disminución y aumento de las HDL?__________________________________________________________________

Bibliografía consultada:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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PRACTICA NO 3COLESTEROL DE BAJA DENSIDAD

(COLESTEROL LDL)

Objetivo: Determinar la aplicación clínica de la prueba. Conocer la preparación de un paciente candidato a dicha prueba. Interpretar correctamente los resultados.

Fundamento:Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) son sintetizadas en el hígado. Se ha

demostrado que la mayor parte del colesterol almacenado en las placas ateroscleróticas se originan del LDL, Por ésta razón la concentración de LDL-Colesterol es considerada la determinación más importante dentro de los parámetros relacionados a aterosclerosis coronaria.

Las lipoproteínas de baja densidad y las poco frecuentes aterogénicas precipitan cuantitativamente. Se da una ligera coprecipitación de VLDL, pero dado que su contenido de colesterol es bajo, los valores de colesterol LDL no aumentan significativamente y no afecta a la estimación de riesgo cardiovascular.Procedimiento:El patrón no debe usarse en el paso de precipitación.1.- Precipitación:

Pipetear en tubos para centrífuga:Muestra.................................... 100 LReactivo de precipitación...... 1 000 L

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos de 4 000 r.p.m. Separar el sobrenadante y realizar la determinación de colesterol antes de que

transcurra 1 hora.

2.- Medida de Colesterol por el método CHOD-PAP Pipetear en tubos de reación:

Reactivo Blanco Patrón MuestraAgua destilada 50 L --- ---Patrón --- 50 L ---Sobrenadante --- --- 50 LReact. De Colesterol 1 000 L 1 000 L 1 000 L

Mezclar en incubar 10 minutos entre 15-25°C o 5 minutos a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra a 546 nm contra el blanco de reactivos.

Cálculos:

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Concentración de LDL-Colesterolmg/dl = Absorbancia de la muestra x 550 Absorbancia del patrónInterpretación clínica:No tratamiento requerido < de 150 mg/dlRango sospecha 150-190 mg/dlTratamiento requerido > de 190 mg/dl

Actividades a realizar:1.- Anote sus resultados:__________________________________________________________________

2.- ¿Cuál es la interpretación clínica?__________________________________________________________________

3.- ¿En qué condiciones debe presentarse un paciente para realizarse cualquier prueba relacionada con el perfil de lípidos? y ¿por qué?__________________________________________________________________

4.- ¿Cumplió su paciente con dichas condiciones?__________________________________________________________________

Bibliografía consultada:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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PRACTICA NO 4DETERMINACIÓN DE UREA

OBJETIVO:

Observar que la concentración de la urea presente en la muestra es proporcional a la intensidad del color formado.

Correlacionar los resultados con los hallazgos clínicos.

MARCO TEORICO:

La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) más abundante en el cuerpo. Los demás son la creatinina , el ácido úrico , el amonio y los aminoácidos.

La urea se produce a través de un proceso de degradación proteínica: la proteína se transforma a partir de aminoácidos en amoníaco ( desaminación oxidativa) como un producto final y de ahí en urea ( ciclo de la ornitina) dentro del hígado. Debido a que el organismo no utiliza urea, es transportada en la sangre hasta que se excreta por vía urinaria. Sus concentraciones varían fisiológicamente, dependiendo de manera directa del consumo de proteínas en la dieta ( exógeno) y del estado de hidratación ( proporción de soluto a solvente en el cuerpo), o de modo indirecto por la tasa del catabolismo tisular ( rápida degradación corporal, que incrementa el desperdicio de nitrógeno), o por la tasa de anabolismo tisular ( disminución de las concentraciones por un mayor índice de construcción tisular, como sucede durante la gestación o convalescencia) (Guyton, 1982).La urea se excreta en el filtrado glomerular y se resorbe ( probablemente por difusión) en el túbulo de la nefrona. Sólo se excreta una fracción de todo el material de desperdicio contenido en el filtrado glomerular, pero a causa de que la urea se resorbe en los túbulos de manera deficiente, se resorbe poca urea; esto es un efecto benéfico.

Los síntomas comunes a todos los padecimientos del ciclo de la urea incluyen: vómito en la lactancia, rechazo de alimentos con contenido elevado de proteínas. Ataxia intermitente, irritabilidad, letargo y retraso mental.

MATERIAL:

3 tubos de ensayo 1 pipeta de 5 ml. 1 micropipeta de 0.02 ml. 2 vasos de precipitado Espectrofotómetro Centrífuga Una parrilla

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Reactivos de la práctica

PROCEDIMIENTO:

1.- Marcar 3 tubos de ensaye: B (blanco), M (muestra) y P (patrón) y proceder como sigue:

BLANCO MUESTRA PATRONReactivo de color 2.5 ml. 2.5 ml. 2.5 ml.Suero o plasma ----- 0.02 ml -----Agua destilada 0.02 ml. ----- -----PatrónReactivo ácid0

----- 2.5 ml.

----- 2.5 ml.

0.02 ml. 2.5 ml.

2.- Mezclar bien y colocar en baño de agua en ebullición durante 1º minutos. Transferir a un baño de agua fría durante 3 minutos.3.- Determinar las absorbancias de la muestra y del patrón a 520 nm, ajustando a cero con el blanco. La coloración es estable 60 minutos.

CALCULOS: UREA = Absorbancia de la muestra ( 80) Absorbancia del patrónValores de referencia:15-40 mg/ 100ml. 2.5 a 6.6 mmol/ l

ACTIVIDADES:1. Las concentraciones séricas de urea disminuyen en:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. ¿En que consiste la azotemia?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. ¿Cuándo están elevadas las concentraciones de urea?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Caso clínico: Hiperamomemia hereditariaUn niño de seis meses comenzó con vómitos ocasionales y dejó de ganar peso. A los 8 meses y medio fue reingresado en el hospital. Las pruebas re rutina y los exámenes de laboratorio fueron normales, pero después de una semana, estaba adormecido, su temperatura ascendió hasta 39.4 °C, su pulso estaba elevado y su hígado había aumentado de tamaño. El electroencefalograma era claramente patológico. Como el lactante no podía retener la leche que le era suministrada, se le administró glucosa por vía intravenosa. Mejoró rápidamente, saliendo del coma al cabo de 24 horas. Los análisis de orina mostraron concentraciones anormalmente altas de glutamina y uracilo, lo que sugirió la presencia de una elevada concentración de amoníaco en sangre, posteriormente confirmada por el laboratorio.

1. ¿ La hiperamonemia hereditaria puede originarse por defectos en genes para enzimas del ciclo de la urea?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. ¿ Que enzimas podrían estar afectadas?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. ¿Por qué estaba elevada la concentración urinaria de glutamina?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. ¿Cuál sería el tratamiento actual de un paciente similar?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFÍA:Montgomery R. Bioquímica: Casos y texto. Quinta edición. Editorial Mosby Year BookWolfe publishing.

Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio clínico y pruebas de diagnóstico. Editorial Manual Moderno

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PRACTICA NO 5DEPURACION DE CREATININA

Los métodos utilizados para determinar la creatinina se basan fundamentalmente en la reacción de Jaffé descrita en el año 1886. En este método, la creatinina reacciona con una solución alcalina de picrato sódico para formar un complejo coloreado anaranjado (lectura a 520 nm), más intenso cuanto mayor cantidad de creatinina se encuentra en el espécimen.

Esta técnica se realiza tanto a punto final como en periodos iniciales más cortos (cinética), en los que se eliminan algunas de las interferencias más corrientes. Estos métodos han logrado amplia aceptación a nivel práctico. Otras técnicas que se han utilizado, pero que en la actualidad están más en desuso son la cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC por sus siglas en inglés) y los métodos químicos que utilizan 3,5 dinitrobenzóico (DNBA).

Método: Picrato Alcalino sin Desproteización, a tiempo fijo.

Fundamento:La creatinina en solución alcalina reacciona con el picrato para formar un

compuesto rojo anaranjado (reacción de Jaffé), color que es medido por la lectura de dos puntos.

Reactivos: Equipo SERA-PAK Creatinina. 1 Picrato. 2 Hidróxido sódico Patrón: Creatinina 2 mg/dl (176.8 mmol /L).

Preparación de la Solución de Trabajo:Mezclar un volumen del reactivo 1 con un volumen del reactivo 2.

Componentes y concentraciones:Picrato sódico: 22 mmol/LHidróxido sódico: 0.125 N

Almacenamiento y estabilidad. Los reactivos 1 y 2 son estables a temperatura ambiente (15°C – 25°C) hasta la fecha de caducidad que viene indicada en la etiqueta. Una vez abierto el frasco, los reactivos pueden utilizarse durante 6 meses mantenidos en los envases originales bien cerrados.En la etiqueta está indicada la fecha de caducidad del patrón guardado a 2°C–8°C. La solución de trabajo es estable durante 8 semanas a 2°C–8°C y durante 2 semanas a 15°C–25°C.

Procedimiento:

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Longitud de onda: 510 nm (490 nm – 520 nm)Cubeta: 1 cm de paso de luzTemperatura: 30° CLectura: Contra aire

La solución de trabajo se debe atemperar hasta temperatura ambiente antes de ser utilizada.

1- Medir en sendos tubos de ensaye:PATRÓN MUESTRA

Solución de trabajo 2.0 ml 2.0 mlAtemperar hasta 30°C. AñadirMuestra(suero) - 0.20 mlPatrón 0.20 ml -

2- Conectar inmediatamente el cronómetro y mezclar. Leer las absorbencias (A1) del patrón y de la muestra contra aire a los 20 segundos. Repetir las lecturas (A2) exactamente 60 segundos después de la primer lectura.

Resultados:

Suero/ Plasma

2.0 = mg/dl de creatinina

A muestra XA patrón 176.8 = creatinina mmol /L

Orina

A muestra. X1.0 mg/dl.( x dil.de 50)

A patrón.

Valores de Referencia:

SueroHombres:

0.7 mg/dl – 1.2 mg/dl 61 mol/L – 106 mol/L

Mujeres:0.5 mg/dl – 1.0 mg/dl 44 mol/L – 88 mol/L

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OrinaHombres:

21 mg/kg de peso/24h26 mg/kg de peso/24h

Mujeres:16 mg/kg de peso/24h

22 mg/kg de peso/24h Notas:

El método es lineal hasta 20 mg/dl de creatinina, para concentración mayores, mezclar 1 volumen de la muestra con 1 volumen igual de solución salina fisiológica. Repetir el análisis y multiplicar el resultado por 2.

Control de Calidad.

Sueros Control SERA- CHEK, Normal y Anormal.

Bibliografía1.- Woo j. Donald Cannon, 19812. Diagnósticos y tratamientos Clínico por el laboratorio. Edit Masson- Sal vat 9ª Edic.

2.- SERA- PAK, 1998 Creatinina Método al Picrato Alcalino. Bayer Corporatión.

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PRACTICA NO 6

DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO.

OBJETIVOS:

Determinar la concentración sérica de ácido úrico. Interpretar los resultados obtenidos. Conocer las causas y consecuencias fisiológicas de la sobreproducción de ácido úrico.

FUNDAMENTO:

El ácido úrico de la muestra , previa desproteinización con ácido túngstico, reacciona en medio alcalino de carbonato de sodio con el reactivo de fosfo-litio-túngstico dando una coloración azul ( azul de tungsteno ) que es proporcional a la concentración de ácido úrico de la muestra.Método empleado: W Wiener lab. ( método colorimétrico para la determinación cuantitativa de ácido úrico en suero u orina.)

INTRODUCCIÓN:

El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas.Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como sexo, dieta , origen étnico, constitución genética, embarazo. Niveles anormales de ácido úrico en suero son índices de desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos en su eliminación.

Las purinas que se ingieren como proteínas complejas son degradadas en el intestino y absorbida a la sangre que las transporta al hígado donde se catabolizan al producto de desecho ácido úrico. Una vez formado, el ácido úrico no se degrada más sino que va a formar parte del “ depósito de ácido úrico” del cuerpo. Alrededor de 50 – 75 % de éste depósito es excretado todos los días. El ácido úrico es filtrado en su totalidad y excretado en el glomérulo, y luego resorbido completamente en el túbulo proximal. Luego, el filtrado se secreta de modo activo en el túbulo distal,, que es responsable del total de urato urinario. Las concentraciones sanguíneas y urinarias varían con la ingestión de purinas, proteínas y energéticos . Una segunda vía de excreción es por la luz intestinal. Se piensa que hasta una tercera parte de la cantidad de ácido úrico que sale cada día del cuerpo lo hace por esta última vía.

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La medición de ácido úrico en el suero es muy útil para el diagnóstico de la gota, que es un síndrome provocado por la acumulación de cristales de ácido úrico en las articulaciones y en el riñón.

MATERIAL

5 tubos de ensaye Una gradilla Pipetas de 1, 5 ml. Suero Reactivos según la técnica de Wiener lab. Centrífuga Espectrofotómetro Una micropipeta Baño de agua a 22-28 °C Reloj

METODO

1.- Técnica para suero.Debe efectuarse la desproteinización de la siguiente manera: En un tubo de centrífuga colocar 4 ml. de agua destilada, 0.5 ml. de ácido tungstico y 0.5 ml. de suero. Agitar vigorosamente, esperar 5 minutos y centrifugar.

1. En tres tubos de ensaye marcados con B (blanco) S (standard) y D (desconocido) colocar:

B S DDesproteinizado - - 2.5 ml.Agua destilada 2.5 ml. 5 ml. -Standard - 50l -Reactivo 1 0.5 ml. 1 ml. 0.5 ml.Reactivo 2 0.5 ml. 1 ml. 0.5 ml.

2. Mezclar por inversión y colocar en baño de agua entre 22 y 28 °C entre 30 y 45 minutos después, leer en espectrofotómetro a 660 nm, llevando el aparato a cero con el blanco.

CALCULOS: Ácido úrico ( mg/ l) = D x f f = 100 mg/l S

Valores de Referencia:Hombres: 35 a 70 mg/l

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Mujeres: 25 a 60 mg/l

ACTIVIDADES:

1. ¿Qué es la gota?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. ¿Cuál es la diferencia entre gota primaria y secundaria?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Las concentraciones séricas de ácido úrico disminuyen en :____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. ¿ Que alteraciones metabólicas pueden traer como consecuencia un aumento en los niveles séricos de ácido úrico?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. ¿ Son necesarias las purinas y pirimidinas en la dieta?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6. Mencione los principales medicamentos utilizados para el tratamiento de la gota.____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Caso clínico. Gota

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Un hombre de 53 años relata que su padecimiento actual se inició con una inflamación aguda del ortejo mayor del pie derecho e intenso dolor, el cual se intensificaba con el frío y el movimiento: Además, asegura que poco antes de presentar este episodio agudo incremebtó el consumo de carne, vísceras, leguminosas y vino de mesa en abundancia.Fue tratado con fenilbutazona, pero presentó daño gástrico, por lo que se cambió el medicamento por alopurinol y naproxén.

1. ¿Qué alteraciones metabólicas pueden traer como consecuencia un aumento en los niveles séricos de ácido úrico?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. ¿Son necesarias las purinas y pirimidinas en la dieta?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. ¿ Son importantes los antecedentes familiares de este paciente?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. ¿Qué régimen dietético le recomendaría a esta persona para mejorar sus niveles de ácido úrico?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. ¿Cómo se relaciona la ingestión de etanol con el incremento de la concentración plasmática de ácido úrico?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFÍA:

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Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio Clínico y pruebas de diagnóstico. Editorial Manual Moderno.

Ana María López Colome. Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Medicina UNAM. Editorial Mc. Graw Hill Interamericana. Montgomery R. Bioquímica: Casos y texto. Quinta edición. Editorial Mosby Year Book

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PRACTICA NO 7DETERMINACION DE DEPURACION DE CREATININA EN ORINA DE 24 HRS

INDICACIONES PARA LA CORRECTA RECOLECCIÓN DE LA ORINA DURANTE UN PERIODO DE 24 HORAS:

El período de recolección es de 24 horas, esto quiere decir un día completo. Se debe conseguir un recipiente (botella, garrafa, etc) preferentemente de plástico

de dos o más litros, debidamente limpio. El día que empieza la recolección de orina se le llama día inicial y el siguiente, que es

cuando llevará la orina al laboratorio, se llama día final. A las 6 de la mañana del día inicial debe orinar y desechar la orina para dejar su

vejiga vacía. Esta es la hora cero, a partir de este momento, toda la orina que se forme debe guardarse.

Todas las veces, orine en un cómodo, si lo tiene, o en cualquier otro utensilio que le pueda servir para esto, y deposite la orina en la botella o garrafa.

Procure NO DESPERDICIAR, no derramar y no tirar la orina. Cualquier cantidad que no se colecte, por pequeña que ésta sea, afectará el resultado del estudio.

La orina recolectada debe guardarse en refrigeración. El día final o sea, el día que llevará su orina al laboratorio, debe orinar por última vez

a las 6 de la mañana y esta orina debe colectarse con el resto que tiene en refrigeración. Aquí se cumplen 24 horas y se termina el procedimiento de recolección.

El último paso es presentarse en el laboratorio con TODA la orina recolectada.

Fundamento:Es el mismo que para creatinina en suero.

Reactivos:Se utiliza el mismo equipo que para creatinina en suero.

Muestra biológica: Orina: diluida 1: 50 con agua destilada.

Procedimiento.Longitud de onda: 510 nm (490 nm – 520 nm)Cubeta: 1 cm de paso de luzTemperatura: 30°CLectura: Contra aire

La solución de trabajo se debe atemperar hasta temperatura ambiente antes de ser utilizadas.

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1.- Medir en sendos tubos de ensaye:

PATRÓN MUESTRA

Solución de trabajo 2.0 ml 2.0 ml

Atemperar hasta 30°C. Añadir

Muestra (orina dil.) - 0.20 ml

Patrón 0.20 ml -Conectar inmediatamente el cronómetro y mezclar. Leer las absorbencias (A1) del patrón y de la muestra contra aire a los 20 segundos. Repetir las lecturas (A2) exactamente 60 segundos después de la primer lectura.

Resultados:

Orina.

A muestra. X1.0 mg/dl.( x dil.de 50)

A patrón.

Cálculos para obtener la depuración de creatinina en orina de 24 horas: (ml/min en 24 horas)

Volumen minutado (ml/min) x creatinina en orina (mg/dl)Creatinina sérica (mg/dl)

Ejemplo: Volumen de orina recolectada: 1800 ml. Volumen de orina minutada:1800 entre 1440 min (24 h) R = 1.25 ml/min Creatinina en suero: 3.8 mg/dl Creatinina en orina: 12.5 mg/dl (X dilución de 50) R = 625 mg/dl

Dep. Creatinina en 24 h. = 1.25 ml/min X 625 mg/dl 3.8 mg/dl = 205 ml/minReporte de la prueba.-

Volumen = mililitros.Volumen minutado= ml/minCreatinina en orina= mg/dl.Creatinina sérica = mg/dl.Depuración= ml/min. en 24 horas.

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Valores de Referencia.

Edad (años) Hombres Mujeres1 – 20 40 – 95 ml/min 43 – 97 ml/min

15 – 30 50 – 156 ml/min 74 – 133 ml/min30 – 40 20 – 175 ml/min 53 – 153 ml/min40 – 50 45 – 132 ml/min 29 – 133 ml/min50 – 60 40 –123 ml/min 25 – 122 ml/min60 – 70 25 – 116 ml/min 35 – 93 ml/min70 – 80 35 – 95 ml/min 30 – 75 ml/min80 – 90 18 – 76 ml/min 19 – 75 ml/min90 – 99 15 – 50 ml/min 24 –55 ml/min

Importancia de los Resultados:

Las cifras bajas de depuración pueden ser consecuencia de disminución del flujo sanguíneo por riñones (junto con choque u obstrucción de arteria renal), necrosis tubular aguda, glomérulo nefritis aguda o crónica, pielonefritis bilateral avanzada y crónica y, lesiones avanzadas en ambos riñones como en el caso de enfermedad poliquística, tuberculosis y cáncer o nefroesclerosis. La insuficiencia congestiva cardiaca y la deshidratación intensa pueden hacer también que la depuración de creatinina disminuya a cifras menores de lo normal.

Los índices elevados de depuración de creatinina por lo regular tienen poca importancia diagnóstica.

Factores que interfieren en los resultados:

Los fármacos que pueden afectar la depuración de creatinina incluyen anfotericina B, clorotiacidas, furosemida y gentamicina. La ingestión de fenacetina por largo tiempo puede hacer que disminuya la depuración de creatinina.

La ingestión de una dieta rica en proteínas antes del estudio y el ejercicio físico agotador durante el período de reunión, pueden incrementar la excreción de creatinina.

El incumplimiento de las restricciones anteriores a la prueba, el hecho de no reunir toda la orina durante el periodo especificado o no almacenar la muestra adecuadamente, pueden interferir en la cuantificación precisa de los resultados.

ACTIVIDADES POR REALIZAR:

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PRACTICA NO. 8FORMULA ROJA

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PRACTICA NO. 9FORMULA BLANCA

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PRACTICA No. 10PRUEBAS DE COAGULACION

(CONTEO DE PLAQUETAS)(Técnica de Brecher y Cronkite)

OBJETIVOS: Determinar la aplicación clínica de la prueba. Conocer la preparación de un paciente candidato a dicha prueba. Interpretar correctamente los resultados. Conocer la “Cascada de Coagulación”

FUNDAMENTO :Se destruyen los eritrocitos con una solución de oxalato de amonio al 1.0 por ciento y se hace cuenta directa de plaquetas con el microscopio de contraste de fase en una cámara de Neubauer de fondo plano.

MATERIAL: Oxalato de amonio Merthiolate incoloro (filtrar antes de usar) Diluyentes para plaquetas, 309ª Oxalato de amonio al 1.0 por ciento Cámara de fondo plano Clay Adams 2908. Material biologico: 1.0 ml. de sangre venosa o capilar con anticoagulante en un tubo

plástico.

TÉCNICA: Cargar de sangre una pipeta par glóbulos rojos hasta la marca 0.5 y llenar con liquido

de dilución hasta la marca 10.1 Agitar. Cargar una cámara de Neubauer plana. Dejar reposar 10 min. en cámara húmeda. Contar las plaquetas en toda la cuadricula central con el microscopio de contraste de

fases y a mayor aumento.

La cifra obtenida se multiplica por 2 000 y nos da el número de plaqueta por milímetro cúbico.Valores Normales: 150,000 - 450 000 plaquetas por mm3

ACTIVIDADES POR REALIZAR

Bibliografia:Brecher, g y Cronkite e. p. “Morphology and enumeration of human blood platelets”. j. appl. physto. s. Pags. 365. Año1990.

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PRACTICA NO 11(TIEMPO DE SANGRADO )

(Técnica de Duke)

Fundamento:La lesión de un pared vascular produce vasoconstricción refleja inmediata y temporal, aglutinación de las plaquetas en el sitio de lesión, las plaquetas liberan serotonina, una sustancia que causa vasoconstricción mas prolongada de los vasos lesionados, además de las plaquetas y de los tejidos se libera tromboplastina que desencadena el proceso que termina con la coagulación de la sangre.Material: Lancetas desechables. Tiras de papel filtro Cronómetro de mano.

Técnica: Limpie con una torunda con alcohol el lóbulo de la oreja y espere a que se evapore el

exceso de alcohol. Puncione el lóbulo de la oreja con una lanceta desechable. Seque la sangre (sin tocar la piel) cada 15 segundos hasta que cese la hemorragia.

Valores Normales:1-3 minutos.Bibliografia:Duke,w.w: “The relation of blood platelets to hemorragic disease”. j.a.m.a. 55:1195, 1910

(TIEMPO DE COAGULACION)Fundamento:Las hemorragia patológicas en un individuo pueden deberse a alteraciones en cualquiera de los tres mecanismos de los que depende la hemostasia normal. La presente prueba tiene una utilidad muy limitada, ya que solo es útil para detectar deficiencias graves del factor de coagulación.Material: Dos tubos de ensaye limpios, de 75 x 10 mm, del mismo calibre, marcados en el nivel

de 1 mm. Un cronómetro. Un Baño María a 37°C, o un matraz al vacío con agua a la misma temperatura. Utensilios y materiales para punción venosa.

Técnica: Extraiga 2-3 ml de sangre venosa. Ponga a funcionar el cronómetro tan pronto como la sangre comience a entrar en la

jeringa. Llene con ésta sangre cada uno de los dos tubos de ensayo hasta la marca de l ml.

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Taponé ambos tubos con algodón no absorbente. Colóquelos en el baño María a 37°C (o en el matraz al vacío) Después de 3 minutos saque el primer tubo. Incline el tubo hasta un plano de 45° para observar si la sangre se ha coagulado. Si no se ha coagulado regréselo al baño María y efectúe el procedimiento anterior

cada 30 segundos hasta que esté realizada la coagulación. Examine el segundo tubo inmediatamente después de que se halla coagulado la

sangre del primero. Nota: Por lo general, la sangre del segundo tubo se coagula muy rápidamente después de que lo ha hecho la sangre del primero.

Detenga el cronómetro o tome nota del tiempo transcurrido.

Se notifica como tiempo de coagulación de la sangre el correspondiente al segundo tubo.Registre el tiempo de coagulación en minutos, redondeándolo al medio minuto más cercano.Valores normales:5 - 12 minutos.

(RETRACCIÓN DEL COAGULO)

FUNDAMENTO:La rapidez e intensidad de la retracción del coágulo dependen del número y calidad de las plaquetas, y del volumen de glóbulos rojos.MATERIAL: Tubos de centrifuga graduados de 15 ml. Alambre de hierro de 1.5mm de diámetro de manera que tenga seis vueltas por cada

2.5 cm la espiral deberá tener unos 5 cm. de largo. Material biológico: 5 ml. de sangre sin anticoagulante.

TÉCNICA: Se deposita la sangre en un tubo de centrifuga hasta la marca de 5 ml. Se coloca dentro de el tubo de alambre enroscado. Se incuba el tubo en baño de agua a 37 °c y una hora después de haberse formado el

coágulo se saca el tubo del baño. Se quita el alambre permitiendo el drenaje del suero. El volumen del suero y de las células exprimidas del coágulo se lee directamente en el

tubo; el resultado se expresa como porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

Ejemplo: si después de la coagulación 5 ml. de sangre suministraron 3 ml. de liquido la relación es de 3 x 100/5= 60 por ciento.Valores Normales:48 - 64 por ciento.

Bibliografia:

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Ackroyd, j.f., “Method of estimating clot retraction with a survey of normal values and the changes that ocurr with menstruaction”, Clin. sc. lond, 7; 231, 1949Macfarlene r. g. : “A simple method for measuring clot retraction”, Lancet,1: 1199, 1939.

Actividades a realizar (como resultado de las tres actividades):1.- ¿En qué casos realizaría usted éstas pruebas?

2.- ¿Es posible realizar algunas en su consultorio?, ¿Porqué?

3.- Esquematice usted la llamada: “Cascada de Coagulación”

Bibliografía consultada:

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PRACTICA NO 12BANCO DE SANGRE

GRUPOS SANGUINEOS Y PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA

Objetivos: Conocer la inmunología aplicada al Banco de Sangre. Conocer las indicaciones específicas de una transfusión sanguínea. Conocer las pruebas necesarias para solicitar una transfusión sanguínea.

GRUPOS SANGUINEOS (ABO) Y FACTOR RH:Para identificar los antígenos de los grupos A, B y O se usan antisueros contra ellos y su presencia se pone de manifiesto por la aglutinación de los eritrocitos.Reactivos:

- Sueros antiA, antiB y antiD.

Material biológico: - 5 ml. de sangre venosa sin anticoagulante - 3 ml. con anticoagulante.

Técnica: - Centrifuge la muestra a 3 000 RPM durante 3 minutos (sin anticoagulante).- Independientemente coloque en un portaobjetos tres gotas de sangre con

anticoagulante.- Aplique los sueros antiA, antiB y antiD (una gota de suero diferente a cada gota

de sangre)- Homogeneizar con un aplicador la gota de sangre con la gota del suero

respectivo.- Agite suavemente durante 30 segundos la placa portaobjetos con movimientos

circulares de balanceo.- Lea los resultados durante los dos primeros minutos.

Resultados:

GRUPOS SANGUINEOSDETERMINACION DIRECTA: REACTIVOS TRANSCLONE

AntiA AntiB AntiDA + 0B 0 +

AB + +O 0 0

RH + +RH— 0

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PRUEBA DE COMPATIBILIDAD EN SOLUCIÓN SALINA:

Fundamento:Las pruebas de compatibilidad sanguínea deben efectuarse antes de una transfusión. Además de la selección de sangre compatible en los sistemas ABO y Rh, se incluyen las pruebas cruzadas que se llevan a cabo con eritrocitos del donador y suero del receptor (prueba Mayor) y con eritrocitos de receptor y suero del donador (prueba Menor).Rutinariamente las reacciones se efectúan en solución salina, en éste medio los anticuerpos que aglutinan son principalmente de clase IgM.Técnica:1.- Marque cuatro tubos, dos con S (salina 1 y 2) y dos con A (albúmina 1 y 2) y adicione dos gotas de suero fresco a cada uno (el obtenido de la centrifugación anterior: gpos. y Rh).

- Para prueba cruzada Mayor (S 1) usar suero del receptor.- Para prueba cruzada Menor (S 2) usar suero del donador.

2.- En dos tubos independientes de los anteriores adicionar una gota de eritrocitos en solución salina fisiológica, del receptor y del donador (tomados del fondo de los tubos centrifugados). Lavar los eritrocitos de 3 a 4 veces con solución salina fisiológica (centrifugando a 3 000 RPM cada vez).

- En la prueba Mayor (S 1) usar eritrocitos lavados del donador.- En la prueba Menor (S 2) usar eritrocitos lavados del receptor.

3.- Adicionar una gota de los eritrocitos lavados a cada uno de los tubos S1 (suero receptor adicionar eritrocitos del donador = fase Mayor) y S2 (suero donador adicionar eritrocitos del receptor = fase Menor).4.- Centrifugar inmediatamente a 1 000 RPM por 20 segundos.5.- Evaluar a trasluz la aglutinación.

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD CON REACTIVO DE ALBUMINA:

Fundamento:Las pruebas cruzadas tienen como función poner de manifiesto la presencia de anticuerpos incompletos dirigidos contra antígenos de sistemas menores o secundarios, y deben realizarse en condiciones que favorezcan la reacción antígeno-anticuerpo y en consecuencia la aglutinación.El empleo de albúmina bovina facilita la detección de anticuerpos de clase IgG, ya que éstos se ven impedidos en su efecto aglutinante, por el potencial Z.

Técnica:1.- Utilice los tubos marcados con A 1 y A 2 de la fase anterior.2.- Adicione eritrocitos lavados de manera cruzada: suero del receptor con eritrocitos del donador (fase Mayor) y suero de donador con eritrocitos del receptor (fase Menor).3.- Agregar una gota de albúmina a los tubos marcados con A1 y A2.4.- Centrifugar inmediatamente a 1 000 RPM por 20 segundos.5.- Evaluar a trasluz si hay aglutinación.

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Si ambas son negativas continuar con la siguiente prueba:

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD CON REACTIVO DE COOMBS:

El suero de Coombs se utiliza para poner de manifiesto anticuerpos que no tienen actividad aglutinante y que se encuentran unidos a la membrana del eritrocito.Si hay aglutininas en el suero del receptor aglutinarán los glóbulos rojos del donador, y si hay aglutininas en el suero del donador, aglutinarán los glóbulos rojos del receptor.

Técnica:1.- Lavar cuatro veces los eritrocitos de los tubos S 1, 2 y A 1, 2.2.- Escurrir el sobrenadante del último lavado y homogeneizar en la gota remanente.3.- Adicionar una gota de reactivo de Coombs y mezclar.4.- Incubar a 37° C por 5 minutos.5.- Retirar y centrifugar.6.- Evaluar a trasluz si hay aglutinación.

ACTIVIDADES A REALIZAR:

1.- ¿Qué es una transfusión?

2.- ¿Cuántos tipos de transfusión conoce?

3.- ¿Qué importancia tiene el conocimiento del grupo sanguíneo y factor Rh?

4.- ¿En qué casos, que no se trate de una transfusión, solicitaría usted el Coombs indirecto?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5.- Explique los mecanismos de la reacción de:Sueros antiA, antiB y antiD:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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Reactivo de albúmina:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Reactivo de Coombs:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6.- ¿En qué casos indicaría una transfusión sanguínea?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

7.- Explique los tratamientos alternativos a una transfusión sanguínea.____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Bibliografia consultada:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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PRACTICA NO 13EXAMEN GENERAL DE ORINA MACROSCOPICO

OBJETIVOS: Que el alumno aprenda cómo realizar el examen, y sea capaz de valorar cada uno de los parámetros adecuadamente.

FUNDAMENTOS: El examen de la orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rápido. Actualmente es posible analizar hasta nueve pruebas diferentes en menos de 60 segundos con la introducción de tiras reactivas simples y múltiples, cintas de pruebas y tabletas.

INTRODUCCION:

MATERIAL Y EQUIPO:ProbetaRefractómetroTubo de ensaye de 13x100 mmTiras reactivas

TECNICAVolumen: En una probeta medir el volumen de la muestra reportándolo en mililitros.Densidad: Procedimiento con tira reactiva (Tiempo de lectura 45 segundos).

Sumergir la tira reactiva en una muestra de orina y comparar con la escala cromática la variación en el cambio de color. Esta prueba se basa en el cambio aparente de pKa de ciertos polielectrolitos pretratados en relación con la concentración iónica. En presencia de un indicador los colores varían desde un verde-azul oscuro en orinas de baja concentración, hasta un verde amarillo en muestras de alta concentración iónica. Este método permite la determinación de la gravedad especifica (densidad) de la orina entre 1.000 a 1.030.

En general existe una correlación que no rebasa las 0.005 unidades de los valores obtenidos con el método del índice de refracción. En orinas con un pH ≤ 6.5, se puede mejorar la exactitud añadiendo 0.005 al valor obtenido. Si la lectura es instrumental el ajuste es automático.

Procedimiento técnico con el refractómetro:

Limpiar y secar la superficie de la tapa y el prisma del refractómetro, depositar una gota de orina y cerrar la tapa, dirigir el instrumento hacia la fuente de luz y leer la escala de densidad en el límite luz - oscuridad. La escala permite lecturas de hasta 1.035, de modo que las muestras con valores superiores deben ser diluidas.

COLOR, OLOR Y ASPECTO: Se hace una inspección ocular de la muestra de orina anotando las observaciones correspondientes.

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ACTIVIADES POR REALIZAR:

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PRACTICA NO 14EXAMEN MICROSCOPICO DE LA ORINA

OBJETIVOFUNDAMENTOSINTRODUCCION

MATERIAL Y EQUIPO:PortaobjetosCubreobjetos de 22x22Tubos de ensaye de 13x100Microscopio

TECNICA1. En un tubo de ensaye de 13 x 100 mm medir una muestra de orina previamente

mezclada y centrifugar a 3000 r.p.m. durante 10 minutos.2. Decantar el sobrenadante en otro tubo.3. Poner aproximadamente una gota de sedimento resuspendido sobre un porta-objetos

y colocar un cubre-objetos, evitando la formación de burbujas. La cantidad de sedimento no debe ser excesiva que flote en cubreobjetos.

4. La observación debe hacerse lo más pronto posible para evitar que se seque y se altere su contenido.

5. Hacer la observación microscópica a bajo y alto aumento, cuidando de variar continuamente el foco y de seguir en forma sistemática los cuatro lados del cubre. Los elementos más comunes a investigar son:

6. Leucocitos por la tira reactiva. (tiempo de lectura 2 minutos)

Los leucocitos granulocíticos contienen esterasas que catalizan la hidrólisis del derivado éster ácido aminopirrol, liberando 3-hidroxi-5-fenil pirrol; este último compuesto de pirrol, reacciona con una sal de diazonio. El color de reacción negativa es crema y violeta para las positivas.

Leucocitos por observación microscópica:Por las interferencias que pueden darse con la tira reactiva, se recomienda hacer la identificación microscópica de leucocitos en seco fuerte contando el número de ellos en 10 campos representativos.

Bacterias, levaduras, cristales y cilindros; se cuentan en forma apreciativa y se reportan desde escasos hasta abundantes.

Células epiteliales escamosas; sólo se informan si son numerosas.

Eritrocitos; de estar presentes, se informan desde escasos hasta abundantes.

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ACTIVIADES POR REALIZAR

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