方案设计

• 根据生理指标数量、取材次数

①每一个生理指标都需要8-10棵材料：对于大型植物，8-10棵材料剪碎后可分成6份甚至9份，用于2-3个生理指标测定；对于小型植物8-10棵甚至更多材料剪碎后可分成3份，用于1个生理指标测定；

②本次课题研究中取材次数一般不少于3次；

• 根据形态学指标测定所需的最小样本量

①大型植物：15；2-3个重复

②小型植物：30； 2-3个重复

方案设计中的材料数量的确定

材料种植与处理1 1. 盐胁迫对小麦和蚕豆萌发过程中胚乳与真叶的生理变化

的影响 （周1班）

材料种植方法：详见网上，一般周期短的水培，周期长的建议土培

材料处理：

盐处理：探究子叶或胚乳的，直接培养于0、150mM和250mM三个浓度的NaCl的培养皿或培养盘上；第一片真叶完全展开前每隔3天取材分析，第一片真叶完全展开后每隔6天取材分析，直到观察到黄化衰老为止；

探究第一对真叶的，真叶原基可见时，以0、150mM的NaCl处理；从处理开始每隔3天测定光合速率、叶绿素含量（用仪器测定）；从处理开始每隔3天测定其它生理指标，直到观察到黄化衰老为止

材料种植与处理2 2. 拟南芥突变体对ER 胁迫（DTT条件）的响应变化（周2、

4班）

2-1. 拟南芥和gaap4 mapr3突变体在幼苗期的生长差异以及DTT对拟南芥Col和gaap4 mapr3突变体萌发的影响差异（萌发率、根长、侧根数、真叶发生率）

• 生长差异: 平板竖直培养： 1/2MS盐+1.5% 蔗糖+0.7%琼脂；每隔2天拍照并统计分析根长、侧根数

• DTT对萌发的影响差异：平板竖直培养：1/2MS盐+1.5% 蔗糖+0.7%琼脂+不同浓度的DTT（0、2、5、10mM DTT），每2天拍照并统计分析萌发率、真叶发生率，第10天测定生物量

材料种植与处理3

2. 拟南芥突变体对ER 胁迫（DTT条件）的响应变化（周2、4班）

2-2. 拟南芥和gaap4 mapr3突变体在幼苗期的根系对不同DTT浓度的敏感性差异（根长、侧根数、根毛长短、电导率）

• 平板竖直培养：1/2MS盐+1.5% 蔗糖+0.7%琼脂+不同浓度的DTT（0、1、2、3mM DTT），从种植第3天开始取材，每3天拍照并统计分析根长、侧根数、根毛长短，第2、5天测定电导率和生物量

ft-3对ABA的敏感性降低；

回复突变体对ABA敏感性增加。

根系的微观照片

材料种植与处理4

2. 拟南芥突变体对ER 胁迫（DTT条件）的响应变化（周2、4班）

2-3. 无菌培养条件下,拟南芥和gaap4 mapr3突变体在幼苗期的地上部分对不同DTT浓度的敏感性差异（叶片黄化率、 可溶性糖、可溶性蛋白质、生物量(包括含水量)、叶绿素含量、MDA含量、电导率）

• 平板正向培养：1/2MS盐+1.5% 蔗糖+0.7%琼脂+不同浓度的DTT（0、2、3mM DTT），从种植第5天开始取材，每间隔5天取材测定生理指标，共取材3-4次。

正向培养

*点样需要牙签，对于拟南芥来讲牙签比移液器好用

材料种植与处理5 2. 拟南芥突变体对ER 胁迫（DTT条件）的响应变化（周2、

4班）

2-4. 土壤培养条件下，拟南芥和gaap4 mapr3突变体在幼苗期的地上部分对不同DTT浓度的敏感性差异（叶片黄化率、可溶性糖、可溶性蛋白质、生物量(包括含水量)、叶绿素含量、MDA含量、电导率）（2组）

• 土壤培养：每盆最多种植16棵

• 材料处理：生长8-10天的苗，开始用含1mM DTT的0.01%花无缺盐浇，注意对照也要用含等体积与DTT的溶剂（即DMSO）的0.01%花无缺盐浇浇的时候是干透浇透的原则，连续处理2周（即处理两次）。从第一次处理开始每隔3天测定叶绿素含量（用仪器测定）；从第一次处理开始每隔3天测定生理指标，直到观察到第一对真叶黄化衰老为止

拟南芥春化处理方法

• 放于一个1.5ml的Ep管中，用70%的酒精消毒5min，倒去酒精，用蒸馏水冲洗种子4次后，加入0.5ml无菌蒸馏水，于4℃冰箱春化2-3天，点播于土壤中培养

生理指标与形态指标的统一

图1 10-27小麦种子萌发情况

图2 可溶性糖含量的变化

强调

• 生物量：鲜重、干重（平均每株或每片叶子）

• 生理指标：换算为每g 或mg鲜重中的酶活或含量。（不是浓度！！！）

• 鲜重与电导率需要取材时及时测定，其它指标可以测定鲜重记录后-20度保存，后期测定；

• 按照时间节点取12株新鲜拟南芥的地上部分，剪碎，分成三份并分别称其鲜重 ；如果材料过少，用微量提取，96孔板进行比色测定。

• 进度安排：以周为节点来安排

进度安排示例 我们的实验进度按如下：

• 10.23- 10.28方案完善和材料准备。先把300颗种子放在瓷盆里萌发，它萌发之后移到土壤里。把土壤装在45个花盆，每个花盆移6-7个蚕豆。等蚕豆萌发之后开始取材。期间隔两天去看一次及拍照观察蚕豆的长叶过程。

• 10.29-11.4.看到大豆种子发芽，反正它子叶长出时开始试剂的准备

• 11.5-11.7冰箱储存备后 、可溶性糖含量和蛋白质含量等生理指标的测定；

• 11.8-11.10可溶性糖含量和蛋白质含量等生理指标测定；

• 11.11-11.13可溶性糖含量和蛋白质含量等生理指标测定；

• 11.14-11.16 可溶性糖含量和蛋白质含量等生理指标测定；

• 11.17-11.19可溶性糖含量和蛋白质含量等生理指标测定。 注：假如实验过程中让种子萌发的时间太长了的话，我们整个实验的结

束时间会要延时。不过我们的各次做实验的日差还是按我们算的日差来做成。

• 材料种植方法：课程网络

• 材料处理取材时间：公邮

• 方案的文件名：学生名字加学号

• 方案格式：课程网络上的要求

• 材料的种植数量：按照种子数

• 方案中的步骤要详细，包括取材时间的描述和取材后是直接测定还是处理后冰箱储存

重要提示

重要提示

• 花无缺 （拟南芥和其他材料用 0.1%“花无缺”复合肥溶液）

• 拟南芥种植要规范的土壤来培养