i,,,,,, , . ,.

'l ,'

t,,-"...

,, r:i:. f:lt r t'l ..

.1' ..

'.. ..'..:...łl'"...'. :. .'..''.l..]

'i'.PRACE ORYGTNATI{E

Zmiany potencjału proliferacyinego fibroblastÓwpochodząCych z polipÓw nosowych, w hodowlach

in.vitro, pod wpływem pochodnych wit. DThe change of proliferative potential of fibroblasts derived

of nasal polyps in vitro cultured,influenced by derivatives vitamins D

Be ata Rostkowska-N ado]ska1, D ariusz Kuśmierz2, Małgorz ata Kap ral3,M atgorz ata Lato chaz, Le ongina Świqtkowskaa, Marcin Frqcz ek1

lKatedra i Klinika otolar]mgologii Akademii Medycznejwe WrocławiuKierownik: prof. T Kręcicki

zZakład Biologii KomÓrki, Wydział Farmaceutyczny z Oddzialem Medycyny LaboratoryjnejŚĘskiej Akademii Medycznej w Katowicach

Kierownik: dr n. biol. M. Latocha3lGtedra i Zakład Biochemii, Wydział Farmaceutyczny z oddziatem Medycyny Laboratoryjnej

Śtąskiej Akademii Medycznej w KatowicachKierownik: dr hab. n. med. L. Węglatz, prof. nadzw. SAM

aZakład Statystyki, Wydział Farmaceutylzny z oddziałem Medycyny LaboratoryjnejŚląskiej Akademii Medycznej w Katowicach

Kierownik: dr n. med. K. Kimek

Summar5rIntroduction. Recurrent polyposis in the same patient resulting in the necessity of repeated surgeries forced to searchfor new pharmacological therapeutic methods. At present, locally acting glycocorticosteroids have the greatest value inthe treatment of nasal polyposis. PoĘs grow is connected with inflammation process and proliferation of fibroblasts.Objective. An evaluation of calcitriol and tacalcitol influence on proliferation of fibroblasts extracted from nasal polyps.Material consisted of g tissue samples coming from nasal polyps sampled during polypectomies. The testing was per-

formed on tle polyps fibroblasts after the sixth passage after the primary culture was established. Tbree days after the cul-ture was started the cells were poured with nutrient medium without serum added and afŁer further 24 hours was replacedby nutrient medium with takalcitol and calcitriol in the defined concentrations. The expression of the genes coding histoneH3 was evaluated with the use of RT-PCR technique. Results. Tacalcitiol and calcitriol in vitro decrease proliferation offibroblasts sampled from nasal polyps. Inhibition is most effective for the concentration of 10-4M. Tacalcitiol and calcitriolalso inhibit level of histone H3 gene expression. Conclusion. Experimental data suggest tacalcitiol to be more effective tothe same concentration. hesent studies may indicate the direction of further investigation in the potential pharmacologicaltreatment on nasal polyps.

Hasła indeksowe: polipy nosa, Calcitriol, Tacalcitol, proliferacja, fibroblasty, mRNA H3

Key words: nasal poĘs, Calcitriol, Tacalcitol, proliferation, fibroblasts, mRNA H3

otolaryngol Po| 2oo7; LXI (5): 661-667 @ zoo7 by Polskie Towarzystwo otorynolaryngolog w - ChirurgÓw Głowy i Szyi

Ąutorzy nie zgta szająkonfliktu interesÓW.

Otolaryngologia Polska 2OO7,LXl, 5

s

+

661

B. Rostkowska-Nado{ska i inni

WSTĘP

.Frzyc Zyrra powstawania polipÓw nosa nie jestpoznalla. obecnie przyjmuje się, iz proces ten jestwynikiem zlozonej reakcji zapalnej [1gl . Leczeniew tej jednostce chorobowej, W większości ptzy-padkÓw, sprowadza się do postępowania chirur-gicznego oraz do stosowania środkÓw farmakolo-gicznych o dziataniu przeciwzapalnym. Obecnienajwiększe zastosowanie W terapii polipÓw mająsteroidy o działaniu miejscowym [15]. Ich działa-nie jest wielopoziomowe: Z jednej strony hamująone wzrost samych polipÓw, a z drugiej działaiqprzeciwzapalnie. ograniczajq one ilość komÓrekzapalnych, hamują ich aktywność, zmniejszają prze.puszczalność naczyfi. krwionośnych, a W związkuz tym zmniejszaiq rÓwniez obrzęk błony śluzowej.Ze względu na powTacający charakter schorze-nia, jak i efekty uboczne steroidÓW nadal trwająposzukiwania nowych substancji i lekÓw, ktÓrychwtaściwości przeciwzapalne i antyproliferacyjnepoz\ryoliłyby na zastosowanie ich w terapii polipÓwnosa schorzenia 14, L71. Przeprowadzone w ostat-nich latach bad.ania wykazaty, że niektÓre analogiwitaminy D, obok regulacyjnego działania na gospo-darkę wapniowo-fosforanowq organizmu, wykazująrÓwniez wpływ na przebieg cyklu komÓrkowego.obserwowane właściwości mogą byĆ wynikiernzarÓwno oglaniczenia podziałÓw komÓrkowych, jakr/Iub indukcji procesu rÓznicowania oraz śmiercikomÓrkowej (apoptotoza lub nekroza) [6, 14, ?"7|.

Występowanie opisanych efektÓw zaLeży od typukomÓrek oraz od zastosowanej pochodnej witaminyD. Stwierdzono m.in. wptyw '!,,25 dihydrocholekal-cyferolu na komÓrki układu immunologicznego 17,20], przeciwnowotworowe działanie,l',2,4-dihydrok-sy-22.ene-24-cyk1opropYl.Ds [27I, stymulację rÓzni.Cowania komÓrek nowotworowych przez pochodnq2K156718 [10], hamowanie procesu angiogenezyprzez analog EB 1089 t1l Czy przyspieszony podztał'i rÓznicowanie kornÓrek naskÓrka pod wptywem'1.,24-dihydrokry*itaminy DB [5, 2L, 25I. Obecnietrwają badania nad otrzymaniem pochodnej witami-nY Ds, ktÓra przy stosunkowo niewielkim wpływiena gospodarkę wapniowo-fosforanowq organizmuwykazywataby silne dziatanie antyproliferacyjneW stosunku do wybranych komÓrek. obiecująCy wtym zakresie wydaje się Tacalcitol (,l',z4-dihydrok.sywitamina De), stosowany obecnie w prepara-tach przeciwtuszczycowych [9, 141. Ogranicza onnadmiernq proliferację keratynocytÓw, ale rÓwniezhamuje wytwarzanie cytokin i zmniejsza liczbę

pobudzonych limfocyŁÓw T przez Co ogranicza reak.cje zapalne i immunologiczne w organizmie [21].

łVedtug dotychczasowych badafi, powstawaniepolipÓw Zwu4z,ane jest 7, procesem zapalnym [1g],a proliferacja .tibroblastÓw, ktÓre są źtÓdtem rÓzno-rodnych mediatorÓw zapalenia, moze petnić istotnąrolę w ich powstawaniu.

CEt PRACY

Celem przeprowadzonych badafi byta ocena iporÓwnanie właściwości antyproliferacyjnychpochodnych witaminy D3 (Calcitriolu i Thcalcitolu)w odniesieniu do fibroblastÓw pochodzqcych z poli-pÓw nosa w hodowlach rn uitro.

IVIATERaŁ I METODY

Materiał do badafr stanowity hodowle komÓrek inuitro Wyprowadzone z polipÓw nosowych. WycinkipolipÓw pobrano od 9 pacjentÓw (6 męzczyzn i 3

kobiety), w wieku 29-7 3 lat, leczonych operacyjnie wKlinice Otolaryngologii AM we Vtlroctawiu. Paciencinie przyjmowali zadnych lekÓw kilka miesięcyprzed zabiegiem. Na prowadzone badania uzyskanozgodę lokalnej Komisji Bioetycznej (Nr. 1,1"7512002).

W przeprowadzonych badaniach histopatologrcz-nych pobranych wycinkÓw stwierdzono 4 polipyneutrofilowe i 5 polipÓw eozynofilowych. Polipypotraktowano jako jedną grupę' Pobrane tkankiodkazano betady[ą, płukano PBS, rozdrabnianomechanicznie, a następnie traktoulano tkankę toz-tworem 0,25% trypsyny z EDTA (Al&ich-Sigma).Tak uzyskaną zawiesinę komÓrek umies zczarro Wpozywce RPMI 1640 (Biomed-Lublin) z dodatkiem.!"oo/o FBS i antybiotykÓw fpenicylina, streptomycy-na) (Atdrich-Sigma). Hodowle prowadzono w tem-peraturze 3 7oC, przy stałym dopływie 5%o Coz i sta-tej wilgotności. Badania wykonywano na komÓrkachz IV.u pasazu hodowli pierwotnej. W doświadcze-niach zastosowano preparaty: Calcitriol, Tacalcitolin subs (Instytut Farmaceutyczny Warszawa}, ktÓrebyły dodawane do pozywki hodowlanej w stęzeniu10.3-].0-gM. Ilość komÓrek W hodowlach określanopo 24,48 i 72',h od dodania prepalatÓw do medium.KomÓrki na ptytkach hodowlanych przemywanobuforem fosforanowyrn (PBS), utrwalano metanolemi zalnrazano na 24 godz. W temp. -7BoC, a następ-nie wykonywano oznaczenia iIości komÓrek przywykorzystaniu zestawu CyQUANT Cell Proliferation

662 Otofaryngologia Polska 2AO7 , LXl, 5

Zmiany potencja|u proliferacyjnego fibrob|astÓw pochodzących z po|ipów nosowych, w hodowlach in vitro, pod wp|ywem pochodnych wit. D

l|ośc komÓrek w hodowli poddanej dzialaniu Calcitrio|u pnez24,48i72h l|oŚc komorek w hodow|i poddanej dziataniu Tacalcito|u przez 24,48.72h3000

200

o(3ox

-:<q)

cEo

-)<<-).(/)o

OOOO

xvc)-oEoJ<-c)'U'o

2500

2000

1 500

'1000

*]\\_ Y

+24n+4Bh-s72h

3000

1 500

't000

+24n-r- 4Bh

+72n

500

0

Ryc. 1. Za|eżnośĆ i|oŚci komÓrek w hodow|i od stężenia pochodnych witaminy D3 p0 24, 48,72h od dodania: A) Ca|cifio|u B) Taca|citolu

kontrola 10-9 10-B 10-7 'l 0-6 10-5 10-4 10-3

stęzenie Ca|citrio|u [M]

Assay Kit fMolecular Probe). Pomiary wykonywanoprzy uzyciu czytnika WALLAC 1.42A VICTOR2 TM(Perkin Elmer). Grupę kontrol''q stanowiły hodowlekomÓrkowe przed podaniem badanych substancji.

Przeprowadzono rÓwniez analizę ekspresji genukodująCego histon H3 (jako markera proliferacjibadanych komÓrek) W postaci transkryptu .mRhJAH3. mRNA H3 oznaczano w hodowlach kontrol-nych i traktowanych pochodnymi witaminy D3 ostęzeniu 10.4M po 24h inkubacji. Catkowite RNAizolowano z hodowli komÓrek polipÓw nosa przyuzyciu odczynnika TRIZOL@ (InvitrogenJ , zgodnie zzaleceniami producenta. Stęzenie RIrIA Wyznaczonospektrofotometrycznie z zastosowaniem spektrofo-tornetru GeneQuant II (Pharmacia). Do detekcji eks-presji genÓw histonu H3 wykorzystano specyficznestartery [18]: H3 starter sensowny: 5'-TgCCATTTCAgCgCCTggTg-3' starter antysensowny: S'-CACggATACSACSCgCAAgC-3'. fako kontrole endogenne zasto-sowano B-aktynę (starter sensowny: 5'.TCACCCACACTgTgCCCATCTACgA-3', starter antysensowny 5'-CASCggAACCgCTCATTgCCAATgg-3') i GAPDH (star-ter Sensowny: 5'-&Ł\ggT8AAggTCggAgTC-3', star.ter antysensowny 5'-gAAgATggTgATgggATTC-3').Liczbę czqsteczek mRNA histonu H3 oraz B-aktynyi GAPDH Wyznaczano technikq RT-QPCR w czasierzeczryistym z zastosowaniem detektora sekwen-cji DNA Engine Opicon'* (MI Research, USAJ przyuzyciu QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix(Qiagen). Warunki temperaturowe RT-PCR: 50"C- 30 minut, 95oC - 15 minut oraz45 cykli 94oC - 15sekund, 60oC 30 sekund. Specyticzność RT-PCRoceniono na podstawie temperatury meltingu dlakazdego z amplimerÓw. Wyniki ilościowei analizyprzeliczono na pg catkorruitego RNA.

kontrola 10-9 10-B 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3

stęzenie Tacalcito|u [M]

RyG. 2. Komorki nekrotyczne w hodowli traktowanei Calcitrio-Iem o stęZeniu 10.3M p0 24h inkubacji

Analizę statystyczną otrzymanych wynikÓw prze.prowadzono przy uzyciu programu Statistica 6.0.Miary statystyk opisowych zostaty wykonane dlawartości rzeczryistych (liczba kopii mRlrIA He/pugRI.IA). Dla celÓw porÓwnawczych uzyskane wyni-ki poddano transformacji logarytmicznej. W pracywykorzystano test t Z oddziel''ą analizą wariancji(test Cochrana-Coxa). Istotnie statystyczny poziomprzyięto dla p<0,05.

WYNIKI

ocena proliferacii komÓrek. Po inkubacji hodow-li Z Calcitriolem i Thcalcitolem przy stęzeniach10.5-10.3M zaobserwowano wyraźny spadek ilościkomÓrek (ryc.].). W prÓbie kontrolnej i ptzy stęze-

Otolaryngologia Polska 2OO7 , LXl, 5 663

B. Rostkowska-Nadolska i inni

A

*ffiS bp,ft## fop

ff,*l ,*B

Byc. 3. A' E|ektrotoregram przedstawiający rozdzia| produKow reakcji RT-OPCR w 6% żelu poliakrylamidowym barwionym meto.

dąsrebrową;ściezka 1_markerwie|kościDNApBR/Hae |||, ścieżka2-H3 (201 pz), ścieżka3-GAPDH (226pz), Ścieżka4_ B-aktyna (295 pz); B. Wykresy krzywych meltingu produktÓw reakcji BT-PCR

z,E.ct)i

CD

z,E.Eo-o

-:<(S

-(fNL)

=

Ryc. 4. Rozk|ad wartoŚci poziomu ekspresii genu kodu-

i4cego histon H3 w komÓrkach kontro|nych polipÓw nosa

oraz komorkach polipow nosa traktowanych Calcitriolem i

Tacalcito|em 0 stęZeniu 10.4 M

niach ponizej 10-5M po Czasie 48 i 72h' Wzrasta ilośćkomÓrek (w porÓwnaniu z ilościq po z4h), Zwi4zanejest to Z obecnością CzynnikÓw Wzrostow5rch llrr

dodawanej do pozywki surowicy i brakiem ujemne-go Wptyrnru badanych pochodnych w zakresie stęzefi10.5_10-9M. Ptzy stęzeniu 10-4 i 10-3M ilośĆ komÓ-rek w hodowlach po dtuzszym czasie inkubacji (48

i 72h) nie zmienia się. Barwienie hodor,vli btękitem

trypanu wykazat'a jednak, że W przypadku stęzenia10.3M spadek ilości komÓrek spowodowany jest ichśmiercią (ryc .2). W związku z tym do kolejnego etapubadafr - oceny aktywności transkrypcyinej genu H3,zostaty wybrane hodowle traktowane Calcitriolem iTacalcitolem o stęzeniu 10.4M i po 24tr inkubacji.

Ocena poziomu ekspresii mRNA tI3Aktywność transkrypcyjną genÓw kodujących

histon H3 wyznaczono metodą RT.QPCR W Cz'a-

sie Tzecz3rwistym. Specyficzność reakcji RT-PCRpotwierdzono eksperymentalnie technikq elektro-forezy w B% zelu poliakrylamidowym barwionymsolami srebra (ryc. 3. A) oraz na podstawie tempera-tur meltingu amplimerÓw (ryc. 3. B).

Poziom ekspresji genu kodujqCego histon H3 W

komÓrkach polipÓW nosa traktowanych Calcitriolemi Tacalcitolem wykazuie nizsze wartości W porÓw-naniu z komÓrkami hodowli kontrolnych. \M obuprzypadkach rÓznica jest bardzo TWysoCe istotna(p<0,0001) (ryc. 4). Wyniki aktywności transkryp-cyjnej H3 w grupie kontrolnej charakteryzują Się

zTuacznym ro zstępem wartości. D ziałanie C alcitriolupowoduje obnizenie poziomu ekspresji genu H3.otrzymane wyniki miesz Czą się w przedziale rÓw-nym 931.7 (tab. I). Analtza wariancii zlogarytmo-wanych wartości nie wykazata istotnej rÓznicy rnr

grupie kontrolnej (0,34) i w grupie traktowanejCalcitriolem (0,20) (p:0,3669). Dane uzyskane dlaproduktÓw ekspresji genu H3 po zastosowaniuThcalcitolu charakteryzujq się większą jednorodnoś-cią, a analiza statystyczna zlogarytmowanych war-tości wykazata istotnie rÓżr;;q wariancję (0,012) rłr

porÓwnaniu z komÓrkami kontrolnymi (p :0,0009),

f,#sfinfi

g#sss$

7##SS

#sss

tssss

rf,*s#$ss

r###

7#*

#ss

3$Sf,

- -lHsstg'tEt- rł t:y.-GE#E!E {J .{tl#

t Mediana

il: zsYo-TSTo

T, Min. Maks.

T

!

B.

664 Otolaryngologia Polska 2OO7, LXl, 5

Zmiany potencialu pro|iferacyjnego fibroblastów pochodzqcych z po|ipów nosowych, w hodow|ach in vitro, pod wp|ywem pochodnych wit. D

Tabe|a |' Rozktad wartoŚci |iczby

Irach traktowanych Calcitriolern i

Kontrola

Calcitriol

Tacalcitol

jak i w porÓwnaniu Z komÓrkami traktowanymiCalcitriolem (p : 0,0 1'21).

DYSKUSIA

Ze względu na posiadane właściwości antyproli-feracyjne aktywna postaĆ wit. D i jej analogi stały sięostatnio przedmiotem interdyscplinarnych badafiw dztedzinie biologii molekularnej, biochemii iimmunologii [3, 227. Zsyntetyzowanie analogÓwkalcytriolu, pozbawionych niekorzystych wtaściwo-ści kalcemicznych aktywnej formy wit. D, stworzyłonowe mozliwości potencjalnej farmakoterapii cho-rÓb zwi4zanych z nieprawidłowym wzrostem l rÓz-nicowaniem komÓrek. Iak wykazano' analogi wita.miny Ds: Thcalcitol i Calcitriol wpływają na regula-cję procesu proliferacii keratynocytÓW [3, 5, 20, 25],

ludzkich fibroblastÓw płucnych |z4), a takze fibro-blastÓw maziowych [26]. \M przedstawionej pracyoceniano wptyw obu pochodnych na proliferacjęfibroblastÓw otrz5rmanych z polipÓw nosa W Walun-kach in uitro. Z prowadzonych obserwacii wynika,ze zastosowanie Calcitriolu i Tacalcitolu jako suple-mentu pozywki hodowlanej o stęzeniach 10.5, 1o.4,

10.3M zrracznie ogranicza przyrost ilości komÓrek,ale stęzenie 10-3M powoduje ich śmierć. KrÓtki czasod zadziałania lekÓW w jakim obserwuje się śmierĆkomÓrek, jak rÓwniez ich morfologia wskazują, zejest to w duzym odsetku śmierĆ nekrotyczna [ryc.2). }'Iatomiast spadek ilości komÓrek w hodowlachprzy stęzeniu ].0.5, 10-4M Calcitriolu i TacalcitoluW odniesieniu do kontroli, przy rÓwnoczesnymbraku martwych komÓrek, jest najprawdopodobniejwynikiem ujemnego wptywu badanych lekÓw naprzebieg samego cyklu komÓrkowego i ograniczeniapotencjatu proliferacyjnego fibroblastÓw.

Do oceny proliferacji komÓrek wykorzystywaneSą obecnie rÓzne molekularne markery określającerozrost tkanek' Stosowane sq biatka związane zkomÓrkow4 proliferacją, takie jak białko jądroweKi-67, obecne w proliferujqcych komÓrkach [13]'PCI{A (Froliferating Cell Nuclear Antigen) t8l czyantygeny p105 i p34 U\ 16J. Powszechnie uznajesię tez , ze takimi markerami mogą byĆ rÓwniez biat-

kopii mRNA H3 w prze|iczeniu na pg RNA w kontro|nych komÓrkach po|ipÓw nosa oraz komÓr-

Tacalcitolemii,trnai

507458931 7

27 48

ka histonÓW wchodzĄce w sktad nukleosomÓw. Majqone wptyw na wtaściwości strukturalne chromat1myi odgrywają kluczową ro1ę \M procesie replikacji itranskrypcji DI{A |2, 11]. Synteza białek histono-wych w komÓrkach ściśle Zwuqzana z replikacjąmateriatu genetycznego, popr zedza kazdy podziatkomÓrki. Informacje dotycząCe ekspresji genÓwkodujących te białka są więc istotnym wskaźnikiemproliferacji komÓrkowej. Najczęściej stosowanymimarkerami potencjału proliferacyjnego komÓrek sq

transkrypty (mRNA) genÓw histonu H1 i H3 |2,1'1,1B]. Wykorzystywane sq one W ploliferacji komÓreknowotworowych, ale tez w nadmiernej proliferacjikomÓrek bez cech atypii [11]. Badania Smitha i wsp.dotyczqcych proliferacj i keratynocfi Ów wyka zały, tżH3 i Ki-67 mogq byĆ markerami wzaje.rnnie się uzu.petniającymi [23].

W prezentowanej pracy analizowano poziom eks-presji genu histonu H3, chcqc wykazaĆ, ze ujemnywptyw badanych analogÓw witarniny D3 na proli-ferację w hodowlach komÓrek z polipÓw nosa mozemieć rÓwniez swoje odbicie w ilości transkryptÓwhistonu H3 ' W dostępnych bazach danych nie rna

doniesiefl na temat wpływu analogÓw witaminy Dna fibroblasty polipÓw nosa i ich proliferację. W5mikiZapnezentowane w pracy wykazaty, Ze zarÓwnoCalcitriol, jak i Thcalcitol w stęzeniu 10.4M wptywa-jąc na obnizenie potencjału proliferacyjnego hodow-li komÓrek z polipÓw nosa hamujq rÓwniez ekspresjęgenu histonu H3 na poziomie transkrypcji.

IJzyskane dane wskazujq na korzystniejsze dzia.tanie Tacalcitolu stosowanego w celu ograni cze-nia proliferacji fibroblastÓw polipÓw nosowych W

hodowlach ln uitro,Iego obecnośĆ W pozywce Spo-

wodowała nie tylko bardzo istotne obnizenie pozio.mu ekspresji genu kodującego histon H3 (p{0,0001)'ale rÓwnlez uzyskanie większej jednorodności efek.tÓw terapii w porÓwnaniu z Calcitriolem.

l^/NIOSKI

ZarÓvvno Calcitriol, jak i Thca]citol wykazują hamu-jqcy wptyw na plolifercję komÓrek z polipÓw nosa Whodowlach in uitro. Na podstawie ilości komÓrek W

Otolaryngologia Polska 2007, LXl, 5 665

B. Rostkowska-Nadolska i inni

hodowli po zadziałaniu obu badanych analogÓw wita-miny D3, jak rÓvrniez analizy zmian poziomu mRI{AH3 wykazano silniejsze hamujqce proliferację - dziata-nie Tacalcitolu. hzedstawione w tej pracy vrrypiki doty-CZ4CI transkryptu genu histonu H3 sugerują, ze mRNAH3 moze być dobr5rm markerem potencjału prolifera-cyjnego fibroblastÓw pochodzqcych z polipÓw nosa.obecne badania mogą stanowiĆ kierunek poszukiwar1w potencjalnej farmakoterapii polipÓw nosowych.

plŚnłlENNICTWo

1. Abe J, Nakano T, Nishii Y i wsp. A novel vitamin D3 analog,

22-oxa-t,ZS-dihydroxyvitamin D3, inhibits the growth of

human breast cancer in vitro and in vivo without causing

hypercalcemia. Endocrinology. 1991 ; 1'29: 832-837

Z. Albig W, Trappe R, Kadalinou E i wsp. The human HZA and

FrZB histone gene complement. Biol Chem. 1999; 380: 7-1,8.

3. Arroyo CM, Kan RK, Burman DL i wsp. Regulation of

lalpha, zs-dihydroxyvitamin D- on interleukin-B and inter-

leukin-B induced by sulfur mustard (HD) on human skin cells.

Pharmacol Toxicol. 2003; 92: 204-213.

.Bruzzese N, Sica G, Iacopino F i wsp. Growth inhibition of

fibroblasts from nasal polyps and normal skin by lysine ace-

tysalcylate. Allergy 1998; 53: 431-434.

5. Castelijns Ę Gerritsen M]n Van V1ijmen.\'Villems IMI i wsp.

Froliferation is the main epidermal target in the treatment of

psoriatic plaques with once daily application of Tacalcitol

ointment. Acta Derm Venereol (Stockh). 1999; 79: 1'3."1'-t1'4.

6. Chung I, Wong MK, Flynn G i wsp. Differential antiproliferati-

ve effects of Calcitriol on tumor-derived and matrigel-derived

endothelial cells. Cancer Res. 2006; 1;66(17):8565-73.

7. Deluca HĘ Cantorna MT. Vitamin D: its role and uses inimmunology. FASEB I.2OO1.; 15: 2,579-2585

B. El.Kott AĘ El.Baz MA, Mokhtar AA. Proliferating cell nucle.

ar antigen (PCNA) overexpression and microvessel density

predict survival in the urinary bladder carcinoma. Int Urol

Nephrol. 2006; 38: 237-24?,

g. Fogh K, Kragballe K. New vitamin D analogs in psoriasis. Curr.

Drug Targets Inflamm Allergy. 2AO4;3: 199-204.

10. Gaschott T Wachtershauser A, Steinhilber D i wsp. 1',25-

Dihydroxycholecalciferol enhances butyrate-inducedp21(Wafr/Cipr) expression. Biochem Biophys Res Commun.

?OOt;283: 80-85

11. Gown AM, Jian JJ, Matles H i wsp. Validation of the S-phase

specificity of histone (H3) in situ hybridization in normal and

malignant cells. J Histochem Cytochem. L996; 44: 221-226

12. Hammond E, Berkey BA, Fu KK. i wsp. P105 as a prognostic

indicator in patients irradiated for locally advanced head-

and-neck cancer: a clinicalAaboratory correlative analysis of

RTOG-9003. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2003 57:683-692.

l3.Jeschke U, Schiessl B, Mylonas I i wsp. Expression of the

proliferation marker Ki-67 and of p53 tumor protein introphoblastic tissue of preeclamptic, HELLĘ and intrau-

terine growth-restricte* pregnancies. Int J Gynecol Pathol.

2006;25: 354-360.

1.4.Jorgensen HL, Scholler J, Sand IC i wsp. Relation of corn-

mon allelic variation at vitamin D receptor locus to bone

mineral density and postmenopausal bone mass: Cross sec-

tional and longitudinal population study. Br Med J. 1996;

313: 586-590

15.Kanai N, Denburg f, )ordana M, i wsp. Nasal polyp inflarna-

tion. Effect of topical nasal steroid. Am J Respir Crit Care

Med. 1994; 150(aJ: 1094-100.

16. Leoncini L, Cossu A, Megha T i wsp. Expression of

p3a(cdcZ) and cyclins A and B compared. to other prolife-

rative features of non-Hodgkin's lymphomas: a multivariate

cluster analysis. Int ) Cancer. 1999; B3: 203-209

17. Nonaka M, Pawankar R, Saji Ę i wsp' Effect of Roxitromycine

on IL-B synthesis and proliferation of nasal polyp fibro-

blasts, Acta Otolaryngol(Stockh) 1998; suppl. 539: 71-75.

lB.Orchel I, Stowifrski J, Mazurek U i wsp. T. H3 mRNA level

as a ne'w marker in astrocytomas. Biochim Biophys Acta

2004; 1689: 42-46.

19. Pawankar R. Nasal polyps: an update: editorial review, Curr

opin Ąllergy Clin Immunol. z003; 3: 1'.6.

20. Peters DC, Balfour JA. Tacalcitol. Drugs 1997; 54: 265-271.

21. Sato H, Ogino Y, kkagi H i wsp. Pharmacological profiles of

hifh-concenntration (20 microg/gJ Thcalcitol ointment: effe-

cts on cutaneous inflammation, epidermal proliferation and

differentiation in mice. |. Dermatol. 2003; 30: 510-524.

?,Z,Schwartz GG, Eads D, Rao A i wsp. Pancreatic cancer

cells express 25-Hydroxyvitamin D-1{alpha}-hydroxy-lase and their proliferation is inhibited by the prohor-

mone 2s-hydroxyvitamin D3. Carcinogenesis. 2,AA4: f5:

101 5-1026.

Z3.Smith MD, Healy E, Thompson V i wsp. Use of in situdetection of histone mRNA in the assessment of epidermalproliferation: comparison with the Ki67 antigen and BrdU

incorporation Br J Dermatol. t995; '132: 359-366.

24. Stio M, Celli A, Lunghi B i wsp. Vitamin D receptor inIMR-90 human fibroblasts and antiproliferative effect of

1,2 5-dihydroxyvitamin D3. Biochem Mol BioI Int. 1 997 ; 43:

L1.7 3-'1,181 .

25. Thkahashi H, Ibe M, Kinouchi M i wsp. Similary potent

action of 1,zs-dihydroxyvitamin D3 and its analogues,

Tacalcitol, calcipotriol and maxacalcitol on normal human

keratinocyte proliferation and differentiation. ] Dermatol

Sci. 2003; 31 : 21.-28.

26. Yaron I, Meyer EA, Weisman Y i wsp. Effect of 1',25'

Dihydroxyvitamin D3 on interleukin 18 actions and cell

growth in human synowial fibroblast cultures. J Rheumatol.

1993 ; ZA:'J.527 -1,53 2.

't

l

z"

Otolaryngologia

Zmiany potencjalu proliferacyjnego fibrob|astÓw pochodzqcych z po|ipów nosowych, w hodowlach in vitro, pod wplywem pochodnych wit. D

ZT.Zimber A, Chedeville A, Abita IP i wsp. Functional inte-

ractions between bile acids, all-trans retinoic acid, and

1,Zs-dihydroxy-vitamin D3 on monocytic differentiation

and myeloblastin gene d,own-regulation in HL60 and

THP-L human leukernda cells. Cancer Res. 2000; 60: 672'

67 B.

Adres autora:

dr n.med. Beata Rostkowska-Nadolska

Ul. Hermanowska 74,

54-314 \Ąhoctaw

Tel.: +48 602 Btz 21'B, fax.:(+łB 71') 327 09 50

e-mail: beatanm@wp.pl

Pracę nadestąno: 2 0,02, 2 00 7.r.

Otolaryngologia Polska 2OA7 , LXl, 5 667