총대장균군– 그람염색/현미경검경(2주차)

(ES 05703.1a)

김 재 건 교수

그람염색

목차 1. 개요

1.1 목적

1.2 적용범위

2. 용어정의

3. 분석기기 및 기구

4. 분석절차

4.1 표본제작

4.2 그람염색

5. 결과보고

그람염색

1.1 목적 그람염색 - 1. 개요

1.2 적용범위

•먹는물, 샘물 및 염지하수에 존재하는 총대장균군을

분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해

필요한 제반사항에 대하여 규정함

•먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의

규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물, 샘물 및

염지하수의 수질검사에 적용

2. 용어정의

•그람염색

: - 1884년 덴마크의 Christian Gram에 의해 고안된 감별염색법

- 단염색법에서 관찰 가능한 균의 크기, 형태, 배열상태 구분가능

- 그람음성∙그람양성으로 구분

그람염색 – 2. 용어정의

1. Crystal violet : 1차 염색

2. Gram’s iodine : 매염제 - Crystal violet와 결합, 염색능력을 향상시킴

3. 95% Alcohol : 염색액 탈색 – 그람양성 : 탈색 X / 그람음성 : 탈색 O

4. Safranin : 대조 염색

3. 분석기기 및 기구 그람염색 – 3. 분석기기 및 기구

4.1 표본제작

1. 세균 배양액을 부유시킴

2. 백금이를 화염멸균함

3. 마개를 열고 시험관 입구 멸균

4. 균을 취함

그람염색 – 4. 분석절차

5. 시험관 입구 멸균함

6. 마개를 닫음

7. 지름 1.0~1.5㎝ 로 도말

8. 백금이를 멸균함

4.1 표본제작

그람염색 – 4. 분석절차

1. Crystal violet으로 60초간염색 – 1차염색

2. 수세 3. Gram’s iodine 으로 60초간 처리

4.2 그람염색

그람염색 – 4. 분석절차

4. 수세 5. 95% Alcohol로 10~20초간 탈색

6. 수세

4.2 그람염색

그람염색 – 4. 분석절차

7. Safranin으로 45초간 염색 - 대조염색

8. 수세 9. 건조

4.2 그람염색

그람염색 – 4. 분석절차

5. 결과보고

•그람양성인 경우 : 보라색, 청색, 자주색 계통 (탈색 X)

•그람음성인 경우 : 붉은색, 핑크색 계통 (탈색 O)

그람염색 – 5. 결과보고

현미경검경

목차 1. 개요

1.1 목적

1.2 적용범위

2. 용어정의

3. 분석기기 및 기구

4. 분석절차

5. 결과보고

현미경검경

1.1 목적 현미경검경 - 1. 개요

1.2 적용범위

•먹는물, 샘물 및 염지하수에 존재하는 총대장균군을

분석함에 있어 검사결과의 정확과 통일을 기하기 위해

필요한 제반사항에 대하여 규정함

•먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙 제2조의

규정에 의한 먹는물의 수질기준에 규정된 먹는물, 샘물 및

염지하수의 수질검사에 적용

•현미경검경

: - 확대 관찰

(미생물의 크기가 작아 눈으로 관찰하기 힘들기 때문)

- 종류에 따라 해상능과 사용 목적이 다름

2. 용어정의

현미경검경 – 2. 용어정의

•광학현미경

3. 분석기기 및 기구 현미경검경 – 3. 분석기기 및 기구

① 수평하며 진동이 없는 실험테이블에 현미경 준비하여

전원을 연결시키고 광원 켜기

② 재물대 중앙에 clip을 당겨 슬라이드 글라스를 고정시킨 후

대물렌즈의 저배율부터 초점 조정

4. 분석절차

현미경검경 – 4. 분석절차

③ 현미경 옆면에 조동나사를 이용하여 대물렌즈와

표본(슬라이드글라스)의 거리조절 후 미동나사로 정확하게

초점을 맞추기

※ 최상의 조건을 위하여 조리개와 집광기를 조절하여 관찰

④ 대안렌즈의 경우 관찰자의 눈 간격과 같게 조절

4. 분석절차

현미경검경 – 4. 분석절차

⑤ 관찰 후 재물대를 아래로 내린 후 조리개 조절 및

광원 전원을 끄고 현미경 정리(현미경 커버를 씌워 제자리에)

⑥ 현미경 검경 후 판정(그람음성, 단간균)

- 핑크색, 붉은색 계통 - 그람음성

- 청색, 보라색, 자주색 계통 - 그람양성 판정

4. 분석절차

현미경검경 – 4. 분석절차

•그람양성인 경우 : 보라색, 청색, 자주색 계통 (탈색 X)

•그람음성인 경우 : 붉은색, 핑크색 계통 (탈색 O)

5. 결과보고

현미경검경 – 5. 결과보고