UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
“EFECTO INHIBITORIO DEL ACEITE ESENCIAL DE CÁSCARA
DE NARANJA (CITRUS SINENSIS) AL 25, 50 Y 100 % EN CEPAS
DE PORPHYROMONAS GINGIVALIS. “
Trabajo de investigación previo a la obtención del Título de Odontóloga
Autor: Cevallos Andrade Andrea Lizeth
Tutora: Dra. Sofía Carolina Santórum Chiriboga
Quito, septiembre 2017
ii
DERECHOS DE AUTOR
Yo, Andrea Lizeth Cevallos Andrade, en calidad de autor del trabajo de investigación
EFECTO INHIBITORIO DEL ACEITE ESENCIAL DE CÁSCARA DE
NARANJA (CITRUS SINENSIS) AL 25, 50 Y 100 % EN CEPAS DE
PORPHYROMONAS GINGIVALIS, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a
hacer uso de todos los contenidos que me/nos pertenecen o parte de los que contiene esta
obra, con fines estrictamente académicos o de investigación. Los derechos que como
autor me corresponden, con excepción de la presente autorización, seguirán vigentes a
mi/nuestro favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8; 19 y demás
pertinentes de la Ley de Propiedad intelectual y su Reglamento. También autorizo a la
Universidad Central del Ecuador a realizar la digitación y publicación de este trabajo de
investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la
Ley Orgánica de Educación Superior.
_________________________
Andrea Lizeth Cevallos Andrade
C.I: 1003324546
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Dra. Sofía Carolina Santorum Chiriboga, en mi calidad de tutora del trabajo de
titulación, modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por Andrea Lizeth Cevallos
Andrade, cuyo título es: “EFECTO INHIBITORIO DEL ACEITE ESENCIAL DE
CÁSCARA DE NARANJA (CITRUS SINENSIS) AL 25, 50 Y 100 % EN CEPAS
DE PORPHYROMONAS GINGIVALIS”, previo a la obtención del Grado de
Odontólogo: considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en el
campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte del
tribunal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo sea
habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad
Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito, a los 20 días del mes de Julio del 2017.
__________________________________
Dra. Sofía Carolina Santorum Chiriboga
DOCENTE-TUTORA
C.C: 1003445374
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por Dr. Eduardo Estévez, Dr. Juan Pablo Jaramillo.
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del
título de Odontólogo presentado por la señorita Andrea Lizeth Cevallos Andrade.
Con el título:
EFECTO INHIBITORIO DEL ACEITE ESENCIAL DE CÁSCARA
DE NARANJA (CITRUS SINENSIS) AL 25, 50 Y 100 % EN CEPAS
DE PORPHYROMONAS GINGIVALIS.
Emite el siguiente veredicto:
Fecha: 20 de Septiembre del 2017
Para constancia de lo actuado firman
Nombre Apellido Calificación Firma
Presidente: Dr. Eduardo Estévez
Vocal 1: Dr. Juan Pablo Jaramillo
v
DEDICATORIA
Este sueño hecho realidad está dedicado con mucho
amor a mis padres Adrianita Andrade M. y Ramiro
Cevallos P.; que son la principal motivación e
inspiración en mi vida, y a quienes admiro, respeto y
amo infinitamente, no sería nada sin ustedes.
A mis hermanos Álvaro y María José Cevallos A. que
confiaron siempre en mí y me brindaron su amor y
amistad incondicional.
A mi pequeño sobrino Benjamín Cevallos T. que llego a
este mundo a llenar de amor y alegría mi corazón.
Andrea Lizeth Cevallos Andrade
vi
AGRADECIMIENTOS
A Dios por darme paz y fé espiritual, cuidar siempre de
mí y toda mi familia.
A mis padres por brindarme su apoyo y amor
incondicional en los momentos más difíciles, por sus
consejos y por sus bendiciones diarias.
A mis hermanos por su cariño, por sus palabras de
aliento y por siempre creer en mí.
A la Universidad Central del Ecuador por abrirme sus
puertas, y a los profesores por contribuir con mi
formación académica universitaria.
De una manera muy especial agradezco a la Dra.
Carolina Santórum por sus tutorías académicas en el
desarrollo de esta investigación, por su tiempo,
paciencia y confianza.
Andrea Lizeth Cevallos Andrade
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DERECHOS DE AUTOR .............................................................................................. ii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ....................... iii
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ............................. iv
DEDICATORIA ............................................................................................................. v
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................ vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS ....................................................................................... vii
ÍNDICE DE TABLAS .................................................................................................... x
ÍNDICE DE GRÁFICOS .............................................................................................. xi
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................ xii
RESUMEN ................................................................................................................... xiii
INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1
CAPÍTULO I .................................................................................................................. 3
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................ 3
1.2. OBJETIVOS .................................................................................................................................... 5
1.2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS .................................................................................. 5
1.3. JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................................... 6
1.4. HIPÓTESIS ...................................................................................................................................... 7
1.4.1. HIPOTESIS DE INVESTIGACIÓN ..................................................................................... 7
1.4.2. HIPOTESIS NULA .................................................................................................................... 7
CAPÍTULO II ................................................................................................................. 8
2.1. MARCO TEÓRICO ....................................................................................................................... 8
2.1.1. ENFERMEDAD PERIODONTAL .......................................................................... 8
2.1.1.4.1. Biofilm ............................................................................................................ 10
2.1.1.4.2. Formación Del Biofilm ................................................................................... 11
2.1.1.6.1. Gingivitis ........................................................................................................ 14
2.1.1.6.2. Periodontitis .................................................................................................... 16
2.1.1.8. Control químico de la enfermedad periodontal ................................................. 22
2.1.1.8.1. Gluconato de clorhexidina .............................................................................. 22
2.1.1.8.1.1 Mecanismo De Acción ................................................................................. 22
2.1.1.8.1.2. Usos en Odontología .................................................................................. 23
viii
2.1.1.8.1.3. Efectos Adversos ........................................................................................ 23
2.1.2. PORPHYROMONAS GINGIVALIS ...................................................................... 25
2.1.3. PLANTAS MEDICINALES ................................................................................... 27
2.1.3.3. Fitoterapia Clásica ............................................................................................. 28
2.1.3.4. Aportes en Odontología ..................................................................................... 28
2.1.4. NARANJA COMÚN O CITRUS SINENSIS .......................................................... 29
2.1.4.1. Descripción Botánica ......................................................................................... 29
2.1.4.2. Taxonomía Reino .............................................................................................. 30
2.1.4.3. Morfología ......................................................................................................... 30
2.1.4.4. Composición Química ....................................................................................... 31
2.1.4.5. Propiedades y usos medicinales ........................................................................ 31
2.1.5.1. Obtención .......................................................................................................... 32
2.1.5.2. Propiedades Fisicoquímicas .............................................................................. 32
2.1.5.3. Composición Química ....................................................................................... 32
2.1.5.4. Propiedades Medicinales ................................................................................... 32
2.1.5.5. Actividad antibacteriana .................................................................................... 33
2.1.5.6. Hallazgos en Odontología ................................................................................. 34
CAPÍTULO III ............................................................................................................. 35
3.1. METODOLOGÍA ........................................................................................................................ 35
3.1.1. Tipo y diseño del estudio ...................................................................................... 35
3.1.2. Población de estudio y muestra ............................................................................ 35
3.1.4. Criterio de inclusión y exclusión .......................................................................... 35
3.1.6. Definición operacional de las variables ............................................................... 38
3.1.7.2. Materiales .......................................................................................................... 39
3.1.8.1. Extracción del aceite esencial de cáscara de naranja por destilación. ............... 40
3.1.8.2. Prueba de difusión por disco en agar ................................................................. 42
3.1.8.2.1. Activación de la cepa bacteriana .................................................................... 42
3.1.8.2.2. Estandarización y preparación del inóculo ..................................................... 44
3.1.8.2.3. Inoculación de las placas ................................................................................ 45
3.1.8.2.4. Colocación de discos ...................................................................................... 47
3.1.8.2.5. Lectura de resultados ...................................................................................... 49
ix
CAPÍTULO IV .............................................................................................................. 52
4.1. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ................................................. 52
4.1.1. Medición y recolección de datos .......................................................................... 52
4.1.2. Análisis de resultados ........................................................................................... 54
4.1.3. Prueba de Normalidad ......................................................................................... 54
4.1.4. Pruebas no paramétricas: Comparación entre sustancias .................................. 57
CAPÍTULO V ............................................................................................................... 68
5.1. DISCUSIÓN .................................................................................................................................. 68
5.2. CONCLUSIONES ....................................................................................................................... 70
5.3. RECOMENDACIONES ............................................................................................................ 71
BIBLIOGRAFÍA .......................................................................................................... 72
ANEXOS ....................................................................................................................... 76
x
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1 Operacional de las variables .............................................................................. 38
Tabla 2 Pruebas de normalidad ..................................................................................... 54
Tabla 3 Comparación entre sustancias ........................................................................... 57
xi
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico 1 Campana de Gauss aceite al 25% .................................................................. 55
Gráfico 2 Campana de Gauss aceite al 50% .................................................................. 55
Gráfico 3 Campana de Gauss aceite al 100% ................................................................ 56
Gráfico 4 Campana de Gauss Clorhexidina al 0.12% ................................................... 56
Gráfico 5 Comparación de medias ................................................................................. 58
Gráfico 6 Diagrama de caja y bigotes del control negativo ........................................... 59
Gráfico 7 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 25% ................................................ 60
Gráfico 8 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 50% ................................................ 61
Gráfico 9 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 100% .............................................. 62
Gráfico 10 Diagrama de caja y bigotes de la clorhexidina al 0.12%.............................. 63
Gráfico 11 Prueba Kruskal Wallis .................................................................................. 64
Gráfico 12 Prueba dos a dos o de emparejamiento ........................................................ 65
xii
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 Árbol de Naranjo dulce .................................................................................... 29
Figura 2 Fruto del naranjo .............................................................................................. 30
Figura 3 Extracción del Aceite esencial de cáscara de naranja ...................................... 41
Figura 4 Pasos para la activación de la cepa bacteriana (Porphyromonas Gingivalis) .. 43
Figura 5 Cultivo primario colonias de Porphyromonas Gingivalis ................................ 44
Figura 6 Estándar de turbidez de McFarland.................................................................. 45
Figura 7 Cajas petri inoculadas y rotuladas .................................................................... 46
Figura 8 Discos de papel embebidos en sustancias ........................................................ 47
Figura 9 Colocación de discos de papel ......................................................................... 48
Figura 10 Jarra de anaerobiosis ...................................................................................... 49
Figura 11 Medición de halos de inhibición a las 48 horas ............................................ 50
Figura 12 Halos de inhibición a las 48 horas................................................................. 52
Figura 13 Tabla de datos ............................................................................................... 53
xiii
TÍTULO: “Efecto inhibitorio del aceite esencial de cáscara de naranja (Citrus sinensis) al 25,
50 y 100 % en cepas de Porphyromonas gingivalis”
Autor: Andrea Lizeth Cevallos Andrade
Tutor: Dra. Sofía Carolina Santórum Chiriboga
RESUMEN
En la actualidad la medicina natural se ha vuelto una opción de tratamiento muy importante para la
sociedad, es por eso que a lo largo de los años se han realizado múltiples investigaciones científicas
para identificar las propiedades curativas de los productos botánicos que nos brinda la tierra, por esta
razón la presente investigación tuvo como objetivo determinar mediante un estudio in-vitro el efecto
inhibitorio del aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis) al 25, 50 y 100 %, frente a
cepas de Porphyromonas gingivalis; que es una de las principales bacterias causantes de la
enfermedad periodontal.
Esta investigación se basó en el método de Kirby Bauer, por lo tanto se utilizó 30 cultivos
bacterianos de agar sangre inoculados con Porphyromonas gingivalis, donde se colocó discos de
papel embebidos de aceite esencial en sus tres porcentajes, un control positivo con clorhexidina al
0,12% y un control negativo con agua destilada.
A las 48 horas se procedió a medir los halos de inhibición, y los resultados estadísticos obtenidos
con la pruebas no paramétricas de Kruskal-Wallis determinaron que; hubo diferencia
estadísticamente significativa entre el aceite esencial al 25,50 y 100% comparado con la clorhexidina
al 0,12%. Los resultados obtenidos fueron; aceite al 25% 8,97mm (IC95% 8,49-9,44) (p< 0,05);
aceite al 50% 10,13mm (IC95% 9,71-10,56) (p< 0,05); aceite al 100 % 13,47mm (IC95% 12,52-
14,42) (p< 0,05); y clorhexidina al 0,12% 18,33mm (IC95% 16,72-19,95) (p< 0,05).
Concluyendo así que el aceite esencial inhibe en todas sus concentraciones, y que a mayor
concentración aumenta la eficacia inhibitoria, pero sin embargo no supera la eficacia inhibitoria de
la clorhexidina al 0,12%.
Palabras clave: Enfermedad Periodontal, Porphyromonas gingivalis, citrus sinensis.
xiv
TITLE: “Inhibitory effect of the essential oil made of orange peel (citrus sinensis) at 25.50%
and 100% of the strains of Porphyromona Gingivalis”
Author: Andrea Lizeth Cevallos Andrade
Tutor: Dr. Sofía Carolina Santórum Chiriboga
ABSTRACT
Currently natural medicine has become a very important option for treatments in the society, that is
why along the years there have been many scientific reserachs to identify the healing properties of
botanical products provided by the earth. This research aims at determining through an in-vitro study
the inhibitory effect of orange peel (Citrus sinensis) at 25.50 and 100% against the strains of
Porphyromona gingivalis, which is one of the main bacteria causing the periodontal disease. This
research was based in the method Kirby Bauer, therefore, 30 bacteria cultures of blood agar were
used, inoculated with Porphyromona gingivalis, and these received paper pieces with essential oil in
the three percentages, a positive control with chlorhexidine at 0.12% and a negative control with
distilled water. 48 hours later the inhibition halos were measured, and the statistical analysis obtained
in the non-parametric tests Kruskal-Wallis determined that there was a statistically significant
difference between the essential oil at 25.50 and 100%, when compared to the chlorhexidine at
0.12%. The results obtained were oil at 25%, 8.97mm (IC95% 8,49-9,44) (p< 0,05); oil at 50%,
10.13mm (IC95% 9,71-10,56) (p< 0,05); oil at 100 %, 13.47mm (IC95% 12,52-14,42) (p< 0,05);
and chlorhexidine at 0.12%, 18.33mm (IC95% 16,72-19,95) (p< 0,05). It is concluded that the
essential oil has an inhibitory effect in all the concentrations, and that greater concentrations increase
the inhibitory effectiveness; however, it is not higher than the inhibitory effect of chlorhexidine at
0.12%.
KEY WORDS: PERIODONTAL DISEASE/ PORPHYROMONAS GINGIVALIS/ CITRUS
SINENSIS.
1
INTRODUCCIÓN
Las enfermedades periodontales son patologías comunes en todo el mundo que atacan a los
tejidos de soporte del diente; es de gran importancia saber que las interacciones bacterianas
con el huésped en la interfase del biofilm con el periodonto desencadenan inicialmente la
inflamación gingival, resultando en gingivitis, que con el tiempo, puede progresar el desgaste
de los tejidos que soportan al diente y esto al estar mediado por el sistema inmune, afecta el
hueso alveolar, lo que se conoce como periodontitis que es la principal causa de pérdida de
dientes en adultos, y contribuye a aumentar la susceptibilidad a otras enfermedades
sistémicas. (1)
Se ha evidenciado científicamente que, la presencia de Porphyormonas gingivalis , se
asocia directamente con la enfermedad periodontal destructiva, y la formación de biofilm
bacteriano en dientes permanentes, que se enriquece de bacterias anaerobias Gram-negativas
las mismas que promueven vías proinflamatorias y da origen a la formación de bolsas
periodontales. (2)
Por otro lado la medicina natural en la actualidad tiene un papel muy importante en
tratamientos alternativos y de complemento en la sociedad, de manera que los aceites
esenciales han sido motivo de investigación ya que son mezclas líquidas, volátiles, naturales
y complejas de compuestos de bajo peso molecular formadas por plantas aromáticas como
metabolitos secundarios, el aceite esencial de cáscara de naranja posee propiedades
medicinales significativas; por lo tanto, puede ser utilizado para la terapia de enfermedades
infecciosas y no infecciosas, la presencia de diferentes compuestos en el aceite hace posible
su uso como agente antimicrobiano que ofrece un bajo riesgo de desarrollo de resistencia
microbiana. (3)
Estudios realizados han demostrado que el aceite esencial de Citrus sinensis tiene
propiedades medicinales entre estas, propiedades antibacterianas, antioxidantes que refuerza
el sistema inmunológico, contiene vitamina C y se ha utilizado tradicionalmente para tratar
dolencias como estreñimiento, calambres, cólicos, diarrea, bronquitis, tuberculosis, tos, frío,
obesidad, trastorno menstrual, angina, hipertensión, ansiedad, depresión y estrés. (4)
2
La prevalencia de la enfermedad periodontal a nivel mundial es alta, por lo que compromete
un problema en la salud pública; además actualmente, el uso irracional de antibióticos ha
ocasionado resistencias agravando de esta manera las enfermedades causadas por patógenos
bacterianos, y el uso de varios agentes antibacterianos en altas dosis puede causar toxicidad
en seres humanos, es por esta razón que se ha llevado a cabo investigaciones para explorar
alternativas contra cepas bacterianas y de esta manera los aceites esenciales de plantas y sus
principales constituyentes químicos son candidatos potenciales como agentes
antibacterianos, por lo tanto esta investigación aporta con una alternativa terapéutica de
complemento. (5) (4)
Motivo por el cual el presente estudio está enfocada en determinar mediante un estudio in-
vitro el efecto inhibitorio del aceite esencial de Citrus sinensis al 25, 50 y 100 % en cepas
de Porphyromonas gingivalis.
3
CAPÍTULO I
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La enfermedad periodontal es muy prevalente en población mundial. La placa subgingival
induce una respuesta inflamatoria e inmune siendo así el factor más importante en el
desarrollo de esta enfermedad. La composición de la placa subgingival ha sido motivo de
algunos estudios, ya que se ha encontrado la presencia de subtipos diferentes de bacterias
que están asociadas con el deterioro periodontal, la profundidad de bolsas periodontales, y
los índices de sangrado. (6)
Es la enfermedad más usual que afecta la cavidad oral después de la caries dental y la
principal causa de pérdida de dientes, lo que afecta la calidad de vida de las personas. Por lo
tanto, el diagnóstico y el control de la enfermedad a tiempo es el principal objetivo de los
odontólogos hoy en día. (7)
En la cavidad oral podemos encontrar más de seiscientas cepas bacterianas que pueden estar
en el biofilm de la placa bacteriana, ya sea por encima o debajo del margen gingival; lo cual
nos indica diversidad bajo varias condiciones clínicas periodontales. (8)
Porphyromona gingivalis es una bacteria Gram negativa, anaerobia estricta que se relaciona
con la aparición y aumento de la periodontitis crónica y agresiva, con frecuencia están
presentes en pacientes con enfermedad periodontal y se encuentran incluso en personas
sanas.(9)
Las biopelículas microbianas de la cavidad oral son grupos de bacterianas de estructuras
tridimensionales, que se unen a una superficie sólida como el esmalte de los dientes, la
superficie de la raíz o implantes dentales y están incrustados en una matriz de exo-
polisacárido. Este biofilm oral sirve como un sistema para la adhesión bacteriana, y
resistencia a los antibióticos. (10)
Se dice que las biopelículas son resistentes a los antibióticos a concentraciones 10-1000
veces mayor que la necesaria para matar las células de vida libre. Este alto nivel de
4
resistencia del biofilm hace que estas infecciones sean difíciles de controlar con
antibioticoterapia convencional. Dentro de los principales factores que favorecen la
resistencia a los antibióticos del biofilm incluyen la difusión ineficaz del antibiótico dentro
de la matriz del biofilm, y la presencia de cepas bacterianas resistentes a los antibióticos. La
microbiota y algunos tejidos orales de la cavidad oral puede actuar como un depósito de
microorganismos resistentes a los antibióticos; esto podría explicar el aumento de la
frecuencia de las infecciones resistentes al antibiótico. (11)
Por lo tanto se plantea la siguiente interrogante:
¿Tiene efecto inhibitorio el aceite esencial de cáscara de naranja (Citrus sinensis), frente a
Porphyromonas gingivalis, y cuán eficaz es a diferentes concentraciones?
5
1.2. OBJETIVOS
1.2.1. OBJETIVO GENERAL
- Determinar mediante un estudio in- vitro el efecto inhibitorio del aceite esencial
de cáscara naranja (Citrus sinensis) a diferentes concentraciones en cepas de
Porphyromonas gingivalis.
1.2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Evaluar el efecto inhibitorio del aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus
sinensis) ante cepas de Porphyromonas gingivalis en concentraciones de 25, 50
y 100 %
- Establecer a que concentración se obtiene mayor efecto inhibitorio en cepas de
Porphyromonas gingivalis.
- Comparar el efecto inhibitorio del aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus
sinensis) con clorhexidina al 0,12% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis.
6
1.3. JUSTIFICACIÓN
De acuerdo con la OMS las periodontopatías, tienen una prevalencia del 60 % en la
población mundial; por lo que representan un problema a diario para los especialistas en
salud bucal. (13)
Estas enfermedades son un problema de gran importancia en la salud pública en especial la
periodontitis, sus signos y síntomas reducen la calidad de vida, ya que altera la función de
masticación y deteriora la estética, causa pérdida dental y discapacidad, es responsable del
edentulismo y disfunción masticatoria, y por estas razones tiene un gran impacto y
repercusiones en la salud de los pacientes.(14)
Un dato importante a tomar en consideración son los efectos secundarios que producen
ciertos agentes antimicrobianos comúnmente utilizados como complemento para tratar esta
enfermedad, como la clorhexidina que, al uso continuo y en proporciones y tiempos mal
administrados por los pacientes puede producir tinción de los dientes y dorso de la lengua
además de alteraciones del gusto. (15)
Por lo tanto, esta investigación aporta con una alternativa terapéutica natural en el
tratamiento de las enfermedades periodontales, ya que algunos pacientes pueden presentar
problemas a la hora de ser tratados con antibióticos y agentes antimicrobianos debido a
resistencias bacterianas y también hipersensibilidad a ciertos fármacos.(16)
La medicina natural hoy en día es utilizada como alternativa para el tratamiento de ciertas
enfermedades, y en esta ocasión el objetivo es investigar a fondo el aceite esencial de cáscara
de naranja que lleva como nombre científico Citrus sinensis, ya que artículos científicos
afirman tener propiedades antibacterianas y puede ser utilizado como una opción de
tratamiento complemento en la enfermedad periodontal, la misma que es causada por varios
microorganismos, entre los más importantes, la Porphyromonas gingivalis. (16)
Por esta razón beneficiaria a la salud pública dando opción natural de bajo costo y fácil
accesibilidad; y de la misma manera podría favorecer al profesional odontólogo
proporcionando una alternativa a la solución y tratamiento de ciertas enfermedades
periodontales. (16)
7
1.4. HIPÓTESIS
1.4.1. HIPOTESIS DE INVESTIGACIÓN
- El aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis), tiene efecto inhibitorio
sobre cepas de Porphyromonas gingivalis.
1.4.2. HIPOTESIS NULA
- El aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis), no tiene efecto
inhibitorio sobre cepas de Porphyromonas gingivalis.
8
CAPÍTULO II
2.1. MARCO TEÓRICO
2.1.1. ENFERMEDAD PERIODONTAL
2.1.1.1. Definición
Mariotti, define a las enfermedades periodontales como una extensa familia de patologías
complejas, que se encuentran relacionadas con la encía y el conjunto de algunas
etiologías.(17)
Se define también como una condición inflamatoria compleja, que se identifica por la
destrucción de los tejidos periodontales blandos y duros que dan soporte al diente en los que
se incluye hueso alveolar, ligamento periodontal y encía. (18)
Son enfermedades causadas por bacterias adheridas a los dientes a través de biofilms
organizados y que se determinan por el sangrado gingival, pérdida de los tejidos de soporte
del diente, y movilidad de los mismos, siendo la principal causa de la halitosis y pérdida de
dientes; estas pueden ser identificadas utilizando algunas técnicas clínicas y su relación con
factores de riesgo y condiciones sistémicas. (19)
La enfermedad periodontal en su forma más leve se manifiesta como gingivitis, que es
causada por el biofilm bacteriano que se acumula en los dientes junto a la encía; pero esta
no afecta las estructuras de soporte subyacentes de los dientes y es reversible; mientras que
la periodontitis si produce pérdida de tejido conectivo y soporte óseo y es una causa
importante de pérdida de dientes. (14)
9
2.1.1.2. Manifestaciones Clínicas
La inflamación, es la respuesta fisiológica que presentan clínicamente los tejidos
periodontales ante numerosos tipos de agresiones, siendo la más común la que es ocasionada
por infecciones bacterianas; esta respuesta inflamatoria en su fase aguda es de corta
duración, pero si la lesión persiste la respuesta se convierte en crónica. (20)
Clínicamente, esta inflamación gingival se manifiesta por enrojecimiento, hinchazón,
consistencia esponjosa, textura superficial lisa, brillante y sangrado al sondeo.(21)
A demás con presencia de dolor, movilidad, halitosis, exudado purulento, variaciones en la
oclusión, y desplazamiento de piezas dentarias; estas inflamaciones se caracterizan por ser
progresivas, ya que a la larga afecta el ligamento periodontal y el hueso alveolar, dando lugar
a la formación de bolsas periodontales que favorecen el sangrado y retracción gingival. (22)
2.1.1.3. Epidemiología
Los estudios epidemiológicos han manifestado que más de dos tercios de la población
mundial sufren de una de las formas crónicas de enfermedad Periodontal. (23)
Pihlstrom y colaboradores en su artículo destacan que las Enfermedades Periodontales son
muy frecuentes y pueden afectar hasta el 90% de la población mundial, dentro del cual el
50% se debe a la Gingivitis. (14)
En Suramérica, estudios afirman que el 10 y 50% de las personas adultas presentan
Periodontitis. (24)
Según el artículo publicado por Vásquez Ana en el 2016; la prevalencia de Gingivitis en
adolescentes de Latinoamérica oscila entre el 34.5% a 35.1%; y el último estudio poblacional
realizado en Ecuador data del año 1988 reporta una prevalencia de 30% a 44% de Gingivitis
en población entre 6 a 12 años. (25)
10
2.1.1.4. Etiología
La enfermedad periodontal es multifactorial, pero se considera que las bacterias son el
principal factor etiológico, sin embargo, también existen varios factores etiológicos
secundarios que consiguen desempeñar un papel significativo en el desarrollo de la
enfermedad entre estos destacan ranuras de desarrollo en la raíz y restauraciones sobre
extendidas; también factores sistémicos, tales como hormonas y medicamentos; factores
genéticos, como los trastornos inmunitarios congénitos; y por último la deficiencia
nutricional. (21)(14)
López, y colaboradores establece en su artículo que estudios recientes han concluido que la
etiología de la enfermedad periodontal se determina como un desequilibrio entre la respuesta
inmunológica del hospedador y la virulencia bacteriana. (26)
Los principales microorganismos que intervienen en las enfermedades periodontales
incluyen Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Forsythia tannerella, y
Treponema denticola; además, Fusobacterium nucleatum, Eikenella corrodens,
Peptostreptococcus spp, y Campylobacter spp que se han encontrado en bolsas
periodontales. (27)
2.1.1.4.1. Biofilm
Newman, define al Biofilm clínicamente como una estructura, resiliente, amarillo-grisácea
que se adhiere fuertemente a las superficies duras intraorales, incluyendo restauraciones
removibles y fijas.(18)
Los biofilms microbianos son comunidades de microorganismos que se encuentran unidos a
una superficie, y están organizados de manera espacial en una estructura tridimensional
dentro de una matriz extracelular. (28)
Los microorganismos que conforman este biofilm están rodeados por esta matriz extracelular
protectora compuesta de glicoproteínas y polisacáridos extracelulares; por lo tanto, es más
resistente a los antimicrobianos que las bacterias que se encuentran fuera en el mismo
ambiente oral. (21)
11
El biofilm se encuentra muy bien organizado y estructurado de tal manera que tiene
permeabilidad a través de canales circulatorios que permiten la entrada de nutrientes y salida
de productos residuos o metabolitos, es decir un sistema circulatorio que satisface las
necesidades nutricionales y respiratorias de este equipo de microorganismos. (21)
2.1.1.4.2. Formación Del Biofilm
El desarrollo del biofilm empieza por la formación de una placa sobre la superficie de diente
que recién se ha limpiado, a esta placa se la conoce como película adquirida; esta comienza
a formarse en segundos por la adsorción de las glicoproteínas salivales sobre el esmalte de
los dientes, el cemento expuesto, la dentina expuesta de la raíz o cualquier otra superficie
dura dentro de la cavidad oral. (29)
Esta película es seguida rápidamente por la unión inicial de colonizadores tempranos que
son los microorganismos Gram positivos facultativos; esta unión implica el reconocimiento
de moléculas receptoras específicas llamadas adhesinas que se proyectan desde superficies
bacterianas. (21)
Las capas subsecuentes de bacterias se unen a las que ya están en su lugar, a través de ciertas
especies de bacterias, estas se coagregan con otras especies bacterianas, basándose en
características compartidas y relaciones simbióticas. (30)
Conforme aumentan las capas de microorganismos en el Biofilm el contenido de oxígeno se
hace escaso, haciendo que el medio ambiente sea más adecuado para la colonización de
especies anaerobias; y este agotamiento conduce a la proliferación de los colonizadores
secundarios o tardíos que son anaerobios Gram negativos y organismos filamentosos.(21)
12
2.1.1.5. Patogénesis Periodontal
Este término abarca el origen y desarrollo de la enfermedad periodontal, además de las
variaciones en la estructura y la función del periodonto; y el mecanismo mediante el cual
ciertos factores causan esta enfermedad.(18)
Botero, afirma que las enfermedades periodontales, en todas sus presentaciones clínicas, son
el resultado de la acumulación de microorganismos alrededor del diente con la estimulación
del sistema inmune.(31)
Todo empieza cuando las bacterias generan factores de virulencia y se ponen en relación con
las células epiteliales específicamente con las células del epitelio de unión las que son
responsables de generar defensinas y citoquinas pro-inflamatorias.(32)
Las defensinas son péptidos antimicrobianos que eliminan las bacterias mediante la
destrucción de la superficie, pero al mismo tiempo son de mucha importancia en la obtención
de IL-1 y TNFα, que van a producir cambios vasculares porque aumentan el calibre de los
vasos sanguíneos; además, producen IL-8, una citoquina con actividad quimiotáctica para
polimorfo nucleares, estos pasan por los espacios intercelulares del epitelio de unión y
emergen al surco donde se degranulan, y al mismo tiempo eliminan reactivos del oxígeno
y enzimas como catepsina G, lactoferrina, defensinas, mieloperoxidasa, metaloproteinasas
(MMP-8).(33)
Estos reactivos biológicos son perjudiciales para las bacterias, pero también pueden dañar
los tejidos periodontales. (33)
Después de que es estimulada la respuesta inmune innata, desencadena la respuesta inmune
adaptativa y aparecen en el tejido conectivo linfocitos T CD4 y linfocitos B, que colaboran
a resolver el proceso inflamatorio, esta estimulación de linfocitos toma entre cinco y siete
días en alcanzar su mayor activación.(34)
Los linfocitos T CD4 motivan a las citoquinas (IFNγ, IL-2) para que generen mejor actividad
de macrófagos y coestimulan a los linfocitos B a producir anticuerpos tipo IgG e IgA
neutralizantes. (31)
13
Además el surco también cuenta con mecanismos de defensa que ayudan a preservar la salud
periodontal, como, por ejemplo, la barrera anatómica de la mucosa intacta que, con la
descamación fisiológica, remueve microorganismos adheridos al epitelio y evita así su
colonización. (35)
Otro mecanismo de defensa es el líquido crevicular gingival, que actúa como barrera
mecánica mediante la remoción de bacterias y otros componentes, y además como barrera
química porque contiene proteínas antimicrobianas sintetizadas localmente o por
extravasación plasmática. (35)
Newman, determina que ocurren cambios dentro de los tejidos y son apreciables a través del
microscopio como, por ejemplo, la infiltración a los tejidos de múltiples células de defensa
importantes como; neutrófilos, macrófagos, células plamáticas y linfocitos, liberando
extracelularmente de enzimas destructivas que alteran la anatomía normal de los tejidos
conjuntivos; y destaca 4 etapas de desarrollo de la enfermedad, lesión inicial, temprana,
establecida y avanzada.(18)
Porphyromonas gingivalis es considerada una bacteria colonizadora secundaria, que se
encuentra en el surco gingival, llega por inoculación de individuos infectados, a través de la
saliva, y posee la capacidad de adherirse por sus fimbrias de tipo Ib, y II, así como por sus
vesículas de membrana, hemaglutininas, y cápsula, que le permite colonizar el surco,
adaptarse e invadir las células epiteliales en aproximadamente 20 minutos, logrando
replicarse en su interior y diseminarse a las células de alrededor.(36)
14
2.1.1.6. Clasificación
2.1.1.6.1. Gingivitis
Es una condición muy común que se caracteriza por la inflamación indolora de las encías
que se acompaña de eritema sangrado al cepillado dental, y edema; es la forma más común
de inflamación inespecífica, representa la primera etapa de la Enfermedad Periodontal y es
reversible. (17)
Es un proceso inflamatorio que se encuentra afectando únicamente a los tejidos
supragingivales. (15)
Las inflamaciones gingivales son una gran familia de patologías complejas, que se
relacionan con la encía y son multifactoriales, lo que les caracteriza es que se encuentran
únicamente sobre la encía; no afectan de ningún modo a la inserción ni al resto del
periodonto, por este motivo se engloban en un grupo independiente al de las periodontitis.
(37)
Signos y síntomas
Existe una respuesta innata, inmune y humoral que se reflejan localmente en los tejidos
periodontales ante bacterias patógenas que se encuentran en el biofilm adherente al diente;
esta respuesta está destinada a contener el estímulo infeccioso y a prevenir la invasión
bacteriana en los tejidos; pero si la infección no puede ser controlada, la liberación local de
citoquinas y enzimas que degradan los tejidos da lugar a daños en la encía. (38)
Los tejidos inflamados presentan signos cardinales de inflamación, como; el enrojecimiento
e hinchazón, sangrado al sondeo que es un indicador importante de la inflamación gingival;
calor, es otro signo cardinal de inflamación y ha sido investigado como una medida
diagnóstica del estado periodontal. (39)
López, y colaboradores aseguran que se caracteriza por enrojecimiento e hinchazón de las
encías que además sangran fácilmente durante el cepillado dental. (26)
15
Los signos más tempranos de la gingivitis incluyen una pérdida de punteado característico
de la encía adherida más sangrado en el sondeo suave; la encía saludable es rosa coral;
cuando existe inflamación, la encía involucrada se vuelve de color rojo claro, con la
progresión, el área se vuelve más roja y edematosa, a medida que el proceso empeora la
encía involucrada se vuelve más roja brillante o magenta; la encía suele mostrar márgenes
que pueden ser embotados, retrocedidos o hiperplásticos; la inflamación crónica causa
aumento de tamaño gingival significativo debido a edema o fibrosis, el proceso se denomina
gingivitis hiperplásica crónica, el sangrado ocurre fácilmente, y el exudado se puede ver en
el surco gingival. (39)
Diagnóstico
La inspección visual es de gran ayuda para el diagnóstico, aquí se observará una inflamación
de la encía, con alargamiento del contorno gingival por la presencia de edema, además es
roja o azulada, posee temperatura sulcular alta, sangrado al examen de sondaje, estos son los
signos que se asocian a tejidos periodontales sin pérdidas de inserción, o firmes, aunque
reducidos. Para este diagnóstico se utiliza una sonda periodontal, que ayuda a detectar el
componente inflamatorio de las bolsas.; además, con la sonda se determinara la existencia o
no de pérdida de inserción. (37)
La profundidad de sondaje es el espacio que se forma alrededor de los dientes, entre la encía
y la superficie radicular, se realiza midiendo desde el margen gingival libre hasta la
profundidad del surco gingival una encía saludable oscila entre 1 y 3 mm en la gingivitis
esta puede aumentar entre 0,69mm y 1mm o no necesariamente tiene que estar en aumento,
es decir no es un determinante de gingivitis sino más bien la presencia de sangrado al examen
de sondeo es un indicador fidedigno de gingivitis. (31)
16
Clasificación
La gingivitis puede subdividirse dependiendo de su factor etiológico dentro de las más
importantes encontramos:
a. Gingivitis inducida por placa
b. Gingivitis no inducida por placa (18)
2.1.1.6.2. Periodontitis
Es la inflamación que se extiende al interior del surco gingival; esta enfermedad, a diferencia
de la gingivitis, se caracteriza por una lesión estructural del sistema de inserción, que se
produce por ciertas bacterias, y por la susceptibilidad del hospedador. (37)
Las características histológicas principales son bolsas periodontales, que se localizan desde
la unión epitelial apical a la línea amelocementaria, también existe pérdida de fibras
colágenas, alta concentración de leucocitos polimorfonucleares, y traslado del infiltrado
celular inflamatorio hacia el tejido conectivo. (40)
Factores de riesgo
La mayor prevalencia de periodontitis crónica se asocia con lo siguiente:
• Edad avanzada
• Fumar
• Diabetes mellitus
• Osteoporosis
• Infección por VIH
• Nivel socioeconómico más bajo
Los factores locales también pueden predisponer a los pacientes a defectos periodontales
aislados; estos incluyen la forma y alineación de los dientes, la presencia y calidad de las
17
restauraciones dentales, el contacto interdental deficiente, la formación de cálculos, la caries
dental subgingival, la oclusión traumática y el hueso alveolar anormal o la anatomía
gingival.(41)
Por el contrario, parece que la presencia de periodontitis significativa puede colocar a los
pacientes en riesgo de un aumento de la prevalencia o mayor severidad de ciertos trastornos
médicos, la periodontitis se ha asociado con un elevado riesgo de enfermedad coronaria,
accidente cerebrovascular, diabetes mellitus progresiva, enfermedades respiratorias y parto
de bebés de bajo peso al nacer. (41)
Signos y Síntomas
Cuando la inflamación gingival se extiende, la encía se separa de los dientes formando
espacios llamados bolsas; en esta situación en epitelio ulcerado que cubre a la bolsa es la
única barrera entre el Biofilm bacteriano y el tejido conectivo, por lo que es posible que
fácilmente las toxinas bacterianas entren y se comuniquen con el torrente sanguíneo. (32)
Diagnóstico
Esta inflamación se extiende dentro del surco gingival, por lo tanto, el diagnostico se basa
en la medición de los espacios que se encuentran entre el diente y la encía los mismos que
en condiciones saludables tienen un valor de 1 a 3 mm; además de la exploración
radiográfica y el registro de cantidad de placa, sangrado gingival y la existencia o no de
supuraciones. (40)
La profundidad de sondaje igual o superior a 4 mm es un signo claro de daño periodontal,
este cambio de surco a bolsa periodontal es uno de los signos importantes de la periodontitis,
ya que se produce por la pérdida de inserción. (31)
La periodontitis se diagnostica actualmente usando radiografía, medidas clínicas de la
profundidad de sondaje, sangrado en el sondeo; sin embargo, estas mediciones clínicas
tradicionales consumen mucho tiempo y producen información limitada porque son
18
indicadores de enfermedad periodontal previa y no de actividad de la enfermedad
presente.(42)
La evaluación radiográfica es un componente esencial del examen periodontal e
indispensable para establecer un diagnóstico periodontal, ya que nos da información
importante sobre la posición y la arquitectura de la cresta alveolar del hueso; bite-wings se
consideran las radiografías intraorales más precisas para determinar la altura de la cresta
alveolar, cuando existe ausencia de pérdida ósea, la cresta alveolar se localiza generalmente
de 1 a 2 mm apical a la unión amelo- cementaría. (38)
Las radiografías periapicales brindan al clínico información importante sobre la relación
entre corona y raíz, el espacio del ligamento periodontal y la presencia de anomalía
periapical, y algunos estudios han demostrado que las radiografías panorámicas pueden
utilizarse para evaluar la altura del hueso alveolar.(38)
Clasificación
Armitage, clasifica a la periodontitis de la siguiente manera:
Periodontitis Crónica
A. Localizado
B. Generalizado
Periodontitis Agresiva
A. Localizado
B. Generalizado
La Periodontitis como Manifestación de Enfermedades Sistémica
A. Asociado con trastornos hematológicos
1. Neutropenia adquirida
2. Leucemias
3. Otros
19
B. Asociado con trastornos genéticos
1. Neutropenia familiar y cíclica
2 Síndrome de Down
3. Síndromes de deficiencia de adhesión de leucocitos
4. Síndrome de Papillon-Lefèvre
5. Síndrome de Chediak-Higashi
6. Síndromes histiocitosis
7. Enfermedad de almacenamiento de glucógeno
8. Agranulocitosis genética infantil
9. El síndrome de Cohen
10. Síndrome de Ehlers-Danlos (Tipos IV y VIII)
11. Hipofosfatasia
12. Otros
C. No especificado de otro modo (NOS)
Enfermedades Periodontales Necrotizantes
A. Gingivitis ulcerativa necrosante (NUG)
B. Periodontitis ulcerativa necrotizante (NUP)
Abscesos del Periodoncio
A. Absceso gingival
B. Absceso periodontal
C. Absceso pericoronal
Periodontitis asociada con lesiones endodónticas
A. Lesiones periodonticas-endodónticas combinadas
Deformidades y Condiciones de Desarrollo o Adquiridas
A. Factores localizados relacionados con los dientes que modifican o predisponen a
enfermedades gingivales inducidas por placa / periodontitis
1. Factores anatómicos del diente
2. Restauraciones y aparatos dentales
3. Fracturas de la raíz
4. Reabsorción de la raíz cervical y lágrimas de cemento
20
B. Deformidades y condiciones mucogingival alrededor de los dientes
1. Recesión de tejido gingival / blando
a. superficies faciales o linguales segundo. interproximal (papilar)
2. Falta de gingiva queratinizada
3. Disminución de la profundidad vestibular
4. Freno aberrante / posición del músculo
5. Exceso gingival
6. Color anormal
C. Deformidades y condiciones mucogingival en edéntulos
1. Deficiencia de cresta vertical y / u horizontal
2. Falta de gingiva / tejido queratinizado
3. Aumento de tejido gingival / blando
4. Freno aberrante / posición del músculo
5. Disminución de la profundidad vestibular
6. Color anormal
D. Traumatismo oclusal
1. Traumatismo oclusal primario
2. Traumatismo oclusal secundario
21
2.1.1.7. Tratamiento
Existen tres tipos de tratamiento periodontal; en primer lugar el tratamiento inicial,
incluyendo la instrucción de higiene oral , control de placa, cálculo dental y alisado radicular;
después el tratamiento de combinación, incluyendo el tratamiento farmacológico, el
tratamiento quirúrgico, gingivectomía, y la reparación del hueso alveolar; y por último otros
métodos de tratamiento, que incluyen la terapia funcional de oclusión, la extracción del
diente selectivamente, la terapia de soporte periodontal, dejar de fumar, y el control de
enfermedades inmunodepresoras. (43)
El tratamiento de la enfermedad periodontal está dirigido hacia la eliminación de la placa
bacteriana y otros factores, entre estos, el cálculo dental o restauraciones con defectos que
favorecen y dificultan la eliminación. (14)
El procedimiento a utilizar depende de la localización de la placa o el cálculo, y de cuan
avanzado este la enfermedad; las técnicas más habituales son la tartrectomía, que es la
eliminación del cálculo supragingival; y raspado y alisado radicular, en el que se elimina la
placa y cálculo subgingival, de esta manera disminuye el sangrado gingival y la profundidad
de sondaje, además de que incrementa a la recolonización de bacterias Gram positivas o cual
es favorable para la flora bacteriana. (26)
22
2.1.1.8. Control químico de la enfermedad periodontal
El control químico de la enfermedad periodontal se realiza con antisépticos orales por lo que
cabe recordar que son antimicrobianos químicos o agentes que puede ser aplicado
tópicamente o subgingivalmente en mucosas, heridas o superficies dérmicas intactas para
destruir microorganismos y para inhibir su reproducción o metabolismo; en odontología, los
antisépticos son muy utilizados como ingredientes activos en enjuagues y dentífricos orales
anti-placa y anti-gingivitis. (18)
El control químico de la placa incluye:
Inhibición del desarrollo de placa
Inhibición de la colonización microbiana en las superficies dentales
Eliminación de placa dental
Transición de la placa "patógena" en una placa "no patógena"(44)
2.1.1.8.1. Gluconato de clorhexidina
Negroni. M, y Lindhe. J; señalan que es una bisbiguadina catiónica que tiene actividad
antibacteriana de baja toxicidad, y fuerte capacidad para adherirse a las mucosas, a la
biopelículas y a los microorganismos, y además tiene un amplio espectro de actividad
antimicrobiana contra; Gram-positivos, Gram-negativos y levaduras. (45)(37)
2.1.1.8.1.1 Mecanismo De Acción
Las moléculas catiónicas del gluconato de clorhexidina son brevemente absorbidas por las
células bacterianas que se encuentran cargadas negativamente, esto hace que se altere la
membrana celular bacteriana lo que determina que el gluconato de clorhexidina se desplace
hasta el interior de la célula, aumentando la permeabilidad de esta y consiente que los
componentes de bajo peso molecular como los iones de potasio sean soltados al exterior.
(45)
Tiene gran afinidad por la pared celular de los microorganismos y cambia las estructuras
superficiales ya que se disipa el equilibrio osmótico y, como resultado, la membrana
citoplasmática se daña, se forman vesículas y el citoplasma se precipita de manera que estas
precipitaciones detienen la reparación de la pared celular y las bacterias ya no son capaces
de recuperarse.(33)
23
2.1.1.8.1.2. Usos en Odontología
La clorhexidina es el agente antiplaca más utilizado en el tratamiento y control de la
enfermedad periodontal que es una de las patologías con mayor demanda y común a nivel
mundial; por este motivo se ha convertido en motivo de investigación en Odontología
principalmente en la rama de Periodoncia. (45)
Es utilizada también en tratamientos de endodoncia al 0,12% para irrigación intraconducto
por su efecto bactericida y bacteriostático; se presenta en distintas presentaciones para su
aplicación clínica: pastas o geles al 1%, barnices al 10%, dentífricos al 0,004% y enjuagues
al 0,12% y 10%. (44)
2.1.1.8.1.3. Efectos Adversos
Hasta el momento no existen hallazgos de efectos perjudiciales importantes para las células
de la mucosa oral, por lo cual constituye un elemento beneficioso en el complemento de la
higiene oral. (49)
Durante un prolongado tiempo de uso, la Clorhexidina produce ciertos efectos secundarios,
el más frecuente el cromatismo pardo rojizo o marrón de las piezas dentarias, de ciertos
materiales de restauración y del dorso de la lengua; también puede trastornar la sensación
del gusto después del enjuague y en algunos casos, su uso ha sido asociado al incremento de
cálculos supragingivales. (46)
2.1.1.9. Prevención
La prevención de las enfermedades periodontales se basa en el conocimiento de los factores
causales, está demostrado que, aunque las bacterias por sí solas no son suficientes para
producir la enfermedad periodontal destructiva, son esenciales para que se produzca la
enfermedad periodontal de cualquier tipo, y por tanto es evidente que sin bacterias las
enfermedades periodontales no existen, por lo que el control de las bacterias supone el
control de la enfermedad.
24
Por lo tanto se puede prevenir con el control de placa bacteriana y el hábito de fumar; con la
eliminación diaria de placa bacteriana por el mismo paciente, esto lo conseguiremos con la
educación al paciente de un correcto cepillado dental, la higiene interdental y el control
químico de la placa. (37)
2.1.1.9.1. Métodos de prevención
Suprimir las costumbres alimenticias nocivas, una alimentación dulce favorece la caries
dental y primero a la placa dentaria
Hay que evitar las substancias azucaradas y pegajosas, sobre todo entre comidas y más aún
por la noche antes de acostarse.
El cepillado de los dientes y las encías es el mejor procedimiento utilizable para una higiene
oral adecuada. Los componentes presentes en las pastas dentales permiten mantener los
dientes libres de residuos alimenticios.
Los cepillos dentales deber ser de tamaño, forma y textura adecuada, manipulables, fáciles
de lavar, de composición constante y durable. De preferencia con un cabezal que no sea
demasiado voluminoso. Debe limpiar de manera eficaz; por tanto, utilice un cepillo de
mucho pelo y de duración media. Evite las cerdas duras que pueden provocar abrasiones o
traumatismos en el borde gingival y también las cerdas muy blandas que pueden ser
insuficientes ante un sedimento importante de placa. Utilice cerdas de nylon mejor que las
naturales.
Es de vital importancia cepillar a profundidad hasta los rincones más escondidos dentro de
la boca, para mantener la placa bajo control. Procure cambiar su cepillo dental por lo menos
cada 3 meses, recuerde que un cepillo desgastado no limpiará bien sus dientes. Debe cepillar
las 5 caras de cada corona dentaria, así como la totalidad del borde gingival. Una vez
formado el sarro o cálculo dentario no se puede eliminar con el cepillado y necesita de una
profilaxis para su remoción. Finalmente, no debe olvidarse que el mejor recurso existente
para una profilaxis o limpieza oral adecuada, proviene de la visita periódica a su
profesionista dental.
25
2.1.2. PORPHYROMONAS GINGIVALIS
2.1.2.1. Taxonomía
Esta bacteria se encuentra dentro del género bacteroides, en un conjunto de bacterias
heterógenas, con características de ser anaerobios estrictos, Gram negativos, no esporulados
de forma bacilar. Existen como doce especies entre las más principales se encuentran; P.
gingivalis, P. asaccharolyticus y P. endodontales; que tienen como características comunes
ser no fermentadores, y utilizan como sustrato el nitrógeno para obtener su energía a partir
de tripticasa y peptona.(36)
2.1.2.2. Estructura y morfología
Es un bacilo corto o cocobacilo, su tamaño es de 0.5 - 0.8 um x 1 - 3.5um, anaerobio estricto,
Gram negativo. A nivel de la membrana externa la pared celular muestra endotoxinas, son
capsulados, no esporulados, sin flagelos y poseen cuantiosas fimbrias. En su superficie
muestra vesículas que tienen una variedad de enzimas de gran importancia con capacidad de
degradar compuestos proteicos. (36)
2.1.2.3. Nutrición
El ecosistema subgingival le proporciona un potencial rédox bajo y aún más inferior las
bolsas periodontales, conserva nutrientes endógenos ricos en péptidos y aminoácidos, P.
gingivalis requiere obligatoriamente hierro para crecer, sin embargo, cuando hay una falta
de hierro en el sistema utiliza hemina (hierro protoporfirina IX); los niveles de hemina en la
cavidad oral son diferentes y el sangrado, motivo de la inflamación gingival, aumenta la
concentración subgingival, de manera que la hemina que se almacena en la membrana
extracelular es una reserva de oxígeno que ayuda a conservar un microambiente anaerobio.
(47)
26
2.1.2.3. Factores de virulencia
- Cápsula
Está formada por polisacáridos, que presentan un gen codificante de epimerasa epsC
esencial para su síntesis, existen 6 serotipos capsulares de K1 a K6; la cápsula tiene un rol
importante en la evasión del sistema inmunológico, evitando la fagocitosis, opsonización y
accionar del complemento.(36)
- Endotoxina (Lps)
El Lipopolisacárido de la Porphyromonas gingivalis contiene 3 componentes: en su parte
externa polisacáridos, en el centro oligosacáridos y en su interior lípido A, siendo esta última
la porción inmunogénica más activa. (48)
Son moléculas de gran tamaño, formadas por un componente lipídico (lípido A) y un
polisacárido; por lo general se encuentran en la membrana externa de las bacterias Gram
Negativas y actúan como endotoxinas. (18)
- Vesículas De Membrana Externa
Durante la enfermedad, la Porphyromonas gingivalis elimina vesículas que guardan
Lipopolisacáridos, que invaden los tejidos periodontales y activan la elaboración de
citoquinas en macrófagos, fibroblastos, queratinocitos y células endoteliales, que son
reconocidas por las células presentadoras de antígenos, con la capacidad de presentar sus
antígenos a los linfocitos T y liberar una respuesta inmune específica en el huésped. (49)
- Fimbrias
Son estructuras filamentosas que se encuentran en la superficie de la Porphyromonas
gingivalis y que le dan la facultad de invadir los tejidos periodontales y colonizar la cavidad
oral; se compone de una subunidad proteica denominada fimbrilina, codificada por fimA, y
otra subunidad llamada Mfa. (50)
27
Miden aproximadamente 3.0 um de largo y 5 nm de ancho; estas tienen la capacidad de
unirse a diferentes sustratos, moléculas, y células, como epitelial, fibrinógeno, fibronectina,
lactoferrina, y también presentan propiedades quimiotácticas y de inducción de
citoquinas.(36)
2.1.3. PLANTAS MEDICINALES
2.1.3.1. Antecedentes
A lo largo de los años las plantas medicinales han desempeñado un papel importante en la
salud de las poblaciones humanas; la evidencia arqueológica nos dice que en la prehistoria
los primeros en tener interés y conocimiento en la botánica fueron los chamanes, estos tenían
conocimiento de la ubicación y el uso de plantas medicinales.(51)
Hace 12 000 años se alteró las relaciones humanas con la naturaleza, reduciendo la
biodiversidad de las especies vegetales por personas; sin embargo, en todas partes surgieron
poderosas civilizaciones y permaneció el interés por en las plantas medicinales.
En el antiguo Egipto, Mesopotamia, Creta, México, y China, aparecieron jardines reales que
contenían especímenes con valor medicinal y se escribieron los primeros textos de medicina
natural. Se dice que Aristóteles había mantenido un jardín de hierbas para uso medicinal y
experimentación. (51)
Después de la caída del Imperio Romano, Benedictinos, Monasterios y Abadías de la Edad
Media estos lugares se convirtieron en centros de conocimiento médico en toda Europa, y
en el siglo IX, los jardines físicos empezaron a ser cultivados en terrenos cerrados, en estos
espacios, los médicos y los boticarios sembraron plantas medicinales para las enfermedades
más comunes. (51)
Hoy en la actualidad hay dos conceptos opuestos que frecuentemente se confunden, por lo
que debe diferenciarse fitomedicina y fitoterapia clásica.
28
2.1.3.2. Fitomedicina
Es una disciplina que emplea fitomedicamentos en la terapéutica de un estado patológico; es
decir, que la droga vegetal considerada como la parte de la planta medicinal empleada en la
terapéutica, es sometida a criterios investigativos, de preclínica, clínica, toxicología, cambios
mutagénicos, con el fin de determinar el mecanismo de acción, receptores, indicaciones y
contraindicaciones; de manera que su empleo sea seguro y fundamentado
científicamente.(52)
2.1.3.3. Fitoterapia Clásica
Emplea plantas medicinales en la terapéutica de una enfermedad, basándose en el uso
empírico de los mismos, lo cual induce a una información poco certera en cuanto a efecto
terapéutico.(52)
2.1.3.4. Aportes en Odontología
Lippia sidoides más conocido como arbusto de Brasil tiene componentes como timol y
carvacrol con propiedades antibacterianas frente a strptococcus mutans y candida albicans,
de la misma manera los aceites esenciales eucalipto, lavándula y rosmarinos en
microorganismos orales como Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus,
Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis y Actinobacillus determinaron que los
aceites esenciales inhibieron el crecimiento y la adhesión de Streptococcus mutans el
biofilm. (53)
En el estudio realizado con aceite esencial de Croton cajucara se pudo ver acción
leishmanicida, así mismo se demostró que este aceite inhibe el crecimiento de Candida
albicans, Staphylococcus aureus, Streptoccocus sobrinus, Lactobacillus casei,
Porphyromonas gingivalis y Streptoccocus mutans; microorganismos relacionados con
enfermedades de la cavidad bucal. (53)
29
2.1.4. NARANJA COMÚN O CITRUS SINENSIS
La naranja dulce o común corresponde a la familia de las Rutáceas, una familia muy extensa
que contiene 1700 especies de plantas aproximadamente que crecen en países de clima
tropical y templado. Las plantas más conocidas son los cítricos, estas especies están incluidas
en el género Citrus, al cual pertenecen la naranja común Citrus sinensis. (53)
Los frutos cítricos se caracterizan principalmente de ser frutos grandes que llevan grandes
cantidades de ácido cítrico, el cual les provee el característico sabor ácido. Además, todos
los miembros del género Citrus contienen otros componentes que les otorgan aromas muy
profundos. (54)
2.1.4.1. Descripción Botánica
El árbol de Citrus Sinensis mide aproximadamente 9-10 m, tienen grandes espinas en sus
ramas, hojas son alternas, con estrecho margen, pecíolos de 3-5 mm de ancho, 6.5-15 cm de
largo; la forma de las hojas varía desde elíptica, oblonga u ovalados, sin rodeos dentada y
que emiten un fuerte olor característico de cítricos debido a la presencia de aceite
abundante.(12)
Figura 1 Árbol de Naranjo dulce
Fuente: Andrea Cevallos A.
30
2.1.4.2. Taxonomía Reino
- Plantae División: Clase: Magnoliophyta; Orden: Magnoliopsida; Familia: Sapindales;
Subfamilia: Rutaceae; Citroideae Tribu: Citreae
- Género: Citrus Especies: Naranjo dulce: Citrus sinensis (L.) Naranjo amargo: Citrus
aurantium (L.)(53)
2.1.4.3. Morfología
La naranja es el fruto del árbol de naranjo, un árbol de larga vida, el tronco es corto y
levemente espinoso y sus ramas son algo vigorosas, las hojas son coriáceas, elípticas o
elipticolanceladas, agudas, con el limbo grande, y el pecíolo dotado de alas pequeñas y
estrechas, tiene espinas no muy evidentes; y las flores son aromáticas de color blanco, solas
o agrupadas, con cinco pétalos con o sin hojas; además el fruto es jugoso liso de sabor dulce
o agrio que consta de tres partes: exocarpo, epicarpo o flavedo la parte exterior denominada
piel o cáscara, la cual tiene vesículas con aceites esenciales, mesocarpo o albedo es la parte
media de textura pomposa y color blanco, y el endocarpo o pulpa que es la parte interna que
presenta tricomas, o gajos con jugo.(4)
Figura 2 Fruto del naranjo
Fuente: Andrea Cevallos A.
31
2.1.4.4. Composición Química
Citrus sinensis es una rica fuente de metabolitos secundarios que contribuyen a las
actividades farmacológicas atribuidas a esta planta. Existen varios tipos de compuestos
químicos han sido identificados en las frutas, cáscara, hojas, jugo y raíces de C. sinensis, que
incluyen los siguientes grupos: flavonoides, esteroides, hidroxiamidas, alcanos y ácidos
grasos, cumarinas, péptidos, los hidratos de carbono, carbamatos y alquilaminas, los
carotenoides, los compuestos volátiles, y los elementos nutritivos, tales como potasio,
magnesio, calcio y sodio.(55)
Los compuestos químicos de la Naranja proceden biológicamente del ácido mevalónico y se
les clasifica como terpenos, siendo los más numerosos los monoterpenos y los
sesquiterpenos. Estos se utilizan en la industria para la elaboración de perfumes, jabones,
desinfectante. El aceite esencial de naranja está compuesto del 90 % de d–limoneno, en su
mayoritaria normalmente y además, en menor proporción posee terpenos. (54)
2.1.4.5. Propiedades y usos medicinales
Una amplia gama de beneficios potenciales para la salud se ha atribuido a Citrus tales como
el cáncer, antimicrobiano, antioxidante y anti-inflamatoria, profundamente asociada con su
contenido flavonoides. (56)
32
2.1.5. ACEITE ESENCIAL (CITRUS SINENSIS)
2.1.5.1. Obtención
El aceite esencial de Naranja se localiza en sacos de forma ovalada o en la porción anaranjada
de la cáscara y es una barrera toxica natural para diversos microorganismos e insectos. La
extracción del aceite se realiza normalmente por métodos mecánicos como presión en frío
sin embargo, también se realiza este proceso por medio de hidrodestilación, destilación con
vapor, hidrodestilación asistida por microondas, extracción con solvente y extracción con
fluidos supercríticos. (57)
2.1.5.2. Propiedades Fisicoquímicas
El análisis organoléptico determina que es un líquido oleoso, ligeramente amarillento,
aromático y agradable, volátil y ligeramente picante y el análisis de miscibilidad establece
que es inmiscible en agua miscible en alcohol, hexano, éter etílico y cloroformo. (53)
2.1.5.3. Composición Química
La composición determinada por Cromatografía de Gas/ Espectrómetro de Masa indica que
el aceite esencial del pericarpio del Citrus sinensis; contiene los siguientes componentes
químicos: Limoneno, β-linalol, decanal y 2(10)- pineno. (53)
2.1.5.4. Propiedades Medicinales
La evidencia científica ha evidenciado que el aceite esencial de Naranja tiene propiedades
como antidepresivo, sedante, los aromaterapeutas afirman que este aroma ayuda a mejorar
la comunicación y es muy efectivo en contra de la celulitis, ya que ayuda a activar la
circulación; se utiliza frecuentemente en la industria de fármacos y como cosméticos porque
limpia la piel opaca, contribuyendo la eliminación de excesos de fluidos y toxinas, además
es característico por sus propiedades antibacteriales, antioxidantes y anticancerígenas por lo
que se utiliza en la producción de fármacos. (57)
33
Este aceite tiene muchas propiedades medicinales, entre ella combate el cólico, malestar
estomacal, cáncer, diurético, es inmuno - potenciador estomacal, tónico para el sistema
digestivo, el sistema inmunológico y la piel; también se utiliza para tratar y prevenir las
deficiencias de vitaminas, resfriados, gripe y escorbuto y ayudar a combatir infecciones
virales y bacterianas; también se encontró que el extracto de cáscara de naranja era efectivo
contra la neumonía por Klebsiella. (58)
2.1.5.5. Actividad antibacteriana
El lípido A al ser la parte hidrofóbica de los lipopolisacáridos que constituyen la pared
celular de las bacterias Gram negativas, ayuda la entrada del aceite esencial de Citrus
sinensis por disolución y provoca la muerte celular por desestabilización de la membrana
externa y la membrana plasmática; además esta propiedad hidrofóbica que tiene el aceite
esencial de Naranja le permite atravesar la pared celular de bacterias Gram negativas a través
de canales compuestos por proteínas llamadas porinas, de esta manera facilita el transporte
de sustancias entre estas antimicrobianos. (59)
Los componentes del aceite esencial de cáscara de naranja ejercen actividad antibacteriana
por que interfiere en la bicapa de fosfolípidos de la membrana celular causando el incremento
de permeabilidad y pérdida de los constituyentes celulares, ya que además destruye el
sistema de enzimas en especial las responsables de la producción de energía celular y
respiración bacteriana. (59)
En altas concentraciones el aceite esencial de Citrus sinensis provoca daños severos de los
componentes estructurales de las células bacteriana ya que ocasiona perdida de homeostasis
y destruye e inactiva el material genético dando lugar a la muerte celular. (59)
34
2.1.5.6. Hallazgos en Odontología
En el estudio realizado por; Shetty. S y colaboradores, las concentraciones mínimas de
extractos etanólicos de cáscara de Citrus sinensis inhibieron el crecimiento de patógenos de
caries dentales, el presente estudio también demostró un aumento en la zona de inhibición
con aumento de la concentración y se cree que la potencia antimicrobiana de las plantas se
debe a taninos, saponinas, compuestos fenólicos, aceites esenciales y flavonoides ya que se
sabe que estos compuestos son biológicamente activos y por lo tanto ayudan a las actividades
antimicrobianas de las plantas, es decir estos metabolitos secundarios ejercen actividad
antimicrobiana a través de diferentes mecanismos, tanino es un compuesto que tiene el
extracto de cáscara de Citrus sinensis se han encontrado para formar complejos irreversibles
con proteína rica en prolina, resultando en la inhibición de la síntesis de proteínas
celulares.(58)
35
CAPÍTULO III
3.1. METODOLOGÍA
3.1.1. Tipo y diseño del estudio
- Experimental: Ya que se manipularon los procedimientos en el laboratorio de
microbiología, siguiendo un protocolo determinado para el efecto inhibitorio del
aceite esencial de cáscara de naranja frente a Porphyromonas gingivalis.
- In vitro: Debido a que este proceso experimental se realizó en un ambiente
controlado en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología de la
Universidad Central del Ecuador.
3.1.2. Población de estudio y muestra
- El presente estudio se evaluó a partir de una unidad de sedimento liofilizado de
Porphyromona gingivalis con referencia ATCC 33277 que una vez activada se
distribuyó en 30 cajas petri con agar sangre más sangre O positivo. (Anexo 1)
3.1.4. Criterio de inclusión y exclusión
Criterios de Inclusión:
- Aceite esencial de cáscara de naranja (Citrus sinensis) al 25%, 50% y 100%.
- Cepa de Porphyromonas gingivalis que no haya sido expuesta a alguna solución o
contaminación.
- Cepa de liofilizada de Porphyromonas gingivalis con referencia ATCC 33277.
- Cajas petri de 10 cm con agar sangre más sangre O+.
36
Criterios de Exclusión:
- Aceite esencial con diferente concentración a lo establecido.
- Cepa de Porphyromonas gingivalis que haya sido expuesta a alguna solución,
contaminación o manipulación.
- Bacterias que no se activaron
- Cajas petri de mayor tamaño con otro tipo de agar que no fuese agar sangre base
más agar sangre O+.
3.1.5. Conceptualización de las variables
Variable independiente
- Aceite Esencial de cáscara de naranja (Citrus sinensis): Es una sustancia
orgánica que se obtiene del pericarpio de la naranja mediante procesos de
hidrodestilación y está compuesta terpenos y compuestos aromáticos. (63)
Variable dependiente
- Efecto Inhibitorio: Es la capacidad que tienen ciertas sustancias para inhibir el
crecimiento bacteriano de alguna cepa en particular; y determina la concentración
mínima inhibitoria, que se define como la concentración más baja que un compuesto,
extracto o fármaco que inhibe el crecimiento del microorganismo en 24 horas. (68)
37
Sustancias control
- Control Positivo (Clorhexidina al 0,12%): La clorhexidina es el principal
antiséptico para el control químico del Biofilm oral y se considera como el agente
Gold standard por su acción antiplaca y antigingivitis superior a la del resto de
antisépticos que existen. (50)
- Control Negativo (Agua destilada): Sustancia dispuesta por dos átomos de
hidrógeno y uno de oxígeno incolora, insípida y pura recibe el nombre de agua; que
se destila es decir se separa una sustancia volátil de otra fija a través de energía
calorífica para luego enfriar su vapor y convertirla nuevamente en un líquido. (60)
38
3.1.6. Definición operacional de las variables
Tabla 1. Operacional de las variables
Fuente. Andrea Cevallos A.
VARIABLE DEFINICIÓN
OPERACIONAL TIPO CLASIFICACIÓN
INDICADOR
CATEGÓRICO
ESCALAS
DE
MEDICIÓN
Aceite esencial
de Citrus sinensis
Es una mezcla de varias
sustancias químicas
biosintetizadas por las plantas
de Citrus sinensis, que dan el
aroma característico de
naranja y además posee
ciertas propiedades
medicinales.
Independiente
Cualitativa
Ordinal
25%
50%
100%
1
2
3
Efecto
Inhibitorio
Capacidad que tienen ciertas
sustancias de limitar
el crecimiento y
desarrollo de
microorganismos en este caso
de
Porphyromonas
Gingivalis.
Dependiente
Cuantitativa
Continua
I. Nula (-) si fue inferior
o igual a 8 mm
II. Sensible (Sensible
=+) de 9 a 14 mm
III. Muy sensible (muy
sensible = ++) de 15 a
19 mm
IV. Sumamente sensible
(S.S.= +++) si fue igual
ó superior a 20 mm
Distancia del
halo medida
en milímetros
Sustancias
Control
Sustancias que han sido
probadas bajo método
científico su acción de inhibir
o no el crecimiento de
Porphyromonas gingivalis
Independiente Cuantitativa
1.- Control negativo:
Agua destilada
2.- Control positivo:
Clorhexidina
(mm)
39
3.1.7. Recursos materiales
3.1.7.1. Infraestructura
- Se utilizó el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología de la
Universidad Central del Ecuador y el laboratorio de operaciones unitarias de la
Facultad de Química de la Escuela Politécnica Nacional. (Anexo 2 y 3)
3.1.7.2. Materiales
Materiales para la extracción del aceite esencial de cáscara de naranja.
- Tanque extractor
- Condensador
- Florentino o separador
- Material biológico (11.6 kg de Cáscara de Naranja )
- Materiales de bioseguridad: guantes, gorro, mascarilla y mandil.
Materiales para la determinación del efecto inhibitorio
- Jarra de anaerobiosis
- Sobres generadores de anaerobiosis
- 31 medios de cultivo de agar sangre humana O+
- Incubadora
- Pinzas
- Mechero
- Hisopos estériles
- Cajas Petri estériles de vidrio
- Material biológico:
- Cepa de Porphyromonas gingivalis ATCC33277
- Aceite esencial de cáscara de naranja
40
Materiales de bioseguridad
- Guantes
- Gorro
- Mascarilla
- Mandil.
3.1.8. Procedimiento
3.1.8.1. Extracción del aceite esencial de cáscara de naranja por destilación.
- Se pesaron 11.6 Kg de cáscara de naranja fresca, muestra que fue donada por la
Escuela Politécnica Nacional.
- Se procedieron a lavar las cáscaras de naranja con agua purificada.
- A continuación, se cortaron pedazos pequeños de aproximadamente 2cm de ancho x
2cm de largo de cáscara de naranja.
- El material vegetal se colocó en el tanque extractor con 20 litros de agua donde
mediante ebullición a 91°C se vaporizó la mezcla durante 3 horas, rompiendo así las
moléculas vegetales para liberar el aceite esencial.
- Este vapor pasó a continuación al condensador, y después a un florentino donde se
separó el agua del aceite por diferencia de densidades.
41
Figura 3. Extracción del Aceite esencial de cáscara de naranja por destilación con arrastre de
vapor
Fuente: Andrea Cevallos A.
42
3.1.8.2. Prueba de difusión por disco en agar
3.1.8.2.1. Activación de la cepa bacteriana
- Se realizó la activación como lo indica la casa comercial de la siguiente manera:
- Se dejó que la bolsa de KWIK-STIK™ sin abrir se equilibre a temperatura ambiente,
y después se abrió la bolsa rasgándola por la muesca y se retiró la unidad KWIK-
STIK™.
- Se retiró la parte de la lengüeta de la etiqueta y la misma que se pegó a la placa del
cultivo primario o a la ficha de control de calidad.
- Se presionó solo una vez la ampolla en la parte superior del KWIK-STIK™ (justo
por debajo del menisco del líquido de la ampolla que se encontraba en la tapa) para
liberar el líquido hidratante.
- Sosteniendo verticalmente se golpeó ligeramente en una superficie dura para facilitar
que pase el fluido al fondo de la unidad que contiene el gránulo.
- Se dejó que el fluido hidratante fluya a través del eje del hisopo y dentro de la parte
inferior de la unidad que contiene el gránulo.
- Después se procedió a apretar la parte inferior de la unidad, con el fin triturar por
completo el gránulo hasta que la suspensión sea homogénea.
- Se saturó de inmediato el hisopo con el material hidratado y se transfirió al medio de
agar.
- Se inoculó la placa de cultivo primario enrollando suavemente el hisopo sobre un
tercio de la placa, haciendo un estriado para facilitar el aislamiento de colonias.
- A continuación, el cultivo primario se dejó en incubación a 35º C por 7 días en una
jarra de anaerobiosis con sobres para anaerobiosis. (70) (Anexo 4)
43
Figura 4. Pasos para la activación de la cepa bacteriana (Porphyromonas Gingivalis)
Fuente: Andrea Cevallos A.
44
3.1.8.2.2. Estandarización y preparación del inóculo
- A los 7 días se observó el crecimiento de las colonias bacterianas.
Figura 5. Cultivo primario colonias de Porphyromonas Gingivalis
Fuente: Andrea Cevallos A.
- Una vez obtenido el cultivo primario, se tomó de 3 a 5 colonias de la placa, se sembró
en un medio líquido de Muller Hinton y se incubó a 35ºC durante 2 horas.
- A las 2 horas se comparó con el estándar de turbidez de McFarland al 0.5 .
45
Figura 6. Estándar de turbidez de McFarland
Fuente: Andrea Cevallos A.
3.1.8.2.3. Inoculación de las placas
- A partir de la estandarización, se inoculó las placas de agar deslizando el hisopo con
el inoculo por la superficie del agar tres veces sin dejar ninguna zona libre, rotando
la caja petri cada vez y pasándola por último por la periferia del agar para conseguir
una siembra uniforme.
- Se dejó secar de 3 a 5 minutos antes de depositar los discos en los medios de cultivo.
46
- Las 30 muestras fueron previamente rotuladas con números guías de la siguiente
manera:
1 Control negativo (Agua destilada)
2 Aceite esencial de cáscara de naranja al 25%
3 Aceite esencial de cáscara de naranja al 50%
4 Aceite esencial de cáscara de naranja al 100%
5 Control positivo (Clorhexidina 0,12%)
Figura 7. Cajas petri inoculadas y rotuladas
Fuente: Andrea Cevallos A.
47
3.1.8.2.4. Colocación de discos
- Se procedió a colocar los discos de papel previamente embebidos con cada sustancia
para esto se utilizó cajas petri vacías; cada uno con aceite esencial de cáscara de
naranja (Citrus sinensis) en sus respectivas concentraciones 25 %, 50% y 100%;
además clorhexidina al 0,12 % y agua destilada, como control positivo y control
negativo respectivamente.
Figura 8 Discos de papel embebidos en sustancias
Fuente: Andrea Cevallos A.
48
- Se colocaron los discos de papel a una distancia no menor de 15mm entre sí y a 1,5
cm del borde de la placa.
- Se presionaron ligeramente sobre la superficie del agar para que contacten
perfectamente.
Figura 9 Colocación de discos de papel
Fuente: Andrea Cevallos A.
-
49
- Se procedió a incubar las placas invertidas dentro de una jarra de anaerobiosis a
35°C.
Figura 10 Jarra de anaerobiosis
Fuente: Andrea Cevallos A.
3.1.8.2.5. Lectura de resultados
- Al cabo de 48h se observaron los resultados.
- Se midieron los halos con una regla Hi antibiotic Zone Scale.
- Los resultados se anotaron en la tabla diseñada para la recolección de datos.
50
Figura 11 Medición de halos de inhibición a las 48 horas
Fuente: Andrea Cevallos A.
3.1.9. Manejo desustancias y materiales de desechos
- El manejo de sustancias y materiales se llevó a cabo en el Laboratorio de Microbiología
de la Facultad de Odontología de la Universidad Central del Ecuador y en el Laboratorio
de Unidades Operacionales de la Facultad de Química de la Escuela Politécnica
Nacional, en los cueles se siguieron los protocolos y principios establecidos por La
Organización Mundial de la Salud en el MANUAL DE BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO.
- El manejo de desechos se realizó tal como lo establece “El reglamento de Manejo de
Desechos Infecciosos para la red de servicios de Salud en el Ecuador”; realizado por el
Ministerio de Salud Pública Del Ecuador. (Anexo 5 y 6)
51
3.1.10. Aspectos Bioéticos
Este trabajo de investigación se realizó de manera in vitro, dentro del laboratorio de
Microbiología la Facultad de Odontología de la Universidad Central del Ecuador, que se
encuentra sujeto a normas bioéticas y de bioseguridad como se fundamentan en el principio
de Beneficencia ya que va en favor de solucionar problemas futuros producidos por ciertos
patógenos, los otros aspectos bioéticos no se aplica en esta investigación, ya que es un
estudio in vitro, y no implica riesgo ya que no se utilizará especies vivas a excepción de la
cepa.
Se contó con las respectivas autorizaciones y certificados. (Anexo 2 y 3)
3.1.11. Bondad Ética
En el presente estudio in vitro se midieron los halos de inhibición, los mismos que
demostraron la susceptibilidad de Porphyromonas gingivalis frente al aceite esencial de
cáscara de naranja en tres distintas concentraciones, 25, 50 y 100%; y de esta manera puede
contribuir con una opción de tratamiento de complemento para la enfermedad periodontal.
3.1.12. Confidencialidad
Los resultados que se obtuvieron en esta investigación pertenecen al autor y a la Universidad
Central Del Ecuador.
52
CAPÍTULO IV
4.1. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
4.1.1. Medición y recolección de datos
Este estudio se realizó tomando como referencia el método de antibiograma disco-placa
basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los métodos que el National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda para la determinación
de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos.
Por lo tanto al cabo de las 48 horas de incubación del inóculo con los discos de papel
embebidos con las respectivas sustancias, se procedió a la medición de los halos de
inhibición circunscritos alrededor de los discos de papel de manera manual con ayuda de la
regla Hi antibiotic Zone Scale.
Los datos obtenidos de la medición de los halos, se registraron y organizaron en una tabla
diseñada en Microsoft Excel.
Figura 12 Halos de inhibición a las 48 horas
Fuente: Andrea Cevallos A.
53
Figura 13 Tabla de datos
Fuente: Andrea Cevallos A.
La actividad se consideró en función a lo descrito por el Dr. C. Duraffourd y el Dr. JC Lapraz
de la Sociedad Francesa de Fitoterapia y Aromaterapia:
- Inhibición nula (-) si fue inferior o igual a 8 mm
- Sensibilidad límite (sensible = +) de 9 a 14 mm
- Sensibilidad media (muy sensible = ++) de 15 a 19 mm
- Sumamente sensible (S.S. = +++) si fue igual o superior a 20 mm. (61)
CULTIVO
MICRO BIO LÓ GICO
PORPHYROMONAS
GINGIVALIS
DISCO DE
PAPEL # 1
Control
negativo
DISCO DE
PAPEL # 2
Aceite al 25%
DISCO DE
PAPEL # 3
Aceite al 50%
DISCO DE
PAPEL # 4
Aceite al
100%
DISCO DE
PAPEL # 5
Control
positivo
Muestra # 1 0 10 12 16 24
Muestra # 2 0 10 11 15 27
Muestra # 3 0 10 12 22 26
Muestra # 4 0 8 10 16 23
Muestra # 5 0 8 10 12 22
Muestra # 6 0 9 10 12 25
Muestra # 7 0 8 9 12 22
Muestra # 8 0 8 11 13 22
Muestra # 9 0 11 9 16 24
Muestra # 10 0 11 11 16 16
Muestra # 11 0 10 12 17 16
Muestra # 12 0 11 10 14 23
Muestra # 13 0 10 11 14 21
Muestra # 14 0 11 12 15 16
Muestra # 15 0 8 10 15 14
Muestra # 16 0 8 10 12 15
Muestra # 17 0 8 8 12 13
Muestra # 18 0 8 9 12 15
Muestra # 19 0 8 10 12 16
Muestra # 20 0 10 11 13 20
Muestra # 21 0 8 9 10 14
Muestra # 22 0 7 9 10 14
Muestra # 23 0 8 10 12 15
Muestra # 24 0 8 10 12 15
Muestra # 25 0 10 11 11 15
Muestra # 26 0 8 8 12 16
Muestra # 27 0 8 9 12 15
Muestra # 28 0 8 10 12 15
Muestra # 29 0 8 9 11 15
Muestra # 30 0 11 11 16 16
DIÁMETRO DE LA ZO NA DE INHIBICIÓ N (mm)
54
4.1.2. Análisis de resultados
En primer lugar para verificar que las muestras tomadas provienen de una población con
distribución Normal, se realizó las pruebas de Kolmogorov - Smirnov y la prueba de Shapiro
– Wilk, la misma que reportó cuervas asimétricas en el estudio.
Si las muestras provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan
pruebas paramétricas: T student, ANOVA.
Si las muestras No provienen de poblaciones con distribución normal entonces se realizan
pruebas no paramétricas (orden, signos): Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon
Para cada prueba de Hipótesis, se compara el valor de significación con el 0,05 (95% de
confiabilidad), si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis inicial),
si es inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alternativa).
4.1.3. Prueba de Normalidad
Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal
Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal
Tabla 2 Pruebas de normalidad
Advertencias
Control negativo es constante.
Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
Aceite al 25% 0,343 30 0,000 0,783 30 0,000
Aceite al 50% 0,180 30 0,014 0,921 30 0,028
Aceite al 100% 0,251 30 0,000 0,857 30 0,001
Control positivo 0,305 30 0,000 0,845 30 0,000
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
55
En la prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov, los valores del nivel de significación
(Sig) son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por tanto se acepta Ha, esto es las
muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la
comparación de grupos se utiliza pruebas no paramétricas: Kruskal Wallis.
Gráfico 1 Campana de Gauss aceite al 25%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
- No se asemeja a la curva Normal
Gráfico 2 Campana de Gauss aceite al 50%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
- No se asemeja a la curva Normal
56
Gráfico 3 Campana de Gauss aceite al 100%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
- No se asemeja a la curva Normal
Gráfico 4 Campana de Gauss Clorhexidina al 0.12%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
- No se asemeja a la curva Normal
57
4.1.4. Pruebas no paramétricas: Comparación entre sustancias
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Tabla 3 Comparación entre sustancias
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
Descriptivos de las muestras
MEDIDAS
n Media
Desviación
estándar
Error
estándar
95% del intervalo de
confianza para la media
Mínimo Máximo
Límite
inferior
Límite
superior
Control negativo 30 0,00 0,000 0,000 0,00 0,00 0 0
Aceite al 25% 30 8,97 1,273 0,232 8,49 9,44 7 11
Aceite al 50% 30 10,13 1,137 0,208 9,71 10,56 8 12
Aceite al 100% 30 13,47 2,543 0,464 12,52 14,42 10 22
Control positivo 30 18,33 4,326 0,790 16,72 19,95 13 27
Total 150 10,18 6,495 0,530 9,13 11,23 0 27
58
Gráfico 5 Comparación de medias
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
En el gráfico #1 se puede observar la comparación de medias de las diferentes muestras
tomadas, en las que se observa que el aceite al 25% tiene una media de inhibición de 8, 97
es decir que ya existe sensibilidad, mientras que el aceite al 50% la media es de 10,13 que
es un valor mayor a la del aceite al 25% y en este caso nos indica que Porphyromona
gingivalis se muestra sensible a esta concentración.
Mientras que la media del aceite al 100% es de 13,47 es decir supera a la de aceite al 25% y
a la del aceite al 50%, pero sin embargo no iguala a la del control positivo que es de 18,33.
No obstante esta figura nos indica que el tamaño del halo de inhibición es directamente
proporcional a la concentración del aceite, es decir a mayor concentración mayor es el
diámetro del halo de inhibición.
En la gráfica se observa que los valores de aceite al 25%, 50% y 100% tienen valores
intermedios entre el control positivo y negativo, para verificar si esta diferencias son
significativas se utiliza la prueba no paramétrica de Kruskal Wallis.
0,00
8,9710,13
13,47
18,33
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
16,00
18,00
20,00
Control negativo
Aceite al 25% Aceite al 50% Aceite al 100%
Control positivo
Comparacion de medias
59
4.1.5. Prueba Kruskal Wallis
En estadística, la prueba de Kruskal-Wallis es un método no paramétrico para probar si un
grupo de datos proviene de la misma población.
Por lo que a continuación se detalla mediante gráficos de cajas a y bigotes cada sustancia:
Control negativo
Gráfico 6 Diagrama de caja y bigotes del control negativo
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
Podemos observar claramente que el control negativo perteneciente al agua destilada es una
constante.
60
Aceite al 25%
Gráfico 7 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 25%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
Este gráfico pertenece al aceite esencial al 25% donde nos indica que el valor mínimo de
inhibición es 7, el máximo es 11 y la media es 8 es decir que el 50% de los datos es 8 que
nos indica que el aceite esencial al 25% ya tiene efecto inhibitorio.
61
Aceite al 50%
Gráfico 8 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 50%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
El gráfico # 4 nos interpreta datos pertenecientes al aceite esencial al 50% donde se puede
observar que el valor mínimo de inhibición es 8, el valor máximo es 12 y la media es 10 lo
que quiere decir que el 50% de las muestras tuvo una inhibición de 10.
62
Aceite al 100%
Gráfico 9 Diagrama de caja y bigotes del aceite al 100%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
Este gráfico representa al aceite al 100% y se puede ver que el dato mínimo es de 10 y el
máximo es de 17, por lo tanto el valor de la media recae en 12 lo que nos indica que el 50%
pertenece a 12 y este valor nos indica que P. Gingivalis se muestra sensible al aceite esencial
al 100%
63
Control Positivo
Gráfico 10 Diagrama de caja y bigotes de la clorhexidina al 0.12%
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
Este gráfico que pertenece a la Clorhexidina al 0,12% como control negativo en la que
claramente se puede ver que el valor mínimo es mucho mayor que el aceite y es de 15
mientras que el máximo es de 27, siendo la media de 16, por lo tanto quiere P. Gingivalis es
sumamente sensible a la clorhexidina.
64
Gráfico 11 Prueba Kruskal Wallis
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias
de las muestras son similares.
Es decir que hay diferencias en la forma de distribución de cada una de ellas, lo que nos
indica esta figura es la ubicación de las medias dentro del rango de 95% de confiabilidad
con un poder de significancia menor al 0.05 lo que indica que mi estudio es real.
Podemos observar que las medias marcan puntos diferentes a excepción de las del aceite al
25% con la del aceite al 50%, esta dos casi si asemejan es decir que estadísticamente casi no
habría diferencia.
65
4.1.6. Prueba dos a dos o de emparejamiento
Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:
Gráfico 12 Prueba dos a dos o de emparejamiento
Fuente: Colaboración Ing. Jaime Molina
66
En el gráfico 8 de la prueba dos a dos se detalla el valor de significancia estadística entre
sustancias, en la que previamente se debe saber que cuando existe una significancia mayor
a 0,05 indica que son similares y no es estadísticamente significativo; mientras que si hay un
valor de significancia menor a 0,05 indica que NO son similares y es estadísticamente
significativo.
Por lo tanto en este estudio se observa que entre el aceite al 25% y el aceite al 50% hay un
valor se significancia estadística de 0,147 que es mayor al 0,05; es decir que entre estas dos
sustancias no existe diferencia significativa y son similares; lo cual nos estaría indicando que
las dos sustancias tiene casi igual eficacia de inhibición bacteriana.
Pero también esta prueba de emparejamiento muestra valores de significancia menores a
0,05 entre las siguientes sustancias:
Control negativo y Aceite al 25%
Control negativo y Aceite al 50%
Control negativo y Aceite al 100%
Control negativo y Control positivo
Aceite al 25% y Aceite al 100%
Aceite al 25% y Control positivo
Aceite al 50% y Aceite al 100%
Aceite al 50% y Control positivo
Aceite al 100% y Control positivo
Lo que quiere decir que estas sustancias NO son similares y es estadísticamente significativo;
por lo tanto vemos que entre el control negativo y el resto de sustancias hay deferencia
significativa, lo cual nos indica que a diferencia del control negativo el resto de sustancias si
tuvieron efecto inhibitorio.
67
Entre el aceite al 25%, el aceite al 100% y el control positivo también existe diferencia
significativa, teniendo más eficacia de inhibición el aceite al 100% y el control positivo; y
sucede de la misma manera con el aceite al 50% comparado con el aceite al 100% y el control
positivo, hay diferencia significativa, y el aceite al 100% y el control positivo tienen mayor
eficacia de inhibición.
Además al comparar el aceite al 100% con el control positivo existe diferencia significativa,
entonces se puede concluir que a pesar de existir inhibición con el aceite al 100% no supera
la eficacia de inhibición de la clorhexidina al 0,12% que es el control positivo.
68
CAPÍTULO V
5.1. DISCUSIÓN
A partir de los hallazgos encontrados en este estudio aceptamos la hipótesis de la
investigación planteada es decir, el aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis),
tiene efecto inhibitorio sobre cepas de Porphyromonas gingivalis ATCC33277.
Estos resultados guardan relación con lo que sostienen Hussain en el 2015, en el que
confirmaron el potencial antimicrobiano de la cáscara de (Citrus sinensis) contra patógenos
periodontales; los datos estadísticos de la prueba no paramétrica entre sustancias del
presente estudio muestran que existe diferencia estadística del aceite esencial en sus tres
concentraciones y con los controles, y que los halos de inhibición del aceite al 100% tienen
un límite inferior de 12.52 mm y un límite superior de 14.2mm lo que quiere decir que la
cepa de Porphyromonas gingivalis se muestra muy sensible al aceite esencial del cáscara de
naranja al 100%.(16)
Guerra, en el 2014, luego de comparar los análisis estadísticos determina que las bacterias
mantuvieron un mismo comportamiento de inhibición de crecimiento, frente a las
concentraciones de aceite esencial utilizados, de esta manera, observó que el
comportamiento de P. aeruginosa y E. coli, no mostraron diferencias significativas (P>0,05)
al comparar las concentraciones de aceite esencial entre 10 y 50%, lo cual podría indicar que
la concentración más baja (10%) tendría el mismo efecto inhibitorio que la concentración
más alta (50%); ocurriendo lo mismo en las concentraciones de 60 a 100%, en la cual una
concentración de 60% sería igualmente efectiva que la de 100%, teoría que concuerda con
el presente estudio donde la prueba estadística de emparejamiento dos a dos indica que entre
el aceite al 25% y aceite al 50%son similares. (59)
Shetty, en el 2016, encontró que el extracto etanólico caliente de (Citrus sinensis) era más
eficaz y con mayor zona de inhibición que el etanol frío contra patógenos de las caries
dentales, en todas las concentraciones, los extractos etanólicos calientes mostraron una
mayor zona de inhibición que la etanólica fría contra Streptococcus mutans y Lactobacillus
Acidophilus; los extractos de agua fría y caliente inhibieron el crecimiento de
microorganismos a concentraciones muy altas de 34,9 y 32 mg / ml contra Sterptococcus
69
mutans, y concentración mínima inhibitoria de extractos etanólicos de cáscara de Citrus
sinensis osciló entre 12-15 mg / frente a los patógenos de las caries dentales. (58)
Finalmente en la presente investigación se determinó que a mayor concentración del aceite
mayor es el efecto inhibitorio de esta manera el aceite al 25% tuvo una media de 8,97 mm,
el aceite al 50% una media de 10,13 mm y el aceite al 100% una media de 13,47 lo cual
comparado con los valores estándar de National Committee for Clinical Laboratory
Standards (NCCLS), indican sensibilidad de Porphyromonas gingivalis ATCC33277 al
aceite esencial de Citrus sinensis, pero aun así la Clorhexidina al 0,12% sigue siendo mejor
antibacteriano ya que la media de esta fue de 18,33mm.
A demás que la prueba de emparejamiento en este estudio demostró valores de significancia
estadística menores a 0.05 entre todas las sustancias a excepción de la comparación entre
aceite al 25% y aceite al 50% donde el valor de significancia fue mayor al 0.05 lo que quiere
decir que entre estas dos sustancias no existe diferencia significativa y por lo tanto son
similares y su eficacia de inhibición es la misma.
70
5.2. CONCLUSIONES
- El aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis), al 25, 50 y 100%, inhibe
el crecimiento bacteriano in- vitro de Porphyromonas gingivalis ATCC33277.
- Los halos de inhibición del aceite esencial de Citrus sinensis al 25% tuvieron un
promedio de 8,97 mm, al 50% un promedio de 10,13 mm y al 100% de 13,47 mm
frente a la cepa Porphyromonas gingivalis ATCC33277, es decir que existió
sensibilidad.
- El efecto inhibitorio del aceite esencial de cáscara de Naranja (Citrus sinensis) ante
cepas de Porphyromonas gingivalis ATCC33277 es directamente proporcional al
porcentaje de concentración del aceite, es decir que el aceite esencial al 100% tiene
mayor eficacia inhibitoria que al 25 y 50 %.
- El efecto inhibitorio de la Clorhexidina al 0.12 % es mayor sobre cepas
Porphyromonas gingivalis ATCC33277 a diferencia del aceite esencial de cáscara de
Naranja (Citrus sinensis).
71
5.3. RECOMENDACIONES
- Se recomienda continuar con este tipo de investigaciones in-vitro con el fin de
obtener mayor información acerca de las propiedades medicinales que poseen las
plantas que en su mayoría son desconocidas.
- Hacer el mismo estudio para probar sensibilidad ante diferentes microorganismos
patógenos de la cavidad oral causantes de enfermedades comunes como caries dental
y candidiasis oral.
- Obtener muestras de Porphyromonas gingivalis aisladas a partir de muestras de
pacientes, para luego ser sometidas a las mismas sustancias y evaluar y comparar los
resultados.
- Realizar cromatografías químicas para tener mayor detalle de las sustancias
biológicas activas del aceite esencial de Citrus sinensis responsables del efecto
inhibitorio bacteriano.
72
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76
ANEXOS
77
ANEXO 1
78
ANEXO 2
79
ANEXO 3
80
ANEXO 4
81
ANEXO 5
82
ANEXO 6
MANUAL DE DESECHOS
Para realizar la correcta manipulación de desechos se seguirán parámetros establecidos en el Reglamento de
manejo de desechos infecciosos para la red de servicios de salud en el Ecuador realizado por el Ministerio de
Salud Pública, por lo cual se cita los siguientes artículos:
Art. 4. Para efectos del presente reglamento, los desechos producidos en los establecimientos de salud se
clasifican en:
a. Desechos generales o comunes.
b. Desechos infecciosos.
c. Desechos especiales.
B.-Desechos infecciosos.
Son aquellos que contienen gérmenes patógenos que implican un riesgo inmediato o potencial para la salud
humana y para el ambiente.
Son desechos infecciosos
b.2 Desechos anátomo-patológicos: órganos, tejidos, partes corporales que han sido extraídos mediante cirugía,
necropsia u otro procedimiento médico
Art.10.- Los desechos infecciosos y patológicos serán colocados en recipientes plásticos de color rojo con fundas
plásticas de color rojo.
Art.26.-
Los desechos serán recolectados, debidamente clasificados y empacados para transportarlos desde los sitios de
generación a los almacenamientos intermedio y final.
Art.28.- El tratamiento de los desechos infecciosos consiste en la inactivación de la carga contaminante
bacteriana y/o viral en la fuente generadora
Art. 29.- Los métodos de tratamiento de los desechos infecciosos son:
a. Esterilización (autoclave): Mediante la combinación de calor y presión proporcionada por el vapor de
agua, en un tiempo determinado.
B.-Desinfección química: Mediante el contacto de los desechos con productos químicos específicos.
Art.35.-La disposición final es un método de confinación de los desechos infecciosos y especiales generados en
las instituciones de salud, que se realizará de acuerdo a lo establecido en el presente reglamento.
Art.44.-Es Obligatorio que todo el personal que manipula los desechos infecciosos, cortopunzantes, especiales
y comunes utilicen las medidas de protección de acuerdo a las normas nacionales e internacionales.
83
ANEXO 7
84
ANEXO 8
85
86
87
