UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
“Desinfección de cepillos dentales inoculados con Streptococcus mutans usando
vinagre, clorhexidina y cloruro de cetilpiridinio”
Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del
título de Odontóloga
AUTORA: ORTIZ URIBE NATHALIE CAROLINA
TUTOR: DR. JUAN PABLO JARAMILLO BURNEO
Quito, abril 2017
ii
©DERECHOS DE AUTOR
Yo, ORTIZ URIBE NATHALIE CAROLINA, en calidad de autora de la tesis realizada
sobre “Desinfección de cepillos dentales inoculados con Streptococcus mutans usando
vinagre, clorhexidina y cloruro de cetilpiridinio”, autorizo a la Universidad Central
Del Ecuador a hacer uso del contenido total o parcial que me pertenecen, con fines
estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artículos 5, 6, 8, 19 y de las demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su
Reglamento.
También autorizo a la Universidad Central del Ecuador realizar la digitalización y
publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el artículo 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
…………………………………………..
ORTIZ URIBE NATHALIE CAROLINA
C.I. 1726158858
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Juan Pablo Jaramillo Burneo en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,
modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por NATHALIE CAROLINA ORTIZ
URIBE cuyo tema es “DESINFECCIÓN DE CEPILLOS DENTALES
INOCULADOS CON STREPTOCOCCUS MUTANS USANDO VINAGRE,
CLORHEXIDINA Y CLORURO DE CETILPIRIDINIO”, previo a la obtención del
título de Odontóloga: considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios
en el campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte
del tribunal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo
sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad
Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito, a los 12 días del mes de abril de 2017.
………………………………………………..
DR. JUAN PABLO JARAMILLO BURNEO
DOCENTE - TUTOR
C.I. 1713048310
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL
El Tribunal constituido por: Dr. Alejandro Farfán y Dra. Sonia Vaca. Luego de receptar
la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título de Odontóloga
presentado por la señorita Nathalie Carolina Ortiz Uribe
Con el título:
“Desinfección de cepillos dentales inoculados con Streptococcus mutans usando
vinagre, clorhexidina y cloruro de cetilpiridinio”
Emite el siguiente veredicto: APROBADO
En la ciudad de Quito, a los 12 días del mes de abril del 2017
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre Calificación Firma
Presidente Dr. Alejandro Farfán 20 ……….……………….
Vocal 1 Dra. Sonia Vaca 20 .………………………..
v
DEDICATORIA
Con mis pies sobre la tierra de dedico todos mis logros mientras Dios y la vida me lo
permitan, a ti mi papito amado, mi Marce, ahora más que nunca eres mi fortaleza para
luchar y seguir adelante.
vi
AGRADECIMIENTOS
A Dios por mostrarme su amor y permitirme llegar hasta aquí.
A mis padres Marcelo y Betty por ser mis grandes amigos, por ser incondicionales, por
brindarme su amor, apoyo y confianza durante todas las etapas de mi vida, gracias por
tanto.
A mi hermano Alejo, por su ayuda, su ejemplo y por hacerme ver la vida un poquito
diferente.
A mis amigos, Iván y Jhonatan, por haber compartido conmigo toda esta etapa
universitaria, demostrando en cada acto su gran corazón y por siempre apoyarnos a
pesar de las dificultades.
A mi tía Moni por todas sus enseñanzas acerca de esta profesión y a su familia por estar
siempre pendientes y prestos a ayudar.
A la Universidad Central del Ecuador, por permitir mi formación profesional durante
estos 5 años.
A la Facultad de Odontología y sus docentes por todos los conocimientos brindados.
A mi tutor el Dr. Juan Pablo Jaramillo, por toda su asistencia y colaboración para
concluir de la mejor manera esta investigación.
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA ........................................................................................................................... v
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................vi
LISTA DE TABLAS ..................................................................................................................... ix
LISTA DE FIGURAS ................................................................................................................... x
LISTA DE ANEXOS .................................................................................................................... xi
RESUMEN ................................................................................................................................... xii
ABSTRACT ................................................................................................................................ xiii
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 1
CAPÍTULO I ................................................................................................................................. 3
1. EL PROBLEMA ................................................................................................................... 3
1.1. Planteamiento Del Problema ......................................................................................... 3
1.2. Objetivos de la Investigación ........................................................................................ 4
1.2.1. Objetivo General ................................................................................................... 4
1.2.2. Objetivos Específicos ............................................................................................ 4
1.3. Justificación ................................................................................................................... 5
1.4. Hipótesis ........................................................................................................................ 6
1.4.1. Hipótesis de Investigación (H1) ................................................................................ 6
1.4.2. Hipótesis Nula (H0) .................................................................................................. 6
CAPITULO II ............................................................................................................................... 7
2. MARCO TEÓRICO .............................................................................................................. 7
2.1. Cavidad oral .................................................................................................................. 7
2.1.1. Ecología Oral......................................................................................................... 7
2.1.2. Microorganismos Orales. ...................................................................................... 8
2.1.3. Streptococcus Mutans ........................................................................................... 9
2.2. Biofilm Dental ............................................................................................................. 11
2.2.1. Estructura del Biofilm Dental.............................................................................. 11
2.2.2. Formación y Desarrollo del Biofilm Dental ........................................................ 12
2.2.3. Clasificación del Biofilm .................................................................................... 13
2.2.4. Control del biofilm dental ................................................................................... 13
2.3. Caries Dental ............................................................................................................... 14
2.3.1. Prevalencia .......................................................................................................... 15
2.3.2. Etiología .............................................................................................................. 15
2.3.3. Fisiopatología .......................................................................................................... 18
2.4. Contaminación de los cepillos dentales....................................................................... 19
2.4.1. Fuentes de contaminación de los cepillos dentales ............................................. 19
viii
2.4.2. Tipos de microorganismos que habitan en los cepillos dentales ......................... 20
2.5. Desinfección De Cepillos Dentales ............................................................................ 22
2.5.1. Sustancias Desinfectantes ................................................................................... 23
A. Vinagre (Ácido Acético) ............................................................................................. 23
B. Gluconato De Clorhexidina ......................................................................................... 24
C. Cloruro De Cetilpiridinio ............................................................................................ 26
CAPITULO III ............................................................................................................................ 27
3. METODOLOGÍA ............................................................................................................... 27
3.1. Tipo de investigación .................................................................................................. 27
3.2. Población de estudio y muestra .................................................................................. 27
3.2.1. Universo y muestra de estudio ............................................................................ 27
3.2.2. Criterios de inclusión .......................................................................................... 28
3.2.3. Criterios de exclusión .......................................................................................... 28
3.3. Variables ..................................................................................................................... 29
3.3.1. Conceptualización de las variables ...................................................................... 29
3.3.2. Operacionalización de variables .......................................................................... 30
3.4. Aspectos éticos, jurídicos y metodológicos ................................................................ 31
3.5. Materiales y Métodos .................................................................................................. 31
3.6. Estandarización ........................................................................................................... 32
3.7. Procedimiento ............................................................................................................. 33
3.7.1. Activación de la cepa de Streptococcus Mutans ATCC® 25175 ........................ 33
3.7.2. Estándar de turbidez para la suspensión del inóculo ............................................... 34
3.7.3. Preparación de los cepillos ...................................................................................... 35
3.7.4. Prueba de actividad antimicrobiana ........................................................................ 36
3.7.5. Eliminación y Manejo De Desechos ....................................................................... 41
3.8. Manejo y recolección de datos .................................................................................... 42
CAPITULO IV ............................................................................................................................ 43
4. RESULTADOS ............................................................................................................... 43
4.1. Análisis Estadístico ................................................................................................. 43
CAPITULO V ............................................................................................................................. 50
5. DISCUSIÓN ................................................................................................................... 50
6. CONCLUSIONES .......................................................................................................... 52
7. RECOMENDACIONES ................................................................................................. 53
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................ 54
ANEXOS..................................................................................................................................... 59
ix
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Resultados del número total de colonias ...................................................................... 43
Tabla 2. Pruebas no paramétricas: Pruebas de Kolmogorov - Smirnov y Shapiro – Wilk......... 44
Tabla 3. Análisis descriptivo de los resultados. ......................................................................... 45
x
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Representación del Biofilm Dental............................................................................. 12
Figura 2. Etiología de la caries dental Modelo de Keyes modificado por Newbrun, 1978 ........ 16
Figura 3. Activación de la cepa de Streptococcus mutans ......................................................... 33
Figura 4. Incubación de los medios de cultivo con Streptococcus mutans ................................ 34
Figura 5. Preparación de la suspensión para la estandarización ................................................. 35
Figura 6. Estandarización del Inoculo Bacteriano ..................................................................... 35
Figura 7. Esterilización mediante luz ultravioleta ...................................................................... 35
Figura 8 Inoculación del microorganismo en los cepillos dentales........................................... 36
Figura 9. Lavado de cepillos dentales para eliminar exceso de microorganismos ..................... 37
Figura 10. Sustancias químicas para estudio .............................................................................. 37
Figura 11. Cepillos dentales sometidos a tratamiento .............................................................. 38
Figura 12. Toma de muestra de las soluciones de los cepillos tratados ..................................... 39
Figura 13. Incubación de los medios de cultivo. ........................................................................ 40
Figura 14. Recuento de colonias A. Colonias incontables. B. Ausencia de colonias. Uribe ..... 40
Figura 15. Recuento de colonias C. Colonias contables. D. Una colonia. ................................. 41
Figura 16. Cámara de flujo laminar. ......................................................................................... 41
Figura 17. Comparación de medias ........................................................................................... 45
Figura 18. Prueba Estadística de Kruskal-Wallis. ...................................................................... 46
Figura 19. Comparación por parejas de la prueba de Kruskal-Wallis. ....................................... 47
Figura 20. Segunda Prueba Estadística de Kruskal-Wallis. ....................................................... 48
Figura 21. Segunda Comparación por parejas de la prueba de Kruskal-Wallis. ........................ 49
xi
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1. Certificado de aprobación del SEISH - UCE .............................................................. 59
Anexo 2. Solicitud para la realización del análisis microbiológico ............................................ 60
Anexo 3. Factura de la compra de la cepa .................................................................................. 61
Anexo 4. Activación de la cepa de acuerdo al fabricante ........................................................... 62
Anexo 5. Ficha para la recolección de datos ............................................................................... 63
Anexo 6. Certificado de realización de las pruebas microbiológicas ......................................... 64
Anexo 7. Certificado de los resultados del análisis microbiológico ........................................... 65
Anexo 8. Certificado de esterilización ........................................................................................ 66
Anexo 9. Protocolo de manejo de desechos ................................................................................ 67
Anexo 10. Autorización para el uso de instalaciones de depósito de desechos .......................... 68
Anexo 11. Certificado de renuncia al trabajo estadístico ............................................................ 69
Anexo 12. Resultado del sistema anti plagio URKUND ............................................................ 70
Anexo 13. Certificado de traducción oficial. .............................................................................. 71
Anexo 14. Carta de declaración de conflicto de interés ............................................................. 72
xii
TEMA: “Desinfección de cepillos dentales inoculados con Streptococcus mutans usando
vinagre, clorhexidina y cloruro de cetilpiridinio”.
Autora: Nathalie Carolina Ortiz Uribe
Tutor: Dr. Juan Pablo Jaramillo Burneo
RESUMEN
El cepillo dental conforme se lo utiliza se convierte en un reservorio de microorganismos
de la cavidad oral y del entorno, siendo potencialmente patógenos principalmente en
pacientes vulnerables o en poblaciones que no realizan un recambio oportuno en largos
períodos de tiempo. Uno de los principales agentes infecciosos presente en el cepillo
dental es el Streptococcus mutans, que es considerado actualmente como el principal
agente cariogénico, que conjuntamente con otros factores etiológicos interviene en la
aparición de la caries dental. Debido a la gran prevalencia de esta patología, se busca
encontrar medidas preventivas para mantener una adecuada salud bucal y así
implementar un método complementario en la higiene oral. El propósito del presente
estudio fue identificar y comparar la efectividad antibacteriana del vinagre (ácido acético)
y el enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio frente al enjuague bucal con gluconato
de clorhexidina, como posibles estrategias de desinfección del cepillo dental. Se
utilizaron 32 cepillos dentales que fueron inoculados con Streptococcus mutans ATCC®
25175™. Los cepillos fueron divididos en cuatro grupos y sometidos a tratamiento
durante 15 minutos: un grupo tratado con vinagre o ácido acético al 5%, otro con enjuague
bucal con cloruro de cetilpiridinio al 0.05% y dos grupos control, el enjuague bucal con
clorhexidina al 0.12% como control positivo y agua destilada como control negativo.
Posteriormente se hizo recuento en UFC/0.1ml de los microorganismos remanentes en
los cepillos dentales. Frente al Streptococcus mutans el cloruro cetilpiridinio al 0.05%
presentó mejor efecto antibacteriano que el vinagre al 5%. Sin embargo los dos
tratamientos evaluados mostraron efectividad para eliminar S. mutans de los cepillos
dentales.
PALABRAS CLAVE: STREPTOCOCCUS MUTANS, DESINFECCIÓN, ÁCIDO
ACÉTICO, CLORURO DE CETILPIRIDINIO, CEPILLO DENTAL, PREVENCIÓN.
xiii
TEMA: “Disinfection of toothbrushes inoculated with Streptococcus mutans using
vinegar, chlorhexidine and cetylpyridinium chloride”.
Autora: Nathalie Carolina Ortiz Uribe
Tutor: Dr. Juan Pablo Jaramillo Burneo
ABSTRACT
According to how it is used, the toothbrush can turn into a reservoir of microorganisms
from the oral cavity and its environment, which are potentially pathogenic, mainly in
vulnerable patients or in communities that do not replace the toothbrushes periodically
over long periods of time. One of the main infectious agents present in the toothbrush is
the Streptococcus mutans, which is currently considered the main cariogenic agent and
that, along with other aetiological factors, intervenes in the appearance of dental caries.
Due to the great prevalence of this pathology, it is necessary to find preventive measures
to maintain an appropriate oral health and, therefore, implement a complementary method
in the oral hygiene. The purpose of this study was to identify and compare the
antibacterial effectiveness of vinegar (acetic acid), mouthwash with cetylpyridinium
chloride and mouthwash with chlorhexidine gluconate, as possible toothbrush
disinfection strategies, 32 toothbrushes were inoculated with Streptococcus mutans
ATCC® 25175™. The toothbrushes were divided into four groups and subjected to
treatment for 15 minutes: a group was treated with vinegar or 15% acetic acid, another
with mouthwash with 0.05% cetylpyridinium chloride and two other control groups with
mouthwash with 0.12% chlorhexidine as positive control and distilled water as negative
control. Subsequently, the remnant microorganisms in the toothbrushes were counted in
UFC/0.1 ml. Facing the Streptococcus mutans, the 0.05% cetylpyridinium chloride
showed a better antibacterial effect than the 5% vinegar. However, the two analyzed
treatments proved to be effective to eliminate the S. mutans from toothbrushes.
KEY WORDS: STREPTOCOCCUS MUTANS, DISINFECTION, ACETIC ACID,
CETYLPYRIDINIUM CHLORIDE, TOOTHBRUSH, PREVENTION.
1
INTRODUCCIÓN
La Higiene Oral son todas aquellas medidas de control y limpieza de la cavidad bucal,
incluyendo dientes, encías, tejidos de sostén y recubrimiento, paladar, lengua, labios, oro
faringe y glándulas. Consiste en combinar métodos mecánicos y químicos para remover
y controlar la formación del biofilm, que es una biopelícula formada por colonias
bacterianas, células epiteliales descamadas, leucocitos, agua y restos alimenticios, que se
adhieren fijamente a los dientes y superficies blandas de la cavidad oral (1,2).
Es así que el biofilm dental constituye un importante factor de riesgo en el desarrollo de
la Caries y Enfermedad Periodontal, que a nivel mundial han sido consideradas como las
enfermedades de mayor peso en la historia de la morbilidad bucal (3). La Caries dental
es el principal padecimiento odontológico en el mundo, es una enfermedad multifactorial
que afecta entre el 95 al 99% de la población mundial (4).
Se caracteriza por la desmineralización y destrucción del órgano dentario, originado por
la acumulación de colonias bacterianas en la superficie dental, principalmente el
Streptococcus Mutans que fermenta los azúcares de la dieta, dando como producto
metabólico ácidos, los cuales actúan en el esmalte dental disolviendo rápidamente el
mineral, en consecuencia éste se debilita y es más propenso a padecer algún tipo de
patología (5,6,7).
Para mantener una adecuada Salud Bucal, debemos practicar medidas personales de
prevención, como es el cepillado dental, la higiene interproximal mediante seda dental,
así también uso de colutorios y simultáneamente es recomendable recibir medidas de
control a nivel profesional. Sin embargo no todas las personas cumplen con estos hábitos,
ya sea por desconocimiento, descuido o motivos económicos (8,9).
El cepillado dental representa el principal método para mantener la higiene oral, no
obstante estudios han demostrado que varios microorganismos orales y ambientales
pueden crecer en los cepillos de dientes aún después de enjuagarlos a chorro, debido a
que sus cerdas se contaminan con bacterias, saliva, sangre y desechos orales. Su
almacenamiento en ambientes sanitarios y el uso oral, lo determinan como una fuente de
contaminación y re contaminación de la cavidad oral (10,11).
Un factor importante dentro de la contaminación microbiana de cepillos dentales es su
tiempo de recambio, lo más recomendable es realizarlo cada tres meses, después de un
2
resfriado o infección oral; esto debido a que pueden permanecer microorganismos en las
cerdas del cepillo y así reactivarse la infección. A pesar de lo mencionado la mayoría de
las personas utilizan el cepillo dental durante largos períodos de tiempo (12).
Con estos antecedentes, el presente estudio tuvo como finalidad identificar la eficiencia,
del vinagre y del enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio frente al enjuague bucal con
clorhexidina como agentes químicos de desinfección sobre cepillos dentales que han sido
inoculados in vitro con cepas de Streptococcus Mutans, considerado como el principal
agente cariogénico.
Se han elegido estas sustancias ya que tienen varios usos por su potente actividad
antimicrobiana y son de fácil acceso para la comunidad.
3
CAPÍTULO I
1. EL PROBLEMA
1.1.Planteamiento Del Problema
Los cepillos dentales al ser los instrumentos más utilizados para la higiene oral, están
expuestos a la acumulación de microorganismos provenientes de la cavidad bucal y del
medio ambiente donde son almacenados, por lo tanto, los cepillos pueden ser
considerados como un vector de transmisión de enfermedades que favorece la
introducción de patógenos en la cavidad oral (13,14).
De acuerdo a lo mencionado, es recomendable hacer el recambio en períodos cortos de
tiempo considerando que la vida útil de un cepillo común no sobrepasa los 3 meses (15).
Sin embargo, en muchas ocasiones las personas no hacen el recambio oportuno de los
cepillos dentales por la ausencia de recursos económicos y la falta de conocimiento acerca
de las enfermedades ocasionadas por el uso inadecuado del mismo (8).
Actualmente la caries dental es un problema frecuente que afecta a la mayoría de
población de forma severa, sin importar edad, género, raza; la incidencia mayoritaria se
da en personas de estratos sociales más bajos y se encuentra relacionada directamente con
un bajo nivel educativo, malos hábitos higiénicos y la inestable situación económica que
impide la utilización de las adecuadas medidas para prevenir esta alteración, provocando
destrucción de las piezas dentarias y consecuentemente el deterioro de la cavidad oral.
Dentro de todos los factores causales de dicha patología el principal agente relacionado
es el Streptococcus mutans (6).
Con esta problemática nos encaminamos en la búsqueda de medidas preventivas para
disminuir la carga de este microorganismo cuando implica un alto riesgo cariogénico,
proponiendo un método efectivo para desinfección de los cepillos dentales mediante la
utilización de agentes químicos de fácil acceso para la comunidad como el vinagre y el
enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio que difiere del estándar (14).
Por lo tanto se genera la siguiente interrogante:
4
¿Cuál de estos agentes químicos tendrá más eficiencia en la desinfección de
cepillos dentales inoculados con Streptococcus mutans?
1.2.Objetivos de la Investigación
1.2.1. Objetivo General
Determinar la eficiencia del vinagre y el cloruro de cetilpiridinio frente a la
clorhexidina como sustancias para desinfección de cepillos dentales inoculados
con Streptococcus Mutans.
1.2.2. Objetivos Específicos
Identificar el efecto del vinagre (ácido acético) al 5% como sustancia
desinfectante sobre cepillos dentales inoculados con Streptococcus Mutans
mediante recuento en placa.
Determinar si el enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio al 0.05% es efectivo
como sustancia desinfectante sobre cepillos dentales inoculados con
Streptococcus Mutans mediante recuento en placa.
Comprobar la efectividad del enjuague bucal con gluconato de clorhexidina al
0.12 % como sustancia desinfectante sobre cepillos dentales inoculados con
Streptococcus Mutans mediante recuento en placa.
5
1.3.Justificación
Los hábitos y costumbres en muchos hogares con respecto al cuidado e higiene del cepillo
dental no son adecuados, frecuentemente estos después de su uso son colocados en
ambientes húmedos como porta cepillos o en superficies de lavamanos, donde el cabezal
al estar descubierto está en contacto directo con cerdas de otros cepillos dentales y existe
un alto riesgo de contaminación por residuos alimenticios, restos de pastas dentales,
saliva, sangre, insectos, además de bacterias fecales presentes en el ambiente sanitario
donde suelen ser almacenados (11,16).
En muchos casos los cepillos son trasladados de un lugar a otro en condiciones no
óptimas, como en carteras, equipajes, carros, bolsas, entre otros, donde habrá mayor
presencia de patógenos, lo que conlleva a la reproducción de microorganismos que se
alojan en las cerdas dentales que posteriormente se relacionan con la cavidad bucal
cuando la persona nuevamente hace uso de ese cepillo, desconociendo la serie de
enfermedades que puede ocasionar si no se le da un correcto manejo (17).
Dentro de las enfermedades infecciosas que afectan a los seres humanos, la caries dental
probablemente es la más prevalente y es considerada como el principal padecimiento
odontológico, a pesar de los grandes avances científicos y las técnicas terapéuticas de la
odontología moderna que facilitan su detección temprana ésta sigue siendo uno de los
mayores problemas de salud pública (4).
El proceso de caries se caracteriza por una avanzada destrucción del órgano dentario
causada por excesiva acumulación de colonias bacterianas, el principal agente
responsable es el Streptococcus Mutans que fermenta los carbohidratos y azúcares de la
dieta diaria para dar como producto metabólico ácidos que se adhieren a la superficie
dental y comienzan el proceso de desmineralización (4,18).
Una de las estrategias que los organismos de salud proponen en la prevención de caries
dental, es hacer control sobre el Streptococcus Mutans eliminándolo del cepillo dental
para evitar la autoinoculación (11). A nivel social existe desconocimiento sobre la
importancia acerca de la limpieza apropiada, el almacenamiento y el reemplazo de los
cepillos dentales para mantener la boca limpia y saludable (16).
Dentro de este contexto se propone la utilización de agentes químicos sobre cepillos
dentales contaminados con Streptococcus Mutans como el vinagre comercial que
6
contiene ácido acético al 5 % que tiene múltiples usos en el hogar, resultando accesible,
económico y no tóxico a tal concentración y el enjuague bucal con cloruro de
cetilpiridinio al 0.05% utilizado como antiséptico oral, para de esta manera disminuir los
microorganismos patógenos que habitan en las cerdas de los cepillos y así prevenir
enfermedades bucales principalmente la caries dental, sobre todo en poblaciones
vulnerables, comunidades de escasos recursos y a familias en general del Ecuador (14).
1.4.Hipótesis
1.4.1. Hipótesis de Investigación (H1)
- El vinagre al 5% (ácido acético) y el enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio
al 0.05% cuentan con efectividad antibacteriana que favorecerá la desinfección de
los cepillos dentales inoculados con cepas de Streptococcus Mutans ATCC®
25175™.
1.4.2. Hipótesis Nula (H0)
- El vinagre al 5% (ácido acético) y el enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio
al 0.05% NO cuentan con efectividad antibacteriana que favorezca a la
desinfección de los cepillos dentales inoculados con cepas de Streptococcus
Mutans ATCC® 25175™.
7
CAPITULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Cavidad oral
La boca es una cavidad virtual, que en su mayoría está ocupada por el órgano lingual; la
conforman la bóveda palatina en la parte superior, el piso de la boca y la lengua en la
parte inferior, lateralmente los carrillos, en la parte posterior el istmo de las fauces y hacia
adelante los labios que la cierran. Por tanto la cavidad oral está conformada por un
conjunto de órganos que están asociados entre sí y que cumplen funciones específicas,
como la masticación, deglución, fonación, etc. (19).
Al estar formada por un conjunto de tejidos habrá numerosos microorganismos asociados
a ellos, por esta razón, la cavidad oral humana es considerada en la actualidad como un
ecosistema dinámico, que permite la subsistencia de gran cantidad de microorganismos
que habitan en ella, estos se desprenden de los tejidos duros y blandos tanto de la cavidad
oral como de la nasofaringe y permanecen en la saliva (7).
2.1.1. Ecología Oral
Ecología oral se entiende como el estudio de la interacción de los microorganismos
presentes en la cavidad oral con el medioambiente que los rodea. Se estima que habitan
de 500 a 700 especies de distintas bacterias en la cavidad oral; investigaciones muestran
que la microbiota oral normal viene a ser un importante componente para la salud bucal,
de igual manera un desequilibrio de la ecología oral intervendrá en el desarrollo de
enfermedades (20).
La integridad de la mucosa, estructura dental, descamación epitelial, flujo salival, dieta,
hábitos de higiene, son algunas de las características propias de cada individuo que
intervienen directamente con la presencia de microorganismos en el ecosistema oral, el
cual constantemente y en períodos cortos de tiempo produce cambios en sus niveles de
pH, variaciones de temperatura y de presencia de oxígeno como también la disponibilidad
de nutrientes.
8
2.1.2. Microorganismos Orales.
Los microrganismos presentes en un medio determinado como la cavidad oral constituyen
la microflora normal o nativa, que está presente desde nuestro nacimiento y nos
acompañan hasta nuestro último día, son importantes porque ayudan directa o
indirectamente, al desarrollo normal de la fisiología, la nutrición y las defensas del
huésped, por lo tanto están relacionados con la salud de en una persona (21). Sin embargo,
cuando existe un desequilibrio en el ecosistema oral, la microflora está involucrada en la
patogenia de enfermedades tales como la caries y periodontitis (22).
Los diferentes microorganismos que habitan en la cavidad oral, viven en nichos
ecológicos o ecosistemas primarios, que tienen distintas características tanto físicas,
químicas y nutricionales, que permiten el desarrollo de unas u otras especies. Los nichos
ecológicos se instauran en superficies mucosas, en el dorso de la lengua, en superficies
dentarias, en el surco gingival, también en materiales biocompatibles de restauración, en
aparatos de ortodoncia, en prótesis, etc. (20).
Existen factores que condicionan las características y composición de cada nicho, estos
dependerán del huésped y de las condiciones de crecimiento de los microorganismos.
Dentro de las características de los ecosistemas primarios o nichos tenemos variabilidad,
especificidad, heterogeneidad, cantidad, entre otras (7).
La mayoría de microorganismos de la cavidad bucal son cocos y bacilos Gram (+) y Gram
(-), aerobios, anaerobios facultativos y anaerobios estrictos, según el nicho que lo
albergue. A continuación se recogen los principales microorganismos que constituyen la
microbiota oral (23).
Cocos Gram (+). Los Streptococcus del grupo viridans son los más aislados de todos los
ecosistemas orales se encuentran en una alta proporción en tejidos blandos, saliva y en la
lengua (23,24); Streptococcus mutans y Streptococcus sanguis se hallan a nivel de la placa
dentaria. Streptococcus mitis se adhiere tanto a los dientes como a las mucosas; S.
salivarius predomina en la mucosa lingual. En menor proporción se hallarían
Staphylococcus spp, Enterococcus spp, y los anaerobios estrictos Peptostreptococcus spp
(7).
9
Cocos Gram (-). Se han identificado diversas especies, aerobias del género Neisseria y
anaerobias estrictas pertenecientes al género Veillonella pueden ser aisladas en todos los
hábitats orales (23,24).
Bacilos Gram (+). Entre los gérmenes anaerobios pueden hallarse Actinomyces spp. que
se encuentran a nivel supra e infragingival, en la placa bacteriana y en fisuras de la lengua,
también se encuentran algunas especies de Lactobacillus (7) y en menor cantidad,
Corynebacterium matruchotii, Propionibacterium, Eubacterium y Bifidobacterium (23).
Bacilos Gram (-). Anaerobios estrictos como Porphyromonas spp., siendo una bacteria
periodontopatógena que no se encuentra normalmente en periodontos sanos, Prevotella
spp., Fusobacterium spp., Leptotrichia buccalis. De igual manera se pueden aislar
bacterias anaerobias facultativas: Actinobacillus, Haemophilus spp, Eikenella,
Capnocytophaga spp y algunas especies del género Campylobacter (23).
Otros microorganismos. Pueden además aislarse especies de Mycoplasma spp y
levaduras del género Cándida spp, Treponemas comensales, virus como Herpes simple
tipo 1 y tipo 2, Cytomegalovirus, Coxackie virus y escasos protozoos como las especies
Trichomonas tenax y Entamoeba gingivalis (23).
Existe también la flora suplementaria que se halla ocasionalmente y en número bajo, sin
embargo, si las condiciones del hábitat sano se modifican por la interacción de factores
de riesgo, un miembro de la flora suplementaria puede pasar a formar parte a la flora
nativa. Se puede encontrar otro tipo de flora denominada transeúnte la cual ingresa por
los alimentos y se elimina fácilmente debido a la falta de mecanismos para establecerse
definitivamente en el medio oral (22,25).
2.1.3. Streptococcus Mutans
El Streptococcus mutans es el principal microorganismo bacteriano asociado con la caries
dental, fue aislado por primera vez en 1924 por el británico Clarke en una caries activa
de dentina (26,27).
Se caracteriza por ser un coco Gram positivo, anaerobio facultativo, inmóvil que se
dispone en parejas y cadenas, tiene la capacidad de fermentar hidratos de carbono como
la sacarosa, glucosa y fructosa dando como productos metabólicos ácidos tales son: ácido
10
láctico, ácido acético, ácido propiónico y ácido fórmico que favorecen la
desmineralización dental. Tiene la capacidad de cambiar un medio de pH 7 a pH 4.2 en
un tiempo estimado de 24 horas (5).
Estudios indican que la transmisión de este microorganismo se da por contacto directo de
madre a hijo en la etapa inicial de vida, posteriormente continúa su transmisión por el
contacto directo con familiares y otras personas, sin embargo, la evidencia indica que la
colonización en la cavidad bucal se produce a partir de la erupción del primer diente
temporal (26).
Dentro de todas las bacterias que forman parte de la población bacteriana en la placa
dental, el mayor número pertenece al género Streptococcus, siendo el Streptococcus
mutans el más asociado con la caries dental, considerándolo también causante de
bacteriemia y endocarditis infecciosa (28,29) .
- Taxonomía
El género Streptococcus tiene 7 especies de los cuales dos pertenecen a la especie humana
que son el Streptococcus mutans con serotipos (c, e, f y k), y Streptococcus sobrinus y
cinco a los animales como son el Streptococcus cricetus, Streptococcus rattus,
Streptococcus ferus, Streptococcus macacae y Streptococcus downei. En la micro flora
oral humana, el serotipo c del Streptococcus mutans predomina más que los serotipos e,
f y k (5,27)
- Factores de Patogeneidad
Los factores de virulencia del Streptococcus mutans involucrados en la producción de
caries son: Acidogenicidad que es la capacidad de producir ácido láctico a través dela
fermentación de azúcares de la dieta. Aciduricidad es la capacidad de producir ácido en
medios con pH bajo. Acidofilicidad es capacidad de sobrevivir a la acidez del medio (28).
El Streptococcus mutans sintetiza enzimas como la glucosiltransferasa (GTF) y
fructosiltransferasa (FTF) que facilitan la fermentación de los carbohidratos, obteniendo
como productos metabólicos glucano y fructano, cuya función es contribuir con la
11
formación de la matriz extracelular de polisacáridos para facilitar la adherencia y
nutrición bacteriana. A nivel intracelular sintetizan glucógeno que sirve como reserva
nutritiva, que permite producir ácidos en ausencia del consumo de azúcares (30).
Otra enzima que sintetiza es la dextranasa quien interviene regulando la actividad de la
glucosiltransferasa, hidrolizando algunos de sus productos finales para ser transportados
y utilizados como reservas energéticas (30).
2.2. Biofilm Dental
Se postula que las bacterias que existen en la naturaleza pueden encontrarse bajo dos
estados, el 99% formando biofilms y el 1% en estado planctónico o de libre flotación.
Entendiendo como biofilm a la asociación de microorganismos que se encuentran en una
matriz celular y se adhieren a tejidos vivos y a superficies inertes (31).
En la cavidad oral las bacterias que permanecen en la saliva son consideradas
planctónicas, por tanto las bacterias que se adhieren a superficies sólidas como dientes,
encías, restauraciones, prótesis e implantes dentales están formando el biofilm dental, que
es una película gelatinosa, blanda, adherente, conformada por diferentes especies
bacterianas organizadas en comunidades, que se encuentran inmersas en una matriz de
exopolisacáridos y proteínas producida por las mismas. Anteriormente se la conocía como
placa bacteriana (32,33)
El biofilm por sí solo no es dañino, a medida que los nichos ecológicos crecen y son
colonizados por microorganismos productores de toxinas, comienzan a ser causantes de
enfermedades, como la caries y la enfermedad periodontal (9).
2.2.1. Estructura del Biofilm Dental
Al microscopio de láser se puede observar a las comunidades bacterianas que se
encuentran separadas por canales de agua y organizadas en forma de seta (32).
12
Figura 1. Representación del Biofilm Dental.
Fuente: En “Biopelícula: una nueva forma de ver la placa” por Pamela R. Overman, EdD, RDH.
Recuperado de http://www.dentalcare.es/educacion-profesionales-
odontologicos/biopelicula.aspx?ModuleName=coursecontent&PartID=3&SectionID=-1
El biofilm dental está compuesto entre un 15% y 20% de su volumen por
microorganismos, mientras que el 85 % restante corresponde a la matriz extracelular que
contiene polisacáridos como glucanos, dextranos, mutanos, entre otros, que son
producidos por las mismas bacterias, también contiene proteínas, sales minerales,
glicolípidos, restos celulares, material genético y agua (34).
Los polisacáridos facilitan la adhesión de los microorganismos, actúan como fuente de
nutrientes y retiran desechos del medio (32).
2.2.2. Formación y Desarrollo del Biofilm Dental
Puede desarrollarse a partir de células planctónicas, ya que varias especies poseen
estructuras como fimbreas o fibrillas que favorecen la adhesión en la superficie dental, o
a partir de otro biofilm por desprendimiento de algunas de sus células (32,34).
Durante la formación del biofilm se presentan algunas fases o etapas. La primera se
caracteriza por el depósito de la película adquirida que es una fina capa de glucoproteínas
salivales que recubre todas las superficies dentarias, la cual actúa como lubricante
protegiendo al esmalte del desgaste masticatorio, abrasión y ácidos bacterianos, también
actúa como membrana semipermeable en procesos de desmineralización y
remineralizacion dental (35).
13
La segunda etapa es la colonización primaria de la película, donde se puede encontrar
pocas especies bacterianas del tipo cocos o cocobacilos que están suspendidas por fuerzas
de electrostáticas. Conforme pasa el tiempo se da la tercera fase en la cual se van
asentando los microorganismos de forma lenta e irreversible sobre la superficie dental
mediante receptores de la película adquirida y las adhesinas bacterianas (35).
En las últimas etapas las bacterias se van extendiendo y multiplicando por el metabolismo
extracelular que inicia la formación de la matriz rica en polisacáridos complejos, también
se puede observar colonizadores secundarios que interactúan con los colonizadores
primarios y es aquí donde aumenta la actividad metabólica que favorecerá a la
maduración de la placa bacteriana o biofilm, modificándose cuantitativamente (34).
La placa bacteriana madura viene a constituir un sistema ecológico cuyo equilibrio
dependerá de la interacción de las especies bacterias que lo forman. (36).
2.2.3. Clasificación del Biofilm
Según la localización con respecto al margen gingival podemos clasificarlo en
supragingival y subgingival.
El biofilm supragingival se localiza en superficies lisas, espacios interproximales, fosas
y fisuras de las caras oclusales donde predominan microorganismos gram positivos, que
están asociados principalmente a la caries dental. El biofilm subgingival que lo
encontramos principalmente en pacientes asociados a enfermedad periodontal
predominando microorganismos gram negativos que están ocupando el surco gingival y
bolsas periodontales (34).
2.2.4. Control del biofilm dental
Debido a que el biofilm dental viene a constituir un importante factor etiológico en la
caries y la enfermedad periodontal que actualmente son las enfermedades orales más
prevalentes, se deben adoptar medidas preventivas para poder controlarlo. Los métodos
mecánicos como el cepillado y el uso del hilo dental para espacios interproximales no son
suficientes, actualmente se recomienda utilizar agentes químicos antimicrobianos como
14
son los antisépticos orales o colutorios para disminuirlo considerablemente, además se
debe complementar con la visita periódica al especialista para removerlo manualmente
(8).
2.3.Caries Dental
Dentro de las enfermedades crónicas que afectan al ser humano, las enfermedades bucales
son consideradas como las más comunes, en salud pública se les da importancia debido a
la prevalencia e impacto que producen tanto a nivel individual como social una vez
instaurado el problema (37).
La caries dental es una de estas enfermedades, considerándose como un proceso crónico,
infeccioso, dinámico, transmisible y multifactorial que puede afectar a cualquier
individuo, se caracteriza por la destrucción localizada de los tejidos duros del diente,
progresa lentamente con el tiempo con la subsecuente pérdida de minerales de la
superficie dental, provocada por ácidos que son productos de la placa bacteriana a partir
del metabolismo oxidativo de los hidratos de carbono consumidos en la dieta (37,38)
Para que se manifieste dicha enfermedad deberá existir un desequilibrio en la cavidad
oral, es decir, los factores de riesgo que favorecen la desmineralización predominan sobre
los factores protectores que se encargan de la remineralización (39,40).
La lesión cariosa evoluciona como un proceso irreversible que afecta principalmente a
zonas del diente donde se acumula fácilmente el biofilm dental como son fosas, fisuras,
espacios interdentales, restauraciones en mal estado, entre otras (40).
Clínicamente se refleja como una opacidad del esmalte que puede avanzar y formar
cavidades que afectan a estructuras como la dentina, el cemento y la pulpa dentaria
produciendo una afección nerviosa, causando sensibilidad, pulpitis irreversible muy
dolorosa y posterior necrosis, en caso de no ser tratada puede provocar la destrucción total
del diente (37,41)
La OMS en 1987, define a la caries dental como un proceso localizado, de origen
multifactorial, que tiene su inicio después de la erupción dentaria, produciendo el
reblandecimiento del tejido duro del diente y que evoluciona hasta formar una verdadera
cavidad (38,40)
15
2.3.1. Prevalencia
Reportes indican que la caries dental afecta del 95 al 99% de la población mundial,
aunque existe una tendencia a la declinación en los países desarrollados se la considera
como la principal causa de pérdida de dientes tanto en la población infantil y adolescente
como en adultos. (4,40).
A pesar de ser un problema que no compromete la vida, constituye hoy por hoy una de
las patologías más frecuentes y costosas que se presenta de por vida, considerando que
nueve de cada diez personas padecen la enfermedad o las secuelas de la misma (37).
La OMS informa que entre el 60% y 90% de los escolares del mundo tienen caries dental.
En Ecuador del 85% al 88 % de niños presentan caries dental, los índices de CPOD
(promedio de piezas definitivas cariadas, perdidas u obturadas) muestran a la edad de 6 y
7 años un CPOD de 0.22, que pasa a 2.95 a los 12 años y a 4.64 a los 15 años, indicando
un nivel severo de acuerdo con lo establecido por la OPS/OMS (3,40)
2.3.2. Etiología
Diversas investigaciones plantean que esta entidad presenta una etiología multifactorial,
coincidiendo que es indispensable la presencia de algunos factores primarios tales son
huésped, microorganismos y dieta, no obstante se requiere la presencia adicional de
factores llamados moduladores los cuales influyen decisivamente en el aparecimiento y
evolución de la caries dental como la higiene oral, nivel socioeconómico, la exposición
al flúor, género, edad, raza, genética y calidad de vida del individuo, entre otras.
(27,37,42)
2.3.2.1.Factores Etiológicos Primarios
La caries dental obedece un esquema compuesto por agentes que interactúan
simultáneamente y en condiciones favorables como son huésped susceptible,
microorganismos cariogénicos y el consumo de una dieta rica en carbohidratos,
agregando un determinado período de tiempo cuya intervención es indispensable para que
se produzca tal alteración (27,36)
16
Figura 2. Etiología de la caries dental Modelo de Keyes modificado por Newbrun, 1978
Fuente: Cuadrado & Gómez, 2013
2.3.2.1.1. Huésped
a) Diente
Entre los factores que determinan que un huésped sea susceptible para el desarrollo de
caries dental podríamos mencionar la morfología de las piezas dentales influyendo la
profundidad de fosas y fisuras, la posición de las piezas en las arcadas dentarias ya que la
placa bacteriana tiende a acumularse en mayor cantidad en el sector posterior de la boca
donde difícilmente puede realizarse la autoclisis, en casos de apiñamiento se dificulta una
limpieza adecuada tanto en el sector anterior como posterior (27).
La edad del diente es un indicador de la calidad del esmalte en cuanto a la porosidad y
mineralización, individuos que durante la etapa embrionaria presentaron alteraciones
como hipoplasia y amilogénesis imperfecta son más propensos a padecer la enfermedad,
la presencia de caries activa puede actuar como reservorios de microorganismos
cariogénicos (42).
b) Saliva
Es secretada por las glándulas salivales, está conformada por un 99% de agua y
componentes orgánicos e inorgánicos. Esta por sus características físicas y sus
17
componentes químicos es considerada como la primera línea de defensa en la cavidad
bucal principalmente frente a la caries dental (43).
Se encarga de realizar la limpieza y lavado de la estructura dental, para evitar la adhesión
bacteriana al diente, actúa como un sistema amortiguador diluyendo ácidos que han sido
fermentados por las bacterias a partir de los hidratos de carbono, mediante iones de calcio,
fosfato y flúor interviene en el proceso de remineralización del esmalte dental (42)
El flujo salival diario va de 800 a 1500ml, manteniendo un promedio de 1000 ml,
cumpliendo un papel importante en la protección contra la caries ya que está eliminando
constantemente microorganismos, alimentos, células muertas entre otros (37).
Por lo tanto una reducción del mismo influirá de manera directa en la aparición de caries,
principalmente en pacientes que sufren xerostomía ya sea por el consumo de ciertos
medicamentes, por tratamientos de radiación y quimioterapia o presencia del síndrome
de Sjögren (42)
2.3.2.1.2. Microorganismos
Actualmente se sabe que la acumulación excesiva de colonias bacterianas influye en la
destrucción del órgano dentario, estudios epidemiológicos consideran como principales
bacterias odontopatógenas causantes de caries a los géneros Streptococcus, Lactobacillus
y Actinomyces. De los cuales específicamente el Streptococcus mutans se relaciona con
la biopelícula cariogénica (5,27,41).
2.3.2.1.3. Dieta o Sustrato
La incidencia de la caries dental en los humanos ha aumentado de manera desmedida
desde la aparición e ingesta de azúcares refinados. La sacarosa el azúcar de mesa común
es un disacárido que está compuesto por glucosa y fructosa, es considerado como el
principal contribuyente para la iniciación de caries dental, ya que el consumo de la misma
ha sido una fuente nutritiva para el Streptococcus mutans para sintetizar polisacáridos
extracelulares que facilitan la adhesión a la superficie dental, generando así una gran
ventaja en su desarrollo sobre las demás bacterias en la cavidad oral, incrementando de
18
esta manera el riesgo de caries dental. Por tal razón el sustrato de la microflora oral lo
otorgan los hidratos de carbono ingeridos diariamente (4,26,27,36).
Los alimentos adhesivos tienden a retenerse en la superficie dental y presentan más
dificultad para eliminarlo, por tanto se consideran más cariogénicos. Debemos considerar
que mientras mayor sea la frecuencia del consumo de azúcares mayor será la probabilidad
de desmineralización del esmalte (36).
2.3.2.1.4. Tiempo
Para que la caries dental se desarrolle, los factores etiológicos que son huésped
susceptible, flora bucal cariogénica y dieta rica en carbohidratos deben estar presentes al
mismo tiempo (26).
2.3.3. Fisiopatología
Cuando las bacterias cariogénicas se encuentran colonizando un diente susceptible más
la presencia de un sustrato principalmente carbohidratos, estas generan ácidos orgánicos
(láctico, acético, fórmico y propiónico) que son bio-productos metabólicos que provocan
disolución de los cristales de hidroxiapatita por la liberación de iones de calcio y fosfato
del esmalte dental (26).
Cuando el medio ambiente oral tiene menor cantidad de iones minerales en relación a los
minerales perdidos del diente, se genera un descenso de pH (+/-5.5) lo que conlleva a un
desequilibrio entre los episodios alternados de desmineralización y remineralizacion
dental, dando como resultado la lesión cariosa. (43)
Clínicamente los primeros estadios de la lesión cariosa suelen pasar desapercibidos, en
otros casos se puede observar pequeñas manchas blancas que son producto de los ácidos
fermentados por las bacterias del biofilm, donde el mayor contribuyente es el
Streptococcus mutans que por medio de sus enzimas produce glucanos y fructanos que
permiten la adhesión en las superficies dentales y estimulan la destrucción de las mismas,
si la lesión avanza se sigue perdiendo minerales de estructuras más internas lo que
conlleva a un proceso irreversible llamado cavitación (26,27).
19
2.4.Contaminación de los cepillos dentales
El cepillo dental es el instrumento más utilizado y efectivo para la remoción de la placa
dental bacteriana o biofilm, considerándose como el arma principal para mantener una
adecuada higiene bucal (14), se debe tener en cuenta las condiciones de higiene en que se
mantiene, ya que constantemente está sujeto a contaminación por el contacto diario con
la boca, la saliva, restos alimenticios y por el ambiente en que se encuentra almacenado,
esto permite que los microorganismos permanezcan vivos y continúen reproduciéndose
y depositándose en las cerdas del cepillo (16)
Por tal motivo, aunque el cepillo de dientes es la herramienta indispensable para la salud
bucal, puede convertirse en un elemento nocivo, al utilizarlo por períodos largos de
tiempo y sin los cuidados adecuados. (44)
La contaminación de los cepillos dentales, ha sido un tema de mediana importancia en la
profesión odontológica (45), sin embargo en los estudios realizados, los científicos han
descubierto más de 10 millones de bacterias habitando en un mismo cepillo de dientes,
debido a que están en contacto directo las bacterias que habitan en un baño. Los cepillos
de dientes generalmente se contaminan en tan sólo una semana y un mes después del
primer uso ya contienen varias bacterias peligrosas (46).
2.4.1. Fuentes de contaminación de los cepillos dentales
Boca.- Los microorganismos que constituyen la flora bucal habitual no causan patologías
bucales siempre que exista un equilibrio en el ecosistema oral. La placa bacteriana que
tiende a formarse sobre las superficies dentales, está constituida por comunidades de
bacterias que son responsables de enfermedades como la caries y la enfermedad
periodontal (11).
Teniendo en cuenta que en la boca están viviendo microorganismos productores de
enfermedades, incluyendo el S. Mutans (responsable por el desarrollo de la caries dental),
podemos indicar que estos se transfieren al cepillo de dientes durante el cepillado, sobre
todo cuando las personas presentan patologías bucales como la enfermedad periodontal,
ya que contaminan su cepillo cada vez que lo utilizan, lo cual crea en el individuo un
círculo vicioso de reinfección de sitios sanos y enfermo (44) .
20
Ambiente.- Los cepillos de dientes son almacenados por lo general en el baño,
considerándose el lugar más contaminado de la casa, aquí es posible encontrar varios
tipos de gérmenes principalmente microorganismos fecales, que permanecen en áreas
húmedas; la acción de vaciar el inodoro después de su uso genera aerosoles, considerando
que el agua que hay en los inodoros viene a ser un reservorio de microorganismos en
donde se alimentan, crecen y se reproducen, de esta forma se propagan miles de gérmenes
que salen del inodoro a la atmosfera, permaneciendo en el aire, en el asiento del inodoro,
en el piso, la tapa, incluso en el rollo de papel durante al menos ocho días (47).
Es así que cada vez que ingresamos al baño nos contaminamos las manos al tocar las
diferentes superficies y más aún al usar el cepillo dental, que ya está contaminado al
permanecer en el baño. En algunos casos se guarda el cepillo dental en los estuches, sin
embargo no es recomendable ya que por sus condiciones de humedad, son espacios
ideales para que estos gérmenes y bacterias se desarrollen (44).
Aire.- La flora microbiana que se encuentra en el aire es transitoria y variable. Debemos
recordar que el aire no es un medio donde pueden vivir los microorganismos, pero viene
a ser un transportador de partículas, de polvo y de gotas que pueden estar cargadas de
microorganismos provenientes del suelo, de la materia orgánica, de animales y del ser
humano. Existen también ciertas circunstancias como las condiciones atmosféricas, la
humedad, la luz solar y la temperatura que determinarán el crecimiento y supervivencia
de los mismos (44).
2.4.2. Tipos de microorganismos que habitan en los cepillos dentales
Se ha determinado que los cepillos de dientes tanto de individuos sanos o con
enfermedades periodontales, contienen bacterias y virus patógenos como:
Virus de Influenza
Conocido como virus de la gripe, encontrado a menudo en los cepillos de dientes, es una
enfermedad causada por el virus de ARN, que infecta el tracto respiratorio.
Herpes simple I
El virus del herpes simple I, conocido como herpes labial o febril, causa infección que
puede afectar a la boca, cara y la piel, donde se desarrollan vesículas llenas de líquido que
21
aparecen cerca del área donde el virus entró al cuerpo. Las infecciones de herpes tienden
a repetirse tan frecuente como una vez al mes.
Bacterias Estreptococos
Las infecciones de estreptococos pueden ir desde leves, causando un dolor de garganta,
a mortales, causando una fascitis necrotizante. Se han aislado bacterias como
Streptococos Mutans y Streptococos sobrinus, conocidos agentes etiológicos de la caries
(14).
Según Medicine Net, hay más de veinte tipos de bacterias estreptocócicas, se puede
encontrar Streptococo β hemolítico que suele ser el causante de infecciones de garganta
y faringe, también puede afectar a la piel produciendo infecciones como el impétigo,
además puede causar problemas más graves si se profundiza en el cuerpo, puede conducir
a la meningitis o la neumonía (44), se han informado casos de endocarditis bacteriana
como resultado de la bacteriemia producida por el cepillado dental (14).
Bacterias de Estafilococos
Este tipo de bacterias pueden ser transmitidas a través de la piel; los estafilococos causan
abscesos, forúnculos, infecciones cutáneas y la mayoría de ellas son resistentes a los
antibióticos, que las hace difíciles de tratar si se vuelven graves (48).
Escherichia coli
Normalmente se encuentran en los intestinos, no se es perjudicial cuando está en el
interior del intestino y en el colon, se puede transmitir de persona a persona a través de
los excrementos y así es como termina en el cepillo de dientes (48).
Cándida Albicans
Es una levadura que vive en la boca, la garganta, los intestinos y el tracto genitourinario
y constituye parte de la flora normal en el tracto digestivo inferior. Se considera que un
sistema inmune sano mantiene el crecimiento de la levadura bajo control y la cándida no
produce síntoma, al contrario, si el sistema inmunológico es débil, una condición llamada
candidiasis oral se puede presentar (48).
22
Las Bacterias Coliformes
Las bacterias coliformes que se encuentran en el cepillo de dientes por lo general
provienen de la materia fecal (48).
Adicionalmente se han identificado Pseudomonas, Corynebacterium, procedentes del
grifo de agua y del medio ambiente. Cualquier ser humano está en riesgo de contraer
infecciones que causan enfermedades en las encías, garganta y dientes, en el caso de
entrar en contacto con un cepillo contaminado (18).
2.5.Desinfección De Cepillos Dentales
A pesar de ser el cepillado dental la medida principal para tener una adecuada salud bucal,
durante los últimos años dentro de la profesión odontológica, la contaminación y
descontaminación de los cepillos dentales no ha sido un tema de relevancia, por tanto, es
importante que al cepillo dental se le dé un adecuado manejo y mantenimiento,
considerando que al estar en contacto diario con la boca y aún después al enjuagarlos con
abundante agua puede quedar contaminado de microorganismos que resultarán
perjudiciales para la salud bucal (17).
La desinfección de los cepillos dentales ha tenido poca atención, debido a que se le
considera a este instrumento como un dispositivo para remover partículas que se quedan
entre los dientes, para controlar la placa bacteriana y evitar la presencia de la caries dental,
lo indicado es sustituirlo mínimo cada 3 meses (17), sin embargo, las personas piensan
que porque físicamente se lo ve bien todavía tiene una vida útil y tampoco toman en
cuenta que sus cerdas son un reservorio de microorganismos que pueden generar
infecciones.
Actualmente no se realiza la desinfección de los cepillos dentales, sin embargo un método
efectivo sería la utilización de corrientes de luz ultravioleta aunque a pesar de ser muy
eficaz los costos de estos aparatos son bastante elevados, existen cepillos modificados
con algún agente antibacterial en sus cerdas y la utilización de algún agente químico. (17).
23
2.5.1. Sustancias Desinfectantes
Se denomina desinfección a la reducción de la concentración de patógenos a niveles no
infecciosos. Desde hace varios años atrás existen procedimientos y técnicas donde se
utilizan sustancias químicas para reducir, eliminar y alterar los efectos nocivos de los
microrganismos patógenos que se encuentran contaminando superficies inertes o tejidos
vivos, desempeñando un papel importante de ayuda para la prevención y tratamiento de
patologías. (49).
Las características ideales que debe poseer un agente antimicrobiano son: una elevada
efectividad antimicrobiana, principalmente un amplio espectro sobre bacterias, hongos y
virus aún en estado diluido y en el menor tiempo posible, mantenerse estable y activo
durante varios meses y en sus formas comerciales, conservar su actividad incluso con
cambios de temperatura y pH, no ser tóxico sobre los tejidos vivos, evitar corrosión sobre
las superficies expuestas, no tener olor o sabor desagradable, ser biodegradable, soluble
en agua y grasas, tener sustantividad y costo moderado (50).
Entre los factores que pueden afectar la efectividad de la sustancia desinfectante podemos
mencionar el tipo de agente microbiano, el tiempo de contacto, la concentración y
temperatura, (14).
A. Vinagre (Ácido Acético)
El vinagre es una solución acuosa, miscible, con un sabor agrio y un aroma particular,
proveniente de dos fermentaciones, la alcohólica y la acética. En primer lugar se realiza
una fermentación de la materia prima utilizada para generar etanol, luego se realiza una
fermentación oxidante denominada fermentación acética por las bacterias implicadas
(Mycoderma aceti) dando como producto el vinagre con una concentración del ácido
acético entre 4 y 8% en masa (51).
Dependiendo de la materia prima utilizada para su elaboración se da su clasificación, las
más utilizadas son el vino, la sidra, la cerveza y el alcohol. El vinagre es muy utilizado
en el hogar así como en la industria alimentaria ya que es un excelente conservante que
impide la proliferación de microorganismos, aumentando así la vida útil de ciertos
alimentos, en su función como conservante, debe ser de buena calidad y provenir del vino
blanco o del tinto (52).
24
El vinagre en sus orígenes se elaboró con vino, se lo utilizaba en Babilonia 5,000 años
antes de Cristo por sus propiedades medicinales servía para tratamiento de heridas de los
soldados persas, Hipócrates también lo utilizó como medicina (52).
De acuerdo con la literatura científica el vinagre contiene vitaminas, minerales, enzimas,
aminoácidos y otros elementos de gran importancia, pertenece al grupo de desinfectantes
de ácidos orgánicos (13).
- Mecanismo de acción
Tiene la capacidad de proporcionar una acidificación en el medio donde es aplicado,
proporcionando de este modo propiedades antibacterianas y antifúngicas. Posee mayor
eficacia frente a bacterias Gram (+) y Gram (-). Su efectividad de acción depende de la
concentración a la que es usada (13).
- Indicaciones
Se lo utiliza como antiséptico en soluciones diluidas del 1 al 5% principalmente frente a
hongos y protozoos, es una sustancia irrigante, desinfectante al poseer propiedades
antimicrobianas sirve para la limpieza del hogar, además proporciona grandes beneficios
para la salud por su efecto antioxidante y su capacidad de aumentar la absorción de
nutrientes.
- Efectos Adversos
Puede presentarse hipersensibilidad, escozor, ulceración, vómito, entre otras.
B. Gluconato De Clorhexidina
El gluconato de clorhexidina es el agente antimicrobiano más estudiado, capaz de
mantener las superficies dentarias libres de placa al utilizarlo bajo un régimen
recomendado (53), fue desarrollada en la década de los 40 por Imperial Chemical
Industries en Inglaterra por científicos en un estudio contra la malaria, los investigadores
desarrollaron un grupo de compuestos denominados polibisguanidas y demostraron que
tienen un amplio espectro antibacteriano, la clorhexidina fue presentada en 1954 y está
reconocido por la ADA como agente antimicrobiano (53).
25
En un comienzo salió al mercado como antiséptico para heridas de la piel, y
posteriormente comenzó a utilizarse en medicina y cirugía; en odontología se la utilizó
en un principio como desinfectante para la boca y también en endodoncia, posteriormente
mediante otros estudios realizados se comprobó que inhibía la formación de placa y se
comenzó a utilizar en periodoncia como enjuague bucal en ausencia de cepillado (50).
Actualmente la clorhexidina es el antiséptico de elección, es el más utilizado por su
solubilidad en agua y alcohol, muestra estabilidad a la temperatura ambiental y un pH
entre 5 y 8, presenta un amplio espectro de acción frente a bacterias Gram positivas y
Gram negativas y hongos, la mayoría de productos usan el digluconato en concentrados
del 0.2% ó 0.12. (53).
En boca se absorbe rápido sobre todas las superficies, alcanza un 60 % en la reducción de
placa y de gingivitis, se la utiliza en tratamientos a pacientes con periodontitis, en
tratamientos para candidiasis, para la desinfección de conductos radiculares, entre otros
(14).
- Mecanismo de acción
Tiene una acción antibacteriana y antiplaca, por tanto impide la formación de la película
adquirida inhibiendo la adhesión de microorganismos, destruye la placa ya formada, y
tiene una acción germicida que se basa en la ruptura de la pared (53).
Una de sus mejores características es la sustantividad gracias a la cual se une fuertemente
a superficies de la cavidad oral y posteriormente actúa como un depósito de liberación
lenta pudiendo tener actividad antimicrobiana entre 8 y 12 horas luego de su absorción
(50,53).
La Clorhexidina es considerada hasta la fecha como el mejor agente antiplaca, sin
embargo, también exhibe algunos efectos secundarios producidos por el uso prolongado.
(14).
Podemos mencionar como desventajas que puede provocar tinciones en dientes,
restauraciones estéticas y lengua, altera el sentido del gusto, descamación de la mucosa
oral, algunas reacciones alérgicas, reducción neta de la flora bucal, puede provocar
resistencias si se utiliza durante largos períodos de tiempo (53).
26
C. Cloruro De Cetilpiridinio
Perteneciente a los compuestos de amonio cuaternario, presenta tendencia a unirse a los
tejidos orales debido a su fuerte carga positiva, es un agente inhibidor de la formación de
placa bacteriana, la reduce en un 35%. Este compuesto es de eficacia moderada y se
eliminan rápidamente de las superficies bucales, ya que es liberado a mayor velocidad
que la clorhexidina, siendo su sustantividad de aproximadamente 3 horas, la
concentración más utilizada generalmente en pastas dentífricas y colutorios es al 0,05%
(50,53).
- Mecanismo de acción
Actúan a nivel de la superficie celular, aumentando la permeabilidad de la pared
bacteriana, favoreciendo la lisis y disminuyendo la capacidad para adherirse a la
superficie dentaria, con la consecuente pérdida de los componentes citoplasmáticos. El
espectro de acción es bastante elevado frente a bacterias y hongos, pero escaso frente a
virus y esporas (50,54).
Entre sus beneficios podemos mencionar la efectividad antiplaca que posee, en cuanto a
sus desventajas tenemos que presenta menor sustantividad con respecto a la clorhexidina,
puede provocar tinción de los dientes, irritación de las mucosas, descamación y lesiones
ulcerosas (50,53).
27
CAPITULO III
3. METODOLOGÍA
3.1. Tipo de investigación
Se realizó una investigación de tipo experimental, in vitro y comparativa.
Experimental.- El investigador interviene mediante la exclusión, inclusión o
modificación de determinados factores con el propósito de describir una situación en
particular.
In vitro: En el presente estudio la técnica utilizada para la ejecución del experimento se
realizó en un ambiente controlado fuera del organismo.
Comparativo: Se comparó el efecto de las sustancias químicas sobre las cepas de
Streptococcus mutans inoculadas en cepillos dentales.
3.2. Población de estudio y muestra
3.2.1. Universo y muestra de estudio
Esta investigación se realizó con una muestra de tipo no probabilística, mediante un
muestreo por conveniencia tomando como base al estudio de:
Herrera Sandoval Laura Viviana, Actividad Antimicrobiana Del Ácido Acético Y El Cepillo
Colgate 360º Antibacterial: Un Estudio In Vitro. Revista Facultad de Odontologia Universidad
de Antioquia. 2012 Diciembre; Volumen 24 Nº1. (11)
El efecto antibacteriano de los agentes de desinfección en estudio, fue evaluado a partir
de una unidad de sedimento liofilizado de “Streptococcus Mutans” ATCC® 25175
importadas de EEUU por la empresa Medibac que se activó previamente (en caja Petri
con agar sangre de cordero), posteriormente se inoculó en 32 unidades experimentales
(cepillos dentales), que fueron divididas en cuatro grupos para el presente estudio.
28
3.2.2. Criterios de inclusión
Cepas puras de Streptococcus mutans.
Solución de Ácido acético al 5% (Vinagre)
Solución antiséptica con Gluconato de Clorhexidina al 0.12%
Solución antiséptica con Cloruro de cetilpiridinio al 0.05%
Cepillos dentales estériles con cerdas suaves
3.2.3. Criterios de exclusión
Cepas de Streptococcus mutans que estén contaminadas.
Cepillos dentales que contengan agentes antibacteriales.
29
3.3. Variables
3.3.1. Conceptualización de las variables
VARIABLES
CONCEPTO
(Dependiente)
Efecto antibacteriano
Sobre el Streptococcus Mutans
Capacidad de eliminar, inactivar e inhibir el crecimiento
o proliferación de agentes patógenos tales como
bacterias, virus y protozoos que se encuentren en objetos
inertes, mediante procesos físicos o químicos. (49)
(Independiente)
Vinagre al 5 %
(Ácido Acético)
Líquido miscible, agrio, elaborado por la fermentación
acética del vino y de la caña de azúcar, este producto
tiene varias propiedades y proporciona varios beneficios
en el hogar, principalmente utilizado para desinfección
(51).
(Independiente )
Gluconato de Clorhexidina al 0.12%
La clorhexidina (CLHX) es una solución acuosa,
siendo uno de los antisépticos mejor conocido y de uso
más extendido por su eficacia y tolerancia. Su espectro
antimicrobiano alcanza a bacterias Gram (+) y Gram
(-). A nivel odontológico está indicada en la inhibición
farmacológica de la formación de la placa dental y
periodontal supragingival (55).
(Independiente)
Cloruro de Cetilpiridinio al 0.05%
Antiséptico de amplio espectro de acción frente a
bacterias Gram (+) y Gram (-) y hongos, siendo escaso
frente a virus y esporas, resulta eficaz en la prevención
de la placa dental, reducción de la gingivitis y halitosis
(53).
(Independiente)
Agua Destilada
Unidad de moléculas de H2O, que ha pasado por un
proceso de destilación y se encuentra libre de impurezas.
(Independiente)
Tiempo
Magnitud física con la que medimos la duración o
separación de acontecimientos sujetos a cambio, siendo
una herramienta que se utiliza para representar
gráficamente datos cronológicos en forma sencilla, y
clara (56).
30
3.3.2. Operacionalización de variables
Variables
Definición Operacional
Tipo
Clasificación
Indicador Categórico
Escalas de
Medición
Efecto antibacteriano
Sobre el Streptococcus
Mutans
Lectura del número total de gérmenes presentes en
cada uno de los medios de cultivo a través del
contador de colonias Reichert Jung determinado
en UFC.
Dependiente
Cuantitativa
Desinfecta
< o = control (+)
No desinfecta
> o = control (-)
0
1
Vinagre
(Ácido acético)
Líquido miscible, agrio, elaborado por la
fermentación acética del vino y de la caña de
azúcar
Independiente
Cualitativa
Efecto desinfectante
concentración 5% en 200ml
2
Gluconato de
Clorhexidina
Antiséptico de segunda generación, de amplio
espectro, tiene la capacidad de limitar el
desarrollo de microorganismos
Independiente
Cualitativa
Efecto desinfectante
concentración 0.12% en
200ml
3
Cloruro de
Cetilpiridinio
Compuesto de amoniaco cuaternario es usado
como antiséptico eficaz frente a bacterias Gram.
Independiente
Cualitativa
Efecto desinfectante
concentración 0.05% en
200ml
4
Agua Destilada
Sustancia utilizada para control negativo
Independiente
Cualitativa
Solución estéril
200ml
5
Tiempo
Tiempo de sumersión de los cepillos en los agentes
químicos
Independiente
Cuantitativa
Cronómetro en.
15 minutos
6
31
3.4.Aspectos éticos, jurídicos y metodológicos
El presente estudio fue de tipo experimental, in vitro y realizado en el Laboratorio de
Análisis Clínico y Bacteriológico de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad
Central del Ecuador en condiciones controladas, con materiales e instrumental de
laboratorio, sin compromiso con seres vivos, únicamente con cepas biológicas que crecen
en un ambiente de anaerobiosis, por tanto, no fue necesario un consentimiento informado.
Todos los aspectos éticos, jurídicos, metodológicos fueron previamente analizados y
aprobados por el Comité de ética de la Universidad Central del Ecuador (Ver Anexo 1).
3.5.Materiales y Métodos
3.5.1. Infraestructura
- Laboratorio de análisis clínico y bacteriológico de la Facultad Química de
Universidad Central del Ecuador.
- Unidad de titulación Facultad de Odontología de la Universidad Central del
Ecuador.
3.5.2. Recursos humanos
Para la realización del presente trabajo investigativo intervinieron conjuntamente
microbiólogo, ingeniero estadístico y odontólogo, aplicando sus conocimientos
científicos e interactuando de acuerdo al avance y necesidades del estudio, para lograr
obtener resultados confiables.
3.5.3. Equipos, materiales, instrumentos y sustancias
Equipos
- Autoclave
- Cámara de Flujo laminar
- Incubadora
- Vórtex
32
- Contador de colonias Reichert Jung
Materiales
- Cepillos convencionales con cerdas suaves
- Hisopos estériles
- Bioseguridad: Mascarilla, cofia, guantes, gafas
Instrumental
- Placas Petri
- Jarra Gaspak
- Tubos de ensayo
- Mechero
- Gradilla
- Vasos de precipitados
- Asa de inoculación
Sustancias
- Agua destilada
- Vinagre al 5% (ácido acético)
- Antiséptico oral con Clorhexidina 0.12%
- Antiséptico oral con Cetilpiridinio al 0.05%
- Caldo de Agar Tripticasa Soya
- Medio de cultivo Agar sangre
- Cepa liofilizada Cepa de Streptococcus Mutans ATCC® 25175™
- Solución McFarland 0.5
3.6.Estandarización
En el presente estudio se procuró alcanzar patrones de equilibrio y de buena
implementación; todos los materiales utilizados fueron de las mismas características y
pasaron por procedimientos de esterilización (Ver Anexo 8).
33
La cepa de Streptococcus mutans se estandarizó en todas las unidades experimentales con
la fórmula de MacFarland para así evitar errores y obtener resultados verdaderos sin
manipulación.
3.7.Procedimiento
3.7.1. Activación de la cepa de Streptococcus Mutans ATCC® 25175
La bolsa que contiene la cepa permaneció almacenada a una temperatura de 2º a 8 º C,
luego se dejó que se equilibre a temperatura ambiente, para así proceder a abrirla y
preparar correctamente la solución homogenizada de acuerdo a las instrucciones del
fabricante (Ver Anexo 4).
Mediante un hisopo se trasladó la solución preparada a los medios de cultivo Agar Sangre
y en tripticasa de soya o TSB.
Figura 3. Activación de la cepa de Streptococcus mutans Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
34
Posteriormente fueron colocados en la jarra de Gaspak e incubados por 48 horas a 37ºC
en condiciones de anaerobiosis, en el laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico de
la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador.
Figura 4. Incubación de los medios de cultivo con Streptococcus mutans
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
3.7.2. Estándar de turbidez para la suspensión del inóculo
De la cepa incubada inicialmente se preparó una suspensión estandarizada de forma
que presente la misma turbidez que la escala de 0.5 McFarland, la suspensión
bacteriana tuvo aproximadamente 1.5 x 108 células /ml de Streptococcus mutans
ATCC 25175.
Se utilizó caldo de tripticasa de soya, el cual se agitó constantemente para luego
compararlo de una manera visual hasta que alcance la misma turbidez que la solución
McFarland, en la comparación se necesitó luz apropiada y un fondo blanco con líneas
negras para contraste.
35
Figura 5. Preparación de la suspensión para la estandarización
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
Figura 6. Estandarización del Inoculo Bacteriano
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
3.7.3. Preparación de los cepillos
Los cepillos de estudio fueron sometidos a radiación ultravioleta durante 20 minutos con
una intensidad de 250 nm en la cámara de flujo laminar para garantizar la esterilidad total.
Figura 7. Esterilización mediante luz ultravioleta
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
36
Una vez esterilizados los 32 cepillos, fueron distribuidos en cuatro grupos A, B, C, D
cada uno conformado por 8 cepillos, para posteriormente ser inoculados y sumergidos en
las sustancias de tratamiento de la siguiente manera:
Grupo A: Agua destilada (control negativo).
Grupo B: Enjuague con gluconato de clorhexidina al 0.12% (control positivo).
Grupo C: Vinagre (ácido acético) al 5%.
Grupo D: Enjuague con cloruro de cetilpiridinio al 0.05%.
3.7.4. Prueba de actividad antimicrobiana
Se inoculó a cada cepillo con 6 ml de la suspensión estandarizada con Streptococcus
Mutans, luego fueron incubados a 37ºC durante 24 horas en condiciones de anaerobiosis.
Figura 8 Inoculación del microorganismo en los cepillos dentales
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
37
Consecutivamente los cepillos dentales de cada grupo fueron lavados con agua destilada
estéril, para eliminar el exceso del microorganismo de las cabezas de los cepillos para
posteriormente ser depositados en vasos de precipitados estériles y ser sometidos a
tratamiento.
Figura 9. Lavado de cepillos dentales para eliminar exceso de microorganismos
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
Se utilizó vinagre (ácido acético) al 5 % y soluciones antisépticas orales (enjuagues) que
contienen gluconato de clorhexidina al 0.12% y cloruro de cetilpiridinio al 0.05%.
Figura 10. Sustancias químicas para estudio
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
38
Cada grupo fue sumergido en 200 ml de la solución respectiva y en tiempo de 15 minutos.
Figura 11. Cepillos dentales sometidos a tratamiento A. Agua destilada (control negativo). B.
Enjuague con clorhexidina al 0.12% (control positivo). C.Vinagre al 5 %. D. enjuague de cetilpiridinio
al 0.05% Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
C
D
A
B
39
Todos los cepillos después del tiempo de tratamiento, se transfirieron a tubos estériles
con 15 ml de agua destilada y se pasaron por vórtex durante 10s para que los
microorganismos presentes en las cerdas del cepillo desciendan a la solución.
Posteriormente se tomaron alícuotas de 0.1 ml de cada solución de los cepillos y fueron
sembradas en agar sangre de acuerdo a los grupos ya establecidos.
Figura 12. Toma de muestra de las soluciones de los cepillos tratados
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
40
Una vez realizada la siembra de todas las soluciones de los cepillos dentales, se trasladó
los cultivos a la jarra de Gaspak para incubarlos por 48 horas a 37ºC en condiciones de
anaerobiosis y así observar el crecimiento bacteriano.
Figura 13. Incubación de los medios de cultivo.
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias
Químicas de la Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
Posteriormente los resultados obtenidos de cada grupo fueron contados en unidades
formadoras de colonia UFC en el contador de colonias Reichert Jung.
Figura 14. Recuento de colonias A. Colonias incontables. B. Ausencia de colonias.
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
A B
41
Figura 15. Recuento de colonias C. Colonias contables. D. Una colonia.
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
3.7.5. Eliminación y Manejo De Desechos
Todo el procedimiento se realizó en una cámara de flujo laminar clase II, el instrumental
utilizado estuvo estéril y fue suministrado por el laboratorio (Ver Anexo 8).
Una vez terminada la fase experimental, se procedió a la eliminación de los desechos
producidos durante el estudio, este procedimiento es realizado de acuerdo al protocolo de
manejo de desechos establecido por el Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico
de la Facultad de Química de la Universidad Central del Ecuador (Ver Anexo 9).
Figura 16. Cámara de flujo laminar.
Elaboración: Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriología de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Central del Ecuador. Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
C D
42
3.8. Manejo y recolección de datos
La recolección de la información se la obtuvo a partir del equipamiento adecuado del
Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico de la Facultad de Química de la
Universidad Central del Ecuador, todos los datos obtenidos durante el experimento fueron
registrados en una ficha (Ver Anexo 5), donde se procedió al análisis de los mismos
colocándolos en una escala nominal y se los clasificó en diferentes categorías con valores
numéricos, donde finalmente fueron organizados en programas de Word y Excel
mediante tablas y gráficos para determinar la eficacia de los datos recopilados.
43
CAPITULO IV
4. RESULTADOS
En el presente estudio se evaluó la efectividad antibacteriana que produjo el vinagre y los
enjuagues bucales con cloruro de cetilpiridinio y clorhexidina, sobre cepas de
Streptococcus mutans inoculadas en cepillos dentales.
Luego del proceso de sumersión en dichas sustancias y la siembra de las muestras en
cultivos de agar sangre, los datos se recolectaron mediante la lectura de un número
cuantificable de gérmenes presentes en cada uno de los medios de cultivo, a través del
contador de colonias Reichert Jung, y se determinó en Unidades Formadoras de Colonias
por 0.1 ml. Estos fueron organizados utilizando el programa Microsoft Word como se
puede ver en la tabla a continuación. (Ver Anexo 7).
Tabla 1.Resultados del número total de colonias
Fuente: Nathalie Ortiz Uribe
4.1.Análisis Estadístico
Una vez recolectados los datos se realizó el análisis de los mismos, utilizando el Programa
de Análisis Estadístico SPSS statistics 20.0
Prueba de Normalidad:
Primeramente se debe verificar que las muestras tomadas provienen de una población con
distribución Normal, esto se realiza con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la
Ficha de Recolección de Datos
GRUPOS
Control (-) Control (+)
A
Agua Destilada
B
Enjuague con
Clorhexidina 0.12%
C
Vinagre 5%
D
Enjuague con
cetilpiridinio 0.05%
UFC/0.1ML
Muestra 1
Incontables
Muestra 1
0
Muestra 1
0
Muestra 1
0
Muestra 2 Incontables Muestra 2 0 Muestra 2 0 Muestra 2 0
Muestra 3 4 Muestra 3 0 Muestra 3 69 Muestra 3 1
Muestra 4 Incontables Muestra 4 0 Muestra 4 47 Muestra 4 0
Muestra 5 Incontables Muestra 5 0 Muestra 5 18 Muestra 5 0
Muestra 6 Incontables Muestra 6 0 Muestra 6 18 Muestra 6 0
Muestra 7 Incontables Muestra 7 0 Muestra 7 13 Muestra 7 1
Muestra 8 Incontables Muestra 8 0 Muestra 8 18 Muestra 8 0
>300 colonias se considera incontable
44
prueba de Shapiro - Wilk (menor a 20 datos).
Si las muestras provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan
pruebas paramétricas (media, desviación estándar): T student, ANOVA.
Si las muestras No provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan
pruebas no paramétricas (orden, signos): Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon
Para cada prueba de Hipótesis, se compara el valor de significación con el 0,05 (95% de
confiabilidad), si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis nula),
si es inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alterna).
Hipótesis a demostrar
Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal
Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal
Tabla 2. Pruebas no paramétricas: Pruebas de Kolmogorov - Smirnov y Shapiro – Wilk
Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístic
o
gl Sig.
AGUA DESTILADA 0,513 8 0,000 0,418 8 0,000
VINAGRE 5% 0,332 8 0,010 0,842 8 0,079
CLORURO DE CETILPIRIDINIO
0,05%
0,455 8 0,000 0,566 8 0,000
Advertencias
CLORHEXIDINA 0,12% es constante
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk, la mayoría de los valores de significación
(Sig) de los grupos experimentales son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), esto es
se acepta Hipótesis alterna, las muestras No provienen de poblaciones con distribución
Normal, por esto para la comparación de medias o medianas se realiza con pruebas NO
paramétricas: Kruskal Wallis.
45
0
50
100
150
200
250
300
AGUA DESTILADA (CONTROL NEGATIVO)
E.B. GLUCONATO DE CLORHEXIDINA 0.12% (CONTROL
POSITIVO)
VINAGRE 5 % (ÁCIDO ACÉTICO)
E.B. CLORURO DE CETILPIRIDINIO
0.05 %
263
0 22,9 0,3
UFC
/0,1
ml
COMPARACIÓN DE MEDIAS
Tabla 3. Análisis descriptivo de los resultados.
Fuente: Ing. Jaime Molina
Figura 17. Comparación de medias
Fuente: Ing. Jaime Molina
La muestra de CLORHEXIDINA 0,12% y la muestra de CLORURO DE
CETILPIRIDINIO 0,05%, aparentan ser similares, con la realización de las pruebas de
Hipótesis se verifica o niega esta afirmación:
Pruebas no paramétricas Kruskal Wallis
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias similares)
Descriptivos
MEDIDAS
N
Med
ia
Des
via
ció
n
está
nd
ar
Err
or
está
nd
ar
95% del intervalo de
confianza para la
media
Mín
imo
Máx
imo Límite
inferior
Límite
superio
r
AGUA DESTILADA
(Control Negativo)
8 263,00 104,652 37,000 175,51 350,49 4 300
CLORHEXIDINA 0,12%
(Control Positivo)
8 0,00 0,000 0,000 0,00 0,00 0 0
VINAGRE 5% 8 22,88 23,679 8,372 3,08 42,67 0 69
CLORURO DE
CETILPIRIDINIO 0,05%
8 0,25 0,463 0,164 -0,14 0,64 0 1
Total 32 71,53 123,705 21,868 26,93 116,13 0 300
46
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Figura 18. Prueba Estadística de Kruskal-Wallis.
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis el valor de significación calculado (Sig. asintótica =
0,000) es menor a 0,05 (95% de confiabilidad), luego aceptamos la Hipótesis alternativa,
esto es que existen diferencias significativas con respecto a la tendencia central de las
poblaciones. Para verificar cuales muestras son diferentes se realizan pruebas dos a dos:
47
Figura 19. Comparación por parejas de la prueba de Kruskal-Wallis.
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la prueba dos a dos se tiene que:
No son similares entre las muestras (Sig menor a 0,05):
Clorhexidina 0,12% y Vinagre 5%
Clorhexidina 0,12% y Agua destilada
Cloruro de cetilpiridinio 0,05% y Agua destilada
Vinagre 5% y Agua destilada
Son similares entre las muestras (Sig mayor a 0,05):
Clorhexidina 0,12% y Cloruro de cetilpiridinio 0,05%
Cloruro de cetilpiridinio 0,05% y Vinagre 5%
Eliminar agua destilada, se mejoran las similitudes:
48
Pruebas no paramétricas Kruskal Wallis, eliminado agua destilada que pertenece
al control negativo (incontables)
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Figura 20. Segunda Prueba Estadística de Kruskal-Wallis.
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis el valor de significación calculado (Sig. asintótica =
0,003 es menor a 0,05 (95% de confiabilidad), por tanto se acepta Ha y se rechaza Ho,
esto es existen diferencias significativas con respecto a la tendencia central de las
poblaciones. Para verificar cuales muestras son diferentes se realizan pruebas dos a dos:
(Control Positivo)
49
Figura 21. Segunda Comparación por parejas de la prueba de Kruskal-Wallis.
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la prueba dos a dos se tiene que:
No son similares entre las muestras (Sig menor a 0,05):
Clorhexidina 0,12% y Vinagre 5%
Cloruro de cetilpiridinio 0,05% y Vinagre 5%
Son similares entre las muestras (Sig mayor a 0,05):
Clorhexidina 0,12% y Cloruro de cetilpiridinio 0,05%
50
CAPITULO V
5. DISCUSIÓN
El cepillo dental desde hace miles de años ha sido usado para el control de la higiene oral,
este instrumento ha demostrado un efecto positivo en la remoción de restos alimenticios
luego de la deglución, lo que ha limitado la acumulación y proliferación de la placa
bacteriana en las piezas dentales, previniendo así problemas orales como gingivitis y
caries (57).
Sin embargo, a pesar de todos los beneficios que este ofrece, estudios han demostrado
que este implemento después de su uso queda contaminado por diversos microorganismos
que provienen de la cavidad oral y del ambiente donde son almacenados, convirtiéndose
en una importante fuente de contaminación y recontaminación de la cavidad oral, que
interviene en la transmisión de infecciones orales y sistémicas (11,14,58).
Varias entidades recomiendan hacer el recambio del cepillo en intervalos cortos de
tiempo, pero muchas veces por desconocimiento o motivos económicos no se lo hace. Al
respecto algunos estudios proponen como una estrategia de educación en salud oral, usar
mecanismos físicos o químicos que garanticen la desinfección de los cepillos de dientes
luego de su uso (11).
Los cepillos dentales pueden contaminarse primero por diversos microorganismos orales,
luego por bacterias entéricas y por último por contaminantes ambientales como hongos y
levaduras (57).
En el presente estudio se evaluó la efectividad del vinagre o ácido acético al 5 % y el
enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio al 0.05%, como sustancias desinfectantes de
cepillos dentales contaminados con Streptococcus mutans, como una medida de
prevención de la caries dental, representando así un hallazgo significativo en la búsqueda
de estrategias complementarias a la higiene oral que estén al alcance del medio y mejoren
la salud bucal de la comunidad en general.
Herrera y cols. (2012), (11) indican que el vinagre al 5 % tiene la capacidad de disminuir
cantidades de microorganismos como Streptococcus mutans y Candida albicans, los
mismos que para el estudio in vitro fueron inoculados en cabezas de cepillos dentales y
sometidos a tratamiento durante 10 minutos. A pesar de utilizar una metodología diferente
estos hallazgos concuerdan con el presente estudio ya que los cepillos tratados con
51
vinagre al 5% durante 15 minutos presentaron una disminución significativa de
Streptococcus mutans principal agente cariogénico.
Al igual que en el estudio de Herrera y cols. (2012) (11), existió un grupo control negativo
que utilizó agua destilada dado que presenta nulo efecto antibacteriano, donde la
magnitud de contaminación de los cepillos se mantuvo intacta, hecho comprobado en los
medios de cultivo donde se obtuvieron colonias incontables.
Según Cortesia C. (2014), (18) el vinagre tiene efecto bactericida del 5 al 10% sobre cepas
de microorganismos aerobios y anaerobios Gram positivos y Gram negativos, todo
dependerá de las características del microorganismo y del tiempo de exposición a dicha
sustancia, los resultados mencionados se correlacionan con esta investigación teniendo
en cuenta que el Streptococcus mutans es un microorganismo Gram positivo anaerobio
facultativo que estuvo expuesto al vinagre al 5%.
Aguilera, M y cols. (2011), (39) realizaron un estudio in vitro acerca de la sensibilidad
del Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales, uno de estos fue el
enjuague con cetilpiridinio al 0.05%, los resultados demostraron que el S. mutans es
sensible a todos los enjuagues bucales, sin embargo concluyeron que el cloruro de
cetilpiridinio era el tercero en producir un descenso de carga bacteriana, ya que la
clorhexidina mostró mayor inhibición en el crecimiento de Streptococcus mutans.
Estos datos coinciden con la presente investigación en la cual el grupo control positivo
representado por el enjuague con gluconato de clorhexidina al 0.12% tuvo mayor efecto
antibacteriano con respecto al enjuague con cloruro de cetilpiridinio al 0.05%, sin
embargo, estadísticamente el efecto antibacteriano del cetilpiridinio fue muy similar al de
la clorhexidina.
De acuerdo a los resultados obtenidos se evidenció que el enjuague bucal con gluconato
de clorhexidina al 0.12% presenta mayor efectividad antibacteriana frente al vinagre y al
cloruro cetilpiridinio, concordando así con Aguilera, M. (2011), (39).
No obstante, la efectividad antibacteriana evaluada en este estudio demostró que existen
métodos químicos que pueden ser empleados para prevenir la contaminación microbiana
evidente que sufren los cepillos dentales.
52
Se debe tomar en cuenta que los resultados de este estudio tienen límites de interpretación
dado que el tamaño de muestra para cada grupo experimental fue pequeño, por lo que se
requiere estudios complementarios.
6. CONCLUSIONES
El vinagre al 5 % y el enjuague bucal con cloruro de cetilpiridinio al 0.05% sí
presentaron efectividad antibacteriana frente a cepillos dentales inoculados con
Streptococcus mutans, por tanto, pueden ser utilizados como sustancias
desinfectantes de los mismos para así disminuir su contaminación.
Los cepillos dentales luego de ser tratados por 15 minutos con vinagre al 5%
(ácido acético) presentaron una media de crecimiento bacteriano de 23 UFC, lo
que indica que a pesar de haber realizado la desinfección, su efectividad es menor
comparada con las otras sustancias utilizadas en el estudio.
El enjuague con cloruro de cetilpiridinio al 0.05% presentó un elevado nivel de
desinfección en los cepillos dentales, ya que luego de ser tratados existió apenas
una media de crecimiento bacteriano de 0.3 UFC, indicando un efecto muy
similar al que produjo el enjuague con clorhexidina.
Se comprobó que el enjuague con gluconato de clorhexidina al 0.12% presentó la
mayor efectividad antibacteriana sobre los cepillos dentales inoculados con
Streptococcus mutans, ya que disminuyó a 0 el número de microorganismos
presentes en los cepillos dentales.
El Streptococcus mutans demostró ser sensible in vitro a sustancias químicas
como el vinagre al 5% y el cloruro de cetilpiridinio 0.05%, sin embargo, se
observó que el microorganismo presenta mayor sensibilidad frente a la
clorhexidina al 0,12%.
53
7. RECOMENDACIONES
- Los estudiantes y profesionales odontólogos debemos brindar mayor educación y
promoción en salud bucal, orientada al cuidado del cepillo dental, ya que al ser el
principal instrumento de higiene oral es evidente su contaminación; es nuestro
deber informar a nuestros pacientes y ser promotores de buenos hábitos tanto de
almacenamiento, mantenimiento, desinfección y recambio.
- La desinfección de los cepillos dentales puede ser realizada habitualmente y en
forma individual en toda la población, no para alargar el tiempo de utilidad
considerando que la vida útil de un cepillo común no debe sobrepasar los 3 meses,
sino como un método preventivo en la aparición de enfermedades bucales,
principalmente la caries dental, siendo un complemento de la higiene oral.
- Se sugiere realizar investigaciones con las mismas sustancias desinfectantes sobre
aparatos y prótesis dentales para estudiar la efectividad antimicrobiana que
presentan frente a otros patógenos orales específicos y poder implementarlas
como medidas preventivas en salud oral.
- Resulta necesario realizar estudios sobre la contaminación de los cepillos dentales
de los pacientes, para lograr identificar y cuantificar las especies de
microorganismos existentes en diversos grupos de población, principalmente en
personas vulnerables como son niños, ancianos, mujeres embarazadas, pacientes
inmunodeprimidos, entre otros, para conocer cuál es la real contribución de los
cepillos a la salud oral.
54
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59
ANEXOS
Anexo 1. Certificado de aprobación del SEISH - UCE
60
Anexo 2. Solicitud para la realización del análisis microbiológico
61
Anexo 3. Factura de la compra de la cepa
62
Anexo 4. Activación de la cepa de acuerdo al fabricante
Anexo 5. Ficha para la recolección de datos
63
Anexo 5. Ficha para la recolección de datos
Ficha de Recolección de Datos
GRUPOS
Control Estudio
Control (+) Control (-)
A
Agua Destilada
B
Enjuague con Clorhexidina
0.12%
C
Vinagre 5%
D
Enjuague con
cetilpiridinio 0.05%
UFC/0.1ML
Muestra 1
Muestra 1
Muestra 1
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 2 Muestra 2 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 3 Muestra 3 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 4 Muestra 4 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 5 Muestra 5 Muestra 5 Muestra 6 Muestra 6 Muestra 6 Muestra 6 Muestra 7 Muestra 7 Muestra 7 Muestra 7 Muestra 8 Muestra 8 Muestra 8 Muestra 8
64
Anexo 6. Certificado de realización de las pruebas microbiológicas
65
Anexo 7. Certificado de los resultados del análisis microbiológico
66
Anexo 8. Certificado de esterilización
67
Anexo 9. Protocolo de manejo de desechos
68
Anexo 10. Autorización para el uso de instalaciones de depósito de desechos
69
Anexo 11. Certificado de renuncia al trabajo estadístico
70
Anexo 12. Resultado del sistema anti plagio URKUND
71
Anexo 13. Certificado de traducción oficial.
72
Anexo 14. Carta de declaración de conflicto de interés
