Etat et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez les herboristes du Nord de Maroc et...

Préparé par : JELLOULI Kaoutar Encadré par : M.LAGLAOUI Amin (FSTT)

AKHRIF Ibtihal M.ZANTAR Saïd (INRA)

Soutenu le 22 juin 2016 en vue de l’obtention du Licence Sciences et techniques

Filière : Biotechnologie végétale

Année universitaire : 2015/2016

État et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez

les herboristes du Nord du Maroc et caracterisation du

Laurus nobilis

Projet de Fin d’Études

W°w|vtvxá

A l’aide de dieu tout puissant, qui m'avoir donnée la force et la patience, j’ai pu réaliser ce travail que je dédie :

Aux étoiles qui éclairent ma vie, à ma source de tendresse : <<Mes parents>>

Ces deux êtres qui m’ont su m’éduquer, qui s'étaient toujours sacrifiés pour me voir réussir qui étaient toujours derrière moi et qui m’ont poussé à aller de l’avant.

Que Dieu vous préservent et vous procurent bonne santé et longue vie.

A mon cher oncle par alliance : Redouane Et ma chère tante : Nadia

Que vous m’avez toujours soutenu durant toutes mes études

Sachez que Vous occupez une place particulière dans mon cœur

A mes chers amis

(Aziza, Mounia, Youssra, Ali, Rida, Tiko, Othmane, Ali…)

Qui m’ont permis d’oublier les moments de stress et de découragement,

Qui m’ont apporté leurs aides

En souvenir de nos éclats de rire et des bons moments, en souvenir de tout ce qu’on a vécu ensemble.

A mon binôme Kaoutar

A tous ceux qui me sont chers

Akhrif Ibtihal

W°w|vtvxá

Que ce travail témoigne de mes respects :

A Dieu qui m’a donné la force d’affronter chaque jour

A mes parents :

Grâce à leurs tendres encouragements et leurs grands sacrifices, ils ont pu créer le climat affectueux et propice à la poursuite de mes études. Aucune dédicace ne pourrait exprimer

mon respect, ma considération et mes profonds sentiments envers eux.

A mes frères Omar et Adil.

Pour leur amour infini et leur soutien tout au long de ce parcours

A la famille Akhrif

Pour leur soutien et leur gentillesse

A mes amis Ibtihal, Youssef, Houria, Safae, Nabila, Fadoua, Imane et à ma chère famille

Dont l’amitié et le soutien, n’ont jamais défailli

A tous mes professeurs :

Leur générosité et leur soutien m’oblige de leurs témoigner mon profond respect et ma loyale considération.

Jellouli Kaoutar

exÅxÜv|xÅxÇà

Un stage n’est jamais un travail individuel, il s’inscrit dans

une démarche globale de recherche qui bénéficie des travaux déjà

réalisés, est en relation avec les travaux en cours et sera peut être

repris par la suite.

Nous tenons à remercier en tout premier lieu notre encadrant Mr.

LAGLAOUI Amin, Enseignant à la Faculté des sciences et techniques

Tanger, qui a dirigé ce travail de recherche de Licence. Nous avons eu

l’honneur d’être parmi vos élèves et de bénéficier de votre riche

enseignement. Vos qualités pédagogiques et humaines sont pour nous

un modèle. Votre gentillesse, votre patience, et votre disponibilité

permanente ont toujours suscité notre admiration. Veuillez bien

monsieur recevoir notre remerciement pour le grand honneur que

vous nous avons fait d’accepter l’encadrement de ce travail.

Nos remerciements s'adressent également à Mr. BAKKALI

Mohammed et Mr. ARAKRAK Abdelhay, Enseignants à la Faculté

des sciences et techniques Tanger, pour avoir accepté de juger ce

travail. Nous adressons nos reconnaissances à tous nos enseignants

pendant nos études notamment ceux du Licence.

Nous exprimons notre reconnaissance à Mr. ZANTAR Said

encadreur de stage à L’ INRA pour nous donné ses conseils et ses avis.

Nous le somme aussi reconnaissant pour le soutien technique qu'il nous

a apporté tout en répondant à nos interrogations à tout moment. Nos

profondes gratitudes s’orientent vers Mr ZERROUK Mounir,

Enseignant à la Faculté polydisciplinaire de Larache pour ses

judicieux conseils et son support permanent.

Spéciale remerciement à notre amie Mme. SSEBBAGH Chaimae,

étudiant du Master à la Faculté des sciences et techniques Tanger

spécialité Chimie, pour le temps qu'il a passé avec nous pour discuter

nos propositions et pour ses aides. Ainsi pour l'intérêt qu'il a porté à

notre travail et ses conseils sur nos propositions, Nous la remercie

aussi pour ses conseils occasionnels et ses aides.

Nos remerciements vont aussi à Mr. JELLOULI Omar doctorant à

la Faculté des sciences et techniques Tanger département

mathématiques appliquées et informatique pour le temps qu'il a passé

avec nous pour discuter nos propositions et pour son aide et ses

remarques.

Enfin, nous présentons nos sincères reconnaissances et nos

remerciements à tous ceux qui ont participé de près ou de loin à la

réalisation de ce travail.

PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE

Ce rapport a été réalisé à la Faculté des Sciences et Techniques de Tanger

collaboration avec le Centre Régional d

comporte deux volets : Le premier a été consacré à l’étude d’état et lieu

médicinales d’origine du nord du Maroc chez les herboristes de la région de Tanger

deuxième a été consacré à l’étude de l’huile essentiell

de Laurus nobilis, provenant de la région de

Chromatographie en phase gazeuse couplée

matière végétale étudiée présente

composés majoritaires identifiés dans l’H

α -Terpinyl acétate (9,98%).

L’étude de l’activité anti-oxydante par le test du DPPH a

maximal (87%) obtenu à la concentration

L’étude de l’activité antibactérienne de l’

bactériennes gram positif (Staphylococcus aureus

(Escherichia coli et Salmonella

important surtout sur deux souches de bactéries à savoir

Mots-clés : plantes aromatiques et médicinales, huile essentielle,

LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE

Résumé Ce rapport a été réalisé à la Faculté des Sciences et Techniques de Tanger

collaboration avec le Centre Régional de la Recherche en Agronomie de Tanger

Le premier a été consacré à l’étude d’état et lieu des plantes aromatiques et

médicinales d’origine du nord du Maroc chez les herboristes de la région de Tanger

à l’étude de l’huile essentielle obtenue par hydrodistillation des feuilles

, provenant de la région de Moulay Abdeslam, cette huile

Chromatographie en phase gazeuse couplée à la Spectrométrie de masse. L’huile extraite de

sente 25 composés chimiques avec un rendement de

entifiés dans l’H.E sont : (1,8 Cineole (42%), Caryophyllene

oxydante par le test du DPPH a révélé un pouvoir

obtenu à la concentration [1000mg/l] de l’extrait méthanolique.

ctivité antibactérienne de l’huile essentielle de Laurus nobilis

Staphylococcus aureus et Enterococcus faecium)

Salmonella seftemberg), montre qu’elle possède un effet antibac

souches de bactéries à savoir : E. coli et S. aureus.

plantes aromatiques et médicinales, huile essentielle, Laurus nobilis

Ce rapport a été réalisé à la Faculté des Sciences et Techniques de Tanger (FSTT), et en

de Tanger (CRRA). Il

des plantes aromatiques et

médicinales d’origine du nord du Maroc chez les herboristes de la région de Tanger –Tétouan. Le

e obtenue par hydrodistillation des feuilles

, cette huile a été analysée par

à la Spectrométrie de masse. L’huile extraite de

avec un rendement de (0,66%). Les

Caryophyllene (11,74%),

révélé un pouvoir antioxydant

thanolique.

Laurus nobilis sur des souches

Enterococcus faecium) et gram négatif

un effet antibactérien

Laurus nobilis, nord du Maroc.

Sommaire Résumé

Liste des tableaux

Liste des figures

Liste des abréviations

Introduction ………………………………………………………….………………...……………1

Chapitre 1 : Etude bibliographique…………………………………………………………………2

I. Les plantes aromatiques et médicinales ......................................................................................2

1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales ...............................................................2

2. Domaines d’application des plantes médicinales ...................................................................2

3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc ........................................................................3

II. Les huiles essentielles ...............................................................................................................4

1. Définition ...............................................................................................................................4

2. composition chimique générale des huiles essentielles ..........................................................5

3. Techniques d’extraction des huiles essentielles ....................................................................5

5. Les activités biologiques des huiles essentielles ....................................................................9

III. L’enquête ................................................................................................................................11

1. À propos ...............................................................................................................................11

2. Région d’étude .....................................................................................................................11

3. Objectifs ................................................................................................................................11

IV. La plante à étudier .................................................................................................................11

1. Généralités ............................................................................................................................11

2. Origine et distribution ...........................................................................................................12

3. Description botanique ...........................................................................................................12

4. Classification botanique: ......................................................................................................13

Chapitre 2 : Matériel et Méthodes................................................................................................14

I. Matériel Biologique: .................................................................................................................14

1. Matériel végétal ....................................................................................................................14

2. Matériel microbiologique .....................................................................................................15

II. L’extraction d’huile essentielle ...............................................................................................15

III. Détermination d’humidité et du rendement en huiles essentielles .........................................16

1. Calcul d’humidité .................................................................................................................16

2. Calcul du rendement en huile essentielle .............................................................................17

IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG/ SM) ...................................................................................................................17

V. Indices physico-chimiques .....................................................................................................18

1. Les propriétés organoleptiques ............................................................................................18

2. Le PH ...................................................................................................................................18

3. Indice d’acide .......................................................................................................................19

4. Pouvoir rotatoire ..................................................................................................................19

VI. Évaluation de l’activité antioxydante ....................................................................................20

VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E .........................................................................20

1. Milieu de culture: ..............................................................................................................20

2. Obtention des suspensions bactériennes ...............................................................................21

3. Méthodes de diffusion sur disques ......................................................................................21

Chapitre 3 : Résultats et Discussion ............................................................................................22

I.L’enquête ...................................................................................................................................22

1. Commentaires ......................................................................................................................27

2. Remarques ...........................................................................................................................27

II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles ..............................................................28

1. Rendement en huile essentielle ............................................................................................28

2. Taux d’humidité ....................................................................................................................28

III. Indices physico-chimiques .....................................................................................................29

VI. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle ...................................................31

V. Activité anti-oxydante .............................................................................................................33

VI. Activité antibactérienne ........................................................................................................34

Conclusion et perspectives .............................................................................................................38

Références bibliographiques .........................................................................................................39

Annexes ...........................................................................................................................................43

PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE

Liste des tableaux

Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord

du Maroc.

Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L.

Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.

Tableau 4 : Résultats de la détermination des indices physico-chimiques des

H.E.

Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’HE

étudiée.

Tableau 6 : L’activité anti-oxydante de l’H.E.

Tableau 7 : L’activité anti-oxydante de la Vitamine C.

Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches

bactériennes testées.

Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches

testées.


Liste des figures

Figure 1 : Montage d’hydrodistillation (Clevenger).

Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau.

Figure 3 : Schéma du montage de l’expression à froid.

Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis.

Figure 5 : Situation géographique de la région de la récolte.

Figure 6 : Montage d’hydro-distillation du type Clevenger.

Figure 7 : Chromatographie en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie de

Masse (GC/MS).

Figure 8 : Diffusion sur disques.

Figure 9 : Teneur en eau des trois différentes parties de la plante.

Figure 10 : Activité anti-oxydante de l’huile essentielle de L.nobilis comparée à

Celui de la vitamine C à des concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L.

Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis sur les Souches

testées.


Liste des abréviations

ADN : Acide Désoxyribonucléique.

AFNOR : Association Française de la Normalisation.

CG/SM : Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de

masse.

CPG : Chromatographie en phase Gazeuse.

DPPH : 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle.

E.Coli : Escherichia coli.

H.E : Huille essentielle.

L. Nobilis : Laurus Nobilis.

MHA : Muller Hinton Agar.

NB : Nutritif Broth.

NIST : National Institute of Standards and Technology.

OMS : Organisation Mondiale de la Santé.

PAMs : Plantes Aromatiques et Médicinales.

S. Aureus : Staphylococcus aureus.


Avant propos L’institut national de recherches agronomiques (INRA) est placé au service du

développement agricole et relève de Ministère de l’Agriculture et de la Pêche Maritime. Elle est

représentée par dix centres régionaux parmi lesquels il y a le centre régional de la recherche

agronomique de Tanger qui couvre la zone d’action des Directions Provinciales d’Agriculture

(DPA) de Tanger, Tétouan , Chefchaouen, Al Hoceima et la partie nord de l’office régional de

mise en valeur agricole de (ORMVA) Loukkos.

Le centre régional de la recherche agronomique de Tanger est organisé en deux unités de

recherche, l’unité de recherches sur les techniques nucléaires, l’environnement et la qualité et,

l’unité de recherche sur la Production Animale. Il inclut un service administratif, un service de

recherche de développement et le domaine expérimental de Boukhalef.

Notre stage a été réalisé à La station d’ionisation de BOUKHALEF (SIBO).

La station d’ionisation de BOUKHALEF SIBO est une unité de traitement par

rayonnement ionisant des produits alimentaires et non alimentaires. Elle est gérée par le

programme des techniques nucléaires au centre régional de la recherche agronomique du Rif à

Tanger.

Cette station créée en 1995, est équipée d’une source radioactive de cobalt 60.

La vocation de la station SIBO est de traiter les produits alimentaires d’origines animales

et végétales en vrac ou emballés ainsi que d’autres produits comme les produits pharmaceutiques

et médicaux.

PFE – LICENCE BIOTECHNOLOGIE VEGETALE Page 1

Introduction

Les plantes médicinales constituent un patrimoine précieux pour l’humanité et plus

particulièrement pour la majorité des communautés démunies des pays en voie de développement.

Elles permettent d’assurer le soin de la santé primaires et subsistances. Elles utilisent la plupart

des espèces végétales (ligneuses, herbacées, …) comme médicaments.

Une croyance bien répondue est que ‘‘toute plante soigne’’. Selon l’OMS, plus de 80% des

populations africaines ont recours à la médecine et à la pharmacopée traditionnelle pour faire face

aux problèmes de sante. Le continent africain regorge de plantes médicinales très diversifiées. En

effet, sur les 300.000 espèces végétales recensées sur la planète plus de 200.000 espèces vivent

dans les pays tropicaux d’Afrique et ont des vertus médicinales {1}.

Le Maroc par sa position biogéographique, offre une très grande diversité écologique et

floristique. Il est l’un des pays méditerranéens qui ont une longue tradition médicale et un savoir-

faire traditionnel a base de plantes médicinales {2}. Par ailleurs, une forte tradition ethno-

médicinal et encore vivante dans toutes les régions du Maroc et nul ne soupçonne la richesse du

savoir ethno-médicinal accumule durant des siècles et qui, de plus en plus risque de ne plus être

transmis, en cas ou aucune sauvegarde n’est entreprise.

La flore médicinale marocaine reste jusqu’à présent connue de manière simplement

empirique. Devant cette parcelle de notre savoir, plusieurs volontés concourent, actuellement, à la

préserver et à la mettre en valeur. Par ailleurs, des enquêtes ethnobotaniques contribuent, de leurs

parts, à rassembler et constituer une source d’information très précieuse, prête à être exploitée sur

le plan scientifique.

Dans le cadre de notre projet de fin d’étude et vu la variété de ces plantes présentes dans

notre région, une enquête sur l’état et le lieu des Plantes Aromatiques et Médicinales (PAM) est

proposée chez les herboristes de la région Tanger-Tétouan, ceci nous a amené aussi à nous

pencher sur l‘étude des caractères physico-chimiques, activité anti-oxydante et l’activité

antibactérienne d’une huile essentielle obtenue par hydrodistillation à partir d’une plante

aromatique et médicinale de la région de Moulay Abdeslam (Nord du Maroc) : c’est le Laurus

nobilis, qu’elle est une épice utilisé surtout dans la cuisson des aliments ou pour l’assaisonnement

et elle possède différentes caractéristiques aromatique culinaire et médicales.


Chapitre 1

Étude bibliographique

I. Les plantes aromatiques et médicinales :

1. Définitions des plantes aromatiques et médicinales :

� Plantes médicinales : La plante médicinale est une plante utilisée pour ses propriétés thérapeutiques,

qui contient une ou des substances susceptibles d’un traitement médical d’une maladie à

réduire l’incidence de la ou des matières premières utilisées dans la préparation de

matériel médical. Leur efficacité relève de leurs composés très nombreux et très variés

en fonction des espèces, qui sont autant de principes actifs différents {3}.

� Plantes aromatiques :

La plante aromatique est toute plante contient suffisamment de molécules aromatiques avec

plusieurs organes producteurs comme les feuilles, les fruits, les racines, l’écorce, … etc. {3}.

2. Domaines d’application des plantes médicinales :

Les substances naturelles issues des végétaux ont des intérêts multiples mis à profit dans

l’industrie : en alimentation, en cosmétologie et en pharmacie.

- En pharmacie : on utilise une forte proportion de médicaments d’origine végétale,

selon l’OMS 75% des médicaments ont une origine végétale et 25% d'entre eux contiennent au

moins une molécule active d'origine végétale. Parmi les composés utilisés dans la médecine, on

retrouve dans une grande mesure les métabolites secondaires.

- En alimentation : les épices et les herbes sont très utilisées dans l’alimentation. La

notion de flaveur des épices et aromates recouvre l’ensemble des perceptions olfactogustatives.

Ces perceptions résultent de stimulations générées par un multiple des composés organiques dont

certains sont volatils : les huiles essentielles; les autres non volatils sont plus particulièrement

responsables de la saveur et de la couleur {4}.

Étude Bibliographique


- En agriculture : les huiles de certaines plantes ont des utilisations dans le contrôle de

certains insectes et nématodes {5}.

- En cosmétique : beaucoup de plantes médicinales sont à l’origine des produits de

beauté parfums et articles de toilettes, produits d’hygiène {6}.

3. Plantes aromatiques et médicinales au Maroc :

3.1. Généralités :

L'importance du secteur des PAM ne cesse d'augmenter en relation, d'une part, avec la forte

augmentation de la demande mondiale enregistrée ces dernières décennies pour les PAM et leurs

produits dérivés et, d'autre part avec le nombre croissant d'utilisateurs et la diversité des domaines

de leur valorisation.

Situé à l'angle Nord-ouest du continent Africain entre 21° et 36° de latitude de Nord et entre le

1er et le 17ème degré de longitude Ouest, et avec une façade maritime de 3446 Km de long

s'ouvrant sur la méditerranée et l'océan atlantique {7}. Le Maroc jouit d'une position privilégiée et

offre une gamme variée de bioclimats permettant l’installation d’une flore riche (plus de 4200

espèces) et une diversité de ressources phylogénétiques en PAM (600 espèces) {6}

Le Maroc est un producteur traditionnel de PAM, et un fournisseur exclusif de plusieurs

huiles essentielles comme l’armoise, et la camomille sauvage {8}. Il est le 12ème exportateur

mondial avec près de 30 millions de dollars pour les PAM cultivées et 40 millions de dollars pour

celles cueillies {9}. Cette production se révèle ainsi riche et diversifiée, ce qui constitue un

important atout pour l’établissement et le développement du secteur. Plusieurs produits sont

connus sur le marché international comme étant des produits typiquement marocains. Cela signifie

que la profession d’exploitation des PAM au Maroc, malgré ses faiblesses, a réussi à introduire sur

le marché international plusieurs produits nouveaux {10}.

3.2. Plantes aromatiques et médicinales du nord du Maroc :

Grâce aux conditions climatiques et géomorphologiques, le nord du Maroc présente une très

grande diversité spécifique de plantes spontanées des zones méditerranéennes et qui ont un

potentiel important en plantes aromatiques et médicinales souvent endémiques. Ce caractère



orographique original lui confère des conditions pédoclimatiques qui se reflètent sur sa végétation

très diversifiée {7}.

Tableau 1 : Les principales plantes aromatiques et médicinales exploitées au nord du Maroc {3}

Nom scientifique Nom français Nom vernaculaire

Origanum compactum Origan Sahtar, Zaatar

Mentha pulegium Menthe pouliot Fleyou

Lavandula stoechas Lavande Halhal

Myrtus communis Myrte Rayhane

Eucalyptus camaldulensis Eucalyptus Kellette

Rosmarinus officinalis Romarin Azir

Mentha rotundifolia Menthe à feuilles rondes Mchechtro

Artemisia absinthium Absinthe Chiba

Rubus ulmifolius .schott Ronce EL Olique

Pistacia lentiscus Pistachier Lentisque Dro

Laurus nobilis Laurier noble Rande

Calamintha ascendens Sarriette ascendent Mantha

II. Les huiles essentielles : 1. Définition :

Une huile essentielle est un extrait volatile odorant, de composition chimique complexe,

obtenu à partir d'une matière première végétale botaniquement définie, soit par entrainement à la

vapeur d'eau, soit par distillation sèche, soit par un procédé mécanique sans chauffage {11}.

En 1987 ; l’AFNOR (Association Française de la Normalisation) donne une définition

officielle des huiles essentielles : « Produit obtenu à partir d’une matière première végétale, soit

par entrainement à la vapeur d’eau, soit par des procédés mécaniques à partir de l’épicarpe des

Citrus, soit par distillation à sec. L’huile essentielle est ensuite séparée de la phase aqueuse par

procédés physiques » {12}.



2. Composition chimique générale des huiles essentielles : La composition chimique de l'huile essentielle est souvent influencée par plusieurs facteurs

externes comme : les conditions climatiques, géographiques et agronomiques qui peuvent

intervenir dans la composition chimiques de l’huile essentielle, mais il est généralement admis que

les constituants des huiles essentielles sont repartis en trois groupes provenant de trois voies de

biosynthèse :

• Le groupe des terpénoïdes ;

• Le groupe des phénylpropanoïdes ;

• Le groupe des lipides, issus de la dégradation d’acides gras et de terpènes {13}.

3. Techniques d’extraction des huiles essentielles :

Le choix de la technique dépend principalement de la matière première: son état originel, ses

caractéristiques et sa nature proprement dite. Le rendement « H.E/matière première végétale »

peut être extrêmement variable selon les plantes {14}.

Parmi de nombreuses techniques d’extraction des huiles essentielles, la distillation est la

méthode la plus ancienne et également la plus utilisée. D’autres techniques plus récentes ont été

développées afin d’améliorer le rendement ou la qualité des huiles essentielles extraites, diminuer

le temps d‘extraction, réduire la quantité du solvant utilisé et accélérer la cinétique d‘extraction

{15}.

3.1. La Distillation :

Dans un premier temps, l’extraction des huiles essentielles s’est faite en plongeant la matière

première dans l’eau qu’on porte ensuite à ébullition, il s’agit de :

� L’HYDRODISTILLATION :

La matière première est en contact direct avec l’eau. Elle peut flotter à la surface ou être

immergée, en fonction de sa densité et de la quantité traitée. Le chauffage de l’ensemble est

effectué à la base de l’alambic, à l’aide de combustibles divers comme le bois (alambic à feu nu)

ou par la vapeur surchauffée injectée dans une double enveloppe entourant l’alambic.



La présence de l’eau engen

d’hydrolyse seront d’autant plus

ailleurs, dans le cas de l’alambic

une certaine surchauffe, ce qui

d’eau, le produit solide résiduel n’

Figure 1 : M

� LA VAPO-DISTILLA

A la différence de l’hyd

l’eau et la matière végétale à traite

De la vapeur d’eau fou

dessus d’une grille. Durant le pa

libèrent l’huile essentielle qui es

« eau + huile essentielle ». Le mé

d’être séparé en une phase aqueus

GIE VEGETALE

gendre notamment des phénomènes d’hydrolys

us importants quand la durée d’hydro-distillatio

ic à feu nu, la matière première située à la supe

i est négatif pour l’huile essentielle ainsi ob

l n’est pas utilisable comme combustible {15}.

Montage d’hydrodistillation (Clevenger) {16}

LATION :

hydro-distillation, cette technique ne met pas

aiter.

fournie par une chaudière traverse la matière

passage de la vapeur à travers le matériel, les

est vaporisée sous l’action de la chaleur pour

mélange est ensuite véhiculé vers le condenseur

euse et une phase organique : l’huile essentielle


Page 6

lyse. Ces phénomènes

ation sera longue. Par

perficie peut connaître

obtenue. Étant gorgée

6}

as en contact direct de

ère végétale située au

les cellules éclatent et

ur former un mélange

eur et l’essencier avant

lle {17}.


Figure 2 : Montage d’entraînement à la vapeur d’eau {17}

3.2. L’expression à froid :

Ce mode d’obtention ne s’applique qu’aux fruits d’agrumes par des procédés

mécaniques à température ambiante. L'expression à froid consiste à soumettre la substance

végétale à une forte pression à l'aide d'une presse hydraulique {14}.

Figure 3: Schéma du montage de l’expression à froid {18}

3.3. Distillation sèche :

L’huile essentielle est obtenue par distillation des bois, écorces ou racines, sans addition

d’eau ou de vapeur d’eau {14}.

Collecteur

Moteur

Aiguille



4. Méthodes d’analyses des huiles essentielles :

L’analyse chimique des huiles essentielles permet d’identifier et quantifier ses constituants.

Les progrès des méthodes analytiques permettent d’identifier rapidement un très grand nombre de

composés chimiques. En effet, la CPG est la méthode de référence utilisée pour analyser les

huiles essentielles {19}, elle permet l’analyse de mélanges, qui peuvent être très complexes, de

nature et de volatilité très variées {20}.

� La chromatographie en phase gazeuse (CPG) :

La CPG est une méthode d’analyse par séparation qui s’applique aux composés gazeux ou

susceptibles d’être vaporisés par chauffage sans décomposition. C’est la technique de séparation la

plus utilisée pour l’analyse de la composition chimique des huiles essentielles, car elle permet

d’effectuer l’individualisation des constituants à partir d’échantillons de l’ordre du millilitre voire

du microlitre. Les progrès technologiques réalisés dans le domaine des colonnes capillaires, des

phases stationnaires et des détecteurs à ionisation de flamme ont contribué à rendre la CPG

incontournable pour l’analyse des huiles essentielles {21}.

Chaque constituant est caractérisé par un indice calculé à partir d’une gamme d’alcanes ou

plus rarement d’esters méthylique linéaires, dans les mêmes conditions d’analyse des échantillons

{16} ou en programmation de la température {23}. Les temps de rétention, bien que spécifiques

d’un composé, ont tendance à varier d’une analyse à l’autre, notamment du fait du vieillissement

des colonnes {24}.

� Couplage chromatographie en phase gazeuse / spectrométrie de masse (CG/SM) :

La simplicité du couplage entre ces deux techniques, les progrès accomplis dans le

traitement en temps réel du signal, la constitution de banques de données de spectre de masse et le

développement des algorithmes de comparaison entre le spectre d’un composé inconnu avec ceux

répertoriés dans la banque sont à l’origine de la généralisation de l’usage de la CG/SM dans les

laboratoires d’analyse des composés aromatisants. La CG sur colonne capillaire constitue une

excellente méthode d’introduction de l’échantillon dans le spectromètre de masse. Ainsi, la

colonne capillaire est directement couplée à la source d’ions permettant l’ionisation en impact

électronique {19}.



5. Les activités biologiques des huiles essentielles :

L’activité des H.E et des extraits aromatique est souvent réduite à l’activité de leurs

composés majoritaires, ou ceux susceptibles d’être actifs. Évalués séparément sous la forme de

composés synthétiques, ils confirment ou infirment l’activité des H.E de compositions semblables.

Il est cependant probable que les composés minoritaires agissent de manière synergique. De cette

manière, la valeur d’une H.E tiennes à l’intégrité de ses composants et non seulement à ses

composés majoritaires {26}.

Les composés chimiques de plus grande efficacité et à plus large spectre sont les phénols, les

alcools, les aldéhydes, les cétones et plus rarement des terpènes {27}.

5.1. Activité anti-oxydante :

Le phénomène d'oxydation consiste à rouiller les métaux, flétrir les légumes et les fruits,

rancir les graisses et modifier le goût et la couleur des aliments.

De point de vue chimique l'oxydation est générée par la présence des radicaux libres;

espèces chimiques instable, neutres ou chargées qui cherchent toujours à récupérer un électron

dans sa couche externe pour retrouver son état stable, très rapide et se propage en cascade.

Ils pointent surtout les corps gras comme les phospholipides des membranes cellulaires ainsi

que les protéines. L’oxydation entraine une modification ou une perte d'activité biologique de la

molécule, en cas d’enzyme, ce qui conduit à des désorganisations cellulaires irréversibles qui

provoque la mort cellulaire. Il en est de même quand l'oxydation touche l'ADN {29}.

Les antioxydants sont des molécules qui fixent les radicaux libres et protègent les protéines

essentielles et qui diminuent ou empêchent l'oxydation d'autres substances {30}.

La méthode d’évaluation de l’activité anti-oxydante est :

� Test de réduction du DPPH :

Le DPPH ou 1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyle agit en tant qu'un radical libre stable efficace

réduit par un antioxydant, montrant un spectre d'absorption à 517 nm avec une couleur violette, la

réduction de ce radical nous donne la coloration jaune.

La méthode est basée sur la dégradation du radical DPPH. Un antioxydant aura la capacité de

donner un électron singulier au radical synthétique DPPH de coloration violette pour le stabiliser



en DPPH de coloration jaune. {31}, cette activité est facilement mesurable par spectrophotométrie

à 517 nm.

Dans ce test les antioxydants réduisent le diphénylpicryl-hydrazyle ayant une couleur violette

en un composé jaune, le diphénylpicryl-hydrazine, dont l'intensité de la couleur est inversement

proportionnelle à la capacité des antioxydants présents dans le milieu à donner des protons {32}.

5.2. Activité antibactérienne :

Du fait de la variabilité des quantités et des profils des composants des huiles essentielles, il

est probable que leur activité antimicrobienne ne soit pas attribuable à un mécanisme unique, mais

à plusieurs sites d’action au niveau cellulaire.

De façon générale, il a été observé une diversité d’actions toxiques des huiles essentielles

sur les bactéries comme la perturbation de la membrane cytoplasmique, la perturbation de la

force motrice de proton, fuite d’électron et la coagulation du contenu protéique des cellules.

Le mode d’action des huiles essentielles dépend en premier lieu du type et des

caractéristiques des composants actifs, en particulier leur propriété hydrophobe qui permet de

pénétrer dans la double couche phospholipidique de la membrane de la cellule bactérienne. Cela

peut induire un changement de conformation de la membrane {33}.

Les méthodes d’évaluation de l’activité antibactérienne sont :

� Méthode des disques :

Cette méthode est nommée aussi technique de l’antibioaromatogramme a été pratiqué

pour tester et mettre en évidence l'activité antimicrobienne {34}.

Une suspension bactérienne de 18 à 24 heures de chaque souche microbienne est préparée

avec le bouillon nutritif dilué. Des boîtes de pétri contenant la gélose sont inoculées par la

suspension bactérienne, les boîtes sont ensuite séchées sous hotte à flux laminaire.

Un disque de papier filtre de 6 mm de diamètre est arrosé de l'huile essentielle puis

conservé sur une boîte de pétri et le tout est entretenu pendant 18 à 24 heures à 30°C pour les

bactéries gram négatif et 37°C pour les bactéries gram positif.

Après 18 à 24 heures d'incubation, on remarque la constitution d’une zone ou un halo clair

autour du disque si l'huile essentielle entrave le développement microbien. Plus la zone

d'inhibition est importante, plus le germe est sensible.



� Méthodes des puits :

Cette méthode assure une diffusion radiale de l'H.E à l’aide d'un puits contenant l’huile

essentielle à étudier en donnant une zone d'inhibition claire et facilement mesurable. La méthode

consiste à créer un trou circulaire vertical dans le milieu gélosé. Chaque puits est remplis l’huile

solubilisé dans un solvant spécifique {35}.

III. L’enquête:

1. À propos :

Au cours de notre enquête, une série de visites ont été effectuées chez des herboristeries à la

fois traditionnelles et sophistiquées, à l’aide d’un questionnaire préétablie (Annexe 2) comportant

des questions sur l’identité vernaculaire de la plante ainsi que la partie utilisée, les modes de

préparation les usages thérapeutiques et traditionnelles, la qualité des produits dérives et leurs

prix.

2. Région d’étude :

L’enquête a été menée auprès des herboristes des deux villes principales de la région

Tanger-Tétouan située au nord du Maroc. Il s’agit de Tanger et Tétouan.

3. Objectifs :

Les principaux objectifs de cette enquête sont :

� Valoriser les PAM d’origine du Nord du Maroc.

� Évaluer la valeur économique de ces plantes.

� Savoir la situation du marché de ces plantes au niveau régional.

IV. La plante à étudier :

1. Généralités :

Laurus nobilis L., membre de la famille des lauracées qui renferme 32 genres et environ

2000-2500 espèces {36}. Laurus, nom latin, d’origine celte qui veut dire « toujours vert » allusion

au feuillage persistant de la plante {37}.



Les feuilles sont largement appliquées et connues comme assaisonnement et herbe

médicinale depuis les périodes antiques grecs et romain {38}. Il est intéressant de noter que cette

herbe, qui était pendant longtemps employée dans la nourriture comme condiment et en médecine

traditionnelle, a des propriétés qui peuvent suggérer de nouvelles applications {39}.

2. Origine et distribution:

Originaire du bassin méditerranéen, Laurus nobilis pousse dans les lieux humides et

ombragés, mais également dans les jardins, où elle est cultivée comme condiment {40}.

Actuellement, dans beaucoup de pays tels que la Turquie, l’Algérie, la France, la Grèce, le

Maroc, l’Amérique centrale et les États-Unis Méridionaux, la plante est largement cultivée

comme plante ornementale et pour la production commerciale {38,36}.

3. Description botanique:

Laurus nobilis, Arbuste ou arbre aromatique de 2 à 10m de haut à tige droite grise dans sa

partie basse et verte en haut. Ses feuilles sont alternés, coriaces, légèrement ondulées sur les

bords, longues de 16 cm sur 8 cm de large, persistantes vert foncé et glacés sur leur face

supérieure et plus pale en dessous. Les fleurs sont dioïques (petites fleurs mâles et femelles sur

des pieds séparés), jaunes, groupées par 4 à 5 en petites ombelles. Le fruit est une petite baie

ovoïde de 2cm de longueur sur 1cm de largeur, noir vernissé à maturité {40, 38,41}.

Figure 4 : Aspect morphologique de Laurus nobilis {41}.

Rameau

Feuille

Fleur Fruit



4. Classification botanique: Le Tableau 2 illustre la classification botanique de Laurus nobilis L. Tableau 2 : Classification botanique de Laurus nobilis L {42}.

Règne Plantes

Sous règne Plantes vasculaires

Embranchement Spermaphytes

Sous embranchement Angiospermes

Classe Dicotylédones

Sous classe Dialypétales

Ordre Laurales

Famille Lauracées

Genre Laurus

Espèce Laurus nobilis L.



Chapitre 2

Matériel et Métho

I. Matériel Biologi

1. Matériel

La plante du laurier noble

Abdeslam, au nord du Maroc.

Les feuilles de cette plante es

Figure 5 : Situati

GIE VEGETALE

thodes

ogique:

el végétal

a été récoltée la 25 mai 2016 à partir de l

e est la partie végétale choisie pour l’extraction.

ation géographique de la région de la récolte {

Matériel et Méthodes

Page 14

e la région de Moulay

n.

{43}.


2. Matériel microbiologique

Les souches utilisées dans notre étude font partie des groupes des microorganismes

pathogènes.

Les souches bactériennes utilisées dans notre travail proviennent de l’Équipe de Recherche

en Biotechnologies et Génie des Biomolécules de la FST de Tanger. Elles sont présentées et

caractérisées dans le Tableau 3.

II. L’extraction d’huile essentielle :

Les feuilles sont séparées minutieusement de leurs pédoncules et nettoyées. Elles sont

mises par la suite à sécher dans l’étuve pendant 48 heurs à 40˚C. Après séchage, 100g de

feuilles séchée ont subit une hydro-distillation. L’extraction de huiles essentielles a été effectuée à

l’aide d’un hydro-distillateur de type Clevenger. L’hydro-distillation est arrêtée après 3 heures.

L’huile est conservé dans des tubes de verre fermés hermétiquement et couverts par un papier

aluminium pour la préserver de l’air et de la lumière et mise à 4˚C dans un réfrigérateur à

l’obscurité jusqu’au l’analyse chimique de leurs composants et l’évaluation de leurs activités.

Les souches Principales caractéristiques

Escherichia coli Bacille à Gram -

Salmonella Seftenberg

Bacille à Gram -

Staphylococcus aureus

Coque à Gram +

Enterococcus faecium

Coque à Gram +


Tableau 3 : Les souches bactériennes testées.


Figure 6 : Mo

III. Détermination d’humid

1. Calcul d

Le taux d’humidité, dans n

une température de 105° C pen

constant. Après refroidissement d

et le taux d’humidité est détermin

Avec:

MF : Matière Fraîche (g).

H(%) : taux d’humidité.

MS: Matière Sèche (g)

H(%

GIE VEGETALE

ontage d’hydro-distillation du type Clevenger

idité et du rendement en huiles essent

l d’humidité :

s notre échantillon, à été déterminé par le procé

endant 24 heures dans une étuve jusqu'à l’o

t dans un dessiccateur, la moyenne des pertes e

iné par la relation suivante :

%) = (MF-MS)/MS×100


Page 16

er :

ntielles :

océdé de dessiccation à

l’obtention d’un poids

s en poids est calculée


2. Calcul du rendement en huile essentielle :

Le rendement de l’huile essentielle des différentes provenances est calculé par rapport à

la matière totale sèche par la relation :

Avec:

R: Rendement en huile essentielle en pourcentage (%).

M H.E: Masse de l’huile recueilli (g).

MS : Matière sèche en (g)

IV. Analyse chimique du H.E par chromatographie en phase gazeuse

couplée à la spectrométrie de masse (CPG/ SM) :

La séparation et l’identification des différents composés chimiques du H.E extraite des

feuilles de Laurus nobilis a été réalisée par la chromatographie en phase gazeuse (Ultra GC

Trace), couplée à un spectromètre de masse de type (PolarisQ) à l’unité d’analyse GC/MS et GC,

Trappe d’ions en mode impact électronique avec une énergie d’ionisations de 70 eV. La colonne

utilisée est une colonne capillaire apolaire en silice. Le volume de l’échantillon injecté est de 1 µl

de l’huile diluée dans l’hexane. En combinant les deux techniques, on obtient les spectres de

masse des différents composés des échantillons des huiles essentielles. L’identification des

composants des huiles essentielles est réalisée en comparant leurs temps de rétention et leurs

spectres de masse avec ceux dans la base de données.

R(%) =M H.E/M S×100



Figure 7 : Chromatographie en

1 : Spectrométrie de masse

2 : Chromatographie en ph

3 : Lien informatique

V. Indices physico-ch

Pour obtenir des données

dans certains cas, pour l'identifier

Dans cette étude, les mét

pH, indice d'acide, pouvoir rotato

les protocoles expérimentaux édic

1. Les propri

Il s’agit des caractéristiq

humains (toucher, saveur, odo

de Laurus nobilis prise en comp

2. Le PH :

La mesure l'activité chimiq

biais d'un pH-mètre.

1

GIE VEGETALE

en Phase Gazeuse Couplée à la Spectrométrie d

sse

phase gazeuse

chimiques :

es sur la composition et le degré de pureté de l

ier, on procède à l'étude de ses propriétés physiq

éthodes d'analyse physico-chimique (proprié

atoire, indice de réfraction), des H.E extraites on

dictés par l'association Française de Normalisat

riétés organoleptiques :

tiques d'un critère d'un produit pouvant être a

dorat). Les différentes caractéristiques organole

mpte sont: aspect, couleur et odeur.

mique des ions hydrogènes (H+) en l'H.E extrai

2 3


Page 18

ie de Masse (GC/MS)

e l'huile essentielle et,

sique et chimique.

riétés organoleptiques,

ont été réalisé suivant

sation {12}.

apprécié par les sens

oleptiques de l'essence

trait a été établie par le


3. Indice d’acide :

La détermination de l'indice d'acide renseigne généralement sur le degré d'hydrolyse. Les

H.E ne contiennent pas d'acide gras libre à courte chaine carbonique (voir négligeable). Ce

paramètre est une variable qui dépend essentiellement des conditions de conservation et surtout

des conditions d'extraction.

L'indice d'acide (la), est le nombre de milligrammes d'hydroxyde de potassium (KOH)

nécessaire pour neutraliser les acides libres renfermés dans (01) grammes d'H.E. Cette

neutralisation par (KOH) se traduit par la réaction chimique suivante :

Le protocole expérimental de la détermination de l'indice d'acide est le suivant:

1g d'H.E ,5mL d'éthanol à 95 % et environ 3 gouttes d'indicateur coloré (phénophtaléine)

sont introduits dans une fiole. Le mélange ainsi formé est titré par une solution éthanolique de

potasse (KOH) (0,1N) jusqu'à ce que la couleur du mélange vire à une couleur rose.

L'indice d'acide (la) est déterminé par la formule suivante :

Avec :

N : normalité de KOH

V : Volume en ml de la solution éthanolique de KOH utilisé pour le titrage.

M : masse en grammes de l'huile essentielle.

4. Pouvoir rotatoire :

Le pouvoir rotatoire du H.E a été mesure à l’aide d’un polarimètre.

Ia = (56, 11×N×V)/m

OH

O

R-C + KOH

OK

O

R-C + H2O



VI. Évaluation de l’activité antioxydante :

L’activité anti-oxydante a été évaluée par la mesure du pouvoir de piégeage du radical

DPPH. Un millilitre d'une solution de 1mM du radical DPPH dans du méthanol est ajouté dans des

tubes contenant 3 ml de différentes concentrations du H.E de Laurus nobilis (1000-100 mg) de

méthanol. Après agitation au vortex, les tubes sont maintenus à température ambiante dans

l'obscurité pendant 30 min. La mesure de l’absorbance est réalisée à 517 nm en utilisant un

spectrophotomètre. La vitamine C (un antioxydant standard) est utilisée comme contrôle positif.

Le pourcentage de l’activité du piégeage du radical DPPH est calculé comme suit:

Avec:

Acontrol : l’absorbance de la réaction contrôle (contenant tous les réactifs excepté le produit à tester)

A test : est l’absorbance du produit à tester.

VII. Évaluation de l’activité bactérienne du H.E :

L'activité antibactérienne des huiles essentielles a été évaluée en utilisant la méthode de

diffusion sur disques.

1. Milieu de culture:

Dans notre travail nous avons utilisé comme milieu de culture les suivants:

� Pour l’obtention des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu Nutritif Broth

(NB) : 13g du milieu déshydraté fondue dans un 1L d'eau distillée.

� Pour tester l’activité biologique des souches bactériennes nous avons utilisé le milieu

gélose Muller Hinton Agar (MHA), Ce milieu est composer de:

� 2 g d'infusion de viande de bœuf.

� 17,5 g de peptone de caséine.

� 1,5 g d'amidon.

� 17 g d'agar.

38g de ces compositions sont fondues dans 1L d'eau distillée.

% Piégeage du radical DPPH = [(Acontrol – Atest) / Acontrol] × 100



2. Obtention des suspensions bactériennes :

La remise en culture des souches a été effectuée par ensemencement d’une colonie isolée à

partir des boites d’agar nutritif dans 5 ml du milieu NB. Le bouillon a ensuite été incubé 24 h à

37°C.

3. Méthodes de diffusion sur disques : La méthode de diffusion sur disque est utilisée comme test pour une détermination

qualitative de l’activité antibactérienne du H.E de Laurus nobilis. Après l’obtention des souches

bactériennes 100µl de la suspension bactérienne de chaque souche d’intérêt a été inoculé à la

surface d’une boîte de gélose de Muller Hinton Agar (MHA) à l’aide d’un étaloir de façon à avoir

une croissance répartie de façon homogène sur toute la boîte. Des disques stériles de papier filtre

ont été imprégné avec 15µl du H.E et ensuite placés à l’aide d’une pince stérile à la surface des

boîtes de pétri de MHA préalablement ensemencée avec les microorganismes. Les boîtes de Pétri

ont été conservées à 4°C pendant 20min pour permettre la diffusion des huiles essentielles. Elles

sont ensuite incubées à 37°C pendant 18 à 24 h sauf pour les boîtes inoculées.

Les diamètres des zones d'inhibition résultants ont été mesurés en mm. Les tests ont été

effectués en double. Les résultats sont exprimés en moyenne de deux déterminations (+/-) écart

type.

Figure 8 : Diffusion sur disques


Disque Imbibé par

H.E

Zone d’inhibition

Croissance bactérienne


Chapitre 3

Résultats et Discussion

I. L’enquête :

� Fiches d’information des herboristes :

Durant la période de l’enquête, on a effectué un tour de plusieurs herboristes de la région

Tanger- Tétouan et on a organisé les informations sous forme de fiches. Elles sont représentées

présentées comme suit :

Herboriste Rass Msalla

Nom Type/origine Usage Fournisseur Mode de

préparation Prix/ Type

d'emballage

La plus commer-cialisée

Plantes

Erica Arbustive/ De forêt

Médicinale Bio-vert (ste) Infusion

Décoction/Cru -------- ⁺

Pin Arbre/ De forêt Médicinale Bio-vert (ste) -------- -------- --------

Laurier noble Arbustive Médicinale/ Alimentaire

Bio-vert (ste) Décoction/

Cuit -------- --------

Extrait / Capsules

Erica -------- Médicinale Bio-vert (ste) -------- 90dh/boite des capsules ⁺⁺

H.E Pin -------- Médicinale /

Cosmétique Bio-vert (ste) -------- 10 ml ⁺

Laurier noble -------- Médicinale Bio-vert (ste) -------- 10 ml

H.Végétale Laurier noble -------- Médicinale Bio-vert (ste)

-------- 10 ml ⁺

Les huiles les plus commercialisés

Huile d’argan, huile du ricin, huile d'amande

Meilleurs clients Jeunes femmes

La distillation chez l'herboriste NON



Herboriste Marrakech

Herboriste Centre Yasmina



Her

boris

te L

alla

Cha

fia



Her

boris

te K

enfa

oui

Her

boris

te T

radi

tionn

el



Résultats et Discussion H

erbo

riste

Lao

un d

e T

etou

an



Herboriste Centre Omar

1. Commentaires :

On a remarqué qu’il existe une grande différence des prix des plantes médicinales d’un

herboriste traditionnel comme ceux que l’on trouve dans les quartiers populaires et ceux qui se

vendent par des herboristes cultivés.

La qualité de ces plantes intervient dans les prix ainsi que l’aspect du lieu par exemple

chez un herboriste moderne on s’aperçoit que les plantes sont conservées dans des boites fermées

par contre chez les herboristes traditionnels, ces plantes sont exposées à l’air et à la poussière ce

qui altère la qualité de ces plantes.

2. Remarques :

On remarque que les prix sont différents même d’un herboriste cultivés à un autre, par

exemple, chez l’herboriste Rass Msalla le prix des Capsules de la plante Erica est de 90dh par

contre chez l’herboristerie Laoun le prix varie de 100 à 120dh.

Pour les huiles, on note que les prix de Le thym et de la camomille sont chers chez certains

herboristes, par contre les autres types des huiles sont presque de même prix qui ne sont pas très

chers.

D’un point de vue régional, on a remarqué que la ville de Casablanca constitue la source

principale des fournitures des plantes médicinales et de leurs produits dérivés, alors que dans la

région Tanger-Tétouan, on trouve rarement un herboriste qui utilise ses plantes.

On note aussi que la plante sèche reste la forme la plus commercialisé malgré la présence

des autres dérivés.

Nom Type/Origine Usage Fournisseur

Mode de préparation

Prix / Type d'emballage

Vérification de la qualité

Partie utilisées

Plantes Romarin

Errachidia/ Nord

Thérapeutique/ Cosmétique -------- -------- --------

Couleur --------

Sauge Arbustive/ Spontanée

Cosmétique/ Alimentaire

-------- Infusion/ Tisane

-------- Tige

H.E Romarin -------- Thérapeutique -------- -------- --------

--------

Sauge -------- Cosmétique -------- -------- -------- --------

Poudre Romarin

Meilleurs client Jeunes femmes



II. Taux d’humidité et rendement en huiles essentielles :

1. Rendement en huile essentielle :

Le rendement moyen de l’huile essentielle, obtenu à partir de la plante Laurus nobilis est

exprimé en 1000 ml de distillat pour 100g de matière sèche, exprimé en pourcentage, est de :

0,66 ±0,11 %

Par comparaison du rendement en H.E obtenu pour cette plante par rapport à un autre

résultat cité dans la littérature scientifique : (OUIBRAHIM et al., 2015), ont obtenu un rendement

en H.E de L.nobilis de 0,71%. Ce rendement s’avère en concordance avec le résultat obtenu par

notre plante {45}. Cependant, d’après (Haddouchi et al., 2009), ont trouvé un rendement de 1,2%

{46}.

Cette différence en matière de rendement en H.E de Laurus nobilis, pourrait être due à la

forte humidité qui caractérise la région de Moulay Abdeslam Il sachant que les rendements

maximaux sont obtenus par temps sec, elle pourrait aussi être due à la période de récolte et la

méthode d’extraction employée. Ce sont des facteurs entre autres qui peuvent avoir un impact

direct sur le rendement en huile essentielle.

2. Taux d’humidité :

Les résultats obtenus ont révélé un taux d‘humidité important compris entre 39% et 51%,

cela signifie que approximativement la moitié ou moins de la moitié du poids frais de la plante est

constituée par l’eau.

Les feuilles du laurier montrent la grande teneur en eau 51%, c'est-à-dire la moitié du poids

frais, respectivement la plante totale avec une teneur de 47%, par contre les tiges du laurier ne

présente qu’une teneur de 38%.



49%

51%

Feuilles

38

Figure 9 : Teneur

III. Indices physico-c

Les résultats des propriété

l’huile essentielle extraite de la pl

Tableau 4 : Résultats de

H.E Aspect Couleur

Laurus nobilis Liquide mobile limpide

Jaune très pâle

GIE VEGETALE

9%Ms

Eau 47%

Plante tot

62%38%

Tiges

MS

Eau

eur en eau des trois différentes parties de la pla

chimiques :

iétés physico-chimiques et les caractéristiques

plante sont regroupés dans le Tableau 4.

de la détermination des indices physico-chimiq

Odeur pH Indice d’acide r

aromatique épicée

5.37 0,561mg

KOH/1gd’H.E (°.


Page 29

53%

totale

MS

Eau

plante.

es organoleptiques de

iques des H.E

Pouvoir rotatoire

Indice de réfraction

-21,66 (°.cm/g.dm)

1,476


Les résultats du Tableau 4 indiquent que les H.E de L.nobilis est liquide, de couleur jaune

très pâle aromatique, ayant un pouvoir rotatoire de -21,66°.cm/g.dm et un indice de réfraction de

1,476.

Selon Afnor (2000) les huiles essentielles sont habituellement liquides odorants à

température ambiante, volatiles, et légèrement acide, ce qui les différencie des autres huiles

végétales. Elles sont plus ou moins colorées, le pouvoir rotatoire du Laurus nobilis varie du (-10) à

(-22).

Les résultats des caractéristiques organoleptiques, de pouvoir rotatoire, d’indice de

réfraction et de pH, obtenus pour l’H.E Laurus nobilis sont donc conforme à celle édictées par la

norme d’Afnor (2000).

L'indice d'acide indique le comportement de la quantité des acides libres présents dans

l'H.E. Il peut aussi nous renseigner sur la susceptibilité de l'huile à subir des altérations,

notamment l'oxydation. D'après les résultats du Tableau 4 : l'H.E de L.nobilis a présenté

respectivement une valeur égale à 0,561mgKOH/1g d'H.E. Cette valeur obtenue, est très inférieure

par rapport à celles préconisées par la norme d’Afnor (2000), qui est de l'ordre de 4,5 à

6,5mgKOH/1g.

L’écart remarqué pour la valeur de l'indice d'acide de H.E de L.nobilis par rapport aux

valeurs promulguées par la norme d’Afnor (2000), peut être expliqué par la méthode de

conservation de plante, sa durée de stockage, la composition chimique de sa H.E, des éventuelles

réactions phytochimiques lors de l'hydrodistillation, … etc. Ce sont des facteurs entre autres qui

peuvent avoir des influences sur le comportement et les caractéristiques des H.E.

En effet, un stockage de la plante pendant 24 heures suffit pour induire des changements

sensibles de composition d'H.E {47}. Au cours de l'hydrodistillation, l'eau, l'acidité et la

température peuvent induire des réactions : d'hydrolyses, hydratations et cyclisation, mais aussi

réarrangements, isomérisations, oxydations, … etc. et ce d'autant plus que la distillation est longue

et le pH acide {48}.

Toutes ces observations montrent les difficultés que l'on peut rencontrer lors de la

préparation et de la conservation des huiles essentielles.



La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais non

suffisante pour caractériser les huiles essentielles. Il est donc nécessaire de la compléter par des

analyses chromatographiques « CG/SM ». Ces dernières sont souvent utilisées comme moyen

analytique complémentaire pour l'analyse structurale des substances volatiles, elles ont été

employées pour identifier qualitativement l'H.E de Laurus nobilis.

IV. Analyse de la composition chimique de l’huile essentielle :

La composition chimique de l’huile essentielle de Laurus nobilis a été déterminée par la

chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) conformément

aux indices de Kovats et en comparant avec les données de la bibliothèque NIST.

Le Tableau 5 représente les différents constituants chimiques identifiés de l’H.E. Les

composés fondamentaux et majoritaires apparaissent en gras.

L’analyse de l’H.E a permis de mettre en évidence 25 substances dominées par la présence

de 1,8 Cineole (42%),Caryophyllene (11,74%),α -Terpinyl acétate (9,98%), ce qui représente

89,42% de l’huile.

Par comparaison de la composition chimique de notre échantillon à celle décrite par :

(OUIBRAHIM et al., 2015) {45}, pour l’H.E originaire de l’Algérie, on constate que le 1,8

Cineole reste toujours le constituant majoritaire avec une teneur de 35,31%. Par ailleurs, cet

échantillon ressort une teneur considérable en β-Linalol 22,52%, et en Camphene 7,37%.

Nos résultats concordent aussi avec ceux rapportés par (Mediouni Ben Jemâa et al., 2012)

{39}, qui ont démontré que les principal composé commun des H.Es de laurier provenant de

l’Algérie, de la Tunisie et du Maroc est le 1,8-Cinéole. (Marzouki et al., 2009) {40} ont

également signalé que les H.Es de L. nobilis cultivé en Tunisie et en Algérie n'ont pas révélé de

différences dans leur composition chimique. En outre, (Ozcan et Chalchat, 2005) {41} soulignent

que la variation quantitative et qualitative des huiles essentielles de L. nobilis concerne

principalement les composés mineurs. La composition chimique des H.Es est influencée par des

facteurs géographiques, bioclimatiques ainsi qu’aux conditions de récolte et de stockage de la

plante {42,43}.



Tableau 5 : Composition chimique (en %) des différents composés identifiés l’H.E étudiée

Composants Temps de rétention(min) Abondance(%)

α-Pinene 7,65

2,59

Camphene 8,05

0,24

Sabinene 8,70

4,64

β -Pinene 8,82

1,99

α -Phellandrene 9,11

0,32

3-Carene 9,71

0,53

p-cymene 9,88

0,40

Limonene 10,13

0,19

1,8-Cineole 10,38

42

cis-Sabinene hydrate 11,08

0,79

Linalool 12,20

0,72

Terpinen-4-ol 14,23

0,58

α -Terpineol 14,53

1,73

Myrtenol

14,91

2,69

δ -Elemene

18,31

0,25

α -Terpinyl acetate 19,20

9,98

Eugenol 19,44

3,63

Methyl eugenol

20,33

0,64

Caryophyllene

20,60

11,74

trans-α -Bergamotene 21,12

0,36



β -Elemol 23,60

0,31

Spathulenol 24,27

1,83

β -Eudesmol 26,19

0,20

α -Eudesmol 26,35

0,23

Cis-Farnesol 26,71

0,83

89,42%

V. Activité anti-oxydante :

On remarque expérimentalement, le changement de couleur de la solution du DPPH

de la coloration violet intense à une coloration jeune pâle, cela montre déjà la présence d’une

activité anti-oxydante.

Notre série de dilution est analysé par un spectrophotomètre à une longueur d’onde de

517nm, les résultats sont présentés dans le Tableau 6.

Tableau 6: L’activité anti-oxydante de l’H.E

Concentration (mg/l)

L’absorbance en 517nm

% Piégeage du radical DPPH Ecartype

1000 0,257 87,98 % 0,08 500 0,618 71,10 % 0,03 250 1,21 43,43 % 0,04 100 1,71 20,05 % 0,06

Tableau 7: L’activité anti-oxydante de la Vitamine C

Concentration (Mg/L)

L’absorbance en 517nm

% Piégeage du radical DPPH

Ecartype

1000 0,083 96,11% 0,0026 500 0,086 95,97% 0,0037 250 0,095 95,55% 0,0043 100 0,097 95,46% 0,0049



Les résultats du Table

radical DPPH s’accentue avec l

comparaison, La vitamine C, ou p

D’ailleurs, l’activité an

vitamine C pour toutes les conce

500Mg/L en huile essentielle le %

Pour toutes les concen

antioxydant élevé comparé à cel

1000Mg/L.

Figure 10 : Activité antioxydavitamine C à d

VI . Activité antibactérie

La méthode de diffusion

pouvoir antibactérien d’huile esse

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

100,00%

120,00%

1000

Pié

geag

e du

rad

ical

DP

PH

%

GIE VEGETALE

bleau 6 et Tableau 7, montre que le pourcent

c l’augmentation de la concentration soit po

u pour l’huile essentielle.

anti-oxydante de l’H.E de Laurus nobilis est in

ncentrations utilisées. Or, pour les concentratio

% de piégeage du radical DPPH dépasse 87%

centrations utilisées, La vitamine C, s’impos

celle de L’H.E, ce pouvoir est de 96,11% à u

ydante de l’huile essentielle de L.nobilis compa à des concentrations allant de 100 à 1000 Mg/L

rienne :

on des disques en agar nous a permis de me

ssentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis quatre so

Concentration (Mg/l)

1000 500 250 100

Concentration (Mg/L)

Laurus

Vitami


Page 34

entage de piégeage du

pour l’antioxydant de

inférieure à celui de la

ations de 1000Mg/L et

%.

pose avec un pouvoir

à une concentration de

parée à celui de la g/L

mettre en évidence le

souches bactériennes.

Laurus nobilis

Vitamine C


D’après la Figure 11 nous constatons que l’huile essentielle du Laurus nobilis a présenté

une certaine activité modérée dont les diamètres des zones d’inhibitions n’ont dépassé 24,45 mm.

Figure 11 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches testées.

Les résultats du test de sensibilité microbienne à l’huile essentielle sont regroupés dans le

Tableau 9. Les valeurs indiquées sont les moyennes de deux mesures.

Tableau 9 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du L. nobilis sur les souches testées.

Les souches testées Diamètres de la zone d’inhibition (mm)

Sensibilité à l’huile essentielle de Laurus nobilis L

Escherichia coli 24,45 ± 3,18 +


12,6 ± 3,67 +


18,9 ± 0,98 +


9,6 ± 0 -

(+) sensible, (-) résistant


0

5

10

15

20

25

30

Les souches testées

Dia

mè

tre

de

zo

ne

d'i

nh

ibit

ion

(m

m)

Escherichia coli





Tableau 8 : Effet inhibiteur d’huile essentielle du Laurus nobilis L sur les souches bactériennes testées.

Escherichia coli Salmonella Seftenberg

Staphylococcus aureus Enterococcus faecium



A partir des résultats obtenus, on peut observer le pouvoir antibactérienne d’huile

essentielle du Laurus nobilis L le plus élevé a été contre Escherichia coli dont le diamètre,

d’environ 24,45 ± 3,18mm, les autres souches Staphylococcus aureus, Salmonella Seftenberg,

Enterococcus faecium, ont des diamètres des zones d’inhibitions moins de 19 mm, 18,9 mm ; 12,6

mm et 9,6 mm respectivement. Il est difficile de comparer les résultats obtenus dans les différentes

études sur l’effet antimicrobien des huiles essentielles en raison de la diversité des méthodes et des

conditions appliquées.



Conclusion et perspectives

Dans le présent travail, on s’est intéressé à la valorisation des plantes médicinales et

aromatiques au Nord du Maroc, plantes très utilisées en médecine traditionnelle, et qui sont déjà

exploitées par la population du Nord.

Dans une première partie, on a réalisé une enquête sur les herboristes de la ville de Tanger

et Tétouan, et comme résultat on a constaté que la majorité d’entre eux n’utilisent pas les plantes

de la région malgré sa richesse en plantes médicinales et aromatiques.

Dans une deuxième partie, on a réalisé une étude des indices physico-chimiques, de

composition chimique, de pouvoir antioxydant et pouvoir antibactérien du produit obtenu, à partir

de l'extraction par hydrodistillation de Laurus nobilis cueilli de la région de Moulay Abdeslam.

� L’étude quantitative a révélé que l’huile essentielle obtenue à partir de L.nobilis représente

0,66 ±0,11%.

� L’étude qualitative par CG/SM, de constituants chimiques a permis l’identification de 25

composés dominés par le 1,8-cineole 42%.

� L’étude de l’activité antioxydante a révélé que l’extrait méthanolique de l’huile essentielle

de Laurus nobilis est actif comme piégeur du radical DPPH.

� L’étude de l’activité antibactérienne de cette huile essentielle de laurier sur des souches de

bactéries gram positif et gram négatif montre que ces huiles possèdent une activité

antibactérienne surtout contre le E.coli et Staphylococcus aureus.

En terme de perspective et à la suite des résultats obtenues, il serait intéressent de mener une suite

plus détaillée de l’enquête dans les autres villes de la région du Nord de Maroc, en vue de bien

évaluer l’état des PAM d’origine du Nord.

Les résultats de ce travail peuvent être complétés aussi par :

� La réalisation des tests antibactériens sur une large gamme de microorganismes ;

� L’étude de l’effet insecticide et antifongique de l’huile essentielle de L.nobilis ;

� L’étude de l’effet de la zone géographique, la période de récolte et la méthode de

conservation sur le rendement et la composition chimique de l’H.E ;

� L’extraction de laurier à l’aide des solvants organiques, pour but de la comparaison de

différentes activités biologiques de ces extraits à celles obtenues par hydro-distillation.

Conclusion et perspectives


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Annexes

Annexe 1 : Questionnaire pour l’enquête

Annexes


Annexes


Annexe 2 : Chromatogramme de l'huile essentielle de Laurus nobilis.

RT: 0,00 - 38,80 SM: 7B

0 5 10 15 20 25 30 35Time (min)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rel

ativ

e A

bund

ance

10,38

20,60

8,70

14,91 25,003,14 5,72 30,41 34,87

NL:2,20E8TIC MS laurier

Annexes

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Etat et lieu des plantes aromatiques et médicinales chez les herboristes du Nord de Maroc et...

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