La qualità in IHC
“A SCANNER DARKLY”
Claudio Ceccarelli e Stefano Simonazzi U.O. Anatomia Patologica - Prof. G. N.
Martinelli
LA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO
A A
RISULTATO UGUALE A TEMPI DIVERSI - CON REAGENTI DIVERSI
CON STRUMENTI DIVERSI
02/05/2004
Ab XXX
Kit Meliorstain
AUTOMAT K
12/12/2012
Ab YZZ
Kit SuperColor
ROBOSTAINER
OUTPUT = qualità + PRODUTTIVITA’
STANDARDIZZATO TUTTO
QUELLO CHE VEDO E’ LA VERITA’ / LA REALTA’
UN OSCURO SCRUTARE
A
NON CI CHIEDIAMO MAI SE ESISTONO CONDIZIONI ALLE QUALI IL MATERIALE NON SI
PRESTA AD UNA STANDARDIZZAZIONE DEL
RISULTATO
BISOGNA PROCESSARE TUTTO
BISOGNA VALUTARE TUTTO
A
LA QUALITA’ MORFOLOGIA COME UNICO CRITERIO DI ADEGUATEZZA
LE TECNICHE IHC NON SONO QUANTITATIVE !
Utilizzo di IHC in algoritmi di diagnostica differenziale
(risposta qualitativa SI/NO)
PROGRAMMI DI VALUTAZIONE ESTERNA DI
QUALITA’
NordiQC
Cromogranina A, RUN 18, 2006 94 Lab.
30/94 OTTIMALE (32,0%)
36/94 BUONA (38,0%)
21/94 BORDERLINE (22,0%)
7/94 INSUFFICIENTE (8,0%)
CDX-2, RUN 22, 2008 56 Lab.
17/56 OTTIMALE (30,0%)
19/56 BUONA (34,0%)
14/56 BORDERLINE (25,0%)
6/56 INSUFFICIENTE (11,0%)
NON SONO NEMMENO COSI’ RIPRODUCIBILI
LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE
EPPUREGLI STESSI REAGENTI E PRINCIPI PER IL SAGGIO “ELISA” QUANTITATIVO
Il punto di vista dei reagenti
QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA FFPE
LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE
Il punto di vista dei materiali
Fresco = FFPE
ALLORA, A CERTE CONDIZIONI, IL RISULTATO DI UNA
COLORAZIONE IMMUNOISTOCHIMICA PUO’
ESSERE VALUTATO SECONDO CRITERI QUANTITATIVI
PERCHE’ DOBBIAMO PORCI QUESTO PROBLEMA?
VALUTAZIONE QUANTITATIVA DELLA
ESPRESSIONE DI PROTEINE MEDIANTE IHC
QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
Qualsiasi intensità
I valori sono riportati in percentuale
esempio: ER = 100 %
USO DEI METODI AR
STANDARDIZZAZIONE
QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
FALSO NEGATIVO ??
< 10 % Negativo
15 %
0 %
QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
SCORE 0 +1 +2 +3 (% e Intensità)
Score +2 Score 0
APPLICAZIONE DEI CONCETTI DELLA MEDICINA DI LABORATORIO
CONCETTO DI
“TOTAL TEST APPROACH”
Aspetti del test considerati:
pre-analitici
analitici
post-analitici
Fattori analitici del test
REAGENTI
Anticorpi
Sistemi di rivelazione
Tamponi
PROTOCOLLI
Procedura IHC
(tempi e temperature)
AR
COMPRENDONO:
AUTOMAZIONE NUOVI AR ?
Fattori pre-analitici del test
COMPRENDONO:
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE
Asportazione/Fissativo
Spessore/tipo di tessuto
Tempo di fissazione
Temperatura del processo
Processazione post-fissazione
Interazione fra diversi fattori del test
DALLA INTERAZIONE
FRA REAGENTI
Anticorpi
SISTEMI AR
E PRE-ANALITICA
CONDIZIONI DI VARIABILITA’
PRE-ANALITICHE
COMBINAZIONE DI QUESTE CON LA METODICA
IHC
PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC
SCARSA PRESERVAZIONE DEL
TESSUTO
> SENSIBILITA’ ALLA DEGRADAZIONE DELL’EPITOPO
PRESCELTO
CONDIZIONI DI VARIABILITA’
PRE-ANALITICHE
SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO
PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC
SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTODEGRADAZIONE – MANCATA FISSAZIONE