H. Bobby Gaspar,1, Emma Bjorkegren, Kate Parsley, Kimberly C. Gilmour, Doug King, Joanna Sinclair, Fang Zhang, Aris Giannakopoulos, Stuart Adams, Lynette D. Fairbanks, Jane Gaspar, Lesley Henderson, Jin Hua Xu-

Bayford, E. Graham Davies, Paul A. Veys, Christine Kinnon,1 and Adrian J. Thrasher1

Molecular Immunology Unit, Institute of Child Health, University College London, 30, Guilford Street, London WC1N

1EH, UK Department of Clinical Immunology and Bone Marrow Transplantation, Great Ormond Street Hospital NHS Trust,

Great Ormond Street, London WC1N JH, UKPurine Research Laboratory, Guys and St Thomas’ Hospital,

London Bridge Road, London SE RT, UKBui Laurent

Introduction

ADA = Enzyme qui catalyse l'hydrolyse de l'adénosine en inosine avec l'élimination de l'ammoniaque.

L'inosine elle-même donnant l'hypoxanthine sous l'influence d'une purine nucléoside phosphorylase. L'inhibition de l'adénosine déaminase tend à augmenter la concentration d'adénosine.

ADA-SCID

Un déficit de l’Adenosine DéAminase (ADA) entraine un développement anormal des cellules T, B et NK.

Ce qui donne un déficit immunitaire combiné sévère (SCID, severe combined immunodeficiency disorder).

Maladie génétique rare qui sans traitement cause des infections chroniques et des troubles du développement pouvant amener à la mort dans les premières années de la vie.

Traitements possiblesADA-SCID patient

Untreated

DeathInfectio

n

HSCTransplantation

PEG-ADA Gene Therapy

Survival > 85%Good

immunological and

Biochemical correction

Overall survival goodVariable immun

reconstitution Lymphopenia

Defects LT< Thymus output

Susceptibility to Viral infection

?

Thérapie GéniqueTri des cellules CD34+

de la moelle osseuse du patient (PEG-ADA)

25-30 % de transduction efficace

on réinjecte 1,4 M de CD34+ADA+/kg

Arrêt pendant 1 mois du traitement PEG-ADA

Après 2j d’un traitement Melphalan

Patient 1 (P1)

Diagnostiquer ADA-SCID à 2 mois.Sans donneur compatible => débute le

traitement PEG-ADA.Après 3 ans de traitement :

(+)- Correction

Métabolique- Statut clinique bon- Pas de pb d’infection

(-)- Lymphopénie T- Production faible d’Ig- Mauvais

fonctionnement Thymique

- Disparition des cellules T naïves

BioéthiqueThérapie génique approuvée par : - UK Gene Therapy Advisory Committee - Medecine and Health Core Control Agency - Local Institutional Research Ethics Committee

Condition pour participer au Programme : - Confirmation ADA-SCID (Génétique ou

Biochimique) - Pas de greffe possible - Echec du traitement PEG-ADA - Accord parental

Après 2 ans de Thérapie génique les premiers

résultats

Immune Reconstitution

Diversity of the T cell Repertoire

Metabolic Correction

Immune Reconstitution (1)

Immune Reconstitution (2)

Profil de prolifération normal des LT après stimulation par CD3 et PHA (phytohémaglutinine)

Augmentation des LT, NK, LT naïfs nouvellement formésRéinitiation de la Thymopoiëse

Diversity of the T cell Repertoire

Après l’analyse des TCR Vβ on a montré qu’il y avait un usage de tous les segments Vβ (40aine)

Les spectratypes du CDR3 des TCR Vβ montre une évolution vers la complexité du répertoire T

On ne trouve pas d’anomalie ou de pathologie lié à une prolifération non contrôlée des lymphocytes

Metabolic Correction

Après 1 an de traitement génique on observe une activité ADA des érythrocytes = 3-5 nmol/mg Hb/h

Cela suggère que la thérapie a amené des GR exprimant des ADA de façon stable

Proviral Copy Number and Lineage-Specific Integration

Analysis

Analysis of proviral integration sites

Les produits de PCR montre une multitude de site d’intégration

Le séquençage de chaque intégrant est en cours

ConclusionMise en place d’un protocole d’autogreffe pour la

thérapie génique = essai clinique.

Après 2 ans de thérapie = Tableau + (LT naïfs en hausse, prolifération normale à une stimulation des LT, TREC, …)

Rétablissement de l’immunité humorale faible (peut être plus longue due au Lthelper)

=> On continue la surveillance clinique