PRESENTA: Bio. Exp. Sara Beatriz Herrera Sols. A novel DNA
gyrase inhibitor rescues Escherichia coli dnaAcos mutant cells from
lethal hyperinitiation. Line Johnsen, Christoph Weigel, Jens von
Kries, Mona Meller y Kristen Skarstad.
Diapositiva 2
Introduccin. DnaA Es una protena clave para el inicio de la
replicacin en E. coli y otras bacterias. Reconoce secuencias
especficas de DNA en OriC, donde se une y promueve la apertura de
la doble cadena.
Diapositiva 3
Diapositiva 4
Topoisomerasa II, DNA girasa y la topoisomerasa IV, cambian el
estado topolgico del ADN. Tienen un alto grado de similitud en su
secuencia. Usan energa a partir de la hidrlisis del ATP.
Topoisomerasa II, DNA girasa y la topoisomerasa IV, cambian el
estado topolgico del ADN. Tienen un alto grado de similitud en su
secuencia. Usan energa a partir de la hidrlisis del ATP. Sper
enrollamiento () Para iniciacin de la replicacin y transcripcin del
DNA. Sper enrollamiento () Para iniciacin de la replicacin y
transcripcin del DNA.
Diapositiva 5
Diapositiva 6
La DnaA, es considerada como un nuevo blanco para nuevos
antibiticos, debido a que est altamente conservada en las
bacterias. La cepa dnaAcos, SF53, fue desarrollada con el proposito
de evaluar los inhibidores de la DnaA. La mutante condicional
dnaA219, crece normalmente a 42 C, pero muere a 30 C, debido
sobreiniciacinde la replicacin por actividaad de la protena DnaA.
La DnaA, es considerada como un nuevo blanco para nuevos
antibiticos, debido a que est altamente conservada en las
bacterias. La cepa dnaAcos, SF53, fue desarrollada con el proposito
de evaluar los inhibidores de la DnaA. La mutante condicional
dnaA219, crece normalmente a 42 C, pero muere a 30 C, debido
sobreiniciacinde la replicacin por actividaad de la protena
DnaA.
Diapositiva 7
Compuesto Efecto FluoroquinolonasDNA girasa y Topoisomerasa IV.
QuinolonasDNA girasa y Topoisomerasa. CumarinasInhiben la actividad
ATPasa de la DNA girasa y topoisomerasa IV. Compuestos que actan a
nivel de las Topoisomerasas.
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Objetivo: Mtodo. Buscar nuevos compuestos con actividad
antibacteriana. Se utiliz la cepa de deteccin SF53 (desarrollada
previamente) para detectar los inhibidores de la protena DnaA. Cepa
no viable a 30 C, debido a la sobreiniciacin. S los compuestos son
viables es probable que causen parcial o completa inhibicin de la
funcin de la DnaA. Cepa SF53. Se estudiaron compuestos que dieron
positivo para crecimiento, en ensayos especficos para protenas de
replicacin. Se determino la actividad de la DNA girasa
purificada.
Diapositiva 9
Cepas bacterianas: Compuestos utilizados con actividad
antibacteriana:
Diapositiva 10
Resultados. Efecto de varias concentraciones de S143 y su
anlogo sobre el crecimiento de SF53.
Diapositiva 11
Efecto de S143 y sus anlogos sobre el crecimiento de E. coli
silvestre. Efecto de S143 y sus anlogos. Efecto de S143 a
diferentes []s
Diapositiva 12
. Efecto de S143 en el crecimiento de clulas sin DnaA
Inhibidores de la girasa
Diapositiva 13
Efecto de S143 sobre el crecimiento de la cepa con
sobreexpresin de DNA girasa Efecto de S143sobre el crecimiento de
E. coli con susceptibilidad decrementada por fluroroquinonas y
cumarinas.
Diapositiva 14
RESULTADOSCONCLUSIN La benzazepina (S143), dio positivo para la
prueba. Pero no acta directamente sobre la DnaA, pero posiblemente
acta a nivel de la DNA girasa. Las benzazepinas no han sido
reportadas como inhibidores de la girasa. Esta prueba con SF53,
permite identificar compuestos que sean inhibidores de protenas de
la replicacin. Con las clulas SF53, se descubri un nuevo inhibidor
de la DNA girasa.