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ABRIL 2005
Aleida Villa Espinosa, Rafael Baselga, Ana Fernández, Elena Gracia,
Iñaki Albizu
ANTIBIOGRAMAS EN DISENTERIA
Difusión en agar con discos
Se utiliza para determinar la sensibilidad de bacterias aerobias de
crecimiento rápido y, en condiciones estándar, el diámetro del halo
de inhibición es inversamente proporcional a la Concentración
Mínima Inhibitoria (MIC). Los resultados son orientativos, es
cualitativa y no es válida para Brachyspiras.
Antibiograma en agar Mueller Hinton incubado a 37º C 18 h. Los
discos contienen diferentes concentraciones de antibióticos que
difunden al medio impidiendo el crecimiento bacteriano.
Prueba de las diluciones (MIC)
La MIC es la menor concentración de antibiótico en la que no hay
crecimiento. La forma adecuada de expresar la MIC es refiriéndose
al 50% (MIC50) y al 90% (MIC90) de las cepas ensayadas (mínimo 50
cepas) y es la concentración a partir de la cual el 50% (o el 90%)
de las cepas no crecen. Pone de manifiesto el grado de resistencia
de la población, la sensibilidad de cada especie y de cada
cepa.
Para determinar la sensibilidad a los antibióticos se
utiliza:
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Sensible: Cuando el microorganismo infectante se inhibe por las
concentraciones que un antibiótico alcanza en los tejidos
administrado a las dosis usuales. Un microorganismo es considerado
sensible si la MIC de este es inferior a la mitad de la
concentración media alcanzada en la sangre, o es inferior a la
cuarta parte de la cifra media de las concentraciones
máximas.
Medianamente sensible: Si el microorganismo sólo es inhibido por
las concentraciones que el antibiótico alcanza en la sangre o en
los tejidos cuando se administra la mayor dosis posible del
mismo
Resistente: Si el microorganismo no resulta afectado por las
concentraciones que normalmente se alcanzan en el organismo, y son
toleradas por él.
CRITERIOS DE UTILIZACION DE LOS ANTIBIOTICOS
Los antibióticos a los que las bacterias son medianamente
sensibles, no se deben utilizar, a no ser: (1) que normalmente
alcancen mayor concentración en el foco de infección, o (2) que no
se disponga de otro agente antimicrobiano, en cuyo caso se deben
administrar las mayores dosis posibles.
Estos conceptos establecen una relación entre la concentración que
los distintos fármacos alcanzan en los tejidos y la MIC, la cual
constituye el parámetro de referencia para determinar la
sensibilidad.
1
3
2
Factores dependientes de las bacterias:
Es posible "in vivo" las bacterias sean más sensibles porque
pierdan factores de virulencia.
Factores dependientes del hospedador:
Es posible que las bacterias sensibles no resulten afectadas debido
a su localización intracelular, su fase metabólica, presencia de
pus, o productos de necrosis, etc.
Factores dependientes del fármaco:
Se incluyen: la administración de dosis insuficientes, la
utilización de una vía de administración incorrecta, el empleo de
un fármaco no apropiado, la inactivación del fármaco, tanto in vivo
como in vitro y la escasa penetración del fármaco en los tejidos,
debida a la existencia de barreras fisiológicas o de extensas zonas
de necrosis.
RESULTADO CLINICO
Los resultados pueden ser no válidos para pronosticar el resultado
clínico:
a
c
b
*(Burch, D.G.S.,
http://www.octagon-services.co.uk/articles/ileitis.pdf)
ANTIBIOTICOS SELECCIONADOS PARA EL CONTROL DE LOS PROCESOS
DIGESTIVOS EN CEBO*
Tilosina
Lincomicina
Tiamullina
Valnemulina
Clortetraciclina
Espectinomicina
Apramicina
Neomicina
Sulfamidas/Trimetropin
Amoxicilina
Penicilina
ANTIMICROBIANO
L.
Intra-
cellularis.
B.
Hyody-
senteriae
B.
Pilosicoli
C.
Perfrin-
gens
Lincomicina 110 ppm
Lincomicina 220 ppm
Tiamulina 110 ppm
Tiamulina 220 ppm
Valnemulina 75 ppm
Valnemulina 200 ppm
Tilosina 100 ppm
ESQUEMA DE TRABAJO CON BRACHYSPIRAS
Esquema de trabajo para determinar la sensibilidad de Brachyspira
sp. a los agentes antimicrobianos utilizando la prueba de las
diluciones y lectura en Citometría de Flujo.
En las placas de ensayo de 96 pocillos de un ml de capacidad se
ponen los medios de crecimiento (1 ml; BHI con 10% de Suero Fetal
Bovino) donde se multiplicarán las Brachyspiras.
En otras microplacas de 96 pocillos se preparan las 8 diferentes
concentraciones decrecientes (1/2) de cada antibiótico
(Lincomicina, Tiamulina, Tilosina, Valnemulina).
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Las diluciones dobles de los antibióticos se realizan pasando
consecutivamente 150µl con una pipeta multicanal a otro pocillo con
150µl del medio de crecimiento sin antibiótico. La placa con las
diferentes concentraciones de antibiótico queda lista. En cada
placa se dejan pozos control con medio sin antibiótico para los
controles de pureza y la evaluación del crecimiento de la población
a 0 y 48 h.
Los antibióticos concentrados se añaden a las microplacas donde se
prepararan las diluciones de los antibióticos.
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Las diluciones de antibiótico preparadas se traspasan a las placas
de ensayo.
Las cepas se preparan a partir de un cultivo de 48 horas a 42ºC en
agar Columbia.
En cada pocillo de
las placas de ensayo tenemos una concentración y un antibiótico
diferente, tal y como se van a ensayar.
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Se deposita 1,5 ml de BHI sin suero sobre las placas con los
cultivos antes de recoger las bacterias con el asa sobre las áreas
de hemólisis.
La suspensión bacteriana se mezcla bien y se distribuye en los
microtubos de las placas de ensayo.
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Las placas de ensayo se incuban en anaerobiosis para permitir el
crecimiento de las Brachyspiras.
Se confirma la pureza del inóculo a partir de uno de los microtubos
de control.
Para realizar la lectura objetiva de los pocillos, las bacterias
que se han multiplicado se diluyen en PBS antes de contarlas en el
citómetro. Un citómetro cuenta el número de bacterias presentes en
un vólumen determinado al hacerlas pasar por un microcapilar.
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El citómetro lee cada una de las bacterias presentes en el medio de
crecimiento (cada punto es una bacteria) y además de contarlas para
estimar su concentración, utilizando Ioduro de Propidio como
marcador estima su viabilidad.
La lectura de los datos se realiza en un citómetro de flujo de un
modo totalmente objetivo, comparando el crecimiento y viabilidad de
las bacterias en cada uno de los pocillos (un pocillo por cepa y
dilución de antibiótico) y su viabilidad con el crecimiento y
viabilidad promedio que se obtiene en los pocillos control.
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Aislamiento: Brachyspira hyodysenteriae
Antibiograma: Se utilizó un método cuantitativo de microdilución en
caldo BHI enriquecido con el 10% de Suero Fetal Bovino y se analizo
por Citometría de Flujo después de 48 horas de incubación a 42ºC
frente a un panel de 4 antibióticos y 8 diluciones de cada uno de
ellos.
Punto de corte: El punto de corte estimado corresponde al 50% de
inhibición del crecimiento contra el control de la misma cepa sin
antibiótico.
ANTIBIOGRAMA FRENTE A BRACHYSPIRAS
Gráfico1
0.7958810597
0.0296225896
0.3502658802
0.0076527733
0.7522466141
0.0125796971
0.3471160676
0.0059210465
0.4641929829
0.0081155173
0.3348304495
0.0040182093
0.4346091298
0.0069760184
0.3332949726
0.0037271111
0.3947365109
0.0066330236
0.3122889336
0.0028097676
0.2697740156
0.006257535
0.3030308994
0.002168247
0.2498954761
0.0042789901
0.2764801264
0.0016244091
0.218554981
0.0036066124
0.253322005
0.0010016783
SENSIBILIDAD IN VITRO:
Sensibilidad Clínica: Valor obtenido en la menor concentración por
debajo del punto de corte (50% de inhibición) multiplicado por 3.
Este valor se compara con las concentraciones que se alcanzan en
intestino.
SENSIBILIDAD CLÍNICA:
CONCLUSIONES: La cepa estudiada no presenta ninguna resistencia
frente a ATB B y el ATB D, mientras que tanto frente a la ATB A
como frente a ATB C podemos sospechar que estamos muy cerca del
límite de sensibilidad clínica.
RESULTADOS
Todos los antibióticos son capaces de inhibir el crecimiento de las
bacterias en alguna de las concentraciones ensayadas
ATB A
ATB B
ATB C
ATB D
en intestino
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ABRIL 2005
Exopol inicia su campaña 2005 "Si no queda satisfecho le devolvemos
su dinero", en la que la empresa devolverá a los clientes nuevos
del año 2005 todo el dinero gastado en autovacunas frente a
Disentería Porcina, siempre que los profesionales manifiesten
no estar conformes con su eficacia. No es necesario justificar
nada, la única condición que existe es un límite en el número total
de dosis a reembolsar.
Si no queda satisfecho le devolvemos su dinero
Exopol quiere demostrar de esta manera el éxito alcanzado con estos
productos y la confianza en su buen funcionamiento. Como todo el
trabajo de la empresa, la campaña
es exclusiva para veterinarios.