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1991, 29(9):1997.J. Clin. Microbiol.

Powers, R P Kokka and K TamuraJ M Janda, S L Abbott, S Kroske-Bystrom, W K Cheung, CPathogenic properties of Edwardsiella species.

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V o l . 2 9 , N o . 9OURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, S ep t . 1 99 1 , p . 1997-20010 0 9 5 - 1 1 3 7 / 9 1 / 0 9 1 9 9 7 - 0 5 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t 1 9 9 1 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

P a t h o g e n i c P r o p e r t i e s o f E d w a r d s i e l l a S p e c i e sJ . MICHAEL J A N D A , 1 * SHARON L . ABBOTT,' SUSAN KROSKE-BYSTROM,1 WENDY K. W. CHEUNG,'CATHERINE POWERS,' ROBERT P . KOKKA,1 AND K . TAMURA2

M i c r o b i al D i s e a s e s L a b o r a t o r y , C a l i f o r n i a D e p a r t m e n t o f H e a l t h S e r v i c e s , B e r k el e y , C a l if o r ni a 9 4 7 0 4 - 1 0 1 1 ,and N a t i o n a l I n s t i t u t e o f H e a l t h , 1 0 - 3 5 , K a m i o s a k i , S h i n a g a w a - k u T o k y o 1 4 1 , J a p a n 2R e c e i v e d 1 2 A p r i l 1 9 9 1 / A c c e p t e d 2 1 J u n e 1 9 9 1

T h e p a t h o g e n i c c h a r a c t e r i s t i c s o f 3 5 E d w a r d s i e l l a s t r a i n s f r o m c l i n i c a l a n d e n v i r o n m e n t a l sources werei n v e s t i g a t e d . O v e r a l l , most E d w a r d s i e l l a t a r d a s t r a i n s were i n v a s i v e i n HEp-2 c e l l m o n o l a y e r s , p r o d u c e d ac e l l - a s s o c i a t e d h e m o l y s i n a n d s i d e r o p h o r e s , a n d b o u n d C o n g o r e d ; many s t r a i n s a l s o e x p r e s s e d mannose-r e s i s t a n t h e m a g g l u t i n a t i o n a g a i n s t g u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s . E d w a r d s i e l l a h o s h i n a e s t r a i n s bound Congo r e d andwere v a r i a b l e i n t h e i r i n v a s i v e a n d h e m o l y t i c c a p a b i l i t i e s w h i l e E d w a r d s i e l l a i c t a l u r i s t r a i n s d i d n o t p r o d u c ee i t h e r f a c t o r ; n e i t h e r E . h o s h i n a e n or E . i c t a l u r i e x p r e s s e d m a n n o s e - r e s i s t a n t h e m a g g l u t i n a t i o n nor e l a b o r a t e ds i d e r o p h o r e s u n d e r t h e t e s t e d c o n d i t i o n s . S e l e c t e d s t r a i n s o f e a c h s p e c i e s t e s t e d f o r mouse l e t h a l i t y i n d i c a t e ds t r a i n v a r i a b i l i t y i n p a t h o g e n i c p o t e n t i a l , w i th E . t a r d a s t r a i n s b e i n g t h e most v i r u l e n t ; 50% l e t h a l d o s e s i ni n d i v i d u a l s t r a i n s d i d n o t c o r r e l a t e w i th p l a s m i d c o n t e n t , c h e m o t a c t i c m o t i l i t y , serum r e s i s t a n c e , or e x p r e s s i o no f s e l e c t e d enzyme a c t i v i t i e s . T h e r e s u l t s s u g g e s t some p o t e n t i a l i m p o r t a n t d i f f e r e n c e s i n p a t h o g e n i c p r o p e r t i e st h a t may h e l p e x p l a i n t h e i r e n v i r o n m e n t a l d i s t r i b u t i o n a n d a b i l i t y t o cause d i s e a s e i n h u m a n s .

One o f t h e l e s s f r e q u e n t l y e n c o u n t e r e d p a t h o g e n i c g e n e r ai n t h e f a m i l y E n t e r o b a c t e r i a c e a e i s t h e g e n u s E d w a r d s i e l l a( 8 ) . A l t h o u g h t h e g e n u s o r i g i n a l l y c o n s i s t e d o f o n l y a s i n g l emember ( E d w a r d s i e l l a t a r d a ) , a t l e a s t t h r e e s p e c i e s a r e nowknown t o e x i s t . T h e s e s p e c i e s o f t e n i n h a b i t f r e s h w a t e rs o u r c e s a n d c a n a l s o b e r e c o v e r e d f r o m c o l d - b l o o d e d v e r t e -b r a t e s . E d w a r d s i e l l a e a d d i t i o n a l l y p r o d u c e a w i d e r a n g e o fi n f e c t i o n s i n a n i m a l s a n d a r e r e c o g n i z e d a s p a t h o g e n s f o re e l s , c a t f i s h , a n d h i g h - o r d e r v e r t e b r a t e s . E d w a r d s i e l l a i c t a -l u r i p r i m a r i l y c a u s e s e n t e r i c s e p t i c e m i a i n c h a n n e l c a t f i s h( 1 0 , 1 1 , 2 7 ) , w h i l e E . t a r d a h a s b e e n i m p l i c a t e d i n t h e s a m ea n i m a l s a s t h e c a u s a t i v e a g e n t o f e m p h y s e m a t o u s p u t r e f a c -t i v e d i s e a s e , a f o u l - s m e l l i n g wound i n f e c t i o n w i th a bs c e s sf o r m a t i o n ( 1 8 ) ; o t h e r a n i m a l d i s e a s e s c a u s e d b y E . t a r d ai n c l u d e " r e d d i s e a s e " i n e e l s ( 3 1 ) a n d e n t e r i t i s i n p e n g u i n s( 4 ) . I n h u m a n s , E . t a r d a i s t h e o n l y r e co g n i z ed p at h o g en i cs p e c i e s p r i m a r i l y a s s o c i a t e d w i t h s p o r a d i c c a s e s o f g a s t r o -e n t e r i t i s ( 3 , 1 3 ) ; i n r a r e i n s t a n c e s , E . t a r d a h a s a l s o b e e nr e p o r t e d t o c a u s e e x t r a i n t e s t i n a l d i s e a s e , m o s t c o m m o n l yi n v o l v i n g c a s e s o f s e p t i c e m i a o r b a c t e r e m i a ( 3 4 ) . I n t h e c a s eo f E d wa r ds i e l l a h o s h i na e, a lt h ou g h t h i s s p e c i e s h a s b e e nr e c o v e r e d f r o m h u m a n s ( i n f e c e s ) , i t h a s b e e n m o s t o f t e ni s o l a t e d f r o m l i z a r d s a n d b i r d s ( 8 , 9 ) . A d e f i n i t e a s s o c i a t i o nb e t w e e n t h i s s p e c i e s a n d i t s i s o l a t i o n a s a b o n a f i d e p a t h o g e nh a s n o t b e e n e s t a b l i s h e d t o d a t e .V e r y l i t t l e i n f o r m a t i o n i s c u r r e n t l y a v a i l a b l e c o n c e r n i n gw h a t f a c t o r s r e g u l a t e p a t h o g e n i c i t y i n t h e t h r e e E d w a r d s i e l l as p e c i e s . S e v e r a l r e c e n t s t u d i e s h a v e i d e n t i f i e d a n u m b e r o ff a c t o r s p o t e n t i a l l y a s s o c i a t e d w i t h t h e p a t h o g e n i c i t y o f e d -w a r d s i e l l a e . T h e s e f a c t o r s i n c l u d e c e l l - a s s o c i a t e d o r e x t r a -c e l l u l a r e n z y m e s , h e m a g g l u t i n i n s , i n v a s i n s , a n d e x t r a c h r o -m o s o m a l e l e m e n t s ( 1 2 , 1 5 , 1 6 , 3 2 , 3 5 ) . P r e s e n t l y , i t i su n k n o w n w h e t h e r c e r t a i n v i r u l e n c e - a s s o c i a t e d f a c t o r s a r es p e c i e s s p e c i f i c o r w h e t h e r d i f f e r e n t i a l e x p r e s s i o n w i t h i n as p e c i e s i s d e f i n e d b y s i t e o f i s o l a t i o n . How t h e s e f a c t o r s p l a ya r o l e i n t h e d i s e a s e p r o c e s s i s a l s o u n c l e a r . To b e g i n t oa d d r e s s some o f t h e s e i s s u e s , we s u r v e y e d t h e p a t h o g e n i cp r o p e r t i e s o f 3 5 E d w a r d s i e l l a s t r a i n s r e c o v e r e d f r o m d i s t i n c t

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .

e c o l o g i c s e t t i n g s t o s e e how e x p r e s s i o n o f t h e s e f a c t o r sm i g h t r e l a t e t o v i r u l e n c e .MATERIALS AND METHODS

B a c t e r i a l s t r a i n s . T h i r t y - f i v e E d w a r d s i e l l a s t r a i n s ( E .t a r d a , n = 2 4 ; E . h o s h i n a e , n = 6 ; E . i c t a l u r i , n = 5 ) w e r ei n v e s t i g a t e d i n t h i s s t u d y . T h e E . t a r d a s t r a i n s t e s t e d w e r es e l e c t e d f o r a n a l y s i s o n t h e b a s e s o f t h e i r s o u r c e o f i s o l a t i o na n d d i s e a s e p r e s e n t a t i o n ; t h e s e s t r a i n s w e r e w i l d - t y p e i s o -l a t e s ( w i t h t h e e x c e p t i o n o f s t r a i n F 6 3 ) w h i c h f a i l e d t op r o d u c e a c i d f r o m D - m a n n i t o l , s u c r o s e , a n d L - a r a b i n o s e a n dp r o d u c e d H2S o n T S I A g a r . O f t h e 3 5 s t r a i n s , 2 1 h a v e b e e nd e s c r i b e d p r e v i o u s l y ( 1 2 , 3 5 ) ; o f t h e r e m a i n i n g 1 4 s t r a i n s , 5e n v i r o n m e n t a l i s o l a t e s were r e c e i v e d f r o m J . L i n d q u i s t( M a d i s o n , W i s . ) , 6 a d d i t i o n a l i s o l a t e s were f r o m t h e M i c r o -b i a l D i s e a s e s L a b o r a t o r y c o l l e c t i o n , a n d 2 c u l t u r e s (ATCC3 5 0 5 2 a n d ATCC 3 3 3 7 9 ) w e r e o b t a i n e d f r o m t h e A m e r i c a nT y p e C u l t u r e C o l l e c t i o n ( R o c k v i l l e , M d . ) . T h e s e r o t y p e o fe a c h E . t a r d a s t r a i n was d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o t h e r e -c e n t l y r e v i s e d i n t e r n a t i o n a l t y p i n g s c h e m e ( 3 0 ) . F o r a l l i nv i t r o a s s a y s , E . t a r d a a n d E . h o s h i n a e s t r a i n s w e r e c u l t u r e da n d t e s t e d a t 3 5 C , w h i l e E . i c t a l u r i was g r o w n a n d a s s a y e da t 2 5 C u n l e s s o t h e r w i s e s p e c i f i e d .M o t i l i t y . T h e a b i l i t y o f e d w a r d s i e l l a e t o m i g r a t e c h e m o -t a c t i c a l l y i n m o t i l i t y medium was d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t ot h e m e t h o d o f C r a v e n a n d M o n t i e ( 5 ) . S t a n d a r d i z e d s u s p e n -s i o n s ( c a . 1 0 9 CFU) w e r e p o i n t i n o c u l a t e d i n t o m o t i l i t y a g a rw h i c h c o n s i s t e d o f 1% t r y p t o n e , 0 . 3 % y e a s t e x t r a c t , 0 . 5 %N a C l , a n d 0 . 3 % a g a r . M i g r a t i o n o f b a c t e r i a i n s u c h m e d i a i sd e p e n d e n t o n t h e m o t i l i t y o f i n d i v i d u a l s t r a i n s a n d t h e i rr e s p o n s i v e n e s s t o c h e m o t a c t i c g r a d i e n t s g e n e r a t e d b y d e p l e -t i o n o f m et ab o l i te s s u r r o u nd i ng g r o wt h . T h e d i s t a n c e o fm i g r a t i o n f r o m t h e p o i n t s o u r c e i n o c u l u m ( d i a m e t e r i s e x -p r e s s e d i n m i l l i m e t e r s ) f o r e a c h s t r a i n was d e t e r m i n e d 1 8 t o2 0 h a f t e r i n i t i a l i n o c u l a t i o n . S t r a i n s whose z o n e wa s . 10mm w e r e c o n s i d e r e d e i t h e r n o n m o t i l e o r d e f e c t i v e i n c h e m o -t a c t i c m o b i l i t y .MRHA. M a n n o s e - r e s i s t a n t h e m a g g l u t i n a t i o n (MRHA) o fg u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s ( 1 . 5 % v o l / v o l ) i n t h e p r e s e n c e o f 1%D - m a n n o s e wa s d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o t h e p r o t o c o l o f

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1 9 9 8 JANDA ET AL.Wong e t a l . ( 3 5 ) b y u s i n g t h e r o c k t i l e t e s t . Some s t r a i n s w e r ef u r t h e r e v a l u a t e d f o r t h e a b i l i t y o f c h e m i c a l t r e a t m e n t s o rs p e c i f i c a n a l o g s t o i n h i b i t t h i s MRHA r e a c t i o n .H E p - 2 i n v a s i o n a n d CAH. T h e i n v a s i v e c a p a b i l i t i e s o fE d w a r d s i e l l a s p e c i e s w e r e s c r e e n e d i n H E p - 2 c e l l s p r o p a -g a t e d i n c h a m b e r s l i d e s i n a 5% C02 a t m o s p h e r e a t 3 5 C ( 1 2 ) .I n v a s i v e s t r a i n s w e r e d e f i n e d a s t h o s e w h o s e n u m b e r s o fg e n t a m i c i n - r e s i s t a n t p r o g e n y a t 3 h p o s t i n f e c t i o n w e r e e q u a lt o o r e x c e e d e d 1 0 3 CFU; i n i t i a l i n f e c t i o n i n o c u l a w e r e c a . 1 0 6CFU. I n v a s i v e s t r a i n s w e r e n o t p r o b e d f o r i n va s i on p l a s m i da n t i g e n - r e l a t e d s e q u e n c e s , a s a p r e v i o u s s t u d y h a d i n d i c a t e dt h a t E . t a r d a s t r a i n s a r e S e r e n y t e s t n e g a t i v e ( 2 ) . C e l l -a s s o c i a t e d h e m o l y s i n s (CAH) w e r e d e t e c t e d b y c o i n c u b a -t i o n o f s e r i a l d i l u t i o n s o f s t a n d a r d i z e d s u s p e n s i o n s o f b a c t e -r i a i n p h o s p h a t e - b u f f e r e d s a l i n e w i t h 1% ( v o l / v o l ) s o l u t i o n so f e i t h e r g u i n e a p i g , s h e e p , o r r a b b i t e r y t h r o c y t e s i n m i c r o -t i t e r p l a t e s a t 3 5 C f o r 1 h . S t r a i n s p r o d u c i n g a CAH w e r ed e f i n e d a s t h o s e w h o s e CAH t i t e r w a s . 4 h e m a g g l u t i n a t i n gu n i t s ( h e m o l y t i c u n i t s , 1 0 0 % l y s i s ) a g a i n s t o n e o r m o r e o f t h ee r y t h r o c y t e s t e s t e d ( 1 2 ) .S T s . P r o d uc ti o n o f h e a t - s t a b l e ( S T ) e n t e r o t o x i n l i k e a c t i v -i t y f o r a l l 3 5 E d w a r d s i e l l a s t r a i n s w a s d e t e r m i n e d i n s u c k l i n gm i c e a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d o f D e a n e t a l . ( 6 ) a s r e c e n t l ym o d i f i e d ( 1 ) ; 2 5 o f t h e s e s t r a i n s w e r e a d d i t i o n a l l y s c r e e n e df o r h o m o l o g o u s s e q u e n c e s t o t h e ST o f E s c h e r i c h i a c o l i ( 2 0 )b y u s i n g t h e b i o t i n y l a t e d SNAP e n t e r o t o x i g e n i c E . c o l i STp r o b e ( M o l e c u l a r B i o s y s t e m s , I n c . , S a n D i e g o , C a l i f . ) .P h e n o ty p i c m a r k e r s . T h e a b i l i t y o f e d w a r d s i e l l a e t o b i n dC o n g o r e d w a s d et er m i n e d o n t r y p t i c s o y a g a r c o n t a i n i n g0 . 0 0 6 % C o n g o r e d . P l a t e s w e r e i n c u b a t e d a t t h e a p p r o p r i a t et e m p e r a t u r e f o r 7 2 h b e f o r e f i n a l r e a d i n g s w e r e r e c o r d e d .S i d e r o p h o r e p r o d u c t i o n w a s d e te r m i ne d u n d e r i d e n t i c a l c o n -d i t i o n s b y u s i n g C h r o m e A z u r o l S a g a r ( 1 ) . C h o n d r o i t i n a s ea c t i v i t y ( 2 8 ) w a s a s s e s s e d o n b r a i n h e a r t i n f u s i o n a g a rc o n t a i n i n g 4 0 0 , u g o f c h o n d r o i t i n s u l f a t e p e r m l a n d 1%b o v i n e s e r u m a l b u m i n ( f r a c t i o n V ) . F o r s e l e c t e d s t r a i n s , t h ea b i l i t y o f 65% p o o l e d human s e r u m t o i n d u c e c o m p l e m e n t -

4 . . ..

OF

F I G . 1 . I n v a s i o n o f HEp-2 c e l l s b y e d w a r d s i e l l a e .

TABLE 1 . T h e i n v i t r o p a t h o g e n i c p r o p e r t i e s o fE . t a r d a s t r a i n s aS t r a i n S o u r c e S e r o t y p e M o t I n v CAH MRHA C r b CAS

C l i n i c a l1 5 9 4 7 T F e c e s 0 3 3 : H 1 + + + + + +E T - 1 F e c e s 0 3 3 : H 1 - + + + + +E T - 2 F e c e s 0 4 0 : H 1 9 + + + + + +E T - 7 F e c e s 033:HNM - + + + + +E T - 1 1 F e c e s 0 5 9 : H 1 9 + + + - + +E T - 1 2 F e c e s 0 2 4 : H 1 1 + + + + + +E T - 1 3 A b s c e s s 0 3 6 : H 1 + + + - + +E T - 1 4 F e c e s 0 6 : H 1 9 + + + - + +E T - 1 5 B l o o d 0 5 : H 1 + + + + + ( + )E T - 1 6 F e c e s UK:H8 + + + - + +E T - 1 7 F e c e s 0 5 9 : H 1 4 - + + + + +E T - 1 9 F e c e s 0 3 2 : H 1 4 + + + - + +E T - 2 0 S p l e e n 04:UK + + + - + -Nonhuman1 0 A L a k e 0 2 4 : H 1 4 + + + + + +F l L a k e 030:HUK + + + - + ( + )F 3 1 L a k e 0 4 4 : H 8 + + + - + +F 4 1 L a k e UK:UK + + + + + ( + )F 5 3 L a k e 0 5 9 : H 1 9 + + + - + +F 6 3 L a k e 0 4 5 : H 3 7 + + + - ( + ) +E T - 1 8 H e r o n 0 5 : H 5 + + + - + +SA 8 3 1 8 F l o u n d e r 0 5 : H 1 + + - + + +AC 8 3 2 1 E e l R:H1 + + - + + +T K 8 4 0 3 E e l 0 9 : H 1 - - - + + +3 5 9 2 - 6 4 Unknown R:H4 + - + + + +a A b b r e v i a t i o n s : M o t , m o t i l i t y ; I n v , i n v a s i o n o f H E p - 2 c e l l s ; CAH, c e l l -a s s o c i a t e d h e m o l y s i n ; MRHA, m a n n o s e - r e s i s t a n t h e m a g g l u t i n a t i o n a g a i n s tg u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s ; C r b , C o n g o r e d b i n d i n g ; C A S , s i d e r o ph o r e p r o d uc -t i o n o n c h r o m e a z u r o l S a g a r ; UK, unknown t y p e ; NM, n o n m o t i l e . P a r e n -t h e s e s d e n o t e w e a k r e a c t i o n s .

m e d i a t e d l y s i s o f b a c t e r i a w a s p e r f o r m e d i n m i c r o c e n t r i f u g et u b e s ; e n d p o i n t a n a l y s i s o c c u r r e d a t 2 h p o s t i n c u b a t i o n ( 2 2 ) .P l a s m i d a n a l y s i s a n d m o u s e p a t h o g e n i c i t y . A l l s t r a i n s w e r es c r e e n e d f o r t h e p r e s e n c e o f e x t r a c h r o m o s o m a l e l e m e n t s b yh o r i z o n t a l e l e c t r o p h o r e s i s o f c e l l l y s a t e s o n 0 . 7 5 % a g a r o s eg e l s ( 2 2 ) . P l a s m i d s w e r e s u b s e q u e n t l y v i s u a l i z e d w i t h UVi l l u m i n a t i o n . T h e p a t h o g e n i c p o t e n t i a l s o f some E . t a r d a , E .h o s h i n a e , a n d E . i c t a l u r i s t r a i n s w e r e d e t er m i n e d b y i n t r a -p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f v i a b l e b a c t e r i a i n t o f em a l e S w i s sW e b s t e r m i c e ; 50% l e t h a l d o s e s b a s e d u p o n m o r t a l i t y r a t e so b s e r v e d a t v a r i o u s d i l u t i o n s o f b a c t e r i a w e r e c a l c u l a t e d a sp r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( 2 2 ) .

RESULTSM o s t s t r a i n s o f E . t a r d a b o u n d C o n g o r e d ( 1 0 0 % ) , p r o -d u c e d s i d e r o p h o r e s ( 9 6 % ) , w e r e i n v a s i v e i n H E p - 2 c e l lm o n o l a y e r s ( 9 2 % ; F i g . 1 ) , e l a b o r a t e d a CAH ( 8 8 % ) , a n dw e r e c h e m o t a c t i c a l l y m o t i l e ( 8 8 % ; T a b l e 1 ) . T h e s e a s s o c i a -t i o n s w e r e i n d e p e n d e n t o f s e r o t y p e d e s i g n a t i o n o r s o u r c e o ft h e s t r a i n ( h u m a n , a n i m a l , e n v i r o n m e n t ) . A p p r o x i m a t e l yh a l f ( 5 4 % ) o f t h e E . t a r d a s t r a i n s t e s t e d a l s o p r o d u c e dMRHA a g a i n s t g u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s ; t h i s h e m a g g l u t i n i nw a s e x p r e s s e d b y a n u m b e r o f i s o l a t e s o f d i v e r s e s e r o t y p e s ,a n d a d i f f e r e n c e i n p o s i t i v i t y r a t e s b e t w e e n human ( 5 4 % ) a n dn o n h u m a n s t r a i n s ( 5 5 % ) was n o t o b s e r v e d . From e a r l i e rs t u d i e s ( 3 5 ) , we p r e s e n t e d e v i d e n c e t h a t t h e MRHA o f E .t a r d a was a n a f i m b r i a l p r o t e i n w h o s e a c t i v i t y c o u l d b eb l o c k e d b y f e t u i n b u t was n o t i n h i b i t e d b y a v a r i e t y o fs u g a r s , p o l y s a c c h a r i d e s , a n d g l y c o l i p i d s . S i n c e a r e c e n ts t u d y ( 2 4 ) o n t h e a f i m b r i a l h e m a g g l u t i n i n o f S h i g e l l a s p e c i e si n d i c a t e d t h a t h e m a g g l u t i n a t i o n c o u l d b e s p e c i f i c a l l y b l o c k e d

J . C L I N . M I C R O B I OL .

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EDWARDSIELLA VIRULENCE FACTORS 1 9 9 9TABLE 2 . E f f e c t s o f v a r i o u s i n h i b i t o r s a n d t r e a t m e n t s o n MRHAa c t i v i t y i n s e l e c t e d E . t a r d a s t r a i n s

H e m a g g l u t i n a t i o n a c t i v i t y b o fC o n d i t i o n a t h e f o l l o w i n g :

E T - 1 2 E T - 1 5 E T - 1 7 1 O AD - M a n n o s e ( 1 % ) 4+ 4+ 3+ 4+F e t u i n ( 6 7 m g / m l ) 0 0 0 0A s i a l o f e t u i n ( 6 7 m g / m l ) 0 0 0 0N - A c e t y l n e u r a m i n i c a c i d ( 1 0 mM) 4 + 3+ 3+ 3+N a I P O 4 ( 1 0 m M) 4+ 3+ 3+ 3+

a F i n a l c o n c e n t r a t i o n s i n p a r e n t h e s e s .b A g a i n s t g u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s .

b y s i a l i c a c i d - s p e c i f i c g l y c o p r o t e i n s , we t e s t e d s e v e r a lMRHA+ E . t a r d a s t r a i n s f o r s i m i l a r r e a c t i v i t y . As c a n b es e e n i n T a b l e 2 , a l l f o u r E . t a r d a s t r a i n s e x h i b i t e d s t r o n gMRHA a c t i v i t y a g a i n s t g u i n e a p i g e r y t h r o c y t e s i n t h e p r e s -e n c e o f D - m a n n o s e ; t h i s r e a c t i v i t y w a s i n h i b i t e d b y f e t u i n , a sp r e v i o u s l y r e p o r t e d , a n d b y a s i a l o f e t u i n , w h i c h l a c k s s i a l i ca c i d . F u r t h e r m o r e , s i a l i c a c i d - c o n t a i n i n g c o m p o u n d s , s u c ha s N - a c e t y l n e u r a m i n i c a c i d , f a i l e d t o i n h i b i t MRHA a c t i v i t y ,a s d i d p e r i o d a t e o x i d a t i o n o f c a r b o h y d r a t e s .I n c o n t r a s t t o t h e f i n d i n g s r e g a r d i n g E . t a r d a , a n u m b e r o fm a j o r d i f f e r e n c e s w e r e n o t e d a m o n g E . h o s h i n a e a n d E .i c t a l u r i s t r a i n s s u r v e y e d . A l t h o u g h E . h o s h i n a e s t r a i n s w e r em o t i l e a n d b o u n d C o n g o r e d , t h e y f a i l e d t o p r o d u c e as i d e r o p h o r e o r d e m o n s t r a t e MRHA a c t i v i t y ( T a b l e 3 ) . I n v a -s i v e c a p a b i l i t i e s a n d e x p r e s s i o n o f CAH w e r e d e t e c t e d a t al o w e r f r e q u e n c y ( 5 0 t o 6 7 % ) i n E . h o s h i n a e t h a n i n E . t a r d a .S u r p r i s i n g l y , a l l f i v e E . i c t a l u r i s t r a i n s f a i l e d t o p r o d u c e a n yo f t h e a b o v e - d e s c r i b e d f a c t o r s e v e n t h o u g h t h e y w e r e a s -s a y e d a t 2 5 C ( e x c e p t f o r CAH a n d i n v a s i o n a s s a y s ) .I n a d d i t i o n t o t h e a b o v e a s s a y s , a l l e d w a r d s i e l l a e w e r es c r e e n e d f o r t h e p r e s e n c e o f p l a s m i d s . H a l f o f t h e E . t a r d aa n d E . h o s h i n a e s t r a i n s s t u d i e d h a r b o r e d e x t r a c h o m o s o m a le l e m e n t s a s d e t e c t e d b y a g a r o s e e l e c t r o p h o r e s i s . T h e m o -l e c u l a r m a s s e s o f t h es e p l a s m i d s a n d n u m b e r s v a r i e d f r o ms t r a i n t o s t r a i n , r a n g i n g f r o m 2 t o 1 2 0 MDa. A l l E . i c t a l u r is t r a i n s c o n t a i n e d t w o l o w - m o l e c u l a r - m a s s p l a s m i d s o f c a . 2a n d 4 MDa t h a t a p p e a r e d s i m i l a r o r i d e n t i c a l t o t h o s ep r e v i o u s l y f o u n d i n t h i s s p e c i e s ( 1 5 ) .We a l s o t e s t e d a l l e d w a r d s i e l l a e f o r S T - l i k e a c t i v i t y i ns u c k l i n g m i c e s i n c e s o m e E . t a r d a i s o l a t e s h a v e r e p u t e d l yb e e n s h o w n t o p r o d u c e s u c h f a c t o r s ( 2 ) . A l l e d w a r d s i e l l a ew e r e f o u n d t o b e ST- i n s u c k l i n g m o u s e a s s a y s w i t hi n t e s t i n a l w e i g h t / b o d y w e i g h t r a t i o s r a n g i n g f r o m 0 . 0 5 1 t o

TABLE 3 . T h e i n v i t r o p a t h o g e n i c p r o p e r t i e s o fE . h o s h i n a e a n d E . i c t a l u r i aS p e c i e s S t r a i n S o u r c e M o t I n v CAH MRHA C r b CAS

E . h o s h i n a e E H - 1 Unknown + - - - + -1 - 7 8 P u f f i n + - + - + -9 - 6 6 M o n i t o r + + + - + -3 5 0 5 1 T M o n i t o r + + - - + -3 5 0 5 2 G e c k o + + + - + -3 3 3 7 9 P u f f i n + - + - + -E . i c t a l u r i 3 3 2 0 2 T C a t f i s h -6 0 0 6 C a t f i s h -6 0 1 2 C a t f i s h -6 0 1 3 C a t f i s h -6 0 1 7 C a t f i s h - - - - - NT

a N T , n o t t e s t e d ; f o r o t h e r a b b r e v i a t i o n s , s e e f o o t n o t e t o T a b l e 1 .

0 . 0 6 9 . T h e 2 5 E d w a r d s i e l l a s t r a i n s ( i n c l u d i n g a l l E . i c t a l u r ia n d t w o E . h o s h i n a e s t r a i n s ) t h a t w e r e a l s o t e s t e d f o rh o m o l o g o u s s e q u e n c e s t o t h e ST o f E . c o l i i n t h e SNAPa s s a y w e r e u n r e a c t i v e .F i n a l l y , t h e r e l a t i v e v i r u l e n c e o f a n u m b e r o f E . t a r d a , E .h o s h i n a e , a n d E . i c t a l u r i s t r a i n s i n m i c e w a s i n v e s t i g a t e d a n dc o m p a r e d w i t h t h e q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e e x p r e s s i o n o fs e l e c t e d v i r u l e n c e f a c t o r s b y i n d i v i d u a l s t r a i n s ( T a b l e 4 ) .O v e r a l l , E . t a r d a w a s 3 - t o 4 0 0 - f o l d m o r e v i r u l e n t i n m i c et h a n e i t h e r E . h o s h i n a e o r E . i c t a l u r i . D i f f e r e n c e s i n p a t h o -g e n i c p o t e n t i a l w i t h i n o r b e t w e e n s p e c i e s d i d n o t d i r e c t l yc o r r e l a t e w i t h q u a l i t a t i v e o r q u a n t i t a t i v e e x p r e s s i o n o f c e l l -a s s o ci a te d o r e x t r a c e l l u l a r f a c t o r s , a l t h o u g h E . t a r d a s t r a i n sw e r e m o r e h e m o l y t i c a n d m o t i l e t h a n E . h o s h i n a e .

DISCUSSIONFew s t u d i e s t o d a t e h a v e c e n t e r e d o n t h e r e l a t i v e p a t h o -g e n i c i t y a n d p o t e n t i a l v i r u l e n c e - a s s o c i a t e d f a c t o r s o f E d -w a r d s i e l l a s p e c i e s ; h o w e v e r , p r e v i o u s i n v e s t i g a t i o n s f r o mo u r l a b o r a t o r y ( 1 2 , 3 5 ) i n d i c a t e t h a t a n u m b e r o f u l t r a s t r u c -t u r a l a n d c e l l - a s s o c i a t e d d i f f e r e n c e s d o e x i s t among t h e s es p e c i e s . I n t h e p r e s e n t s t u d y , we e x t e n d t h e s e f o r m e r

o b s e r v a t i o n s b y i d e n t i f y i n g a d d i t i o n a l f a c t o r s p o t e n t i a l l yr e l a t e d t o p a t h o g e n i c i t y a n d d e t e r m i n e t h e i r r e l a t i v e f r e -q u e n c y i n e a c h o f t h es e s pe ci es a s r e l a t e d t o s o u r c e o fi s o l a t i o n . T h e s e d i f f e r e n c e s o f f e r p o s s i b l e e x p l a n a t i o n s f o ro b s e r v e d v a r i a t i o n s i n o v e r t p a t h o g e n i c i t y , d i s e a s e s p e c -t r u m , a n d h o s t t r o p i s m s r e c o g n i z e d i n e a c h o f t h e t h r e eE d w a r d s i e l l a s p e c i e s .One o f t h e i n t e r e s t i n g o b s e r v a t i o n s n o t e d i n t h e p r e s e n ts u r v e y c o n c e r n s t h e a b i l i t y o f E d w a r d s i e l l a s p e c i e s t o e l a b -o r a t e s i d e r o p h o r e s a n d b i n d C o n g o r e d . F o r E . t a r d a ,s i d e r o p h o r e ( i r o n c h e l a t o r ) p r o d u c t i o n m a y f a c i l i t a t e i r o na c q u i s i t i o n i n t h e h o s t a n d p r o v i d e a n e s s e n t i a l m i c r o n u t r i e n tr e l a t e d t o m i c r o b i a l v i r u l e n c e ( 2 3 ) . S e v e r a l u n d e r l y i n g c o n -d i t i o n s ( 3 3 ) l e a d i n g t o t h e h y p e r f e r r e m i c s t a t e i n h u m a n s ,s u c h a s s i c k l e c e l l h e m o g l o b i n o p at h y , a n d t h e n e o n a t a l s t a g eh a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h a v a r i e t y o f e x t r a i n t e s t i n a l E .t a r d a i n f e c t i o n s ( 2 1 , 2 5 , 2 6 , 3 4 ) . U n d e r c i r c u m s t a n c e s o f i r o nd e p r i v a t i o n i n t h e h o s t , t h e CAH o f E . t a r d a ma y p r o v i d e a ni r o n s o u r c e f o r t h e b a c t e r i u m b y c a u s i n g t h e r e l e a s e o fh e m o g l o b i n f r o m l y s e d e r y t h r o c y t e s ( 2 3 ) . I n t h e c a s e o fC o n g o r e d b i n d i n g , b o t h E . t a r d a a n d E . h o s h i n a e w e r ef o u n d t o a b s o r b t h i s d y e , w h i l e a l l E . i c t a l u r i s t r a i n s w e r en e g a t i v e f o r t h i s t r a i t . C o n g o r e d i s s t r u c t u r a l l y a n d c o n f o r -m a t i o n a l l y s i m i l a r t o p r o t o p o r p h y r i n I X , a n d b i n d i n g o f t h i sd y e c o u l d b e r e l a t e d t o t h e i n i t i a l s t a g e s o f i r o n a c q u i s i t i o n .T h e c o m m e r c i a l d y e , h o w e v e r , i s a l s o h i g h l y h y d r o p h o b i ca n d c o u l d s i m p l y r e a c t w i t h t h e c o l o n i a l s u r f a c e o f t h eb a c t e r i u m t h r o u g h h y d r o p h o b i c - h y d r o p h o b i c i n t e r a c t i o n s .F o r E . h o s h i na e, a s p e c i e s t h a t a p p a r e n t l y d o e s n o t p r o d u c es i d e r o p h o r e s y e t b i n d s t h i s c o m m e r c i al d y e a n d h a s p r e v i -o u s l y b e e n f o u n d t o b e a u t o a g g l u t i n a t i o n p o s i t i v e a n d m o d -e r a t e l y h y d r o p h o b i c ( 3 5 ) , t h e l a t t e r p o s s i b i l i t y i s more l i k e l y .A l m o s t a l l s e r o t y p e s o f E . t a r d a w e r e a l s o f o u n d t o b ei n v a s i v e a n d p r o d u c e a CAH w h e t h e r o f c l i n i c a l o r n o n h u -m a n o r i g i n ; t h e o n l y m a j o r e x c e p t i o n t o t h i s r u l e n o t i c e dw e r e f o r t h r e e CAH- f i s h i s o l a t e s . By f a r t h e p r e d o m i n a n ts y n d r o m e a s s o c i a t e d w i t h E . t a r d a i n f e c t i o n s i n h u m a n si n v o l v e s c a s e s o f g a s t r o e n t e r i t i s ( 8 ) . E . t a r d a - a s s o c i a t e dg a s t r o e n t e r i t i s s p a n s t h e f u l l p a n o r a m a o f i n t e s t i n a l s y m p -t o m s , a n d c a s e s o f c o l i t i s o r d y s e n t e r y l i k e d i s e a s e ( 1 4 , 1 7 ,1 9 ) a r e c o m p a t i b l e w i t h a n e n t e r o i n v a s i v e m e c h a n i s m a n ds u p p o r t t h e p r e s e n t a n d p r e v i o u s o b s e r v a t i o n s ( 1 2 ) r e g a r d i n gt h e i n v a s i v e n a t u r e o f m o s t E . t a r d a s t r a i n s . T h e CAH

V O L . 2 9 , 1 9 9 1

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2 0 0 0 JANDA ET AL.TABLE 4 . P a t h o g e n i c i t y o f s e l e c t e d E d w a r d s i e l l a s t r a i n s r e l a t e d to p h e n o t y p e

O r g a n i s m S t r a i n C h e m o t a l t i c CAHa P l a s m i d b r e s i s t a n c e c C h n d p a t h o g e n c i t y eE . t a r d a 1 5 9 4 7 T 8 0 3 2 1 2 0 , 3 , 2 + ( 0 . 4 ) - 1 . 0 X 1 0 8E T - 1 1 8 0 1 2 8 - + ( 0 . 5 ) - 6 . 3 x 1 0 7E T - 1 2 8 0 6 4 - + ( 0 . 4 ) + 3 . 1 x 10 63 5 9 2 - 6 4 1 8 4 1 2 0 + ( 0 . 1 ) - 4 . 4 x 1 0 8E . h o s h i n a e 3 5 0 5 T 2 5 2 - + ( 1 . 0 ) + 1 . 0 x 1 0 99 - 6 6 3 5 2 - NDf + 4 . 8 x 1 0 8E . i c t a l u r i 3 3 2 0 2 T 2 0 4 , 2 + ( 0 . 2 ) + 1 . 3 x 1 0 96 0 0 6 1 0 4 , 2 + ( 0 . 1 ) + 3.2x 1 0 8

a H e m o l y t i c t i t e r a g a i n s t s h e e p e r y t h r o c y t e s .b I n M D a .c R e s i s t a n c e ( + ) o r s u s c e p t i b i l i t y t o 6 5 % p o o l e d h u m a n s e r u m a t 1 2 0 m i n .d C h o n d r o i t i n a s e a c t i v i t y .e 5 0 % l e t h a l d o s e i n o u t b r e d S w i s s - W e b s t e r m i c e .f N D , n o t d e t e r m i n e d .9 Z o n e o f m i g r a t i o n ( s p r e a d i n g i n s o f t a g a r , i n m i l l i m e t e r s ) .

c y t o l y s i n m a y a d d i t i o n a l l y p l a y a r o l e i n i n f e c t i o n v i a e p i -t h e l i a l c e l l d e s t r u c t i o n l e a d i n g t o a n i n f l a m m a t o r y i n f i l t r a t e i nt h e i n t e s t i n a l m u c o s a o r a l t e r n a t i v e l y c o u l d d e s t r o y v i l l u sc e l l s o r d i s t u r b i n t e s t i n a l m o t o r f u n c t i o n r e s u l t i n g i n d i a r r h e a( 7 ) . T h e l a c k o f s u c h f a c t o r s i n E . i c t a l u r i ( c ou pl e d w i thg r o w t h t e m p e r a t u r e r e s t r i c t i o n s ) a n d t h e l o w e r f r e q u e n c y o fi n v a s i v e s t r a i n s a n d CAH a c t i v i t y i n E . h o s h i n a e m a yp r e c l u d e a s i m i l a r r o l e f o r t h e s e o r g a n i s m s i n human c a s e s o fg a s t r o e n t e r i t i s .I t i s c l e a r t h a t a n u m b e r o f m a j o r d i f f e r e n c e s p o t e n t i a l l yi m p o r t a n t i n t h e p a t h o g e n e s i s o f E . t a r d a i n f e c t i o n s h e l p t os e p a r a t e t h i s s p e c i e s f r o m b o t h E . i c t a l u r i a n d E . h o s h i n a e .S u c h d i f f e r e n c e s i n c l u d e a n MRHA t h a t m a y p l a y a r o l e i nc o l o n i z a t i o n , a n a c t i v e CAH, s i d e r o p h o r e s , s t r o n g c h e m o -t a c t i c m o t i l i t y , a n d i n v a s i v e c h a r a c t e r i s t i c s . T h e u n i f o r m l yn e g a t i v e r e s u l t s o b ta i ne d w i th E . i c t a l u r i s u p p o r t t h e p r e v i -o u s h y p o t h e s i s r e g a r d i n g t h e c l o n a l i t y o f t h i s s p e c i e s o n t h eb a s i s o f i s o e n z y m e a n a l y s i s , p l a s m i d c o n t e n t , a n d t h e l a c k o fb i o c h e m i c a l v a r i a b i l i t y ( 1 5 , 2 7 , 2 9 ) . R e c e n t s t u d i e s s u p p o r tp r e v i o u s s p o r a d i c o b s e r v a t i o n s t h a t t h e r e c o v e r y o f E . t a r d af r o m human f e c e s i s n o t i n v a r i a b l y a s s o c i a t e d w i t h d i a r r h e a ld i s e a s e . W h e t h e r d i s e a s e s t a t u s i n h u m a n s i s l i n k e d t os t r a i n s p o s s e s s i n g t h e r e q u i r e d v i r u l e n c e f a c t o r s r e m a i n s t ob e d e t e r m i n e d . I t i s a p p a r e n t f o r e d w a r d s i e l l a e l i s t e d i nT a b l e 4 t h a t s t r a i n s o f E . t a r d a a p p e a r t o b e m o r e v i r u l e n t i nm i c e t h a n e i t h e r E . h o s h i n a e o r E . i c t a l u r i . T h i s r e s u l t i s n o ts u r p r i s i n g s i n c e E . i c t a l u r i i s a f i s h p a t h o g e n t h a t g r o w s b e s ta t 2 5 C . H o w e v e r , E . h o s h i n a e , w h i c h g r o w s a t 3 5 C , h a d50% l e t h a l d o s e s s i m i l a r t o t h o s e o f E . i c t a l u r i , p r e s u m a b l yi n d i c a t i n g t h a t c r i t i c a l d e t e r m i n a n t s i n a d d i t i o n t o m e t a b o l i ca c t i v i t y a t e l e v a t e d t e m p e r a t u r e s a r e r e q u i r e d f o r p a t h o g e -n i c i t y . F u t u r e s t u d i e s i d e n t i f y i n g w h a t f a c t o r s a r e c r i t i c a l i nt h i s p r o c e s s seem w a r r a n t e d .

REFERENCES1 . A b b o t t , S . L . , R . P . K o k k a , a n d J . M. J a n d a . 1 9 9 1 . L a b o r a t o r yi n v e s t i g a t i o n s o n t h e l o w p a t h o g e n i c p o t e n t i a l o f P l e s i o m o n a ss h i g e l l o i d e s . J . C l i n . M i c r o b i o l . 2 9 : 1 4 8 - 1 5 3 .2 . B o c k e m u h l , J . , V . A l e k s i c , R . W o k a ts c h , a n d S . A l e k s i c . 1 9 8 3 .P a t h o g e n i c i t y t e s t s w i t h s t r a i n s o f E d w a r d s i e l l a t a r d a : d e t e c t i o no f a h e a t - s t a b l e e n t e r o t o x i n . Z e n t r a l b l . B a k t . H y g . A 2 5 5 : 4 6 4 -4 7 1 .3 . B o c k e m u h l , J . , R . P a n - U r a i , a n d F . B u r k h a r d t . 1 9 7 1 . E d w a r d s -i e l l a t a r d a a s s oc i at ed w i t h human d i s e a s e . P a t h o l . M i c r o b i o l .3 7 : 3 9 3 - 4 0 1 .4 . C o o k , R . A . , a n d J . P . T a p p e . 1 9 8 5 . C h r o n i c e n t e r i t i s a s s o c i a t e dw i t h E d w a r d s i e l l a t a r d a i n f e c t i o n i n R o c k h o p p e r p e n g u i n s . J .Am . V e t . M e d . A s s o c . 1 8 7 : 1 2 1 9 - 1 2 2 0 .

5 . C r a v e n , R . C . , a n d T . C . M o n t i e . 1 9 8 1 . M o t i l i t y a n d c h e m o t a x i so f t h r e e s t r a i n s o f P s e u d o m o n a s a er u g i n o s a u s e d f o r v i r l e n c es t u d i e s . C a n . J . M i c r o b i o l . 2 7 : 4 5 8 - 4 6 0 .6 . D e a n , A . G . , Y . C . C h i n g , R . G . W i l l i a m , a n d L . B . H a r d e n .1 9 7 2 . T e s t f o r E s c h e r i c h i a c o l i e n t e r o t o x i n u s i n g i n f a n t m i c e :a p p l i c a t i o n i n a s tu d y o f d i a r r h e a i n c h i l d r e n i n H o n o l u l u . J .I n f e c t . D i s . 1 2 5 : 4 0 7 - 4 1 1 .7 . D o n o h u e - R o l f e , A . , G . P . K a n d e l , a n d G . T . K e u s c h . 1 9 8 8 .M o l e c u l a r m e c h a n i s m s o f c y t o t o x i n s , p . 1 0 5 - 1 1 9 . I n M. J .F a r t h i n g a n d G . T . K e u s c h ( e d . ) , E n t e r i c i n f e c t i o n s . R a v e nP r e s s , New Y o r k .8 . F a r m e r , J . J . , I I I , a n d A . C . M c W h o r t e r . 1 9 8 4 . E d w a r d s i e l l a .E w i n g a n d M c W h o r t e r 1 9 6 5 , 3 7 A L , p . 4 8 6 4 9 1 . I n N . R . K r i e ga n d J . G . H o l t ( e d . ) , B e r g e y ' s m a n u a l o f s y s t e m a t i c b a c t e r i o l -o g y , v o l . 1 . T h e W i l l i a m s a n d W i l k i n s C o . , B a l t i m o r e .9 . G r i m o n t , P . A . D . , F . G r i m o n t , C . R i c h a r d , a n d R . S ak a z a k i .1 9 8 0 . E d w a r d s i e l l a h o s h i n a e , a n ew s p e c i e s o f E n t e r o b a c -t e r i a c e a e . C u r r. M i c ro b i o l. 4 : 3 4 7 - 3 5 1 .1 0 . H a w k e , J . P . 1 9 7 9 . A b a c t e r i u m a s s o c i a t e d w i t h d i s e a s e o fp o n d - c u l t u r e d c h a n n e l c a t f i s h , I c t a l u r u s p u n c t a t u s . J . F i s h .R e s . B o a r d C a n . 3 6 : 1 5 0 8 - 1 5 1 2 .1 1 . H a w k e , J . P . , A . C . M c W h o r t e r , A . G . S t e i g e r w a l t , a n d D . J .B r e n n e r . 1 9 8 1 . E d w a r d s i e l l a i c t a l u r i s p . n o v . , t h e c a u s a t i v ea g e n t o f e n t e r i c s e p t i c e m i a o f c a t f i s h . I n t . J . S y s t . B a c t e r i o l .3 1 : 3 9 6 - 4 0 0 .1 2 . J a n d a , J . M . , S . L . A b b o t t , a n d L . S . O s h i r o . 1 9 9 1 . P e n e t r a t i o na n d r e p l i c a t i o n o f E d w a r d s i e l l a s p p . i n H E p - 2 c e l l s . I n f e c t .Immun. 5 9 : 1 5 4 - 1 6 1 .1 3 . J o r d a n , G . W . , a n d W. K . H a d l e y . 1 9 6 9 . Human i n f e c t i o n w i t hE d w a r d s i e l l a t a r d a . A n n . I n t e r n . M e d . 7 0 : 2 8 3 - 2 8 8 .1 4 . K o u r a n y , M . , M. A . V a s q u e z , a n d R . S a e n z . 1 9 7 7 . E d w a r d s i e l -l o s i s i n m a n a n d a n i m a l s i n P a n a m a : c l i n i c a l a n d e p i d e m i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s . Am . J . T r o p . M e d . H y g . 2 6 : 1 1 8 3 - 1 1 9 0 .1 5 . L o b b , C . J . , a n d M. R h o a d e s . 1 9 8 7 . R a p i d p l a s m i d a n a l y s i s f o ri d e n t i f i c a t i o n o f E d w a r d s i e l l a i c t a l u r i f r o m i n f e c t e d c h a n n e lc a t f i s h ( I c t a l u r u s p u n c t a t u s ) . A p p l . E n v i r o n . M i c r o b i o l . 5 3 :1 2 6 7 - 1 2 7 2 .1 6 . M a r q u e s , L . R . M . , M. R . F . T o l e d o , N . P . S i l v a , M. M a g a l h a e s ,a n d L . R . T r a b u l s i . 1 9 8 4 . I n v a s i o n o f HeLa c e l l s b y E d w a r d s -i e l l a t a r d a . C u r r . M i c r o b i o l . 1 0 : 1 2 9 - 1 3 2 .1 7 . M a r s h , P . K . , a n d S . L . G o r b a c h . 1 9 8 2 . I n v a s i v e e n t e r o c o l i t i sc a u s e d b y E d w a r d s i e l l a t a r d a . G a s t r o e n t e r o l o g y 8 2 : 3 3 6 - 3 3 8 .1 8 . M e y e r , F . P . , a n d G . L . B u l l o c k . 1 9 7 3 . E d w a r d s i e l l a t a r d a , anew p a t h o g e n o f c h a n n e l c a t f i s h ( I c t a l u r u s p u n c t a t u s ) . A p p l .M i c r o b i o l . 2 5 : 1 5 5 - 1 5 6 .1 9 . N a g e l , P . , A . S e r r i t e l l a , a n d T . J . L a y d e n . 1 9 8 2 . E d w a r d s i e l l at a r d a g a s t r o e n t e r i t i s a s so c ia te d w i t h a p e t t u r t l e . G a s t r o e n t e r -o l o g y 8 2 : 1 4 3 6 - 1 4 3 7 .2 0 . N i s h i b u c h i , M . , M. A r i t a , T . H o n d a , a n d T . M i w a t a n i . 1 9 8 8 .E v a l ua t i on o f a n o n i s o t o p i c a l l y l a b e l e d o l i g o n u c l e o t i d e p r o b e t od e t e c t t h e h e a t - s t a b l e e n t e r o t o x i n g e n e o f E s c h e r i c h i a c o l i b y

J . C L I N . M I C R O B I O L .

7/30/2019 1997.fullhoshinae

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EDWARDSIELLA VIRULENCE FACTORS 2 0 0 1t h e DNA c o l o n y h y b r i d i z a t i o n t e s t . J . C l i n . M i c r o b i o l . 2 6 : 7 8 4 -7 8 6 .2 1 . O k u b a d e j o , 0. A . , a n d K . 0. A l a u s a . 1 9 6 8 . N e o n a t a l m e n i n g i t i sc a u s e d b y E d w a r d s i e l l a t a r d a . B r . M e d . J . 3 : 3 5 7 - 3 5 8 .2 2 . P a u l a , S . J . , P . S . D u f f e y , S . L . A b b o tt , R . P . K o k k a , L . S .O s h i r o , J . M. J a n d a , T . S h i m a d a , a n d R . S a k a z a k i . 1 9 8 8 .S u r f a c e p r o p e r t i e s o f a u t o a g g l u t i n a t i n g m e s o p h i l i c a e r o m o n a d s .I n f e c t . Immun. 5 6 : 2 6 5 8 - 2 6 6 5 .

2 3 . P a y n e , S . M. 1 9 8 8 . I r o n a n d v i r u l e n c e i n t h e f a m i l y E n t e r o b a c -t e r i a c e a e . C r i t . R e v . M i c r o b i o l . 1 6 :8 1 - 11 1.2 4 . Q a d r i , F . , S . H a q , a n d I. C i z n a i r . 1 9 8 9 . H e m a g g l u t i n a t i n gp r o p e r t i e s o f S h i g e l l a d y s e n t e r i a e t y p e 1 a n d o t h e r S h i g e l l as p e c i e s . I n f e c t . Immun. 5 7 : 2 9 0 9 - 2 9 1 1 .2 5 . R a o , K . R . P . , J . S h a h , K . R . R a ja s h ek a r ai a h , A . R . P a t e l , D . B .M i s k e w , a n d P . S . F e n n e w a l d . 1 9 8 1 . E d w a r d s i e l l a t a r d a o s t e o -m y e l i t i s i n a p a t i e n t w i t h SC h e m o g l o b i n o p a t h y . S o u t h . M e d . J .7 4 : 2 8 8 - 2 9 2 .2 6 . S a c h s , J . M . , M. P a c i n , a n d G . W. C o u n t s . 1 9 7 4 . S i c k l eh e mo g l o b i n o pa t h y a n d E d w a r d s i e l l a t a r d a m e n i n g i t i s . Am . J .D i s . C h i l d . 1 2 8 : 3 8 7 - 3 8 8 .2 7 . S h o t t s , E . B . , V . S . B l a z e r , a n d W. D . W a l t m a n . 1 9 8 6 . P a t h o -g e n e s i s o f e x p e r i m en t a l E d w a r d s i e l l a i c t a l u r i i n f e c t i o n s i n c h a n -n e l c a t f i s h ( I c t a l u r u s p u n c t a t u s ) . C a n . J . F i s h . A q u a t . S c i .

4 3 : 3 6 - 4 2 .2 8 . S m i t h , R . F . , a n d N . P . W i l l e t t . 1 9 6 8 . R a p i d p l a t e m e t h o d f o rs c r e e n i n g h y a l u r o n i d a s e a n d c h o n d r o i t i n s u l f a t a s e - p r o d u c i n gm i c r o o r g a n i s m s . A p p l . M i c r o b i o l . 1 6 : 1 4 3 4 - 1 4 3 6 .2 9 . S t a r l i p e r , C . E . , W. B . S c h i l l , E . B . S h o t t s , a n d W. D . W a l t m a n .1 9 8 8 . I s o e n z y m e a n a l y s i s o f E d w a r d s i e l l a i c t a l u r i . M i c r o b i o sL e t t . 3 7 : 8 1 - 8 7 .3 0 . T a m u r a , K . , R . S a k az ak i , A . C . M c W h o r t e r , a n d Y . K o s a k o .1 9 8 8 . E d w a r d s i e l l a t a r d a s e r o t y p i n g s c h e m e f o r i n t e r n a t i o n a luse. J . C l i n . M i c r o b i o l . 2 6 : 2 3 4 3 - 2 3 4 6 .3 1 . W a k a b a y a s h i , H . , a n d S . E g u s a . 1 9 7 3 . E d w a r d s i e l l a t a r d a ( P a r a -c o l o b a c t r u m a n g u i l l i m o r t i f e r u m ) a s s o c i a t e d w i t h p o n d - c u l t u r e de e l d i s e a s e . B u l l . J p n . S o c . S c i . F i s h . 3 9 : 9 3 1 - 9 3 6 .3 2 . W a t s o n , J . J . , a n d F . H . W h i t e . 1 9 7 9 . H e m o l y s i n s o f E d w a r d s -i e l l a t a r d a . C a n . J . C o m p . M e d . 4 3 : 7 8 - 8 3 .3 3 . W e i n b e r g , K . D . 1 9 7 8 . I r o n a n d i n f e c t i o n . M i c r o b i o l . R e v .4 2 : 4 5 - 6 6 .3 4 . W i l s o n , J . P . , R . R . W a t e r e r , J . D . W o f f o r d , a n d S . W.C h a p m a n . 1 9 8 9 . S e r i o u s i n f e c t i o n s w i t h E d w a r d s i e l l a t a r d a .A r c h . I n t e r n . M e d . 1 4 9 : 2 0 8 - 2 1 0 .3 5 . Wong, J . D . , M. A . M i l l e r , a n d J . M. J a n d a . 1 9 8 9 . S u r f a c ep r o p e r t i e s a n d u l t r a s t r u c t u r e o f E d w a r d s i e l l a s p e c i e s . J . C l i n .M i c r o b i o l . 2 7 : 1 7 9 7 - 1 8 0 1 .

V O L . 2 9 , 1 9 9 1