5/24/2018 7 Antibiograma

1/6

1

ANTIBIOGRAMA

Prin antibiogram se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate dintr-un produspatologic fa de diferite chimioterapice sau fa de concentraii diferite ale unuichimioterapic. Se evideniaz efectul bacteriostatic: inhibarea dezvoltrii bacteriei de ctre

chimioterapice. n anumite concentraii chimioterapicele au i un efect bactericid.Antibiograma se efectueazdupizolarea n culturpuri identificarea agentului etiologic.Tehnici: antibiograma prin metoda difuzimetric, antibiograma prin metoda diluiilor n mediilichide, metoda cu antibiotic ncorporat n mediu semisolid (galerii ATB), E-test (Testul E).

1) Antibiograma prin metoda difuzimetric - se poate efectua pe mediul MuellerHinton; pentru bacterii cu necesiti de culturspeciale se utilizeazmedii corespunztoare (deexemplu: gelozsnge sau gelozocolatie). nsmnarea pe mediu se poate efectua astfel: 1-nsmnarea n pnz cu pipeta cu care se rspndete uniform cultura bacterian lichiddiluat1/100-1/1 000 pe suprafaa mediului de cultur, iar excesul se aspiri se introduce ndezinfectant; 2 - nsmnarea cu tamponul mbibat n cultura bacterian lichid cu care se

nsmneaz toat suprafaa mediului. Cultura lichid are o anumit densitate bacterianexprimatn McFarland (de ex. 0,5 McFarland) i msuratcu un aparat numit Densimat.

Pe suprafaa mediului de cultur nsmnat i uscat la temperatura camerei, se dispun laanumite distane microcomprimate standard cu anumite concentraii de chimioterapice(g/ml).

Interpretareaantibiogrameidifuzimetrice:se face dupo incubare de 18-24 ore la 37oC.n jurul microcomprimatelor se realizeazun gradient de concentraie prin difuziunea localachimioterapicelor care pot inhiba dezvoltarea bacteriei ntr-o zonnumitzonde inhibiie.Diametrul zonei de inhibiie se msoarcu rigla i se exprimn mm, iar valorile obinute secomparcu valori standard din tabelele interpretative de laborator, apreciindu-se bacteria cafiind sensibil (S) sau intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) fade chimioterapiceletestate.

5/24/2018 7 Antibiograma

2/6

2

1. Pseudomonas aeruginosa 2. Serratia marcescens

3. Escherichia coli 4. Escherichia coli cu beta-lactamazcu spectruextins (BLSE): sinergism ntre Amoxicilin-Acidclavulanic (AMC) i Cefotaxim (CTX)

5. Klebsiella pneumoniae 6. Klebsiella pneumoniae cu beta-lactamazcu spectruextins (BLSE): sinergism ntre Amoxicilin-Acid clavulanic(AMC) i Cefotaxim (CTX)

5/24/2018 7 Antibiograma

3/6

3

7. Staphylococcus aureus 8. Salmonella enterica serovar. typhimurium- Antagonism ntre Clindamicin(DA)-Eritromicin(E)

9. Proteus mirabilis 10. Haemophilus influenzae

11.Antibiograma pe mediul Mueller Hinton cu snge - incubatn anaerobioz(Bacteroides fragilis)

5/24/2018 7 Antibiograma

4/6

4

2) Metoda diluiilor n medii lichide-se efectueaza diluii crescnde de chimioterapic n 2 ml bulion glucozat steril;- se adaugo picturdin cultura bacterian(o culturde 24 ore obinutn bulion glucozat)n fiecare eprubet;

- ultima eprubeteste eprubeta martor i nu conine chimioterapic;-se pot utiliza 10 sau 11 concentraii diferite din fiecare chimioterapic;-pentru fiecare chimioterapic existdiluii de pornire;- eprubetele se incubeaztimp de 18-20 ore la 37 0C.

Interpretarea antibiogramei: ultima eprubet n care nu se constat cu ochiul liber omultiplicare bacterian(mediul este limpede) indicCMI (Concentraia MinimInhibitorie).-Prin adugarea unui indicator de pH (de ex.: rou fenol) n bulionul glucozat, se poate reducetimpul de citire al antibiogramei, deoarece modificarea culorii mediului prin multiplicarea

bacteriei apare mai repede dect tulburarea mediului.

3) Metoda cu antibiotic ncorporat n mediu semisolid- este o micrometodprindiluie simplificat(se utilizeazgalerii ATB).-Se lucreazcu douconcentraii diferite de chimioterapic: o concentraie mai mic (c) i oconcentraie mai mare (C) de chimioterapice introduse n douiruri de godeuri dintr-o placde plastic, de unic utilizare (sunt 16 perechi de godeuri, din care 4 godeuri nu coninchimioterapic i reprezintmartorii).-Se adaugn fiecare godeu un inocul din cultura bacterianlichidde o anumitdensitate (deex.: 0,5 McFarland).-Se incubeaz18-24 ore la 37 0C i apoi se interpreteazantibiograma: - mediu limpede laambele concentraii de chimioterapice (la c i C): bacterie sensibil (S); mediu tulbure nambele godeuri (la c i C): bacterie rezistent(R); mediu tulbure la concentraia mai mic(c)i limpede la concentraie mai mare (C): bacterie intermediar sensibil(I).

Exemple:Klebsiella pneumoniae (ATB G-5):

- bacteria este sensibilfade Imipenem (IMI), Ciprofloxacin (CIP) - n ambele godeuri (la c i C) mediuleste limpede (multiplicarea bacteriei este inhibat);- bacteria este rezistentfade Amoxicilin-Acid clavulanic (AMC), Cefotaxim (CTX) - n ambele godeuri (lac i C) mediul este tulbure deoarece bacteria s-a multiplicat.

5/24/2018 7 Antibiograma

5/6

5

Pseudomonas aeruginosa (ATB PSE):- bacteria este intermediar sensibilfade Aztreonam (ATM) deoarece se multiplicla concentraia mai mic(c) de chimioterapic (culoare verde-albastrprin multiplicarea bacteriei) i nu se dezvolt la concentraia maimare (C) (mediu limpede).

E-test (Testul E)

E-test (sau Testul E) este o metod n care se utilizeaz langhete (bandelete) subiri, deplastic inert, neporoase, (5 mm lime i 50 mm lungime) impregnate cu un gradientexponenial de chimioterapic; la un capt al langhetei este precizat tipul de chimioterapic

printr-un simbol (de ex.: E pentru Eritromicin, TX pentru Cefotaxim); langheta prezint oscal gradat util pentru determinarea concentraiei minime inhibitorii (CMI); diluiile dechimioterapic cu care se lucreaz (15 diluii) pot svarieze, de exemplu ntre 0,016 i 256g/ml sau ntre 0,002 i 32 g/ml (cifra 0 a unitilor nu este trecut pe langhet, astfel

prezena unui punct urmat de alte cifre se citete astfel: .016=0,016, .75=0,75, .094=0,094).Gradientul de concentraie este obinut n jurul langhetei prin difuziunea chimioterapicului nmediu.

E-test pentruStreptococcus pneumoniaetestat fade Cefotaxim (TX)

5/24/2018 7 Antibiograma

6/6

6

Dupincubare la termostat, timp de 16-18-24-48 ore (n funcie de microorganismul testat), sedetermin valoarea CMI direct pe langhet - acolo unde zona de inhibiie o intersecteaz(zona de inhibiie este o zoncu aspect de elips, frculturbacterian, care poate saparn jurul langhetei). Aprecierea bacteriei ca fiind Sensibil(S) sau Intermediar sensibil(I) sauRezistent(R) se face cu ajutorul unor tabele de interpretare ce nsoesc testul.